CN114025765A

CN114025765A - 巨环激酶抑制剂的多晶型

Info

Publication number: CN114025765A
Application number: CN202080044953.1A
Authority: CN
Inventors: 邓维; E·W·罗杰斯; Y·卢; 张晗; 刘靖
Original assignee: Tepu Pharmaceutical
Current assignee: Tepu Pharmaceutical
Priority date: 2019-06-19
Filing date: 2020-06-16
Publication date: 2022-02-08
Also published as: AU2020294627A1; EP3986413A1; CA3143043A1; WO2020257169A1; TW202115090A; EP3986413A4; PE20220135A1; KR20220046549A; CO2022000405A2; IL288982A; JP2022537385A; MX2021015756A; US20220411439A1; BR112021025786A2

Abstract

本公开涉及(3aR,11S,20aS)‑7‑氟‑11‑甲基‑2,3,3a,12,13,20a‑六氢‑1H,5H‑17,19‑(亚甲桥)环戊并[5,6][1,4]噁嗪并[3,4‑i]吡唑并[4,3‑f]吡啶并[3,2‑l][1,4,8,10]氧杂三氮杂环十三烯‑14(11H)‑酮的多晶型，其适用于治疗哺乳动物的如癌症的疾病。本公开还涉及包括所述多晶型的组合物和使用所述组合物治疗尤其人类的哺乳动物的如癌症的疾病的方法。

Description

巨环激酶抑制剂的多晶型

相关申请的交叉参考

本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2019年6月19日提交的美国临时申请序列号62/863,493；2020年1月11日提交的美国临时申请序列号62/959,940和2020年6月8日提交的美国临时申请序列号63/036,102的权益，所述美国临时申请的全部公开内容以引用的方式并入本文中。

技术领域

本公开涉及(3aR,11S,20aS)-7-氟-11-甲基-2,3,3a,12,13,20a-六氢-1H,5H-17,19-(亚甲桥)环戊并[5,6][1,4]噁嗪并[3,4-i]吡唑并[4,3-f]吡啶并[3,2-l][1,4,8,10]氧杂三氮杂环十三烯(oxatriazacyclotridecin)-14(11H)-酮的多晶型或其水合物，其适用于治疗哺乳动物的如癌症的疾病。本公开还涉及包括所述多晶型的组合物和使用所述组合物治疗尤其人类的哺乳动物的如癌症的疾病的方法。

背景技术

由式I表示的化合物(3aR,11S,20aS)-7-氟-11-甲基-2,3,3a,12,13,20a-六氢-1H,5H-17,19-(亚甲桥)环戊并[5,6][1,4]噁嗪并[3,4-i]吡唑并[4,3-f]吡啶并[3,2-l][1,4,8,10]氧杂三氮杂环十三烯-14(11H)-酮(本文中也称作“化合物I”)

为展示针对野生型和突变型RET、SRC和FGFR1/2的活性的强效小分子多重靶标激酶抑制剂。化合物I具有经由抑制酪氨酸激酶受体进行药理学介导的特性，包括抗肿瘤特性。化合物I公开于2018年12月18日提交的国际专利公开第WO 2019/126121 A1号(国际专利申请第PCT/US2018/066158号)，其以全文引用的方式并入本文中。

蛋白质激酶为细胞生长、增殖和存活的关键调节因子。已展示出有多种疾病(如癌症、疼痛、神经疾病、自体免疫疾病和发炎)由受体酪氨酸激酶(如活化突变的RET或FGFR1/2)介导。举例来说，基因和表观遗传变化在癌细胞中积聚，从而造成驱动恶性过程的信号转导路径的异常活化。曼宁,G(Manning,G)等人,科学(Science)2002,298,1912-1934。这些信号传导路径的药理学抑制展示用于标靶癌症疗法的有前景的介入机会。索耶斯,C.(Sawyers,C.),自然(Nature)2004,432,294-297。

然而已发现化合物I可适用于治疗与受体酪氨酸激酶相关的疾病(如RET活化突变)，其有利地具有改进的特性(如改进的结晶度、溶解特性和/或降低的吸湿性)的多晶型式，同时维持化学和对映异构稳定性特性。

发明内容

在一个方面，本公开提供一种(3aR,11S,20aS)-7-氟-11-甲基-2,3,3a,12,13,20a-六氢-1H,5H-17,19-(亚甲桥)环戊并[5,6][1,4]噁嗪并[3,4-i]吡唑并[4,3-f]吡啶并[3,2-l][1,4,8,10]氧杂三氮杂环十三烯-14(11H)-酮的结晶型式或其水合物。

在另一实施例中，所述(3aR,11S,20aS)-7-氟-11-甲基-2,3,3a,12,13,20a-六氢-1H,5H-17,19-(亚甲桥)环戊并[5,6][1,4]噁嗪并[3,4-i]吡唑并[4,3-f]吡啶并[3,2-l][1,4,8,10]氧杂三氮杂环十三烯-14(11H)-酮的结晶多晶型式为水合物。

在另一实施例中，所述(3aR,11S,20aS)-7-氟-11-甲基-2,3,3a,12,13,20a-六氢-1H,5H-17,19-(亚甲桥)环戊并[5,6][1,4]噁嗪并[3,4-i]吡唑并[4,3-f]吡啶并[3,2-l][1,4,8,10]氧杂三氮杂环十三烯-14(11H)-酮的结晶多晶型式为无水的。

在另一实施例中，化合物I的结晶多晶型式A或D可由下式表示：

在另一实施例中，所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为20.1±0.1的峰的粉末X射线衍射图。在另一实施例中，所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为11.3±0.1和20.1±0.1的峰的粉末X射线衍射图。在另一实施例中，所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为11.3±0.1、20.1±0.1和23.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。在另一实施例中，所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为11.3±0.1、18.0±0.1、20.1±0.1和23.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。在另一实施例中，所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为10.3±0.1、11.3±0.1、18.0±0.1、20.1±0.1和23.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。在另一实施例中，所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为10.3±0.1、11.3±0.1、16.6±0.1、18.0±0.1、20.1±0.1和23.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。在另一实施例中，所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为10.3±0.1、11.3±0.1、16.6±0.1、18.0±0.1、20.1±0.1、20.5±0.1和23.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

在另一方面，所述结晶型式具有基本上与图1中所示相同的包含衍射角(2θ)处的峰的粉末X射线衍射图。

在另一实施例中，所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为18.8±0.1的峰的粉末X射线衍射图。在另一实施例中，所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为18.8±0.1和20.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。在另一实施例中，所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为12.3±0.1、18.8±0.1和20.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。在另一实施例中，所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为12.3±0.1、18.8±0.1、19.4±0.1和20.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。在另一实施例中，所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为12.3±0.1、13.1±0.1、18.8±0.1、19.4±0.1和20.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。在另一实施例中，所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为12.3±0.1、13.1±0.1、15.3±0.1、18.8±0.1、19.4±0.1和20.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。在另一实施例中，所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为9.4±0.1、12.3±0.1、13.1±0.1、15.3±0.1、18.8±0.1、19.4±0.1和20.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

在另一方面，所述结晶型式具有基本上与图3中所示相同的包含衍射角(2θ)处的峰的粉末X射线衍射图。

本公开进一步提供一种药物组合物，其包含下式的化合物I的多晶型式A或型式D：

本公开进一步提供一种包含如本文所描述的药物组合物的胶囊。

在另一方面，本公开提供一种治疗哺乳动物(包括人类)的疾病(尤其癌症)的方法，所述方法包含向所述哺乳动物投与治疗有效量的如本文所描述的(3aR,11S,20aS)-7-氟-11-甲基-2,3,3a,12,13,20a-六氢-1H,5H-17,19-(亚甲桥)环戊并[5,6][1,4]噁嗪并[3,4-i]吡唑并[4,3-f]吡啶并[3,2-l][1,4,8,10]氧杂三氮杂环十三烯-14(11H)-酮的多晶型式A或D，或如本文所描述的包含(3aR,11S,20aS)-7-氟-11-甲基-2,3,3a,12,13,20a-六氢-1H,5H-17,19-(亚甲桥)环戊并[5,6][1,4]噁嗪并[3,4-i]吡唑并[4,3-f]吡啶并[3,2-l][1,4,8,10]氧杂三氮杂环十三烯-14(11H)-酮的多晶型式A或D的药物组合物。

在一个实施例中，本公开提供一种治疗需要此类治疗的哺乳动物(包括人类)的异常细胞生长的方法，其包含向所述哺乳动物投与治疗有效量的化合物I的游离碱多晶型式A或D。在一些实施例中，所述异常细胞生长由至少一种基因改变的酪氨酸激酶介导。

在一些实施例中，所述异常细胞生长由RET、SRC、FGFR1/2或其组合介导。在一些实施例中，所述异常细胞生长由野生型或突变型RET介导。在一些实施例中，所述异常细胞生长由野生型或突变型SRC介导。在一些实施例中，所述异常细胞生长由野生型或突变型FGFR1/2介导。

在一些实施例中，本公开提供一种治疗需要此类治疗的患者的异常细胞生长的方法，其包含投与治疗有效量的化合物I。在一些实施例中，本公开提供一种治疗需要此类治疗的患者的异常细胞生长的方法，其包含投与治疗有效量的化合物I的游离碱多晶型式A或D。在一些实施例中，所述异常细胞生长为由基因改变的RET介导的癌症。在一些实施例中，所述异常细胞生长为由遗传改变的RET介导的癌症，所述RET包含选自由以下组成的群组的至少一种点突变：A883F、E762Q、G691S、L790F、M918T、R749T、R813Q、S891A、S904A、S904F、V778I、V804L、V804M、Y791F和Y806H。

在一些实施例中，本公开提供一种治疗需要此类治疗的患者的异常细胞生长的方法，其包含投与治疗有效量的化合物I。在一些实施例中，本公开提供一种治疗需要此类治疗的患者的异常细胞生长的方法，其包含投与治疗有效量的化合物I的游离碱多晶型式A或D。在一些实施例中，所述异常细胞生长为由融合蛋白质介导的癌症，所述融合蛋白质包含由RET基因编码的蛋白质的片段和可形成卷曲螺旋相互作用以促进蛋白质二聚或寡聚的蛋白质的片段。在一些实施例中，所述异常细胞生长为由融合蛋白质介导的癌症，所述融合蛋白质包含由RET基因编码的蛋白质的片段和由选自由以下组成的群组的基因编码的蛋白质的片段：KIF5B、CCDC6、NCOA4、TRIM24、TRIM33、PRKAR1A、GOLGA5、KTN1、ERC1、MBD1和TRIM27。在一些实施例中，所述融合蛋白质包含由RET基因编码的蛋白质的片段和由KIF5B基因编码的蛋白质的片段。在一些实施例中，所述基因改变的RET为KIF5B-RET、CCDC6-RET、NCOA4-RET、TRIM24-RET、TRIM33-RET、PRKAR1A-RET、GOLGA5-RET、KTN1-RET、ERC1-RET、MBD1-RET或TRIM27-RET融合蛋白质。在一些实施例中，所述基因改变的RET为KIF5B-RET融合蛋白质。在一些实施例中，所述KIF5B-RET融合蛋白质为野生型蛋白质。在一些实施例中，所述KIF5B-RET融合蛋白质包含至少一种抗性突变。在一些实施例中，所述KIF5B-RET融合蛋白质包含至少一种守门员抗性突变(gate keeper resistance mutation)。在一些实施例中，所述KIF5B-RET融合蛋白质包含至少一种溶剂前沿抗性突变(solvent front resistancemutation)。在一些实施例中，所述KIF5B-RET融合蛋白质包含选自由以下组成的群组的至少一种突变：A883F、E762Q、G691S、L790F、M918T、R749T、R813Q、S891A、S904A、S904F、V778I、V804L、V804M、Y791F、Y806H、V804M、G810R、G810C和G810S。在一些实施例中，所述KIF5B-RET融合蛋白质包含选自由V804M、G810R、G810C和G810S组成的群组的至少一种突变。

在一些实施例中，所述异常细胞生长为癌症。在一些实施例中，所述癌症选自由以下组成的群组：肺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、肝细胞癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区癌、胃癌、结肠癌、乳癌、输卵管癌瘤、子宫内膜癌瘤、子宫颈癌瘤、阴道癌瘤、外阴癌瘤、霍奇金氏病(Hodgkin's Disease)、胃癌和食道胃癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤(如未分化大细胞淋巴瘤)、膀胱癌、肾脏癌或尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌瘤、中枢神经系统(CNS)赘瘤、成胶质细胞瘤、原发性CNS淋巴瘤、脊髓轴肿瘤、脑干神经胶瘤、垂体腺瘤、发炎性成肌纤维细胞瘤和其组合。

本公开的其它实施例、特征和优势将由以下实施方式并且经由实践本公开显而易知。本公开化合物可以任何如下所列举条目中的实施例形式描述。应了解，本文所述的任何实施例可与本文所述的任何其它实施例以所述实施例彼此不相矛盾的程度结合使用。

1.一种(3aR,11S,20aS)-7-氟-11-甲基-2,3,3a,12,13,20a-六氢-1H,5H-17,19-(亚甲桥)环戊并[5,6][1,4]噁嗪并[3,4-i]吡唑并[4,3-f]吡啶并[3,2-l][1,4,8,10]氧杂三氮杂环十三烯-14(11H)-酮的结晶多晶型式或其水合物。

2.如条目1的结晶多晶型式，其中所述结晶型式为(7S,13R)-11-氟-7,13-二甲基-6,7,13,14-四氢-1,15-乙烯桥吡唑并[4,3-f][1,4,8,10]苯并氧杂三氮杂环十三烯-4(5H)-酮的游离碱的多晶型式或其水合物。

3.如条目1或2的结晶多晶型，其中所述结晶型式为单水合物。

4.如条目1或2的结晶多晶型，其中所述结晶型式为无水的。

5.一种(3aR,11S,20aS)-7-氟-11-甲基-2,3,3a,12,13,20a-六氢-1H,5H-17,19-(亚甲桥)环戊并[5,6][1,4]噁嗪并[3,4-i]吡唑并[4,3-f]吡啶并[3,2-l][1,4,8,10]氧杂三氮杂环十三烯-14(11H)-酮的结晶多晶型式A，其具有包含衍射角(2θ)为20.1±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

6.如条目5的结晶多晶型式，其中所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为11.3±0.1和20.1±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

7.如条目5或6的结晶多晶型式，其中所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为11.3±0.1、20.1±0.1和23.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

8.如条目5到7中任一项的结晶多晶型式，其中所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为11.3±0.1、18.0±0.1、20.1±0.1和23.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

9.如条目5到8中任一项的结晶多晶型式，其中所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为10.3±0.1、11.3±0.1、18.0±0.1、20.1±0.1和23.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

10.如条目5到9中任一项的结晶多晶型式，其中所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为10.3±0.1、11.3±0.1、16.6±0.1、18.0±0.1、20.1±0.1和23.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

11.如条目5到10中任一项的结晶多晶型式，其中所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为10.3±0.1、11.3±0.1、16.6±0.1、18.0±0.1、20.1±0.1、20.5±0.1和23.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

12.一种(3aR,11S,20aS)-7-氟-11-甲基-2,3,3a,12,13,20a-六氢-1H,5H-17,19-(亚甲桥)环戊并[5,6][1,4]噁嗪并[3,4-i]吡唑并[4,3-f]吡啶并[3,2-l][1,4,8,10]氧杂三氮杂环十三烯-14(11H)-酮的结晶多晶型式D，其具有包含衍射角(2θ)为18.8±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

13.如条目12的结晶多晶型式，其中所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为18.8±0.1和20.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

14.如条目12或13的结晶多晶型式，其中所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为12.3±0.1、18.8±0.1和20.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

15.如条目12到14的结晶多晶型式，其中所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为12.3±0.1、18.8±0.1、19.4±0.1和20.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

16.如条目12到15的结晶多晶型式，其中所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为12.3±0.1、13.1±0.1、18.8±0.1、19.4±0.1和20.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

17.如条目12到16的结晶多晶型式，其中所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为12.3±0.1、13.1±0.1、15.3±0.1、18.8±0.1、19.4±0.1和20.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

18.如条目12到17的结晶多晶型式，其中所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为9.4±0.1、12.3±0.1、13.1±0.1、15.3±0.1、18.8±0.1、19.4±0.1和20.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

19.如条目1到11中任一项的结晶多晶型式，其具有包含选自表3的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个或至少约8个峰的拉曼光谱(Raman spectra)。

20.一种(3aR,11S,20aS)-7-氟-11-甲基-2,3,3a,12,13,20a-六氢-1H,5H-17,19-(亚甲桥)环戊并[5,6][1,4]噁嗪并[3,4-i]吡唑并[4,3-f]吡啶并[3,2-l][1,4,8,10]氧杂三氮杂环十三烯-14(11H)-酮的结晶多晶型式，其具有与图1中所示大体上相同的粉末X射线衍射图。

21.一种(3aR,11S,20aS)-7-氟-11-甲基-2,3,3a,12,13,20a-六氢-1H,5H-17,19-(亚甲桥)环戊并[5,6][1,4]噁嗪并[3,4-i]吡唑并[4,3-f]吡啶并[3,2-l][1,4,8,10]氧杂三氮杂环十三烯-14(11H)-酮的结晶多晶型式，其具有与图3中所示大体上相同的粉末X射线衍射图。

22.一种药物组合物，其包含如前述条目中任一项的结晶多晶型式。

23.一种治疗哺乳动物的疾病的方法，所述方法包含向所述哺乳动物投与治疗有效量的如条目1到21中任一项的结晶多晶型式。

24.如条目23的方法，其中所述哺乳动物为人类。

25.如条目23或24的方法，其中所述疾病选自由以下组成的群组：癌症、疼痛、神经疾病、自体免疫疾病和发炎。

26.如条目22到25中任一项的方法，其中所述疾病为癌症。

27.如条目26的方法，其中所述癌症选自由以下组成的群组：肺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、肝细胞癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区癌、胃癌、结肠癌、乳癌、输卵管癌瘤、子宫内膜癌瘤、子宫颈癌瘤、阴道癌瘤、外阴癌瘤、霍奇金氏病、胃癌和食道胃癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤(如未分化大细胞淋巴瘤)、膀胱癌、肾脏癌或尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌瘤、中枢神经系统(CNS)赘瘤、成胶质细胞瘤、原发性CNS淋巴瘤、脊髓轴肿瘤、脑干神经胶瘤、垂体腺瘤、发炎性成肌纤维细胞瘤和其组合。

28.如条目23到27中任一项的方法，其中所述疾病为由基因改变的RET介导的癌症。

29.如条目23到27中任一项的方法，其中所述疾病为由基因改变的RET介导的癌症，所述RET包含选自由以下组成的群组的至少一种点突变：A883F、E762Q、G691S、L790F、M918T、R749T、R813Q、S891A、S904A、S904F、V778I、V804L、V804M、Y791F和Y806H。

30.如条目23到27中任一项的方法，其中所述疾病为由融合蛋白质介导的癌症，所述融合蛋白质包含由RET基因编码的蛋白质的片段和可形成卷曲螺旋相互作用以促进蛋白质二聚或寡聚的蛋白质的片段。

31.如条目23到27中任一项的方法，其中所述疾病为由融合蛋白质介导的癌症，所述融合蛋白质包含由RET基因编码的蛋白质的片段和由选自由以下组成的群组的基因编码的蛋白质的片段：KIF5B、CCDC6、NCOA4、TRIM24、TRIM33、PRKAR1A、GOLGA5、KTN1、ERC1、MBD1和TRIM27。

32.如条目31中任一项的方法，其中所述融合蛋白质包含由RET基因编码的蛋白质的片段和由KIF5B基因编码的蛋白质的片段。

33.如条目28的方法，其中所述基因改变的RET为KIF5B-RET、CCDC6-RET、NCOA4-RET、TRIM24-RET、TRIM33-RET、PRKAR1A-RET、GOLGA5-RET、KTN1-RET、ERC1-RET、MBD1-RET或TRIM27-RET融合蛋白质。

34.如条目28或33的方法，其中所述基因改变的RET为KIF5B-RET融合蛋白质。

35.如条目28、33或34的方法，其中所述KIF5B-RET融合蛋白质为野生型蛋白质。

36.如条目28、33或34的方法，其中所述KIF5B-RET融合蛋白质包含至少一种抗性突变。

37.如条目28、33或34的方法，其中所述KIF5B-RET融合蛋白质包含至少一种守门员抗性突变。

38.如条目28、33或34的方法，其中所述KIF5B-RET融合蛋白质包含至少一种溶剂前沿抗性突变。

39.如条目28、33或34的方法，其中所述KIF5B-RET融合蛋白质包含选自由以下组成的群组的至少一种突变：A883F、E762Q、G691S、L790F、M918T、R749T、R813Q、S891A、S904A、S904F、V778I、V804L、V804M、Y791F、Y806H、V804M、G810R、G810C和G810S。

40.如条目28、33或34的方法，其中所述KIF5B-RET融合蛋白质包含选自由V804M、G810R、G810C和G810S组成的群组的至少一种突变。

定义

除非另外指示，否则如本文所使用，术语“异常细胞生长”是指独立于正常调节机制的细胞生长(例如丧失接触抑制性)。

除非另外指示，否则如本文所使用，术语“治疗”意指逆转、缓解、抑制进程(即疗愈性治疗的进程)、或预防此类术语所适用的病症或病状、或此类病症或病状的一种或多种症状。除非另外指明，否则如本文中所用，术语“治疗(treatment)”是指治疗行动(act oftreating)，正如就在上文所定义的“治疗(treating)”。“预防性”治疗意图指示推迟疾病、疾病症状或医学病状的产生，抑制可能出现的症状、或降低疾病或症状产生或复发的风险。“疗愈性”治疗包括降低现有疾病、症状或病状的严重性或抑制其恶化。因此，治疗包括改善现有疾病症状或预防其恶化；预防其它症状发生；改善或预防症状的根本全身性病因；抑制病症或疾病，例如遏制病症或疾病的产生；缓解病症或疾病；使病症或疾病消退；缓解疾病或病症所引起的病状；或使疾病或病症的症状停止。

术语“受试者”是指需要此类治疗的哺乳动物患者，如人类。

如本文中所使用，关于X射线衍射峰位置的术语“基本上相同”意指考虑到典型的峰位置和强度变化。举例来说，所属领域的技术人员应了解峰位置(2θ)将出现一些设备之间变化，通常多达0.1°。另外，所属领域的技术人员应了解，相对峰强度将显示设备之间变化以及因结晶度、优选取向、制备的样品表面和所属领域的技术人员已知的其它因素所致的变化，并且应仅视为定性测量。

附图说明

图1展示(3aR,11S,20aS)-7-氟-11-甲基-2,3,3a,12,13,20a-六氢-1H,5H-17,19-(亚甲桥)环戊并[5,6][1,4]噁嗪并[3,4-i]吡唑并[4,3-f]吡啶并[3,2-l][1,4,8,10]氧杂三氮杂环十三烯-14(11H)-酮单水合物的结晶型式(多晶型式A)的粉末X射线衍射图。

图2展示(3aR,11S,20aS)-7-氟-11-甲基-2,3,3a,12,13,20a-六氢-1H,5H-17,19-(亚甲桥)环戊并[5,6][1,4]噁嗪并[3,4-i]吡唑并[4,3-f]吡啶并[3,2-l][1,4,8,10]氧杂三氮杂环十三烯-14(11H)-酮单水合物的结晶型式(多晶型式A)的差示扫描热量测定(DSC)。

图3展示(3aR,11S,20aS)-7-氟-11-甲基-2,3,3a,12,13,20a-六氢-1H,5H-17,19-(亚甲桥)环戊并[5,6][1,4]噁嗪并[3,4-i]吡唑并[4,3-f]吡啶并[3,2-l][1,4,8,10]氧杂三氮杂环十三烯-14(11H)-酮的结晶型式(无溶剂并且无水)(多晶型式D)的粉末X射线衍射图。

图4展示(3aR,11S,20aS)-7-氟-11-甲基-2,3,3a,12,13,20a-六氢-1H,5H-17,19-(亚甲桥)环戊并[5,6][1,4]噁嗪并[3,4-i]吡唑并[4,3-f]吡啶并[3,2-l][1,4,8,10]氧杂三氮杂环十三烯-14(11H)-酮的结晶型式(无溶剂并且无水)(多晶型式D)的差示扫描热量测定(DSC)。

图5A为展示在Ba/F3 KIF5B-RET细胞增殖分析中化合物I、Loxo-292和BLU-667的活性的图表。(▲)化合物I；(■)BLU-667；(●)Loxo-292。

图5B为展示在Ba/F3 KIF5B-RET细胞增殖分析中化合物I、Loxo-292和BLU-667的活性的图表。(▲)化合物I；(■)BLU-667；(●)Loxo-292。

图6A为凝胶图像，其显示在以nM为单位的各种浓度下在Ba/F3工程改造的细胞中的残基Y905处化合物I对RET-G810C磷酸化的作用。

图6B为凝胶图像，其显示在以nM为单位的各种浓度下在Ba/F3工程改造的细胞中的残基Y905处LOXO-292对RET-G810C磷酸化的作用。

具体实施方式

在进一步描述本公开前，应了解，本公开并不限于所述特定实施例，因此当然可变化。还应理解，本文所用的术语仅出于描述特定实施例的目的而并不意图为限制性的，因为本公开的范围将仅由所附权利要求书限定。

除非另有定义，否则本文中所使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的一般技术人员通常所理解相同的含义。本文所提及的所有专利、申请、公开的申请和其它出版物均以全文引用的方式并入本文中。如果此部分中所阐述的定义与以引用的方式并入本文中的专利、申请或其它公开中所阐述的定义相反或以其它方式与其不符，那么相对于以引用的方式并入本文中的定义，以此部分中所阐述的定义为主。

除非上下文另外明确指示，否则如本文中和随附权利要求书中所使用，单数形式“一(a/an)”和“所述”包括多个指示物。应进一步注意，权利要求书可经拟定以排除任何任选的要素。因此，此陈述意图与对所要求保护的元素的叙述结合充当使用如“仅仅(solely)”、“仅(only)”等的排他性术语或意图充当使用“否定性”限制的前提基础。

已根据本文所描述的方法制备(3aR,11S,20aS)-7-氟-11-甲基-2,3,3a,12,13,20a-六氢-1H,5H-17,19-(亚甲桥)环戊并[5,6][1,4]噁嗪并[3,4-i]吡唑并[4,3-f]吡啶并[3,2-l][1,4,8,10]氧杂三氮杂环十三烯-14(11H)-酮单水合物的独特物理型式(多晶型式A)。游离碱多晶型式A的粉末X射线衍射(PXRD)图展示于图1中，其具有表1中所示的对应列表数据。

表1

*vs＝极强，s＝强，m＝中等，w＝弱，vw＝极弱

结晶多晶型式A的DSC热分析图示于图2中。

已根据本文所描述的方法制备(3aR,11S,20aS)-7-氟-11-甲基-2,3,3a,12,13,20a-六氢-1H,5H-17,19-(亚甲桥)环戊并[5,6][1,4]噁嗪并[3,4-i]吡唑并[4,3-f]吡啶并[3,2-l][1,4,8,10]氧杂三氮杂环十三烯-14(11H)-酮的独特物理型式(无溶剂并且无水)(多晶型式D)。游离碱多晶型式D的粉末X射线衍射(PXRD)图展示于图3中，其具有表2中所示的对应列表数据。

表2

*vs＝极强，s＝强，m＝中等，w＝弱，vw＝极弱结晶多晶型式D的DSC热分析图示于图4中。

在一个方面，本发明的化合物和药物组合物特异性地标靶酪氨酸受体激酶，尤其RET、SRC或FGFR1/2。因此，这些化合物和药物组合物可用于预防、逆转、减缓或抑制这些激酶中的一种或多种的活性。在一些实施例中，本文描述治疗由一种或多种受体酪氨酸激酶介导的疾病的方法。

示例性疾病包括癌症、疼痛、神经疾病、自体免疫疾病和发炎。

在一些实施例中，本文描述治疗癌症的方法，所述方法包含投与治疗有效量的化合物I的结晶多晶型式A或D。癌症包括但不限于：肺癌(如非小细胞肺癌、小细胞肺癌等)、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、肝细胞癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区癌、胃癌、结肠癌、乳癌、输卵管癌瘤、子宫内膜癌瘤、子宫颈癌瘤、阴道癌瘤、外阴癌瘤、霍奇金氏病、胃癌和食道胃癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤(如未分化大细胞淋巴瘤)、膀胱癌、肾脏癌或尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌瘤、中枢神经系统(CNS)赘瘤(如成胶质细胞瘤、原发性CNS淋巴瘤、脊髓轴肿瘤、脑干神经胶瘤等)、垂体腺瘤、发炎性成肌纤维细胞瘤和其组合。

在一些实施例中，异常细胞生长是由RET、SRC、FGFR1/2或其组合介导。在一些实施例中，异常细胞生长是由野生型或突变型RET介导。在一些实施例中，异常细胞生长是由野生型或突变型SRC介导。在一些实施例中，异常细胞生长是由野生型或突变型FGFR1/2介导。

在一些实施例中，本公开提供一种治疗需要此类治疗的患者的异常细胞生长的方法，其包含投与治疗有效量的化合物I。在一些实施例中，本公开提供一种治疗需要此类治疗的患者的异常细胞生长的方法，其包含投与治疗有效量的化合物I的游离碱多晶型式A或D。在一些实施例中，所述异常细胞生长为由融合蛋白质介导的癌症，所述融合蛋白质包含由RET基因编码的蛋白质的片段和可形成卷曲螺旋相互作用以促进蛋白质二聚或寡聚的蛋白质的片段。在一些实施例中，所述异常细胞生长为由融合蛋白质介导的癌症，所述融合蛋白质包含由RET基因编码的蛋白质的片段和由选自由以下组成的群组的基因编码的蛋白质的片段：KIF5B、CCDC6、NCOA4、TRIM24、TRIM33、PRKAR1A、GOLGA5、KTN1、ERC1、MBD1和TRIM27。在一些实施例中，所述融合蛋白质包含由RET基因编码的蛋白质的片段和由KIF5B基因编码的蛋白质的片段。在一些实施例中，所述基因改变的RET为KIF5B-RET、CCDC6-RET、NCOA4-RET、TRIM24-RET、TRIM33-RET、PRKAR1A-RET、GOLGA5-RET、KTN1-RET、ERC1-RET、MBD1-RET或TRIM27-RET融合蛋白质。在一些实施例中，所述基因改变的RET为KIF5B-RET融合蛋白质。在一些实施例中，所述KIF5B-RET融合蛋白质为野生型蛋白质。在一些实施例中，所述KIF5B-RET融合蛋白质包含至少一种抗性突变。在一些实施例中，所述KIF5B-RET融合蛋白质包含至少一种守门员抗性突变。在一些实施例中，所述KIF5B-RET融合蛋白质包含至少一种溶剂前沿抗性突变。在一些实施例中，所述KIF5B-RET融合蛋白质包含选自由以下组成的群组的至少一种突变：A883F、E762Q、G691S、L790F、M918T、R749T、R813Q、S891A、S904A、S904F、V778I、V804L、V804M、Y791F、Y806H、V804M、G810R、G810C和G810S。在一些实施例中，所述KIF5B-RET融合蛋白质包含选自由V804M、G810R、G810C和G810S组成的群组的至少一种突变。

在一些实施例中，本文描述治疗或预防疼痛的方法，其包含投与治疗有效量的化合物I的结晶多晶型式A或D。疼痛包括例如来自任何来源或病因的疼痛，包括癌症疼痛、来自化学治疗的疼痛、神经疼痛、来自损伤的疼痛或其它来源的疼痛。

在一些实施例中，本文描述治疗自体免疫疾病的方法，其包含投与治疗有效量的化合物I的结晶多晶型式A或D。自体免疫疾病包括例如类风湿性关节炎、休格连氏综合征(Sjogren syndrome)、I型糖尿病和狼疮。示例性神经疾病包括阿尔茨海默病(Alzheimer'sDisease)、帕金森氏病(Parkinson's Disease)、肌肉萎缩性侧索硬化和亨廷顿氏病(Huntington's disease)。

在一些实施例中，本文描述治疗发炎的发炎疾病的方法，其包含投与治疗有效量的化合物I的结晶多晶型式A或D。示例性发炎性疾病包括动脉粥样硬化、过敏和来自感染或损伤的炎症。

在本发明的治疗方法中，“有效量”意指一般足以在需要此类治疗的受试者中产生所要治疗益处的量或剂量。本发明化合物的有效量或剂量可通过常规方法(如模型化、剂量递增或临床试验)，考虑常规因素(例如投药或药物递送的模式或途径、药剂的药物动力学、感染的严重性和病程、受试者的健康状况、病状和重量和治疗医师的判断)来确定。示例性剂量在每天约0.1mg到1g、或每天约1mg到50mg、或每天约50到250mg、或每天约250mg到1g范围内。总剂量可以单次或分次剂量单位(例如BID、TID、QID)给与。

患者的疾病出现改善之后，剂量可经调节以用于预防或维持治疗。举例来说，投药的剂量或频率或两者可随症状变化降到维持所要治疗或预防作用的水平。当然，如果症状已缓解到适当水平，那么可停止治疗。然而，患者可在症状任何复发时要求长期间歇性治疗。患者还可能需要长期持续治疗。

药物组合物

本公开还涉及包含本文所描述的化合物I的游离碱多晶型式A或D的药物组合物。本公开的药物组合物可例如呈适于经口投与的形式(如锭剂、胶囊、丸剂、散剂、持续释放型调配物、溶液、悬浮液)、适于肠胃外注射的形式(如无菌溶液、悬浮液或乳液)、适于局部投与的形式(如软膏或乳膏)或适于直肠投与的形式(如栓剂)。药物组合物可呈适用于单次投与精确剂量的单位剂型。所述药物组合物可包括药学上可接受的常规赋形剂。另外，本文所描述的所述药物组合物可包括其它药用或药物试剂、载剂、佐剂等。

药学上可接受的赋形剂为无毒并在其它方面生物学上适合于投与受试者的物质。此类赋形剂有助于本文中所描述的化合物的投与并且与活性成分相容。药学上可接受的赋形剂的实例包括稳定剂、润滑剂、表面活性剂、稀释剂、抗氧化剂、粘合剂、着色剂、膨化剂、乳化剂或口味调节剂。在优选实施例中，根据本发明的药物组合物为无菌组合物。药物组合物可使用所属领域的技术人员已知或可利用的混配技术制备。

本发明还涵盖无菌组合物，包括符合控管此类组合物的国家和地区法规的组合物。

本文中所描述的药物组合物和化合物可根据所属领域中已知用于制备各种剂型的常规方法调配成于适合药物溶剂或载剂中的溶液、乳液、悬浮液或分散液，或与固体载剂一起调配成丸剂、锭剂、口含锭、栓剂、药囊、糖衣药丸、颗粒、散剂、复原用散剂或胶囊。可通过适合递送途径(如经口、肠胃外、经直肠、经鼻、局部或眼部途径)或通过吸入投与本发明的药物组合物。在一些实施例中，组合物经调配用于静脉内或经口投与。

为经口投与，可以固体形式(如锭剂或胶囊)或溶液、乳液或悬浮液形式提供本发明化合物。为制备经口组合物，本发明化合物可经调配以产生例如每天约0.1mg到1g、或每天约1mg到50mg、或每天约50到250mg、或每天约250mg到1g的剂量。经口锭剂可包括与药学上可接受的相容赋形剂混合的一种或多种活性成分，所述赋形剂如稀释剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂。适合惰性填充剂包括碳酸钠和碳酸钙、磷酸钠和磷酸钙、乳糖、淀粉、糖、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、甘露糖醇、山梨糖醇等。示例性液体口服赋形剂包括乙醇、甘油、水等。淀粉、聚乙烯-吡咯烷酮(PVP)、羟基乙酸淀粉钠、微晶纤维素和褐藻酸为示例性崩解剂。粘合剂可包括淀粉和明胶。润滑剂如果存在可为硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。如果需要，锭剂可包覆有如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯的材料以延迟在胃肠道中的吸收，或可包覆肠溶包衣。

用于经口投与的胶囊包括硬明胶胶囊和软明胶胶囊。为制备硬明胶胶囊，活性成分可与固体、半固体或液体稀释剂混合。可通过将活性成分与水、油(如花生油或橄榄油)、液体石蜡、短链脂肪酸的单甘油酯与二甘油酯的混合物、聚乙二醇400或丙二醇混合来制备软明胶胶囊。

用于经口投与的液体可为悬浮液、溶液、乳液或糖浆形式或可冻干或呈现为干燥产物用以在使用之前用水或其它适合媒剂复原。此类液体组合物可任选地含有：药学上可接受的赋形剂，如悬浮剂(例如山梨糖醇、甲基纤维素、海藻酸钠、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶等)；非水性媒剂，例如油(例如杏仁油或经分馏的椰子油)、丙二醇、乙醇或水；防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)；湿润剂，如卵磷脂；和(如果需要)调味剂或着色剂。

为进行肠胃外使用，包括静脉内、肌肉内、腹膜内、鼻内或皮下途径，可以缓冲到适当pH值和等张性的无菌水溶液或悬浮液形式或以肠胃外可接受的油形式提供本发明的药剂。适合水性媒剂包括林格氏溶液(Ringer's solution)和等张氯化钠。此类形式可呈现为单位剂型(如安瓿或一次性注射装置)、多剂量形式(如可从中取出适当剂量的小瓶)或可用于制备可注射调配物的固体形式或预浓缩物。在数分钟到数天范围内的时段内，说明性输注剂量在每分钟约1到1000μg/kg药剂与药物载剂的混合物的范围内。

为进行经鼻、吸入或经口投与，本发明的药物组合物可使用例如还含有适合载剂的喷雾调配物投与。本发明组合物可经调配以用于以栓剂形式经直肠投与。

为进行局部施用，本发明化合物优选调配为乳膏或软膏或适合于局部投与的类似媒剂。为进行局部投与，本发明化合物可与药物载剂以药物比媒剂呈约0.1％到约10％的浓度混合。投与本发明的药剂的另一模式可利用贴片调配物来实现经皮递送。

所属领域的技术人员已知或将清楚制备含有具体量的活性化合物的各种药物组合物的方法。举例来说，参见雷明顿氏药物科学(Remington's PharmaceuticalSciences),马克出版公司(Mack Publishing Company),宾夕法尼亚州伊斯特(Easter,Pa.),第15版(1975)。

药物组合

本文所述的本发明化合物可与一种或多种其它活性成分组合用于药物组合物或方法中来治疗本文所述的疾病和病症。其它活性成分包括缓和用于预期疾病目标的疗法的不良作用的其它疗法或药剂。此类组合可用来提高功效、改善其它疾病症状、减少一种或多种副作用或减少本发明化合物的所需剂量。其它活性成分可呈与本发明化合物分离的药物组合物投与或可与本发明化合物一起包括于单一药物组合物中。可在投与本发明化合物同时、之前或之后投与其它活性成分。

组合药剂包括已知或发现有效治疗本文所述的疾病和病症的其它活性成分，包括那些具有针对与所述疾病相关联的另一目标的活性的活性成分。举例来说，本发明的组合物和调配物以及治疗方法可另外包含其它药物或药剂，例如适用于治疗或缓解目标疾病或相关症状或病状的其它活性剂。对于癌症适应症，其它此类药剂包括但不限于激酶抑制剂，如EGFR抑制剂(例如埃罗替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib))、Raf抑制剂(例如维罗非尼(vemurafenib))、VEGFR抑制剂(例如舒尼替尼(sunitinib))、ALK抑制剂(例如克卓替尼(crizotinib))；标准化学治疗剂，如烷基化剂、抗代谢物、抗肿瘤抗生素、拓朴异构酶抑制剂、铂类药物、有丝分裂抑制剂、抗体、激素疗法或皮质类固醇。对于疼痛适应症，适合组合药剂包括抗炎药，如NSAID。本发明的药物组合物可另外包含一种或多种此类活性剂，并且治疗方法可另外包含投与有效量的一种或多种此类活性剂。

实例

下文所提供的实例和制剂进一步说明并且举例说明本公开的实施例的具体方面。应了解，本公开的范围不以任何方式受以下实例的范围限制。

缩写

本文所描述的实例使用的材料包括但不限于由所属领域的技术人员已知的以下缩写所描述的那些材料：

实例1

化合物I的合成

根据以下合成流程制备化合物I：

制备(3aR,11S,20aS)-7-氟-11-甲基-2,3,3a,12,13,20a-六氢-1H,5H-17,19-(亚甲桥)环戊并[5,6][1,4]噁嗪并[3,4-i]吡唑并[4,3-f]吡啶并[3,2-l][1,4,8,10]氧杂三氮杂环十三烯-14(11H)-酮(5)

步骤1.向含B-1(454mg，1.49mmol)和A-5(358mg，1.49mmol)的t-BuOH(5.0mL)的溶液中添加许尼希氏碱(963mg，7.45mmol，1.30mL)。将混合物加热到105℃持续17小时。冷却反应物并在减压下浓缩。进行快速色谱(ISCO系统，二氧化硅(12g)，10-40％乙酸乙酯/己烷)得到5-1(292mg，产率38％)。

步骤2.向含5-1(18.8mg,37μmol)的DMF(3mL)的溶液中添加含KOt-Pent(1.7M，65μL)的甲苯。在室温下搅拌反应物20小时。将反应物冷却到-20℃并用饱和NH₄Cl溶液(5mL)淬灭，接着用DCM(3×10mL)萃取。用Na₂SO₄干燥经合并的萃取物并在减压下浓缩。进行快速色谱(ISCO系统，二氧化硅(12g)，0-5％甲醇/二氯甲烷)得到5-2(6.2mg，产率39％)。

步骤3.向含5-2(6.2mg，14.5μmol)的EtOH(4mL)的溶液中添加含HCl水溶液(4.0M，3.0mL)的1,4-二噁烷。在70℃下加热混合物6小时。冷却混合物，在减压下浓缩，并在高真空下干燥，得到粗5-3。按原样使用化合物。

步骤4.向含5-3(6.2mg，14.5μmol)和A-3-1A(17mg，73μmol，2,2-二氧化(R)-5-甲基-1,2,3-氧杂噻唑烷-3-甲酸叔丁酯，购自(例如)先进化工公司(Advanced ChemBlocksInc))的DMF(250μL)中添加K₂CO₃(14.0mg,101μmol)并搅拌2小时。冷却混合物并用水(5mL)淬灭，接着用DCM(3×10mL)萃取。用Na₂SO₄干燥合并的萃取物并在减压下浓缩。进行快速色谱(ISCO系统，二氧化硅(12g)，20-100％乙酸乙酯/己烷)以得到5-4(6.1mg，产率为73％)。

步骤5.在环境温度下向含5-4(6.1mg，10.7μmol)的MeOH(3mL)和THF(1mL)的溶液中添加LiOH水溶液(2.0M，1.0mL)。在60℃下加热混合物16小时，冷却到-20℃，接着用HCl水溶液(2.0M)淬灭到呈酸性。用DCM(3×5mL)萃取混合物，用Na₂SO₄干燥，在减压下浓缩并在高真空下干燥。将粗材料溶解于DCM(4mL)中，随后添加含HCl的1,4-二噁烷溶液(4M，3mL)。在环境温度下搅拌混合物2小时，在减压下浓缩并在高真空下干燥。将粗材料溶解于DMF(2.0mL)和DCM(4.0mL)以及许尼希氏碱(185mg，1.4mmol，250μL)中，接着一次性添加FDPP(34.5mg，89μmol)。搅拌反应物1小时，接着用2M Na₂CO₃溶液(5mL)淬灭。搅拌混合物5分钟，接着用DCM(4×10mL)萃取。用Na₂SO₄干燥合并的萃取物并在减压下浓缩。进行快速色谱(ISCO系统，二氧化硅(12g)，0-5％甲醇/二氯甲烷)以得到5(3.21mg，产率为71％)。

(1S,2R)-2-(((5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)甲基)氨基)环戊-1-醇(A-5)的制备

将含(1S,2R)-2-氨基环丁烷HCl盐(69mg，504μmol)、许尼希氏碱(196mg，0.26mL，1.5mmol)和A-1-4(150.00mg，504μmol)的无水MeOH(2.50mL)加热到65℃并持续1小时。使反应物冷却到室温并添加NaBH₄(38mg，1.0mmol)。搅拌混合物2小时，接着用水(3mL)淬灭并搅拌5分钟。用DCM(3×5mL)萃取混合物，用Na₂SO₄干燥并在减压下浓缩。进行快速色谱(ISCO系统，二氧化硅(12g)，25-50％乙酸乙酯/己烷)以得到A-1(125.3mg，327μmol，产率为64.9％)。

根据通用方法A在步骤2中使用5-氟-2-甲氧基烟醛制备化合物A-5。

制备6-溴-5-二氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(B-1)

步骤1.向含B-1-1(10.00g，47.80mmol，1.00eq.，5-羟基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯，购自(例如)苏州迪飞医药科技有限公司(Suzhou Devi Pharma Technology Co,Ltd.))的乙酸(100.00mL)的溶液中添加溴(7.64g，47.80mmol，2.46mL，1.00eq.)。在180℃下搅拌混合物6小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)展示起始物质完全耗尽并发现一个新斑点。通过水(30mL)淬灭混合物。过滤混合物并浓缩滤饼，得到呈白色固体状的B-1-2(10.00g，34.71mmol，产率72.62％)：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.34(br.s.,1H),9.25(s,1H),8.15(s,1H),4.28(q,J＝7.2Hz,2H),1.29(t,J＝7.2Hz,3H)。

步骤2.向B-1-2(6.00g，20.97mmol，1.00eq.)的溶液中添加氧氯化磷(60mL)。在120℃下搅拌混合物16小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)指示起始材料完全耗尽并发现一个新斑点。过滤反应混合物并在减压下浓缩，得到残余物。通过柱色谱(SiO₂、石油醚/乙酸乙酯＝10/1到1/1)纯化残余物，得到呈白色固体状的B-1(2.50g，8.21mmol，产率39.15％)；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:8.94(s,1H),8.54(s,1H),4.43(q,J＝7.2Hz,2H),1.42(t,J＝7.2Hz,3H)。

实例2

化合物I的结晶多晶型式A的形成.

用水(10mL)处理含化合物I(13.8g)的乙醇(30mL)的溶液。直接由沉淀获得的固体化合物I为化合物I的结晶多晶型式A。

实例3

化合物I的结晶多晶型式D的形成.

使直接由实例1步骤5的纯化溶离份获得的固体化合物I结晶多晶型式A(302mg)在无水2-丙醇(1.5mL)中平衡，得到化合物I的结晶多晶型式D。

化合物I的结晶多晶型式A的测试.

实例4

化合物I的结晶多晶型式A的粉末X射线衍射(PXRD).

在配备有Mythen1K检测器和Cu-Kα1辐射的Stoe Stadi P粉末X射线衍射仪上对化合物I的样品(结晶多晶型式A)运作PXRD。在收集期间旋转样品以限制优选取向峰。使用0.02°2θ的步长和12秒/步的扫描速率从1.5°-50.5°2θ收集数据。结果展示于图1中。

实例5

化合物I的结晶多晶型式A的差示扫描热量测定(DSC).

使用气密密封式金样品盘通过TA Instruments DSC Q2000进行DSC测量。使化合物I的3.2150mg样品(结晶多晶型式A)在-70℃下平衡，并接着以10℃/分钟的速率逐渐升到200℃。化合物I的样品(结晶多晶型式A)展示峰值温度为155.5℃的吸热峰。结果展示于图2中。

实例6

化合物I的结晶多晶型式A的FT-拉曼光谱.

使用具有在1064nm下操作的近红外Nd:YAG激光和经液氮冷却的锗检测器的Bruker MultiRAM FT-拉曼系统对化合物I的样品(结晶多晶型式A)进行FT-拉曼。具有2cm^-1分辨率的64次扫描积聚在3500到50cm^-1范围内。激光功率为300mW。由于过滤截止作用，仅评估高于100cm^-1的数据。化合物I的样品(结晶多晶型式A)展示如表3中的吸光度：

表3

化合物I的结晶多晶型式D的测试.

实例7

化合物I的结晶多晶型式D的粉末X射线衍射(PXRD).

在配备有Mythen1K检测器和Cu-Kα1辐射的Stoe Stadi P粉末X射线衍射仪上对化合物I的样品(结晶多晶型式D)运作PXRD。在收集期间旋转样品以限制优选取向峰。使用0.02°2θ的步长和12秒/步的扫描速率从1.5°-50.5°2θ收集数据。结果展示于图3中。

实例8

化合物I的结晶多晶型式D的差示扫描热量测定(DSC).

使用气密密封式金样品盘通过TA Instruments DSC Q2000进行DSC测量。使化合物I的1.8860mg样品(结晶多晶型式D)在-70℃下平衡，并接着以10℃/分钟的速率逐渐升到300℃。化合物I的样品(结晶多晶型式D)展示峰值温度为239.5℃的吸热峰。结果展示于图4中。

生物实例

实例9：

生化激酶分析方法

还在反应生物学公司(Reaction Biology Corporation)(www.reactionbiology.com,宾夕法尼亚州莫尔文(Malvern,PA))遵循描述于参考文献阿纳斯塔西迪斯T(Anastassiadis T等人,自然-生物技术(Nat Biotechnol.)2011,29,1039)中的程序进行生化激酶分析。在反应缓冲液；20mM Hepes pH 7.5、10mM MgCl₂、1mM EGTA、0.02％Brij35、0.02mg/mL BSA、0.1mM Na₃VO₄、2mM DTT、1％DMSO中制备特定激酶/底物对以及必需辅因子。将化合物递送到反应中，继而在约20分钟后添加ATP(密苏里州圣路易斯的西格玛公司(Sigma，St.Louis MO))与³³P ATP(马萨州塞州沃尔瑟姆的珀金埃尔默公司(Perkin Elmer,Waltham MA))的混合物达到10μM的最终浓度。反应在室温下进行120分钟，继而将反应物点样到P81离子交换滤纸(新泽西州皮斯卡特维的沃特曼公司(WhatmanInc.,Piscataway,NJ))上。通过在0.75％磷酸中充分洗涤过滤器来去除未结合的磷酸酯。在扣除来源于含有惰性酶的对照反应的背景之后，将激酶活性数据表示为与媒剂(二甲亚砜)反应相比在测试样品中剩余激酶活性的百分比。使用Prism(格拉夫帕德软件公司(GraphPad Software))获得IC₅₀值和曲线拟合。

细胞系和细胞培养：

人类髓质甲状腺癌细胞系TT(含有RET M918T突变)和急性骨髓性细胞系KG-1购自ATCC。人类结肠癌细胞系KM12(含有TPM3-TRKA)由NCI获得。

克隆和制造Ba/F3稳定细胞系

在金斯瑞(GenScript)合成EML4-ALK基因(变型1)并克隆到pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro质粒(系统生物科学公司(System Biosciences,Inc))。通过用含有EML4-ALK野生型的慢病毒转导Ba/F3细胞生成Ba/F3-EML4-ALK野生型。通过嘌呤霉素处理继而IL-3抽取来选择稳定细胞系。简单地说，用慢病毒上清液在8μg/mL硫酸鱼精蛋白存在下转导5×10⁶个Ba/F3细胞。随后用1μg/mL嘌呤霉素在含IL3的培养基RPMI1640加10％FBS存在下选择经转导的细胞。在选择10-12天之后，进一步针对IL3独立型生长选择存活细胞。

在金斯瑞合成KIF5B-RET基因并克隆到pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro质粒(系统生物科学公司)。在金斯瑞通过PCR生成KIF5B-RET点突变V804M和G810C并通过定序确认。通过用含有KIF5B-RET野生型或突变的慢病毒转导Ba/F3细胞生成Ba/F3-KIF5B-RET野生型和突变。通过嘌呤霉素处理继而IL-3抽取来选择稳定细胞系。简单地说，用慢病毒上清液在8μg/mL硫酸鱼精蛋白存在下转导5×10⁶个Ba/F3细胞。随后用1μg/mL嘌呤霉素在含IL3的培养基RPMI1640加10％FBS存在下选择经转导的细胞。在选择10-12天之后，进一步针对IL3独立型生长选择存活细胞。

细胞增殖分析：

以每孔两千个细胞接种在384孔白板中24小时，并随后用化合物处理72小时(37℃，5％CO₂)。使用基于CellTiter-Glo荧光素酶的ATP检测分析(普洛麦格公司(Promega))遵循制造商的方法来测量细胞增殖。使用GraphPad Prism软件(加利福尼亚州圣地亚哥(San Diego,CA)的格拉夫帕德公司)执行IC₅₀值测定。

数据和结果：

化合物I的酶促激酶活性.

化合物I	10μM ATP下的IC<sub>50</sub>(nM)
		RET	1.0
RET(A883F)	1.2
		RET(E762Q)	1.0
RET(G691S)	1.8
		RET(L790F)	0.4
RET(M918T)	0.3
		RET(R749T)	0.8
RET(R813Q)	1.7
		RET(S891A)	0.2
RET(S904A)	0.9
		RET(S904F)	0.5
RET(V778I)	0.1
		RET(V804E)	>1000
RET(V804L)	6.2
		RET(V804M)	8.1
RET(Y791F)	0.4
		RET(Y806H)	2.6
RET-CCDC6(PTC1)	0.5
		RET-NCOA4(PTC3)	0.7
SRC	1.5
		FYN	1.9
LYN	2.0
		YES/YES1	2.6
HCK	2.7

抗细胞增殖活性

化合物I抗细胞增殖比较

还参见图5A和图5B。

化合物I强效抑制Ba/F3 KIF5B-RET G810C自体磷酸化

化合物I和LOXO-292对Ba/F3工程改造细胞中残基Y905处的RET-G810C磷酸化的作用.将各种浓度的化合物I、LOXO-292与Ba/F3 KIF5B-RET G810C(24孔板中1百万个细胞/孔)一起培育4小时。收集细胞，裂解，并使用相关抗体通过SDS-PAGE和免疫印迹法测定p-RET(Y905 RET含量。使用肌动蛋白作为内参物。化合物I的IC₅₀在1-3nM之间，而LOXO-292的IC₅₀大于300nM。结果展示于图6A和图6B中。

Claims

2.根据权利要求1所述的结晶多晶型式，其中所述结晶型式为(7S,13R)-11-氟-7,13-二甲基-6,7,13,14-四氢-1,15-乙烯桥吡唑并[4,3-f][1,4,8,10]苯并氧杂三氮杂环十三烯-4(5H)-酮的游离碱的多晶型式或其水合物。

3.根据权利要求1或2所述的结晶多晶型，其中所述结晶型式为单水合物。

4.根据权利要求1或2所述的结晶多晶型，其中所述结晶型式为无水物。

6.根据权利要求5所述的结晶多晶型式，其中所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为11.3±0.1和20.1±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

7.根据权利要求6所述的结晶多晶型式，其中所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为11.3±0.1、20.1±0.1和23.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

8.根据权利要求7所述的结晶多晶型式，其中所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为11.3±0.1、18.0±0.1、20.1±0.1和23.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

9.根据权利要求8所述的结晶多晶型式，其中所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为10.3±0.1、11.3±0.1、18.0±0.1、20.1±0.1和23.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

10.根据权利要求9所述的结晶多晶型式，其中所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为10.3±0.1、11.3±0.1、16.6±0.1、18.0±0.1、20.1±0.1和23.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

11.根据权利要求10所述的结晶多晶型式，其中所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为10.3±0.1、11.3±0.1、16.6±0.1、18.0±0.1、20.1±0.1、20.5±0.1和23.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

13.根据权利要求12所述的结晶多晶型式，其中所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为18.8±0.1和20.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

14.根据权利要求13所述的结晶多晶型式，其中所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为12.3±0.1、18.8±0.1和20.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

15.根据权利要求14所述的结晶多晶型式，其中所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为12.3±0.1、18.8±0.1、19.4±0.1和20.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

16.根据权利要求15所述的结晶多晶型式，其中所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为12.3±0.1、13.1±0.1、18.8±0.1、19.4±0.1和20.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

17.根据权利要求16所述的结晶多晶型式，其中所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为12.3±0.1、13.1±0.1、15.3±0.1、18.8±0.1、19.4±0.1和20.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

18.根据权利要求17所述的结晶多晶型式，其中所述结晶多晶型式具有包含衍射角(2θ)为9.4±0.1、12.3±0.1、13.1±0.1、15.3±0.1、18.8±0.1、19.4±0.1和20.9±0.1的峰的粉末X射线衍射图。

19.根据权利要求1到11中任一权利要求所述的结晶多晶型式，其具有包含选自表3的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个或至少约8个峰的拉曼光谱。

22.一种药物组合物，其包含根据前述权利要求中任一权利要求所述的结晶多晶型式。

23.一种治疗哺乳动物的疾病的方法，所述方法包含向所述哺乳动物投与治疗有效量的根据权利要求1到21中任一权利要求所述的结晶多晶型式。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述哺乳动物为人类。

25.根据权利要求24所述的方法，其中所述疾病选自由以下组成的群组：癌症、疼痛、神经疾病、自体免疫疾病和发炎。

26.根据权利要求25所述的方法，其中所述疾病为癌症。

27.根据权利要求26所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的群组：肺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、肝细胞癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区癌、胃癌、结肠癌、乳癌、输卵管癌瘤、子宫内膜癌瘤、子宫颈癌瘤、阴道癌瘤、外阴癌瘤、霍奇金氏病、胃癌和食道胃癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤(如未分化大细胞淋巴瘤)、膀胱癌、肾脏癌或尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌瘤、中枢神经系统CNS赘瘤、成胶质细胞瘤、原发性CNS淋巴瘤、脊髓轴肿瘤、脑干神经胶瘤、垂体腺瘤、发炎性成肌纤维细胞瘤和其组合。

28.根据权利要求23到27中任一权利要求所述的方法，其中所述疾病是由基因改变的RET介导。

29.根据权利要求23到27中任一权利要求所述的方法，其中所述疾病是由基因改变的RET介导，所述RET包含选自由以下组成的群组的至少一种点突变：A883F、E762Q、G691S、L790F、M918T、R749T、R813Q、S891A、S904A、S904F、V778I、V804L、V804M、Y791F和Y806H。

30.根据权利要求23到27中任一权利要求所述的方法，其中所述疾病是由融合蛋白质介导，所述融合蛋白质包含由RET基因编码的蛋白质的片段和能够形成卷曲螺旋相互作用以促进蛋白质二聚或寡聚的蛋白质的片段。

31.根据权利要求23到27中任一权利要求所述的方法，其中所述疾病是由融合蛋白质介导，所述融合蛋白质包含由RET基因编码的蛋白质的片段和由选自由以下组成的群组的基因编码的蛋白质的片段：KIF5B、CCDC6、NCOA4、TRIM24、TRIM33、PRKAR1A、GOLGA5、KTN1、ERC1、MBD1和TRIM27。

32.根据权利要求31所述的方法，其中所述融合蛋白质包含由RET基因编码的蛋白质的片段和由KIF5B基因编码的蛋白质的片段。

33.根据权利要求28所述的方法，其中所述基因改变的RET为KIF5B-RET、CCDC6-RET、NCOA4-RET、TRIM24-RET、TRIM33-RET、PRKAR1A-RET、GOLGA5-RET、KTN1-RET、ERC1-RET、MBD1-RET或TRIM27-RET融合蛋白质。

34.根据权利要求28或33所述的方法，其中所述基因改变的RET为KIF5B-RET融合蛋白质。

35.根据权利要求28、33或34所述的方法，其中所述KIF5B-RET融合蛋白质为野生型蛋白质。

36.根据权利要求28、33或34所述的方法，其中所述KIF5B-RET融合蛋白质包含至少一种抗性突变。

37.根据权利要求28、33或34所述的方法，其中所述KIF5B-RET融合蛋白质包含至少一种守门员抗性突变。

38.根据权利要求28、33或34所述的方法，其中所述KIF5B-RET融合蛋白质包含至少一种溶剂前沿抗性突变。

39.根据权利要求28、33或34所述的方法，其中所述KIF5B-RET融合蛋白质包含选自由以下组成的群组的至少一种突变：A883F、E762Q、G691S、L790F、M918T、R749T、R813Q、S891A、S904A、S904F、V778I、V804L、V804M、Y791F、Y806H、V804M、G810R、G810C和G810S。

40.根据权利要求28、33或34所述的方法，其中所述KIF5B-RET融合蛋白质包含选自由V804M、G810R、G810C和G810S组成的群组的至少一种突变。