CN113956997A - 一种醋酸杆菌破碎及其提取物的生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种醋酸杆菌破碎及其提取物的生产方法，其步骤包括：1）菌种划线培养；2)三角瓶液体菌种培养；3)三角瓶液体菌种传代培养；4)液体发酵罐培养；5）发酵液离心；6）菌泥破碎；7）真空冷冻干燥；8）冻干提取物收集，粉碎，包装。本发明方法生产的醋酸杆菌提取物中水溶性纤维素的含量大于5mg/g的冻干粉。
Description
技术领域
本发明公开一种醋酸杆菌破碎及其提取物的生产方法，应用于食品生物技术领域。
背景技术
醋酸杆菌是一类能使糖类和酒精氧化成醋酸等产物的短杆菌。细胞椭圆或短杆，0.8～1.2μm×1.5～2.5μm，单生、成对偶尔成短链；细胞端尖或平。革兰氏阳性。运动，亚极生的单鞭毛或两根鞭毛。不产芽孢。极端严格好氧，化能无机营养，氧化氢、还原CO2生成乙酸。也可营化能有机营养，发酵果糖和其他底物几乎只产生乙酸。乙酸是代谢的有机终产物。不产生接触酶。最适生长温度30℃。广泛分布于水生环境中。醋酸杆菌常存在于醋和醋的食品中。工业上可以利用醋酸杆菌酿醋、制作醋酸和葡萄糖酸等。
细胞骨架(Cytoskeleton)是指广泛存在于真核细胞内的蛋白纤维网架体系，包括细胞核骨架、细胞膜骨架和细胞质骨架。一般认为,由 微 管(Microtubule)、微丝(Microfilament)和中间丝(Intermediate filament)这 3 类蛋白构成狭义上的细胞骨架, 即细胞质骨架。细胞骨架不仅在维持细胞形态及内部稳态中发挥重要作用，而且与细胞的胞质运动、物质运输、能量转换、信息传递、基因表达、分裂和分化等生命必须活动密切相关。长期以来,人们认为细胞骨架为真核生物所特有的结构，但近年研究发现它也存在于细菌等原核生物中。到目前为止,人们已经在细菌中发现了多种类型的骨架蛋白,它们均在胞质内发挥类似真核生物骨架蛋白的功能,且大部分与之在结构上具有一定的相似性。
随着人们对细菌骨架的研究的深入，已广泛应用于食品、医药、等各个领域，现己成为国际的研究热点。醋酸杆菌的细胞骨架一般由50%的醋酸纤维和一些类似胶原的糖蛋白组成，相关研究表明，醋酸纤维对人体具有许多独特的功能，如增强消化功能，预防便秘，降低胆固醇，吸附与清除食物中有毒物质，优化消化系统内的环境，起到抗衰老作用。
因此，在技术上寻求新的突破口，筛选出具有优良性能的醋酸杆菌菌株，提高醋酸杆菌的活力，增加醋酸杆菌的高密度培养活菌数，再通过离心、破碎、冻干、收集等工艺，加强对醋酸杆菌破碎提取物的研究，在基础理论和生产技术等方面为醋酸杆菌破碎提取物醋酸纤维的高产量的开发提供支持。
发明内容
本发明的目的是公开一种醋酸杆菌破碎及其提取物的生产方法，通过高密度培养使醋酸杆菌在发酵罐中大量增殖，离心后再采用超声波方法对菌泥进行破碎收集，加入赋形剂后进行真空冷冻干燥，获得醋酸杆菌提取物中水溶性纤维素含量大于5mg/g的冻干粉。
本发明采用的技术方案为：
一种醋酸杆菌破碎及其提取物的生产方法，包括如下步骤：
1) 菌种划线培养:醋酸杆菌菌粉用无菌水稀释后，于醋酸杆菌固体培养基上分区划线，划线结束后平皿倒置，32～37℃培养箱恒温培养48～72小时；
2) 三角瓶液体菌种培养:挑取平皿上透明圈较大的单菌落接种至装有醋酸杆菌液体培养基的三角瓶中, 培养基装液体积占三角瓶容积的40%～50% ,三角瓶用耐高温透气膜密封, 32～37℃，140～180rpm摇床培养32～48小时；
3) 三角瓶液体菌种传代培养:按3～5%接种量，将步骤2培养好的三角瓶菌种接种至装有醋酸杆菌液体培养基的三角瓶中 ,培养基装液体积占三角瓶容积的40%～50%，三角瓶用耐高温透气膜密封，32～37℃，140～180rpm摇床培养32～48小时；
4）重复步骤3操作2次，将醋酸杆菌三角瓶液体菌种传代至第4代；
5) 液体发酵罐培养：将传至第4代的醋酸杆菌三角瓶液体菌种按照10～15%接种量，接入装有醋酸杆菌发酵培养基的液体发酵罐中，培养基装液体积占发酵罐容积的40%～50%，32～37℃，100～120rpm通氧气搅拌，培养24～32小时；
6）发酵液离心：以 6000 ～ 13000rpm 条件下进行以管式或碟片式离心机分离菌体，并以无菌水洗涤 1 ～ 2 次，得到菌泥；
7）菌泥破碎：根据收集菌泥的重量配制磷酸盐缓冲液，跟菌泥充分混合后超声破碎，再根据破碎后菌泥重量，加入保护剂；
8）真空冷冻干燥：按照步骤7完成后的菌泥重量，按比例加入赋形剂，充分混匀后装盘送入真空冷冻干燥机冷冻干燥；
9）冻干提取物收集，粉碎，包装。
所述醋酸杆菌固体培养基的重量百分比组成为：葡萄糖0.3～1.0％，酵母浸粉0.5～1.0%，无水乙醇1.0～2.0%，琼脂2.5%，碳酸钙1.0～1.5%，余量为无菌水，按照配方比例称量除无水乙醇外的组分充分溶解，再用1mol/L食品级氢氧化钠溶液调节培养基pH值至6.4～6.6，115℃，30min下灭菌，冷却至30～40℃左右在无菌环境下加入组分中的无水乙醇。
所述醋酸杆菌三角瓶液体培养基的重量百分比组成为：葡萄糖0.8～1.2％，酵母浸粉0.8～1.5%，无水乙醇1.0～3.0%，硫酸镁0.02～0.06%，磷酸二氢钾0.2～0.6%，余量为无菌水，按照配方比例称量除无水乙醇外的组分充分溶解，再用1mol/L食品级氢氧化钠溶液调节培养基pH值至6.4～6.6，115℃，30min下灭菌，冷却至30～40℃左右在无菌环境下加入组分中的无水乙醇。
所述醋酸杆菌发酵培养基的重量百分比组成为：葡萄糖1.0～2.0％，酵母浸粉1.0～2.0%，无水乙醇2.0～5.0%，硫酸镁0.04～0.08%，磷酸二氢钾0.2～0.6%，余量为无菌水，按照配方比例称量除无水乙醇外的组分充分溶解，再用1mol/L食品级氢氧化钠溶液调节培养基pH值至6.4～6.6，115℃，30min下灭菌，冷却至30～40℃左右通过发酵罐补料系统加入组分中的无水乙醇，接入三角瓶液体菌种后，待发酵液pH值下降0.5，再通过补加食品级氢氧化钠溶液调节维持培养基pH值为6.2±0.1。
所述液体发酵罐培养，当OD600 值停止增长或呈负增长，镜检醋酸杆菌形态正常，无杂菌，终止发酵。
所述菌泥破碎前加入的磷酸盐缓冲液组分为，按照每克菌泥加入100ml pH6.5的0.06M 磷酸盐缓冲液，重悬菌体；采用超声波破碎的方法，其功率为300～350W，利用超声10秒间歇10秒，循环120～150次的方式破碎菌体。
所述的保护剂，是按照破碎后菌泥的重量1:1加入0.1～0.3mM硫酸铁或4～6mM硫酸镁，两者充分混匀。
所述磷酸盐缓冲液和保护剂需灭菌处理，灭菌方式为在115℃条件下灭菌30分钟后冷却至 5 ～ 20℃备用。
所述的真空冷冻干燥赋形剂为玉米粉、玉米低聚肽、麦芽糊精或玉米糊精的一种或几种，其重量为破碎后加入保护剂菌泥重量的10 ～ 20％。
所述的真空冷冻干燥工艺，其特征在于干燥条件为 ：在 -55 ～ -45℃预冻4 ～8 小时后真空冷冻干燥，冷冻干燥温度为 -35℃，真空度为 0.5 ～ 1.5pa，真空冷冻干燥40 ～ 60小时；收集冻干提取物，粉碎、包装，干燥后得到醋酸杆菌提取物中醋酸纤维的含量大于10mg/g的冻干粉。
所述的菌种划线培养、三角瓶液体菌种制备、发酵液离心和菌泥破碎赋形的操作环境条件要求为在温度低于 25 ℃、湿度 RH＜ 35％的10万级净化环境中进行。
所述的醋酸杆菌为AS1.41醋酸杆菌、沪酿1.01醋酸杆菌、奥尔兰醋酸杆菌、许氏醋酸杆菌、纹膜醋酸杆菌的一种或几种。
与现有技术相比 ,本发明具有以下突出的优点:
1、本发明为实现醋酸杆菌的增殖培养、富集高活菌数的菌体用于生产作为食品添加剂的冻和干粉的目的，针对醋酸杆菌纯化培养和菌种发酵分别采用了不同的更适于菌体不同生长阶段的基础培养基和优化培养基，并且培养基采用的组分原料均为食品级。
2、在本发明中，在醋酸杆菌三角瓶培养阶段通过多次传代培养增强醋酸杆菌的活力，减少醋酸杆菌在发酵罐培养中的适应期时间，让其在短时间能进入对数生长期增殖，提高生产能力，降低生产成本。
3、通过流加食品级氢氧化钠溶液来控制发酵过程中pH值恒定,在短时间里得到大量的菌体,并且菌种稳定,变异、退化少。
4、本发明采用管式离心机或碟式离心机分离收集嗜酸乳杆菌菌泥，管式离心机菌泥收率可达到2.0%以上，菌泥活菌数高达1010cfu/g以上，并且管式离心机的转鼓可用蒸汽灭菌或者干热灭菌，有效地防止了在离心过程中染菌。但管式离心机由于其内部管径大小受限，如果对大型液体发酵罐进行离心，需要多台管式离心机一起工作，操作人员和设备投入成本较高；而碟式离心机其分离能力远超管式离心机，可实现定时排渣，而且不用像管式离心机一样转鼓菌泥满了后要拆卸取菌泥，但碟式离心机成本较管式离心机高。两种分离设备各有优缺点，可以根据实际情况灵活选择离心方式。
具体实施方式
以下结合具体实施例，进一步阐明本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明保护的范围，本发明保护的范围以本发明申请的权利要求书说阐述的为准。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。比例和百分比基于重量单位，除非特别说明。
实施例 1 ：
本实施例采用AS1.41醋酸杆菌菌种
一、发酵菌种的制备
1) 菌种划线培养: AS1.41醋酸杆菌菌粉用无菌水稀释后，于醋酸杆菌固体培养基上分区划线，划线结束后平皿倒置，32℃培养箱恒温培养60小时；
2) 三角瓶液体菌种培养:挑取平皿上透明圈较大的单菌落接种至装有醋酸杆菌液体培养基的三角瓶中, 培养基装液体积占三角瓶容积的50% ,三角瓶用耐高温透气膜密封, 32℃，160rpm摇床培养36小时；
3) 三角瓶液体菌种传代培养:按3～5%接种量，将步骤2培养好的三角瓶菌种接种至装有醋酸杆菌液体培养基的三角瓶中 ,培养基装液体积占三角瓶容积的50%，三角瓶用耐高温透气膜密封，32℃，160rpm摇床培养32小时；
4）重复步骤3操作2次，将醋酸杆菌三角瓶液体菌种传代至第4代；
醋酸杆菌固体培养基的重量百分比组成为：葡萄糖0.5％，酵母浸粉0.5%，无水乙醇1.0%，琼脂2.5%，碳酸钙1.5%，余量为无菌水，按照配方比例称量除无水乙醇外的组分充分溶解，再用1mol/L食品级氢氧化钠溶液调节培养基pH值至6.4，115℃，30min下灭菌，冷却至35℃在无菌环境下加入组分中的无水乙醇。
醋酸杆菌三角瓶液体培养基的重量百分比组成为：葡萄糖0.8％，酵母浸粉0.8%，无水乙醇2.0%，硫酸镁0.04%，磷酸二氢钾0.35%，余量为无菌水，按照配方比例称量除无水乙醇外的组分充分溶解，再用1mol/L食品级氢氧化钠溶液调节培养基pH值至6.4，115℃，30min下灭菌，冷却至35℃左右在无菌环境下加入无水乙醇。
二、菌种发酵罐培养
5) 液体发酵罐培养：将传至第4代的醋酸杆菌三角瓶液体菌种按照12%接种量，接入装有醋酸杆菌发酵培养基的液体发酵罐中，培养基装液体积占发酵罐容积的50%，34℃，100rpm通氧气搅拌，培养28小时；
醋酸杆菌发酵培养基的重量百分比组成为：葡萄糖1.0％，酵母浸粉1.0%，无水乙醇4.0%，硫酸镁0.06%，磷酸二氢钾0.45%，余量为无菌水，按照配方比例称量除无水乙醇外的组分充分溶解，再用1mol/L食品级氢氧化钠溶液调节培养基pH值至6.4，115℃，30min下灭菌，冷却至35℃左右通过发酵罐补料系统加入无水乙醇，接入三角瓶液体菌种后，待发酵液pH值下降0.5，再通过补加食品级氢氧化钠溶液调节维持培养基pH值为6.2±0.1。当OD600值停止增长或呈负增长，镜检醋酸杆菌形态正常，无杂菌，终止发酵。
三、发酵液离心、破碎及提取物收集
6）发酵液离心：以 6500rpm 条件下用碟片式离心机分离菌体，并以无菌水洗涤2次，得到菌泥；
7）菌泥破碎：按照每克菌泥加入100ml pH6.5的0.06M 磷酸盐缓冲液，重悬菌体，跟菌泥充分混合后采用超声波破碎的方法，其功率为300W，利用超声10秒间歇10秒，循环120次的方式破碎菌体；再根据破碎后菌泥重量1:1加入4mM硫酸镁保护剂，两者充分混匀；
8）真空冷冻干燥：按照步骤7完成后的菌泥重量，按20%比例加入麦芽糊精，充分混匀后装盘在 -55℃预冻4小时后真空冷冻干燥，冷冻干燥温度为 -35℃，真空度为 0.5 pa，真空冷冻干燥 40 小时；
9）提取物收集：收集冻干提取物、粉碎、包装，干燥后得到醋酸杆菌提取物中醋酸纤维的含量为6mg/g的冻干粉。
步骤7的磷酸盐缓冲液和保护剂需灭菌处理，灭菌方式为在115℃条件下灭菌30分钟后冷却至10℃备用。
步骤1～4、6～7操作环境条件要求为在温度低于 25 ℃、湿度 RH＜35％的10万级净化环境中进行。
实施例 2 ：
本实施例采用沪酿1.01醋酸杆菌菌种
一、发酵菌种的制备
1) 菌种划线培养: AS1.41醋酸杆菌菌粉用无菌水稀释后，于醋酸杆菌固体培养基上分区划线，划线结束后平皿倒置，34℃培养箱恒温培养50小时；
2) 三角瓶液体菌种培养:挑取平皿上透明圈较大的单菌落接种至装有醋酸杆菌液体培养基的三角瓶中, 培养基装液体积占三角瓶容积的50% ,三角瓶用耐高温透气膜密封, 34℃，140rpm摇床培养36小时；
3) 三角瓶液体菌种传代培养:按5%接种量，将步骤2培养好的三角瓶菌种接种至装有醋酸杆菌液体培养基的三角瓶中 ,培养基装液体积占三角瓶容积的50%，三角瓶用耐高温透气膜密封，34℃，140rpm摇床培养32小时；
4）重复步骤3操作2次，将醋酸杆菌三角瓶液体菌种传代至第4代；
醋酸杆菌固体培养基的重量百分比组成为：葡萄糖0.3％，酵母浸粉0.5%，无水乙醇1.5%，琼脂2.5%，碳酸钙2.0%，余量为无菌水，按照配方比例称量除无水乙醇外的组分充分溶解，再用1mol/L食品级氢氧化钠溶液调节培养基pH值至6.5，115℃，30min下灭菌，冷却至35℃在无菌环境下加入组分中的无水乙醇。
醋酸杆菌三角瓶液体培养基的重量百分比组成为：葡萄糖1.0％，酵母浸粉0.8%，无水乙醇2.0%，硫酸镁0.03%，磷酸二氢钾0.45%，余量为无菌水，按照配方比例称量除无水乙醇外的组分充分溶解，再用1mol/L食品级氢氧化钠溶液调节培养基pH值至6.5，115℃，30min下灭菌，冷却至35℃左右在无菌环境下加入无水乙醇。
二、菌种发酵罐培养
5) 液体发酵罐培养：将传至第4代的醋酸杆菌三角瓶液体菌种按照15%接种量，接入装有醋酸杆菌发酵培养基的液体发酵罐中，培养基装液体积占发酵罐容积的50%，34℃，120rpm通氧气搅拌，培养26小时；
醋酸杆菌发酵培养基的重量百分比组成为：葡萄糖1.5％，酵母浸粉1.5%，无水乙醇4.5%，硫酸镁0.08%，磷酸二氢钾0.55%，余量为无菌水，按照配方比例称量除无水乙醇外的组分充分溶解，再用1mol/L食品级氢氧化钠溶液调节培养基pH值至6.4，115℃，30min下灭菌，冷却至35℃左右通过发酵罐补料系统加入无水乙醇，接入三角瓶液体菌种后，待发酵液pH值下降0.5，再通过补加食品级氢氧化钠溶液调节维持培养基pH值为6.2±0.1。当OD600值停止增长或呈负增长，镜检醋酸杆菌形态正常，无杂菌，终止发酵。
三、发酵液离心、破碎及提取物收集
6）发酵液离心：以 13000rpm 条件下用管式离心机分离菌体，并以无菌水洗涤1次，得到菌泥；
7）菌泥破碎：按照每克菌泥加入100ml pH6.5的0.06M 磷酸盐缓冲液，重悬菌体，跟菌泥充分混合后采用超声波破碎的方法，其功率为350W，利用超声10秒间歇10秒，循环120次的方式破碎菌体；再根据破碎后菌泥重量1:1加入4mM硫酸镁保护剂，两者充分混匀；
8）真空冷冻干燥：按照步骤7完成后的菌泥重量，按20%比例加入麦芽糊精，充分混匀后装盘在 -45℃预冻8小时后真空冷冻干燥，冷冻干燥温度为 -35℃，真空度为 1.5 pa，真空冷冻干燥 60 小时；
9）提取物收集：收集冻干提取物、粉碎、包装，干燥后得到醋酸杆菌提取物中醋酸纤维的含量为6.5mg/g的冻干粉。
步骤7的磷酸盐缓冲液和保护剂需灭菌处理，灭菌方式为在115℃条件下灭菌30分钟后冷却至10℃备用。
步骤1～4、6～7操作环境条件要求为在温度低于 25 ℃、湿度 RH＜35％的10万级净化环境中进行。
本发明要求保护的范围不受所述具体实施方案的限制，本发明提供的具体实施例仅作为进一步说明本发明的例子，本领域技术人员参照本案说明书的描述可以很容易对本发明作出多种改进及组份的替换，这些无需创造性劳动的改进和替换也应落入本发明所附权利要求书的保护范围之内。
Claims (12)
1.一种醋酸杆菌破碎及其提取物的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：
1) 菌种划线培养:醋酸杆菌菌粉用无菌水稀释后，于醋酸杆菌固体培养基上分区划线，划线结束后平皿倒置，32～37℃培养箱恒温培养48～72小时；
2) 三角瓶液体菌种培养:挑取平皿上透明圈较大的单菌落接种至装有醋酸杆菌液体培养基的三角瓶中, 培养基装液体积占三角瓶容积的40%～50% ,三角瓶用耐高温透气膜密封, 32～37℃，140～180rpm摇床培养32～48小时；
3) 三角瓶液体菌种传代培养:按3～5%接种量，将步骤2培养好的三角瓶菌种接种至装有醋酸杆菌液体培养基的三角瓶中 ,培养基装液体积占三角瓶容积的40%～50%，三角瓶用耐高温透气膜密封，32～37℃，140～180rpm摇床培养32～48小时；
4）重复步骤3操作2次，将醋酸杆菌三角瓶液体菌种传代至第4代；
5) 液体发酵罐培养：将传至第4代的醋酸杆菌三角瓶液体菌种按照10～15%接种量，接入装有醋酸杆菌发酵培养基的液体发酵罐中，培养基装液体积占发酵罐容积的40%～50%，32～37℃，100～120rpm通氧气搅拌，培养24～32小时；
6）发酵液离心：以 6000 ～ 13000rpm 条件下进行以管式或碟片式离心机分离菌体，并以无菌水洗涤 1 ～ 2 次，得到菌泥；
7）菌泥破碎：根据收集菌泥的重量配制磷酸盐缓冲液，跟菌泥充分混合后超声破碎，再根据破碎后菌泥重量，加入保护剂；
8）真空冷冻干燥：按照步骤7完成后的菌泥重量，按比例加入赋形剂，充分混匀后装盘送入真空冷冻干燥机冷冻干燥。
2.根据权利要求 1 所述的一种醋酸杆菌破碎及其提取物的生产方法，其特征在于，所述醋酸杆菌固体培养基的重量百分比组成为：葡萄糖0.3～1.0％，酵母浸粉0.5～1.0%，无水乙醇1.0～2.0%，琼脂2.5%，碳酸钙1.0～1.5%，余量为无菌水，按照配方比例称量除无水乙醇外的组分充分溶解，再用1mol/L食品级氢氧化钠溶液调节培养基pH值至6.4～6.6，115℃，30min下灭菌，冷却至30～40℃左右在无菌环境下加入组分中的无水乙醇。
3.根据权利要求 1 所述的一种醋酸杆菌破碎及其提取物的生产方法，其特征在于，所述醋酸杆菌三角瓶液体培养基的重量百分比组成为：葡萄糖0.8～1.2％，酵母浸粉0.8～1.5%，无水乙醇1.0～3.0%，硫酸镁0.02～0.06%，磷酸二氢钾0.2～0.6%，余量为无菌水，按照配方比例称量除无水乙醇外的组分充分溶解，再用1mol/L食品级氢氧化钠溶液调节培养基pH值至6.4～6.6，115℃，30min下灭菌，冷却至30～40℃左右在无菌环境下加入组分中的无水乙醇。
4.根据权利要求1所述的一种醋酸杆菌破碎及其提取物的生产方法，其特征在于，所述醋酸杆菌发酵培养基的重量百分比组成为：葡萄糖1.0～2.0％，酵母浸粉1.0～2.0%，无水乙醇2.0～5.0%，硫酸镁0.04～0.08%，磷酸二氢钾0.2～0.6%，余量为无菌水，按照配方比例称量除无水乙醇外的组分充分溶解，再用1mol/L食品级氢氧化钠溶液调节培养基pH值至6.4～6.6，115℃，30min下灭菌，冷却至30～40℃左右通过发酵罐补料系统加入组分中的无水乙醇，接入三角瓶液体菌种后，待发酵液pH值下降0.5，再通过补加食品级氢氧化钠溶液调节维持培养基pH值为6.2±0.1。
5.根据权利要求 1 所述的一种醋酸杆菌破碎及其提取物的生产方法，其特征在于：所述液体发酵罐培养，当OD600 值停止增长或呈负增长，镜检醋酸杆菌形态正常，无杂菌，终止发酵。
6.根据权利要求 1 所述的一种醋酸杆菌破碎及其提取物的生产方法，其特征在于：所述的菌泥破碎前加入的磷酸盐缓冲液组分为，按照每克菌泥加入100ml pH6.5的0.06M 磷酸盐缓冲液，重悬菌体；采用超声波破碎的方法，其功率为300～350W，利用超声10秒间歇10秒，循环120～150次的方式破碎菌体。
7.根据权利要求 1 所述的一种醋酸杆菌破碎及其提取物的生产方法，其特征在于：所述的保护剂，是按照破碎后菌泥的重量1:1加入0.1～0.3mM硫酸铁或4～6mM硫酸镁，两者充分混匀。
8.根据权利要求1、5和6所述的一种醋酸杆菌破碎及其提取物的生产方法，其特征在于：所述磷酸盐缓冲液和保护剂需灭菌处理，灭菌方式为在115℃条件下灭菌30分钟后冷却至 5 ～ 20℃备用。
9.根据权利要求 1 所述的一种醋酸杆菌破碎及其提取物的生产方法，其特征在于：所述的真空冷冻干燥赋形剂为玉米粉、玉米低聚肽、麦芽糊精或玉米糊精的一种或几种，其重量为破碎后加入保护剂菌泥重量的10 ～ 20％。
10.根据权利要求 1 所述的一种醋酸杆菌破碎及其提取物的生产方法，其特征在于：所述的真空冷冻干燥工艺，其特征在于干燥条件为 ：在 -55 ～ -45℃预冻4 ～ 8 小时后真空冷冻干燥，冷冻干燥温度为 -35℃，真空度为 0.5 ～ 1.5pa，真空冷冻干燥 40 ～ 60小时；干燥后得到醋酸杆菌提取物中醋酸纤维的含量大于10mg/g的冻干粉。
11.根据权利要求 1 所述的一种醋酸杆菌破碎及其提取物的生产方法，其特征在于：所述的菌种划线培养、三角瓶液体菌种制备、发酵液离心和菌泥破碎赋形的操作环境条件要求为在温度低于 25 ℃、湿度 RH＜ 35％的10万级净化环境中进行。
12.根据权利要求 1 所述的一种醋酸杆菌破碎及其提取物的生产方法，其特征在于：所述醋酸杆菌为AS1.41醋酸杆菌、沪酿1.01醋酸杆菌、奥尔兰醋酸杆菌、许氏醋酸杆菌、纹膜醋酸杆菌的一种或几种。
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