CN113912686B - OsRBP2蛋白及其编码基因和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了OsRBP2蛋白及其编码基因和应用。本发明提供了一种蛋白质，为序列表中序列1所示的OsRBP2蛋白。编码OsRBP2蛋白的核酸分子也属于本发明的保护范围。本发明还保护一种制备转基因植物的方法，包括如下步骤：在受体植物中导入抑制OsRBP2基因表达的物质，得到转基因植物。本发明还保护一种植物育种方法，包括如下步骤：对受体植物中的OsRBP2基因进行基因编辑，得到基因编辑植株。与所述受体植物相比，所述转基因植物/基因编辑植株具有如下五种表型中的至少一种：衰老提前、株高增高、穗长缩短、结实率降低、粒重降低。本发明可用于植物性状改良，对于植物育种特别是水稻育种，具有重大的应用推广价值。

Description

OsRBP2蛋白及其编码基因和应用

技术领域

本发明涉及OsRBP2蛋白及其编码基因和应用。

背景技术

水稻原产于中国和印度。是世界主要粮食作物之一。中国水稻播种面占全国粮食作物的1/4，而产量则占一半以上。栽培历史已有14000～18000年。为重要粮食作物；除食用颖果外，可制淀粉、酿酒、制醋，米糠可制糖、榨油、提取糠醛，供工业及医药用；稻秆为良好饲料及造纸原料和编织材料，谷芽和稻根可供药用。

近年来，生物技术的迅速发展大大地推动了植物育种研究手段的革新与研究水平的不断提高，植物抗病虫、抗除草剂生物技术育种已开始进入实用化阶段。利用生物技术手段将外源杀虫、抗除草剂基因导入植物基因组内，打破了植物种属甚至物种之间难以杂交的天然屏障，实现了抗虫、抗除草剂基因的转移，从而使植物迅速地、定向地获得抗虫性及机械化除草，同时又能保留原有的良好农艺性状。由于转基因玉米的每株植株都具有相当程度的抗性，因而其抗虫、抗除草剂效果比人工防治防治效果要好且稳定，还能够节省人力和物力的投入，有效的节约社会资源。其他农艺性状改良转基因植物进展及应用不如抗虫、抗除草剂性状理想，主要是由于没有优良的性状改良基因，大多农艺性状主要是有一些微效的多基因控制所致，一直没有理想的基因进行操作。

发明内容

本发明的目的是提供OsRBP2蛋白及其编码基因和应用。

本发明提供了一种蛋白质，命名为OsRBP2蛋白，获自水稻(Oryza sativa)，为如下(a1)或(a2)或(a3)或(a4)：

(a1)序列表中序列1所示的蛋白质；

(a2)在(a1)所述蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白；

(a3)将(a1)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与植物发育相关的蛋白质；

(a4)来源于水稻且与(a1)具有98％以上同一性且与植物发育相关的蛋白质。

标签具体如表1所示。

表1标签的序列

编码OsRBP2蛋白的核酸分子也属于本发明的保护范围。

编码OsRBP2蛋白的核酸分子具体可为RNA分子或DNA分子。

编码OsRBP2蛋白的DNA分子，即OsRBP2基因。

编码OsRBP2蛋白的RNA分子，即OsRBP2基因转录得到的RNA分子。

所述OsRBP2基因具体可为如下(b1)或(b2)或(b3)或(b4)：

(b1)编码区如序列表中序列2所示的DNA分子；

(b2)序列表中序列3所示的DNA分子；

(b3)来源于水稻且与(b1)或(b2)具有95％以上同一性且编码所述蛋白质的DNA分子；

(b4)在严格条件下与(b1)或(b2)限定的核苷酸序列杂交且编码所述蛋白质的DNA分子。

上述严格条件可为用6×SSC，0.5％SDS的溶液，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。

含有所述OsRBP2基因的表达盒、重组载体或重组微生物均属于本发明的保护范围。

本发明还保护OsRBP2蛋白的应用，为如下(c1)、(c2)、(c3)、(c4)和(c5)中的至少一种：

(c1)调控植物的衰老进程；

(c2)调控植物株高；

(c3)调控植物穗长；

(c4)调控植物结实率；

(c5)调控植物粒重。

本发明还保护OsRBP2基因的应用，为如下(d1)、(d2)、(d3)、(d4)和(d5)中的至少一种：

(d1)培育衰老进程改变的转基因植物；

(d2)培育株高性状改变的转基因植物；

(d3)培育穗长性状改变的转基因植物；

(d4)培育结实率性状改变的转基因植物；

(d5)培育粒重性状改变的转基因植物。

本发明还保护抑制OsRBP2蛋白的物质在植物育种的应用，所述育种的目标为如下(e1)、(e2)、(e3)、(e4)和(e5)中的至少一种：

(e1)培育早衰的植物；

(e2)培育株高增高的植物；

(e3)培育穗长缩短的植物；

(e4)培育结实率降低的植物；

(e5)培育粒重降低的植物。

所述抑制OsRBP2蛋白为抑制OsRBP2蛋白的活性和/或降低OsRBP2蛋白的丰度。所述降低OsRBP2蛋白的丰度可通过使OsRBP2蛋白不能被表达实现。

本发明还保护抑制编码OsRBP2蛋白的核酸分子的物质在植物育种的应用，所述育种的目标为如下(e1)、(e2)、(e3)、(e4)和(e5)中的至少一种：

(e1)培育早衰的植物；

(e2)培育株高增高的植物；

(e3)培育穗长缩短的植物；

(e4)培育结实率降低的植物；

(e5)培育粒重降低的植物。

所述抑制编码OsRBP2蛋白的核酸分子为抑制编码OsRBP2蛋白的核酸分子的活性和/或降低编码OsRBP2蛋白的核酸分子的丰度。降低编码OsRBP2蛋白的核酸分子的丰度可通过使RNA不能被转录实现。降低编码OsRBP2蛋白的核酸分子的丰度可通过基因编辑实现。所述基因编辑具体可为基于Cas9系统的基因编辑。Cas9系统中，sgRNA中的靶序列结合区如序列表的序列7所示。Cas9系统中，sgRNA如序列表的序列6所示。所述基因编辑具体通过在植物中导入重组质粒SG2027实现。

本发明还保护对OsRBP2基因进行基因编辑的物质的应用，为如下(f1)、(f2)、(f3)、(f4)和(f5)中的至少一种：

(f1)培育衰老进程提前的基因编辑植株；

(f2)培育株高增高的基因编辑植株；

(f3)培育穗长缩短的基因编辑植株；

(f4)培育结实率降低的基因编辑植株；

(f5)培育粒重降低的基因编辑植株。

所述基因编辑具体可为基于Cas9系统的基因编辑。对OsRBP2基因进行基因编辑的物质具体可为sgRNA和Cas9蛋白。对OsRBP2基因进行基因编辑的物质具体可为编码sgRNA的DNA分子和编码Cas9蛋白的DNA分子。对OsRBP2基因进行基因编辑的物质具体可为具有编码sgRNA的DNA分子的表达载体和具有编码Cas9蛋白的DNA分子的表达载体。对OsRBP2基因进行基因编辑的物质具体可为具有编码sgRNA的DNA分子和编码Cas9蛋白的DNA分子的表达载体。sgRNA中的靶序列结合区如序列表的序列7所示。sgRNA如序列表的序列6所示。编码sgRNA的DNA分子如序列表的序列5所示。对OsRBP2基因进行基因编辑的物质具体为重组质粒SG2027。

本发明还保护一种制备转基因植物的方法，包括如下步骤：在受体植物中导入抑制OsRBP2基因表达的物质，得到转基因植物；与所述受体植物相比，所述转基因植物具有如下五种表型中的至少一种：衰老提前、株高增高、穗长缩短、结实率降低、粒重降低。所述抑制OsRBP2基因表达的物质可为编码sgRNA的DNA分子和编码Cas9蛋白的DNA分子。所述抑制OsRBP2基因表达的物质具有编码sgRNA的DNA分子的表达载体和具有编码Cas9蛋白的DNA分子的表达载体。所述抑制OsRBP2基因表达的物质可为具有编码sgRNA的DNA分子和编码Cas9蛋白的DNA分子的表达载体。所述抑制OsRBP2基因表达的物质具体可为重组质粒SG2027。sgRNA中的靶序列结合区如序列表的序列7所示。sgRNA如序列表的序列6所示。编码sgRNA的DNA分子如序列表的序列5所示。对OsRBP2基因进行基因编辑的物质具体为重组质粒SG2027。

本发明还保护一种植物育种方法，包括如下步骤：对受体植物中的OsRBP2基因进行基因编辑，得到基因编辑植株；与所述受体植物相比，所述基因编辑植株具有如下五种表型中的至少一种：衰老提前、株高增高、穗长缩短、结实率降低、粒重降低。对受体植物中的OsRBP2基因进行基因编辑具体通过Cas9系统实现。Cas9系统中，sgRNA中的靶序列结合区如序列表的序列7所示。Cas9系统中，sgRNA如序列表的序列6所示。对受体植物中的OsRBP2基因进行基因编辑具体通过导入重组质粒SG2027实现。所述基因编辑植株具体可为用“GCAGTGACAAGTCGTGCTGTC”替换基因组DNA中的OsRBP2基因的“GCAGTGACAAGTCGTGCGTC”，且为纯合型的植株。

以上任一所述Cas9蛋白为序列表的序列4中第2697-6968位核苷酸编码的蛋白质。

以上任一所述重组质粒SG2027如序列表的序列4所示。

以上任一所述植物为单子叶植物或双子叶植物。以上任一所述植物为禾本科植物。以上任一所述植物为稻属植物。以上任一所述植物为水稻，例如水稻日本晴。

本发明可用于植物性状改良，对于植物育种特别是水稻育种，具有重大的应用推广价值。

附图说明

图1为重组质粒SG2027的结构示意图。

图2为突变位点及其周边核苷酸的测序结果。

图3为植株的照片。

图4为植株的株高测量结果。

图5为植株的穗的照片。

图6为穗长的结果。

图7为结实率的结果。

图8为千粒重的结果。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

实施例

OsRBP2蛋白如序列表的序列1所示。水稻日本晴的cDNA中，编码OsRBP2蛋白的CDS如序列表的序列2所示。水稻日本晴的基因组DNA中，编码OsRBP2蛋白的基因如序列表的序列3所示。

一、构建重组质粒

构建重组质粒SG2027。重组质粒SG2027的结构示意图见图1。经全质粒测序，重组质粒SG2027如序列表的序列4所示。序列表的序列4中，第2697-6968位核苷酸编码Cas9蛋白。重组质粒SG2027中，sgRNA的编码区如序列表的序列5所示。相应的，sgRNA如序列表的序列6所示，sgRNA中的靶序列结合区如序列表的序列7所示。

二、进行遗传转化并获得再生植株

将重组质粒SG2027导入农杆菌EHA105，得到重组农杆菌。采用农杆菌浸染法，将重组农杆菌对水稻日本晴的胚性愈伤组织进行遗传转化，然后筛选抗性愈伤组织(抗性筛选采用100mg/L潮霉素)，然后进行分化再生培养，然后进行生根培养，得到再生植株。

三、获得转基因植株及其后代植株

将步骤二得到的再生植株进行如下鉴定：取叶片，提取基因组DNA，采用GP7395-6439-F和GP7395-6439-R组成的引物对进行PCR扩增，然后将PCR扩增产物进行测序。

GP7395-6439-F：5’-ACAAGGAGAACGGCAAGGTC-3’；

GP7395-6439-R：5’-AGCAAACGGCATGATCCAAC-3’。

通过以上鉴定，从步骤二得到的再生植株中筛选得到一个纯合突变型植株(即两条染色体发生的突变一致)，命名为OsRBP2-1植株。

经测序鉴定，与水稻日本晴的基因组DNA相比，OsRBP2-1植株的差异仅在于在编码OsRBP2蛋白的基因中发生了1个核苷酸“T”的插入(引起了移码突变，并提前终止)，该突变位点及其周边核苷酸的测序结果(反向互补序列测序结果)见图2。

OsRBP2-1植株自交并收获种子，将种子培育为植株，即为T1代植株。T1代植株自交并收获种子，将种子培育为植株，即为T2代植株。OsRBP2-1植株及其自交后代，称为OsRBP2-1株系。

四、性状比较

供试植株为：水稻日本晴植株(用Nip表示)、OsRBP2-1株系的T2代植株(用OsRBP2表示)。

在平行条件下培养供试植株。成熟期，观察植株表型和植株穗表型，测量植株的株高、穗长、结实率和千粒重。定量数据均取10株植株的平均值。

成熟期植株的照片见图3。OsRBP2-1株系植株大量叶片为黄色，呈现显著的早衰性状。水稻日本晴植株的株高为108cm，OsRBP2-1株系植株的株高为115cm，见图4。OsRBP2-1株系植株的株高高于日本晴植株。

成熟期植株的穗的照片见图5。水稻日本晴植株的穗长为22.8cm，OsRBP2-1株系植株的穗长为17.4cm，见图6。OsRBP2-1株系植株的穗长短于日本晴植株。

结实率结果见图7。OsRBP2-1株系植株的结实率低于日本晴植株。

千粒重结果见图8。OsRBP2-1株系植株的千粒重低于日本晴植株。

                         SEQUENCE LISTING

<110>  中国农业科学院生物技术研究所

<120>  OsRBP2蛋白及其编码基因和应用

<130>  GNCYX200450

<160>  7

<170>  PatentIn version 3.5

<210>  1

<211>  220

<212>  PRT

<213>  Oryza sativa

<400>  1

Met Ala Asp Lys Glu Pro Val Val Asp Arg Pro Glu Asp Glu Glu Glu

1               5                   10                  15

Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Glu Glu Glu Asp Thr Gly

            20                  25                  30

Ala Gln Val Ala Pro Ile Val Arg Leu Glu Glu Val Ala Val Thr Thr

        35                  40                  45

Gly Glu Glu Asp Glu Asp Val Leu Leu Asp Met Lys Ala Lys Leu Tyr

    50                  55                  60

Arg Phe Asp Lys Glu Gly Asn Gln Trp Lys Glu Arg Gly Thr Gly Thr

65                  70                  75                  80

Val Lys Leu Leu Lys His Lys Glu Asn Gly Lys Val Arg Leu Val Met

                85                  90                  95

Arg Gln Ala Lys Thr Leu Lys Ile Cys Ala Asn His Leu Val Ala Ser

            100                 105                 110

Thr Thr Lys Met Gln Glu His Ala Gly Ser Asp Lys Ser Cys Val Trp

        115                 120                 125

His Ala Ala Asp Phe Ala Asp Gly Glu Leu Lys Glu Glu Met Phe Ala

    130                 135                 140

Ile Arg Phe Gly Ser Val Glu Asn Cys Lys Lys Phe Lys Asp Leu Val

145                 150                 155                 160

Glu Glu Ile Ser Glu Ser Leu Ala Lys Thr Glu Gly Lys Glu Thr Glu

                165                 170                 175

Glu Asp Ser Ser Ala Ala Gly Leu Leu Glu Lys Leu Ser Val Thr Glu

            180                 185                 190

Lys Lys Ser Glu Glu Val Ala Thr Lys Glu Glu Ser Thr Glu Ala Val

        195                 200                 205

Lys Glu Thr Asp Thr Lys Ser Ala Ala Thr Ser Glu

    210                 215                 220

<210>  2

<211>  663

<212>  DNA

<213>  Oryza sativa

<400>  2

atggcggaca aggagcccgt cgtggaccgc cccgaggacg aggaggaggc ctccgccgcc  60

gccgccgccg cgggcggcga ggaggaggac acgggcgccc aggtcgcccc catcgtgcgg 120

ctcgaggagg tcgccgtcac caccggcgag gaggacgagg acgtgctcct cgacatgaag 180

gcgaagcttt accggtttga caaggagggg aaccagtgga aggagcgggg gacgggcacc 240

gtcaagctcc tcaagcacaa ggagaacggc aaggtccgcc tcgtcatgcg ccaggccaag 300

acgctcaaga tctgcgcgaa ccacctagtt gcttcgacca cgaagatgca ggagcatgcg 360

ggcagtgaca agtcgtgcgt ctggcacgcg gcggacttcg ccgacggcga gcttaaggag 420

gagatgttcg caatccggtt tggctctgtc gaaaattgca agaaatttaa ggatttggtt 480

gaagagattt cggaatcact tgcaaagaca gaaggcaaag aaaccgagga agattcgtct 540

gccgctggcc ttctggagaa actcagcgta actgaaaaga agtctgagga agtggcgaca 600

aaggaggaat cgaccgaagc agtcaaggag actgacacca aatcagctgc cacctcagag 660

taa                                                               663

<210>  3

<211>  2707

<212>  DNA

<213>  Oryza sativa

<400>  3

ggcgcctctc ccgtggctaa caaaaaccct agcgcgccgc cccctcctcc tccttcttac  60

caccaacctc tccccccacg atcgccctcc tccccgaaac ttctggaacc gagagcagca 120

gacgttagct cttctcctcc gatggcggac aaggagcccg tcgtggaccg ccccgaggac 180

gaggaggagg cctccgccgc cgccgccgcc gcgggcggcg aggaggagga cacgggcgcc 240

caggtcgccc ccatcgtgcg gctcgaggag gtcgccgtca ccaccggcga ggaggacgag 300

gacgtgctcc tcgacatgtg agcccccccc gccgccgccg cttgctctct ctcctcttct 360

cccctctctt gtagctcgtg tgcttttttt cggttcgatc tggtggcgct gatccgcgcg 420

attgtttgca ggaaggcgaa gctttaccgg tttgacaagg aggggaacca gtggaaggag 480

cgggggacgg gcaccgtcaa gctcctcaag cacaaggaga acggcaaggt ccgcctcgtc 540

atgcgccagg ccaagacgct caagatctgc gcgaaccacc taggtttctc cccaaactaa 600

tttcctcctc cgaatttccc cgcctctctc tctctctctc tctctctctc tctctctctt 660

ctcttcgggg gaggattggt tacagatgtt gcaatcgcgg tgcctgtgta gtatagattc 720

atgtggccca ataacctcgt tgctaaggct ttgtgtcgtc ttgtgtgcag ttgcttcgac 780

cacgaagatg caggagcatg cgggcagtga caagtcgtgc gtctggcacg cggcggactt 840

cgccgacggc gagcttaagg aggagatgtt cgcaatccgg tttggctctg tcgaaagtga 900

gttgttcgct cccgtcgtct ctgggctaat ttgttctgtt gtagtcgtat ctactatgta 960

gtgtggttat ccttgcttgg tagtattatg ttggatcatg ccgtttgctt ttgttcatgg     1020

tggcaatagt agttttccta tctgagattc cgttgaacgt tgatgggttg caatttttgc     1080

ttaaccaaag ttgtgcttaa gaacatgttg aattgggggt acttgtgaat ctattggttg     1140

tttcatatga tgtttctatg aggagtgttg gatagctaac cttgaaggat tttcgcacgc     1200

tttggatcgg atgggtggga taacataggg gcaccaattc ccctggtctt ccctgtcatt     1260

acagttttca tctaattttt accttaataa ttattgagat ttgtcatgtt caattttaag     1320

attctgttat tagaccctat gaggtaaact ggagatggga caccatgatg tctctctgtt     1380

tatgttgcta cttgctagtc atgtggagaa caatcttact gaaacttaaa atgtacagaa     1440

taataatgaa ctagactggt ccatgatatt taacattctg tttacctcat gttttgtttt     1500

ttactccctc cgtttcacaa tgtaagtcat tctaatattt gccacattca tattgatgtt     1560

aatgaatcta gatatatata tccatctaga ttaattaaca tcaacatgaa tgtgggaaat     1620

gctagaataa acggaggaag tatgtggtaa agtacacttg atatgtataa ttcccaatgt     1680

atatttttgt gtagctatcc aggtgcacac tgttgtggta gaacacaggt tgtttgctct     1740

tgctggccat tggcttcttt aggcactatt gcggtagaat gatttaggta cacactgttg     1800

tggtagaaaa aataggcttt ctttgtgtta acacattttt agcagtcgtt acagattaca     1860

ttctttcatt ccttgtctgt aaaggtgaag tagtgaactt tgtaactttc atgtgtttgt     1920

gggggcatct ttttcttgaa tagtacaata taatttttgc cattagtaat gaacgtgttt     1980

attattatgt agctacaaca ttatgtctag tagcatctgc atgagcagca tcctcttcat     2040

ctactatgtt ccatttgttg cacatatttc attctgttat ttgaatcttc tgaaaactat     2100

ctgaatttaa ctgactaaga ttcctatcat ataattccta gattgcaaga aatttaagga     2160

tttggttgaa gagatttcgg aatcacttgc aaagacagaa ggcaaagaaa ccgaggaaga     2220

ttcgtctgcc gctggccttc tggagaaact cagcgtaact gaaaagaagt ctgaggaagt     2280

ggcgacaaag gaggaatcga ccgaagcagt caaggagact gacaccaaat cagctgccac     2340

ctcagagtaa tcagcagtgt gttacctcca gaacactagt gctcggtggg aagggtaagt     2400

ttgtcagtgc ttcccgtcta tggaagttaa aagtcgttag ccatgagcta tgttgagaac     2460

atttgggcag agtcggaaga tgtcagggtc atctttacct attgggcgtt cacttgttat     2520

tatttatttg tttgtgtatg gtttctgctt agagtcgcag gttggctttt ggatcaggtc     2580

tgttcggatc tcgcttttat cgagaacacg aaatgtagtc catgagtagg acgagttgga     2640

acgttttggg tccgagttac gagtatcttg acagcaagat gtttatggat gcgtgctatt     2700

catataa                                                          2707

<210>  4

<211>  15898

<212>  DNA

<213>  Artificial sequence

<400>  4

taaacgctct tttctcttag gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta  60

aactgaaggc gggaaacgac aatctgatcc aagctcaagc tgctctagca ttcgccattc 120

aggctgcgca actgttggga agggcgatcg gtgcgggcct cttcgctatt acgccagctg 180

gcgaaagggg gatgtgctgc aaggcgatta agttgggtaa cgccagggtt ttcccagtca 240

cgacgttgta aaacgacggc cagtgccaag cttggatcat gaaccaacgg cctggctgta 300

tttggtggtt gtgtagggag atggggagaa gaaaagcccg attctcttcg ctgtgatggg 360

ctggatgcat gcgggggagc gggaggccca agtacgtgca cggtgagcgg cccacagggc 420

gagtgtgagc gcgagaggcg ggaggaacag tttagtacca cattgcccag ctaactcgaa 480

cgcgaccaac ttataaaccc gcgcgctgtc gcttgtgtgc agtgacaagt cgtgcgtcgt 540

tttagagcta gaaatagcaa gttaaaataa ggctagtccg ttatcaactt gaaaaagtgg 600

caccgagtcg gtgctttttt gttttagagc tagaaatagc aagttaaaat aaggctagtc 660

cgtagcgcgt gcgccaattc tgcagacaaa tggccccggg cctgcaggtg cagcgtgacc 720

cggtcgtgcc cctctctaga gataatgagc attgcatgtc taagttataa aaaattacca 780

catatttttt ttgtcacact tgtttgaagt gcagtttatc tatctttata catatattta 840

aactttactc tacgaataat ataatctata gtactacaat aatatcagtg ttttagagaa 900

tcatataaat gaacagttag acatggtcta aaggacaatt gagtattttg acaacaggac 960

tctacagttt tatcttttta gtgtgcatgt gttctccttt ttttttgcaa atagcttcac     1020

ctatataata cttcatccat tttattagta catccattta gggtttaggg ttaatggttt     1080

ttatagacta atttttttag tacatctatt ttattctatt ttagcctcta aattaagaaa     1140

actaaaactc tattttagtt tttttattta ataatttaga tataaaatag aataaaataa     1200

agtgactaaa aattaaacaa atacccttta agaaattaaa aaaactaagg aaacattttt     1260

cttgtttcga gtagataatg ccagcctgtt aaacgccgtc gacgagtcta acggacacca     1320

accagcgaac cagcagcgtc gcgtcgggcc aagcgaagca gacggcacgg catctctgtc     1380

gctgcctctg gacccctctc gagagttccg ctccaccgtt ggacttgctc cgctgtcggc     1440

atccagaaat tgcgtggcgg agcggcagac gtgagccggc acggcaggcg gcctcctcct     1500

cctctcacgg cacggcagct acgggggatt cctttcccac cgctccttcg ctttcccttc     1560

ctcgcccgcc gtaataaata gacaccccct ccacaccctc tttccccaac ctcgtgttgt     1620

tcggagcgca cacacacaca accagatctc ccccaaatcc acccgtcggc acctccgctt     1680

caaggtacgc cgctcgtcct cccccccccc ccctctctac cttctctaga tcggcgttcc     1740

ggtccatggt tagggcccgg tagttctact tctgttcatg tttgtgttag atccgtgttt     1800

gtgttagatc cgtgctgcta gcgttcgtac acggatgcga cctgtacgtc agacacgttc     1860

tgattgctaa cttgccagtg tttctctttg gggaatcctg ggatggctct agccgttccg     1920

cagacgggat cgatttcatg attttttttg tttcgttgca tagggtttgg tttgcccttt     1980

tcctttattt caatatatgc cgtgcacttg tttgtcgggt catcttttca tgcttttttt     2040

tgtcttggtt gtgatgatgt ggtctggttg ggcggtcgtt ctagatcgga gtagaattct     2100

gtttcaaact acctggtgga tttattaatt ttggatctgt atgtgtgtgc catacatatt     2160

catagttacg aattgaagat gatggatgga aatatcgatc taggataggt atacatgttg     2220

atgcgggttt tactgatgca tatacagaga tgctttttgt tcgcttggtt gtgatgatgt     2280

ggtgtggttg ggcggtcgtt cattcgttct agatcggagt agaatactgt ttcaaactac     2340

ctggtgtatt tattaatttt ggaactgtat gtgtgtgtca tacatcttca tagttacgag     2400

tttaagatgg atggaaatat cgatctagga taggtataca tgttgatgtg ggttttactg     2460

atgcatatac atgatggcat atgcagcatc tattcatatg ctctaacctt gagtacctat     2520

ctattataat aaacaagtat gttttataat tattttgatc ttgatatact tggatgatgg     2580

catatgcagc agctatatgt ggattttttt agccctgcct tcatacgcta tttatttgct     2640

tggtactgtt tcttttgtcg atgctcaccc tgttgtttgg tgttacttct gcagccatgg     2700

actataagga ccacgacgga gactacaagg atcatgatat tgattacaaa gacgatgacg     2760

ataagatggc cccaaagaag aagcggaagg tcggtatcca cggagtccca gcagccgaca     2820

agaagtacag catcggcctg gacatcggca ccaactctgt gggctgggcc gtgatcaccg     2880

acgagtacaa ggtgcccagc aagaaattca aggtgctggg caacaccgac cggcacagca     2940

tcaagaagaa cctgatcgga gccctgctgt tcgacagcgg cgaaacagcc gaggccaccc     3000

ggctgaagag aaccgccaga agaagataca ccagacggaa gaaccggatc tgctatctgc     3060

aagagatctt cagcaacgag atggccaagg tggacgacag cttcttccac agactggaag     3120

agtccttcct ggtggaagag gataagaagc acgagcggca ccccatcttc ggcaacatcg     3180

tggacgaggt ggcctaccac gagaagtacc ccaccatcta ccacctgaga aagaaactgg     3240

tggacagcac cgacaaggcc gacctgcggc tgatctatct ggccctggcc cacatgatca     3300

agttccgggg ccacttcctg atcgagggcg acctgaaccc cgacaacagc gacgtggaca     3360

agctgttcat ccagctggtg cagacctaca accagctgtt cgaggaaaac cccatcaacg     3420

ccagcggcgt ggacgccaag gccatcctgt ctgccagact gagcaagagc agacggctgg     3480

aaaatctgat cgcccagctg cccggcgaga agaagaatgg cctgttcgga aacctgattg     3540

ccctgagcct gggcctgacc cccaacttca agagcaactt cgacctggcc gaggatgcca     3600

aactgcagct gagcaaggac acctacgacg acgacctgga caacctgctg gcccagatcg     3660

gcgaccagta cgccgacctg tttctggccg ccaagaacct gtccgacgcc atcctgctga     3720

gcgacatcct gagagtgaac accgagatca ccaaggcccc cctgagcgcc tctatgatca     3780

agagatacga cgagcaccac caggacctga ccctgctgaa agctctcgtg cggcagcagc     3840

tgcctgagaa gtacaaagag attttcttcg accagagcaa gaacggctac gccggctaca     3900

ttgacggcgg agccagccag gaagagttct acaagttcat caagcccatc ctggaaaaga     3960

tggacggcac cgaggaactg ctcgtgaagc tgaacagaga ggacctgctg cggaagcagc     4020

ggaccttcga caacggcagc atcccccacc agatccacct gggagagctg cacgccattc     4080

tgcggcggca ggaagatttt tacccattcc tgaaggacaa ccgggaaaag atcgagaaga     4140

tcctgacctt ccgcatcccc tactacgtgg gccctctggc caggggaaac agcagattcg     4200

cctggatgac cagaaagagc gaggaaacca tcaccccctg gaacttcgag gaagtggtgg     4260

acaagggcgc ttccgcccag agcttcatcg agcggatgac caacttcgat aagaacctgc     4320

ccaacgagaa ggtgctgccc aagcacagcc tgctgtacga gtacttcacc gtgtataacg     4380

agctgaccaa agtgaaatac gtgaccgagg gaatgagaaa gcccgccttc ctgagcggcg     4440

agcagaaaaa ggccatcgtg gacctgctgt tcaagaccaa ccggaaagtg accgtgaagc     4500

agctgaaaga ggactacttc aagaaaatcg agtgcttcga ctccgtggaa atctccggcg     4560

tggaagatcg gttcaacgcc tccctgggca cataccacga tctgctgaaa attatcaagg     4620

acaaggactt cctggacaat gaggaaaacg aggacattct ggaagatatc gtgctgaccc     4680

tgacactgtt tgaggacaga gagatgatcg aggaacggct gaaaacctat gcccacctgt     4740

tcgacgacaa agtgatgaag cagctgaagc ggcggagata caccggctgg ggcaggctga     4800

gccggaagct gatcaacggc atccgggaca agcagtccgg caagacaatc ctggatttcc     4860

tgaagtccga cggcttcgcc aacagaaact tcatgcagct gatccacgac gacagcctga     4920

cctttaaaga ggacatccag aaagcccagg tgtccggcca gggcgatagc ctgcacgagc     4980

acattgccaa tctggccggc agccccgcca ttaagaaggg catcctgcag acagtgaagg     5040

tggtggacga gctcgtgaaa gtgatgggcc ggcacaagcc cgagaacatc gtgatcgaaa     5100

tggccagaga gaaccagacc acccagaagg gacagaagaa cagccgcgag agaatgaagc     5160

ggatcgaaga gggcatcaaa gagctgggca gccagatcct gaaagaacac cccgtggaaa     5220

acacccagct gcagaacgag aagctgtacc tgtactacct gcagaatggg cgggatatgt     5280

acgtggacca ggaactggac atcaaccggc tgtccgacta cgatgtggac catatcgtgc     5340

ctcagagctt tctgaaggac gactccatcg acaacaaggt gctgaccaga agcgacaaga     5400

accggggcaa gagcgacaac gtgccctccg aagaggtcgt gaagaagatg aagaactact     5460

ggcggcagct gctgaacgcc aagctgatta cccagagaaa gttcgacaat ctgaccaagg     5520

ccgagagagg cggcctgagc gaactggata aggccggctt catcaagaga cagctggtgg     5580

aaacccggca gatcacaaag cacgtggcac agatcctgga ctcccggatg aacactaagt     5640

acgacgagaa tgacaagctg atccgggaag tgaaagtgat caccctgaag tccaagctgg     5700

tgtccgattt ccggaaggat ttccagtttt acaaagtgcg cgagatcaac aactaccacc     5760

acgcccacga cgcctacctg aacgccgtcg tgggaaccgc cctgatcaaa aagtacccta     5820

agctggaaag cgagttcgtg tacggcgact acaaggtgta cgacgtgcgg aagatgatcg     5880

ccaagagcga gcaggaaatc ggcaaggcta ccgccaagta cttcttctac agcaacatca     5940

tgaacttttt caagaccgag attaccctgg ccaacggcga gatccggaag cggcctctga     6000

tcgagacaaa cggcgaaacc ggggagatcg tgtgggataa gggccgggat tttgccaccg     6060

tgcggaaagt gctgagcatg ccccaagtga atatcgtgaa aaagaccgag gtgcagacag     6120

gcggcttcag caaagagtct atcctgccca agaggaacag cgataagctg atcgccagaa     6180

agaaggactg ggaccctaag aagtacggcg gcttcgacag ccccaccgtg gcctattctg     6240

tgctggtggt ggccaaagtg gaaaagggca agtccaagaa actgaagagt gtgaaagagc     6300

tgctggggat caccatcatg gaaagaagca gcttcgagaa gaatcccatc gactttctgg     6360

aagccaaggg ctacaaagaa gtgaaaaagg acctgatcat caagctgcct aagtactccc     6420

tgttcgagct ggaaaacggc cggaagagaa tgctggcctc tgccggcgaa ctgcagaagg     6480

gaaacgaact ggccctgccc tccaaatatg tgaacttcct gtacctggcc agccactatg     6540

agaagctgaa gggctccccc gaggataatg agcagaaaca gctgtttgtg gaacagcaca     6600

agcactacct ggacgagatc atcgagcaga tcagcgagtt ctccaagaga gtgatcctgg     6660

ccgacgctaa tctggacaaa gtgctgtccg cctacaacaa gcaccgggat aagcccatca     6720

gagagcaggc cgagaatatc atccacctgt ttaccctgac caatctggga gcccctgccg     6780

ccttcaagta ctttgacacc accatcgacc ggaagaggta caccagcacc aaagaggtgc     6840

tggacgccac cctgatccac cagagcatca ccggcctgta cgagacacgg atcgacctgt     6900

ctcagctggg aggcgacaaa aggccggcgg ccacgaaaaa ggccggccag gcaaaaaaga     6960

aaaagtaagg atcctgattg atcgatagag ctcgaatttc cccgatcgtt caaacatttg     7020

gcaataaagt ttcttaagat tgaatcctgt tgccggtctt gcgatgatta tcatataatt     7080

tctgttgaat tacgttaagc atgtaataat taacatgtaa tgcatgacgt tatttatgag     7140

atgggttttt atgattagag tcccgcaatt atacatttaa tacgcgatag aaaacaaaat     7200

atagcgcgca aactaggata aattatcgcg cgcggtgtca tctatgttac tagatcggga     7260

attcgtaatc atggtcatag ctgtttcctg tgtgaaattg ttatccgctc acaattccac     7320

acaacatacg agccggaagc ataaagtgta aagcctgggg tgcctaatga gtgagctaac     7380

tcacattaat tgcgttgcgc tcactgcccg ctttccagtc gggaaacctg tcgtgccagc     7440

tgcattaatg aatcggccaa cgcgcgggga gaggcggttt gcgtattggc tagagcagct     7500

tgccaacatg gtggagcacg acactctcgt ctactccaag aatatcaaag atacagtctc     7560

agaagaccaa agggctattg agacttttca acaaagggta atatcgggaa acctcctcgg     7620

attccattgc ccagctatct gtcacttcat caaaaggaca gtagaaaagg aaggtggcac     7680

ctacaaatgc catcattgcg ataaaggaaa ggctatcgtt caagatgcct ctgccgacag     7740

tggtcccaaa gatggacccc cacccacgag gagcatcgtg gaaaaagaag acgttccaac     7800

cacgtcttca aagcaagtgg attgatgtga taacatggtg gagcacgaca ctctcgtcta     7860

ctccaagaat atcaaagata cagtctcaga agaccaaagg gctattgaga cttttcaaca     7920

aagggtaata tcgggaaacc tcctcggatt ccattgccca gctatctgtc acttcatcaa     7980

aaggacagta gaaaaggaag gtggcaccta caaatgccat cattgcgata aaggaaaggc     8040

tatcgttcaa gatgcctctg ccgacagtgg tcccaaagat ggacccccac ccacgaggag     8100

catcgtggaa aaagaagacg ttccaaccac gtcttcaaag caagtggatt gatgtgatat     8160

ctccactgac gtaagggatg acgcacaatc ccactatcct tcgcaagacc ttcctctata     8220

taaggaagtt catttcattt ggagaggaca cgctgaaatc accagtctct ctctacaaat     8280

ctatctctct cgagctttcg cagatcccgg ggggcaatga gatatgaaaa agcctgaact     8340

caccgcgacg tctgtcgaga agtttctgat cgaaaagttc gacagcgtct ccgacctgat     8400

gcagctctcg gagggcgaag aatctcgtgc tttcagcttc gatgtaggag ggcgtggata     8460

tgtcctgcgg gtaaatagct gcgccgatgg tttctacaaa gatcgttatg tttatcggca     8520

ctttgcatcg gccgcgctcc cgattccgga agtgcttgac attggggagt ttagcgagag     8580

cctgacctat tgcatctccc gccgtgcaca gggtgtcacg ttgcaagacc tgcctgaaac     8640

cgaactgccc gctgttctac aaccggtcgc ggaggctatg gatgcgatcg ctgcggccga     8700

tcttagccag acgagcgggt tcggcccatt cggaccgcaa ggaatcggtc aatacactac     8760

atggcgtgat ttcatatgcg cgattgctga tccccatgtg tatcactggc aaactgtgat     8820

ggacgacacc gtcagtgcgt ccgtcgcgca ggctctcgat gagctgatgc tttgggccga     8880

ggactgcccc gaagtccggc acctcgtgca cgcggatttc ggctccaaca atgtcctgac     8940

ggacaatggc cgcataacag cggtcattga ctggagcgag gcgatgttcg gggattccca     9000

atacgaggtc gccaacatct tcttctggag gccgtggttg gcttgtatgg agcagcagac     9060

gcgctacttc gagcggaggc atccggagct tgcaggatcg ccacgactcc gggcgtatat     9120

gctccgcatt ggtcttgacc aactctatca gagcttggtt gacggcaatt tcgatgatgc     9180

agcttgggcg cagggtcgat gcgacgcaat cgtccgatcc ggagccggga ctgtcgggcg     9240

tacacaaatc gcccgcagaa gcgcggccgt ctggaccgat ggctgtgtag aagtactcgc     9300

cgatagtgga aaccgacgcc ccagcactcg tccgagggca aagaaataga gtagatgccg     9360

accggatctg tcgatcgaca agctcgagtt tctccataat aatgtgtgag tagttcccag     9420

ataagggaat tagggttcct atagggtttc gctcatgtgt tgagcatata agaaaccctt     9480

agtatgtatt tgtatttgta aaatacttct atcaataaaa tttctaattc ctaaaaccaa     9540

aatccagtac taaaatccag atcccccgaa ttaattcggc gttaattcag tacattaaaa     9600

acgtccgcaa tgtgttatta agttgtctaa gcgtcaattt gtttacacca caatatatcc     9660

tgccaccagc cagccaacag ctccccgacc ggcagctcgg cacaaaatca ccactcgata     9720

caggcagccc atcagtccgg gacggcgtca gcgggagagc cgttgtaagg cggcagactt     9780

tgctcatgtt accgatgcta ttcggaagaa cggcaactaa gctgccgggt ttgaaacacg     9840

gatgatctcg cggagggtag catgttgatt gtaacgatga cagagcgttg ctgcctgtga     9900

tcaccgcggt ttcaaaatcg gctccgtcga tactatgtta tacgccaact ttgaaaacaa     9960

ctttgaaaaa gctgttttct ggtatttaag gttttagaat gcaaggaaca gtgaattgga    10020

gttcgtcttg ttataattag cttcttgggg tatctttaaa tactgtagaa aagaggaagg    10080

aaataataaa tggctaaaat gagaatatca ccggaattga aaaaactgat cgaaaaatac    10140

cgctgcgtaa aagatacgga aggaatgtct cctgctaagg tatataagct ggtgggagaa    10200

aatgaaaacc tatatttaaa aatgacggac agccggtata aagggaccac ctatgatgtg    10260

gaacgggaaa aggacatgat gctatggctg gaaggaaagc tgcctgttcc aaaggtcctg    10320

cactttgaac ggcatgatgg ctggagcaat ctgctcatga gtgaggccga tggcgtcctt    10380

tgctcggaag agtatgaaga tgaacaaagc cctgaaaaga ttatcgagct gtatgcggag    10440

tgcatcaggc tctttcactc catcgacata tcggattgtc cctatacgaa tagcttagac    10500

agccgcttag ccgaattgga ttacttactg aataacgatc tggccgatgt ggattgcgaa    10560

aactgggaag aagacactcc atttaaagat ccgcgcgagc tgtatgattt tttaaagacg    10620

gaaaagcccg aagaggaact tgtcttttcc cacggcgacc tgggagacag caacatcttt    10680

gtgaaagatg gcaaagtaag tggctttatt gatcttggga gaagcggcag ggcggacaag    10740

tggtatgaca ttgccttctg cgtccggtcg atcagggagg atatcgggga agaacagtat    10800

gtcgagctat tttttgactt actggggatc aagcctgatt gggagaaaat aaaatattat    10860

attttactgg atgaattgtt ttagtaccta gaatgcatga ccaaaatccc ttaacgtgag    10920

ttttcgttcc actgagcgtc agaccccgta gaaaagatca aaggatcttc ttgagatcct    10980

ttttttctgc gcgtaatctg ctgcttgcaa acaaaaaaac caccgctacc agcggtggtt    11040

tgtttgccgg atcaagagct accaactctt tttccgaagg taactggctt cagcagagcg    11100

cagataccaa atactgtcct tctagtgtag ccgtagttag gccaccactt caagaactct    11160

gtagcaccgc ctacatacct cgctctgcta atcctgttac cagtggctgc tgccagtggc    11220

gataagtcgt gtcttaccgg gttggactca agacgatagt taccggataa ggcgcagcgg    11280

tcgggctgaa cggggggttc gtgcacacag cccagcttgg agcgaacgac ctacaccgaa    11340

ctgagatacc tacagcgtga gctatgagaa agcgccacgc ttcccgaagg gagaaaggcg    11400

gacaggtatc cggtaagcgg cagggtcgga acaggagagc gcacgaggga gcttccaggg    11460

ggaaacgcct ggtatcttta tagtcctgtc gggtttcgcc acctctgact tgagcgtcga    11520

tttttgtgat gctcgtcagg ggggcggagc ctatggaaaa acgccagcaa cgcggccttt    11580

ttacggttcc tggccttttg ctggcctttt gctcacatgt tctttcctgc gttatcccct    11640

gattctgtgg ataaccgtat taccgccttt gagtgagctg ataccgctcg ccgcagccga    11700

acgaccgagc gcagcgagtc agtgagcgag gaagcggaag agcgcctgat gcggtatttt    11760

ctccttacgc atctgtgcgg tatttcacac cgcatatggt gcactctcag tacaatctgc    11820

tctgatgccg catagttaag ccagtataca ctccgctatc gctacgtgac tgggtcatgg    11880

ctgcgccccg acacccgcca acacccgctg acgcgccctg acgggcttgt ctgctcccgg    11940

catccgctta cagacaagct gtgaccgtct ccgggagctg catgtgtcag aggttttcac    12000

cgtcatcacc gaaacgcgcg aggcagggtg ccttgatgtg ggcgccggcg gtcgagtggc    12060

gacggcgcgg cttgtccgcg ccctggtaga ttgcctggcc gtaggccagc catttttgag    12120

cggccagcgg ccgcgatagg ccgacgcgaa gcggcggggc gtagggagcg cagcgaccga    12180

agggtaggcg ctttttgcag ctcttcggct gtgcgctggc cagacagtta tgcacaggcc    12240

aggcgggttt taagagtttt aataagtttt aaagagtttt aggcggaaaa atcgcctttt    12300

ttctctttta tatcagtcac ttacatgtgt gaccggttcc caatgtacgg ctttgggttc    12360

ccaatgtacg ggttccggtt cccaatgtac ggctttgggt tcccaatgta cgtgctatcc    12420

acaggaaaga gtccttttcg acctttttcc cctgctaggg caatttgccc tagcatctgc    12480

tccgtacatt aggaaccggc ggatgcttcg ccctcgatca ggttgcggta gcgcatgact    12540

aggatcgggc cagcctgccc cgcctcctcc ttcaaatcgt actccggcag gtcatttgac    12600

ccgatcagct tgcgcacggt gaaacagaac ttcttgaact ctccggcgct gccactgcgt    12660

tcgtagatcg tcttgaacaa ccatctggct tctgccttgc ctgcggcgcg gcgtgccagg    12720

cggtagagaa aacggccgat gccgggatcg atcaaaaagt aatcggggtg aaccgtcagc    12780

acgtccgggt tcttgccttc tgtgatctcg cggtacatcc aatcagctag ctcgatctcg    12840

atgtactccg gccgcccggt ttcgctcttt acgatcttgt agcggctaat caaggcttca    12900

ccctcggata ccgtcaccag gcggccgttc ttggccttct tcgtacgctg catggcaacg    12960

tgcgtggtgt ttaaccgaat gcaggtttct accaggtcgt ctttctgctt tccgccatcg    13020

gctcgccggc agaacttgag tacgtccgca acgtgtggac ggaacacgcg gccgggcttg    13080

tctcccttcc cttcccggta tcggttcatg gattcggtta gatgggaaac cgccatcagt    13140

accaggtcgt aatcccacac actggccatg ccggccggcc ctgcggaaac ctctacgtgc    13200

ccgtctggaa gctcgtagcg gatcacctcg ccagctcgtc ggtcacgctt cgacagacgg    13260

aaaacggcca cgtccatgat gctgcgacta tcgcgggtgc ccacgtcata gagcatcgga    13320

acgaaaaaat ctggttgctc gtcgcccttg ggcggcttcc taatcgacgg cgcaccggct    13380

gccggcggtt gccgggattc tttgcggatt cgatcagcgg ccgcttgcca cgattcaccg    13440

gggcgtgctt ctgcctcgat gcgttgccgc tgggcggcct gcgcggcctt caacttctcc    13500

accaggtcat cacccagcgc cgcgccgatt tgtaccgggc cggatggttt gcgaccgtca    13560

cgccgattcc tcgggcttgg gggttccagt gccattgcag ggccggcaga caacccagcc    13620

gcttacgcct ggccaaccgc ccgttcctcc acacatgggg cattccacgg cgtcggtgcc    13680

tggttgttct tgattttcca tgccgcctcc tttagccgct aaaattcatc tactcattta    13740

ttcatttgct catttactct ggtagctgcg cgatgtattc agatagcagc tcggtaatgg    13800

tcttgccttg gcgtaccgcg tacatcttca gcttggtgtg atcctccgcc ggcaactgaa    13860

agttgacccg cttcatggct ggcgtgtctg ccaggctggc caacgttgca gccttgctgc    13920

tgcgtgcgct cggacggccg gcacttagcg tgtttgtgct tttgctcatt ttctctttac    13980

ctcattaact caaatgagtt ttgatttaat ttcagcggcc agcgcctgga cctcgcgggc    14040

agcgtcgccc tcgggttctg attcaagaac ggttgtgccg gcggcggcag tgcctgggta    14100

gctcacgcgc tgcgtgatac gggactcaag aatgggcagc tcgtacccgg ccagcgcctc    14160

ggcaacctca ccgccgatgc gcgtgccttt gatcgcccgc gacacgacaa aggccgcttg    14220

tagccttcca tccgtgacct caatgcgctg cttaaccagc tccaccaggt cggcggtggc    14280

ccatatgtcg taagggcttg gctgcaccgg aatcagcacg aagtcggctg ccttgatcgc    14340

ggacacagcc aagtccgccg cctggggcgc tccgtcgatc actacgaagt cgcgccggcc    14400

gatggccttc acgtcgcggt caatcgtcgg gcggtcgatg ccgacaacgg ttagcggttg    14460

atcttcccgc acggccgccc aatcgcgggc actgccctgg ggatcggaat cgactaacag    14520

aacatcggcc ccggcgagtt gcagggcgcg ggctagatgg gttgcgatgg tcgtcttgcc    14580

tgacccgcct ttctggttaa gtacagcgat aaccttcatg cgttcccctt gcgtatttgt    14640

ttatttactc atcgcatcat atacgcagcg accgcatgac gcaagctgtt ttactcaaat    14700

acacatcacc tttttagacg gcggcgctcg gtttcttcag cggccaagct ggccggccag    14760

gccgccagct tggcatcaga caaaccggcc aggatttcat gcagccgcac ggttgagacg    14820

tgcgcgggcg gctcgaacac gtacccggcc gcgatcatct ccgcctcgat ctcttcggta    14880

atgaaaaacg gttcgtcctg gccgtcctgg tgcggtttca tgcttgttcc tcttggcgtt    14940

cattctcggc ggccgccagg gcgtcggcct cggtcaatgc gtcctcacgg aaggcaccgc    15000

gccgcctggc ctcggtgggc gtcacttcct cgctgcgctc aagtgcgcgg tacagggtcg    15060

agcgatgcac gccaagcagt gcagccgcct ctttcacggt gcggccttcc tggtcgatca    15120

gctcgcgggc gtgcgcgatc tgtgccgggg tgagggtagg gcgggggcca aacttcacgc    15180

ctcgggcctt ggcggcctcg cgcccgctcc gggtgcggtc gatgattagg gaacgctcga    15240

actcggcaat gccggcgaac acggtcaaca ccatgcggcc ggccggcgtg gtggtgtcgg    15300

cccacggctc tgccaggcta cgcaggcccg cgccggcctc ctggatgcgc tcggcaatgt    15360

ccagtaggtc gcgggtgctg cgggccaggc ggtctagcct ggtcactgtc acaacgtcgc    15420

cagggcgtag gtggtcaagc atcctggcca gctccgggcg gtcgcgcctg gtgccggtga    15480

tcttctcgga aaacagcttg gtgcagccgg ccgcgtgcag ttcggcccgt tggttggtca    15540

agtcctggtc gtcggtgctg acgcgggcat agcccagcag gccagcggcg gcgctcttgt    15600

tcatggcgta atgtctccgg ttctagtcgc aagtattcta ctttatgcga ctaaaacacg    15660

cgacaagaaa acgccaggaa aagggcaggg cggcagcctg tcgcgtaact taggacttgt    15720

gcgacatgtc gttttcagaa gacggctgca ctgaacgtca gaagccgact gcactatagc    15780

agcggagggg ttggatcaaa gtactttgat cccgagggga accctgtggt tggcatgcac    15840

atacaaatgg acgaacggat aaaccttttc acgccctttt aaatatccgt tattctaa 15898

<210>  5

<211>  96

<212>  DNA

<213>  Artificial sequence

<400>  5

gcagtgacaa gtcgtgcgtc gttttagagc tagaaatagc aagttaaaat aaggctagtc  60

cgttatcaac ttgaaaaagt ggcaccgagt cggtgc                            96

<210>  6

<211>  96

<212>  RNA

<213>  Artificial sequence

<400>  6

gcagugacaa gucgugcguc guuuuagagc uagaaauagc aaguuaaaau aaggcuaguc  60

cguuaucaac uugaaaaagu ggcaccgagu cggugc                            96

<210>  7

<211>  20

<212>  RNA

<213>  Artificial sequence

<400>  7

gcagugacaa gucgugcguc                                              20

Claims (4)

1.抑制OsRBP2蛋白质的物质和/或抑制编码OsRBP2蛋白的核酸分子的物质在植物育种的应用，所述育种的目标为如下（e1）、（e2）、（e3）、（e4）和（e5）中的至少一种：

（e1）培育早衰的植物；

（e2）培育株高增高的植物；

（e3）培育穗长缩短的植物；

（e4）培育结实率降低的植物；

（e5）培育粒重降低的植物；

所述OsRBP2蛋白质为如下（a1）或（a2）：

（a1）序列表中序列1所示的蛋白质；

（a2）在（a1）所述蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白；

所述物质为编码sgRNA的DNA分子和编码Cas9蛋白的DNA分子；所述sgRNA中的靶序列结合区如序列表的序列7所示；

所述植物为水稻。

2.对编码OsRBP2蛋白的核酸分子进行基因编辑的物质的应用，为如下（f1）、（f2）、（f3）、（f4）和（f5）中的至少一种：

（f1）培育衰老进程提前的基因编辑植株；

（f2）培育株高增高的基因编辑植株；

（f3）培育穗长缩短的基因编辑植株；

（f4）培育结实率降低的基因编辑植株；

（f5）培育粒重降低的基因编辑植株；

所述OsRBP2蛋白质为如下（a1）或（a2）：

（a1）序列表中序列1所示的蛋白质；

（a2）在（a1）所述蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白；

所述基因编辑为基于Cas9系统的基因编辑，所述Cas9系统中，sgRNA中的靶序列结合区如序列表的序列7所示；

所述植物为水稻。

3.一种制备转基因植物的方法，包括如下步骤：在受体植物中导入抑制OsRBP2基因表达的物质，得到转基因植物；与所述受体植物相比，所述转基因植物具有如下五种表型中的至少一种：衰老提前、株高增高、穗长缩短、结实率降低、粒重降低；

所述OsRBP2基因为如下（b1）或（b2）：

（b1）序列表中序列2所示的DNA分子；

（b2）序列表中序列3所示的DNA分子；

所述抑制OsRBP2基因表达的物质为编码sgRNA的DNA分子和编码Cas9蛋白的DNA分子；所述sgRNA中的靶序列结合区如序列表的序列7所示；

所述植物为水稻。

4.一种植物育种方法，包括如下步骤：对受体植物中的OsRBP2基因进行基因编辑，得到基因编辑植株；与所述受体植物相比，所述基因编辑植株具有如下五种表型中的至少一种：衰老提前、株高增高、穗长缩短、结实率降低、粒重降低；

所述OsRBP2基因为如下（b1）或（b2）：

（b1）序列表中序列2所示的DNA分子；

（b2）序列表中序列3所示的DNA分子；

对受体植物中的OsRBP2基因进行基因编辑通过Cas9系统实现；

所述基因编辑植株为用“GCAGTGACAAGTCGTGCTGTC”替换基因组DNA中的OsRBP2基因的“GCAGTGACAAGTCGTGCGTC”，且为纯合型的植株；

所述植物为水稻。

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