CN114045347B - 一种用于特禽性别鉴定的pcr引物、试剂盒及其方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种用于特禽性别鉴定的PCR引物、试剂盒及其方法，所述特禽性别鉴定用PCR引物序列如SEQ ID NO.1和/SEQ ID NO.2所示。通过本发明的PCR引物进行PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳，利用电泳结果的条带数来确定火鸡、珍珠鸡、七彩山鸡、鹧鸪的性别，具有操作简单方便，鉴别结果快速准确，便于基层推广和使用，具有广阔的市场应用前景，此外，基于本发明方法开发的检测试剂盒，可产生可观的经济效益和良好的社会价值。

Description

一种用于特禽性别鉴定的PCR引物、试剂盒及其方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于特禽性别鉴定的PCR引物、试剂盒及其方法。
背景技术
特禽是特种经济禽类的简称，同鸡、鸭、鹅等家禽相比，特禽一般驯化时间较短，有的甚至处于半野生状态，如：火鸡、珍珠鸡、七彩山鸡、鹧鸪等。特禽一般具有较高的经济价值，养殖效益高，养殖前景好。在特禽生产中，需要的母禽的数量要远远大于公禽的数量，比如：在自然交配时，公母配比一般为1:10，人工授精，比例则可达1:20。因此，需要进行早期性别鉴定，提前淘汰公禽。
雏特禽公母在外形上非常相似，无法从体型外貌进行鉴别，也没有发现类似家禽的金银色羽、横斑羽、快慢羽等伴性遗传性状。目前特禽早期的性别鉴定主要通过翻肛观察生殖突起进行鉴别，一般泄殖腔下部有两个浅红色椭圆形球状突起的为公特禽，有浅粉红色八字状皱襞的为母特禽。但翻肛鉴别须在雏禽出壳一天内进行，雏禽肛门难以翻开，生殖突起萎缩甚至陷入泄殖腔深处，不便观察。翻肛鉴别劳动强度大、工作环境差、专业性高，误鉴率也较高。通过分子生物学手段，快速、准确的进行特禽早期性别鉴定具有重要意义。
随着我国特禽产业的快速发展，亟需开发一种简单方便，能够快速、准确鉴别特禽性别的方法。
发明内容
本发明目的在于解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种设计合理，可用于特禽早期性别快速鉴定的PCR引物。
本发明通过以下技术方案实现本发明的目的：
本发明目的之一在于提供一种性别鉴定用PCR引物，所述引物序列如SEQ IDNO.1/SEQ ID NO.2所示。即所述引物的核苷酸序列为：
正向引物（SEQ ID NO.1）：5'- TATGGACTAGAGCTGCACAAA -3'；
反向引物（SEQ ID NO.2）：5'- GAGCCATCTTCTGTCTCAA -3'。
本发明目的之二在于提供包含本发明所述的性别鉴定用PCR引物的试剂盒。
在本发明的一种实施例中，本发明所述的试剂盒包含本发明所述的PCR引物、PCR反应液，在一些实施例中，还可以包含DNA提取液。
本发明目的之三在于提供本发明所述的PCR引物或本发明所述的试剂盒在养殖业中的应用。
本发明目的之四在于提供本发明所述的PCR引物或本发明所述的试剂盒在火鸡性别鉴定中的应用。
本发明所述的在火鸡性别鉴定中的应用，通过本发明所述的引物进行PCR扩增，电泳结果呈现1083 bp一条带的为公火鸡，呈现1083 bp和766 bp的两条带时为母火鸡。
本发明目的之五在于提供本发明所述的PCR引物或本发明所述的试剂盒在珍珠鸡性别鉴定中的应用。
本发明所述的在珍珠鸡性别鉴定中的应用，通过本发明所述的引物进行PCR扩增，电泳结果呈现960 bp一条带的为公珍珠鸡，呈现960 bp和771 bp的两条带时为母珍珠鸡。
本发明目的之六在于提供本发明所述的PCR引物或本发明所述的试剂盒在七彩山鸡性别鉴定中的应用。
本发明所述的在七彩山鸡性别鉴定中的应用，通过本发明所述的引物进行PCR扩增，电泳结果呈现1118 bp一条带的为公七彩山鸡，呈现1118 bp和774 bp的两条带时为母七彩山鸡。
本发明目的之七在于提供本发明所述的PCR引物或本发明所述的试剂盒在鹧鸪性别鉴定中的应用。
本发明所述的在鹧鸪性别鉴定中的应用，通过本发明所述的引物进行PCR扩增，电泳结果呈现945 bp一条带的为公鹧鸪，呈现945 bp和815 bp的两条带时为母鹧鸪。
本发明还提供一种火鸡、珍珠鸡、七彩山鸡或鹧鸪性别快速鉴定方法，包括以下步骤：
1) 提取待测火鸡、珍珠鸡、七彩山鸡或鹧鸪的基因组DNA；
2) 以步骤1)中提取的DNA为模板，利用本发明所述引物对，进行PCR 扩增反应；
3) PCR 产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，
当待测特禽为火鸡时，电泳结果呈现1083 bp一条带的为公火鸡，呈现1083 bp和766 bp的两条带时为母火鸡；
当待测特禽为珍珠鸡时，电泳结果呈现960 bp一条带的为公珍珠鸡，呈现960 bp和771 bp的两条带时为母珍珠鸡；
当待测特禽为七彩山鸡时，电泳结果呈现1118 bp一条带的为公七彩山鸡，呈现1118 bp和774 bp的两条带时为母七彩山鸡。
当待测特禽为鹧鸪时，电泳结果呈现945 bp一条带的为公鹧鸪，呈现945 bp和815bp的两条带时为母鹧鸪。
本发明所述的方法，步骤1）提取待测特禽的基因组DNA可以按照本领域常规方法提取，例如可以选用包括但不限于羽毛、血液、组织、器官等进行待测特禽的基因组DNA的提取。
本发明所述的方法，步骤2）中PCR反应体系可以为本领域的常规体系，在本发明的一种具体的实施方式中，为：2×PCR Mix(上海生工生物有限公司) 12.5 μL，10 μmol/L正向和反向引物各0.5 μL，50-100μg/ml模板DNA 1 μL，超纯水10.5 μL。
本发明所述的方法，步骤2）中PCR反应程序可以为本领域的常规体系，在本发明的一种具体的实施方式中，为：95℃ 3 min，（95℃ 30 s，59℃ 30 s，72℃ 30 s）33循环，72℃7min。
本发明与现有技术相比具有以下优点：本发明通过设计的PCR引物，进行PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳，利用电泳结果的条带数来确定特禽的性别，具有操作简单方便，鉴别结果快速准确，便于基层推广和使用，具有广阔的市场应用前景，此外，基于本发明方法开发的检测试剂盒，可产生可观的经济效益和良好的社会价值。
本发明的引物对特禽品种限制性小，因此对于所述的本发明所述的火鸡、珍珠鸡、七彩山鸡和鹧鸪没有具体品种的限制。
附图说明
图1为本发明实施例1火鸡的PCR扩增产物的电泳图谱。
图2为本发明实施例2火鸡的PCR扩增产物的电泳图谱。
图3为本发明实施例3珍珠鸡的PCR扩增产物的电泳图谱。
图4为本发明实施例4珍珠鸡的PCR扩增产物的电泳图谱。
图5为本发明实施例5七彩山鸡的PCR扩增产物的电泳图谱。
图6为本发明实施例6七彩山鸡的PCR扩增产物的电泳图谱。
图7为本发明实施例7鹧鸪的PCR扩增产物的电泳图谱。
图8为本发明实施例8鹧鸪的PCR扩增产物的电泳图谱。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。
实施例1
1已知性别火鸡鉴定
1.1 样品采集
采集10只已知性别的成年青铜火鸡，编号1-5为公火鸡，6-10为母火鸡，使用本发明设计引物扩增火鸡基因组。
正向引物（SEQ ID NO.1）：5'- TATGGACTAGAGCTGCACAAA -3'；
反向引物（SEQ ID NO.2）：5'- GAGCCATCTTCTGTCTCAA -3'。
1.2 PCR扩增
PCR反应体系为：
2×PCR Mix(上海生工生物有限公司) 12.5 μL，10 μmol/L正向和反向引物各0.5μL，50-100μg/ml模板DNA 1 μL，超纯水10.5 μL。
PCR反应程序为：95℃ 3 min，（95℃ 30 s，59℃ 30 s，72℃ 30 s）33循环，72℃7min。
1.3 电泳检测
反应结束后，用1.2%琼脂糖凝胶电泳检测。公火鸡电泳检测只有一条1083 bp的条带，母火鸡电泳检测时有1083 bp和766 bp的两条带，见结果如图1（其中1～5为公火鸡，6～10为母火鸡）。
以上结果表明本发明能够快速准确对火鸡进行性别鉴定，并且简单易于操作。
实施例2
2 未知性别火鸡鉴定
2.1 样品采集
采集16只未知性别的贝蒂纳火鸡雏火鸡，使用本发明设计引物（SEQ ID NO.1）和（SEQ ID NO.2）扩增火鸡基因组。
2.2 PCR扩增
PCR反应体系为：
2×PCR Mix(上海生工生物有限公司) 12.5 μL，10 μmol/L正向和反向引物各0.5μL，50-100μg/ml模板DNA 1 μL，超纯水10.5 μL。
PCR反应程序为：95℃ 3 min，（95℃ 30 s，59℃ 30 s，72℃ 30 s）33循环，72℃7min。
2.3 电泳检测
反应结束后，用1.2%琼脂糖凝胶电泳检测。公火鸡电泳检测只有一条1083 bp的条带，母火鸡电泳检测时有1083 bp和766 bp的两条带，见结果如图2（其中2、4、5、7、9、10、14、15、17为公火鸡，1、3、6、8、11、12、13、16为母火鸡）。
供试样本经过解剖，进行性器官观察，以上鉴定结果完全正确。
实施例3
1已知性别珍珠鸡鉴定
1.1 样品采集
采集12只已知性别的成年珍珠鸡，编号1-6为公珍珠鸡，7-12为母珍珠鸡，使用本发明设计引物扩增珍珠鸡基因组。
正向引物（SEQ ID NO.1）：5'- TATGGACTAGAGCTGCACAAA -3'；
反向引物（SEQ ID NO.2）：5'- GAGCCATCTTCTGTCTCAA -3'。
1.2 PCR扩增
PCR反应体系为：
2×PCR Mix(上海生工生物有限公司) 12.5 μL，10 μmol/L正向和反向引物各0.5μL，50-100μg/ml模板DNA 1 μL，超纯水10.5 μL。
PCR反应程序为：95℃ 3 min，（95℃ 30 s，59℃ 30 s，72℃ 30 s）33循环，72℃7min。
1.3 电泳检测
反应结束后，用1.2%琼脂糖凝胶电泳检测。公珍珠鸡电泳检测只有一条960 bp的条带，母珍珠鸡电泳检测时有960 bp和771 bp的两条带，见结果如图3（其中1～6为公珍珠鸡，7～12为母珍珠鸡）。
以上结果表明本发明能够快速准确对珍珠鸡进行性别鉴定，并且简单易于操作。
实施例4
2 未知性别珍珠鸡鉴定
2.1 样品采集
采集17只未知性别的雏珍珠鸡，使用本发明设计引物（SEQ ID NO.1）和（SEQ IDNO.2）扩增珍珠鸡基因组。
2.2 PCR扩增
PCR反应体系为：
2×PCR Mix(上海生工生物有限公司) 12.5 μL，10 μmol/L正向和反向引物各0.5μL，50-100μg/ml模板DNA 1 μL，超纯水10.5 μL。
PCR反应程序为：95℃ 3 min，（95℃ 30 s，59℃ 30 s，72℃ 30 s）33循环，72℃7min。
2.3 电泳检测
反应结束后，用1.2%琼脂糖凝胶电泳检测。公珍珠鸡电泳检测只有一条960 bp的条带，母珍珠鸡电泳检测时有960 bp和771 bp的两条带，见结果如图4（其中1、4、5、6、8、11、13、14为公珍珠鸡，2、3、7、9、10、12、15、16、17为母珍珠鸡）。
供试样本经过解剖，进行性器官观察，以上鉴定结果完全正确。
实施例5
1已知性别七彩山鸡鉴定
1.1 样品采集
采集10只已知性别的成年美国七彩山鸡，编号1-5为公七彩山鸡，6-10为母七彩山鸡，使用本发明设计引物扩增七彩山鸡基因组。
正向引物（SEQ ID NO.1）：5'- TATGGACTAGAGCTGCACAAA -3'；
反向引物（SEQ ID NO.2）：5'- GAGCCATCTTCTGTCTCAA -3'。
1.2 PCR扩增
PCR反应体系为：
2×PCR Mix(上海生工生物有限公司) 12.5 μL，10 μmol/L正向和反向引物各0.5μL，50-100μg/ml模板DNA 1 μL，超纯水10.5 μL。
PCR反应程序为：95℃ 3 min，（95℃ 30 s，59℃ 30 s，72℃ 30 s）33循环，72℃7min。
1.3 电泳检测
反应结束后，用1.2%琼脂糖凝胶电泳检测。公七彩山鸡电泳检测只有一条1118 bp的条带，母七彩山鸡电泳检测时有1118 bp和774 bp的两条带，见结果如图5（其中1～5为公七彩山鸡，6～10为母七彩山鸡）。
以上结果表明本发明能够快速准确对七彩山鸡进行性别鉴定，并且简单易于操作。
实施例6
2 未知性别七彩山鸡鉴定
2.1 样品采集
采集17只未知性别的中国七彩山鸡雏鸡，使用本发明设计引物（SEQ ID NO.1）和（SEQ ID NO.2）扩增七彩山鸡基因组。
2.2 PCR扩增
PCR反应体系为：
2×PCR Mix(上海生工生物有限公司) 12.5 μL，10 μmol/L正向和反向引物各0.5μL，50-100μg/ml模板DNA 1 μL，超纯水10.5 μL。
PCR反应程序为：95℃ 3 min，（95℃ 30 s，59℃ 30 s，72℃ 30 s）33循环，72℃7min。
2.3 电泳检测
反应结束后，用1.2%琼脂糖凝胶电泳检测。公七彩山鸡电泳检测只有一条1118 bp的条带，母七彩山鸡电泳检测时有1118 bp和774 bp的两条带，见结果如图6（其中1、2、4、6、10、11、14、15、16、17为公七彩山鸡，3、5、7、8、9、12、13为母七彩山鸡）。
供试样本经过解剖，进行性器官观察，以上鉴定结果完全正确。
实施例7
1已知性别鹧鸪鉴定
1.1 样品采集
采集10只已知性别的成年鹧鸪，编号1-5为公鹧鸪，6-10为母鹧鸪，使用本发明设计引物扩增鹧鸪基因组。
正向引物（SEQ ID NO.1）：5'- TATGGACTAGAGCTGCACAAA -3'；
反向引物（SEQ ID NO.2）：5'- GAGCCATCTTCTGTCTCAA -3'。
1.2 PCR扩增
PCR反应体系为：
2×PCR Mix(上海生工生物有限公司) 12.5 μL，10 μmol/L正向和反向引物各0.5μL，50-100μg/ml模板DNA 1 μL，超纯水10.5 μL。
PCR反应程序为：95℃ 3 min，（95℃ 30 s，59℃ 30 s，72℃ 30 s）33循环，72℃7min。
1.3 电泳检测
反应结束后，用1.2%琼脂糖凝胶电泳检测。公鹧鸪电泳检测只有一条945 bp的条带，母鹧鸪电泳检测时有945 bp和815 bp的两条带，见结果如图7（其中1～5为公鹧鸪，6～10为母鹧鸪）。
以上结果表明本发明能够快速准确对鹧鸪进行性别鉴定，并且简单易于操作。
实施例8
2 未知性别鹧鸪鉴定
2.1 样品采集
采集17只未知性别的雏鹧鸪，使用本发明设计引物（SEQ ID NO.1）和（SEQ IDNO.2）扩增鹧鸪基因组。
2.2 PCR扩增
PCR反应体系为：
2×PCR Mix(上海生工生物有限公司) 12.5 μL，10 μmol/L正向和反向引物各0.5μL，50-100μg/ml模板DNA 1 μL，超纯水10.5 μL。
PCR反应程序为：95℃ 3 min，（95℃ 30 s，59℃ 30 s，72℃ 30 s）33循环，72℃7min。
2.3 电泳检测
反应结束后，用1.2%琼脂糖凝胶电泳检测。公鹧鸪电泳检测只有一条945 bp的条带，母鹧鸪电泳检测时有945 bp和815 bp的两条带，见结果如图8（其中1、2、6、7、10、12、15、16、17为公鹧鸪，3、4、5、8、9、11、13、14为母鹧鸪）。
供试样本经过解剖，进行性器官观察，以上鉴定结果完全正确。
序列表
<110> 江苏省家禽科学研究所
<120> 一种用于特禽性别鉴定的PCR引物、试剂盒及其方法
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
tatggactag agctgcacaa a 21
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
gagccatctt ctgtctcaa 19

Claims (11)

1.一种性别鉴定用PCR引物，其特征在于，所述引物的核苷酸序列为：正向引物序列如SEQ ID NO.1所示、反向引物序列如SEQ ID NO.2所示。
2.包含权利要求1所述的性别鉴定用PCR引物的试剂盒。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包含PCR反应液和/或DNA提取液。
4.权利要求1所述的PCR引物或权利要求2或3所述的试剂盒在火鸡性别鉴定中的应用，所述应用具体为通过权利要求1所述的PCR引物或权利要求2或3所述的试剂盒进行PCR扩增，电泳结果呈现1083 bp一条带的为公火鸡，呈现1083 bp和766 bp的两条带时为母火鸡。
5.权利要求1所述的PCR引物或权利要求2或3所述的试剂盒在珍珠鸡性别鉴定中的应用，所述应用具体为通过权利要求1所述的PCR引物或权利要求2或3所述的试剂盒进行PCR扩增，电泳结果呈现960 bp一条带的为公珍珠鸡，呈现960 bp和771 bp的两条带时为母珍珠鸡。
6.权利要求1所述的PCR引物或权利要求2或3所述的试剂盒在七彩山鸡性别鉴定中的应用，所述应用具体为通过权利要求1所述的PCR引物或权利要求2或3所述的试剂盒进行PCR扩增，电泳结果呈现1118 bp一条带的为公七彩山鸡，呈现1118 bp和774 bp的两条带时为母七彩山鸡。
7.权利要求1所述的PCR引物或权利要求2或3所述的试剂盒在鹧鸪性别鉴定中的应用，所述应用具体为通过权利要求1所述的PCR引物或权利要求2或3所述的试剂盒进行PCR扩增，电泳结果呈现945 bp一条带的为公鹧鸪，呈现945 bp和815 bp的两条带时为母鹧鸪。
8.一种火鸡、珍珠鸡或七彩山鸡的性别快速鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
1) 提取待测火鸡、珍珠鸡或七彩山鸡的基因组DNA；
2) 以步骤1)中提取的DNA 为模板，利用权利要求1所述引物对，进行PCR 扩增反应；
3) PCR 产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，
当待测特禽为火鸡时，电泳结果呈现1083 bp一条带的为公火鸡，呈现1083 bp和766bp的两条带时为母火鸡；
当待测特禽为珍珠鸡时，电泳结果呈现960 bp一条带的为公珍珠鸡，呈现960 bp和771bp的两条带时为母珍珠鸡；
当待测特禽为七彩山鸡时，电泳结果呈现1118 bp一条带的为公七彩山鸡，呈现1118bp和774 bp的两条带时为母七彩山鸡；
当待测特禽为鹧鸪时，电泳结果呈现945 bp一条带的为公鹧鸪，呈现945 bp和815 bp的两条带时为母鹧鸪。
9.根据权利要求8所述的鉴定方法，其特征在于，步骤1）提取待测火鸡、珍珠鸡或七彩山鸡的基因组DNA选用羽毛、血液、组织或器官进行基因组DNA的提取。
10.根据权利要求8所述的鉴定方法，其特征在于，步骤2）中PCR反应体系为：2×PCRMix 25μL，10μmol/L正向和反向引物各1μL，50-100μg/ml模板DNA 2μL，超纯水21μL。
11.根据权利要求8所述的鉴定方法，其特征在于，步骤2）中PCR反应程序为：95℃ 5min，95℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 30 s 35循环，72℃ 10 min。
CN202111318592.8A 2021-11-09 2021-11-09 一种用于特禽性别鉴定的pcr引物、试剂盒及其方法 Active CN114045347B (zh)

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CN112746070A (zh) * 2021-01-28 2021-05-04 江苏省家禽科学研究所 用于鸡早期性别鉴定的引物对、试剂盒以及它们的应用
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