CN113933520A - 一种通用型抗体药血药浓度检测的单克隆抗体试剂组合、检测方法和试剂盒 - Google Patents

一种通用型抗体药血药浓度检测的单克隆抗体试剂组合、检测方法和试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种通用型抗体药血药浓度检测的单克隆抗体试剂组合、检测方法和试剂盒，属于抗体药血药浓度的检测技术领域，所述单克隆抗体试剂组合包括单克隆抗体MBD‑Mah01和MBD‑Mah02。抗体药物以Kappa轻链型占主流，美国FDA迄今批准的104个抗体药物中91％为Kappa轻链的分子。本发明提供的单克隆抗体试剂MBD‑Mah01和MBD‑Mah02特异性地识别抗体药的Kappa轻链，故而检测数据具有极高的普适性和特异性，不仅解决了方法开发的难题，也将实验操作流程大大简化，是一种极具创新性的临床前抗体药物的通用型血药浓度检测方法。

Description

一种通用型抗体药血药浓度检测的单克隆抗体试剂组合、检 测方法和试剂盒
技术领域
本发明属于抗体药血药浓度的检测技术领域，尤其涉及一种通用型抗体药血药浓度检测的单克隆抗体试剂组合、检测方法和试剂盒。
背景技术
药代动力学(Pharmacokinetic,PK)主要是研究药物在生物体内吸收、分布、代谢等过程，并通过数学统计等方法描述血药浓度与给药时间之间的关系，从而揭示药物浓度在体内的动态变化规律，获得药代动力学参数，为后期制定给药方案提供重要依据。
针对于生物药研发的PK研究主要分为临床前与临床研究，临床研究在人体进行，而临床前研究则在实验动物如猴、大鼠、小鼠上进行。为了降低免疫原性等不良反应，越来越多的抗体药物选为人源化/全人源化抗体，它们有许多共同的、但又能区别于动物体内抗体的氨基酸顺序。因此抗体药物的临床前PK研究可以利用上述特点开发通用型方法进行分析检测。
目前，市面上针对于临床前PK研究的通用型血药浓度的检测方法并未形成体系，还需实验开发人员根据自身需求购买不同来源、不同厂家抗体进行组合开发。商业化的试剂也多为多克隆抗体试剂，由于多克隆抗体本身性质，存在批间差异等不可控因素，且加之需购自不同厂家等差异，对于开发者的方法稳定性造成极大的不确定性。
针对于临床前抗体药物的血药浓度分析检测，由于每个项目的抗体分子不同，通常需要根据不同分子进行单独的方法开发，而后期运用此方法检测的样本量通常又较少，因此造成了很大的资源浪费，且市场上的抗体试剂需要试验开发人员根据需求进行筛选组合测试，因此缺少一种临床前抗体药物的通用型血药浓度检测的抗体试剂。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种通用型抗体药物血药浓度检测的单克隆抗体试剂组合、检测方法试剂盒和，采用本发明提供的单克隆抗体试剂组合对含有kappa轻链的各种靶点、各种IgG亚型的抗体药物都能够检测，实现了通用性，很好的解决了临床前关于该领域难点。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种通用型抗体药血药浓度检测的单克隆抗体试剂组合，包括单克隆抗体试剂MBD-Mah01和试剂MBD-Mah02；
所述单克隆抗体试剂MBD-Mah01的轻链的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，重链的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；
所述单克隆抗体试剂MBD-Mah02的轻链的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示，重链的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。
本发明还提供了一种利用上述技术方案所述的单克隆抗体试剂组合检测血药浓度的方法，包括以下步骤：
1)将所述单克隆抗体试剂MBD-Mah01包被于微孔板中孵育16～18h，经吐温20磷酸盐缓冲液洗涤后经Casein缓冲液封闭，得到封闭后的微孔板；
2)将样本加入步骤1)封闭后的微孔板中孵育1h，经吐温20磷酸盐缓冲液洗涤后加入辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体试剂MBD-Mah02-HRP，孵育后经吐温20磷酸盐缓冲液洗涤，得到洗涤微孔板；
3)在所述步骤2)得到的洗涤微孔板中加入显色底物后孵育10min，完成显色反应，得到孵育微孔板；
4)将所述步骤3)得到的孵育微孔板在波长为OD450-630nm下，得到吸光度OD值，根据四参数拟合曲线得到样本浓度。
优选的，所述步骤1)单克隆抗体试剂MBD-Mah01以抗体溶液形式包被于微孔板中，所述抗体溶液中单克隆抗体试剂MBD-Mah01的浓度为2μg/mL，所述抗体溶液的包被量为100μl/孔。
优选的，所述步骤2)单克隆抗体试剂MBD-Mah02-HRP加入微孔板中，所述单克隆抗体试剂MBD-Mah02-HRP以试剂溶液形式加入，所述试剂溶液中MBD-Mah02-HRP的浓度为250～500ng/mL，所述试剂溶液的加入量为100μl/孔。
本发明还提供了一种利用上述技术方案所述的单克隆抗体试剂组合检测血药浓度的方法，包括以下步骤：
a、将所述单克隆抗体试剂MBD-Mah01包被于磁珠，得到包被磁珠，每毫克磁珠的单克隆抗体试剂MBD-Mah01的包被量为20μg；
b、将所述步骤a得到的包被磁珠与辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体试剂MBD-Mah02-HRP、Casein缓冲液混合，得到工作液；
c、将所述步骤b得到的工作液与样本混合后孵育1h，洗涤后与显色底物混合、孵育10min，进行显色反应；
d、将所述步骤c的显色反应经终止液终止，在波长为OD450-630nm下测量，得到吸光度OD值，根据四参数拟合曲线得到样本浓度。
优选的，所述步骤b中包被磁珠与单克隆抗体试剂MBD-Mah02-HRP、Casein缓冲液的体积比为40:1:4000。
本发明还提供了一种通用型抗体药血药浓度检测的试剂盒，包括上述技术方案所述的单克隆抗体组合。
优选的，所述试剂盒还包括吐温20磷酸盐缓冲液、Casein缓冲液和显色底物；
所述述吐温20磷酸盐缓冲液中吐温20的百分含量为0.05～0.5％；
述Casein缓冲液的百分含量为1％。
优选的，所述试剂盒还包括Casein缓冲液、显色底物和终止液；
所述Casein缓冲液的百分含量为1％。
优选的，所述显色底物包括3,3',5,5'-四甲基联苯胺。
本发明提供了一种通用型抗体药血药浓度检测的单克隆抗体试剂组合，包括单克隆抗体试剂MBD-Mah01和试剂MBD-Mah02；所述单克隆抗体试剂MBD-Mah01的轻链的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，重链的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；所述单克隆抗体试剂MBD-Mah02的轻链的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示，重链的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。本发明利用单克隆抗体试剂组合检测血药浓度的机理是：通过将单克隆抗体试剂MBD-Mah01包被在微孔板上，特异性地识别并结合动物基质(血清、血浆等)中的抗体药物，加入辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体试剂MBD-Mah02，形成复合物达到分析检测目的。由于该法对含有kappa轻链的各种靶点和各种IgG亚型抗体药物都能够检测，实现了方法的通用性，很好地解决了临床前关于该领域难点。
本发明的有益效果：
(1)采用特异性单克隆抗体试剂对，识别位点互不重叠，避免了试剂之间的竞争，因而检测范围更为宽广，使临床前样本血药浓度检测更为灵敏和特异；
(2)不仅适用于猴血样本，也可用于大小鼠血样中抗体药物的检测；
(3)抗体试剂本身可以两两配对、也可以与重链特异性的鼠抗人单克隆抗体试剂(例如R10Z8E9)配对或者混合形成人工多抗，在类似的检测中使用，增加试剂的抗干扰能力；
(4)通过试剂盒提供，极大简化了实验人员的调研以及采购等物资时间成本，无需进行过多试剂操作，是一种通用型血药浓度检测方法；
(5)采用磁珠标记技术可在方法一的基础上使流程更为便捷，使后期操作实现自动化成为可能。
附图说明
图1为检测抗体适用范围；
图2为本发明的抗体组合与商业化试剂比较结果；
图3为验证抗体适用范围-含kappa轻链的抗体药；
图4为验证抗体适用范围-含Lambda轻链的抗体药；
图5为不同来源血清基质适用范围；
图6为操作原理图；
图7为操作原理图。
具体实施方式
本发明提供了一种通用型抗体药血药浓度检测的单克隆抗体试剂组合，包括单克隆抗体试剂MBD-Mah01和试剂MBD-Mah02；所述单克隆抗体试剂MBD-Mah01的轻链的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，重链的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；所述单克隆抗体试剂MBD-Mah02的轻链的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示，重链的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。
在本发明中，所述单克隆抗体试剂MBD-Mah01的轻链的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，具体如下：
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQVSIHGSNNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYLVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGIYYCLGQHSVPLTFGAGTTLELKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC；
所述单克隆抗体试剂MBD-Mah01的重链的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，具体如下：
QVTLKESGPGILKPSQTLSLTCSFSGFLSTSGMSGVGWIRQPSGKGLEWLAHQKVWWDDKSYNPSLKSQLTISKDTSRNQVFLKITGVDTADAATYYCVRRATGFQTGDYFYFDYYWGQGTTLTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDTVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK。
在本发明中，所述单克隆抗体试剂MBD-Mah02的轻链氨基酸序列如SEQ ID No.3所示，具体如下所示：
DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIHQSSINTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGIYYCLEASHVELTFGAGTTLELKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC；
所述单克隆抗体试剂MBD-Mah02的重链氨基酸序列如SEQ ID No.4所示，具体如下所示：
QVTLKESGPGILKPSQTLSLTCSFSGFLTDRESGPVKIVGWIRQPSGKGLEWLAHQWWKLGGISYNPSLKSQLTISKDTSRNQVFLKITGVDTADAATYYCVRRATGFQTGDYFYFDYYWGQGTTLTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDTVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK。
在本发明中，所述单克隆抗体试剂MBD-Mah01和单克隆抗体MBD-Mah02具有不同的抗原决定簇，因而形成抗体对。
本发明还提供了一种通用型抗体药血药浓度检测的试剂盒，包括上述技术方案所述的单克隆抗体试剂组合。
在本发明中，所述试剂盒还优选包括吐温20磷酸盐缓冲液、Casein缓冲液和显色底物。在本发明中，所述述吐温20磷酸盐缓冲液中吐温20的百分含量优选为0.05～0.5％。在本发明中，所述Casein缓冲液的百分含量优选为1％。本发明对所述吐温20磷酸盐缓冲液和Casein缓冲液的来源没有特殊限定，本领域技术人员常规配置或者采用市售产品即可。在本发明中，所述显色底物优选包括3,3',5,5'-四甲基联苯胺。
本发明还提供了一种非疾病诊断和治疗目的的利用上述技术方案所述的单克隆抗体试剂组合检测血药浓度的方法(流程图见图6)，包括以下步骤：
1)将所述单克隆抗体试剂MBD-Mah01包被于微孔板中孵育16～18h，经吐温20磷酸盐缓冲液洗涤后经Casein缓冲液封闭，得到封闭后的微孔板；
2)将样本加入步骤1)封闭后的微孔板中孵育1h，经吐温20磷酸盐缓冲液洗涤后加入辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体试剂MBD-Mah02-HRP，孵育后经吐温20磷酸盐缓冲液洗涤，得到洗涤微孔板；
3)在所述步骤2)得到的洗涤微孔板中加入显色底物后孵育10min，完成显色反应，得到孵育微孔板；
4)将所述步骤3)得到的孵育微孔板在波长为OD450-630nm下，得到吸光度OD值，根据四参数拟合曲线得到样本浓度。
本发明将所述单克隆抗体试剂MBD-Mah01包被于微孔板中孵育16～18h，经吐温20磷酸盐缓冲液洗涤后经Casein缓冲液封闭，得到封闭后的微孔板。
在本发明中，单克隆抗体试剂MBD-Mah01优选以抗体溶液形式包被于微孔板中，所述抗体溶液中单克隆抗体试剂MBD-Mah01的浓度优选为2μg/mL，所述抗体溶液的包被量优选为100μl/孔。在本发明中，所述抗体溶液中单克隆抗体试剂MBD-Mah01的浓度还可根据检测不同的药物浓度，本领域技术人员依据常规设置浓度即可。本发明对溶解单克隆抗体试剂MBD-Mah01的溶剂没有特殊限定，本领域技术人员依据常规溶剂溶解单克隆抗体试剂MBD-Mah01即可。在本发明中，所述单克隆抗体试剂MBD-Mah01包被于微孔板中孵育16～18h，孵育的温度优选为4℃。在本发明中，所述吐温20磷酸盐缓冲液洗涤的次数优选为3次。在本发明中，所述Casein缓冲液封闭的时间优选为1h，在常温下封闭即可。
本发明将样本加入封闭后的微孔板中孵育1h，经吐温20磷酸盐缓冲液洗涤后加入辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体MBD-Mah02-HRP，孵育后经吐温20磷酸盐缓冲液洗涤，得到洗涤微孔板。
在本发明中，所述样本优选包括猴血样或鼠血样，本发明对猴血样和鼠血样的处理方式没有特殊限定，本领域技术人员依据常规操作即可。在本发明中，所述样本的加入量优选为100μL/孔。在本发明中，样本加入后优选在室温下进行孵育，再经吐温20磷酸盐缓冲液洗涤3次。
在本发明中，所述辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体MBD-Mah02-HRP优选以试剂溶液形式加入到微孔板中，试剂溶液中单克隆抗体试剂MBD-Mah02-HRP的浓度优选为250～500ng/mL，所述试剂溶液的加入量优选为100μl/孔。在本发明中，加入单克隆抗体试剂MBD-Mah02-HRP后孵育的时间优选为1h，优选在室温下进行孵育，孵育后优选经吐温20磷酸盐缓冲液洗涤3次。
本发明在得到的洗涤微孔板中加入显色底物后孵育10min，得到孵育微孔板。在本发明中，所述显色底物优选包括3,3',5,5'-四甲基联苯胺。在本发明中，所述显色底物的加入量优选为100μl/孔，加入后优选在室温下孵育10min。
本发明将得到的完成显色反应的孵育微孔板在波长为OD450-630nm下测量，得到吸光度OD值，根据四参数拟合曲线得到样本浓度。
在本发明中，所述试剂盒还优选包括Casein缓冲液、显色底物和终止液；在本发明中，所述Casein缓冲液的百分含量优选为1％。在本发明中，所述显色底物优选包括3,3',5,5'-四甲基联苯胺。在本发明中，所述终止液使用本领域技术人员在所述技术领域常规使用的终止液即可，在此无特殊限定。
本发明还提供了一种非诊断和治疗目的地利用上述技术方案所述的单克隆抗体试剂组合检测血药浓度的方法(流程图见图7)，包括以下步骤：
a、将所述单克隆抗体试剂MBD-Mah01包被于磁珠，得到包被磁珠，每毫克磁珠的单克隆抗体试剂MBD-Mah01的包被量为20μg；
b、将所述步骤a得到的包被磁珠与辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体MBD-Mah02-HRP、Casein缓冲液混合，得到工作液；
c、将所述步骤b得到的工作液与样本混合后孵育1h，洗涤后与显色底物混合、孵育10min，完成显色反应；
d、将所述步骤c得到的完成显色反应的孵育微孔板经终止液终止，在波长为OD450-630nm下测量，得到吸光度OD值，根据四参数拟合曲线得到样本浓度。
本发明将所述单克隆抗体试剂MBD-Mah01包被于磁珠，得到包被磁珠，每毫克磁珠的单克隆抗体试剂MBD-Mah01的包被量为20μg。本发明对单克隆抗体试剂MBD-Mah01包被于磁珠的方法没有特殊限定，本领域技术人员采用常规方法进行包被即可。本发明对所述磁珠的种类没有特殊限定，本领域技术人员根据单克隆抗体试剂MBD-Mah01常规选择即可。
本发明将得到的包被磁珠与辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体试剂MBD-Mah02-HRP、Casein缓冲液混合，得到工作液。在本发明中，包被磁珠与单克隆抗体试剂MBD-Mah02-HRP、Casein缓冲液的体积比优选为40:1:4000。
本发明将得到的工作液与样本混合后孵育1h，洗涤后与显色底物混合、孵育10min，进行显色反应。在本发明中，所述工作液与样本的体积比优选为3:2。在本发明中，所述孵育的时间优选为1h，所述孵育优选在恒温震荡仪中室温孵育，孵育后优选经吐温20磷酸盐缓冲液洗涤3次。在本发明中，所述显色底物优选包括3,3',5,5'-四甲基联苯胺，加入后在室温下孵育10min。
将所述步骤c得到的完成显色反应的孵育微孔板经终止液终止，在波长为OD450-630nm下测量，得到吸光度OD值，根据四参数拟合曲线得到样本浓度。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
特异性单克隆抗体选择：
抗体筛选过程：使用不同抗体药物(包含IgG1、IgG2、IgG4亚型)混合后对小鼠进行腹腔注射，从而产生纯化出不同的单克隆抗体；然后通过猴血吸附反向筛选得到特异性识别人IgG的抗体，筛选得出两株种属特异性的单克隆抗体试剂MBD-Mah01(轻链的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，重的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示)和单克隆抗体试剂MBD-Mah02(轻链的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示，重的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示)，且二者针对IgG kappa轻链上不同的抗原决定簇，结合点互不重叠。
对不同抗体药物(涵盖IgG1、IgG2、IgG4三种不同亚型，IgG3亚型不用于抗体药物开发)的血药浓度进行分析，如图结果所示，针对于抗体IgG1、IgG2、IgG4亚型的特异性识别，信号值随抗体药物浓度升高而增加(图1)，从图1中可以看出，单克隆抗体MBD-Mah01和单克隆抗体MBD-Mah02表现出了优异的结果。商品化多克隆抗体试剂会更快的到达检测上限，因而检测范围较狭，检测上限较低，标准曲线浓度点在STD04以上，信号值趋于上平台，即信号值不在随着浓度增加而升高，上限检测浓度低于理论浓度值(准确度％RE值超出接受标准±20％)(表1)，相较于市场上商品化多克隆抗体试剂，所述单克隆抗体试剂对具有更宽的线性范围以及相近的灵敏度(表1和图2)，满足临床前通用型检测血药浓度的分析要求。
表1单克隆抗体MBD-Mah01、MBD-Mah02与商业化多克隆抗体试剂比较结果
Figure BDA0003354498370000101
针对于上述实验结果，为了进一步确认所述单克隆抗体试剂对的适用性范围，选取了更多的抗体药物(涵盖IgG1、IgG2、IgG4亚型)进行抗体识别适应范围验证，其中六种为IgG kappa轻链的抗体药物均得到很强的信号(图3)，而另外三种IgG Lambda轻链的抗体药物无响应(图4)，即两株单克隆抗体不识别IgG Lambda轻链。结果表明所述的单克隆抗体试剂特异性地识别并检测含kappa轻链的抗体药物。
实施例2
实验操作流程：
1.按一定浓度(2μg/mL)将抗体试剂MBD-Mah01包被于微孔板中(100μL/孔)，4℃孵育16-18小时；
2.用0.05％吐温20磷酸盐缓冲液洗涤三次，拍干残留液体后用1％Casein室温封闭1小时；
3.加入样本(含待检测抗体药物的猴/鼠血样)，100μL/孔，室温孵育1小时，PBST洗涤三次；
4.加入侦测抗体HRP标记的MBD-Mah02试剂(抗体MBD-Mah02的浓度为250ng/mL)，100μL/孔，室温孵育1小时，PBST洗涤三次；
5.显色：加入显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺混匀，100μL/孔，室温孵育10分钟；
6.将完成显色反应的孵育微孔板放入酶标仪中，在波长为OD(450-630nm)条件下检测，得出吸光度OD值数据结果，根据四参数拟合曲线得到样本浓度。
根据上述实验操作流程针对于不同的动物血清样本(鼠血清、猴血清)进行适用性探究，探究实施例1得到的两株单克隆抗体MBD-Mah01和单克隆抗体MBD-Mah02可以应用于临床前不同的动物种属血清基质样本中而对检测结果是否存在影响，结果见图5。
由图5可以发现，针对于不同的IgG1、IgG2、IgG4亚型的抗体药物，无论是在鼠血清还是猴血清基质中，检测结果均未受到影响，即所述的两株种属特异性的单克隆抗体可以应用于临床前不同种属的动物血清样本中、而不影响血药浓度的检测结果。
实施例3
猴血样本：精密度和准确度试验
根据实验操作流程(同实施例2)，在猴血(血清和血浆)样本中对单克隆抗体MBD-Mah01和单克隆抗体MBD-Mah02构建的检测方法进行精密度(Precision,％CV)和准确度(Accuracy,％RE)试验，分别进行三次独立重复试验，每次试验包括一组标准曲线以及三组质控样本，STD01-STD07为标准曲线不同浓度点，ULOQ、HQC、MQC、LQC、LLOQ分别表示为定量上限、高浓度质控样本、中浓度质控样本、低浓度质控样本、定量下限水平的质控样本，数据总结见表2-5。
表2猴血清样本精密度和准确度的结果(标准曲线)
标准曲线 STD1 STD2 STD3 STD4 STD5 STD6 STD7
理论浓度(ng/mL) 20000.0 16000.0 12000.0 7000.0 2000.0 500.0 200.0
实测浓度(ng/mL) 18576.7 17230.1 12489.5 6860.5 1963.7 511.6 197.9
复孔％CV 2.3 1.2 1.6 1.7 0.5 0.1 0.6
复孔％RE -7.1 7.7 4.1 -2.0 -1.8 2.3 -1.1
表3猴血清样本精密度和准确度的结果(质控样本)
Figure BDA0003354498370000121
表4猴血浆样本精密度和准确度的结果(标准曲线)
标准曲线 STD1 STD2 STD3 STD4 STD5 STD6 STD7
理论浓度(ng/mL) 20000.0 16000.0 12000.0 7000.0 2000.0 500.0 200.0
实测浓度(ng/mL) 17641.3 17145.3 12858.2 7179.1 1895.3 524.2 196.4
复孔％CV 1.6 2.1 1.8 0.2 2.0 0.4 3.5
复孔％RE -11.8 7.2 7.2 2.6 -5.2 4.8 -1.8
表5猴血浆样本精密度和准确度的结果(质控样本)
Figure BDA0003354498370000122
Figure BDA0003354498370000131
从表2-5中可以得出，标准曲线的实测浓度与理论浓度的准确度％RE均在±20％以内，且复孔的精密度％CV也在20％以内，质控样本由标准曲线拟合回算结果同样符合精密度与准确度要求，因此在猴血清和猴血浆样本中，采用单克隆抗体MBD-Mah01和单克隆抗体MBD-Mah02的分析结果完全满足精密度与准确度要求，无论是标准曲线还是相对应的质控样本，接受标准均符合规定要求，充分说明特异性单克隆抗体MBD-Mah01、MBD-Mah02可应用于临床前猴血样本通用型血药浓度分析。
实施例4
鼠血样本：精密度和准确度试验
根据实验操作流程(同实施例2)，在鼠血(血清和血浆)样本中对单克隆抗体MBD-Mah01和单克隆抗体MBD-Mah02进行精密度(Precision,％CV)和准确度(Accuracy,％RE)试验，分别进行三次独立重复试验，每次试验包括一组标准曲线以及三组质控样本，STD01-STD07为标准曲线不同浓度点，ULOQ、HQC、MQC、LQC、LLOQ分别表示为定量上限、高浓度质控样本、中浓度质控样本、低浓度质控样本、定量下限，数据总结见表6-9。
表6鼠血清样本精密度和准确度的结果(标准曲线)
Figure BDA0003354498370000132
Figure BDA0003354498370000141
表7鼠血清样本精密度和准确度的结果(质控样本)
Figure BDA0003354498370000142
表8鼠血浆样本精密度和准确度的结果(标曲)
标准曲线 STD1 STD2 STD3 STD4 STD5 STD6 STD7
理论浓度(ng/mL) 20000.0 16000.0 12000.0 7000.0 2000.0 500.0 200.0
实测浓度(ng/mL) 18531.1 17545.6 12508.8 6658.8 2032.3 497.7 200.2
复孔％CV 1.1 3.5 2.1 4.8 2.7 2.5 4.4
复孔％RE -7.3 9.7 4.2 -4.9 1.6 -0.5 0.1
表9鼠血浆样本精密度和准确度的结果(质控样本)
Figure BDA0003354498370000151
由表6-9可以得出，标准曲线的实测浓度与理论浓度的准确度％RE均在±20％以内，且复孔的精密度％CV也在20％以内，质控样本由标准曲线拟合回算结果同样符合精密度与准确度要求，因此在鼠血清和鼠血浆样本中，由单克隆抗体MBD-Mah01和单克隆抗体MBD-Mah02的试验结果同样满足精密度与准确度要求，无论是标准曲线还是质控样本的接受标准均符合规定要求，充分说明特异性单克隆抗体试剂MBD-Mah01、MBD-Mah02同样可应用于临床前鼠血样本通用型血药浓度分析。
实施例5
选择性样本试验：
由于样本检测阶段标准曲线以及质控样本使用的均为混合猴血清/鼠血清样本进行配制，为了验证混合血清样本配制的标准曲线可以进行个体未知血清样本抗体药物浓度的检测，用混合血清样本配制的标准曲线，来检测配制于个体血清样本中的已知药物浓度样本，计算检测值与实际药物浓度值之间的准确度，从而说明是否会因为受到个体血清样本基质干扰而导致检测的药物浓度不准确等结果。因此为了验证单克隆抗体试剂MBD-Mah01、MBD-Mah02对在样本中检测的准确性，分别用8只不同个体猴血清样本以及鼠血清样本进行样本已知浓度配制(定量上限浓度点：20000ng/mL，定量下限浓度点：200ng/mL，以及个体样本空白浓度点)检测，通过混合血清样本配制标准曲线回算个体血清样本浓度，探究个体基质对所述抗体试剂构建的分析方法是否存在干扰，试验数据汇总见表10和11(BQL：低于定量下限)。
表10猴血清样本个体选择性干扰验证实验结果
Figure BDA0003354498370000161
Figure BDA0003354498370000171
表11鼠血清样本个体选择性干扰验证实验结果
Figure BDA0003354498370000172
Figure BDA0003354498370000181
由表10和11可以得出，由混合血清样本配制的标准曲线用于个体血清样本中抗体药物浓度检测，所得到的实际测定浓度值与理论浓度值准确度范围％RE均在±20％以内，远低于法规要求的％RE在±25％接受标准，即由MBD-Mah01、MBD-Mah02抗体对开发的检测方法可用于实际的样本抗体药物浓度检测，因此单克隆抗体无论是在猴血清样本中还是鼠血清样本中，均未受到个体血清基质样本的干扰，检测结果均满足接受标准。
由以上实施例可以得出，针对于临床前抗体药物开发的通用型血药浓度的检测方法完全满足试验需求。抗体药物以Kappa轻链型占主流，美国FDA迄今批准的104个抗体药物中91％为Kappa轻链型的分子。由于单克隆抗体试剂MBD-Mah01和MBD-Mah02特异性地识别抗体药(人源IgG)的Kappa轻链，数据具有极高的特异性，不仅解决了方法开发的难题，也将实验操作流程大大简化，是一种极具创新性的临床前抗体药物的通用型血药浓度检测方法。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种通用型抗体药血药浓度检测的单克隆抗体试剂组合，其特征在于，包括单克隆抗体试剂MBD-Mah01和试剂MBD-Mah02；所述单克隆抗体试剂MBD-Mah01的轻链的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，重链的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；所述单克隆抗体试剂MBD-Mah02的轻链的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示，重链的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。
2.一种非诊断和治疗目的地利用权利要求1所述的单克隆抗体试剂组合检测血药浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将所述单克隆抗体试剂MBD-Mah01包被于微孔板中孵育16～18h，经吐温20磷酸盐缓冲液洗涤后经Casein缓冲液封闭，得到封闭后的微孔板；
2)将样本加入步骤1)封闭后的微孔板中孵育1h，经吐温20磷酸盐缓冲液洗涤后加入辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体试剂MBD-Mah02-HRP，孵育后经吐温20磷酸盐缓冲液洗涤，得到洗涤微孔板；
3)在所述步骤2)得到的洗涤微孔板中加入显色底物后孵育10min，完成显色反应，得到孵育微孔板；
4)将所述步骤3)得到的孵育微孔板在波长为OD450-630nm下，得到吸光度OD值，根据四参数拟合曲线得到样本浓度。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤1)单克隆抗体试剂MBD-Mah01以抗体溶液形式包被于微孔板中，所述抗体溶液中单克隆抗体试剂MBD-Mah01的浓度为2μg/mL，所述抗体溶液的包被量为100μl/孔。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤2)辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体试剂MBD-Mah02-HRP加入微孔板中，所述单克隆抗体试剂MBD-Mah02-HRP以试剂溶液形式加入，所述试剂溶液中MBD-Mah02-HRP的浓度为250～500ng/mL，所述试剂溶液的加入量为100μl/孔。
5.一种非诊断和治疗目的地利用权利要求1所述的单克隆抗体试剂组合检测血药浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、将所述单克隆抗体试剂MBD-Mah01包被于磁珠，得到包被磁珠，每毫克磁珠的单克隆抗体试剂MBD-Mah01的包被量为20μg；
b、将所述步骤a得到的包被磁珠与辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体试剂MBD-Mah02-HRP、Casein缓冲液混合，得到工作液；
c、将所述步骤b得到的工作液与样本混合后孵育1h，洗涤后与显色底物混合、孵育10min，进行显色反应；
d、将所述步骤c的显色反应经终止液终止，在波长为OD450-630nm下测量，得到吸光度OD值，根据四参数拟合曲线得到样本浓度。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤b中包被磁珠与单克隆抗体试剂MBD-Mah02-HRP、Casein缓冲液的体积比为40:1:4000。
7.一种通用型抗体药血药浓度检测的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的单克隆抗体组合。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括吐温20磷酸盐缓冲液、Casein缓冲液和显色底物；
所述述吐温20磷酸盐缓冲液中吐温20的百分含量为0.05～0.5％；
述Casein缓冲液的百分含量为1％。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括Casein缓冲液、显色底物和终止液；
所述Casein缓冲液的百分含量为1％。
10.根据权利要求8或9所述的试剂盒，其特征在于，所述显色底物包括3,3',5,5'-四甲基联苯胺。
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103837681A (zh) * 2013-11-11 2014-06-04 华南农业大学 戊型肝炎病毒抗体检验通用elisa法及其应用
CN110231481A (zh) * 2019-07-22 2019-09-13 长春祈健生物制品有限公司 一种水痘-带状疱疹病毒病毒滴度的快速检测方法
US20210047409A1 (en) * 2018-02-13 2021-02-18 Merck Sharp & Dohme Corp. Methods for treating cancer with anti pd-1 antibodies and anti ctla4 antibodies
CN113092392A (zh) * 2021-03-05 2021-07-09 苏州西山中科药物研究开发有限公司 一种检测猴血清中靶向可溶性蛋白的单克隆抗体药物总浓度的通用型方法
CN113607520A (zh) * 2021-08-02 2021-11-05 湖州中科湖兴生物科技有限公司 一种提高抗药抗体分析中药物耐受的操作方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103837681A (zh) * 2013-11-11 2014-06-04 华南农业大学 戊型肝炎病毒抗体检验通用elisa法及其应用
US20210047409A1 (en) * 2018-02-13 2021-02-18 Merck Sharp & Dohme Corp. Methods for treating cancer with anti pd-1 antibodies and anti ctla4 antibodies
CN110231481A (zh) * 2019-07-22 2019-09-13 长春祈健生物制品有限公司 一种水痘-带状疱疹病毒病毒滴度的快速检测方法
CN113092392A (zh) * 2021-03-05 2021-07-09 苏州西山中科药物研究开发有限公司 一种检测猴血清中靶向可溶性蛋白的单克隆抗体药物总浓度的通用型方法
CN113607520A (zh) * 2021-08-02 2021-11-05 湖州中科湖兴生物科技有限公司 一种提高抗药抗体分析中药物耐受的操作方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ZHANDONG DON ZHONG等: "Development and Utility of an ELISA Method for Sensitive and Specific Detection of IgE Antidrug Antibodies", 《THE AAPS JOURNAL》, vol. 22, no. 36, pages 1 - 11 *
郭长福: "WuTac单抗血药浓度和人抗鼠抗体检测方法学的建立及其临床应用", 《万方医学网》 *

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