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Abstract

本发明属于临床医学技术领域，具体涉及一种富血小板血浆的制备方法。其包括以下步骤：S1、将外周静脉血放入含抗凝剂的分离胶采血管，混匀；S2、进行第一次离心，以300g离心力离心9‑11min；S3、进行第二次离心，以1200g离心力离心9‑11min，离心后血浆分为三层：最下层即分离胶下面为红细胞，最上层为血清(贫血小板血浆)，两层之间即贫血小板血浆与分离胶之间(浑浊色)的便为富血小板血浆层；抽取废弃掉离心管上层的血清，抽取分离胶上层的富血小板血浆，即得成品。采用本发明的方法获得了含高倍数血小板的PRP，用于注射退行性膝关节病及二期以内的股骨头坏死患者，治疗效果好。

Description

一种富血小板血浆的制备方法
技术领域
本发明属于临床医学技术领域，具体涉及一种富血小板血浆的制备方法。
背景技术
富血小板血浆(PRP)是通过离心的方法从全血中提取出来的血小板浓缩液，含高浓度的血小板(血小板激活后释放30多种生长因子)、白细胞和纤维蛋白。
PRP经活化后(注射体内不需要激活)释放出含有多种高浓度的生长因子，如如血小板源性生长因子、转化因子β、胰岛素样生长因子、血管内皮生长因子、表皮生长因子等等30余种生长因子的调控，这些生长因子可以加速间充质干细胞的分化，促进成骨细胞和成纤维细胞的增值，加快纤维蛋白与细胞外基质的合成。PRP经凝血酶激活之后(凝血酶冻干粉，如果没有可以用CaCl、葡萄糖酸钙代替)，释放出含有多种高浓度的生长因子并且血浆中的纤维蛋白单体会聚合成纤维蛋白多聚体，形成网状三维结构。这种纤维蛋白立体结构有助于封堵破损的血管壁，收缩血管破口，防止受损组织进一步出血。其相当于一种生物支架，可以网罗细胞和血小板，有利于周围修复干细胞的爬行和附着。PRP还具有抗炎、抑菌作用。
由于PRP具有上述多种用途，关于富血小板血浆研究也成为热门。如何获得含更高体积分数血小板的PRP成为本领域技术人员要解决的技术问题，现有技术一次离心10分钟后静置15分钟，测试血小板浓度倍数不佳；同时不同离心机用同样的离心力也会造成离心后血小板浓度倍数不佳。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种富血小板血浆的制备方法。
本发明的一种富血小板血浆的制备方法，包括如下步骤：
S1、将外周静脉血放入含抗凝剂的分离胶采血管，混匀；
S2、进行第一次离心，以300g离心力离心9-11min；
S3、进行第二次离心，以1200g离心力离心9-11min，离心后血浆分为三层：最下层即分离胶下面为红细胞，最上层为血清(贫血小板血浆)，两层之间即贫血小板血浆与分离胶之间的便为富血小板血浆层；抽取废弃掉离心管上层的血清，抽取分离胶上层的富血小板血浆，即得成品。
进一步的，所述抗凝剂为枸橼酸钠。
更进一步的，所述外周静脉血与枸橼酸钠的体积质量比为7-9ml：1mg。
更进一步的，第一次离心前将分离胶采血管上下颠倒8～10次。
更进一步的，离心所用离心机型号为迈克尔TD5B。
更进一步的，所述离心机为8孔(内外径各4孔)、外径半径9cm、内径半径5cm，落地放置重量50kg(因使用相同的离心力，故内外半径数据不受影响)。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明在现有技术的基础上将离心改进为进行二次离心，并在离心力及时间上多次试验测试后，采取本方法得到了高倍数的血小板。离心出的血小板(PRP)用于注射退行性膝关节病及二期以内的股骨头坏死患者，治疗效果好，避免了患者置换人工关节，还可用于肩关节炎、面部祛皱、椎间盘病变等疾病。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明，但不应理解为本发明的限制。如未特殊说明，下述实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1：一种富血小板血浆的制备方法
S1、将8ml外周静脉血放入含1mg枸橼酸钠(抗凝剂)的分离胶采血管；将分离胶采血管上下颠倒8次；
S2、进行第一次离心，以300g离心10min；离心所用离心机型号为迈克尔TD5B，离心机为8孔(内外径各4孔)、外径半径9cm、内径半径5cm，落地放置重量50kg(因使用相同的离心力，故内外半径数据不受影响)；
S3、进行第二次离心，以1200g离心10min，离心后血浆分为三层：下层为红细胞(红色)，上层为血清(贫血小板血浆)，抽取废弃掉离心管上层的血清，抽取分离胶上层的富血小板血浆，即得成品。
对比例1：一种富血小板血浆的制备方法
S1、将8ml外周静脉血放入含1mg枸橼酸钠(抗凝剂)的分离胶采血管；
S2、以2100g离心10min，离心机同实施例1；离心后血浆分为三层：最下层即分离胶下面为红细胞，最上层为血清，两层之间即贫血小板血浆与分离胶之间的便为富血小板血浆层；抽取废弃掉离心管上层的血清，抽取分离胶上层的富血小板血浆，即得成品。
对比例2：一种富血小板血浆的制备方法
S1、将8ml外周静脉血放入含1mg枸橼酸钠(抗凝剂)的分离胶采血管；
S2、进行第一次离心，以700g离心10min；离心机同实施例1；
S3、进行第二次离心，以1100g离心10min，离心后血浆分为三层：下层为红细胞，上层为贫血小板血浆，两层之间便为富血小板血浆层；抽取废弃掉离心管上层的血清，抽取分离胶上层的富血小板血浆，即得成品。
对比例3：一种富血小板血浆的制备方法
S1、将8ml外周静脉血放入含1mg枸橼酸钠(抗凝剂)的分离胶采血管；将枸橼酸钠/分离胶采血管180度上下颠倒8次；
S2、进行第一次离心，以700g离心10min；离心机同实施例1；
S3、进行第二次离心，以1100g离心10min，离心后血浆分为三层：下层为红细胞，上层为贫血小板血浆，两层之间便为富血小板血浆层；抽取废弃掉离心管上层的血清，抽取分离胶上层的富血小板血浆，即得成品。
对比例4：一种富血小板血浆的制备方法
S1、将8ml外周静脉血放入含1mg枸橼酸钠(抗凝剂)的分离胶采血管；将枸橼酸钠/分离胶采血管上下颠倒8次；
S2、进行第一次离心，以500g离心10min；离心机同实施例1；
S3、进行第二次离心，以1200g离心10min，离心后血浆分为三层：下层为红细胞，上层为贫血小板血浆，两层之间便为富血小板血浆层；抽取废弃掉离心管上层的血清，抽取分离胶上层的富血小板血浆，即得成品。
在研究过程中对全血运用多实施例1及对比例1-4制作的PRP中血小板计数、血小板倍数以及股骨头坏死患者PRP治疗后疼痛评分(VAS)进行比较，结果如表1所示。
表1不同方法效果比较
Figure BDA0003369527400000051
综上所述，本发明提供的方法大大提高了PRP中血小板数量及血小板增加倍数，避免了血小板流失而造成的浪费，且增强了股骨头坏死患者的治疗效果，患者疼痛明显缓解。
需要说明的是，本发明权利要求书中涉及数值范围时，应理解为每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用，为了防止赘述，本发明描述了优选的实施例。
尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (6)

1.一种富血小板血浆的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将外周静脉血放入含抗凝剂的分离胶采血管，混匀；
S2、进行第一次离心，以300g离心力离心9-11min；
S3、进行第二次离心，以1200g离心力离心9-11min，离心后血浆分为三层：最下层即分离胶下面为红细胞，最上层为血清，两层之间即贫血小板血浆与分离胶之间的便为富血小板血浆层；抽取废弃掉离心管上层的血清，抽取分离胶上层的富血小板血浆，即得成品。
2.根据权利要求1所述的一种富血小板血浆的制备方法，其特征在于，所述抗凝剂为枸橼酸钠。
3.根据权利要求2所述的一种富血小板血浆的制备方法，其特征在于，所述外周静脉血与枸橼酸钠的体积质量比为7-9ml：1mg。
4.根据权利要求3所述的一种富血小板血浆的制备方法，其特征在于，第一次离心前将分离胶采血管上下颠倒8～10次。
5.根据权利要求4所述的一种富血小板血浆的制备方法，其特征在于，离心所用离心机型号为迈克尔TD5B。
6.根据权利要求5所述的一种富血小板血浆的制备方法，其特征在于，所述离心机为8孔，内外径各4孔，外径半径9cm，内径半径5cm。
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