CN113913309A - 一株耐碱酵母及在利用沼液产单细胞蛋白中的应用 - Google Patents

一株耐碱酵母及在利用沼液产单细胞蛋白中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于微生物发酵领域，具体涉及一株耐碱酵母及在利用沼液产单细胞蛋白中的应用。具体技术方案为：一株耐碱酵母，所述耐碱酵母为汉逊德巴利酵母，于2021年7月15日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为：CGMCC No.22903。本发明提供了一株新的汉逊德巴利酵母，该微生物不仅耐碱，而且嗜碱，可在天然具有抗菌能力的沼液中生存，高效利用沼液中的氨氮转换为蛋白质，降低沼液中的氨氮浓度，为沼液处理和资源化利用提供了新途径。

Description

一株耐碱酵母及在利用沼液产单细胞蛋白中的应用
技术领域
本发明属于微生物发酵领域，具体涉及一株耐碱酵母及在利用沼液产单细胞蛋白中的应用。
背景技术
近年来，厌氧消化技术，也称沼气发酵技术，已经被广泛用于处理畜禽养殖粪污、餐厨垃圾、工业有机废水废渣。然而，在生产清洁能源(生物燃气或生物天然气)的同时，会产生大量的高氨氮的沼液。沼液作为液体肥还田是一种不错的选择。但是由于沼液肥效较低，运输成本较高，还田使用在实践中较为困难。另外，当沼液的施用超过土地的承载能力时，就是一种污染物，会污染水体。此时，就只能对沼液进行达标排放处理。目前高氨氮沼液的处理采用的是传统物化法、生物法等污水处理工艺，这些工艺均是通过硝化-反硝化生物过程将氨氮转化为氮气排放到大气中，没有对其实现资源化利用，造成资源浪费，且处理成本较高。
沼液中氨氮含量高、碳氮比低，限制了微生物对沼液的利用。即使现有一些利用微生物处理沼液、生产单细胞蛋白的技术，但仍存在发酵时间较长、氨氮利用率低、单细胞蛋白产量/率不高等缺陷，难以实际投入生产应用。申请人课题组在先研究的已授权专利《一株蜂蜜酵母及用其处理高氨氮沼液产单细胞蛋白的方法》和《一株白地霉及用其处理高氨氮沼液产单细胞蛋白的方法》，虽然分别提供了可在沼液中生存并利用沼液生产单细胞蛋白的蜂蜜酵母和白地霉，但这两种酵母都无法适应沼液的初始pH，需要先将沼液pH调为酸性，并在处理全程都需要密切关注和控制pH，增加了处理成本和难度。
综上，如果能筛选出一株不仅可高效处理高氨氮沼液、产单细胞蛋白，而且可以耐沼液碱性甚至嗜碱的菌株，将具有重要的现实意义。
发明内容
本发明的目的是提供一株耐碱酵母及在利用沼液产单细胞蛋白中的应用。
为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案是：一株耐碱酵母，所述耐碱酵母为汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)，于2021年7月15日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为：CGMCCNo.22903。
相应的，一株耐碱酵母，所述耐碱酵母为汉逊德巴利酵母(Debary omyceshansenii)，其ITS序列如SEQ ID NO.1所示。
相应的，所述耐碱酵母处理沼液中的应用。
优选的，所述应用为利用沼液产单细胞蛋白。
优选的，所述应用的温度为25～35℃。
本发明具有以下有益效果：本发明提供了一株新的汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)，该微生物不仅耐碱，而且嗜碱，无需外界调酸即可在天然具有抗菌能力的沼液中生存，并高效利用沼液中的氨氮转换为蛋白质，降低沼液中的氨氮浓度，为沼液处理和资源化利用提供了新途径。
附图说明
图1为筛选的4种微生物在鸡粪沼液培养基中培养的pH变化示意图；
图2为筛选的4种微生物在鸡粪沼液培养基中培养的DCW变化示意图；
图3为JL8-0在酵母菌液体培养基中生长曲线(OD值)示意图；
图4为在鸡粪沼液液体培养基中生长曲线(pH、DCW、氨氮含量和剩余的还原糖)示意图；
图5为菌株JL8-0电镜扫描图；
图6为菌株JL8-0菌落照片；
图7为菌株JL8-0系统进化树；
图8为不同补料时间下试验组和CK组pH变化示意图；
图9为不同补料时间下试验组和CK组DCW变化示意图；
图10为不同补料时间下试验组和CK组氨氮含量变化示意图；
图11为不同补料时间下试验组和CK组剩余还原糖变化示意图。
具体实施方式
本发明提供了一株具有耐碱能力的酵母菌。所述酵母菌于2021年7月15日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为：CGMCC No.22903。所述酵母菌的ITS如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了所述酵母菌在利用沼液发酵产单细胞蛋白中的应用方法。具体为将所述酵母菌接种到待处理沼液中，从而将沼液中绝大部分的无机氮、微量元素以及部分有机污染物转化为菌体蛋白，实现沼液资源化利用，解决制约沼气工业发展的瓶颈问题，同时也为养殖业蛋白质饲料的开发和利用提供有利的途径。
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例一：酵母菌的筛选和鉴定
酵母菌筛选样品来源于沃尔玛超市中的泡菜(JP)；酱菜类(JJ)，包括辣椒豆瓣酱，碱面酱，酱油等；腌菜(JY)；碱鱼(JX)；醪糟(JL)；实验室已有菌种(YY)，已有菌种包括Saccharomyces cerevisiae JSJ(酿酒酵母)、Pichia kudriavzevii GJ-1(库德里阿兹威毕赤酵母)、Debaryomyces hansenii BJ(汉逊德巴利酵母)、Candida tropicalis CGMCC2.587(热带假丝酵母)、Saccharomyces cerevisiae CGMCC 2.1011(酿酒酵母)、Candidatropicalis PTA(热带假丝酵母)、Saccharomyces cerevisiae CGMCC No.2.3095(耐碱酿酒酵母)、Pichia manshurica G2F(曼舒里卡毕赤酵母)、Nectaromyces rattus JFJ(蜂蜜酵母)、Galactomyces candidum ZJ(白地霉)。
本实施例涉及的培养基如下：
(1)富集培养基：酵母粉5g，蛋白胨10g，葡萄糖20g，水1000mL，pH＝6.8。分装于250mL三角瓶中，每一个三角瓶装大约120mL；然后分别加入氯化钠，浓度分别为2.5％、5％、8％，每一类样品及每一个盐浓度各2瓶；115℃灭菌30min。
(2)酵母菌分离固体培养基(g/L)：酵母粉5g，蛋白胨10g，麦芽浸粉2g，葡萄糖20g，琼脂13g，水1000mL，pH＝6.8。分装于500mL三角瓶中，每一个装350mL，分别加氯化钠使得盐浓度分别为2.5％、5％、8％，115℃灭菌30min。
(3)鸡粪沼液液体培养基：沼液原液的氨氮含量5000mg/L和COD含量10000mg/L，稀释沼液氨氮浓度至2500mg/L，外加葡萄糖调节C/N＝2.5，在115℃、30min灭菌，用2mol/LH2SO4将沼液培养基的pH调至8.50。
(4)鸡粪沼液固体培养基：将原始沼液的氨氮含量稀释至2500mg/L，向每升沼液中加入20g葡萄糖，13g琼脂，115℃、30min灭菌后，待冷却到50℃后倒平板。
1、耐碱酵母菌的筛选。利用富集培养基和酵母菌分离固体培养基，从各样品中富集驯化和分离酵母菌，并采用鸡粪沼液固体培养基筛选能够在沼液中生长的酵母。将筛选出的能够在鸡粪沼液中生长的酵母菌按8％的接种量接种到装有50mL鸡粪沼液液体培养基的150mL三角瓶内，在30℃，180r/min的条件下培养60h，每个菌种的每个处理都设置3个重复。发酵完成后测定pH、还原糖含量(生物传感器测定)、氨氮含量(水杨酸-次氯酸盐比色法测定)以及细胞干重(dry cell weight，DCW，重量法测定)。
从样品中共分离出28株酵母菌，其中能够在8％的盐浓度下生长的菌株有23株，能在pH＝8.5的鸡粪沼液固体培养基上生长的菌株仅有4株，包括JL8-0、YY-2(CGMCC 2.587)、JJ2.5-8和JP8-2-5。
将这四株菌置于鸡粪沼液液体培养基中培养，观察pH变化(如图1所示)和DCW变化(如图2所示)。通过图1可以看出，JJ2.5-8和JP8-2-5的pH在0～120h内无显著变化，且DCW为0，说明JJ2.5-8和JP8-2-5在氨氮浓度为2500mg/L，C/N＝2.5的鸡粪沼液培养基中无法生长。JL8-0的pH在0～24h内由8.50迅速降低到6.73，DCW也从0增加到了4.36g/L，随着发酵时间增加，JL8-0的pH也逐渐增加，当发酵时间为60h时，JL8-0的DCW含量达到最大为7.15g/L。YY-2的pH在0-24h内由8.50迅速降低到6.57，DCW也从0增加到了2.21g/L，当发酵时间由24h增加到60时，pH由6.57增加到7.69，DCW达到最大，为4.27g/L。当发酵时间延长到108h，pH降低到4.92。至此，筛出耐碱酵母JL8-0。
2、JL8-0在酵母菌液体培养基中生长曲线的测定。将JL8-0接种于酵母菌液体培养基中，以未接菌的培养基作为空白对照。利用生长曲线测定仪在30℃条件下，每30min自动测量菌体的OD600，并绘制成生长曲线图。结果如图3所示：JL8-0的对数期为4～20h，这时JL8-0生长迅速，稳定期为28～36个小时，稳定期能获得更多的代谢产物。
3、JL8-0在鸡粪沼液液体培养基中生长曲线的测定。配置氨氮浓度为2500mg/L，C/N＝2.5：1的鸡粪沼液液体培养基1.5L，分装50mL在150mL的锥形瓶中,共分装27瓶。分别按8％的接种量接种JL8-0到灭菌后的鸡粪沼液液体培养基中，于30℃，180r/min在摇床上培养，并分别在0、12、24、36、48、60、72、84、96h取样测定pH、DCW、氨氮含量和剩余的还原糖含量。结果如图4所示。JL8-0的pH在0～36h内迅速由8.50降低到5.17，在36～96h内逐步升高到7.21，DCW的含量在0～72h内升高8.30g/L，在72～96h内逐步降低到7.99g/L,氨氮的含量在0～72小时从2163mg/L降低1676mg/L，而后趋于稳定。
4、菌株JL8-0的形态鉴定和生理生化特征。
(1)将JL8-0接种到灭菌后的YPD液体培养基(酵母浸出粉胨葡萄糖培养基)中，在30℃、24h的条件下进行培养，液体培养基变浑浊，有白色絮状沉淀，液体颜色变浅。再利用稀释梯度法稀释到10-7涂布到YPD固体培养基上，菌株JL8-0电镜扫描图如图5所示，培养皿中菌落照片如图6所示。
(2)糖发酵实验。测试6种糖(葡萄糖、D-半乳糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖和D-果糖)的发酵结果。将这6种糖用蒸馏水配成质量分数20％的母液，过滤、灭菌。用蒸馏水配制质量分数0.5％的酵母浸出溶液，每次取出3.6mL分装于试管中，放入倒置的杜氏发酵管，棉塞封口，灭菌，然后每管内加入0.4mL糖母液。将活化好的JL8-0菌种制成细胞悬液，以每管0.5mL的量接种于发酵试管内，摇匀，25℃下培养2周，其间观察杜氏管内是否有气体产生。杜氏管内有气泡计为阳性“+”，无气泡计为阴性“-”。结果如表1所示。“+”表示发酵(可利用)，“-”表示不发酵(不可利用)；表2、3中的+、-于此处相同含义。
表1菌株JL8-0的糖发酵结果展示
发酵糖类 结果
葡萄糖 +
蔗糖 -
麦芽糖 -
乳糖 -
半乳糖 -
果糖 -
(3)碳源同化实验。每试管加无碳基础培养基5mL，加入被测试的碳源(葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、乳糖、柠檬酸、D-木糖、肌醇、甘油、乙醇)，加入量均为1g。接入新鲜JL8-0菌液1mL，培养1周～2周后观察。液体试管法培养同化结果的观察与记录方法：取一白色卡片，其上用墨汁或黑色墨水划上约3/4mm宽的直线，透过培养液观察卡片上的黑线。透过试管看不见黑线记为“+”，为阳性；黑线清晰可见记为“-”，为阴性。结果如表2所示。
表2菌株JL8-0的碳源同化结果展示
碳源 结果
葡萄糖 +
蔗糖 -
可溶性淀粉 -
乳糖 -
柠檬酸 -
D-木糖 -
肌醇 -
甘油 -
乙醇 -
(4)氮源同化实验。将JL8-0进行饥饿培养，以消耗细胞内多余的氮源，防止出现假阳性结果。随后将菌株接种在无菌碳基础培养基上，再加入被测氮源(硫酸铵、亚硝酸钠、硝酸钾)，加入量均为1g，25℃培养3d～5d。按碳源同化实验的方法进行观测，结果如表3所示。
表3菌株JL8-0的氮源同化结果展示
氮源 结果
硫酸铵 +
亚硝酸钠 -
硝酸钾 -
5、JL8-0分子鉴定。将培养好后的JL8-0送于生工公司测序，其ITS序列如SEQ IDNO.1所示。并将所得DNA序列输入NCBI进行Blast检索，采用Clustaix1.81、MEGA7.0软件对所得到的核苷序列与NCBI中收录相近菌株的相应序列进行比较和分析，并构建系统进化树(如图7所示)。发现菌株JL8-0与EU585757.1Debaryomyces hansenii QD4.1亲缘关系最近，结合其形态学、初步鉴定菌株JL8-0为Debaryomyceshansenii。
所述酵母菌菌株JL8-0于2021年7月15日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)，分类命名为：汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为：CGMCC No.22903。
实施例二：酵母菌JL8-0利用沼液产单细胞蛋白效果展示
本实施例发酵底物均为鸡粪沼液液体培养基，通过不同发酵条件的筛选，获得利用酵母菌JL8-0发酵沼液产单细胞蛋白的优选条件。
1、不同C/N的影响。在氨氮浓度为2500mg/L的鸡粪沼液培养基中，利用外加碳源无水葡萄糖将C/N比分别调节为：1/1(加入葡萄糖6.25g)、1.5/1(加入葡萄糖9.375g)、2/1(加入葡萄糖12.5g)、2.5/1(加入葡萄糖15.625g)、3/1(加入葡萄糖18.75g)、4/1(加入葡萄糖25g)、5/1(加入葡萄糖31.25g)、6/1(加入葡萄糖37.5g)、7/1(加入葡萄糖43.75g)、8/1(加入葡萄糖50g)、9/1(加入葡萄糖56.25g)。取4mL JL8-0的种子液，加到装有50mL鸡粪沼液液体培养基的150mL锥形瓶中，pH＝8.5，30℃、180rpm的条件下培养60h。以未接种的空白培养基做对照，做三个生物学重复。培养后，测量pH、DCW、氨氮、还原糖的含量、SCP、并计算细胞得率，细胞得率＝m/M，m指DCW的含量，M指用掉的葡萄糖的质量。结果如表4所示。
表4不同碳氮比下JL8-0的生长情况
C/N pH DCW(g/L) 剩余的还原糖(g/L) 氨氮(mg/L) SCP(％) 细胞得率
1/1 8.31 3.61 0.06 1500 34.95 0.583
1.5/1 7.97 5.11 0.05 1542 34.23 0.549
2/1 7.85 6.22 0.06 1458 31.86 0.500
2.5/1 7.25 8.14 0.06 1375 31.23 0.545
3/1 7.13 8.70 0.05 1375 30.23 0.465
4/1 5.26 7.74 0.20 1400 29.47 0.312
5/1 5.08 7.23 2.17 1375 31.11 0.249
6/1 4.99 6.79 5.00 1475 32.28 0.209
7/1 5.14 7.14 9.33 1400 29.47 0.207
8/1 5.12 7.19 13.00 1400 29.45 0.194
9/1 5.02 6.37 17.60 1442 30.97 0.164
从表4可以看出：培养60h后，各组的pH降低，当C/N＞3/1时，试验组的pH小于5.30，其中C/N＝6/1的pH最低，为4.99。当C/N＝3/1时，DCW含量最高，为8.70g/L，且显著高于C/N为1/1、1.5/1、2/1、4/1、5/1、6/1、7/1、8/1和9/1的试验组(P＜0.01)，与C/N＝2.5/1的试验组无显著性差异。当C/N在1/1～4/1时，还原糖几乎全被利用完，其中C/N＝2.5/1和C/N＝3/1的试验组所利用的氨氮的含量相同，剩余的氨氮含量为1375mg/L。当C/N＝1/1时，SCP和细胞得率最高，分别为34.95％和0.583g/g。从经济价值出发，综合DCW和细胞得率，认为当C/N＝2.5/1时，JL8-0利用沼液产单细胞蛋白的经济效益最好。
2、不同氨氮浓度的影响。控制鸡粪沼液培养基C/N比为2.5/1,将初始氨氮浓度分别调节为2000mg/L(葡萄糖用量12g)、2500mg/L(葡萄糖用量15.625g)、3000mg/L(葡萄糖用量18.75g)、3500mg/L(葡萄糖用量21.875g)、4000mg/L(葡萄糖用量25g)、4500mg/L(葡萄糖用量28.125g)、5000mg/L(葡萄糖用量31.25g)，在pH＝8.5，30℃，180rpm的条件下培养60h。以空白培养基做对照(不接种)，测量其pH、DCW、氨氮含量、剩余还原糖含量、蛋白质含量，结果如表5所示。
表5不同氨氮浓度对菌株JL8-0的影响
氨氮浓度(mg/L) pH DCW(g/L) 剩余的还原糖(g/L) 氨氮(mg/L)
2000 7.54 7.50 0.05 1484
2500 7.38 7.62 0.06 1837
3000 7.32 7.50 0.06 2561
3500 7.25 4.44 0.07 3093
4000 8.42 0.22 7.40 3995
4500 8.43 0.24 7.80 4495
5000 8.38 0.27 7.80 4964
从表5可以看出：培养60h小时后，JL8-0的pH、DCW、氨氮和还原糖的含量在氨氮浓度为4000、4500、5000mg/L的鸡粪沼液的培养基中无显著变化，说明JL8-0在4000mg/L以上的高氨氮沼液中无法生长。当氨氮浓度在2000～3500mg/L时，pH由8.50降低到7.54～7.25，沼液中的还原糖几乎被利用完，氨氮的利用率分别为25.80％、26.52％、14.63％、11.65％，其中当氨氮浓度为2500mg/L，DCW的含量最高，为7.62g/L，且显著高于氨氮浓度为3500mg/L的试验组(P＜0.01)。JL8-0的最适氨氮浓度为2500mg/L。
3、不同初始pH的影响。调整碳氮比为2.5/1(葡萄糖用量15.625g)、氨氮浓度为2500mg/L，利用2mol/L的硫酸将沼液培养基的初始pH分别调节为6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5，在30℃、180rpm的条件下培养60h。测量其pH、DCW、氨氮含量、剩余还原糖含量，结果如表6所示。
表6不同初始pH对菌株JL8-0的影响
不同初始pH pH DCW(g/L) 剩余的还原糖(g/L) 氨氮(mg/L)
6 4.15 5.50 0.11 1969
6.5 4.67 4.54 0.07 1970
7 6.32 4.19 0.07 1947
7.5 7.27 3.39 0.07 1937
8 7.60 4.49 0.06 1899
8.5 7.33 8.06 0.07 1859
9 8.79 0.23 7.87 2430
9.5 9.42 0.22 9.07 2430
由表6可知，培养60h小时后，JL8-0的pH、DCW、氨氮和还原糖的含量在pH为9～9.5的鸡粪沼液的培养基中无显著变化。除初始pH为9和9.5的两个试验组外，其余试验组中还原糖几乎被利用完。当初始pH调节到6和6.5时，发酵后的pH分别为4.15和4.67，说明书酸性的环境不利于酵母菌JL8-0的生长。当初始pH调节到8.5时，DCW的含量最高，为8.06g/L，且显著高于其他试验组(P＜0.01)。各试验组氨氮的利用率依次为18.97％、18.92％、19.88％、20.27％、21.86％、23.51％、0、0。综上所述，JL8-0的最适初始pH为8.5，并且说明JL8-0不仅是耐碱酵母，还是嗜碱酵母。
4、不同补料时间的影响。调整碳氮比为2.5/1(葡萄糖用量15.625g)、氨氮浓度为2500mg/L，pH为8.5，分别在培养的第12h、24h、36h、48h添加灭菌后的25mol/L的葡萄糖溶液，每次补料后都使得沼液液体培养基中的C/N比调节至2.5/1，并在每次补料时，同时利用2mol/L的硫酸将沼液培养基的pH调节8.5，继续培养至60h。同时设置CK组，其余条件与试验组相同，只是在首次添加原料后，后续不添加葡萄糖溶液补料。测量两组的pH、DCW、氨氮含量、剩余还原糖含量，结果如图8～11所示。
从图8可以看出，CK组的pH在0～12h降低到7.22，而后逐渐增加到7.63；但在12h补料后，试验组的pH降低到6.33，在24h补料后试验组的pH增加到7.51，在36h补料后试验组的pH增加到7.66。如图9所示，在0～48小时，CK组的DCW呈现出不断增加的趋势，且由0.07增加到5.39g/L；而在12h补料后试验组的DCW增加到了8.11g/L，在24h补料后试验组的DCW增加到了9.79g/L，相反在36h补料后试验组和在48h补料后的试验组DCW降低，说明在该时间段内补料并未促进酵母菌产生DCW。如图10所示，在48h补料后的试验组氨氮含量显著低于CK的试验组。如图11所示，CK组的还原糖在36h后被全部利用完，而在补料的试验组中，还原糖仍有剩余。这表明试验组中可能存在高密度抑制，使得还原糖未能被利用。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形、变型、修改、替换，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
序列表
<110> 中国科学院成都生物研究所
<120> 一株耐碱酵母及在利用沼液产单细胞蛋白中的应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 572
<212> DNA
<213> Debaryomyces hansenii
<400> 1
ccatgcatgc cttagtacgg cgagtgagcg gcaaaagctc aaatttgaaa tctggcacct 60
tcggtgtccg agttgtaatt tgaagaaggt aactttggag ttggctcttg tctatgttcc 120
ttggaacagg acgtcacaga gggtgagaat cccgtgcgat gagatgccca attctatgta 180
aagtgctttc gaagagtcga gttgtttggg aatgcagctc taagtgggtg gtaaattcca 240
tctaaagcta aatattggcg agagaccgat agcgaacaag tacagtgatg gaaagatgaa 300
aagaactttg aaaagagagt gaaaaagtac gtgaaattgt tgaaagggaa gggcttgaga 360
tcagacttgg tattttgcga tcctttcctt cttggttggg ttcctcgcag cttactgggc 420
cagcatcggt ttggatggta ggataatgac taaggaatgt ggctctactt cggtggagtg 480
ttatagcctt ggttgatact gcctgtctag accgaggact gcgtctttga ctaggatgct 540
ggcataatga tcttaagcca cccgtcttga cc 572

Claims (6)

1.一株耐碱酵母，其特征在于：所述耐碱酵母为汉逊德巴利酵母(Debaryomyceshansenii)，于2021年7月15日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为：CGMCC No.22903。
2.一株耐碱酵母，其特征在于：所述耐碱酵母为汉逊德巴利酵母(Debaryomyceshansenii)，其ITS序列如SEQ ID NO.1所示。
3.权利要求1或2所述耐碱酵母处理沼液中的应用。
4.根据权利要求3所述应用，其特征在于：所述应用为利用沼液产单细胞蛋白。
5.根据权利要求3所述应用，其特征在于：所述应用的温度为25～35℃。
6.根据权利要求3所述应用，其特征在于：所述应用的初始pH为6～8.5。
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