CN114010839B - 一种梯度降解人工真皮及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种梯度降解人工真皮及其制备方法和应用，所述梯度降解人工真皮包括胶原基质膜和嵌入在胶原基质膜上的胶原基质颗粒。本发明提供的梯度降解人工真皮可以实现梯度降解，未经交联处理的胶原基质膜，在体内以较快的速度降解，降解产物为创面的组织再生提供原材料、促进创面血管化；胶原基质膜降解后，原位保留的胶原基质颗粒均匀地分布在创面上，在新生真皮组织中持续发挥细胞微载体的功能，能够引导细胞有序长入，同时能够阻碍肌成纤维细胞对胶原纤维的牵拉，延缓创面挛缩。

Description

一种梯度降解人工真皮及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于仿生材料技术领域，具体涉及一种梯度降解人工真皮及其制备方法和应用。
背景技术
近30年来，人工真皮在修复缺损创面领域得到越来越广泛的应用。人工真皮主要分为脱细胞真皮基质和人工真皮替代物两种类型。
其中，脱细胞真皮基质包括Alloderm、桀亚、优创真质等产品，但存在孔径尺寸小不利于细胞长入，降解周期长不利于新生真皮形成等问题；人工真皮替代物包括Integra、Pelnac、Lando人工真皮，虽然孔径尺寸和降解周期得到优化，但存在成分单一的问题；成分单一的真皮产品，要么降解较快，在创面愈合早期缺乏“真皮模板”，容易导致肉芽组织形成，术后容易出现严重的瘢痕；要么降解较慢，创面愈合营养供给不足，导致创面血管化较慢的问题。真皮在创面要实现快速血管化和远期抗瘢痕效果好的目标，需要控制合适的降解周期。
US7993679B2公开了一种包含胶原/GAG基质颗粒的可流动基质，当水合时，可以将基质有效地输送到具有不同深度和几何形状的伤口处。该基质允许伤口基质和伤口床之间更紧密的接触，并提供用作细胞向内生长的支架的结构框架，但凝胶产品无固定形状，涂覆在创面上容易厚度不均。
CN110420359A公开了一种引导组织再生膜及其制备方法，所述引导组织再生膜包括面向骨膜的致密层和面向骨缺损区域的疏松层；所述致密层由I型胶原构成，表面光滑；所述疏松层由I型胶原和矿化胶原纳米颗粒复合而成，内部为多孔状结构。但该材料的矿化胶原颗粒含有较高含量的钙盐和钠盐，且经交联处理，降解周期长。
CN110638684A公开了一种可注射的胶原组合物及其制备方法，所述胶原组合物包括去端肽胶原凝胶和分散于所述去端肽胶原凝胶中的n种粒径不同的脱细胞胶原颗粒，所述n为3-18中的整数。但是该专利所用的胶原基颗粒为脱细胞颗粒，孔径一般低于50μm，不利于细胞长入，难以发挥真皮模板功能，仅起到延长降解时间的作用。
因此，如何提供一种降解周期合适的人工真皮，使其既可以引导缺损细胞再生，又可以延缓创面挛缩，成为目前亟待解决的问题。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种梯度降解人工真皮及其制备方法和应用。本发明提供的梯度降解人工真皮可以实现梯度降解，其中，未经交联处理的胶原基质膜，在体内以较快的速度降解，降解产物为创面的组织再生提供原材料、促进创面血管化；胶原基质膜降解后，原位保留的胶原基质颗粒均匀地分布在创面上，在新生真皮组织中持续发挥细胞微载体的功能，能够引导细胞有序长入，同时能够阻碍肌成纤维细胞对胶原纤维的牵拉，延缓创面挛缩。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种梯度降解人工真皮，所述梯度降解人工真皮包括胶原基质膜和嵌入在胶原基质膜上的胶原基质颗粒。
在本发明中，所述梯度降解人工真皮可以实现梯度降解，胶原基质膜在体内降解的时间为1-14天，胶原基质颗粒在体内的降解时间大于14天。
在本发明中，所述胶原基质膜和胶原基质颗粒的重量比为(2-8):(8-2)，例如可以是2:8、3:7、4:6、5:5、6:4、7:3、8:2等。
优选地，所述胶原基质膜中的胶原包括I型胶原、II型胶原或III型胶原中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述胶原基质颗粒中的胶原包括I型胶原、II型胶原或III型胶原中的任意一种或至少两种的组合。
在本发明中，所述胶原基质膜的厚度为1-3mm，例如可以是1mm、1.2mm、1.4mm、1.6mm、1.8mm、2mm、2.2mm、2.4mm、2.6mm、2.8mm、3mm等。
优选地，所述胶原基质膜的孔径为50-500μm，例如可以是50μm、100μm、150μm、200μm、250μm、300μm、350μm、400μm、450μm、500μm等；孔隙率≥80％，例如可以是80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、89.2％、89.4％、89.6％、89.9％、89.99％、90.0％、99.2％、99.5％、99.6％、99.9％等。
优选地，所述胶原基质颗粒的粒径为50-1000μm，例如可以是50μm、100μm、150μm、200μm、250μm、300μm、350μm、400μm、450μm、500μm、550μm、600μm、650μm、700μm、750μm、800μm、850μm、900μm、950μm、1000μm等。
优选地，所述胶原基质颗粒的孔径为50-500μm，例如可以是50μm、100μm、150μm、200μm、250μm、300μm、350μm、400μm、450μm、500μm等；孔隙率≥80％，例如可以是80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、89.2％、89.4％、89.6％、89.9％、89.99％、90.0％、99.2％、99.5％、99.6％、99.9％等。
本发明提供的梯度降解人工真皮的孔径为50-500μm，可以促进细胞长入，发挥真皮模板功能。
在本发明中，所述梯度降解人工真皮还包括添加剂，所述添加剂包括壳聚糖、硫酸软骨素、透明质酸或海藻酸钠中的任意一种或至少两种的组合。
在本发明中，所述添加剂可以改善所述梯度降解人工真皮的理化性质，并且可以促进梯度降解人工真皮表面孔径的形成。
优选地，所述添加剂和梯度降解人工真皮的重量比为(1-10):(101-110)，例如可以是1:101、2:102、3:103、4:104、5:105、6:106、7:107、8:108、9:109、10:110等。
在本发明中，所述胶原基质膜由胶原复合液固化得到，所述胶原复合液按重量百分含量计包括：胶原0.1-1％、任选的添加剂0-0.1％和酸溶液98.9-99.9％。
在本发明所述胶原复合液中，胶原的重量百分含量为0.1-1％，例如可以是0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％等。
在本发明所述胶原复合液中，添加剂的重量百分含量为0-0.1％，例如可以是0、0.0001％、0.0005％、0.0009％、0.001％、0.005％、0.008％、0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％等。
在本发明所述胶原复合液中，酸溶液的重量百分含量为98.9-99.9％，例如可以是98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％等。
优选地，所述胶原基质颗粒的制备原料按重量百分含量计包括：胶原0.1-1％、任选的添加剂0-0.1％、交联剂0.01-0.1％和酸溶液98.8-99.89％。
在本发明所述胶原基质颗粒的制备原料中，胶原的重量百分含量为0.1-1％，例如可以是0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％等。
在本发明所述胶原基颗粒的制备原料中，添加剂的重量百分含量为0-0.1％，例如可以是0、0.0001％、0.0005％、0.0009％、0.001％、0.005％、0.008％、0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％等。
在本发明所述胶原基质颗粒的制备原料中，交联剂的重量百分含量为0.01-0.1％，例如可以是0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％等。
在本发明所述胶原基质颗粒的制备原料中，酸溶液的重量百分含量为98.8-99.89％，例如可以是98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.89％等。
优选地，所述交联剂包括甲醛、戊二醛、京尼平或碳二亚胺中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述酸溶液包括醋酸水溶液。
优选地，所述酸溶液中酸的浓度为0.03-0.07mol/L，例如可以是0.03mol/L、0.035mol/L、0.04mol/L、0.045mol/L、0.05mol/L、0.055mol/L、0.06mol/L、0.065mol/L、0.07mol/L等。
第二方面，本发明提供一种根据第一方面所述的梯度降解人工真皮的制备方法，所述梯度降解人工真皮的制备方法包括以下步骤：通过冷冻后再进行高温处理的方法使胶原基质颗粒嵌入胶原基质膜中，得到所述梯度降解人工真皮。
在本发明中，所述梯度降解人工真皮的制备方法包括以下步骤：
(1)将胶原基质颗粒和胶原复合液混合，搅拌，得到悬浊液；
(2)将步骤(1)得到的悬浊液冷冻，得到冻干样品1；
(3)将步骤(2)得到的冻干样品1高温处理，得到所述梯度降解人工真皮。
在本发明中，步骤(2)先进行冷冻处理，步骤(3)再进行高温处理，使得胶原复合液固化成胶原基质膜，而胶原基质颗粒牢固地嵌入到胶原基质膜中，形成所述梯度降解人工真皮。
在本发明中，步骤(1)中，所述胶原复合液的制备方法包括以下步骤：将胶原和酸溶液混合搅拌，得到所述胶原复合液。
优选地，步骤(2)中，所述冷冻的温度为-80～-40℃，例如可以是-80℃、-75℃、-70℃、-65℃、-60℃、-55℃、-50℃、-45℃、-40℃等；冷冻的时间为1-3h，例如可以是1h、1.2h、1.4h、1.6h、1.8h、2h、2.2h、2.4h、2.6h、2.8h、3h等。
优选地，步骤(3)中，所述高温处理的温度为100-110℃，例如可以是100℃、101℃、102℃、103℃、104℃、105℃、106℃、107℃、108℃、109℃、110℃等；高温处理的时间为12-30h，例如可以是12h、13h、14h、15h、16h、17h、18h、19h、20h、21h、22h、23h、24h、25h、26h、27h、28h、29h、30h等。
优选地，步骤(3)中，所述高温处理在真空环境下进行，真空度≤1.3kPa，例如可以是0.1kPa、0.2kPa、0.3kPa、0.4kPa、0.5kPa、0.6kPa、0.7kPa、0.8kPa、0.9kPa、1.0kPa、1.1kPa、1.2kPa、1.3kPa等。
在本发明中，将步骤(2)得到的冻干样品1在真空环境下，进行高温处理，既可以实现脱水，使胶原基质颗粒更好地交联，使得胶原基质颗粒和胶原基质膜紧密结合；同时也可以实现病毒灭活，去除免疫因子。
在本发明中，所述胶原基质颗粒的制备方法包括以下步骤：
(a)将胶原、交联剂、任选的添加剂和酸溶液混合，搅拌，进行交联反应后，得到交联后的复合液；
(b)将步骤(a)得到的交联后的复合液冷冻、干燥，得到冻干样品2；
(c)将步骤(b)得到的冻干样品2清洗、冷冻，得到冻干样品3；
(d)将步骤(c)得到的冻干样品3粉碎，过筛，得到所述胶原基质颗粒。
优选地，步骤(b)中，所述冷冻的温度为-80～-40℃，例如可以是-80℃、-75℃、-70℃、-65℃、-60℃、-55℃、-50℃、-45℃、-40℃等；冷冻的时间为1-3h，例如可以是1h、1.2h、1.4h、1.6h、1.8h、2h、2.2h、2.4h、2.6h、2.8h、3h等。
优选地，步骤(b)中，所述干燥采取真空冷冻干燥。
优选地，步骤(c)中，所述清洗采用的溶剂包括水。
优选地，步骤(c)中，所述冷冻的温度为-80～-40℃，例如可以是-80℃、-75℃、-70℃、-65℃、-60℃、-55℃、-50℃、-45℃、-40℃等；冷冻的时间为1-3h，例如可以是1h、1.2h、1.4h、1.6h、1.8h、2h、2.2h、2.4h、2.6h、2.8h、3h等。
优选地，步骤(d)中，所述粉碎采用的机器包括球磨机、磨粉机或粉碎机中的任意一种。
优选地，步骤(d)中，所述过筛采用的筛目数为200-400目，例如可以是200目、220目、240目、260目、280目、300目、320目、340目、360目、380目、400目等。
第三方面，本发明提供一种根据第一方面所述的梯度降解人工真皮在制备创面修复产品中的应用。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明提供的梯度降解人工真皮可以实现梯度降解；其中，未经交联处理的胶原基质膜，在体内以较快的速度降解，降解产物为羟脯氨酸、羟赖氨酸等氨基酸成分，为创面的组织再生提供原材料、促进创面血管化；
(2)在本发明中，胶原基质膜降解后，原位保留的胶原基质颗粒均匀地分布在创面上，在新生真皮组织中持续发挥细胞微载体的功能，能够引导细胞有序长入，同时能够阻碍肌成纤维细胞对胶原纤维的牵拉，延缓创面挛缩。
附图说明
图1为实施例1中所述胶原基质颗粒50倍放大微观形貌图。
图2为实施例1中所述胶原基质颗粒200倍放大微观形貌图。
图3为实施例1所述梯度降解人工真皮表面30倍放大微观形貌图。
图4为实施例1所述梯度降解人工真皮侧面30倍放大微观形貌图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
以下实施例中各组分均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。
实施例1
本实施例提供一种梯度降解人工真皮，所述梯度降解人工真皮的制备方法包括以下步骤：
(1)取0.3g I型胶原、0.03g壳聚糖和99.67g 0.05mol/L醋酸溶液混合，搅拌，得到0.33wt％胶原-壳聚糖溶液；
(2)将步骤(1)得到的0.33wt％胶原-壳聚糖溶液和0.01g戊二醛，300rpm搅拌1h，得到交联后的复合液；
(3)将步骤(2)得到的交联后的复合液注至模具中，放入-60℃的超低温冰箱中冷冻2h，然后转移到真空冷冻干燥机中冷冻干燥，得到冻干样品2；
(4)将步骤(3)得到的冻干样品2用纯化水清洗，除去多余的交联剂；将清洗后的样品，放入-60℃的超低温冰箱中冷冻2h，然后转移到真空冷冻干燥机中冷冻干燥，得到冻干样品3；
(5)将步骤(4)得到的冻干样品3，通过磨粉机机械剪切粉碎成颗粒状，用300目筛过筛，得到所述胶原基质颗粒，备用；
(6)将0.4g I型胶原、0.04g壳聚糖和99.56g 0.05mol/L醋酸溶液混合，搅拌，得到0.44wt％胶原-壳聚糖溶液；
(7)取0.2g步骤(5)得到的胶原基质颗粒和步骤(6)得到的0.44wt％胶原-壳聚糖溶液混合，300rpm搅拌2h，得到悬浊液；
(8)将步骤(7)得到的悬浊液注至模具中，放入-60℃的超低温冰箱中冷冻2h，然后转移到真空冷冻干燥机中冷冻干燥，得到冻干样品1；
(9)将步骤(8)得到的冻干样品1放在真空干燥箱中，真空度为100Pa的真空下105℃高温处理24h，得到所述梯度降解人工真皮。
如图1和图2所示，机械剪切得到的胶原基质颗粒表面呈开孔结构，所述胶原基质颗粒的粒径在50-1000μm。
如图3所示，在所述梯度降解人工真皮中，胶原基质颗粒的孔结构与胶原基质膜的孔结构类似。
如图4所示，胶原基质颗粒嵌入在胶原基质膜中；其中，图4所示框线内为胶原基质颗粒。
实施例2
本实施例提供一种梯度降解人工真皮，所述梯度降解人工真皮的制备方法包括以下步骤：
(1)取0.3g I型胶原、0.03g硫酸软骨素和99.67g 0.05mol/L醋酸溶液混合，搅拌，得到0.33wt％胶原-硫酸软骨素溶液；
(2)将步骤(1)得到的0.33wt％胶原-硫酸软骨素溶液和0.015g戊二醛，310rpm搅拌1.2h，得到交联后的复合液；
(3)将步骤(2)得到的交联后的复合液注至模具中，放入-65℃的超低温冰箱中冷冻2.1h，然后转移到真空冷冻干燥机中冷冻干燥，得到冻干样品2；
(4)将步骤(3)得到的冻干样品2用纯化水清洗，除去多余的交联剂；将清洗后的样品，放入-65℃的超低温冰箱中冷冻2.1h，然后转移到真空冷冻干燥机中冷冻干燥，得到冻干样品3；
(5)将步骤(4)得到的冻干样品3，通过磨粉机机械剪切粉碎成颗粒状，用300目筛过筛，得到所述胶原基质颗粒，备用；
(6)将0.4g I型胶原、0.04g硫酸软骨素和99.56g 0.05mol/L醋酸溶液混合，搅拌，得到0.44wt％胶原-硫酸软骨素溶液；
(7)将0.22g步骤(5)得到的胶原基质颗粒和步骤(6)得到的0.44wt％胶原-硫酸软骨素溶液混合，310rpm搅拌2h，得到悬浊液；
(8)将步骤(7)得到的悬浊液注至模具中，放入-65℃的超低温冰箱中冷冻2.1h，然后转移到真空冷冻干燥机中冷冻干燥，得到冻干样品1；
(9)将步骤(8)得到的冻干样品1放在真空干燥箱中，真空度为200Pa的真空下108℃高温处理23h，得到所述梯度降解人工真皮。
实施例3
本实施例提供一种梯度降解人工真皮，所述梯度降解人工真皮的制备方法包括以下步骤：
(1)取0.4g I型胶原、0.04g透明质酸和99.56g 0.05mol/L醋酸溶液混合，搅拌，得到0.44wt％胶原-透明质酸溶液；
(2)将步骤(1)得到的0.44wt％胶原-透明质酸溶液和0.012g戊二醛，290rpm搅拌1.4h，得到交联后的复合液；
(3)将步骤(2)得到的交联后的复合液注至模具中，放入-55℃的超低温冰箱中冷冻2.2h，然后转移到真空冷冻干燥机中冷冻干燥，得到冻干样品2；
(4)将步骤(3)得到的冻干样品2用纯化水清洗，除去多余的交联剂；将清洗后的样品，放入-55℃的超低温冰箱中冷冻2.2h，然后转移到真空冷冻干燥机中冷冻干燥，得到冻干样品3；
(5)将步骤(4)得到的冻干样品3，通过磨粉机机械剪切粉碎成颗粒状，用300目筛过筛，得到所述胶原基质颗粒，备用；
(6)将0.5g I型胶原、0.05g硫酸软骨素和99.45g 0.05mol/L醋酸溶液混合，搅拌，得到0.55wt％胶原-硫酸软骨素溶液；
(7)将0.19g步骤(5)得到的胶原基质颗粒和步骤(6)得到的0.55wt％胶原-硫酸软骨素溶液混合，310rpm搅拌2h，得到悬浊液；
(8)将步骤(7)得到的悬浊液注至模具中，放入-55℃的超低温冰箱中冷冻2.2h，然后转移到真空冷冻干燥机中冷冻干燥，得到冻干样品1；
(9)将步骤(8)得到的冻干样品1放在真空干燥箱中，真空度为100Pa的真空下104℃高温处理23.5h，得到所述梯度降解人工真皮。
实施例4
本实施例提供一种梯度降解人工真皮，所述梯度降解人工真皮的制备方法包括以下步骤：
(1)取0.3g I型胶原和99.7g 0.05mol/L醋酸溶液混合，搅拌，得到0.3wt％胶原溶液；
(2)将步骤(1)得到的0.3wt％胶原溶液和0.01g戊二醛，300rpm搅拌1h，得到交联后的复合液；
(3)将步骤(2)得到的交联后的复合液注至模具中，放入-60℃的超低温冰箱中冷冻2h，然后转移到真空冷冻干燥机中冷冻干燥，得到冻干样品2；
(4)将步骤(3)得到的冻干样品2用纯化水清洗，除去多余的交联剂；将清洗后的样品，放入-60℃的超低温冰箱中冷冻2h，然后转移到真空冷冻干燥机中冷冻干燥，得到冻干样品3；
(5)将步骤(4)得到的冻干样品3，通过磨粉机机械剪切粉碎成颗粒状，用300目筛过筛，得到所述胶原基质颗粒，备用；
(6)将0.55g I型胶原和99.45g 0.05mol/L醋酸溶液混合，搅拌，得到0.55wt％胶原溶液；
(7)取0.2g步骤(5)得到的胶原基质颗粒和步骤(6)得到的0.55wt％胶原溶液混合，300rpm搅拌2h，得到悬浊液；
(8)将步骤(7)得到的悬浊液注至模具中，放入-60℃的超低温冰箱中冷冻2h，然后转移到真空冷冻干燥机中冷冻干燥，得到冻干样品1；
(9)将步骤(8)得到的冻干样品1放在真空干燥箱中，真空度为50Pa的真空下105℃高温处理24h，得到所述梯度降解人工真皮。
实施例5
本实施例提供一种梯度降解人工真皮，与实施例1的区别仅在于，步骤(7)中，所述胶原基质颗粒的重量为1g，其他步骤同实施例1。
实施例6
本实施例提供一种梯度降解人工真皮，与实施例1的区别仅在于，步骤(7)中，所述胶原基质颗粒的重量为0.05g，其他步骤同实施例1。
实施例7
本实施例提供一种梯度降解人工真皮，与实施例1的区别仅在于，不含有步骤(2)，其他步骤同实施例1。
对比例1
本对比例提供一种梯度降解人工真皮，所述梯度降解人工真皮的制备方法包括以下步骤：
(1)将0.6g I型胶原、0.06g壳聚糖和98.74g 0.05mol/L醋酸溶液混合，搅拌，得到0.66wt％胶原-壳聚糖溶液；
(2)将步骤(1)得到的0.66wt％胶原-壳聚糖溶液灌注至模具中，放入-60℃的超低温冰箱中冷冻2h，然后转移到真空冷冻干燥机中冷冻干燥，得到冻干样品；
(3)将步骤(2)得到的冻干样品放在真空干燥箱中，真空度为100Pa的真空下105℃高温处理24h，得到所述梯度降解人工真皮。
测试例1体外降解实验
测试样本：实施例1-7和对比例1提供的梯度降解人工真皮
测试方法：将每种测试样品制成边长5cm的正方形3片，进行体外降解实验。实验前将梯度降解人工真皮放在真空干燥器内干燥至恒重，记为W初始，将试验样品放置于含3.5U/mL胶原酶溶液中，37℃摇床50rpm振摇。分别于1h、2h、4h、8h、24h各取3个样，清洗后干燥至恒重，记为W实验，计算降解率，公式为：体外降解率＝(W初始-W实验)/W初始×100％。体外降解率取平均值，以平均值±标准差表示，实验结果如表1所示：
表1
Figure BDA0003345861810000131
Figure BDA0003345861810000141
由表1数据可知，本发明(实施例1-7)提供的梯度降解人工真皮，体外降解24h后，胶原基质膜已经全部降解完全，胶原基质颗粒未发生明显降解。实施例7由于胶原基质颗粒未发生交联，24h后已基本降解；对比例1同样在24h内基本降解。
本发明提供的梯度降解人工真皮在体外可以实现梯度降解，未经交联处理的胶原基质膜，以较快的速度降解；经交联处理的胶原基质颗粒的降解速度较慢。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种梯度降解人工真皮及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (27)

1.一种梯度降解人工真皮，其特征在于，所述梯度降解人工真皮包括胶原基质膜和嵌入在胶原基质膜上的胶原基质颗粒；
所述胶原基质颗粒为经过交联的胶原基质颗粒；
所述胶原基质膜的孔径为50-500 μm，孔隙率≥80%；
所述胶原基质颗粒的孔径为50-500 μm，孔隙率≥80%。
2.根据权利要求1所述的梯度降解人工真皮，其特征在于，所述胶原基质膜和胶原基质颗粒的重量比为(2-8):(8-2)。
3.根据权利要求1所述的梯度降解人工真皮，其特征在于，所述胶原基质膜中的胶原包括I型胶原、II型胶原或III型胶原中的任意一种或至少两种的组合。
4.根据权利要求1所述的梯度降解人工真皮，其特征在于，所述胶原基质颗粒中的胶原包括I型胶原、II型胶原或III型胶原中的任意一种或至少两种的组合。
5.根据权利要求1所述的梯度降解人工真皮，其特征在于，所述胶原基质膜的厚度为1-3 mm。
6.根据权利要求1所述的梯度降解人工真皮，其特征在于，所述胶原基质颗粒的粒径为50-1000 μm。
7.根据权利要求1所述的梯度降解人工真皮，其特征在于，所述梯度降解人工真皮还包括添加剂，所述添加剂包括壳聚糖、硫酸软骨素、透明质酸或海藻酸钠中的任意一种或至少两种的组合。
8.根据权利要求7所述的梯度降解人工真皮，其特征在于，所述添加剂和梯度降解人工真皮的重量比为(1-10):(101-110)。
9.根据权利要求1所述的梯度降解人工真皮，其特征在于，所述胶原基质膜由胶原复合液固化得到，所述胶原复合液按重量百分含量计包括：胶原0.1-1%、任选的添加剂0-0.1%和酸溶液98.9-99.9%。
10.根据权利要求1所述的梯度降解人工真皮，其特征在于，所述胶原基质颗粒的制备原料按重量百分含量计包括：胶原0.1-1%、任选的添加剂0-0.1%、交联剂0.01-0.1%和酸溶液98.8-99.89%。
11.根据权利要求10所述的梯度降解人工真皮，其特征在于，所述交联剂包括甲醛、戊二醛、京尼平或碳二亚胺中的任意一种或至少两种的组合。
12.根据权利要求10所述的梯度降解人工真皮，其特征在于，所述酸溶液包括醋酸水溶液。
13.根据权利要求10所述的梯度降解人工真皮，其特征在于，所述酸溶液中酸的浓度为0.03-0.07 mol/L。
14.一种根据权利要求1-13中任一项所述的梯度降解人工真皮的制备方法，其特征在于，所述梯度降解人工真皮的制备方法包括以下步骤：通过冷冻后再进行高温处理的方法使胶原基质颗粒嵌入胶原基质膜中，得到所述梯度降解人工真皮。
15.根据权利要求14所述的梯度降解人工真皮的制备方法，其特征在于，所述梯度降解人工真皮的制备方法包括以下步骤：
（1）将胶原基质颗粒和胶原复合液混合，搅拌，得到悬浊液；
（2）将步骤（1）得到的悬浊液冷冻，得到冻干样品1；
（3）将步骤（2）得到的冻干样品1高温处理，得到所述梯度降解人工真皮。
16.根据权利要求15所述的梯度降解人工真皮的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述胶原复合液的制备方法包括以下步骤：将胶原和酸溶液混合搅拌，得到所述胶原复合液。
17.根据权利要求15所述的梯度降解人工真皮的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述冷冻的温度为-80~-40℃，冷冻的时间为1-3 h。
18.根据权利要求15所述的梯度降解人工真皮的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述高温处理的温度为100-110℃，高温处理的时间为12-30 h。
19.根据权利要求15所述的梯度降解人工真皮的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述高温处理在真空环境下进行，真空度≤1.3 kPa。
20.根据权利要求14所述的梯度降解人工真皮的制备方法，其特征在于，所述胶原基质颗粒的制备方法包括以下步骤：
（a）将胶原、交联剂、任选的添加剂和酸溶液混合，搅拌，进行交联反应后，得到交联后的复合液；
（b）将步骤（a）得到的交联后的复合液冷冻、干燥，得到冻干样品2；
（c）将步骤（b）得到的冻干样品2清洗、冷冻，得到冻干样品3；
（d）将步骤（c）得到的冻干样品3粉碎，过筛，得到所述胶原基质颗粒。
21.根据权利要求20所述的梯度降解人工真皮的制备方法，其特征在于，步骤（b）中，所述冷冻的温度为-80~-40℃，冷冻的时间为1-3 h。
22.根据权利要求20所述的梯度降解人工真皮的制备方法，其特征在于，步骤（b）中，所述干燥采取真空冷冻干燥。
23.根据权利要求20所述的梯度降解人工真皮的制备方法，其特征在于，步骤（c）中，所述清洗采用的溶剂包括水。
24.根据权利要求20所述的梯度降解人工真皮的制备方法，其特征在于，步骤（c）中，所述冷冻的温度为-80~-40℃，冷冻的时间为1-3 h。
25.根据权利要求20所述的梯度降解人工真皮的制备方法，其特征在于，步骤（d）中，所述粉碎采用的机器包括球磨机、磨粉机或粉碎机中的任意一种。
26.根据权利要求20所述的梯度降解人工真皮的制备方法，其特征在于，步骤（d）中，所述过筛采用的筛目数为200-400目。
27.一种根据权利要求1-13中任一项所述的梯度降解人工真皮在制备创面修复产品中的应用。
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