CN114058712A - 与牦牛肉品质相关的ucp1基因的分子标记 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种与牦牛肉品质相关的UCP1基因的分子标记，其中，UCP1基因I4‑769G>A位点的AA型、I4‑836C>T位点中CC型和E5‑26C>G位点的CC型可作为改善牦牛肉色的最优基因型；E5‑59A>G位点的GA型可作为提高牦牛宰后pH值的最优基因型；H2H2单倍型组合可作为改善牦牛肉色的最优单倍型组合。本发明为牦牛改善肉品质标记辅助育种及建立优势优质群体提供了理论基础。
Description
技术领域
本发明涉及耗牛的育种技术领域，具体地，涉及与牦牛肉品质相关的UCP1基因的分子标记。
背景技术
四川牦牛(Bos grunniens，yak)主要分布于我国海拔3000-5000m的青藏高原及其毗邻高山、亚高山地区。牦牛是高原地区特有的、耐粗饲、抗寒性能强和适应低氧环境的物种资源之一，受到当地牧民的长期驯养，是一种乳肉役兼用型品种。高原地区的低氧环境使得牦牛机体中糖酵解反应增强、酶活性增加、载氧能力增强等生理生化反应发生适应性的变化，并影响着牦牛屠宰后的肉质特性的改变。牦牛全身都是宝，藏族人民衣食住行都离不开它。此外，牦牛以肉质细嫩、味美可口、低脂肪、高蛋。
肉品质主要包括营养品质、食用品质和加工品质三方面，评价营养品质的指标包括各种营养物质的含量，如脂肪酸含量、蛋白含量、氨基酸含量等；评价食用品质和加工品质的指标包括肉色、pH值、系水力、风味物质含量和嫩度等。
肉色是消费者视觉上的第一感官，能直接影响消费者的消费行为。而且肉色与肌肉中肌红蛋白含量、肌红蛋白氧化程度及高铁肌红蛋白含量有关，刚宰后肌肉中还含有大量还原型肌红蛋白，随着时间的增长，肌红蛋白会被空气中的氧气氧化，肉色会由鲜红色逐渐变成褐色。评定肉色主要包括红度(a*)、黄度(b*)和亮度(L*)。L*的数值范围为0(全黑)到100(全白)，数值越大代表肉色越亮，肌内脂肪含量越高；a*的数值范围为从+127(洋红色)到-128(绿色)，数值越大则代表肉色越红，b*数值范围为+127(黄色)到-128(蓝色)，肉类加工过程中黄度的变化会影响消费者的感官。一般来说，在一定范围内，a*值越大，L*和b*越小，代表肌肉的颜色就越鲜红，说明肌肉品质就越好；a*值太大而L*值太小就会形成黑干肉；反之，L*值太大而a*值太小就会形成白肌肉。
解偶联蛋白1(Uncoupling protein 1,UCP1)是解偶联蛋白家族中的一员，是棕色和米色脂肪细胞特异性表达一种产热线粒体蛋白，它可以通过驱散电子传递链产生的电化学梯度，将底物氧化与ATP合成分离，从而导致热量释放，是在寒冷条件下维持体温或在哺乳动物(包括人类)摄入过多热量时维持能量稳态的机制中的关键因素。目前大多数关于UCP1基因功能的研究主要集中在人和小鼠脂肪代谢脂肪、能量代谢和糖尿病方面。
有研究表明UCP1在牦牛心、肝、脾等各个组织中均有表达，但在肾脏组织中的表达量显著高于其他组织，并且UCP1基因在麦洼牦牛背最长肌以及肝脏中的表达量显著高于金川牦牛(赵丹,熊燕,华永琳,等.牦牛UCP1基因生物学特性及组织表达分析[J].西南民族大学学报,2021,47(02):139-14)。罗刚等人的研究表明牛UCP1基因编码区存在5个错义突变多态性位点与牛抗寒性状存在显著相关性(罗刚,王杰,赖添赋,等.UCP1基因多态性与牛耐寒性的关联分析[J].四川农业大学学报,2018,36(06):808-814.)。安清明等人的研究表示UCP1基因对绵羊的生长发育性状影响具有性别特异性，且携带等位基因A1的公羔群体具有较低的胴体性状(安清明,王星,孟金柱,等.解耦联蛋白1(UCP1)基因单体型差异及其与不同性别绵羊生长性状关联性分析[J].黑龙江畜牧兽医,2020(11):72-75+8)。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供牦牛肉品质相关的UCP1基因的分子标记。
本发明的第一个目的是提供一种检测牦牛肉品质性状相关的分子标记的基因型的试剂。
本发明的第二个目的是提供任一所示检测试剂在预测、评价、评估和/或检测牦牛肉品质相关性状中的应用。
本发明的第三个目的是提供任一所示检测试剂在制备预测、评价、评估和/或检测牦牛肉品质相关性状的试剂盒中的应用。
本发明的第四个目的是提供一种制备预测、评价、评估和/或检测牦牛肉品质相关性状的试剂盒。
本发明的第五个目的是提供一种预测、评价、评估和/或检测牦牛肉品质相关性状的方法。
本发明的第六个目的是提供所述的检测试剂、所述的试剂盒、和/或所述的方法在牦牛肉品质相关性状的分子育种中的应用。
为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：
本发明针对UCP1基因的遗传多态性与四川牦牛肉品质性状的相关关系，采用直接测序的方法验证UCP1基因的相关分子标记。发现牦牛UCP1基因的内含子4和外显子5共存在4个SNPs位点：I4-769 G>A(分子标记1)、I4-836 C>T(分子标记2)、E5-26 C>G(分子标记3)和E5-59 A>G(分子标记4)。其中，I4-769 G>A位点的AA型、I4-836 C>T位点中CC型和E5-26C>G位点的CC型可作为改善牦牛肉色的最优基因型；E5-59 A>G位点的GA型可作为提高牦牛宰后pH值的最优基因型；H2H2(分子标记1的基因型为AA、分子标记2的基因型为CC、且分子标记3的基因型为CC)单倍型可作为改善牦牛肉色的最优单倍型组合。
一种检测牦牛肉品质性状相关的分子标记的基因型的试剂，所述试剂检测以下分子标记1到4中的一个或几个：
分子标记1(I4-769 G>A)位于NW_005393703.1：25700，即BosGru_v2.0版基因组JH881130.1:21,532-27,498中的第25700位核苷酸，GG基因型个体肉色红度低于AA基因型个体；
分子标记2(I4-836 C>T)位于NW_005393703.1：25767，即BosGru_v2.0版基因组JH881130.1:21,532-27,498中的第25767位核苷酸，CC基因型个体肉色红度高于CT基因型个体，CC基因型个体肉色黄度大于CT基因型个体；
分子标记3(E5-26 C>G)位于NW_005393703.1：25882，即BosGru_v2.0版基因组JH881130.1:21,532-27,498中的第25882位核苷酸，CC基因型个体肉色亮度低于CG基因个体，CC基因型个体肉色红度高于CG基因型个体，CC基因型个体肉色黄度高于CG基因型个体。
分子标记4(E5-59 A>G)位于NW_005393703.1：25915，即BosGru_v2.0版基因组JH881130.1:21,532-27,498中的第25915位核苷酸，GA基因型个体屠宰后45min pH值高于AA基因型个体。
优选地，分子标记1的基因型为GG、分子标记2的基因型为CC、且分子标记3的基因型为CC(H1H1)的个体的肉色亮度低于分子标记1的基因型为GG、分子标记2的基因型为CT、且分子标记3的基因型为CG(H1H3)的个体的肉色亮度；
分子标记1的基因型为GA、分子标记2的基因型为CC、且分子标记3的基因型为CC(H1H2)的个体的肉色亮度低于分子标记1的基因型为GG、分子标记2的基因型为CT、且分子标记3的基因型为CG(H1H3)的个体；
分子标记1的基因型为AA、分子标记2的基因型为CC、且分子标记3的基因型为CC(H2H2)的个体的肉色红度和/或黄度高于分子标记1的基因型为GG、分子标记2的基因型为CT、且分子标记3的基因型为CG(H1H3)的个体；
分子标记1的基因型为AA、分子标记2的基因型为CC、且分子标记3的基因型为CC(H2H2)的个体的肉色黄度显著高于分子标记1的基因型为AG、分子标记2的基因型为CT、且分子标记3的基因型为CG(H2H3)的个体
以上所述的“高于”和“低于”，均为统计学上的显著差异(P＜0.05)。
优选地，所述试剂为核苷酸序列如SEQ ID NO：1到2所示的引物。
上游引物：5'TGGTAAAGAATCTGCCTGCG 3'(SEQ ID NO:1)
下游引物：5'TCTCCATCCCAAGCTGAATC 3'(SEQ ID NO:2)。
本发明还要求保护以下内容：
任一所示检测试剂在预测、评价、评估和/或检测牦牛肉品质相关性状中的应用，所述牦牛肉品质相关性状为屠宰后45min pH值、肉色亮度、肉色红度和/或肉色黄度。
任一所示检测试剂在制备预测、评价、评估和/或检测牦牛肉品质相关性状的试剂盒中的应用，所述牦牛肉品质相关性状为屠宰后45min pH值、肉色亮度、肉色红度和/或肉色黄度。
以及一种制备预测、评价、评估和/或检测牦牛肉品质相关性状的试剂盒，含有任一所述的试剂，所述牦牛肉品质相关性状为屠宰后45min pH值、肉色亮度、肉色红度和/或肉色黄度。
优选地，所述试剂为核苷酸序列如SEQ ID NO：1到2所示的引物。
更优选地，还含有PCR试剂。
进一步优选地，所述PCR试剂为2×Green Taq Mix。
具体地，PCR反应体系20μL：2×Green Taq Mix 10μL，上/下游引物(SEQ ID NO：1到2所示的引物)各0.4μL，模板1μL，ddH2O 8.2μL。
PCR反应程序：95℃热变性3min，95℃变形30s，56℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环，72℃延伸5min，4℃保存。
一种预测、评价、评估和/或检测牦牛肉品质相关性状的方法，检测中所述的SNP分子标记1到4中的任意一个或几个，所述牦牛肉品质相关性状为屠宰后45min pH值、肉色亮度、肉色红度和/或肉色黄度。。
所述的检测试剂、所述的试剂盒、和/所述的方法在牦牛肉品质相关性状的分子育种中的应用，其特征在于，牦牛肉品质相关性状为屠宰后45min pH值、肉色亮度、肉色红度和/或肉色黄度。
优选地，所述耗牛为四川耗牛。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明公开了UCP1基因I4-769 G>A位点的AA型、I4-836 C>T位点中CC型和E5-26C>G位点的CC型可作为改善牦牛肉色的最优基因型；E5-59 A>G位点的GA型可作为提高牦牛宰后pH值的最优基因型；H2H2单倍型组合可作为改善牦牛肉色的最优单倍型组合。本发明为牦牛改善肉品质标记辅助育种及建立优势优质群体提供了理论基础。
附图说明
图1为四川牦牛UCP1基因扩增产物电泳图；M:Marker；1-4泳道分别为不同个体的PCR扩增产物。
图2为UCP1基因I4-769 G>A3种基因型的测序峰图；图Ⅰ是基因型为GG的个体；图Ⅱ是基因型为GA的个体；图Ⅲ是基因型为AA的个体。
图3为UCP1基因I4-836 C>T 3种基因型的测序峰图；图Ⅰ是基因型为CC的个体；图Ⅱ是基因型为CT的个体；图Ⅲ是基因型为TT的个体。
图4为UCP1基因E5-26 C>G 3种基因型的测序峰图；图Ⅰ是基因型为CC的个体；图Ⅱ是基因型为CG的个体；图Ⅲ是基因型为GG的个体。
图5为UCP1基因E5-59 A>G 2种基因型的测序图谱；图Ⅰ是基因型为GA的个体；图Ⅱ是基因型为AA的个体。
图6为UCP1基因的牦牛群体SNPs位点连锁反应。
具体实施方式
下面结合说明书附图及具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
实验试剂：
全基因组血液DNA提取试剂盒，购自天根生化科技(北京)有限公司；琼脂糖，购自博格林生物有限公司；Taq PCR Mix、1×TAE电泳缓冲液，均购自诺唯赞公司。
实施例1UCP1基因SNP位点的扩增
一、实验方法
1、实验样本
103头健康牦牛来自于四川省阿坝州某牛场，采集了血液样品于-20℃保存，用于提取血液基因组DNA。
2、血液基因组DNA提取
采用天根的血液基因组DNA提取试剂盒提取各个样本血液DNA，步骤参照试剂盒说明书，使用NanoDropTM Lite Spectrophotometer仪器检测DNA浓度和纯度，-20℃保存备用。将各样本血液DNA混合，得到混池DNA。
3、引物设计
根据NCBI数据库提供的UCP1基因组序列(编号：ENSBMUG00000011219.1)，使用Primer 5.0软件进行UCP1基因的引物设计，引物送至生工生物工程(上海)股份有限公司进行合成：
上游引物：5'TGGTAAAGAATCTGCCTGCG 3'(SEQ ID NO:1)
下游引物：5'TCTCCATCCCAAGCTGAATC 3'(SEQ ID NO:2)。
4、目的基因PCR扩增及验证
使用SEQ ID NO:1和2所示的引物，PCR扩增混池DNA。
PCR反应体系20μL：2×Green Taq Mix 10μL，上/下游引物各0.4μL，模板1μL，ddH2O8.2μL；PCR反应程序：95℃热变性3min，95℃变形30s，56℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环，72℃延伸5min，4℃保存。
1％琼脂糖凝胶进行电泳验证后，送至上海生工生物有限公司测序。
二、实验结果
PCR扩增四川牦牛混池DNA样本的UCP1基因，扩增产物经1％凝胶电泳检测，结果如图1所示，PCR产物扩增特异性良好，无杂带，条带清晰，可直接用于测序鉴定。
UCP1基因内含子4和外显子5中发现了4处SNPs位点，分别为分子标记1(I4-769G>A)、分子标记2(I4-836 C>T)、分子标记3(E5-26 C>G)和分子标记4(E5-59 A>G)。
分子标记1(I4-769 G>A)位于NW_005393703.1：25700，即BosGru_v2.0版基因组JH881130.1:21,532-27,498中的第25700位核苷酸，其存在GG、GA、和AA，3种基因型；
分子标记2(I4-836 C>T)位于NW_005393703.1：25767，即BosGru_v2.0版基因组JH881130.1:21,532-27,498中的第25767位核苷酸，其存在CC、CT、和TT，3种基因型；
分子标记3(E5-26 C>G)位于NW_005393703.1：25882，即BosGru_v2.0版基因组JH881130.1:21,532-27,498中的第25882位核苷酸，其存在CC、CG、和GG，3种基因型；
分子标记4(E5-59 A>G)位于NW_005393703.1：25915，即BosGru_v2.0版基因组JH881130.1:21,532-27,498中的第25915位核苷酸，其存在GG、GA、和AA，3种基因型。
4个SNPs的每种基因型测序结果如图2到图5所示。
实施例2 UCP1 4个SNPs位点的群体遗传特性
一、实验方法
取实施例1中103个牦牛血样样本，按照实施例1的方法对各个样本进行PCR扩增。
利用SeqMan软件进行序列比对，统计每一个个体的SNP位点和基因型，并计算每个SNP位点的等位基因的基因频率、基因型频率、遗传杂合度(H)、有效等位基因数(Ne)、多态信息含量(PIC)和卡方检验值χ2。
二、实验结果
由表1可以看出，4个SNPs位点中优势基因型分别是GG、CC、CC和AA，优势等位基因分别为C、C、C和A，其频率均大于0.50；I4-769 G>A、I4-836 C>和E5-26 C>G 3个SNPs的基因杂合度(He)和多态信息含量(PIC)均处在0.25～0.5范围内，表明这3个SNPs在群体多态性中属于I4-769 G>A、I4-836 C>T、E5-26 C>G和E5-59 A>G中度多态性；而E5-59 A>G位点的基因杂合度(He)和多态信息含量(PIC)均小于0.25，表明该位点在群体多态性中属于低度多态性；χ2检验结果显示，4个SNPs的χ2值均处于
P>0.05这个范围，说明4个SNPs在牦牛群体中均处于哈代温伯格平衡。
其中I4-769 G>A、I4-836 C>T和E5-26 C>G位点的基因杂合度和多态信息含量均处在0.25～0.5范围内，表明这3个SNPs在群体多态性中属于中度多态性；而E5-59 A>G位点的基因杂合度和多态信息含量均小于0.25，表明该位点在群体多态性中属于低度多态性，说明该群体具有一定的遗传选择潜力。
表1 UCP1基因4个SNPs的群体遗传特性
实施例3 UCP1基因4个SNPs位点的不同基因型与四川牦牛肉品质的相关性分析
一、实验方法
收集实施例1的四川牦牛肉品质性状数据，以下是性状的测定方法：
(1)蒸煮损失率：指肉在蒸煮过程中水分损失的百分比。应当将牛肉样品切成6cm×4cm×4cm的块状牛肉，将肉块放到水浴锅中加热，水浴温度为80℃，等到加热到肉中心温度70℃时将肉取出，根据前后重量的差异计算蒸煮损失，取平均值并记录。
(2)pH值：将103头四川牦牛屠宰后的里脊置于4℃保存，在45min和24h时，分别用pH计测定里脊的pH值。每个样品进行三次测定，取平均值并记录。
(3)肉色：将103头四川牦牛屠宰后取肌肉样品置于4℃冷库保存，在宰后约24小时分别用色度仪测量背最长肌的亮度(L*)、红度(a*)和黄度(b*)等三个参数。每个样品分别三次测定取平均值。
使用SPSS 22.0单因素方差分析UCP1基因SNPs与牦牛肉品质的相关性。
二、实验结果
结果见表2所示。因此可知，I4-769 G>A位点的AA型的背最长肌红度(a*)显著高于GG型；在I4-836 C>T位点中CC型的背最长肌红度(a*)和黄度(b*)相对CT型显著升高(P<0.05)；E5-26 C>G位点的CC型的背最长肌亮度(L*)显著低于CG型(P<0.05)，而CC型背最长肌红度(a*)和黄度(b*)显著高于CG型(P<0.05)；E5-59 A>G位点的GA型的背最长肌24h时的pH值显著高于AA型(P<0.05)。
由以上结果可见，除E5-59 A>G位点外，其余SNPs位点均与牦牛背最长肌的肉色显著相关，其余3个SNPs位点能作为牦牛背最长肌的肉色的分子标记位点；E5-59 A>G位点与牦牛背最长肌的24h时的pH值显著相关，说明这个SNP可能对牦牛宰后pH值的分子标记位点，对肉质性状具有重要指导作用。
本实施例发现的I4-769 G>A位点的AA型、I4-836 C>T位点的CC型和E5-26 C>G位点的CC型的a*均最高，b*也较高，L*却最低，提示I4-769 G>A位点的AA型、I4-836C>T位点中CC型和E5-26 C>G位点的CC型可作为改善牦牛肉色的最优基因型，为牦牛改善肉品质提供理论基础。而E5-59 A>G位点的GA型的背最长肌宰后24h时的pH值显著高于AA型，且GA型肉色指标(a*、b*和L*)均高于AA型，由于宰后pH值的变化与肌肉中发生的糖酵解反应有关，随着时间的增长，糖酵解产生的乳酸越多，肉的pH值会从宰后的6～7下降至极限值5.4～5.6，而且肌肉中的乳酸盐还会加快肌红蛋白的还原，提高肉色的稳定性，因此，显示E5-59 A>G位点的GA型可作为提高牦牛宰后pH值的最优基因型，为选育优质肉品质品种的牦牛提供分子遗传标记。
表2 UCP1基因4个SNPs不同基因型与牦牛肉品质的相关性分析结果
注：同列同一指标中标有字母完全不同者表示差异显著(P<0.05或P<0.01)；标有相同字母或者不标字母者表示差异不显著(P>0.05)。
实施例4 UCP1基因不同单倍型组合与四川牦牛肉品质的关联分析
一、实验方法
利用Haploview 4.2软件进行4个SNPs进行单倍型连锁不平衡分析。再利用SPSS20.0数据分析软件，运用LSD法对四川牦牛的肉品质性状与基因型和单倍型之间的相关性差异分析，结果以“平均数±标准误”表示，当P<0.05时表示差异显著，P<0.01时表示差异极显著。
二、实验结果
如图6和表3所示，结果发现I4-769 G>A(分子标记1)、I4-836 C>T(分子标记2)和E5-26 C>G(分子标记3)这3个位点存在强连锁遗传，3个位点构成了一个结构域，共有6种不同的单倍型组合。其中，H1：GCC、H2：ACC和H3：GTG。
6种不同的单倍型组合具体为：
H1H1组为：GGCCCC(分子标记1的基因型为GG、分子标记2的基因型为CC、且分子标记3的基因型为CC)；
H1H2组为：GACCCC(分子标记1的基因型为GA、分子标记2的基因型为CC、且分子标记3的基因型为CC)；
H1H3组为：GGCTCG(分子标记1的基因型为GG、分子标记2的基因型为CT、且分子标记3的基因型为CG)；
H2H2组为：AACCCC(分子标记1的基因型为AA、分子标记2的基因型为CC、且分子标记3的基因型为CC)；
H2H3组为：AGCTCG(分子标记1的基因型为AG、分子标记2的基因型为CT、且分子标记3的基因型为CG)；
H3H3组为：GGTTGG(分子标记1的基因型为GG、分子标记2的基因型为TT、且分子标记3的基因型为GG)。
LSD法分析6种单倍型组合与四川牦牛肉品质的关联性，结果见表4所示。由此可知，H1H1和H1H2单倍型组合的背最长肌亮度(L*)显著低于H1H3单倍型组合(P<0.05)；H2H2单倍型组合的背最长肌红度(a*)和黄度(b*)显著高于H1H3单倍型组合(P<0.05)；而H2H2单倍型组合的背最长肌黄度(b*)显著高于H2H3单倍型组合(P<0.05)。
结合UCP1基因的单个SNPs位点的分析结果认为H2H2单倍型组合可作为改善牦牛肉色的最优单倍型组合。
表3 UCP1基因单倍型与牦牛肉品质的相关性分析结果
注：同列同一指标中标有字母完全不同者表示差异显著(P<0.05)；标相同字母或未标字母者表示差异不显著(P>0.05)。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，对于本领域的普通技术人员来说，在上述说明及思路的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。
序列表
<110> 广东海洋大学
<120> 与牦牛肉品质相关的UCP1基因的分子标记
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
tggtaaagaa tctgcctgcg 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
tctccatccc aagctgaatc 20
Claims (8)
1.一种检测牦牛肉品质性状相关的分子标记的基因型的试剂，其特征在于，所述试剂检测以下分子标记1到4中的一个或几个：
分子标记1位于NW_005393703.1：25700，即BosGru_v2.0版基因组JH881130.1:21,532-27,498中的第25700位核苷酸，GG基因型个体肉色红度低于AA基因型个体；
分子标记2位于NW_005393703.1：25767，即BosGru_v2.0版基因组JH881130.1:21,532-27,498中的第25767位核苷酸，CC基因型个体肉色红度高于CT基因型个体，CC基因型个体肉色黄度大于CT基因型个体；
分子标记3位于NW_005393703.1：25882，即BosGru_v2.0版基因组JH881130.1:21,532-27,498中的第25882位核苷酸，CC基因型个体肉色亮度低于CG基因个体，CC基因型个体肉色红度高于CG基因型个体，CC基因型个体肉色黄度高于CG基因型个体。
分子标记4位于NW_005393703.1：25915，即BosGru_v2.0版基因组JH881130.1:21,532-27,498中的第25915位核苷酸，GA基因型个体屠宰后45min pH值高于AA基因型个体。
2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，
分子标记1的基因型为GG、分子标记2的基因型为CC、且分子标记3的基因型为CC的个体的肉色亮度低于分子标记1的基因型为GG、分子标记2的基因型为CT、且分子标记3的基因型为CG的个体的肉色亮度；
分子标记1的基因型为GA、分子标记2的基因型为CC、且分子标记3的基因型为CC的个体的肉色亮度低于分子标记1的基因型为GG、分子标记2的基因型为CT、且分子标记3的基因型为CG的个体；
分子标记1的基因型为AA、分子标记2的基因型为CC、且分子标记3的基因型为CC的个体的肉色红度和/或黄度高于分子标记1的基因型为GG、分子标记2的基因型为CT、且分子标记3的基因型为CG的个体；
分子标记1的基因型为AA、分子标记2的基因型为CC、且分子标记3的基因型为CC的个体的肉色黄度显著高于分子标记1的基因型为AG、分子标记2的基因型为CT、且分子标记3的基因型为CG的个体。
3.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述试剂为核苷酸序列如SEQ ID NO：1到2所示的引物。
4.权利要求1到3任一所示检测试剂在预测、评价、评估和/或检测牦牛肉品质相关性状中的应用，其特征在于，所述牦牛肉品质相关性状为屠宰后45min pH值、肉色亮度、肉色红度和/或肉色黄度。
5.权利要求1到3任一所示检测试剂在制备预测、评价、评估和/或检测牦牛肉品质相关性状的试剂盒中的应用，其特征在于，所述牦牛肉品质相关性状为屠宰后45min pH值、肉色亮度、肉色红度和/或肉色黄度。
6.一种制备预测、评价、评估和/或检测牦牛肉品质相关性状的试剂盒，其特征在于，含有权利要求1到3任一所述的试剂，所述牦牛肉品质相关性状为屠宰后45min pH值、肉色亮度、肉色红度和/或肉色黄度。
7.一种预测、评价、评估和/或检测牦牛肉品质相关性状的方法，其特征在于，检测权利要求1中所述的SNP分子标记1到4中的任意一个或几个，所述牦牛肉品质相关性状为屠宰后45min pH值、肉色亮度、肉色红度和/或肉色黄度。。
8.权利要求1所述的检测试剂、权利要求6所述的试剂盒、和/或权利要求7所述的方法在牦牛肉品质相关性状的分子育种中的应用，其特征在于，牦牛肉品质相关性状为屠宰后45min pH值、肉色亮度、肉色红度和/或肉色黄度。
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