CN114027095B - 一种富硒菇类培养基的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于菌菇培养基技术领域，涉及一种富硒菇类培养基的制备方法及其应用。方法如下：将羧甲基壳聚糖、聚乙醇与水混合得纳米硒模板溶液，加入亚硒酸钠或硒酸钠，得无机硒溶液，再加入VC、VB1、VB7和蛋氨酸，得纳米硒溶液；然后将麦秸秆、鸡粪或牛粪、稻壳、木屑、石膏混合的混合物投入发酵槽中建堆，喷洒含有纳米硒的水溶液，喷洒量为混合物质量的50‑90％；经过通风发酵以及两次转仓，制得富硒培养基。基于此培养基生产的蘑菇硒含量(干重)总硒含量可以达到20mg/kg，有机硒含量占比达93.30％，属于富含(有机)硒蘑菇；且所用的硒属于纳米硒、无毒，方法简单，不显著增加成本，具有重要的经济价值和社会意义。
Description
技术领域
本发明涉及一种富硒菇类培养基的制备方法及其应用，属于菌菇培养基及其生产技术领域。
背景技术
硒（selenium, Se）已经被证实是一种人体必需的微量金属元素，被誉为“抗癌之王”、 “心脏守护神”、“长寿元素”和“天然解毒剂”等。此外，硒可作为辅酶因子或辅基存在于膜硒蛋白（包括脱碘酶类等）和游离硒蛋白（蛋氨酸硫氧化物还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶、硫氧环蛋白还原酶类等）中，具有重要功能（徐贵法. 蛋白硒的研究进展及富硒鸡蛋的价值[J]. 现代食品, 2020, (15): 26-31）。硒缺乏可导致上述酶活力下降甚至丧失，使人体免疫力下降和新陈代谢紊乱，进而引发各类疾病，如甲状腺疾病、糖尿病、人类生殖障碍和肥胖症等（Huang, et al. Role of glutathione peroxidase1 in glucose and lipidmetabolism-related diseases [J]. Free radical biology&medicine, 2018, 127:108-115.）。因此，硒是保持人类健康的重要微量元素。
食物是人类获得硒的唯一途径。然而不幸的是我国72%以上的国土面积属于低硒和贫硒地区（特别是黑龙江和东部沿海地区），这导致我国大部分地区所产蔬菜、谷物和以此为饲料的牲畜、家禽中含硒量均低。研究表明我国超过1/3以上的居民硒摄入量不足国家最低推荐量的一半1/2（50 μg/d）（Ding, et al. Selenium distribution in theChinese environment and its relationship with human health: A review [J].Environment International, 2018, 112: 294-309.）。因此，生产富硒农副产品以提高我国居民硒摄入量具有重要意义。
菇类具有味道鲜美，营养丰富，可药食两用，深受广大消费者的青睐（Usman etal. Nutritional, medicinal, and cosmetic value of bioactive compounds inbutton mushroom (Agaricus bisporus): A review [J]. Applied Sciences, 2021, 11(13) : 5943-5943.）。研究表明，菇类富含蛋白质，可吸收土壤中的无机硒，然后与菇类蛋白质中的蛋氨酸、半胱氨酸可与硒结合形成硒代蛋氨酸和硒代半胱氨酸，硒代氨基酸有利于人体的吸收利用（Prange et al. Characterization of selenium speciation inselenium-enriched button mushrooms (Agaricus bisporus) and selenized yeasts(dietary supplement) using X-ray absorption near-edge structure (XANES)spectroscopy [J]. Journal of Trace Elements in Medicine and Biology, 2019,51: 164-168.）。然而无机硒具有剧毒，无论是通过直接喷施或者在培养基中添加均可能附着于菇类表面，菇类表面不平滑，不易清洗。因此，利用无机硒生产菇类存在食品安全风险（特别是无机硒喷施或在培养基中混合不均匀的时候）。
发明内容
本发明的目的是为了开发一种富硒菇类培养基和蘑菇生产方法。具体地，本发明提供了一种以麦秸秆、鸡粪或牛粪、稻壳、木屑、石膏为主要原料，利用羧甲基壳聚糖、亚硒酸或硒酸钠、VB、VC和氨基酸等为原料制备的纳米硒为硒源，生产富硒菇类培养基和蘑菇的方法。
为了实现以上目的，具体步骤如下：
（1）纳米硒溶液的制备
1）模板溶液制备：将羧甲基壳聚糖、聚乙二醇依次加入水中并溶解，得到模板溶液；
所述羧甲基壳聚糖、聚乙二醇和水的质量比为0.1-4:0.1-20:100（w/w/w）；
2）亚硒酸钠或硒酸钠溶液：将亚硒酸钠或硒酸钠加入上述1）制备的模板溶液中，搅拌均匀，得到亚硒酸钠或硒酸钠溶液；
所述亚硒酸钠或硒酸钠与模板溶液的质量比为0.00001-1:100（w/w）；
3）维生素和氨基酸混合物的制备：将VC、VB1、VB7和蛋氨酸混合均匀，得到维生素和氨基酸混合物；
所述VC、VB1、VB7和蛋氨酸的质量比为1:0.1-2:0.1-2:0.1-5；
4）纳米硒溶液制备：向上述步骤2）制备的亚硒酸钠或硒酸钠溶液中加入步骤3）制备的维生素和氨基酸混合物中，搅拌均匀即为纳米硒溶液；
所述维生素和氨基酸混合物与亚硒酸钠或硒酸钠溶液的质量比为0.00003-10:100；
（2）富硒菇类培养基的制备：先将麦秸秆与粪便混合均匀，再加入稻壳、木屑和石膏，混合均匀，得到混合物投入发酵槽中建堆；然后将步骤（1）制备的纳米硒溶液加入水中得到含有纳米硒的水溶液；最后针对发酵槽中建堆的混合物喷洒含有纳米硒的水溶液，经过通风发酵以及转仓后，制得富硒培养基；
所述麦秸秆、粪便、稻壳、木屑、石膏的质量比为100:30-60:5-20:1-10:2-10（w/w/w/w/w）；
所述含有纳米硒的水溶液中纳米硒溶液体积的占比为0.1-100%；
所述喷洒量为混合物量的50-90%（w/w）；
所述通风发酵的发酵温度为30-80℃，通风的条件为20-60 分钟/天；
所述转仓具体为发酵的第5-10 d和第15-20 d进行两次转仓。
优选的，步骤（1）中所述羧甲基壳聚糖、聚乙二醇和水的质量比为0.5-2: 1-5:100（w/w/w）。
优选的，步骤（1）中所述亚硒酸钠或硒酸钠与模板溶液的质量比为0.0001-1:100（w/w）。
优选的，步骤（1）中所述VC、VB1、VB7和蛋氨酸的质量比为1:0.5-1:0.5-1:1-2（w/w/w/w）。
优选的，步骤（1）中所述维生素和氨基酸混合物与亚硒酸钠或硒酸钠溶液的质量比为0.0003-1:100（w/w）。
优选的，步骤（2）中所述麦秸秆、粪便、稻壳、木屑、石膏的质量比为100:40-50:10-15:2-8:3-5（w/w/w/w/w）；所述粪便为鸡粪或牛粪。
优选的，步骤（2）中所述含有纳米硒的水溶液中纳米硒溶液体积的占比为0.5-50%。
优选的，步骤（2）中所述喷洒为均匀喷洒，喷洒量为混合物量的60-80%（w/w）。
优选的，步骤（2）中所述通风发酵的发酵温度为40-60℃，通风的条件为30-50分钟/天。
优选的，步骤（2）中所述转仓具体为发酵的第7-8 d和第16-18d进行两次转仓。
本发明所述方法制备的富硒菇类培养基为在蘑菇生产方法中的应用，具体用于生产富硒蘑菇的用途。
本发明的优势：
（1）本发明生产的富硒蘑菇培养基和蘑菇采用纳米硒为硒源，具有安全性和有机硒含量高的特点；使用本发明的培养基按照菇类常规培养方法生产蘑菇，所产蘑菇硒含量（干重）在1.12 mg-20 mg/kg，其中有机硒含量在硒含量中的占比为80.36-93.30%，属于富硒蘑菇。本发明利用纳米硒生产菇类富硒培养基和蘑菇，所用硒元素为纳米硒，微生物吸收和转化率更高，达到80.36-93.3%，显著高于目前文献所报道的数据50-75%，且残余硒元素为纳米硒，无毒，与前述专利相比，利用本发明方法生产富硒菇类优势明显。
（2）本发明专利中除了含有硒元素外，还含有B族维生素、VC和蛋氨酸，维生素和蛋氨酸是植物生长的优质营养物质，它们与硒协同作用，促进了菇类生产，将更多的无机硒转化为有机硒。
（3）本发明的富硒菇类培养基和蘑菇生产方法简单，不显著增加成本，具有重要的经济意义和社会意义。
附图说明
图1为制备纳米硒溶液的透射电镜图（A）和扫描电镜图（B）。
实施方式
下面结合实例对本发明的具体实施方式作进一步说明，但本发明的实施和保护范围不限于此。
本发明所涉及的总硒、有机硒和无机硒含量的测定方法参照GB 5009.93-2017和Jing Dawei等方法（Selenium enrichment, fruit quality and yield of winterjujube as affected by addition of sodium selenite [J]. ScientiaHorticulturae, 2017, 225, 1-5）。
实施例1：
富硒双孢菇培养基和双孢菇的生产方法，双孢蘑菇（
Agaricus bisporus(Large)Sing.）
富硒双孢蘑菇（
Agaricus bisporus(Large) Sing.）培养基和富硒双孢菇按照如下方法进行生产：将羧甲基壳聚糖、聚乙二醇依次加入水溶液并溶解，使羧甲基壳聚糖：聚乙二醇：水=0.1:0.1:100（w/w/w），得到纳米硒模板溶液；将亚硒酸钠缓慢加入上述溶液，使亚硒酸钠：模板溶液=0.00001:100（w/w），搅拌均匀，得到亚硒酸钠溶液；将VC、VB1、VB7和蛋氨酸按照1:0.1:0.1:0.1（w/w/w/w）混合均匀，得到维生素和氨基酸混合物；将混合均匀的维生素和氨基酸混合物缓慢加入亚硒酸钠溶液，使维生素和氨基酸混合物与亚硒酸钠溶液的比例为0.00003: 100（w/w），搅拌均匀即为纳米硒溶液。
图1为制备纳米硒溶液的透射电镜图（A）和扫描电镜图（B），通过纳米硒的表征可以说明本发明方法成功将无机硒成功还原成单晶纳米硒。
富硒双孢菇培养基的制备方法如下：所用主料为麦秸秆、鸡粪、稻壳、木屑、石膏，使用比例为100:30:5:1:2（w/w/w/w/w），先将麦秸秆与鸡粪混合均匀，再将稻壳、木屑和石膏与麦秸秆和鸡粉混合物混合均匀，然后将混合物投入发酵槽中建堆，最后均匀喷含有纳米硒的水溶液（纳米硒溶液和水的混合液），所用纳米硒的水溶液含有上述制备纳米硒溶液的100%，喷洒量为培养基混合物量的90%（w/w），经过通风发酵（每天通风60 min、发酵温度80℃）以及两次转仓（第10 d和第20 d进行转仓，转仓后通风以及发酵温度保持不变），制得富硒培养基；
在上述培养基中接种双孢菇菌种，按照双孢菇常规培养方法生产蘑菇，得到样品双孢菇（对应表格中的样品）。
对照1：对照生产方法同实施例1，区别仅在于培养基中喷的水为自来水（不添加纳米硒溶液）。
对照2：对照2硒酸钠用量同实施例1，区别是不添加B族维生素、VC和蛋氨酸，其他均与实施例1相同。
对照3：对照3硒酸钠和VC用量同实施例1，区别是不添加B族维生素和蛋氨酸，其他均与实施例1相同。
对照4：对照4硒酸钠、B族维生素用量同实施例1，区别是不添加VC和蛋氨酸，其他均与实施例1相同。
对照5：对照5硒酸钠、蛋氨酸用量同实施例1，区别是不添加B族维生素和VC，其他均与实施例1相同。
对照6：对照6硒酸钠、VC和B族维生素用量同实施例1，区别是不添加蛋氨酸，其他均与实施例1相同。
对照7：对照7硒酸钠、VC和蛋氨酸用量同实施例1，区别是不添加B族维生素，其他均与实施例1相同。
对照8：对照8硒酸钠、B族维生素和蛋氨酸用量同实施例1，区别是不添加VC，其他均与实施例1相同。
样品双孢菇总硒含量（干重）达到1.12 mg/kg，分别比对照1、对照2、对照3、对照4、对照5、对照6、对照7和对照8高762%、58%、40%、49%、44%、15%、11%和14%。
样品双孢菇有机硒含量（干重）达到0.99 mg/kg，分别比对照1、对照2、对照3、对照4、对照5、对照6、对照7和对照8高800%、80%、43%、60%、55%、19%、15%和16%。上述结果表明采用本发明方法可以制备富硒蘑菇，其中硒主要以有机硒的形式存在（88.4%）；与直接添加无机硒制备的富硒蘑菇（对照2）相比，本发明方法制备的蘑菇总硒和有机硒含量均显著提高（p<0.05）；与仅添加本发明纳米硒溶液中部分营养素的对照相比，采用本发明方法制备的蘑菇其总硒和有机硒含量也显著提高（p<0.05）。
综上可以看出，本发明中纳米硒溶液中的营养素之间存在协同作用，在合适的应用范围内可以显著提高双孢菇的总硒和有机硒含量。此外，表1可知，样品和对照双孢菇其他指标不存在显著性差异（p>0.05）。
表1 采用本发明方法生产的富硒双孢菇和常规双孢菇的基本成分
| 水分(%,FW) | 碳水化合物(g/100 g DW) | 总氮(%,DW) | 粗脂肪(g/100 g DW) | 粗纤维(g/100 g DW) | 总硒(mg/kgDW) | 有机硒(mg/kgDW) | |
| 对照1 | <![CDATA[90.21±0.90<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[53.08±2.12<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[5.90±0.12<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[2.67±0.08<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[5.90±0.23<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[0.13±0.02<sup>d</sup>]]> | <![CDATA[0.11±0.02<sup>e</sup>]]> |
| 对照2 | <![CDATA[90.40±0.92<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[53.01±2.09<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[5.94±0.13<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[2.64±0.07<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[5.75±0.19<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[0.71±0.05<sup>c</sup>]]> | <![CDATA[0.55±0.04<sup>d</sup>]]> |
| 对照3 | <![CDATA[91.10±0.90<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[52.56±1.96<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[5.96±0.14<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[2.60±0.06<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[5.79±0.19<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[0.80±0.05<sup>c</sup>]]> | <![CDATA[0.69±0.05<sup>c</sup>]]> |
| 对照4 | <![CDATA[89.64±0.87<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[52.94±1.98<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[5.89±0.13<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[2.65±0.06<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[5.85±0.21<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[0.75±0.04<sup>c</sup>]]> | <![CDATA[0.62±0.04<sup>cd</sup>]]> |
| 对照5 | <![CDATA[90.41±0.89<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[53.23±2.03<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[5.93±0.15<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[2.70±0.07<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[5.93±0.25<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[0.78±0.05<sup>c</sup>]]> | <![CDATA[0.64±0.04<sup>c</sup>]]> |
| 对照6 | <![CDATA[91.37±0.94<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[53.32±2.05<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[5.87±0.13<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[2.60±0.06<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[5.87±0.23<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[0.97±0.06<sup>b</sup>]]> | <![CDATA[0.83±0.05<sup>b</sup>]]> |
| 对照7 | <![CDATA[91.46±0.93<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[52.22±1.96<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[5.98±0.13<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[2.62±0.07<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[5.82±0.21<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[1.01±0.06<sup>ab</sup>]]> | <![CDATA[0.86±0.06<sup>b</sup>]]> |
| 对照8 | <![CDATA[90.14±0.89<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[53.31±2.01<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[5.90±0.14<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[2.67±0.06<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[5.77±0.18<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[0.98±0.05<sup>b</sup>]]> | <![CDATA[0.85±0.05<sup>b</sup>]]> |
| 样品 | <![CDATA[90.86±1.06<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[52.96±2.09<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[6.00±0.15<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[2.62±0.10<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[5.51±0.16<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[1.12±0.07<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[0.99±0.06<sup>a</sup>]]> |
注：结果为平均值±标准差（n=3）；同行不同小写字母表示同一列数据的显著性差异（
p<0.05）；鲜重（fresh weight, FW），干重（dry weight, DW），下同。
实施例2：
富硒杏鲍菇培养基和杏鲍菇的生产方法
富硒杏鲍菇（
Pleurotus eryngii）培养基和富硒杏鲍菇按照如下方法进行生产：将羧甲基壳聚糖、聚乙二醇依次加入水溶液并溶解，使羧甲基壳聚糖：聚乙二醇：水=4:20:100（w/w/w），得到纳米硒模板溶液；将硒酸钠缓慢加入上述溶液，使硒酸钠：模板溶液=1:100（w/w），搅拌均匀，得到硒酸钠溶液；将VC、VB1、VB7和蛋氨酸按照1:2:2:5（w/w/w/w）混合均匀，得到微生物和氨基酸混合物；将混合均匀的维生素和氨基酸混合物缓慢加入硒酸钠溶液，使维生素和氨基酸混合物与硒酸钠溶液的比例为10:100（w/w），搅拌均匀即为纳米硒溶液。
富硒杏鲍菇培养基的制备方法如下：所用主料为麦秸秆、牛粪、稻壳、木屑、石膏，使用比例为100:60:20:10:10（w/w/w/w/w），先将麦秸秆与牛粪混合均匀，再将稻壳、木屑和石膏与麦秸秆和牛粪混合物混合均匀，然后将混合物投入发酵槽中建堆，最后喷含有纳米硒的水溶液（纳米硒溶液和水的混合液），所用纳米硒的水溶液含有上述制备纳米硒溶液的0.1%，喷水量为培养基混合物量的50%（w/w），经过通风发酵（每天通风20 min、发酵温度30℃）以及两次转仓（第5 d和第15 d进行转仓，转仓后通风以及发酵温度保持不变），制得富硒培养基；
在上述培养基中接种杏鲍菇菌种，按照杏鲍菇常规培养方法生产蘑菇，得到样品杏鲍菇（对应表格中的样品）。
对照1：对照生产方法同实施例2，区别仅在于培养基中喷的水为自来水（不添加纳米硒溶液）。
对照2：对照2硒酸钠用量同实施例2，区别是不添加B族维生素、VC和蛋氨酸，其他均与实施例2相同。
对照3：对照3硒酸钠和VC用量同实施例2，区别是不添加B族维生素和蛋氨酸，其他均与实施例2相同。
对照4：对照4硒酸钠、B族维生素用量同实施例2，不添加VC和蛋氨酸，其他均与实施例2相同。
对照5：对照5硒酸钠、蛋氨酸用量同实施例2，不添加B族维生素和VC，其他均与实施例2相同。
对照6：对照6硒酸钠、VC和B族维生素用量同实施例2，不添加蛋氨酸，其他均与实施例2相同。
对照7：对照7硒酸钠、VC和蛋氨酸用量同实施例2，不添加B族维生素，其他均与实施例2相同。
对照8：对照8硒酸钠、B族维生素和蛋氨酸用量同实施例2，不添加VC，其他均与实施例2相同。
样品杏鲍菇总硒含量（干重）达到1.86 mg/kg，分别比对照1、对照2、对照3、对照4、对照5、对照6、对照7和对照8高333%、37%、28%、33%、30%、20%、18%和16%。
样品杏鲍菇有机硒含量（干重）达到1.67 mg/kg，分别比对照1、对照2、对照3、对照4、对照5、对照6、对照7和对照8高351%、46%、38%、49%、42%、29%、25%和23%。上述结果表明采用本发明方法可以制备富硒蘑菇，其中硒主要以有机硒的形式存在（89.8%）；与直接添加无机硒制备的富硒蘑菇（对照2）相比，本发明方法制备的蘑菇总硒和有机硒含量均显著提高（
p<0.05）；与仅添加本发明纳米硒溶液中部分营养素的对照相比，采用本发明方法制备的蘑菇其总硒和有机硒含量也显著提高（
p<0.05）。
综上可以看出，本发明中纳米硒溶液中的营养素之间存在协同作用，在合适的应用范围内可以显著提高杏鲍菇的总硒和有机硒含量。此外，表2可知，样品和对照杏鲍菇其他指标不存在显著性差异（
p>0.05）。
表2 采用本发明方法生产的富硒杏鲍菇和常规杏鲍菇的基本成分
| 水分(%,FW) | 碳水化合物(g/100 g DW) | 总氮(%,DW) | 粗脂肪(g/100 g DW) | 粗纤维(g/100 g DW) | 总硒(mg/kgDW) | 有机硒(mg/kgDW) | |
| 对照1 | <![CDATA[89.69±0.88<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[51.12±2.36<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[4.03±0.13<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[2.38±0.06<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[10.90±0.33<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[0.43±0.02<sup>e</sup>]]> | <![CDATA[0.37±0.03<sup>e</sup>]]> |
| 对照2 | <![CDATA[88.60±0.84<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[50.31±2.34<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[4.10±0.14<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[2.40±0.07<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[10.87±0.34<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[1.36±0.06<sup>d</sup>]]> | <![CDATA[1.14±0.05<sup>d</sup>]]> |
| 对照3 | <![CDATA[88.79±0.85<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[50.63±2.40<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[4.09±0.13<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[2.43±0.08<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[10.84±0.32<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[1.45±0.07<sup>bcd</sup>]]> | <![CDATA[1.21±0.06<sup>cd</sup>]]> |
| 对照4 | <![CDATA[90.02±0.90<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[50.95±2.43<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[3.95±0.10<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[2.37±0.06<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[10.96±0.35<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[1.40±0.06<sup>d</sup>]]> | <![CDATA[1.12±0.05<sup>d</sup>]]> |
| 对照5 | <![CDATA[89.82±0.87<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[51.22±2.49<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[4.11±0.15<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[2.43±0.08<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[10.94±0.34<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[1.43±0.07<sup>cd</sup>]]> | <![CDATA[1.18±0.05<sup>cd</sup>]]> |
| 对照6 | <![CDATA[90.25±0.91<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[51.38±2.50<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[4.06±0.12<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[2.39±0.06<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[10.67±0.30<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[1.55±0.07<sup>bc</sup>]]> | <![CDATA[1.29±0.06<sup>bc</sup>]]> |
| 对照7 | <![CDATA[90.71±0.93<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[50.94±2.46<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[4.13±0.13<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[2.37±0.07<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[10.76±0.31<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[1.58±0.08<sup>bc</sup>]]> | <![CDATA[1.34±0.06<sup>b</sup>]]> |
| 对照8 | <![CDATA[90.13±0.89<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[51.01±2.43<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[4.14±0.14<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[2.35±0.08<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[10.82±0.32<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[1.60±0.08<sup>b</sup>]]> | <![CDATA[1.36±0.07<sup>b</sup>]]> |
| 样品 | <![CDATA[90.23±0.96<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[50.16±2.30<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[4.16±0.15<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[2.52±0.11<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[10.51±0.34<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[1.86±0.09<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[1.67±0.10<sup>a</sup>]]> |
注：结果为平均值±标准差（n=3）；同行不同小写字母表示同一列数据的显著性差异（
p<0.05）；鲜重（fresh weight, FW），干重（dry weight, DW），下同。
实施例3:
富硒金针菇培养基和金针菇的生产方法
富硒金针菇（
Flammulina velutipes）培养基和富硒金针菇按照如下方法进行生产：将羧甲基壳聚糖、聚乙二醇依次加入水溶液并溶解，使羧甲基壳聚糖：聚乙二醇：水=1:5:100（w/w/w），得到纳米硒模板溶液；将亚硒酸钠缓慢加入上述溶液，使亚硒酸钠：模板溶液=1:100（w/w），搅拌均匀，得到亚硒酸钠溶液；将VC、VB1、VB7和蛋氨酸按照1:0.5:0.5:1（w/w/w/w）混合均匀，得到微生物和氨基酸混合物；将混合均匀的维生素和氨基酸混合物缓慢加入亚硒酸钠溶液，使维生素和氨基酸混合物与亚硒酸钠溶液的比例为1:100（w/w），搅拌均匀即为纳米硒溶液。
富硒金针菇培养基的制备方法如下：所用主料为麦秸秆、牛粪、稻壳、木屑、石膏，使用比例为100:40:10:5:6（w/w/w/w/w），先将麦秸秆与牛粪混合均匀，再将稻壳、木屑和石膏与麦秸秆和牛粪混合物混合均匀，然后将混合物投入发酵槽中建堆，最后喷含有纳米硒的水溶液，所用纳米硒的水溶液含有上述制备纳米硒溶液的10%，喷水量为培养基混合物量的70%（w/w），经过通风发酵（每天通风40 min、发酵温度55℃）以及两次转仓（第8d和第18d进行转仓，转仓后通风以及发酵温度保持不变），制得富硒培养基；
在上述培养基中接种金针菇菌种，按照金针菇常规培养方法生产蘑菇，得到样品金针菇（对应表格中的样品）。
对照1：对照生产方法同实施例3，区别仅在于培养基中喷的水为自来水（不添加纳米硒溶液）。
对照2：对照2硒酸钠用量同实施例3，区别是不添加B族维生素、VC和蛋氨酸，其他均与实施例3相同。
对照3：对照3硒酸钠和VC用量同实施例3，区别是不添加B族维生素和蛋氨酸，其他均与实施例3相同。
对照4：对照4硒酸钠、B族维生素用量同实施例3，区别是不添加VC和蛋氨酸，其他均与实施例3相同。
对照5：对照5硒酸钠、蛋氨酸用量同实施例3，区别是不添加B族维生素和VC，其他均与实施例3相同。对照6：
对照6硒酸钠、VC和B族维生素用量同实施例3，区别是不添加蛋氨酸，其他均与实施例3相同。
对照7：对照7硒酸钠、VC和蛋氨酸用量同实施例3，区别是不添加B族维生素，其他均与实施例3相同。
对照8：对照8硒酸钠、B族维生素和蛋氨酸用量同实施例3，区别是不添加VC，其他均与实施例3相同。
样品金针菇总硒含量（干重）达到20 mg/kg，分别比对照1、对照2、对照3、对照4、对照5、对照6、对照7和对照8高5163%、62%、44%、45%、45%、28%、29%和29%。
样品金针菇有机硒含量（干重）达到18.66 mg/kg，分别比对照1、对照2、对照3、对照4、对照5、对照6、对照7和对照8高5388%、99%、75%、75%、76%、37%、40%和38%。上述结果表明采用本发明方法可以制备富硒蘑菇，其中硒主要以有机硒的形式存在（93.3%）；与直接添加无机硒制备的富硒蘑菇（对照2）相比，本发明方法制备的蘑菇总硒和有机硒含量均显著提高（p<0.05）；与仅添加本发明纳米硒溶液中部分营养素的对照相比，采用本发明方法制备的蘑菇其总硒和有机硒含量也显著提高（
p<0.05）。
综上可以看出，本发明中纳米硒溶液中的营养素之间存在协同作用，在合适的应用范围内可以显著提高金针菇的总硒和有机硒含量。此外，表3可知，样品金针菇的总氮含量也显著高于对照金针菇，除总氮和硒含量存在差异外，样品和对照金针菇其他指标不存在显著性差异（
p>0.05）。
表3 采用本发明方法生产的富硒金针菇和常规金针菇的基本成分
| 水分(%,FW) | 碳水化合物(g/100 gDW) | 总氮(%,DW) | 粗脂肪(g/100g DW) | 粗纤维(g/100g DW) | 总硒(mg/kgDW) | 有机硒(mg/kgDW) | ||
| 对照1 | <![CDATA[86.69±0.85<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[41.33±2.16<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[3.62±0.13<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[4.38±0.14<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[18.90±0.54<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[0.38±0.02<sup>e</sup>]]> | <![CDATA[0.34±0.03<sup>e</sup>]]> | |
| 对照2 | <![CDATA[87.70±0.87<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[41.65±2.12<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[3.67±0.11<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[4.32±0.13<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[18.73±0.51<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[12.36±0.55<sup>d</sup>]]> | <![CDATA[9.39±0.53<sup>d</sup>]]> | |
| 对照3 | <![CDATA[88.12±0.90<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[42.62±2.26<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[3.64±0.12<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[4.29±0.12<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[18.61±0.49<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[13.86±0.57<sup>c</sup>]]> | <![CDATA[10.67±0.56<sup>c</sup>]]> | |
| 对照4 | <![CDATA[87.86±0.88<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[43.60±2.32<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[3.60±0.13<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[4.35±0.14<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[18.70±0.48<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[13.80±0.56<sup>c</sup>]]> | <![CDATA[10.64±0.55<sup>c</sup>]]> | |
| 对照5 | <![CDATA[88.31±0.91<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[43.57±2.28<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[3.65±0.11<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[4.31±0.12<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[18.68±0.47<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[13.75±0.52<sup>c</sup>]]> | <![CDATA[10.59±0.53<sup>c</sup>]]> | |
| 对照6 | <![CDATA[87.55±0.89<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[43.63±2.32<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[3.61±0.12<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[4.34±0.13<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[18.75±0.49<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[15.63±0.60<sup>b</sup>]]> | <![CDATA[13.60±0.57<sup>b</sup>]]> | |
| 对照7 | <![CDATA[87.73±0.92<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[42.96±2.35<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[3.63±0.13<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[4.33±0.12<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[18.72±0.48<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[15.51±0.55<sup>b</sup>]]> | <![CDATA[13.34±0.54<sup>b</sup>]]> | |
| 对照8 | <![CDATA[87.64±0.94<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[42.88±2.34<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[3.60±0.12<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[4.27±0.11<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[18.65±0.46<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[15.47±0.53<sup>b</sup>]]> | <![CDATA[13.53±0.56<sup>b</sup>]]> | |
| 样品 | <![CDATA[87.23±0.86<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[40.78±2.10<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[3.87±0.15<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[4.30±0.13<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[17.96±0.43<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[20.00±1.12<sup>a</sup>]]> | <![CDATA[18.66±1.10<sup>a</sup>]]> |
注：结果为平均值±标准差（n=3）；同行不同小写字母表示同一列数据的显著性差异（
p<0.05）；鲜重（fresh weight, FW），干重（dry weight, DW），下同。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做出各种改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定范围为准。
Claims (3)
1.一种富硒菇类培养基的制备方法，其特征在于，按照下述步骤进行：
（1）纳米硒溶液的制备
1）模板溶液制备：将羧甲基壳聚糖、聚乙二醇依次加入水中并溶解，得到模板溶液；
所述羧甲基壳聚糖、聚乙二醇和水的质量比为1:5:100；
2）亚硒酸钠溶液：将亚硒酸钠加入上述步骤1）制备的模板溶液中，搅拌均匀，得到亚硒酸钠溶液；
所述亚硒酸钠与模板溶液的质量比为1:100；
3）维生素和氨基酸混合物的制备：将VC、VB1、VB7和蛋氨酸混合均匀，得到维生素和氨基酸混合物；
所述VC、VB1、VB7和蛋氨酸的质量比为1:0.5:0.5:1；
4）纳米硒溶液制备：向上述步骤2）制备的亚硒酸钠溶液中加入步骤3）制备的维生素和氨基酸混合物中，搅拌均匀即为纳米硒溶液；
所述维生素和氨基酸混合物与亚硒酸钠溶液的质量比为1: 100；
（2）富硒菇类培养基的制备：先将麦秸秆与粪便混合均匀，再加入稻壳、木屑和石膏，混合均匀，得到混合物投入发酵槽中建堆；所述麦秸秆、鸡粪或牛粪、稻壳、木屑、石膏的质量比为100:40:10:5:6；
然后将步骤（1）制备的纳米硒溶液加入水中得到含有纳米硒的水溶液，所述含有纳米硒的水溶液中纳米硒溶液体积的占比为10%；
最后针对发酵槽中建堆的混合物喷洒含有纳米硒的水溶液，经过通风发酵以及转仓后，制得富硒培养基；喷洒量为混合物质量的70%；通风发酵的发酵温度为55℃，通风的条件为40分钟/天；所述转仓具体为发酵的第8 d和第18d进行两次转仓。
2.根据权利要求1所述方法制备的富硒菇类培养基。
3.根据权利要求2所述的富硒菇类培养基用于生产富硒蘑菇的用途，其特征在于，用于培养金针菇，其中金针菇有机硒含量占比为93.3%。
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