CN114062567B - (1r,2s)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺盐酸盐及其有关物质的分离检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种(1R,2S)‑2‑(3,4‑二氟苯基)环丙胺盐酸盐及其有关物质的分析检测方法，通过高效液相色谱仪，磷酸二氢铵缓冲液和甲醇/乙腈的混合液为流动相，梯度洗脱，检测波长220nm。本发明采用的梯度洗脱可实现各杂质的有效分离，各吸收峰分离度≥1.4，进样精密度良好，RSD＜2％，方法耐用性好，可用于替格瑞洛研发和生产过程中的质量控制。

Description

(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺盐酸盐及其有关物质的分离检测方法

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺盐酸盐及其有关物质的分离检测方法。

背景技术

药品内在质量直接影响其临床疗效和安全性，有关物质主要是在生产过程中带入的起始原料、中间体、聚合体、副反应产物，以及贮藏过程中的降解产物等。基于安全性和生产实际情况的考虑，可允许含有一定限量的无害或低毒性的有关物质，但对毒性较大，危害人体健康、无效或影响药物稳定性的有关物质必须严格控制。因此，有关物质的检测是控制药物质量的关键指标。

(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺盐酸盐为合成替格瑞洛的起始物料，其有关物质结构如下：

目前暂无文献报道(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺盐酸盐及其有关物质的分离检测方法。

发明内容

本发明提供一种用高效液相色谱检测(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺盐酸盐及其有关物质的方法，其特征在于：以十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相为磷酸氢二铵缓冲溶液，流动相B为乙腈和甲醇的混合溶液，按以下梯度洗脱：

时间(min)	流动相A(v/v)	流动相B(v/v)
			0	90-95	5-10
5	90-95	5-10
			44	10	90
50	10	90
			51	90-95	5-10
60	90-95	5-10

检测波长220nm，柱温20℃～30℃，流速0.5～2mL/min，进样量：1μL～100μL。

本发明实施方案，其中所述的乙腈和甲醇的体积比为2:8。

本发明实施方案，其中所述的梯度为：

时间(min)	流动相A(v/v)	流动相B(v/v)
			0	92	8
5	92	8
			44	10	90
50	10	90
			51	92	8
60	92	8

检测波长220nm，柱温20℃～30℃，流速0.6～1.0mL/min，进样量：10μL～20μL。

本发明实施方案，其中所述的磷酸氢二铵缓冲溶液pH为3～7。

本发明实施方案，其中所述的磷酸氢二铵缓冲溶液pH为4～6。

本发明实施方案，其中所述的磷酸氢二铵缓冲溶液pH为4.5～5.5。

本发明实施方案，其中所述的色谱柱为Waters xbridge shield RP18。

本发明实施方案，其特征在于检测的有关物质选自如下化合物或其游离碱：

分离度，用于评价待测物质与被分离物质之间的分离程度，是衡量色谱系统分离效能的关键指标。用R表示，R等于相邻色谱峰保留时间之差与两色谱峰峰宽均值之比。R越大，表明相邻两组分分离越好。一般说当R<1时，两峰有部分重叠，当R＝1.0时，分离度可达98％，当R＝1.5时，分离度可达99.7％。

附图说明

图1实施例1条件a的152-20有关物质分离色谱图；

图2实施例1条件f的152-20有关物质分离色谱图；

图3对照品152-19A的色谱图，保留时间t＝13.684min；

图4对照品152-19B的色谱图，保留时间t＝13.316min；

图5对照品152-20C的色谱图，保留时间t＝10.996min；

图6对照品152-19Z的色谱图，保留时间t＝12.986min；

图7对照品152-80的色谱图，保留时间t＝38.963min；

图8对照品152-20的色谱图，保留时间t＝16.565min；

图9混合溶液的分离色谱图，保留时间11.298min的为152-20C，保留时间13.354min的为152-19Z，保留时间为13.827min的为152-19B，保留时间14.191min的为152-19A，保留时间16.601min的为152-20，保留时间38.963min的为152-80。

实施例1色谱条件的筛选

通过色谱柱、流动相、洗脱梯度、柱温、流速等进行筛选确定色谱条件，详见表1。

表1(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺盐酸盐及其有关物质检测条件的筛选

实验结果发现：当采用f条件：Waters xbridge shield RP18为色谱柱，流动相为磷酸氢二铵缓冲溶液、乙腈/甲醇，梯度洗脱，(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺盐酸盐及其有关物质的分离度达到较好的效果。

实施例2方法专属性

色谱条件：

以Waters xbridge shield RP18为色谱柱，紫外检测波长220nm，柱温25℃，进样体积20μL，流速0.8mL/min。

流动相的配制：流动相A：5.28g磷酸氢二铵加1000mL水溶解后，用磷酸调pH至5.0；

流动相B：乙腈/甲醇＝20:80(v/v)，梯度程序如表2所示。

表2 梯度程序

时间(min)	磷酸氢二铵缓冲溶液(v/v)	乙腈/甲醇＝20:80(v/v)
			0	92	8
5	92	8
			44	10	90
50	10	90
			51	92	8
60	92	8

稀释剂：本品为盐酸盐，易溶于水和有机相，考虑溶剂效应，选择乙腈-水(20:80，v/v)作为本品的稀释剂，在HPLC中峰形良好，空白无干扰。

溶液配制：

1)选择对照物质152-20及其杂质152-20C、152-19Z、152-19A、152-19B、152-80；

2)杂质贮备液：分别称取各杂质，用稀释剂稀释，配制成1mg/mL 152-19A、1mg/mL152-19B、0.5mg/mL 152-20C、0.5mg/mL 152-19Z、0.5mg/mL 152-80，精密量入各杂质溶液1.0mL，稀释100倍。

3)混合溶液：分别称取152-20约5mg，置10mL量瓶中，加稀释液使溶解，精密量入上述杂质贮备液1.0mL，并加稀释液至刻度，摇匀。(152-20：0.5mg/mL；杂质152-19A,152-19B：1μg/mL；杂质152-20C，152-19Z，152-80：0.5μg/mL)，在上述色谱条件下取各杂质溶液和混合溶液各20μL分别进样，记录色谱图，对照品溶液定位如图3-8所示，混合溶液如图9所示，本方法对152-20及其有关物质分离情况见表3。

表3(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺盐酸盐及其有关物质分离情况

备注：152-19A和152-19B相邻较近，考察两者分离度，故分离度写相同数值。

实施例3精密度实验

取混合溶液，连续进样6次，记录色谱图，并对结果进行评价，结果见表4。

表4 进样精密度实验结果

进样精密度测试结果显示：进样精密度溶液中152-20以及各杂质的峰面积RSD％≤2％，此方法检测152-20及其有关物质，进样精密度好。

实施例4耐用性实验

通过将色谱条件的流速、流动相pH值、检测波长、柱温等进行调整，测定结果不受影响的承受程度，耐用性结果见表5～表7。

表5 不同流速的测试结果

耐用性不同流速测试结果显示：本测试方法在流速0.6mL/min及1.0mL/min之间变化，对测定结果影响不大，表明本方法的耐用性良好。

表6 流动相不同pH值的测试结果

耐用性不同pH测试结果显示：本测试方法在pH4.8及pH5.2之间变化，对测定结果影响不大，表明本方法的耐用性良好。

表7 不同柱温的测定结果

耐用性不同柱温测试结果显示：本测试方法在柱温23℃及27℃之间变化，对测定结果影响不大，表明本方法的耐用性良好。

Claims (1)

1.一种用高效液相色谱检测(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺盐酸盐及其有关物质的方法，其特征在于：以Waters xbridge shield RP18为色谱柱，流动相A为磷酸氢二铵缓冲溶液，流动相B为乙腈和甲醇的混合溶液，按以下梯度洗脱：

检测波长220nm，柱温23℃～27℃，流速0.6～1mL/min，进样量：10μL～20μL，流动相A的pH为4.8～5.2，流动性B中乙腈和甲醇的体积比为2:8，

所述检测的有关物质选自如下化合物或其游离碱：

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