CN114040815A - 阴离子交换-疏水混合模式色谱树脂 - Google Patents
阴离子交换-疏水混合模式色谱树脂 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114040815A CN114040815A CN202080048684.6A CN202080048684A CN114040815A CN 114040815 A CN114040815 A CN 114040815A CN 202080048684 A CN202080048684 A CN 202080048684A CN 114040815 A CN114040815 A CN 114040815A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- group
- chromatography
- alkyl
- optionally substituted
- resin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000012539 chromatography resin Substances 0.000 title claims abstract description 29
- 150000001450 anions Chemical group 0.000 title claims abstract description 15
- 238000012434 mixed-mode chromatography Methods 0.000 title description 6
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims abstract description 55
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims abstract description 55
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 53
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 25
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 111
- 239000012504 chromatography matrix Substances 0.000 claims description 65
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 claims description 50
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 47
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 45
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 45
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 44
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 36
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 35
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 claims description 23
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 22
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims description 21
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 18
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 125000004076 pyridyl group Chemical group 0.000 claims description 14
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 14
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 claims description 11
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 9
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 claims description 9
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 8
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 claims description 8
- STMDPCBYJCIZOD-UHFFFAOYSA-N 2-(2,4-dinitroanilino)-4-methylpentanoic acid Chemical compound CC(C)CC(C(O)=O)NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O STMDPCBYJCIZOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 125000003700 epoxy group Chemical group 0.000 claims description 7
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical group Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 238000006268 reductive amination reaction Methods 0.000 claims description 6
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 claims description 4
- WERYXYBDKMZEQL-UHFFFAOYSA-N butane-1,4-diol Chemical compound OCCCCO WERYXYBDKMZEQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 4
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 claims description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 3
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 claims description 2
- 150000002924 oxiranes Chemical class 0.000 claims 3
- 239000000049 pigment Substances 0.000 claims 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 42
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 21
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 13
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 11
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- -1 anionic salt Chemical class 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 9
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 9
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 7
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 7
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 7
- 150000002009 diols Chemical class 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 150000002118 epoxides Chemical class 0.000 description 6
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical compound NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 5
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 5
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 4
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 4
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 4
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 4
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- GNVMUORYQLCPJZ-UHFFFAOYSA-M Thiocarbamate Chemical compound NC([S-])=O GNVMUORYQLCPJZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 3
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 3
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 3
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 3
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- IEJPPSMHUUQABK-UHFFFAOYSA-N 2,4-diphenyl-4h-1,3-oxazol-5-one Chemical group O=C1OC(C=2C=CC=CC=2)=NC1C1=CC=CC=C1 IEJPPSMHUUQABK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YYROPELSRYBVMQ-UHFFFAOYSA-N 4-toluenesulfonyl chloride Chemical compound CC1=CC=C(S(Cl)(=O)=O)C=C1 YYROPELSRYBVMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101800000263 Acidic protein Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CGPHZDRCVSLMCF-JZMIEXBBSA-N CDP-alpha-D-glucose Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 CGPHZDRCVSLMCF-JZMIEXBBSA-N 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N Furan Chemical compound C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N Pyrrole Chemical compound C=1C=CNC=1 KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YTPLMLYBLZKORZ-UHFFFAOYSA-N Thiophene Chemical compound C=1C=CSC=1 YTPLMLYBLZKORZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 2
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 2
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000002950 monocyclic group Chemical group 0.000 description 2
- ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N n,n'-methylenebisacrylamide Chemical compound C=CC(=O)NCNC(=O)C=C ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RCHKEJKUUXXBSM-UHFFFAOYSA-N n-benzyl-2-(3-formylindol-1-yl)acetamide Chemical compound C12=CC=CC=C2C(C=O)=CN1CC(=O)NCC1=CC=CC=C1 RCHKEJKUUXXBSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 2
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 2
- 125000004169 (C1-C6) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- XEPXTKKIWBPAEG-UHFFFAOYSA-N 1,1-dichloropropan-1-ol Chemical compound CCC(O)(Cl)Cl XEPXTKKIWBPAEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CXCHEKCRJQRVNG-UHFFFAOYSA-N 2,2,2-trifluoroethanesulfonyl chloride Chemical compound FC(F)(F)CS(Cl)(=O)=O CXCHEKCRJQRVNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCXVJRGWDAFVTK-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydroxyocta-2,6-dienediamide Chemical compound NC(=O)C=CCCC(O)=C(O)C(N)=O ZCXVJRGWDAFVTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHKUUQIDMUMQQK-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(oxiran-2-ylmethoxy)butoxymethyl]oxirane Chemical compound C1OC1COCCCCOCC1CO1 SHKUUQIDMUMQQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MPQPXMRGNQJXGO-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxamide Chemical compound NC(=O)CC(O)(C(N)=O)CC(N)=O MPQPXMRGNQJXGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PAKCOSURAUIXFG-UHFFFAOYSA-N 3-prop-2-enoxypropane-1,2-diol Chemical compound OCC(O)COCC=C PAKCOSURAUIXFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 229920000945 Amylopectin Polymers 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 240000008564 Boehmeria nivea Species 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241001125671 Eretmochelys imbricata Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N Hydroxyethyl methacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCO WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- 239000007832 Na2SO4 Substances 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N Vinyl acetate Chemical compound CC(=O)OC=C XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 125000002619 bicyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- CQEYYJKEWSMYFG-UHFFFAOYSA-N butyl acrylate Chemical compound CCCCOC(=O)C=C CQEYYJKEWSMYFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 1
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 1
- 239000012501 chromatography medium Substances 0.000 description 1
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001995 cyclobutyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001559 cyclopropyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 description 1
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N cysteamine Chemical compound NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- GYZLOYUZLJXAJU-UHFFFAOYSA-N diglycidyl ether Chemical compound C1OC1COCC1CO1 GYZLOYUZLJXAJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N divinyl sulfone Chemical compound C=CS(=O)(=O)C=C AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GKIPXFAANLTWBM-UHFFFAOYSA-N epibromohydrin Chemical compound BrCC1CO1 GKIPXFAANLTWBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001600 hydrophobic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001597 immobilized metal affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001972 isopentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 229960003151 mercaptamine Drugs 0.000 description 1
- FQPSGWSUVKBHSU-UHFFFAOYSA-N methacrylamide Chemical compound CC(=C)C(N)=O FQPSGWSUVKBHSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005397 methacrylic acid ester group Chemical group 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- GEEBERLMXGRSBG-UHFFFAOYSA-N n-ethenylpropan-1-amine Chemical compound CCCNC=C GEEBERLMXGRSBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- NXGWSWBWEQYMND-UHFFFAOYSA-N piperazine;prop-2-enamide Chemical compound NC(=O)C=C.NC(=O)C=C.C1CNCCN1 NXGWSWBWEQYMND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 229920002454 poly(glycidyl methacrylate) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920000193 polymethacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012925 reference material Substances 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 150000003871 sulfonates Chemical class 0.000 description 1
- 150000003459 sulfonic acid esters Chemical class 0.000 description 1
- YBBRCQOCSYXUOC-UHFFFAOYSA-N sulfuryl dichloride Chemical class ClS(Cl)(=O)=O YBBRCQOCSYXUOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229930192474 thiophene Natural products 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 1
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J41/00—Anion exchange; Use of material as anion exchangers; Treatment of material for improving the anion exchange properties
- B01J41/08—Use of material as anion exchangers; Treatment of material for improving the anion exchange properties
- B01J41/12—Macromolecular compounds
- B01J41/14—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving unsaturated carbon-to-carbon bonds
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 - B01D15/36
- B01D15/3847—Multimodal interactions
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
- B01J20/286—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers
- B01J20/289—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers bonded via a spacer
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3202—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the carrier, support or substrate used for impregnation or coating
- B01J20/3206—Organic carriers, supports or substrates
- B01J20/3208—Polymeric carriers, supports or substrates
- B01J20/321—Polymeric carriers, supports or substrates consisting of a polymer obtained by reactions involving only carbon to carbon unsaturated bonds
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
- B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
- B01J20/3244—Non-macromolecular compounds
- B01J20/3246—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure
- B01J20/3248—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure the functional group or the linking, spacer or anchoring group as a whole comprising at least one type of heteroatom selected from a nitrogen, oxygen or sulfur, these atoms not being part of the carrier as such
- B01J20/3253—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure the functional group or the linking, spacer or anchoring group as a whole comprising at least one type of heteroatom selected from a nitrogen, oxygen or sulfur, these atoms not being part of the carrier as such comprising a cyclic structure not containing any of the heteroatoms nitrogen, oxygen or sulfur, e.g. aromatic structures
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
- B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
- B01J20/3244—Non-macromolecular compounds
- B01J20/3246—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure
- B01J20/3248—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure the functional group or the linking, spacer or anchoring group as a whole comprising at least one type of heteroatom selected from a nitrogen, oxygen or sulfur, these atoms not being part of the carrier as such
- B01J20/3255—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure the functional group or the linking, spacer or anchoring group as a whole comprising at least one type of heteroatom selected from a nitrogen, oxygen or sulfur, these atoms not being part of the carrier as such comprising a cyclic structure containing at least one of the heteroatoms nitrogen, oxygen or sulfur, e.g. heterocyclic or heteroaromatic structures
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3291—Characterised by the shape of the carrier, the coating or the obtained coated product
- B01J20/3293—Coatings on a core, the core being particle or fiber shaped, e.g. encapsulated particles, coated fibers
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J41/00—Anion exchange; Use of material as anion exchangers; Treatment of material for improving the anion exchange properties
- B01J41/04—Processes using organic exchangers
- B01J41/07—Processes using organic exchangers in the weakly basic form
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J47/00—Ion-exchange processes in general; Apparatus therefor
- B01J47/014—Ion-exchange processes in general; Apparatus therefor in which the adsorbent properties of the ion-exchanger are involved, e.g. recovery of proteins or other high-molecular compounds
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J47/00—Ion-exchange processes in general; Apparatus therefor
- B01J47/02—Column or bed processes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/165—Extraction; Separation; Purification by chromatography mixed-mode chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/18—Ion-exchange chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/88—Lyases (4.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y402/00—Carbon-oxygen lyases (4.2)
- C12Y402/01—Hydro-lyases (4.2.1)
- C12Y402/01045—CDP-glucose 4,6-dehydratase (4.2.1.45)
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
- B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
- B01J2220/52—Sorbents specially adapted for preparative chromatography
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Pyridine Compounds (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
提供了具有阴离子交换‑疏水混合模式配体的色谱树脂和使用这种树脂的方法。
Description
本申请要求于2019年9月5日提交的美国临时申请62/896,196的权益，其通过引用整体并入本文。
背景技术
从主要是哺乳动物体液或细胞培养收获物的源液体中提取免疫球蛋白对于获得足够浓缩或纯化形式的免疫球蛋白用于诊断和治疗用途以及一般的实验室研究是有价值的。类似地，从生物样品纯化其它类型的蛋白质和其它分子也很有价值。
发明内容
提供了包含与阴离子交换-疏水混合模式配体连接的色谱基质的色谱树脂。在一些实施方式中，色谱树脂具有下式：
色谱基质-(X)-N(R1)-(R2-L)n-Ar
或其阴离子盐，
其中，
X是间隔物；
R1是氢或任选被-OH取代的C1至C6烷基；
R2是C2至C6烷基或C4至C6环烷基；
L是NR4、O或S；
n＝1或2；和
Ar是6–10元环，并且：
如果Ar是芳基，则该芳基任选被至多五个C1至C3未取代烷基、C3至C6支化烷基、未取代芳基或氟基团取代；或者
如果Ar是杂芳基，则该杂芳基任选地被至多四个未取代烷基取代，
限制条件是当R1是氢，R2是C2烷基，L是NR4或O，并且n是1时，Ar不是苯基。
在色谱树脂的一些实施方式中：
X选自下组：–O-CH2-，–O-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-CH2-，-O-CH2-CH(CH2-OH)-(O-CH2-CH(OH)-CH2)2-，–O-CH2-CH2-CH(CH2-OH)-(O-CH2-CH2-CH(OH)-CH2)2-，–O-CH2-CH(OH)-CH2-，–O-CH2-CH2-CH(OH)-CH2-CH2-，–O-CH2-CH(OH)-CH2-O-CH2-CH2-CH2-CH2-O-CH2-CH(OH)-CH2-，和-CO-NH-C(CH3)2-CO-；
R1是氢或C1至C3烷基；
R2是C2至C4烷基；
L是O；
n＝1；和
Ar是6元环，并且：
如果Ar是芳基，则该芳基任选被至多四个C1至C2未取代烷基、C3或C4支化烷基或氟基团取代；或者
如果Ar是杂芳基，则该杂芳基任选地被至多三个未取代烷基取代，
限制条件是当R1是氢，R2是C2烷基，并且n是1时，Ar不是苯基。
具体实施方式
提供了可用于使用阴离子交换和疏水混合模式色谱纯化目标生物分子的色谱树脂。所述色谱树脂允许从样品高效纯化目标生物分子(例如，重组蛋白)。在一个实施方式中，色谱树脂可用于将目标蛋白质与样品中的一种或多种成分(例如，污染物)分离。
定义
除非另有说明，本申请中使用的下列术语(包括说明书和权利要求)具有以下定义。在本说明书和所附权利要求书中所用的单数形式“一个”、“一种”和“该”包括多个指示物，除非上下文中有明显的表示。标准化学术语的定义可见于参考书籍，包括Carey和Sundberg(2007)“《高级有机化学第5版》(Advanced Organic Chemistry 5th Ed.)”A卷和B卷，施普林格科学商务媒体有限责任公司(Springer Science+Business Media LLC)，纽约。除非另有说明，否则本发明的实践将采用合成有机化学，质谱的常规方法，色谱，蛋白质化学，生物化学，重组DNA技术和制药的制备和分析方法。
如本文所用，术语“烷基”是指具有1-10个碳原子的直链或支化、饱和、脂肪族基团。例如，C1-C6烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基和/或己基。烷基可包括任何数量的碳，例如1-2、1-3、1-4、1-5、1-6、1-7、1-8、1-9、1-10、2-3、2-4、2-5、2-6、3-4、3-5、3-6、4-5、4-6和5-6。烷基通常是一价的，但也可以是二价的，例如当烷基将两个化学基团连接在一起时。
如本文所用，术语“环烷基”是指具有所示碳原子数的单环烷基。单环包括例如环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
如本文所用，术语“芳基”是指单环或稠合双环芳环组件。例如，芳基可以是苯基或萘基。芳基可以任选地被一个、两个、三个、四个或五个未取代的烷基、未取代的芳基或氟基团取代。
术语“杂原子”是指N、O和S。
如本文所用，术语“杂芳基”是指包含一个杂原子作为环成员的芳族基团。示例包括但不限于吡咯、呋喃、噻吩和吡啶。杂芳基可任选地被一个、两个、三个或四个烷基取代。
在配体中的碱性(例如氨基或烷基氨基)基团处形成“阴离子盐”。阴离子盐包括但不限于卤化物、磺酸盐、硫酸盐、羧酸盐、磷酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐和硝酸盐。酸加成盐的示例包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐和硝酸盐。
如本文所用，术语“间隔物”是指具有选自H、C、N、O和S的1-30个原子的分子。间隔物具有中性电荷并可包括环状基团。间隔物将色谱配体连接到色谱基质。用于将间隔物连接到色谱基质的键类型包括但不限于酰胺、胺、醚、酯、氨基甲酸酯、脲、硫醚、硫代氨基甲酸酯、硫代碳酸酯和硫脲。在一些实施方式中，用于将间隔物连接到色谱基质的键是胺、醚或酰胺。
“生物样品”是指含有希望被纯化的生物来源的目标分子(“生物分子”)的任何组合物。在一些实施方式中，待纯化的靶分子是抗体或非抗体蛋白质。
“抗体”是指免疫球蛋白、其复合物(如融合物)或其片段形式。该术语包括但不限于：源自人或其它哺乳动物细胞系的IgA、IgD、IgE、IgG和IgM类的多克隆或单克隆抗体，包括天然形式或遗传修饰形式，如人源化、人、单链、嵌合、合成、重组、杂合、突变、移接和体外生成的抗体。“抗体”还包括复合形式，包括但不限于具有免疫球蛋白部分的融合蛋白。“抗体”还包括抗体片段，例如Fab、F(ab')2、Fv、scFv、Fd、dAb、Fc，无论它们是否保留抗原结合功能。
术语“蛋白质”是指氨基酸残基的聚合物。该术语适用于其中一个或多个氨基酸残基是相应天然产生氨基酸的人造化学模拟物的氨基酸聚合物，以及天然产生的氨基酸聚合物和非天然产生的氨基酸聚合物(例如，重组蛋白)。
“结合-洗脱模式”是指色谱的操作方法，其中建立缓冲条件，从而使得当将样品施加到配体时目标分子和任选的不期望的污染物与配体结合。随后可以通过改变条件使目标从支持物(support)上洗脱来实现目标的分级分离(fractionation)。在一些实施方式中，污染物在目标洗脱后保持结合。在一些实施方式中，污染物在目标洗脱之前流穿(flow-through)或被结合和洗脱。
“流穿模式(flow-through mode)”是指色谱的操作方法，其中建立缓冲条件以使得待纯化的目标流过包含配体的色谱支持物，同时至少一些样品污染物被选择性地保留，从而实现它们从样品的去除。
色谱配体
在一个实施方式中，混合模式色谱支持物和配体具有下式：
色谱基质-(X)-N(R1)-(R2-L)n-Ar
或其阴离子盐，
其中：
X是间隔物；
R1是氢或任选被-OH取代的C1至C6烷基；
R2是C2至C6烷基或C4至C6环烷基；
L是NR4、O或S；
n＝1或2；和
Ar是6–10元环，并且：
如果Ar是芳基，则该芳基任选被至多五个C1至C3未取代烷基、C3至C6支化烷基、未取代芳基或氟基团取代；或者
如果Ar是杂芳基，则该杂芳基任选地被至多四个未取代烷基取代，
限制条件是当R1是氢，R2是C2烷基，L是NR4或O，并且n是1时，Ar不是苯基。
与间隔物相邻的氮的电荷取决于pH。因此，这些树脂提供弱离子交换。
在第一实施方式的第一方面，R1是氢或C1至C3烷基。或者，R1是氢或C1至C2烷基。
在第一实施方式的第二方面，R2是C2至C4烷基。或者，R2是C2或C3烷基。
在第一实施方式的第三方面，L是NR4或O；或NR4或S。或者，L为O。
在第一实施方式的第四方面，n是1。
在第一实施方式的第五个方面，Ar是6元环，并且如果Ar是芳基，则该芳基任选地被至多四个C1至C2未取代烷基、C3至C4支化烷基，或氟基团取代，或如果Ar是杂芳基，则该杂芳基任选地被至多三个烷基取代，限制条件是当R1是氢，R2是C2烷基，L是NR4或O，并且n是1时，Ar不是苯基。或者，Ar是苯基、萘基或吡啶基，任选地被至多三个C1至C2未取代烷基或氟基团取代，条件是当R1是氢，R2是C2烷基，L是NR4或O，并且n是1时，Ar不是苯基。或者，Ar是任选地被一个或两个C1至C2未取代烷基取代的苯基，限制条件是当R1是氢，R2是C2烷基，L是NR4或O，并且n是1时，Ar不是苯基。或者，Ar是被一个C1至C3未取代烷基、C3至C6支化烷基、未取代芳基或氟基团在相对于色谱基质-(X)-N(R1)-(R2-L)n-的对位或间位取代的苯基。或者，Ar是杂芳基并且杂芳基中的杂原子是N。或者，Ar是未取代的杂芳基。在又一个替代实施方式中，Ar是吡啶基。
在第一实施方式的第六方面，X通过选自酰胺、胺、醚、酯、氨基甲酸酯、脲、硫醚、硫代氨基甲酸酯、硫代碳酸酯和硫脲的键附接到色谱基质。或者，键是胺、醚或酰胺。
在第一实施方式的第七方面，X选自下组：–O-CH2-，–O-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-CH2-，-O-CH2-CH(CH2-OH)-(O-CH2-CH(OH)-CH2)2-，–O-CH2-CH2-CH(CH2-OH)-(O-CH2-CH2-CH(OH)-CH2)2-，–O-CH2-CH(OH)-CH2-，–O-CH2-CH2-CH(OH)-CH2-CH2-，–O-CH2-CH(OH)-CH2-O-CH2-CH2-CH2-CH2-O-CH2-CH(OH)-CH2-，和-CO-NH-C(CH3)2-CO-。或者，X选自下组：–O-CH2-，–O-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-CH2-，和–O-CH2-CH(OH)-CH2-。
在第二实施方式中，色谱树脂具有下式：
色谱基质-(X)-N(R1)-(R2-L)n-Ar
或其阴离子盐，
其中：
X选自下组：–O-CH2-，–O-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-CH2-，-O-CH2-CH(CH2-OH)-(O-CH2-CH(OH)-CH2)2-，–O-CH2-CH2-CH(CH2-OH)-(O-CH2-CH2-CH(OH)-CH2)2-，–O-CH2-CH(OH)-CH2-，–O-CH2-CH2-CH(OH)-CH2-CH2-，–O-CH2-CH(OH)-CH2-O-CH2-CH2-CH2-CH2-O-CH2-CH(OH)-CH2-，和-CO-NH-C(CH3)2-CO-；
R1是氢或C1至C3烷基；
R2是C2至C4烷基；
L是O；
n＝1；和
Ar是6元环，并且：
如果Ar是芳基，则该芳基任选被至多四个C1至C2未取代烷基、C3或C4支化烷基或氟基团取代；或者
如果Ar是杂芳基，则该杂芳基任选地被至多三个未取代烷基取代，
限制条件是当R1是氢，R2是C2烷基，并且n是1时，Ar不是未取代的苯基。
在第二实施方式的第一方面，R1是氢或C1至C2烷基。
在第二实施方式的第二方面，R2是C2或C3烷基。
在第二实施方式的第三方面，Ar是苯基、萘基或吡啶基，其任选地被至多三个C1至C2未取代的烷基或氟基团取代，条件是当R1是氢，R2是C2烷基，L是NR4或O，且n是1时，Ar不是苯基。或者，Ar是任选地被一个或两个C1至C2未取代烷基取代的苯基，限制条件是当R1是氢，R2是C2烷基，L是NR4或O，并且n是1时，Ar不是苯基。或者，Ar是被一个C1至C2未取代烷基在相对于色谱基质-(X)-N(R1)-(R2-L)n-的对位或间位取代的苯基。或者，Ar是杂芳基并且杂芳基中的杂原子是N。或者，Ar是未取代的杂芳基。在又一个替代实施方式中，Ar是吡啶基。
在第三实施方式中，色谱树脂具有下式：
色谱基质-(X)-N(R1)-(R2-L)n-Ar
或其阴离子盐，
其中：
X选自下组：–O-CH2-，–O-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-CH2-和–O-CH2-CH(OH)-CH2-；
R1是氢或C1至C2烷基；
R2是C2至C3烷基；
L是O；
n＝1；和
Ar是苯基、萘基或吡啶基，其任选地被至多三个C1至C2未取代的烷基取代，限制条件是当R1是氢，R2是C2烷基，并且n是1时，Ar不是未取代的苯基。
在第三实施方式的第一方面，Ar是任选被一个或两个C1至C2未取代的烷基取代的苯基，限制条件是当R1是氢，R2是C2烷基，Ar不是苯基。或者，Ar是被甲基在相对于色谱基质-(X)-N(R1)-(R2-L)n-的对位或间位取代的苯基。或者，Ar是未取代的苯基，限制条件是R1不是氢，R2不是C2烷基。
在第四实施方式中，-(X)-N(R1)-(R2-L)n-Ar是表1配体中的任何一种。
表1
在第五实施方式中，色谱树脂具有下式：
色谱基质-(X)-N-[(R2-L)n-Ar]2
或其阴离子盐，
其中：
X是间隔物；
R2是C2至C6烷基或C4至C6环烷基；
L是NR4、O或S；
n＝1或2；和
Ar是6–10元环，并且：
如果Ar是芳基，则该芳基任选被至多五个C1至C3未取代烷基、C3至C6支化烷基、未取代芳基或氟基团取代；或者
如果Ar是杂芳基，则该杂芳基任选地被至多四个未取代烷基取代。
在第五实施方式的第一方面，R2是C2至C4烷基。或者，R2是C2或C3烷基。
在第一实施方式的第三方面，L是NR4或O；或NR4或S。或者，L为O。
在第五实施方式的第三方面，n是1。
在第五实施方式的第四方面，Ar是6元环，并且如果Ar是芳基，则该芳基任选地被至多四个C1至C2未取代烷基、C3至C4支化烷基，或氟基团取代，或如果Ar是杂芳基，则该杂芳基任选地被至多三个烷基取代。或者，Ar是任选地被至多三个C1至C2未取代烷基或氟基团取代的苯基、萘基或吡啶基。或者，Ar是任选地被一个或两个C1至C2未取代烷基取代的苯基。或者，Ar是被一个C1至C3未取代烷基、C3至C6支化烷基、未取代芳基或氟基团在相对于-(R2-L)n-的对位或间位取代的苯基。或者，Ar是杂芳基并且杂芳基中的杂原子是N。或者，Ar是未取代的杂芳基。在又一个替代实施方式中，Ar是吡啶基。
在第五实施方式的第五方面，X通过选自酰胺、胺、醚、酯、氨基甲酸酯、脲、硫醚、硫代氨基甲酸酯、硫代碳酸酯和硫脲的键附接到色谱基质。或者，键是胺、醚或酰胺。
在第五实施方式的第六方面，X选自下组：–O-CH2-，–O-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-CH2-，-O-CH2-CH(CH2-OH)-(O-CH2-CH(OH)-CH2)2-，–O-CH2-CH2-CH(CH2-OH)-(O-CH2-CH2-CH(OH)-CH2)2-，–O-CH2-CH(OH)-CH2-，–O-CH2-CH2-CH(OH)-CH2-CH2-，–O-CH2-CH(OH)-CH2-O-CH2-CH2-CH2-CH2-O-CH2-CH(OH)-CH2-，和-CO-NH-C(CH3)2-CO-。或者，X选自下组：–O-CH2-，–O-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-CH2-，和–O-CH2-CH(OH)-CH2-。
在第六实施方式中，色谱树脂具有下式：
色谱基质-(X)-N-[(R2-L)n-Ar]2
或其阴离子盐，
其中：
X选自下组：–O-CH2-，–O-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-CH2-，-O-CH2-CH(CH2-OH)-(O-CH2-CH(OH)-CH2)2-，–O-CH2-CH2-CH(CH2-OH)-(O-CH2-CH2-CH(OH)-CH2)2-，–O-CH2-CH(OH)-CH2-，–O-CH2-CH2-CH(OH)-CH2-CH2-，–O-CH2-CH(OH)-CH2-O-CH2-CH2-CH2-CH2-O-CH2-CH(OH)-CH2-，和-CO-NH-C(CH3)2-CO-；
R2是C2至C4烷基；
L是O；
n＝1；和
Ar是6元环，并且：
如果Ar是芳基，则该芳基任选被至多四个C1至C2未取代烷基、C3或C4支链烷基或氟基团取代；或者
如果Ar是杂芳基，则该杂芳基任选地被至多三个未取代烷基取代。
在第六实施方式的第一方面，R2是C2或C3烷基。
在第六实施方式的第二方面，Ar是任选地被至多三个C1至C2未取代烷基或氟基团取代的苯基、萘基或吡啶基。或者，Ar是任选地被一个或两个C1至C2未取代烷基取代的苯基。或者，Ar是被一个C1或C2未取代烷基在相对于-(R2-L)n-的对位或间位取代的苯基。或者，Ar是杂芳基并且杂芳基中的杂原子是N。或者，Ar是未取代的杂芳基。在又一个替代实施方式中，Ar是吡啶基。
在第七实施方式中，色谱树脂具有下式：
色谱基质-(X)-N-[(R2-L)n-Ar]2
或其阴离子盐，
其中：
X选自下组：–O-CH2-，–O-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-CH2-和–O-CH2-CH(OH)-CH2-；
R1是氢、C1或C2烷基；
R2是C2或C3烷基；
L是O；
n＝1；和
Ar是苯基、萘基或吡啶基，其任选地被至多三个C1至C2未取代的烷基取代。
在第七实施方式的第一方面，Ar是任选地被一个或两个C1至C2未取代烷基取代的苯基。或者，Ar是被甲基在相对于-(R2-L)n-的对位或间位取代的苯基。或者，Ar是未取代的苯基。
在第八实施方式中，-(X)-N-[(R2-L)n-Ar]2是表2配体中的任何一种。
表2
在一些实施方式中，阴离子盐是盐酸盐、磷酸盐或硫酸盐。
色谱基质是被官能化的聚合物，从而可以与间隔物X形成键。优选地，聚合物是亲水性聚合物。该聚合物不溶于水。合适的聚合物是多羟基聚合物，例如基于多糖，例如琼脂糖、葡聚糖、纤维素、淀粉、支链淀粉和完全合成的聚合物，例如聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、聚(羟烷基乙烯基醚)、聚(羟烷基丙烯酸酯)和聚甲基丙烯酸酯(例如聚甲基丙烯酸缩水甘油酯)、聚乙烯醇和基于苯乙烯和二乙烯基苯的聚合物，以及其中包括对应于上述聚合物的两种或更多种单体的共聚物。合适的合成聚合物包括但不限于来自西格玛-密理博-EMD-默克公司(Sigma-Millipore-EMD-Merck)的Fractogel和
基珠、来自东曹生命科学公司(Tosoh Bioscience)的Toyopearl AF-Eposy-650M和Toyopearl AF-Tresyl-650M、来自赛默飞世尔科学公司(ThermoFisher Scientific)的POROS介质、来自生物辐射实验室股份有限公司(Bio-Rad)的Bio-Gel P和Macro Prep、来自特塞克(TESSEK)的HEMA和Separon、来自GE医疗生命科学公司(GE Healthcare Life Sciences)的活化的Sepharose6B、活化的Sepharose 4B和活化的Sepharose 4Fast Flow和来自颇尔公司(Pall)的HyperD和Trisacryl介质。可溶于水的聚合物可以衍生为不溶性的，例如通过交联和通过吸附或共价结合的方式与不溶体偶联。亲水基团可以通过具有可转化为OH的基团的单体的聚合，或通过最终聚合物的亲水化，例如通过吸附合适的化合物，例如亲水聚合物，而被引入到疏水聚合物上(例如单乙烯基和二乙烯基苯的共聚物上)。可聚合以获得有用基质的单体的示例是乙酸乙烯酯、乙烯基丙胺、丙烯酸、甲基丙烯酸酯、丙烯酸丁酯、丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺、乙烯基吡咯烷酮(乙烯基吡咯烷酮)，在某些情况下具有官能团。交联剂也可用于许多实施方式中，并且当存在时，在一些实施方式中可以构成相对于总单体的约0.1至约0.7的摩尔比。交联剂的示例是二羟基亚乙基双丙烯酰胺、二烯丙基酒石二酰胺、三烯丙基柠檬酸三酰胺、二丙烯酸乙烯酯、双丙烯酰胱胺、N，N'-亚甲基双丙烯酰胺和哌嗪二丙烯酰胺。在一些实施方式中，基质是UNOsphereTM支持物，一种由水溶性亲水单体(生物辐射实验室股份有限公司，加利福尼亚州赫拉克勒斯)产生的聚合物。
色谱基质可以是颗粒、碎片、膜或整料的形式，即材料的单块、丸粒或板。优选地，色谱基质是多孔的。用作基质时的颗粒可以是球体或珠，并且可以具有光滑表面或具有粗糙或有纹理的表面。在一些情况下，一些孔是通孔，延伸穿过颗粒以作为足够大的通道，以允许流体动力流动或通过孔快速扩散。当呈球体或珠形式时，中值粒径(其中术语“直径”是指颗粒的最长外部尺寸)为约25微米至约150微米。示例性基质及其制备方法的公开内容可见于Hjertén等，美国专利号5,645,717，Liao等，美国专利号5,647,979，Liao等，美国专利号5,935,429，和Liao等，美国专利号6,423,666。
配体通过间隔物X与色谱基质连接。与色谱基质的连接将取决于所使用的特定色谱基质和要连接至色谱基质的化学基团。通过在配体和色谱基质上的官能团之间进行反应，可以将配体连接到色谱基质。对于不具有合适官能团的色谱基质，色谱基质与合适的活化剂反应以产生可供配体附接的合适的官能团。还原胺化、环氧化物化学或氮杂内酯化学是分别作用于醛、环氧化物或氮杂内酯官能团的化学实例。
在一些实施方式中，色谱基质包含二醇，其被转化为醛，例如通过与NaIO4转化。配体的伯胺或仲胺通过以下方案的还原胺化反应与色谱基质上的醛连接。在该方案中，间隔物X是-O-CH2-CH2-CH2-。在本公开的该合成方案和其它合成方案中，正方形代表基质并且所有偶联化学单独显示。
在一些实施方式中，色谱基质包含环氧基团并且配体中的伯胺或仲胺通过环氧化物化学通过以下方案连接至环氧基团。在该方案中，间隔物X是-O-CH2-CH(OH)-CH2-。
在一些实施方式中，色谱基质包含吖内酯环并且配体中的伯胺或仲胺通过以下方案连接到吖内酯环。在该方案中，间隔物X是-CO-NH-C(CH3)2-CO-。
在一些实施方式中，色谱基质包含二醇并且伯胺或仲胺通过以下方案通过用两种活化剂烯丙基缩水甘油醚(AGE)和溴活化树脂而连接至-OH基团。在该方案中，间隔物X是-O-CH2-CH(CH2-OH)-(O-CH2-CH(OH)-CH2)2-。
在某些实施方式中，色谱基质包含-OH基团并且伯胺或仲胺通过以下方案用表氯醇活化树脂而连接至-OH基团。在该方案中，间隔物X是-O-CH2-CH(OH)-CH2-。
在一些实施方式中，色谱基质包含-OH基团并且伯胺或仲胺通过以下方案通过用1,4-丁二醇二缩水甘油醚活化树脂而连接至-OH基团。在该方案中，间隔物X是–O-CH2-CH(OH)-CH2-O-CH2-CH2-CH2-CH2-O-CH2-CH(OH)-CH2-。
其它活化试剂包括但不限于表溴醇(与色谱基质上的-OH官能团反应以产生环氧基)、聚(乙二醇)二缩水甘油醚(与色谱基质上的-OH官能团反应生成环氧基团)、卤素取代的脂肪族物质，例如二氯丙醇(与色谱基质上的–OH官能团反应生成环氧基团)、二乙烯基砜(与色谱基质上的二醇官能团反应生成乙烯基)和磺酰氯，如甲苯磺酰氯和三氟代乙烷磺酰氯(与色谱基质上的–OH官能团反应生成磺酸酯)。
其它间隔物可包括但不限于–O-CH2-，–O-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH(CH2-OH)-(O-CH2-CH2-CH(OH)-CH2)2-，和–O-CH2-CH2-CH(OH)-CH2-CH2-。
色谱基质可以任何常规配置使用，包括填充柱和流化床或膨胀床柱、整料或多孔膜，并且可以通过任何常规方法使用，包括用于加载、洗涤和洗脱的分批模式，以及连续或流穿模式。在一些实施方式中，柱的直径范围可以是1cm至1m，高度范围可以是1cm至30cm或更高。
方法
还提供了纯化目标生物分子的方法。在一个实施方式中，该方法包括将包含生物分子的样品与色谱树脂接触，从而将生物分子与污染物分离。随后收集所得纯化的生物分子。在一些实施方式中，目标生物分子是目标蛋白质并且该方法包括从污染物纯化目标蛋白质。在一些实施方式中，目标生物分子是单体抗体并且该方法包括从样品中的聚集抗体中纯化单体抗体。
色谱配体可用于使用阴离子交换(即，其中配体带正电荷)和疏水混合模式色谱法纯化目标分子。可以调整条件以便以结合-洗脱模式或流穿模式运行色谱。
可以应用该方法的蛋白质制剂可以包括来自天然、合成或重组来源的蛋白质。例如，未纯化的蛋白质制剂可以来自各种来源，包括但不限于血浆、血清、腹水、乳汁、植物提取物、细菌裂解物、酵母裂解物或条件细胞培养基。部分纯化的蛋白质制品可以来自已通过至少一种色谱、沉淀、其它分级分离步骤或前述的任何组合处理的未纯化制品。在一些实施方式中，一个或多个色谱步骤采用任何方法，包括但不限于尺寸排阻、亲和、阴离子交换、阳离子交换、蛋白A亲和、疏水相互作用、固定化金属亲和色谱或羟基磷灰石色谱。一个或多个沉淀步骤可包括盐或聚乙二醇(PEG)沉淀，或用有机酸、有机碱或其它试剂沉淀。其它分级分离步骤可包括但不限于结晶、液:液分配或膜过滤。
如本领域所理解的，混合模式色谱中使用的加载、洗涤和洗脱条件将取决于所使用的特定色谱介质/配体。
在一些结合-洗脱模式实施方式中，加载(即，将目标蛋白结合到基质上)和任选的洗涤在高于6.5，例如在6.5-8、7-9等之间的pH值下进行。示例性结合-洗脱条件是：
结合条件：0-1000mM NaCl或0-400mM NaCl，在适当的缓冲液(例如，Tris、Bis-Tris、磷酸钠、柠檬酸钠或乙酸钠)中pH6.5-8.5或7-9；
洗脱条件：10-1000mM NaCl或20-500mM NaCl，使用含有磷酸钠、乙酸钠、柠檬酸盐、精氨酸或甘氨酸的适当缓冲液，pH3-8.5或4-6。
任选地，可以一定条件下洗涤基质，从而使得样品的一些组分从色谱基质移出，但目标生物分子保持固定在基质上。在一些实施方式中，随后通过降低与基质接触的溶液的pH和/或降低盐浓度来洗脱目标生物分子。
或者，可以流穿模式施用样品，其中样品的一些组分被固定到基质上，但目标生物分子流穿(即，流过)色谱基质，并被收集。一些示例性流穿条件是0-150mM NaCl，pH 4.0-8.5；合适的缓冲剂可以包括例如2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES)、Bis-Tris、乙酸钠或柠檬酸盐-磷酸盐。
实施例
提供以下实施例仅为说明而非限定。本领域技术人员不难发现有多项非关键参数可变或可修饰并得出基本相同或相似的结果。
实施例1–具有表2配体的色谱树脂的制备
表3中的伯胺配体5、6、11和16：
对于表3中的伯胺配体5、6、11和16中的每一个，UNOsphere Diol(20mL)，3-烯丙氧基-1,2-丙二醇和乙烯基吡咯烷酮的共聚物(与N,N'-亚甲基双丙烯酰胺交联且二醇密度为200-300μmol/mL)以球珠形式使用。将珠悬浮在20mL的0.1M乙酸钠或水中。将高碘酸钠添加至50至100mM的浓度，并将所得混合物室温(约70°F.(21℃.))孵育3-24小时。该反应导致二醇基团转化为醛基团，在150-250μmol/mL范围内。将所得醛官能化树脂转移到20mL柱中，在那里用100mL水洗涤。
对于各伯胺配体，然后在pH7.0下将20ml的UNOsphere醛树脂悬浮在含有0.6g配体的20ml的0.20M磷酸钠中。在这些混合物室温孵育(振荡，200rpm)15分钟后，然后将200mgNaBH3CN添加至各混合物并使反应继续3-20小时。各反应中的配体浓度被确定为在25-200mM的范围内。反应结束后，将树脂各自转移至20ml柱，依次用3CV的水和1-2CV的0.1NHCl洗涤，然后用5CV的水洗涤。各树脂的配体密度在25-100μmol/ml范围内。
与UNOsphere醛树脂附接的配体5、6、11和16的结构和密度列于表3中。
表3
表4中的仲胺配体32、34、39和44：
对于表4中的各仲胺配体32、34、39和44，UNOsphere Diol(100mL)以球珠形式使用。将珠悬浮在30mL水，30mL 10N的NaOH和16g Na2SO4中，在50℃于250RPM摇床上振荡10分钟。添加100mL烯丙基缩水甘油醚(AGE)并将混合物在同一振荡器中保持50℃过夜。所得的AGE改性树脂用3x2柱体积(CV)的异丙醇(IPA)和30CV的水洗涤。AGE改性树脂与100mL水和3.4gNaOAC混合。将溴液滴加至浆液中，直至呈橙色(表明双键与溴反应完成)。然后添加Na2SO3直至橙色消失(过量的溴还原为溴化物)。所得UNOsphere Diol溴化物树脂用30CV水洗涤并准备用于配体偶联。对于各仲胺配体，将100mL UNOsphere Diol溴化物树脂与50mL水和50mL IPA混合。然后添加12.5g配体。将各混合物在250RPM的振荡器中50℃孵育过夜。反应结束时，用2CV IPA、2CV水、2CV 1N HCl、2CV水、2CV 1N NaOH和30CV水洗涤各树脂，得到叔胺树脂。
与UNOsphere Diol溴化物树脂附接的配体32、34、39和44的数量、结构和密度列于表4中。
表4
实施例2–使用酸性蛋白质和结合-洗脱模式评估表3和4中的胺树脂
使用各种结合和洗脱条件对表3和4中的树脂测定两种模型酸性蛋白质CDP-D-葡萄糖4,6-脱水酶和人血清白蛋白的静态结合能力、回收率和纯度。
材料：
1.表3和表4中的树脂
2.一次性离心柱(生物辐射实验室股份有限公司目录号#732-6207)
3.含有CDP-D-葡萄糖4,6-脱水酶(“Eod”)(pI约为6；在pH6以下不稳定)的粗制大肠杆菌裂解物。
4.人血清白蛋白(“HSA”)(分级分离部分V，西格玛目录号A1653；pI约为4.7)。
5.Eod的结合/洗涤缓冲液：
a.25mM磷酸钠缓冲液，pH6.5、7.5或约8.5；和
b.0、25或约50mM NaCl
6.HSA的结合/洗涤缓冲液：
a.25mM磷酸钠或醋酸钠缓冲液，pH4、6或约8；和
b.0、200或约400mM NaCl
7.Eod的洗脱缓冲液：
a.25mM磷酸钠缓冲液，pH6.5、7.5或约8.5；和
b.10、500或约1000mM NaCl
8.HSA洗脱缓冲液：
a.25mM磷酸钠或醋酸钠缓冲液，pH4、6或约8；和
b.20、500或约1000mM NaCl
方法：
静态结合容量(SBC)测定：对于各测试的树脂和目标蛋白质(即Eod和/或HSA)，含有0.1ml树脂的离心柱用适当的结合缓冲液(取决于目标蛋白质)预平衡，然后与含有Eod的裂解物或HSA溶液孵育5分钟。对于各树脂和目标蛋白质，三种不同pH值(例如，对于Eod，pH6.5、7.5、8.5)联合三种不同NaCl浓度(例如，对于Eod，0、25、50mM NaCl)的结合/洗涤缓冲液用三种洗脱缓冲液pH值和NaCl浓度组合中的每一种进行测试。因此，各树脂和目标蛋白质用9种结合/洗涤缓冲液组合进行测试，并且每种结合/洗涤缓冲液组合都用9种洗脱缓冲液组合进行测试。
将柱以1000xg离心1分钟以去除未结合的蛋白质/杂质，用5个柱体积的适当结合/洗涤缓冲液洗涤一次，然后用5CV的适当洗脱缓冲液(取决于目标蛋白质)孵育以回收结合的目标蛋白质。将柱子再次以1000xg离心1分钟，并且测定柱流出物在280nm处的吸光度以及上样到离心柱上的原始蛋白质溶液在280nm处的吸光度。静态结合容量由下式确定：
SBC＝(加载的总蛋白质-流穿分级分离部分中的蛋白质)/树脂体积。
目标蛋白质回收率：对于各树脂，通过280nm处的吸光度，Eod的消光系数为1，HSA的消光系数为0.534(对于1mg/mL的目标蛋白质溶液)，以及以下等式，对洗出液中回收的蛋白质进行定量：
回收率(％)＝(洗出液中的总蛋白质/总加载蛋白质)x100。
目标蛋白质纯度：通过SDS-PAGE和生物辐射实验室股份有限公司的ImageLab软件评估各树脂的目标蛋白质纯度。
最佳结合和洗脱条件：JMP软件(SAS Institute)用于确定各目标蛋白质和树脂的最佳纯化条件。
结果：SBC的结果，树脂的回收率列于表5(仲胺树脂5、6、11和16)和表6(叔胺树脂32、34、39和44)中。表5和6还列出了各树脂的最佳结合和洗脱条件。表5中，“～”表示“约”，在两个表中，[NaCl]指的是NaCl浓度。
表5–仲胺树脂的结果
表6–叔胺树脂的结果
表5和6的数据显示了取决于目标蛋白质和树脂的最佳结合和洗脱条件的范围。例如，对于作为目标蛋白质的Eod，当用树脂5测试时，最佳结合条件是pH6.5/无NaCl，而对于树脂16，最佳结合条件是pH8.5/50mM NaCl。类似地，对于作为目标蛋白质的HSA，树脂6的最佳结合条件是pH8.0/400mM NaCl，而对于树脂34，最佳结合条件是pH4.0/无NaCl。
用Eod作为目标蛋白质测试的树脂5、11和16的最佳洗脱条件是高pH(8-8.5)和高NaCl浓度(1000mM)。然而，对于用HSA测试的树脂44，最佳洗脱条件是低pH(4)和低NaCl浓度(20mM)。
来自表5和6的数据表明树脂可以在宽范围的pH值和NaCl浓度下使用，并且对于给定应用的树脂的选择将取决于感兴趣的目标蛋白质。
本说明书中引用的所有专利、专利申请和其它公开的参考材料都通过引用全文结合入本文中。
附加公开内容和可请求保护的主题
项目1.一种与配体共价连接的色谱基质，其具有下式：
色谱基质-(X)-N(R1)-(R2-L)n-Ar
或其阴离子盐，
其中：
X是间隔物；
R1是氢或任选被-OH取代的C1至C6烷基；
R2是C2至C6烷基或C4至C6环烷基；
L是NR4、O或S；
n＝1或2；和
Ar是6–10元环，并且：
如果Ar是芳基，则该芳基任选被至多五个C1至C3未取代烷基、C3至C6支化烷基、未取代芳基或氟基团取代；或者
如果Ar是杂芳基，则该杂芳基任选地被至多四个未取代烷基取代，
限制条件是当R1是氢，R2是C2烷基，L是NR4或O，并且n是1时，Ar不是苯基。
项目2.如项目1所述的色谱基质，其中：
X选自下组：–O-CH2-，–O-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-CH2-，-O-CH2-CH(CH2-OH)-(O-CH2-CH(OH)-CH2)2-，–O-CH2-CH2-CH(CH2-OH)-(O-CH2-CH2-CH(OH)-CH2)2-，–O-CH2-CH(OH)-CH2-，–O-CH2-CH2-CH(OH)-CH2-CH2-，–O-CH2-CH(OH)-CH2-O-CH2-CH2-CH2-CH2-O-CH2-CH(OH)-CH2-，和-CO-NH-C(CH3)2-CO-；
R1是氢或C1至C3烷基；
R2是C2至C4烷基；
L是O；
n＝1；和
Ar是6元环，并且：
如果Ar是芳基，则该芳基任选被至多四个C1至C2未取代烷基、C3或C4支链烷基或氟基团取代；或者
如果Ar是杂芳基，则该杂芳基任选地被至多三个未取代烷基取代，
限制条件是当R1是氢，R2是C2烷基，并且n是1时，Ar不是苯基。
项目3.如项目2所述的色谱基质，其中：
X选自下组：–O-CH2-，–O-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-CH2-和–O-CH2-CH(OH)-CH2-；
R1是氢或C1至C2烷基；
R2是C2至C3烷基；
L是O；
n＝1；和
Ar是苯基、萘基或吡啶基，其任选地被至多三个C1至C2未取代的烷基取代，限制条件是当R1是氢，R2是C2烷基，并且n是1时，Ar不是苯基。
项目4.如项目1-3中任一项所述的色谱树脂，其中Ar是被一个或两个C1至C2未取代烷基在相对于色谱基质-(X)-N(R1)-(R2-L)n-的对位或间位取代的苯基。
项目5.如项目1-4中任一项所述的色谱树脂，其中-(X)-N(R1)-(R2-L)n-Ar是表1的配体中的任一种。
项目6.一种色谱树脂，具有下式：
色谱基质-(X)-N-[(R2-L)n-Ar]2
或其阴离子盐，
其中：
X是间隔物；
R2是C2至C6烷基或C4至C6环烷基；
L是NR4、O或S；
n＝1或2；和
Ar是6–10元环，并且：
如果Ar是芳基，则该芳基任选被至多五个C1至C3未取代烷基、C3至C6支化烷基、未取代芳基或氟基团取代；或者
如果Ar是杂芳基，则该杂芳基任选地被至多四个未取代烷基取代。
项目7.如项目6所述的色谱基质，其中：
X选自下组：–O-CH2-，–O-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-CH2-，-O-CH2-CH(CH2-OH)-(O-CH2-CH(OH)-CH2)2-，–O-CH2-CH2-CH(CH2-OH)-(O-CH2-CH2-CH(OH)-CH2)2-，–O-CH2-CH(OH)-CH2-，–O-CH2-CH2-CH(OH)-CH2-CH2-，–O-CH2-CH(OH)-CH2-O-CH2-CH2-CH2-CH2-O-CH2-CH(OH)-CH2-，和-CO-NH-C(CH3)2-CO-；
R2是C2至C4烷基；
L是O；
n＝1；和
Ar是6元环，并且：
如果Ar是芳基，则该芳基任选被至多四个C1至C2未取代烷基、C3或C4支链烷基或氟基团取代；或者
如果Ar是杂芳基，则该杂芳基任选地被至多三个未取代烷基取代。
项目8.如项目7所述的色谱基质，其中：
X选自下组：–O-CH2-，–O-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-CH2-和–O-CH2-CH(OH)-CH2-；
R1是氢、C1或C2烷基；
R2是C2或C3烷基；
L是O；
n＝1；和
Ar是苯基、萘基或吡啶基，其任选地被至多三个C1至C2未取代的烷基取代。
项目9.如项目6-8中任一项所述的色谱树脂，其中Ar是被一个或两个C1至C2未取代烷基在相对于-(R2-L)n-的对位或间位取代的苯基。
项目10.如项目6-9中任一项所述的色谱树脂，其中-(X)-N-[(R2-L)n-Ar]2是表2配体中的任一种。
项目11.如项目1或6所述的色谱树脂，其中Ar是杂芳基并且杂芳基中的杂原子是N。
项目12.如项目1-11中任一项所述的色谱树脂，其中所述阴离子盐是盐酸盐、磷酸盐或硫酸盐。
项目13.如项目1-12中任一项所述的色谱树脂，其中X通过胺、醚或酰胺键附接至色谱基质。
项目14.一种色谱树脂，其通过将表1配体中的任一种与色谱基质通过还原胺化、环氧化物化学或氮杂内酯化学中的任一种反应而制备。
项目15.如项目14所述的色谱树脂，其中所述色谱基质包含醛基，并且表1配体中的任一种通过还原胺化与所述色谱基质反应。
项目16.如项目14所述的色谱树脂，其中所述色谱基质包含环氧基团，并且表1配体中的任一种通过环氧化物化学与所述色谱基质反应。
项目17.如项目14-16中任一项所述的色谱树脂，其中在色谱基质与配体反应之前，色谱基质与烯丙基缩水甘油醚和溴；1,4-丁二醇二缩水甘油；或表氯醇反应。
项目18.一种色谱树脂，其通过环氧化物化学使表2配体中的任一种与色谱基质反应而制备。
项目19.一种纯化生物分子的方法，该方法包括：
将包含生物分子的样品与项目1-18中任一项所述的色谱树脂接触，从而将所述生物分子与污染物分离；和
收集纯化的生物分子。
项目20.如项目19所述的方法，其中纯化的生物分子是蛋白质。
项目21.如项目20所述的方法，其中接触步骤包括将蛋白质固定到色谱基质上，收集步骤包括从色谱基质洗脱蛋白质。
项目22.如项目21所述的方法，其中蛋白质通过以下步骤洗脱，该步骤包括将与配体接触的溶液的pH值从约7-9降低至约4-6。
项目23.如项目20所述的方法，其中接触步骤包括使蛋白质流穿色谱基质并且收集步骤包括收集流穿物(flow through)中的蛋白质。
Claims (23)
1.一种与配体共价连接的色谱基质，其具有下式：
色谱基质-(X)-N(R1)-(R2-L)n-Ar
或其阴离子盐，
其中：
X是间隔物；
R1是氢或任选被-OH取代的C1至C6烷基；
R2是C2至C6烷基或C4至C6环烷基；
L是NR4、O或S；
n＝1或2；和
Ar是6–10元环，并且：
如果Ar是芳基，则该芳基任选被至多五个C1至C3未取代烷基、C3至C6支化烷基、未取代芳基或氟基团取代；或者
如果Ar是杂芳基，则该杂芳基任选地被至多四个未取代烷基取代，
限制条件是当R1是氢，R2是C2烷基，L是NR4或O，并且n是1时，Ar不是苯基。
2.如权利要求1所述的色谱基质，其中：
X选自下组：–O-CH2-，–O-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-CH2-，-O-CH2-CH(CH2-OH)-(O-CH2-CH(OH)-CH2)2-，–O-CH2-CH2-CH(CH2-OH)-(O-CH2-CH2-CH(OH)-CH2)2-，–O-CH2-CH(OH)-CH2-，–O-CH2-CH2-CH(OH)-CH2-CH2-，–O-CH2-CH(OH)-CH2-O-CH2-CH2-CH2-CH2-O-CH2-CH(OH)-CH2-，和-CO-NH-C(CH3)2-CO-；
R1是氢或C1至C3烷基；
R2是C2至C4烷基；
L是O；
n＝1；和
Ar是6元环，并且：
如果Ar是芳基，则该芳基任选被至多四个C1至C2未取代烷基、C3或C4支链烷基或氟基团取代；或者
如果Ar是杂芳基，则该杂芳基任选地被至多三个未取代烷基取代，
限制条件是当R1是氢，R2是C2烷基，并且n是1时，Ar不是苯基。
3.如权利要求2所述的色谱基质，其中：
X选自下组：–O-CH2-，–O-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-CH2-和–O-CH2-CH(OH)-CH2-；
R1是氢或C1至C2烷基；
R2是C2至C3烷基；
L是O；
n＝1；和
Ar是苯基、萘基或吡啶基，其任选地被至多三个C1至C2未取代的烷基取代，
限制条件是当R1是氢，R2是C2烷基，并且n是1时，Ar不是苯基。
4.如权利要求1-3中任一项所述的色谱树脂，其中Ar是被一个或两个C1至C2未取代烷基在相对于色谱基质-(X)-N(R1)-(R2-L)n-的对位或间位取代的苯基。
5.如权利要求1-4中任一项所述的色谱树脂，其中-(X)-N(R1)-(R2-L)n-Ar是表1的配体中的任一种。
6.一种色谱树脂，具有下式：
色谱基质-(X)-N-[(R2-L)n-Ar]2
或其阴离子盐，
其中：
X是间隔物；
R2是C2至C6烷基或C4至C6环烷基；
L是NR4、O或S；
n＝1或2；和
Ar是6–10元环，并且：
如果Ar是芳基，则该芳基任选被至多五个C1至C3未取代烷基、C3至C6支化烷基、未取代芳基或氟基团取代；或者
如果Ar是杂芳基，则该杂芳基任选地被至多四个未取代烷基取代。
7.如权利要求6所述的色谱基质，其中：
X选自下组：–O-CH2-，–O-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-CH2-，-O-CH2-CH(CH2-OH)-(O-CH2-CH(OH)-CH2)2-，–O-CH2-CH2-CH(CH2-OH)-(O-CH2-CH2-CH(OH)-CH2)2-，–O-CH2-CH(OH)-CH2-，–O-CH2-CH2-CH(OH)-CH2-CH2-，–O-CH2-CH(OH)-CH2-O-CH2-CH2-CH2-CH2-O-CH2-CH(OH)-CH2-，和-CO-NH-C(CH3)2-CO-；
R2是C2至C4烷基；
L是O；
n＝1；和
Ar是6元环，并且：
如果Ar是芳基，则该芳基任选被至多四个C1至C2未取代烷基、C3或C4支链烷基或氟基团取代；或者
如果Ar是杂芳基，则该杂芳基任选地被至多三个未取代烷基取代。
8.如权利要求7所述的色谱基质，其中：
X选自下组：–O-CH2-，–O-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-，–O-CH2-CH2-CH2-CH2-和–O-CH2-CH(OH)-CH2-；
R1是氢、C1或C2烷基；
R2是C2或C3烷基；
L是O；
n＝1；和
Ar是苯基、萘基或吡啶基，其任选地被至多三个C1至C2未取代的烷基取代。
9.如权利要求6-8中任一项所述的色谱树脂，其中Ar是被一个或两个C1至C2未取代烷基在相对于-(R2-L)n-的对位或间位取代的苯基。
10.如权利要求6-9中任一项所述的色谱树脂，其中-(X)-N-[(R2-L)n-Ar]2是表2配体中的任一种。
11.如权利要求1或6所述的色谱树脂，其中Ar是杂芳基并且杂芳基中的杂原子是N。
12.如权利要求1-11中任一项所述的色谱树脂，其中所述阴离子盐是盐酸盐、磷酸盐或硫酸盐。
13.如权利要求1-12中任一项所述的色谱树脂，其中X通过胺、醚或酰胺键附接至色谱基质。
14.一种色谱树脂，其通过将表1配体中的任一种与色谱基质通过还原胺化、环氧化物化学或氮杂内酯化学中的任一种反应而制备。
15.如权利要求14所述的色谱树脂，其中所述色谱基质包含醛基，并且表1配体中的任一种通过还原胺化与所述色谱基质反应。
16.如权利要求14所述的色谱树脂，其中所述色谱基质包含环氧基团，并且表1配体中的任一种通过环氧化物化学与所述色谱基质反应。
17.如权利要求14-16中任一项所述的色谱树脂，其中在色谱基质与配体反应之前，色谱基质与烯丙基缩水甘油醚和溴；1,4-丁二醇二缩水甘油；或表氯醇反应。
18.一种色谱树脂，其通过环氧化物化学使表2配体中的任一种与色谱基质反应而制备。
19.一种纯化生物分子的方法，该方法包括：
将包含生物分子的样品与权利要求1-18中任一项所述的色谱树脂接触，从而将所述生物分子与污染物分离；和
收集纯化的生物分子。
20.如权利要求19所述的方法，其中纯化的生物分子是蛋白质。
21.如权利要求20所述的方法，其中接触步骤包括将蛋白质固定到色谱基质上，收集步骤包括从色谱基质洗脱蛋白质。
22.如权利要求21所述的方法，其中蛋白质通过以下步骤洗脱，该步骤包括将与配体接触的溶液的pH值从约7-9降低至约4-6。
23.如权利要求20所述的方法，其中接触步骤包括使蛋白质流穿色谱基质并且收集步骤包括收集流穿物中的蛋白质。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201962896196P | 2019-09-05 | 2019-09-05 | |
| US62/896,196 | 2019-09-05 | ||
| PCT/US2020/049305 WO2021046284A1 (en) | 2019-09-05 | 2020-09-04 | Anionic exchange-hydrophobic mixed mode chromatography resins |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114040815A true CN114040815A (zh) | 2022-02-11 |
| CN114040815B CN114040815B (zh) | 2024-06-28 |
Family
ID=74850383
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202080048684.6A Active CN114040815B (zh) | 2019-09-05 | 2020-09-04 | 阴离子交换-疏水混合模式色谱树脂 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US11896969B2 (zh) |
| EP (1) | EP4025336A4 (zh) |
| JP (1) | JP2022546901A (zh) |
| CN (1) | CN114040815B (zh) |
| WO (1) | WO2021046284A1 (zh) |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011104307A2 (en) * | 2010-02-25 | 2011-09-01 | Graffinity Pharmaceuticals Gmbh | Ligands for antibody purification by affinity chromatography |
| US20120259094A1 (en) * | 2009-10-15 | 2012-10-11 | Monash University | Affinity ligands and methods for protein purification |
| CN102762585A (zh) * | 2010-02-12 | 2012-10-31 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 单一单元抗体纯化 |
| CN103189390A (zh) * | 2010-11-01 | 2013-07-03 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 单一单元离子交换色谱抗体纯化 |
| CN103877748A (zh) * | 2012-12-21 | 2014-06-25 | 戴安公司 | 通过混合模式液相色谱法分离聚糖 |
| CN103998456A (zh) * | 2011-10-19 | 2014-08-20 | 生物辐射实验室股份有限公司 | 用于蛋白质的混合式色谱纯化的固相 |
| CN104812491A (zh) * | 2012-03-08 | 2015-07-29 | 生物辐射实验室股份有限公司 | 阴离子交换-疏水性混合模式 |
| CN109790201A (zh) * | 2016-08-12 | 2019-05-21 | 百时美施贵宝公司 | 纯化蛋白质的方法 |
Family Cites Families (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5645717A (en) | 1989-01-13 | 1997-07-08 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Hydrophobic polymers from water-soluble monomers and their use as chromatography media |
| AU5522390A (en) | 1989-04-19 | 1990-11-16 | United States of America, as represented by the Secretary, U.S. Department of Commerce, The | Process for removing c-reactive protein and anti-phosphorylcholine antibodies from biological fluids |
| US5652348A (en) * | 1994-09-23 | 1997-07-29 | Massey University | Chromatographic resins and methods for using same |
| SE9600590D0 (sv) | 1996-02-19 | 1996-02-19 | Pharmacia Biotech Ab | Sätt för kromatografisk separation av peptider och nukleinsyra samt ny högaffin jonbytesmatris |
| US5647979A (en) | 1996-06-14 | 1997-07-15 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | One-step preparation of separation media for reversed-phase chromatography |
| EP0921855B1 (en) | 1996-08-30 | 2003-11-19 | Upfront Chromatography A/S | Isolation of immunoglobulins |
| US5935429A (en) | 1997-01-03 | 1999-08-10 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Chromatography columns with continuous beds formed in situ from aqueous solutions |
| US6423666B1 (en) | 1999-10-05 | 2002-07-23 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Large-pore chromatographic beads prepared by suspension polymerization |
| GB0228724D0 (en) * | 2002-12-09 | 2003-01-15 | Prometic Biosciences Ltd | Multidimensinal libraries |
| SE0400501D0 (sv) | 2004-02-27 | 2004-02-27 | Amersham Biosciences Ab | Antibody purification |
| US9266041B2 (en) | 2004-10-21 | 2016-02-23 | Ge Healthcare Bio-Sciences Ab | Chromatography ligand |
| JP4831436B2 (ja) * | 2004-10-21 | 2011-12-07 | ジーイー・ヘルスケア・バイオサイエンス・アクチボラグ | クロマトグラフィーリガンド |
| CA2687930C (en) | 2007-05-25 | 2016-05-17 | Merck Patent Gesellschaft Mit Beschraenkter Haftung | Graft copolymers for cation exchange chromatography |
| JP5999899B2 (ja) | 2008-04-08 | 2016-09-28 | バイオ−ラッド ラボラトリーズ インコーポレーティッド | 抗体のクロマトグラフィー精製法 |
| WO2010055135A1 (en) * | 2008-11-13 | 2010-05-20 | Novo Nordisk A/S | Process for the purification of human growth hormone polypeptides using affinity resins comprising specific ligands |
| US8277649B2 (en) | 2009-12-14 | 2012-10-02 | General Electric Company | Membranes and associated methods for purification of antibodies |
| KR101871683B1 (ko) | 2010-07-30 | 2018-06-27 | 이엠디 밀리포어 코포레이션 | 크로마토그래피 매질 및 방법 |
| WO2013028330A2 (en) | 2011-08-19 | 2013-02-28 | Emd Millipore Corporation | Methods of reducing level of one of more impurities in a sample during protein purification |
| EP2812346A1 (en) * | 2012-02-08 | 2014-12-17 | Graffinity Pharmaceuticals GmbH | Ligands for antibody and fc-fusion protein purification by affinity chromotography iv |
| SG10201701224UA (en) | 2012-03-12 | 2017-04-27 | Merck Patent Gmbh | Removal of protein aggregates from biopharmaceutical preparations in a flowthrough mode |
| US9486799B2 (en) | 2012-09-11 | 2016-11-08 | Dionex Corporation | Glycidol functionalized anion exchange stationary phases |
| CN104797332B (zh) | 2012-11-13 | 2018-05-29 | 通用电气医疗集团生物工艺研发股份公司 | 多元阴离子交换基质 |
| US20160272673A1 (en) | 2013-11-07 | 2016-09-22 | Abbvie Inc. | Isolation and purification of dvd-igs |
| PL3116891T3 (pl) | 2014-03-10 | 2020-07-27 | Richter Gedeon Nyrt. | Oczyszczanie immunoglobuliny z zastosowaniem etapów wstępnego oczyszczania |
| ES2920381T3 (es) | 2014-08-15 | 2022-08-03 | Merck Patent Gmbh | Purificación de inmunoglobulinas a partir de plasma |
| US10457749B2 (en) | 2015-03-13 | 2019-10-29 | Novimmune Sa | Methods of purifying bispecific antibodies |
| GB201506117D0 (en) | 2015-04-10 | 2015-05-27 | Ge Healthcare Bio Sciences Ab | Method for chromatography |
| CN111683976B (zh) * | 2018-02-05 | 2022-11-18 | 生物辐射实验室股份有限公司 | 具有阴离子交换-疏水混合模式配体的色谱树脂 |
| WO2019173731A1 (en) * | 2018-03-08 | 2019-09-12 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Anionic exchange-hydrophobic mixed mode chromatography resin |
-
2020
- 2020-09-04 JP JP2021577372A patent/JP2022546901A/ja active Pending
- 2020-09-04 US US17/012,108 patent/US11896969B2/en active Active
- 2020-09-04 WO PCT/US2020/049305 patent/WO2021046284A1/en unknown
- 2020-09-04 EP EP20860236.7A patent/EP4025336A4/en active Pending
- 2020-09-04 CN CN202080048684.6A patent/CN114040815B/zh active Active
-
2024
- 2024-02-09 US US18/437,294 patent/US20240261775A1/en active Pending
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20120259094A1 (en) * | 2009-10-15 | 2012-10-11 | Monash University | Affinity ligands and methods for protein purification |
| CN102762585A (zh) * | 2010-02-12 | 2012-10-31 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 单一单元抗体纯化 |
| WO2011104307A2 (en) * | 2010-02-25 | 2011-09-01 | Graffinity Pharmaceuticals Gmbh | Ligands for antibody purification by affinity chromatography |
| CN103189390A (zh) * | 2010-11-01 | 2013-07-03 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 单一单元离子交换色谱抗体纯化 |
| CN103998456A (zh) * | 2011-10-19 | 2014-08-20 | 生物辐射实验室股份有限公司 | 用于蛋白质的混合式色谱纯化的固相 |
| CN104812491A (zh) * | 2012-03-08 | 2015-07-29 | 生物辐射实验室股份有限公司 | 阴离子交换-疏水性混合模式 |
| CN103877748A (zh) * | 2012-12-21 | 2014-06-25 | 戴安公司 | 通过混合模式液相色谱法分离聚糖 |
| CN109790201A (zh) * | 2016-08-12 | 2019-05-21 | 百时美施贵宝公司 | 纯化蛋白质的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 蒋中华 等著: "《生物分子固定化技术及应用》", vol. 1, 化学工业出版社, pages: 778 - 781 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2022546901A (ja) | 2022-11-10 |
| EP4025336A1 (en) | 2022-07-13 |
| CN114040815B (zh) | 2024-06-28 |
| US20210069692A1 (en) | 2021-03-11 |
| US20240261775A1 (en) | 2024-08-08 |
| EP4025336A4 (en) | 2024-01-17 |
| WO2021046284A1 (en) | 2021-03-11 |
| US11896969B2 (en) | 2024-02-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10124328B2 (en) | Separation method and separation matrix | |
| US11590486B2 (en) | Solid phase for mixed-mode chromatographic purification of proteins | |
| CN111818980B (zh) | 阴离子交换-疏水混合模式色谱树脂 | |
| US10682640B2 (en) | Anionic exchange-hydrophobic mixed mode | |
| EP2986625B1 (en) | Mixed mode ligands | |
| US20240001338A1 (en) | Mixed mode cation exchange chromatography ligands based on 1,3-dioxoisoindolin-2-yl structures | |
| US20230264171A1 (en) | Chromatography resin having an anionic exchange-hydrophobic mixed mode ligand | |
| CN114040815B (zh) | 阴离子交换-疏水混合模式色谱树脂 | |
| US20230127357A1 (en) | Mixed mode cationic exchange chromatography ligands based on substituted 2-benzamido acetic acid structures |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |