CN113908270A - 一种乌金肽与抗幽门杆菌IgY组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及肠胃医疗领域，具体公开了一种乌金肽与抗幽门杆菌IgY组合物及其制备方法。一种乌金肽与抗幽门杆菌IgY组合物，包括抗幽门杆菌特异性IgY0.01％～5％、乌金肽0.1％～2％。组合物的制备方法，包括如下步骤：抗幽门杆菌特异性IgY的制备：制备耐药幽门螺旋杆菌和幽门球菌复合抗原；制备幽门螺旋菌尿素酶亚单位B(UreB)、黏附素HpaA和SabA以及BabA2基因重组表达蛋白复合抗原；制备幽门螺旋菌尿素酶亚单位B(UreB)、黏附素HpaA和SabA以及BabA2基因重组表达蛋白复合抗原；制备纳米脂质体抗耐药幽门杆菌和球菌以及尿素酶和黏附素复合IgY；将IgY与乌金肽混合即可得到组合物。乌金肽与抗幽门杆菌IgY组合物及其制备方法通过针对人幽门螺旋菌感染引致的消化性溃疡和慢性胃炎根治率低、复发率高的现状。

Description

一种乌金肽与抗幽门杆菌IgY组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及肠胃医疗领域，特别涉及了乌金肽与抗幽门杆菌IgY组合物。

背景技术

幽门螺旋杆菌感染是消化性溃疡和慢性胃炎的主要病因，与胃癌的发生也密切相关。揭示这一本质的两位澳大利亚科学家Barry J.Marshall和J.Robin Warren己被评为2005年度诺贝尔国际医学奖。然而，目前采用抗生素为主的治疗方法，不良反应大，而且幽门螺旋杆菌对抗生素的耐药率不断增加，导致根除治疗失败率不断上升。据有关数据显示，根治率仅20-40％，而且这也只是指治疗后至少四周内无HP复现的情况。抑制胃酸的方法也可使80％的溃疡得以愈合，但是也同样都是暂时的，半年后复发率为66％，一年内复发率为80％，两年内复发率可高达99.9％。科学研究揭示，胃病之所以久治不愈，还有一个重要原因是由于幽门球菌在作怪。每当胃病患者在服胃药期间，幽门杆菌就会转变成体积非常小的幽门球菌，隐藏在胃粘膜内，普通胃药对其无能为力。当停止服药一段时间，隐藏的幽门球菌又会再转变成幽门杆菌，使炎症复发；因此，必须将藏匿粘膜深层的这种属于幽门杆菌死亡状态的球菌也一并杀灭，才有可能减少复发率。最新的研究进一步揭示，在幽门螺旋杆菌致病机制中幽门螺杆菌尿素酶和幽门螺杆菌黏附素也扮演着重要的角色，幽门螺杆菌尿素酶和黏附素是幽门螺杆菌在胃和十二指肠粘膜表面粘附和定植而引发炎症、溃疡甚至胃癌的物质基础；如果只杀灭幽门杆菌，不同时抑制幽门螺杆菌尿素酶和黏附素，就不可能达到有效治疗和预防的目的。

黄腐酸属于腐植酸类物质中分子量最小、活性最高、药用价值最高的物质，既溶于酸、又溶于碱、还溶于水。

太神石乌金液分子量小于400道尔顿，可称作“乌金肽”！

太神石乌金液纯度极高，干基含量高达99.75％！灰分小于0.5％。

面对这种全球医药界一致公认根治率最低的顽疾，如何从病发根源着手，寻找一种能真正彻底根治胃病的新方法、新途径，以取代目前广为采用的抗生素和化学药物，已成为摆在国际医药科学界面前的重要课题，也是全球千百万胃病患者的殷切期盼。

本申请所要解决的技术问题为：如何提供一种有效的组合物，实现真正彻底根治胃病。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种有效根治胃病的乌金肽与抗幽门杆菌IgY组合物及其制备方法。

本发明所采用的技术方案为：

一种乌金肽与抗幽门杆菌IgY组合物，其特征在于，包括如下重量份的成分：

抗幽门杆菌特异性IgY0.01％～5％、乌金肽0.1％～2％。

一种乌金肽与抗幽门杆菌IgY组合物的制备方法，用于制备权利要求1 的组合物，其特征在于，包括如下步骤：

抗幽门杆菌特异性IgY的制备：

S1、制备耐药幽门螺旋杆菌和幽门球菌复合抗原；

S2、制备幽门螺旋菌尿素酶亚单位B(UreB)、黏附素HpaA和SabA以及 BabA2基因重组表达蛋白复合抗原；

S3、分别采用所述耐药幽门杆菌和幽门球菌复合抗原以及幽门螺旋菌尿素酶亚单位B(UreB)、黏附素HpaA和SabA以及BabA2的重组蛋白复合抗原对具有高免疫应答能力的选择产蛋禽类进行免疫；

S4、采用淘汰法筛选具有高免疫应答能力的选择产蛋禽类(鸡、鸭、鹅、火鸡、鸵鸟等)，分别采用所述耐药幽门螺杆菌和幽门球菌复合抗原以及幽门螺旋菌尿素酶亚单位B(UreB)、黏附素HpaA和SabA以及BabA2的重组蛋白复合抗原对具有高免疫应答能力的选择产蛋禽类进行免疫；

S5、取上述两种免疫蛋消毒，取用蛋黄加入蒸馏水稀释搅拌，1.0N NaOH 液或者1.0N HCL液调节PH至5.5–6.0,4–6℃下静置过夜，稀释液 6,000-12,000r/min高速离心20分钟，取上清液用17万分子量至20万分子量截留超滤浓缩10-20倍，得到浓缩液；

S6、将得到的浓缩液用冷冻干燥机干燥，分别制得抗耐药幽门螺杆菌和幽门球菌特异性复合IgY和抗Hp尿素酶和黏附素特异性复合IgY粗提物；

S7、将所述两种IgY粗提物分别过离子交换柱和凝胶交换柱进行纯化，即得相应的抗幽门杆菌和幽门球菌特异性复合纯IgY和抗Hp尿素酶和黏附素特异性复合纯IgY；

S8、将所制得的抗耐药幽门螺杆菌和幽门球菌特异性复合纯IgY和抗Hp 尿素酶和黏附素特异性复合纯IgY按(1-10)：(10-1)的比例混合，置入搅拌机中充分混合均匀，即制得抗幽门杆菌特异性IgY；

组合物的混合：

按比例将抗幽门杆菌特异性IgY与乌金肽混合得到组合物。

在一些实施方式中，步骤S1的详细步骤包括：

A1、获取耐阿莫西林和克拉霉素的耐药幽门螺旋杆菌菌株和幽门球菌菌株；

A2、培养耐药幽门螺旋杆菌菌株和幽门球菌菌株；

A3、将培养的耐药幽门螺杆菌和幽门球菌按(1-10):(10:1)比例混合，然后经过超声粉碎处理后，得到含全菌和菌体成份的幽门螺杆菌和幽门球菌混合物；

A4、将A3步骤得到的混合物加入福氏佐剂，高速匀化处理形成油包水乳液，即制得耐药幽门螺杆菌和幽门球菌复合抗原。

在一些实施方式中，步骤S2的详细步骤包括：

B1、采用基因工程技术，将幽门螺旋菌尿素酶亚单位B(UreB)、黏附素 HpaA和SabA以及BabA2分别重组表达；

B2、提取H.pylori染色体基因，分别用PCR方法扩增HpaA和SabA以及BabA2基因，将其分别克隆至表达载体pET22b(+)，并在BL21(DE3) 大肠杆菌中表达，得到幽门螺旋菌尿素酶亚单位B(UreB)、黏附素HpaA和 SabA以及BabA2的重组蛋白；

B3、在培养基中诱导目的重组蛋白表达，SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统确定表达情况和产量；再采用Ni-NTA亲和层析法提纯幽门螺旋菌尿素酶亚单位B(UreB)、黏附素HpaA和SabA以及BabA2的重组蛋白；

B4、将所制备的幽门螺旋菌尿素酶亚单位B(UreB)、黏附素HpaA和SabA 以及BabA2的重组蛋白按(1-10):(1-10):(1-10):(1-10)比例混合均匀，再加入福氏佐剂，高速匀化处理形成油包水乳液，即制得幽门螺旋菌相关酶和粘附素复合抗原。

在一些实施方式中，步骤S4的详细方法包括：

每只禽类在皮下注射所制备的两种抗原中之一种抗原0.5-1ml；在第一次注射后间隔7天，再以同样剂量、方法注射第二次，第二次注射后再间隔7 天以相同剂量注射第3次，第一次注射后从第20天开始拣取高免疫蛋，对所检取的免疫蛋进行编码标记。

在一些实施方式中，步骤S6进行冷冻干燥之前，还包括过滤程序，过滤程序包括对浓缩液进行过滤的三道滤除装置：

第一道细菌滤除装置是用0.22μm膜除菌过滤器除去沙门菌(Salmonella) 等细菌；第二道支原体滤除装置是用0.1μm膜除支原体过滤器除去支原体；第三道病毒滤除装置是用UltiporVFTM DV50除病毒过滤器除去包括禽流感病毒、肠病毒病毒。

一种乌金肽与抗幽门杆菌IgY组合物的口服溶液，使用上述的组合物，包括如下重量份的成分：

抗幽门杆菌特异性IgY0.01％～5％、乌金肽0.1％～2％、甘油3％-5％、纯化水75％-95％。

一种乌金肽与抗幽门杆菌IgY组合物的胶囊，使用上述的组合物。

本发明的有益效果在于：

乌金肽与抗幽门杆菌IgY组合物及其制备方法通过针对人幽门螺旋菌感染引致的消化性溃疡和慢性胃炎根治率低、复发率高的现状，提供一种纳米脂质体抗耐药幽门杆菌和球菌以及尿素酶和黏附素复合IgY及其制备方法，一方面有效抑灭耐药幽门杆菌和抗生素难于对付的幽门球菌，以彻底消除病原体，另一方面有效抑制幽门螺旋菌尿素酶和黏附素，阻断致病菌粘附定植于胃和十二指肠粘膜；从而，双管齐下消灭病灶，达到根治的目的；同时黄腐酸对胃液量及胃酸的分泌有明显的抑制作用，通过交感神经中枢某些受体，直接作用于壁细胞而抑制胃酸分泌，络合能力非常强，并具有很大的缓冲能力，能够吸附胃肠粘膜表面的附着物，随食物排出体外，有利于加快溃疡面的愈合。

锌是体内必需的微量元素，参与机体内蛋白的合成。锌在正常胃壁分布较均匀，在溃疡底部表面则分布不均匀；黄腐酸影响了溃疡组织表面及深部，包括坏死层和肉芽组织层上的锌的分布，而锌对组织细胞有直接保护作用，并参与组织的恢复，有利于溃疡的愈合。

另外，黄腐酸可刺激胃粘膜前列腺素的合成，使胃粘膜内的前列腺素明显增加，而前列腺素对消化道有明显的细胞保护作用，因而起到抗溃疡的作用。

黄腐酸的酚-醌结构在生物体内产生氧化还原体系，加强物质代谢，促使 细胞分裂，加速生肌能力，伤口愈合快，加促血流凝固、封闭伤口、防止细 菌感染的作用。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所 描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发 明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的 所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供一种技术方案：一种乌金肽与抗幽门杆菌IgY组合物，包括如下重量份的成分：

抗幽门杆菌特异性IgY0.01％～5％、乌金肽0.1％～2％。

一种乌金肽与抗幽门杆菌IgY组合物的制备方法，包括如下步骤：

抗幽门杆菌特异性IgY的制备：

S1、制备耐药幽门螺旋杆菌和幽门球菌复合抗原；

S2、制备幽门螺旋菌尿素酶亚单位B(UreB)、黏附素HpaA和SabA以及 BabA2基因重组表达蛋白复合抗原；

S3、分别采用所述耐药幽门杆菌和幽门球菌复合抗原以及幽门螺旋菌尿素酶亚单位B(UreB)、黏附素HpaA和SabA以及BabA2的重组蛋白复合抗原对具有高免疫应答能力的选择产蛋禽类进行免疫；

S4、采用淘汰法筛选具有高免疫应答能力的选择产蛋禽类(鸡、鸭、鹅、火鸡、鸵鸟等)，分别采用所述耐药幽门螺杆菌和幽门球菌复合抗原以及幽门螺旋菌尿素酶亚单位B(UreB)、黏附素HpaA和SabA以及BabA2的重组蛋白复合抗原对具有高免疫应答能力的选择产蛋禽类进行免疫；

S5、取上述两种免疫蛋消毒，取用蛋黄加入蒸馏水稀释搅拌，1.0N NaOH 液或者1.0N HCL液调节PH至5.5–6.0,4–6℃下静置过夜，稀释液 6,000-12,000r/min高速离心20分钟，取上清液用17万分子量至20万分子量截留超滤浓缩10-20倍，得到浓缩液；

S6、将得到的浓缩液用冷冻干燥机干燥，分别制得抗耐药幽门螺杆菌和幽门球菌特异性复合IgY和抗Hp尿素酶和黏附素特异性复合IgY粗提物；

S7、将所述两种IgY粗提物分别过离子交换柱和凝胶交换柱进行纯化，即得相应的抗幽门杆菌和幽门球菌特异性复合纯IgY和抗Hp尿素酶和黏附素特异性复合纯IgY；

S8、将所制得的抗耐药幽门螺杆菌和幽门球菌特异性复合纯IgY和抗Hp 尿素酶和黏附素特异性复合纯IgY按(1-10)：(10-1)的比例混合，置入搅拌机中充分混合均匀，即制得抗幽门杆菌特异性IgY；

组合物的混合：

按比例将抗幽门杆菌特异性IgY与乌金肽混合得到组合物。

步骤S1的详细步骤包括：

A1、获取耐阿莫西林和克拉霉素的耐药幽门螺旋杆菌菌株和幽门球菌菌株；

A2、培养耐药幽门螺旋杆菌菌株和幽门球菌菌株；

A3、将培养的耐药幽门螺杆菌和幽门球菌按(1-10):(10:1)比例混合，然后经过超声粉碎处理后，得到含全菌和菌体成份的幽门螺杆菌和幽门球菌混合物；

A4、将A3步骤得到的混合物加入福氏佐剂，高速匀化处理形成油包水乳液，即制得耐药幽门螺杆菌和幽门球菌复合抗原。

制备耐药幽门螺旋杆菌和幽门球菌复合抗原中，

向中国科学院微生物研究所购买耐阿莫西林和克拉霉素的耐药幽门螺旋杆菌菌株和向新加坡国立大学微生物系购买幽门球菌菌株。

采用常规方法培养耐药幽门杆菌菌株和幽门球菌菌株

生长条件:

(1)ATCC培养基260：

含「脱纤维蛋白羊血」的胰化蛋白大豆琼脂(Trypticase soy agar)

(2)生长环境：

微需氧性

(3)温度：摄氏37度

步骤S2的详细步骤包括：

B1、采用基因工程技术，将幽门螺旋菌尿素酶亚单位B(UreB)、黏附素 HpaA和SabA以及BabA2分别重组表达；

B2、提取H.pylori染色体基因，分别用PCR方法扩增HpaA和SabA以及BabA2基因，将其分别克隆至表达载体pET22b(+)，并在BL21(DE3) 大肠杆菌中表达，得到幽门螺旋菌尿素酶亚单位B(UreB)、黏附素HpaA和 SabA以及BabA2的重组蛋白；

B3、在培养基中诱导目的重组蛋白表达，SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统确定表达情况和产量；再采用Ni-NTA亲和层析法提纯幽门螺旋菌尿素酶亚单位B(UreB)、黏附素HpaA和SabA以及BabA2的重组蛋白；

B4、将所制备的幽门螺旋菌尿素酶亚单位B(UreB)、黏附素HpaA和SabA 以及BabA2的重组蛋白按(1-10):(1-10):(1-10):(1-10)比例混合均匀，再加入福氏佐剂，高速匀化处理形成油包水乳液，即制得幽门螺旋菌相关酶和粘附素复合抗原。

步骤S4的详细方法包括：

每只禽类在皮下注射所制备的两种抗原中之一种抗原0.5-1ml；在第一次注射后间隔7天，再以同样剂量、方法注射第二次，第二次注射后再间隔7 天以相同剂量注射第3次，第一次注射后从第20天开始拣取高免疫蛋，对所检取的免疫蛋进行编码标记。

将上述两种免疫蛋分别用0.1％新洁而灭溶液或0.1％KMnO4溶液或其它同类消毒液将免疫蛋浸泡消毒，无菌蒸馏水冲洗、晾干，置于打蛋机中将蛋壳打碎，用蛋黄筛滤除蛋清留下蛋黄加入4-8倍蒸馏水稀释搅拌均匀，用1.0N NaOH液或者1.0N HCL液调节PH至5.5–6.0,4–6℃下静置过夜，稀释液 6,000-12,000r/min高速离心20分钟，取上清液用17万分子量至20万分子量截留超滤浓缩10-20倍。

然后，采用美国Pall Ultrafine Filtration Company制造的除病毒过滤系统的细菌病毒滤除装置，彻底滤除各种细菌病毒，确保所制备的IgY绝不含任何病毒和细菌。

第一道细菌滤除装置是用0.22μm膜除菌过滤器除去沙门菌(Salmonella) 等细菌；第二道支原体滤除装置是用0.1μm膜除支原体过滤器除去支原体；第三道病毒滤除装置是用UltiporVFTM DV50除病毒过滤器除去包括禽流感病毒、肠病毒在内的多种病毒。

最后，将所得浓缩液用冷冻干燥机干燥，即分别制得抗耐药幽门螺杆菌和幽门球菌特异性复合IgY和抗Hp尿素酶和黏附素特异性复合IgY粗提物；

将两种IgY粗提物分别过离子交换柱和凝胶交换柱进行纯化。

抗耐药幽门杆菌和球菌以及尿素酶和黏附素复合IgY脂质体制备：

把卵磷脂和胆固醇溶于乙醚中，再将纳米化抗耐药幽门杆菌和球菌以及尿素酶和黏附素复合纯IgY加入4mmol/L磷酸盐缓冲液(PBS)配成IgY溶液，超声处理2min(每处理0.5min，间歇.0.5min)，立即在水浴中减压旋转蒸发至呈凝胶状，漩涡振荡使凝胶转相，再继续蒸发除尽乙醚，进而超速离心(35000r/min，30min)分离除去未包入的IgY，沉淀用水洗二次，离心，得沉淀，再冷冻干燥，即制得抗耐药幽门杆菌和球菌以及尿素酶和黏附素复合纯IgY脂质体液晶微囊。

本实施例安全性较佳，可直接口服，进行小鼠急性经口毒性试验：

采用最大耐受剂量法，选用健康小鼠20只，雌雄各10只，动物禁食12h 称重后灌胃给原药，灌胃体积按0.15ml/10g体重计算，染毒剂量为 15000mg/kg·bw。染毒后动物未见明显中毒症状，连续观察两周动物无死亡。

小鼠经口急性毒性检测LD50>15000mg/kg.bw，无毒级！微生物、重金属不超标；外用、内服无副作用。

稳定：全水溶、真溶液、无限稀释不絮凝！乳液、精华、沐浴液，各种

体系均可添加，不破坏体系；纯矿物提取物，不分解、不腐败、不变质、不变味、不变色！

功效强大：皮肤、黏膜全覆盖；外用、内服均适合；医疗、保健、美容都适用！

使用舒适：小分子量直接吸收无残留，亲油基亲水基团全都有；亲皮肤，

无刺激；无气味、矿石原味(几乎无味道)。

本发明还可用于多种组合物的应用，包括口服液、口喷剂、胶囊(软胶囊、硬胶囊)、口含片、咀嚼片、泡腾片、口服片、粉剂。其中包括如上所述方法制备的抗耐药幽门杆菌和球菌以及尿素酶和黏附素复合IgY和抗耐药幽门杆菌和球菌以及尿素酶和黏附素复合纯IgY纳米脂质体，还包括赋形剂、填充料等辅料和溶剂辅料或软胶囊、硬胶囊等辅料。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种乌金肽与抗幽门杆菌IgY组合物，其特征在于，包括如下重量份的成分：

抗幽门杆菌特异性IgY0.01％～5％、乌金肽0.1％～2％。

2.根据权利要求1所述的一种乌金肽与抗幽门杆菌IgY组合物的制备方法，用于制备权利要求1的组合物，其特征在于，包括如下步骤：

抗幽门杆菌特异性IgY的制备：

S1、制备耐药幽门螺旋杆菌和幽门球菌复合抗原；

S2、制备幽门螺旋菌尿素酶亚单位B(UreB)、黏附素HpaA和SabA以及BabA2基因重组表达蛋白复合抗原；

S3、分别采用所述耐药幽门杆菌和幽门球菌复合抗原以及幽门螺旋菌尿素酶亚单位B(UreB)、黏附素HpaA和SabA以及BabA2的重组蛋白复合抗原对具有高免疫应答能力的选择产蛋禽类进行免疫；

S4、采用淘汰法筛选具有高免疫应答能力的选择产蛋禽类(鸡、鸭、鹅、火鸡、鸵鸟等)，分别采用所述耐药幽门螺杆菌和幽门球菌复合抗原以及幽门螺旋菌尿素酶亚单位B(UreB)、黏附素HpaA和SabA以及BabA2的重组蛋白复合抗原对具有高免疫应答能力的选择产蛋禽类进行免疫；

S5、取上述两种免疫蛋消毒，取用蛋黄加入蒸馏水稀释搅拌，1.0N NaOH液或者1.0NHCL液调节PH至5.5–6.0,4–6℃下静置过夜，稀释液6,000-12,000r/min高速离心20分钟，取上清液用17万分子量至20万分子量截留超滤浓缩10-20倍，得到浓缩液；

S6、将得到的浓缩液用冷冻干燥机干燥，分别制得抗耐药幽门螺杆菌和幽门球菌特异性复合IgY和抗Hp尿素酶和黏附素特异性复合IgY粗提物；

S7、将所述两种IgY粗提物分别过离子交换柱和凝胶交换柱进行纯化，即得相应的抗幽门杆菌和幽门球菌特异性复合纯IgY和抗Hp尿素酶和黏附素特异性复合纯IgY；

S8、将所制得的抗耐药幽门螺杆菌和幽门球菌特异性复合纯IgY和抗Hp尿素酶和黏附素特异性复合纯IgY按(1-10)：(10-1)的比例混合，置入搅拌机中充分混合均匀，即制得抗幽门杆菌特异性IgY；

组合物的混合：

按比例将抗幽门杆菌特异性IgY与乌金肽混合得到组合物。

3.根据权利要求2所述的一种乌金肽与抗幽门杆菌IgY组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤S1的详细步骤包括：

A1、获取耐阿莫西林和克拉霉素的耐药幽门螺旋杆菌菌株和幽门球菌菌株；

A2、培养耐药幽门螺旋杆菌菌株和幽门球菌菌株；

A3、将培养的耐药幽门螺杆菌和幽门球菌按(1-10):(10:1)比例混合，然后经过超声粉碎处理后，得到含全菌和菌体成份的幽门螺杆菌和幽门球菌混合物；

A4、将A3步骤得到的混合物加入福氏佐剂，高速匀化处理形成油包水乳液，即制得耐药幽门螺杆菌和幽门球菌复合抗原。

4.根据权利要求2所述的一种乌金肽与抗幽门杆菌IgY组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤S2的详细步骤包括：

B1、采用基因工程技术，将幽门螺旋菌尿素酶亚单位B(UreB)、黏附素HpaA和SabA以及BabA2分别重组表达；

B2、提取H.pylori染色体基因，分别用PCR方法扩增HpaA和SabA以及BabA2基因，将其分别克隆至表达载体pET22b(+)，并在BL21(DE3)大肠杆菌中表达，得到幽门螺旋菌尿素酶亚单位B(UreB)、黏附素HpaA和SabA以及BabA2的重组蛋白；

B3、在培养基中诱导目的重组蛋白表达，SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统确定表达情况和产量；再采用Ni-NTA亲和层析法提纯幽门螺旋菌尿素酶亚单位B(UreB)、黏附素HpaA和SabA以及BabA2的重组蛋白；

B4、将所制备的幽门螺旋菌尿素酶亚单位B(UreB)、黏附素HpaA和SabA以及BabA2的重组蛋白按(1-10):(1-10):(1-10):(1-10)比例混合均匀，再加入福氏佐剂，高速匀化处理形成油包水乳液，即制得幽门螺旋菌相关酶和粘附素复合抗原。

5.根据权利要求2所述的一种乌金肽与抗幽门杆菌IgY组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤S4的详细方法包括：

每只禽类在皮下注射所制备的两种抗原中之一种抗原0.5-1ml；在第一次注射后间隔7天，再以同样剂量、方法注射第二次，第二次注射后再间隔7天以相同剂量注射第3次，第一次注射后从第20天开始拣取高免疫蛋，对所检取的免疫蛋进行编码标记。

6.根据权利要求2所述的一种乌金肽与抗幽门杆菌IgY组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤S6进行冷冻干燥之前，还包括过滤程序，所述过滤程序包括对浓缩液进行过滤的三道滤除装置：

第一道细菌滤除装置是用0.22μm膜除菌过滤器除去沙门菌(Salmonella)等细菌；第二道支原体滤除装置是用0.1μm膜除支原体过滤器除去支原体；第三道病毒滤除装置是用UltiporVFTM DV50除病毒过滤器除去包括禽流感病毒、肠病毒病毒。

7.一种乌金肽与抗幽门杆菌IgY组合物的口服溶液，使用如权利要求1至6任一项所述的组合物，其特征在于，包括如下重量份的成分：

抗幽门杆菌特异性IgY0.01％～5％、乌金肽0.1％～2％、甘油3％-5％、纯化水75％-95％。

8.一种乌金肽与抗幽门杆菌IgY组合物的胶囊，使用如权利要求1至6任一项所述的组合物。