CN114044808B - 白蛋白亲和剂及其应用 - Google Patents
白蛋白亲和剂及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114044808B CN114044808B CN202111375949.6A CN202111375949A CN114044808B CN 114044808 B CN114044808 B CN 114044808B CN 202111375949 A CN202111375949 A CN 202111375949A CN 114044808 B CN114044808 B CN 114044808B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- peptide
- amino acid
- affinity
- group
- affinity agent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 title claims abstract description 16
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 title claims abstract description 16
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 130
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 52
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 31
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000012867 alanine scanning Methods 0.000 claims abstract description 14
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 40
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 36
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims description 9
- HXMVNCMPQGPRLN-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyputrescine Chemical compound NCCC(O)CN HXMVNCMPQGPRLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 claims description 7
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 claims description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 6
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims description 4
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 claims description 4
- 101000851007 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor receptor 2 Proteins 0.000 claims description 3
- 230000007306 turnover Effects 0.000 claims description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 24
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 11
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 10
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 4
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 abstract description 3
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 abstract description 3
- 238000002823 phage display Methods 0.000 abstract description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 abstract 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 23
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 23
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 11
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 10
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 10
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 5
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- NWOSHVVPKDQKKT-RYUDHWBXSA-N Gly-Tyr-Gln Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O NWOSHVVPKDQKKT-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 4
- HEYZPTCCEIWHRO-IHRRRGAJSA-N Ser-Met-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HEYZPTCCEIWHRO-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 3
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 3
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- JQHYVIKEFYETEW-IHRRRGAJSA-N Met-Phe-Ser Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JQHYVIKEFYETEW-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- 108010053099 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Proteins 0.000 description 2
- 102000016549 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Human genes 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 201000010989 colorectal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 16-Epiaffinine Natural products C1C(C2=CC=CC=C2N2)=C2C(=O)CC2C(=CC)CN(C)C1C2CO PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PBAMJJXWDQXOJA-FXQIFTODSA-N Ala-Asp-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PBAMJJXWDQXOJA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- YCRAFFCYWOUEOF-DLOVCJGASA-N Ala-Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=CC=C1 YCRAFFCYWOUEOF-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- XCBKBPRFACFFOO-AQZXSJQPSA-N Asn-Thr-Trp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O XCBKBPRFACFFOO-AQZXSJQPSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GZUKEVBTYNNUQF-WDSKDSINSA-N Gly-Ala-Gln Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O GZUKEVBTYNNUQF-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- -1 L-form amino acids Chemical class 0.000 description 1
- LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N L-leucine-L-tyrosine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WXHHTBVYQOSYSL-FXQIFTODSA-N Met-Ala-Ser Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WXHHTBVYQOSYSL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- MIAZEQZXAFTCCG-UBHSHLNASA-N Met-Phe-Ala Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MIAZEQZXAFTCCG-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- SSSFPISOZOLQNP-GUBZILKMSA-N Pro-Arg-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O SSSFPISOZOLQNP-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- UIUWGMRJTWHIJZ-ULQDDVLXSA-N Pro-Tyr-Lys Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O UIUWGMRJTWHIJZ-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- FIXILCYTSAUERA-FXQIFTODSA-N Ser-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O FIXILCYTSAUERA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- KNZQGAUEYZJUSQ-ZLUOBGJFSA-N Ser-Asp-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N KNZQGAUEYZJUSQ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- CNIIKZQXBBQHCX-FXQIFTODSA-N Ser-Asp-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O CNIIKZQXBBQHCX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- TVPQRPNBYCRRLL-IHRRRGAJSA-N Ser-Phe-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O TVPQRPNBYCRRLL-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- AHERARIZBPOMNU-KATARQTJSA-N Thr-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AHERARIZBPOMNU-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- AGDDLOQMXUQPDY-BZSNNMDCSA-N Tyr-Tyr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O AGDDLOQMXUQPDY-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 1
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 1
- 238000010640 amide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003277 amino acid sequence analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003527 anti-angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 108010012058 leucyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 238000012917 library technology Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000006996 mental state Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 108010016686 methionyl-alanyl-serine Proteins 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 108010024607 phenylalanylalanine Proteins 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 108010084932 tryptophyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/10—Peptides having 12 to 20 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及一种白蛋白亲和剂，其选自肽SP、其丙氨酸扫描肽、其逆序翻转肽DSP或式I所示的DSP碳端衍生物、SEQ ID NOs：2‑4或SEQ ID NOs：9‑12所示肽。本发明通过噬菌体展示技术筛选得到了亲和血清白蛋白的多肽。本发明还提供了该亲和肽的改造肽在缓解、治疗肿瘤相关疾病等药物中的用途。本发明的亲和剂能特异地亲和白蛋白。
Description
技术领域
本发明涉及生物领域，尤其涉及一种白蛋白亲和剂。
背景技术:
血清白蛋白是由肝脏合成并分泌的，是血浆中最丰富的蛋白质之一，其功能主要是通过血液转运激素、脂肪酸和多种化合物，此外，白蛋白还有助于维持血液渗透压。人血清白蛋白具有与多种配体相互作用的能力，包括多种外源性药物，当前人血清白蛋白被用于载药工具来改善药物的半衰期。药物与人血清白蛋白的相互作用通常会增加药物的分布和生物利用度，具体取决于药物分子的特定药代动力学特性。此外，由于其含量丰富，人血清白蛋白在多种药物的药代动力学行为中起着重要作用，包括：血液中的药物半衰期，调节药物功效，降低药物毒性以及改善药物靶向特异性。有文献报道，通过噬菌体展示肽库技术筛选出白蛋白亲和短肽，融合目标靶向肽，在体内形成一个复杂的白蛋白-多肽结构，以白蛋白作为载体运送药物在血液中循环，避免被肾小球过滤，在不影响其原有抗血管生成的作用下，显著增加了药物半衰期。经白蛋白亲和肽修饰后的药物可以与HSA特异性结合，从而延长其循环寿命，在体内逐渐被蛋白酶水解后，缓慢释放偶联的生物活性药物，相较于其他修饰方法能够使药物在体内持续发挥作用，且不影响药物原有的生物活性。目前针对延长多肽类小分子药物半衰期并延长药物在体内代谢时间的研究已有很多，能够有效延长药物在体内存留的时间，在体内长期发挥药效，有利于在临床上降低给药剂量，减少用药频率。
发明内容
一方面，本发明提供了白蛋白的亲和剂，其选自下述化合物组：
组a：SEQ ID NO.1所示肽SP、其丙氨酸扫描肽、其逆序翻转肽DSP或式I所示的DSP碳端衍生物肽SP各氨基酸均为L型，其丙氨酸扫描肽的氨基酸序列独立选自SEQ ID NOs：5-8，肽DSP氨基酸序列为SEQ ID NO.13且各氨基酸均为D型，式I中各模块的含义：DSP表示序列同肽DSP的肽基且组成该肽基的氨基酸均为D型，P1、P2为靶向肽，L1、L2、L3为连接子且共同用于避免DSP、P1、P2发挥功能时彼此干扰；
组b：多肽b，其氨基酸序列独立选自SEQ ID NOs：2-4或SEQ ID NOs：9-12，所述肽b的各个氨基酸的构型独立地选自D型或L型，如，各氨基酸均为D型或L型。
所述亲和剂在本领域指能亲和白蛋白的分子，本专利的亲和剂，可以游离形式存在，也可以其药学上可接受的盐的形式存在，基于本专利思路的简单变形，均构成对本专利的等同侵权。为行文简洁，对不分构型的甘氨酸，本专利亦将其任意归入D型或L型；对D型氨基酸，用L型氨基酸缩写字母的小写形式表示，其他情况下，如无特别说明，氨基酸的构型为L 型。丙氨酸扫描肽，在本领域指将母体肽的任意一个氨基酸替换为丙氨酸得到的一系列单突变肽，当然，氨基酸的构型保持不变，比如本专利公开的肽MF-1A、MF-2A与MF的氨基酸均为L型。逆序翻转肽是指该肽与其原始肽的氨基酸组成相同，但氨基酸次序相互颠倒且构型由L型翻转为D型。连接子指起连接作用的基团，用于隔离两端所连的功能分子使两者不彼此干扰，包括氨基酸连接子，比如Gly-Ser，以及非氨基酸连接子，如AEEA，其结构如下：
进一步地，所述P1、P2独立选自靶向VEGFR2的肽或靶向PD-L1的肽，VEGFR2即血管内皮细胞生长因子受体2，PD-L1即细胞程序死亡-配体1(Programmed cell death 1ligand1， PD-L1)；比如，所述靶向VEGFR2的肽的序列可为rpplwta；独立可选地，所述靶向PD-L1的肽为rvysf。优选所述P1为靶向PD-L1的肽，所述P2为靶向VEGFR2的肽。
进一步地，所述P2与L3之间、L3与L2之间和/或L2与P1之间，通过形成酰胺键(优选为肽键)彼此连接。所述L3为可为二肽Gly-Ser,优选其两氨基酸的构型均为L型；独立可选地，所述L2为D型赖氨酸。
进一步地，所述L1为n为正整数，优选为1或2。优选地，式中L1是通过氨基与DSP末端的羧基相连的。
进一步地，所述式I的为与肽OGS相同的多肽链rpplwtaGSkrvysf；作为具体示例，所述式I化合物为DSP碳端通过AEEA与肽OGS共价连接得到的肽偶联物DSPOGS，结构式为/>结构式中的AEEA表示/>除此之外，该结构式的其他模块均由氨基酸组成，式I各模块之间均通过酰胺键彼此相连，两个AEEA之间亦通过成酰胺键而缩合，其中由氨基酸组成的模块，均采用本领域标准写法：字母缩写小写表示氨基酸为 D型(比如，k表示式I的所述L2为D型赖氨酸)，字母缩写大写表示L型氨基酸(GS表示前面所述的Gly-Ser)，结构式中各肽链的左端为N端，右端为C端。
另一方面，本发明提供了含任一所述白蛋白亲和剂的药物组合物或试剂盒。
又一方面，本发明提供了所述亲和剂特异性亲和白蛋白的用途，比如：提高所述P1或P2肽的代谢半衰期。
再一方面，本发明提供了抗癌化合物，其为OGS肽或所述式I化合物(所述P1或P2具备抗癌活性时)，OGS肽序列为rpplwtaGSkrvysf(写法如前所述，字母缩写小写表示氨基酸为 D型)。本发明的抗癌化合物可治疗实体瘤，如结直肠癌。
附图说明
图1为MST测定DSP肽和肽偶联物DSPOGS分别与HSA(人血清白蛋白)和MSA(鼠血清白蛋白)的亲和力；
图2为OGS肽和肽偶联物DSPOGS对接种MC38的C57BL/6小鼠移植瘤体积变化的影响；各图中涉及的显著性分析标识*表示P<0.05，**表示P<0.01。
具体实施方式：
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是下列实施例仅用于说明本发明，而不应该为限制本发明的范围。如无特别说明，下面所用试剂、生物材料、培养基和溶液均为本领域常用、公众可以得到或市售的物品，比如白蛋白亲和肽WW序列为WQRPSSW，氨基酸构型均为L型。本发明所涉肽链可通过固相合成得到，氨基酸k与其他模块之间的酰胺键、两个AEEA与其他模块之间的酰胺键、以及两个AEEA之间的酰胺键，均可通过常规成酰胺反应合成得到。
1.噬菌体展示技术筛选HSA亲和肽
采用噬菌体展示固相筛选技术筛选HSA亲和七肽，然后挑选出富集程度较高的噬菌体克隆，通过挑取噬菌斑、PCR扩增噬菌体DNA、DNA测序和氨基酸序列分析，最终得到了数条可能与HSA亲和的候选多肽序列-氨基酸构型均为L。
2.候选肽的亲和力测定
a)标记蛋白：HSA的分子质量为69367Da，MSA的分子质量为68693Da。以HSA为例，根据摩尔计算器计算出HSA摩尔浓度为2.88μM，标蛋白时要求蛋白摩尔浓度在2-20 μM之间。根据染料(470μM)与蛋白摩尔浓度比为3：1的比例标蛋白，加入100μL的 HSA到离心管中，随后计算出所需NT647荧光染料1.9μL，用98.1μL的PBS7.4稀释染料，以染料与蛋白体积比为1：1混合在一起，混匀后避光室温孵育30min，孵育过程即为标记过程，标记后需要用分子筛除去多余未与蛋白结合的染料。
b)冲洗层析柱：首先用PBS7.4小心缓慢加入层析柱中，约加入3mL，待层析柱不再滴落液体后再加入1个柱体积的PBS7.4，最少冲洗3个柱体积，冲洗过程中摆好离心管备用。注意此过程中避免层析柱干燥。
c)纯化已标记的蛋白：待层析柱不再滴落液体时，将标记好的混合液体200μL加入到层析柱中，再加入300μL的PBS7.4，待层析柱不再滴落液体时加入500μL的PBS7.4，此时收集所有滴落的液体，每一滴放入一个离心管中，大概需收集20滴液体，根据蛋白分子量的大小决定收集液体的多少。收集好后，用PBS7.4冲洗层析柱，最少冲洗3 个柱体积，最终将层析柱保存在20％酒精中，置于4℃。收集在离心管中的液体用毛细管吸引摆放在托盘上，随后检测其荧光值，根据荧光值的变化规律收集纯化后与染料结合的蛋白。
d)检测蛋白与多肽的亲和能力：仪器控温至25℃，调节适当的POWER值。多肽用PBS7.4(含有0.1％Tween-20)溶解成摩尔浓度为400μM备用，取10μL的多肽用PBST 倍比稀释成16个浓度梯度样品，再加入10μL标记后的蛋白，混匀后离心除去气泡(此时多肽浓度为100μM)，小心取毛细管吸引混合后的样品按顺序放入托盘上进行检测。在专用软件上点击start scan图标，测定每管样品荧光的一致性，然后点击start measurement图标开始检测。
e)分析数据：选用专用Mo.Control(×86)软件进行分析。
MST实验结果表明NP、SP、TR、MF肽可与HSA特异性亲和，多数对MSA亦有较好的亲和能力。亲和力数据见后附表。
3.SP肽及MF肽的丙氨酸扫描肽的合成
a)丙氨酸扫描是将多肽链某一氨基酸置换成丙氨酸，相当于除去了侧链上的活性基团，换成了无其他官能团的甲基。观察置换丙氨酸后对多肽功能的影响，由此可以推断出多肽链中发挥作用的关键氨基酸，为后续的多肽优化提供思路。为了确定亲和力较高的两条肽SP和MF与HSA相互作用的关键位点，为后续优化提供基础，我们将SP和MF肽序列中每一个氨基酸依次替换成丙氨酸，共得到七条SP肽丙氨酸扫描肽序列和七条 MF肽丙氨酸扫描肽序列。
b)SP肽丙氨酸扫描结果发现将第一位、第三位和第七位氨基酸置换成丙氨酸后多肽与 HSA无亲和能力，而将多肽链中第五位和第六位氨基酸置换成丙氨酸后严重影响了多肽与HSA的亲和能力，但将多肽链中第二位和第四位氨基酸替换成丙氨酸后对多肽的功能无影响。故可推断，SP肽序列中第一位、第三位、第五位、第六位和第七位为SP 与HSA相互作用的关键位点。
c)MF肽丙氨酸扫描结果发现将第四位、第六位和第七位氨基酸置换成丙氨酸后多肽与 HSA无亲和能力，而将多肽链中第二位和第五位氨基酸置换成丙氨酸后严重影响了多肽与HSA的亲和能力，但将多肽链中第一位和第三位氨基酸替换成丙氨酸后对多肽的功能无影响。故可推断，MF肽序列中第二位、第四位、第五位、第六位和第七位为 MF与HSA相互作用的关键位点。
丙氨酸扫描肽亲和结果见后附表。
4.SP肽经逆序翻转得到DSP肽
对SP肽进行结构预测，发现其结构并非为α螺旋结构，将组成SP肽的L-氨基酸替换为D- 氨基酸，再将其逆序排列后仍能保持SP肽的原有结构；将SP肽经逆序翻转得到的全由D 构型氨基酸组成的肽命名为的DSP肽。经MST实验证明DSP肽与HSA和MSA仍具有很强的亲和力。
5.DSP肽偶联治疗肽使治疗肽半衰期显著延长
将治疗肽OGS肽和DSP肽偶联得到的DSPOGS肽偶联物以8μmol/kg的剂量通过尾静脉注射到SD大鼠体内。注射后在不同时间点尾静脉取血，经蛋白沉淀等处理后,用RP-HPLC分析样品检测血液中多肽的含量。结果表明OGS肽的半衰期为29.94±2.00min,DSPOGS的半衰期为326.08±72.31min，经DSP修饰后OGS肽的半衰期显著延长。
6.在MC38结直肠癌移植瘤模型中探究OGS肽和肽偶联物DSPOGS的抗肿瘤效果，具体实施方法如下：
a)荷瘤：收集生长状态良好的MC38结直肠癌细胞，以1×106cells/只对C57BL/6小鼠荷瘤。
b)待荷瘤一周左右，小鼠瘤体积小鼠瘤体积约长至40-80mm3时开始S形分组并每天腹腔给药，给药剂量为3μmol/kg，连续给药18天，给药期间隔天使用电子天平称量小鼠体重、数显游标卡尺测量小鼠肿瘤，按照公式V＝1/2×a(长)×b(宽)×c(高)计算并记录小鼠肿瘤体积变化。
c)瘤体积曲线表明OGS肽和DSPOGS在3μmol/kg的给药剂量下均能够抑制MC38结直肠癌移植瘤的生长，且DSPOGS与OGS肽相比抗肿瘤作用显著增强。且OGS肽和DSPOGS在3μmol/kg的给药剂量下C57BL/6小鼠的体重无明显减轻现象，给药期间小鼠精神状态较为良好，表明药物分子对小鼠身体状况无明显毒副作用。
表1经淘选所得七肽，MST检测候选肽与HSA的亲和力，WW为阳性对照肽。
表2 MST检测候选肽与MSA的亲和力，WW为阳性对照肽。
*表示不结合
表3 MST测定SP和MF肽的丙氨酸扫描肽与HSA的亲和力，WW为阳性对照肽。
所涉活性多肽及序列：
| 多肽名称 | 多肽序列 |
| SP | SMFSDRP |
| NP | NTWPYKP |
| TR | TSLYYSR |
| MF | MFSGYQY |
| SP-2A | SAFSDRP |
| SP-4A | SMFADRP |
| SP-5A | SMFSARP |
| SP-6A | SMFSDAP |
| MF-1A | AFSGYQY |
| MF-2A | MASGYQY |
| MF-3A | MFAGYQY |
| MF-5A | MFSGAQY |
| DSP | prdsfms |
| OGS | rpplwtaGSkrvysf |
序列表
<110> 郑州大学
<120> 白蛋白亲和剂及其应用
<160> 13
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Ser Met Phe Ser Asp Arg Pro
1 5
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Asn Thr Trp Pro Tyr Lys Pro
1 5
<210> 3
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Thr Ser Leu Tyr Tyr Ser Arg
1 5
<210> 4
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Met Phe Ser Gly Tyr Gln Tyr
1 5
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Ser Ala Phe Ser Asp Arg Pro
1 5
<210> 6
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Ser Met Phe Ala Asp Arg Pro
1 5
<210> 7
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Ser Met Phe Ser Ala Arg Pro
1 5
<210> 8
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Ser Met Phe Ser Asp Ala Pro
1 5
<210> 9
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
Ala Phe Ser Gly Tyr Gln Tyr
1 5
<210> 10
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
Met Ala Ser Gly Tyr Gln Tyr
1 5
<210> 11
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
Met Phe Ala Gly Tyr Gln Tyr
1 5
<210> 12
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
Met Phe Ser Gly Ala Gln Tyr
1 5
<210> 13
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
Pro Arg Asp Ser Phe Met Ser
1 5
Claims (5)
1.白蛋白的亲和剂，其选自下述化合物组：
组a：序列为SMFSDRP的肽SP、其丙氨酸扫描肽、其逆序翻转肽DSP或式I所示的DSP碳端衍生物肽SP各氨基酸均为L型，其丙氨酸扫描肽的氨基酸序列独立选自SAFSDRP或SMFADRP，肽DSP氨基酸序列为prdsfms且各氨基酸均为D型，式I中：DSP表示序列同肽DSP的肽基且组成该肽基的氨基酸均为D型，P1、P2为靶向肽，L1、L2、L3为连接子且共同用于避免DSP、P1、P2发挥靶向功能时彼此干扰；
组b：多肽b，其氨基酸序列独立选自NTWPYKP、TSLYYSR、MFSGYQY、AFSGYQY或MFAGYQY，所述肽b的各个氨基酸的构型均为L型；
其特征是，所述P2选自靶向VEGFR2的肽，P1为靶向PD-L1的肽，所述靶向VEGFR2的肽的序列为rpplwta，所述靶向PD-L1的肽为rvysf；
所述P2与L3之间、L3与L2之间和/或L2与P1之间，通过形成酰胺键彼此连接；
所述L3为肽Gly-Ser,其两氨基酸的构型均为L型，所述L2为D型赖氨酸；
所述L1为n为2；
式中L1是通过氨基与DSP末端的羧基相连的。
2.如权利要求1所述的亲和剂，其特征是，所述酰胺键为肽键。
3.如任一在先权利要求所述的亲和剂，其特征是，所述式I的P2-L3—L2—P1为多肽链rpplwtaGSkrvysf。
4.如权利要求1所述的亲和剂，其特征是，所述L2为D型赖氨酸，式I结构式为
结构式中的AEEA表示
5.含任一在先权利要求所述亲和剂的药物组合物或试剂盒。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111375949.6A CN114044808B (zh) | 2021-11-19 | 2021-11-19 | 白蛋白亲和剂及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111375949.6A CN114044808B (zh) | 2021-11-19 | 2021-11-19 | 白蛋白亲和剂及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114044808A CN114044808A (zh) | 2022-02-15 |
| CN114044808B true CN114044808B (zh) | 2024-01-30 |
Family
ID=80210143
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111375949.6A Active CN114044808B (zh) | 2021-11-19 | 2021-11-19 | 白蛋白亲和剂及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114044808B (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108341853A (zh) * | 2017-01-22 | 2018-07-31 | 中国科学院化学研究所 | 人血清白蛋白特异性识别多肽及其应用 |
| CN109776653A (zh) * | 2018-11-26 | 2019-05-21 | 上海华新生物高技术有限公司 | 一种新型人血清白蛋白黏附肽及其应用 |
| CN110330550A (zh) * | 2019-08-02 | 2019-10-15 | 郑州大学 | PD-L1-IgV的亲和肽及其应用 |
| CN112409450A (zh) * | 2020-03-29 | 2021-02-26 | 郑州大学 | TIGIT-IgV的亲和剂及其应用 |
-
2021
- 2021-11-19 CN CN202111375949.6A patent/CN114044808B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108341853A (zh) * | 2017-01-22 | 2018-07-31 | 中国科学院化学研究所 | 人血清白蛋白特异性识别多肽及其应用 |
| CN109776653A (zh) * | 2018-11-26 | 2019-05-21 | 上海华新生物高技术有限公司 | 一种新型人血清白蛋白黏附肽及其应用 |
| CN110330550A (zh) * | 2019-08-02 | 2019-10-15 | 郑州大学 | PD-L1-IgV的亲和肽及其应用 |
| CN112409450A (zh) * | 2020-03-29 | 2021-02-26 | 郑州大学 | TIGIT-IgV的亲和剂及其应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Albumin Concentration Controls Cancer;Kenneth Seaton 等;《JOURNAL OF THE NATIONAL MEDICAL ASSOCIATION》;第93卷(第12期);第490-493页 * |
| Harnessing albumin as a carrier for cancer therapies;Ella N. Hoogenboezem 等;《Advanced Drug Delivery Reviews》;第1-17页 * |
| 白蛋白亲和肽- 黑色素瘤抗原肽胶束淋巴结的靶向性研究;李琳 等;《华西药学杂志》;第33卷(第1期);第1-4页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114044808A (zh) | 2022-02-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2003274822B2 (en) | Intracellular delivery of biological effectors | |
| JP4387669B2 (ja) | 新規なトランスポーターペプチド配列による生物学的エフェクターの細胞内送達 | |
| JP4044140B2 (ja) | インスリン誘導体類とその使用 | |
| KR101216008B1 (ko) | 바이포달 펩타이드 바인더 | |
| CN104395338B (zh) | 人胰岛淀粉样多肽类似物 | |
| JP2007056023A (ja) | 親油性のペプチドホルモン誘導体 | |
| Chothia et al. | Helix movements and the reconstruction of the haem pocket during the evolution of the cytochrome c family | |
| CN103450348A (zh) | 一种促红细胞生成素模拟肽、其制备方法和用途 | |
| BR112013024706B1 (pt) | Método para preparar análogos de exendina peguilada e análogo de exendina peguilada | |
| CN104231067B (zh) | 促红细胞生成素模拟肽化学二聚体及其用途 | |
| Mezö et al. | Synthesis of Gonadotropin-Releasing Hormone III Analogs. Structure− Antitumor Activity Relationships | |
| CN117143194B (zh) | 抗血小板聚集多肽、其制备方法及应用 | |
| CN112409450B (zh) | TIGIT-IgV的亲和剂及其应用 | |
| CN114044808B (zh) | 白蛋白亲和剂及其应用 | |
| Neundorf et al. | Detailed analysis concerning the biodistribution and metabolism of human calcitonin-derived cell-penetrating peptides | |
| CN112225820A (zh) | 肿瘤特异靶向性基质的重组人血清白蛋白-胶原结合域融合蛋白和应用 | |
| WO2016148213A1 (ja) | 血液脳関門透過性ペプチド | |
| KR101323846B1 (ko) | 타겟 친화도가 유지되고 안정성이 개선된 ｄ－앱타이드 | |
| WO2023088143A1 (zh) | 含订合钉的多肽及其应用 | |
| CN117143193B (zh) | 血小板聚集抑制肽、其制备方法及应用 | |
| CN103897031A (zh) | 化学修饰的胸腺五肽及其合成方法 | |
| AU2008201592C1 (en) | Intracellular Delivery of Biological Effectors | |
| CN117362391A (zh) | 一种靶向降解brd4的多肽偶联蛋白降解靶向嵌合体化合物、其中间体、制备方法及应用 | |
| CN117083304A (zh) | c－Met蛋白结合肽复合物 | |
| CN118290537A (zh) | 一种在nci-h460细胞系中对ck2起到抑制作用的多肽 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |