CN110982706A - 一株白地霉及用其处理高氨氮沼液产单细胞蛋白的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物发酵领域，具体涉及一株白地霉及用其处理高氨氮沼液产单细胞蛋白的方法。具体技术方案为：一株白地霉，保藏编号为：CGMCC No.18570。发酵沼液的方法为：取沼液，过滤去除大颗粒杂质，外加碳源调节碳氮比为6:1～10:1，调节pH为5.5～7，获得发酵底物；在所述发酵底物中接种生长至对数期的所述白地霉，随后在20～30℃下进行发酵。发酵结束后，将发酵液进行离心，取离心后的沉淀物在50～60℃下烘干至恒重，得所需的单细胞蛋白。本发明仅需要一段生物反应即可处理沼液，运行成本低、操作方便，对沼液的处理效果优异，并可提供高经济价值产品，为沼液处理提供了整体化、经济化解决方案。
Description
技术领域
本发明属于生物发酵领域，具体涉及一株白地霉及用其处理高氨氮沼液产单细胞蛋白的方法。
背景技术
近年来，厌氧消化技术，也称沼气发酵技术，已经被广泛用于处理畜禽养殖粪污、餐厨垃圾、工业有机废水废渣。然而，在生产清洁能源(生物燃气或生物天然气)的同时，会产生大量的高氨氮的沼液。沼液作为液体肥还田是一种不错的选择。但是由于沼液肥效较低，运输成本较高，还田使用在实践中较为困难。另外，当沼液的施用超过土地的承载能力时，就是一种污染物，会污染水体。此时，就只能对沼液进行达标排放处理。目前高氨氮沼液的处理采用的是传统物化法、生物法等污水处理工艺，这些工艺均是通过硝化-反硝化生物过程将氨氮转化为氮气排放到大气中，没有对其实现资源化利用，造成资源浪费，且处理成本较高。
因沼液中氨氮含量高、碳氮比低，具有一定的天然抑菌作用，所以现有的一些利用微生物处理沼液、生产单细胞蛋白的技术，都存在发酵处理时间较长、氨氮含量处理结果不理想、单细胞蛋白生产量/率不高等缺陷，难以实际投入生产应用。下面试举两例：专利(CN107653207A)公开了一株善变副球菌及用于高氨氮废水处理副产单细胞蛋白的方法，该菌的总发酵时间较长，需要6～13天，且得到的DCW(dry cell weight，细胞干重)最高浓度仅为12.95g/L,沼液氨氮浓度最低只能降到200mg/L。专利(CN107760622A)公开了一株脱氮副球菌及用于高氨氮废水处理产单细胞蛋白的方法，该菌的总发酵时间较长，需要6～13天，且得到的DCW最高浓度仅为10.9g/L,沼液氨氮浓度最低只能降到236mg/L。
综上，提供一种可高效处理高氨氮沼液、产单细胞蛋白的菌株及方法，具有重要的现实意义。
发明内容
本发明的目的是针对现有高氨氮沼液处理技术存在的二次污染、资源浪费等问题，提供一株白地霉及用其处理高氨氮沼液产单细胞蛋白的方法。
为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案是：一株白地霉，于2019年09月09日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.18570。
相应的，一株白地霉，其序列如SEQ ID No.1所示。
相应的，所述白地霉在处理沼液中的应用。
优选的，所述应用包括如下步骤：
(1)取沼液，过滤去除大颗粒杂质，外加碳源调节碳氮比为6:1～10:1，调节pH为5.5～7，获得发酵底物；
(2)在所述发酵底物中接种生长至对数期的所述白地霉，随后在20～30℃下进行发酵。
优选的，所述应用还包括：
(3)发酵结束后，将发酵液进行离心，取离心后的沉淀物在50～60℃下烘干至恒重，即得所需的单细胞蛋白。
优选的，所述外加碳源为葡萄糖、木糖、醋酸钠、乳酸钠、蔗糖中的一种或几种的混合物。
优选的，所述外加碳源为葡萄糖。
优选的，所述调节pH所用试剂为醋酸。
优选的，所述外加碳源调节碳氮比为6:1。
优选的，所述pH调节为5.5。
本发明具有以下有益效果：
本发明提供了一株新的白地霉，其在高氨氮沼液环境中生长良好，并可利用高氨氮沼液中的有机碳、氨氮及其它营养元素高效生产单细胞蛋白。蛋白含量占菌体干重的32％～45％，可作为优质蛋白饲料。同时，本发明还提供了一种利用白地霉发酵处理高氨氮沼液的方法，不仅可有效去除沼液中的氨氮，将氨氮含量降低至50mg/L以下；还可以短期内(5～8天)快速生产大量单细胞蛋白，DCW浓度最终高达20g/L以上，远优于一般的5～7g/L的水平。
与传统硝化-反硝化两段式生物处理工艺相比，本发明仅需要一段生物反应，运行成本低，操作方便，对沼液的处理效果优异，并可提供高经济价值产品，为沼液处理提供了整体化、经济化解决方案。
附图说明
图1为各菌株在盐酸调节的鸡粪沼液培养基中培养后培养基中还原糖含量变化示意图；
图2为各菌株在醋酸调节的鸡粪沼液培养基中培养后的菌体干重含量变化示意图；
图3为各菌株在醋酸调节的鸡粪沼液培养基中培养后培养基中还原糖含量变化示意图；
图4为各菌株在醋酸调节的鸡粪沼液培养基中培养后培养基中氨氮含量变化示意图；
图5为各菌株在碳氮比为10:1、不同氨氮浓度下的DCW情况示意图；
图6为各菌株在碳氮比为10:1、不同氨氮浓度下培养基中还原糖变化情况示意图；
图7为各菌株在碳氮比为10:1、不同氨氮浓度下培养基中氨氮变化情况示意图；
图8为各菌株在碳氮比为6:1、不同氨氮浓度下的DCW情况示意图；
图9为各菌株在碳氮比为6:1、不同氨氮浓度下培养基中还原糖变化情况示意图；
图10为各菌株在碳氮比为6:1、不同氨氮浓度下培养基中氨氮变化情况示意图；
图11为白地霉菌株显微镜示意图；
图12为外加不同碳源对白地霉的DCW情况影响示意图；
图13为转速对白地霉的DCW情况影响示意图；
图14为pH对白地霉的DCW情况影响示意图；
图15为温度对白地霉的DCW情况影响示意图；
图16为接种量对白地霉的DCW情况影响示意图。
具体实施方式
本发明涉及的培养基如下：
1、酵母培养基：蛋白胨10g，酵母粉5g，葡萄糖10g，加蒸馏水定容至1000mL。(定容前加琼脂15g即为对应的固体酵母培养基)。
2、不同碳源选择培养基：20g葡萄糖，3.0g NaNO3,0.5g MgSO4·7H2O,0.5g KCl,0.01g FeSO4·7H2O,1.0g K2PO4,1000mL水。
3、鸡粪沼液培养基：取鸡粪沼液，测定初始数据，其中的氨氮含量为4500mg/L，COD含量为16440mg/L，pH为7.3～7.5。将鸡粪沼液过滤，115℃、30min灭菌，外加葡萄糖以调节培养体系的C/N(分别调节为10:1和6:1)。使用1mol/L的HCl或醋酸(分析纯)调节pH至所需值(根据后文具体需要调节pH)。
本发明涉及的发酵和制备单细胞蛋白的方法主要包括如下步骤：
(1)取沼液，过滤去除大颗粒杂质，外加碳源调节碳氮比为6:1～10:1，调节pH为5.5～7，获得发酵底物。
(2)在所述发酵底物中接种生长至对数期的白地霉或蜂蜜酵母，接种量为发酵底物体积的2％～10％。接种后，在20～30℃下进行发酵。
(3)发酵结束后，将发酵液进行离心，取离心后的沉淀物在50～60℃下烘干至恒重，即得所需的单细胞蛋白。下面结合具体实施例对本发明进行进一步阐述。应当理解的是，下述各实施例仅旨在便于更好地理解本发明，而并非对本发明的限制。由于实验本身的实践特性和实验时间、精力、成本所限，发明人当然不可能全部验证和体现可替换的技术细节。但本领域技术人员都可以在理解本发明的基础上进行进一步筛选和等同替换获得改变的技术，其均构成对本发明技术的侵犯。
实施例一：菌株的筛选
1、本发明共测试了数十种各类可能能够用于高氨氮沼液处理中的菌株，本实施例选取其中具有代表性的14种进行展示，各菌株的名称、来源及培养条件等如表1所示。
表1各菌株情况展示
2、各菌株在鸡粪沼液培养基中的生长情况展示。分别将表1中的14种菌接种至氨氮含量为1000mg/L的鸡粪沼液培养基中(使用纳氏试剂光度法测定氨氮含量)，使用葡萄糖调节C:N＝10:1,使用HCl调节pH为7.0，每组设置3个平行。以相同条件、相同培养基，不接种菌株作为空白对照组(CK)。培养至2天和4天时，分别对各组培养基进行取样，使用3,5二硝基水杨酸法测定各组的还原糖含量，结果如图1所示。
结果显示，在培养48h后，组4、5、8、10对应的沼液中的还原糖依然还有5g/L以上，其他各组的还原糖均已经不足0.5g/L。这表明大多数被测菌株在高氨氮沼液环境下会快速发生糖降解，不利于制备SCP(single cell protein，单细胞蛋白)，也不利于高效处理沼液中的氨氮；而组4、5、8、10的菌株在高氨氮沼液中具有较强的生长潜力。
另外还需要说明的是，本试验中发现，使用HCl调节培养基的pH后，所有组别的培养基中，pH均在24h内快速下降至2.4～3.5之间，不利于菌株的正常生长。因此，与48h相比，96h时各组的还原糖情况均变化不大。故后续试验中均使用醋酸，以缓慢调节pH；另外，醋酸也可以作为外加碳源，为菌株提供一定的碳源。
3、调节鸡粪沼液培养基的氨氮含量为1000mg/L，使用葡萄糖调节C:N＝10:1,灭菌后，使用醋酸调节pH至5.5，每组设置3个平行。使用醋酸时，将pH调节为5.5而非7.5的原因在于：醋酸具有一定的缓释效果，且对细胞的毒副作用更小，可以一开始将pH调节到相对更低的环境，为菌株提供更大的提升pH的空间。如果使用HCl调节时，也在一开始即将pH调节到5.5，那么体系内的pH会快速降低到3以下，不利于菌株的正常生长。
分别将表1中的14种菌接种至各组鸡粪沼液培养基中。以相同条件、相同培养基，不接种菌株作为空白对照组(CK)。培养至2天和4天时，分别对各组培养基进行取样，测定各组培养基的pH、菌体干重(DCW)、培养基中还原糖含量和培养基中氨氮含量。所述菌体干重测量方法为：将培养基离心后，将沉淀在55℃下烘干至恒重。pH变化结果如表2，DCW含量变化如图2所示，还原糖变化情况如图3所示，氨氮变化情况如图4所示。
表2各组培养基中pH变化情况
| 组别 | pH-2d | pH-4d |
| 组1 | 4.37-4.42 | 4.23-4.25 |
| 组2 | 5.24-5.82 | 7.23-7.32 |
| 组3 | 6.53-6.78 | 5.84-6.33 |
| 组4 | 4.43-4.51 | 4.76-4.8 |
| 组5 | 5.66-6.10 | 6.68-6.93 |
| 组6 | 6.71-6.72 | 6.31-6.35 |
| 组7 | 6.49-6.56 | 5.84-6.4 |
| 组8 | 5.46-5.86 | 7.12-7.55 |
| 组9 | 6.11-6.30 | 6.71-6.86 |
| 组10 | 5.52-5.70 | 6.04-6.92 |
| 组11 | 7.02-7.34 | 7.67-7.70 |
| 组12 | 6.56-6.62 | 6.00-6.17 |
| 组13 | 4.83-4.91 | 5.42-5.66 |
| 组14 | 4.81-4.96 | 4.78-5.09 |
从表2可以看出，与使用HCl调节pH后，各组pH均快速、急剧下降所不同的是，使用醋酸调节pH后，组2、5、8、10、11的pH呈持续上升的趋势。这有可能是醋酸不仅起到了缓慢、持续调节pH的作用，还起到了一定外加碳源的作用。发酵过程中，菌株将醋酸中产生酸性的部分C消耗了。一方面证明上述菌株分解碳源的能力更强，生长潜力大，另一方面也表明醋酸确实具有调节pH和补充碳源的双重作用。使用醋酸调节pH，用量低于HCl，效果更优，且可减少外接碳源的用量。
从图2可以看出，在相同环境下，组5、10的DCW明显优于其他组别，均达到了11g/L以上，分别为11.74g/L和12.05g/L。从图3可以看出，使用醋酸调节pH后，各菌株均可在一定程度上继续生长并消耗还原糖，但大部分菌株的生长情况并不理想，而组4、5、8、10的菌株生长情况明显更为优越，培养基中的该4组的还原糖消耗率分别为：55.79％、50.99％、77.3％和58.12％。从图4可以看出，除组1、14外，其余菌株均可在一定程度上降低培养体系中的氨氮含量。其中，组5、7、10的氨氮含量降低最为明显，分别为：78.30％、77.37％和80.04％。
综合上述情况，选择组5、7、8、10对应菌株继续后续试验。
4、各菌株耐高氨氮的能力各不相同，当沼液中氨氮浓度较高时，大部分菌株均无法生存。这是沼液天生具有杀菌能力的原因之一，但这一特性同时也限制了对沼液的无害化处理和资源化利用。同时，沼液中的碳氮比较低，也进一步限制了微生物的生存，为此，往往需要外加碳源。但添加过多碳源也意味着发酵成本大幅增加，因此，发明人在前述试验结果基础上，进一步进行筛选，以期获得具有耐高氨氮浓度且可在相对较低的碳氮比环境中生长良好的菌株。
使用葡萄糖调节鸡粪沼液培养基中碳氮比分别为10:1(高碳氮比)和6:1(低碳氮比)，并调节氨氮含量分别为1000mg/L、2000mg/L、3000mg/L和4000mg/L。将组5、7、8、10对应的菌株分别接种上述具有不同碳氮比且不同氨氮含量的培养基中，每个处理设置3个平行。以未接种菌株的相同培养基作为空白对照组(CK)。分别于2天和4天后对各培养基进行取样，测定pH、培养基中的氨氮含量和培养基中的还原糖含量，同时在4天后测定DCW。
(1)碳氮比为10:1处理下，培养4天后，不同氨氮浓度下各组的DCW情况如图5所示。不同氨氮浓度下各组培养基中还原糖的变化情况如图6所示。不同氨氮浓度下各组培养基中氨氮变化情况如图7所示。
如图5所示，在较高碳氮比环境下，组5、10的菌株可耐受高氨氮浓度，且较高的氨氮浓度反而可带来更高的DCW。如图6所示，还原糖的变化与各菌株的生长规律一致，组7的菌株很快的将体系中的还原糖降解完，生长潜力不佳。而组5、8、10均展现出良好的生长潜力。如图7所示，各组均能显著降低培养基中的氨氮含量。
(2)碳氮比为6:1处理下，培养4天后，不同氨氮浓度下各组的DCW情况如图8所示。不同氨氮浓度下各组培养基中还原糖的变化情况如图9所示。不同氨氮浓度下各组培养基中氨氮变化情况如图10所示。在较低碳氮比环境中，各组生长情况(绝对值)均略弱于碳氮比为10:1的处理，组5、10仍然表现出良好的耐高氨氮的能力，生长良好。碳氮比为10:1时，产SCP和降氨氮的相对效率低于碳氮比为6:1的情况，并综合考虑到外加碳源的成本，后续试验时选用碳氮比为6:1的外加碳源量。
至此，发明人从众多菌株中筛选出2株菌株：组5对应菌株(白地霉)和组10对应菌株(蜂蜜酵母)。这2株菌株耐高氨氮能力强，在沼液环境中生长良好，可高效降低沼液中的氨氮含量，并利用沼液大量制备SCP。本发明主要提供白地霉菌株的相关应用，下文各实施例主要围绕白地霉进行。
实施例二：白地霉菌株的获得、纯化和鉴定
取贵阳市某酒厂的酒糟样品，装入有80mL无菌水的三角瓶中，在28℃条件下160rpm摇床培养。培养12h后，在无菌间依次进行浓度为101～107的梯度稀释，选取浓度为106和107的稀释液，在固体酵母培养基上进行三次以上涂布。培养24h后，用接种环挑取单菌落，再用平板划线法分离纯化单个菌落。重复挑取单菌落并分离纯化三次以上，直至菌落形态一致，镜检得纯化菌种，最后转接到固体酵母培养基斜面的试管中。
将分离纯化的菌株在显微镜下观察，结果如图11所示：该菌为长杆状，长2.5～7μm，菌落呈圆形，表面湿润凸起，边缘呈细丝状，颜色为白色；适宜生长pH为4.5～7.5；生长温度为25～30℃。菌群进行分裂生殖。
采用DP336试剂盒，提取纯菌株的基因组，经选用真菌通用引物ITS1和ITS4进行PCR扩增，然后测序分析，结果如SEQ ID No.1所示。测序结果经NCBI数据库中比对，鉴定该菌株为白地霉(Galactomyces candidum)，命名为白地霉(ZJ)，于2019年09月09日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101),保藏编号为：CGMCC No.18570。
实施例三：外加不同碳源对发酵的影响
选择5号察氏培养基作为选择培养基，将其中的碳源(葡萄糖)分别替换成等量碳源的含木糖、乳酸钠、醋酸钠、蔗糖(所述等量碳源，具体指等摩尔质量的C)。将菌体浓度为1.25×109CFU/mL的白地霉2.5ml(即4％的接种量)分别接种至上述含不同碳源的5号察氏培养基中，于30℃下培养，各处理分别设置3个平行。需要说明的是，全文所述的接种均指接种生长至对数期的微生物，接种量的％均指菌体体积占接种底物体积的百分比。全文如无特殊说明，接种量均为上述接种量。并以相同培养基、相同环境且未接种菌株作为空白对照组(CK)。分别于接种后24h和48h测定各组中的DCW。结果如图12所示。从图12可以看出，白地霉最适碳源的排序：葡萄糖＞木糖＞醋酸钠≥乳酸钠＞蔗糖。
实施例四：培养中其它条件对发酵的影响
1、转速的影响。
使用葡萄糖作为外加碳源，调节碳氮比为10:1，使用醋酸调节pH为5.5，在初始氨氮含量为2000mg/L的鸡粪沼液培养基中，以4％的接种量分别接种白地霉种子液，并分别在120、160、200rpm下进行培养，培养温度为30℃。各组设置3个平行，同时设置不接种菌株，其余条件相同的培养基作为空白对照组(CK)。分别于培养4天后测定DCW。
各组4天后的DCW如图13所示。结果显示，转速对白地霉的DCW无显著影响，这可能是因为白地霉前期生长较快，很快就达到了生长平台期，故转速影响较小。因此，在实际生长中，可以降低搅拌速度或旋转速度，或定期搅拌或旋转，两次搅拌或旋转的中途可以暂停搅拌或旋转，从而降低生产成本。
2、初始pH的影响。
使用葡萄糖作为外加碳源，调节碳氮比为10:1，使用醋酸调节pH分别为4.5、5.5、6.5、7.5、8.5，在初始氨氮含量为2000mg/L的鸡粪沼液培养基中，将白地霉分别以4％的接种量接入各pH处理组试样中。在120rpm下进行培养，培养温度为30℃。各组设置3个平行，同时设置不接种菌株，其余条件相同的培养基作为空白对照组(CK)。分别于培养2天后测定DCW和SCP。白地霉的结果如图14所示。初始pH为5.5时，DCW和SCP最高：白地霉的DCW和SCP分别为7.97g/L和36.7％。需要说明的是，2天后体系pH为7.5的菌株生长较pH为5.5的体系有显著的抑制，不利于菌体的高产。故选择pH为5.5作为最优的初始pH。
3、培养温度的影响。
整个发酵过程中，通过温控系统控温，分别控制为20℃、25℃、30℃、35℃、40℃。使用葡萄糖作为外加碳源，调节碳氮比为10:1，使用醋酸调节pH为5.5，在初始氨氮含量为2000mg/L的鸡粪沼液培养基中，将白地霉分别以4％的接种量接入各温度处理组试样中。在120rpm下进行培养，各组设置3个平行，同时设置不接种菌株，其余条件相同的培养基作为空白对照组(CK)。分别于培养2天后测定DCW和SCP。白地霉的结果如图15所示。温度为30℃时，DCW和SCP最高：白地霉的DCW和SCP分别为7.74g/L和36.5％。
4、接种量的影响
使用葡萄糖作为外加碳源，调节碳氮比为10:1，使用醋酸调节pH为5.5，在初始氨氮含量为2000mg/L的鸡粪沼液培养基中，分别接入2％、4％、6％、8％、10％的白地霉(接种量的定义见上文)。在120rpm、30℃下进行培养，各组设置3个平行，同时设置不接种菌株，其余条件相同的培养基作为空白对照组(CK)。分别于培养2天后测定DCW和SCP。白地霉的结果如图16所示。白地霉的接种量在4％时DCW和SCP最高，分别为7.85g/L和36.81％。
实施例五：鸡粪沼液发酵效果展示
取鸡粪沼液，滤出大颗粒杂质后。调节初始氨氮含量为2000mg/L左右，随后外加葡萄糖调节碳氮比为6:1，加醋酸调节pH为5.5，分别接入4％的白地霉种子液，在120rpm、30℃下培养4天，各组设置3个平行，同时设置不接种菌株，其余条件相同的培养基作为空白对照组(CK)。4天后，取上清液测定氨氮含量、DCW及SCP含量。并测定Ca、Co、Cu、Fe、Mg、Mn、Ni、Pb和Zn的含量。
处理组中，DCW含量为：13.73g/L，SCP含量为：38.95％，氨氮去除率为70.2％。其余结果如表3所示。
表3白地霉处理鸡粪沼液效果展示表
实施例六：猪场沼液发酵效果展示
取猪场沼液，滤出大颗粒杂质后。随后外加葡萄糖调节碳氮比为6:1，加醋酸调节pH为6.5，分别接种白地霉，接种量为4％，在120rpm、30℃下培养4天，各组设置3个平行，同时设置不接种菌株，其余条件相同的培养基作为空白对照组(CK)。以接种本实验室购买的产朊假丝酵母菌(CGMCC No.2.615)作为阳性对照组。4天后，取上清液测定氨氮含量、DCW及SCP含量。需要说明的是，因为猪场沼液的初始氨氮含量远低于鸡粪沼液，本实施例中，测定初始氨氮含量约为1100mg/L。所以使用猪场沼液发酵时，发酵体系中pH上升速率低于鸡粪沼液的发酵体系。因此，为了减少加入醋酸的量，本实施例中初始pH调节为6.5而非5.5。处理组中，氨氮去除率为81.19％。其余结果如表4所示。
表4白地霉处理餐厨沼液效果展示表
| 组别 | 氨氮(mg/L) | DCW(g/L) | SCP(％) |
| 空白对照组 | 893 | 0.44 | 14.8 |
| 阳性对照组 | 532 | 4.32 | 32.5 |
| 处理组 | 168 | 9.69 | 41.2 |
实施例七：二次发酵效果展示
以实施例五4天发酵结束后的离心上清液50mL为发酵原料，灭菌后，分别接种4％的白地霉种子液进行发酵，发酵条件同实施例五。发酵2天后，测定离心上清液中的氨氮浓度、DCW及SCP含量。结果如表5所示。白地霉对氨氮的再次的利用率为：49.75％。
表5二次发酵效果展示表
综合实施例五和实施例七，白地霉的DCW总和可达20.37g/L。
实施例八：SCP的获得
发酵结束后，将发酵液在2500rpm下离心5min，随后于55℃下进行烘干，即可得SCP。产品具有明显的饲料香味，可作为饲料使用。
序列表
<110> 中国科学院成都生物研究所
<120> 一株白地霉及用其处理高氨氮沼液产单细胞蛋白的方法
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 358
<212> DNA
<213> 白地霉(Galactomyces.candidum)
<400> 1
tccgtagggt gacctgcgga aggatcatta tgaattataa atatttgtga atttaccaca 60
gcaaacaaaa atcatacaat caaaacaaaa ataattaaaa cttttaacaa tggatctctt 120
ggttctcgta tcgatgaaga acgcagcgaa acgcgatatt tcttgtgaat tgcagaagtg 180
aatcatcagt ttttgaacgc acattgcact ttggggtatc ccccaaagta tacttgtttg 240
agcgttgttt ctctcttgga attgctttgc tcttctaaaa tttcgaatca aattcgtttg 300
aaaaacaaca ctattcaacc tcagatcaag taggattacc cgctgaactt aagcatat 358
Claims (10)
1.一株白地霉，其特征在于：于2019年09月09日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.18570。
2.一株白地霉，其特征在于：其序列如SEQ ID No.1所示。
3.权利要求1或2所述白地霉在处理沼液中的应用。
4.根据权利要求3所述的白地霉在处理沼液中的应用，其特征在于：所述应用包括如下步骤：
(1)取沼液，过滤去除大颗粒杂质，外加碳源调节碳氮比为6:1～10:1，调节pH为5.5～7，获得发酵底物；
(2)在所述发酵底物中接种生长至对数期的所述白地霉，随后在20～30℃下进行发酵。
5.根据权利要求4所述的白地霉在处理沼液中的应用，其特征在于：所述应用还包括：
(3)发酵结束后，将发酵液进行离心，取离心后的沉淀物在50～60℃下烘干至恒重，即得所需的单细胞蛋白。
6.根据权利要求4所述的白地霉在处理沼液中的应用，其特征在于：所述外加碳源为葡萄糖、木糖、醋酸钠、乳酸钠、蔗糖中的一种或几种的混合物。
7.根据权利要求6所述的白地霉在处理沼液中的应用，其特征在于：所述外加碳源为葡萄糖。
8.根据权利要求4所述的白地霉在处理沼液中的应用，其特征在于：所述调节pH所用试剂为醋酸。
9.根据权利要求4所述的白地霉在处理沼液中的应用，其特征在于：所述外加碳源调节碳氮比为6:1。
10.根据权利要求4所述的白地霉在处理沼液中的应用，其特征在于：所述pH调节为5.5。
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| CN110982706B (zh) | 2021-08-17 |
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