CN113899647A - 胶原蛋白肠衣中微晶纤维素含量的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及胶原蛋白检测技术领域，具体涉及一种胶原蛋白肠衣中微晶纤维素含量的检测方法。本发明包括：(1)剪取胶原蛋白肠衣于锥形瓶中，记录肠衣重量M1；加入10wt％盐酸和蛋白酶制剂，在锥形瓶上放上漏斗，水浴加热；(2)将消解完全的消解液倒入离心管进行离心；每次离心后倒出上清液，再将剩余消解液倒入离心，并加蒸馏水离心洗涤；(3)对烘干的称量瓶进行称重，记为M2，离心后的底物倒入烘干的称量瓶，用蒸馏水冲洗，装有底物的称量瓶于烘箱中干燥，称重记为M3；(4)计算得出微晶纤维素含量。本发明设计科学合理，操作简单易行，检测效率和检测准确度高，省时省力，降低了检测成本，提高了产品的质量。
Description
技术领域
本发明涉及胶原蛋白检测技术领域，具体涉及一种胶原蛋白肠衣中微晶纤维素含量的检测方法。
背景技术
微晶纤维素的主要成分为以β-1,4-葡萄糖苷键结合的直链式多糖类物质。在一般植物纤维中，微晶纤维素约占70％，另外的30％为无定形。
在肠衣中，也含有丰富的微晶纤维素。微晶纤维素含量为肠衣中的一个重要物理指标，但是目前的测量方法存在着以下问题：检测数据工作量大，每次检测耗时耗力，检测成本高，检测失误率较高，检测结果不理想，严重影响了产品的质量。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：克服现有技术的不足，提供一种胶原蛋白肠衣中微晶纤维素含量的检测方法，其设计科学合理，操作简单易行，检测效率和检测准确度高，省时省力，降低了检测成本，提高了产品的质量。
本发明所述的胶原蛋白肠衣中微晶纤维素含量的检测方法，包括以下步骤：
(1)剪取胶原蛋白肠衣于锥形瓶中，记录肠衣重量M1；加入10wt％盐酸和蛋白酶制剂，在锥形瓶上放上漏斗，于75-85℃水浴锅中水浴加热1-4h；
然后蘸取少量溶液，在显微镜下观察是否消解完全，纤维素完全裸露为消解完全，消解图片见附图1；
(2)将消解完全的消解液倒入离心管，于3500-4500rpm下离心25-35min；溶液过多无法一次装入，分次离心，每次离心后倒出上清液，再将剩余消解液倒入离心，并加蒸馏水离心洗涤；
(3)对烘干的称量瓶进行称重，记为M2，离心后的底物倒入烘干的称量瓶，用蒸馏水冲洗，装有底物的称量瓶于100-110℃烘箱中干燥1-3h，称重记为 M3；
(4)通过计算公式微晶纤维素含量＝(M3-M2)/M1*100％，计算得出微晶纤维素含量。
优选的，步骤(1)中，盐酸与胶原蛋白肠衣的体积质量比为5mL：2g。
所述蛋白酶制剂为胶原蛋白水解酶。
胶原蛋白水解酶浓度对肠衣消解实验的影响：
研究相同时间、不同胶原蛋白水解酶浓度(胶原蛋白水解酶占肠衣质量) 0.10％、0.13％、0.16％、0.19％、0.22％、0.25％、0.28％、0.31％的情况下，检测肠衣消解程度，发现胶原蛋白酶用量越大，微晶纤维素消解越完全，但当胶原蛋白酶用量达到0.25％及以上时，变化趋于平稳。具体结果见表1。
表1
不同胶原蛋白水解酶含量的情况下，按照上面分别添加10％的盐酸，测试结果发现：
相同时间内，胶原蛋白水解酶用量0.16％，10％盐酸用量为5mL时，与胶原蛋白水解酶用量0.25％或者0.28％时，在显微镜下消解状态相同。
综上，步骤(1)中，胶原蛋白水解酶用量优选为0.16％，10％盐酸用量优选为5mL。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明同时使用蛋白酶制助剂和10％盐酸，大大缩短胶原蛋白肠衣的消解时间；
(2)本发明研究最佳温度、时间、pH值，提高了酶的活性和均一性，减少了50％的消解时间，提高了检测效率；
(3)本发明中的盐酸用量由原来的60mL降低为5mL，减少了近90％的盐酸用量，节约了实验成本；
(4)本发明设计科学合理，操作简单易行，检测效率高，省时省力，降低了检测成本；
(5)本发明可以有针对性的对试样进行消解，提高实验结果的准确性、可靠性。
附图说明
图1是胶原蛋白肠衣消解后的扫描电镜图。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步说明。
取未交联的肠衣与交联后的肠衣，分别用实施例和对比例中的方法进行消解。
实施例1
一种胶原蛋白肠衣中微晶纤维素含量的检测方法，包括以下步骤：
(1)剪取胶原蛋白肠衣于锥形瓶中，记录肠衣重量M1；加入10wt％盐酸和胶原蛋白水解酶，在锥形瓶上放上漏斗，于75℃水浴锅中水浴加热1h；
然后蘸取少量溶液，在显微镜下观察是否消解完全，纤维素完全裸露为消解完全；
盐酸与胶原蛋白肠衣的体积质量比为5mL：2g。
胶原蛋白水解酶用量为0.16％，10％盐酸用量为5mL。
(2)将消解完全的消解液倒入离心管，于3500rpm下离心25min；溶液过多无法一次装入，分次离心，每次离心后倒出上清液，再将剩余消解液倒入离心，并加蒸馏水离心洗涤；
(3)对烘干的称量瓶进行称重，记为M2，离心后的底物倒入烘干的称量瓶，用蒸馏水冲洗，装有底物的称量瓶于100℃烘箱中干燥1h，称重记为M3；
(4)通过计算公式微晶纤维素含量＝(M3-M2)/M1*100％，计算得出微晶纤维素含量。
实施例2
一种胶原蛋白肠衣中微晶纤维素含量的检测方法，包括以下步骤：
(1)剪取胶原蛋白肠衣于锥形瓶中，记录肠衣重量M1；加入10wt％盐酸和胶原蛋白水解酶，在锥形瓶上放上漏斗，于80℃水浴锅中水浴加热3h；
然后蘸取少量溶液，在显微镜下观察是否消解完全，纤维素完全裸露为消解完全；
盐酸与胶原蛋白肠衣的体积质量比为5mL：2g。
胶原蛋白水解酶用量为0.16％，10％盐酸用量为5mL。
(2)将消解完全的消解液倒入离心管，于4000rpm下离心30min；溶液过多无法一次装入，分次离心，每次离心后倒出上清液，再将剩余消解液倒入离心，并加蒸馏水离心洗涤；
(3)对烘干的称量瓶进行称重，记为M2，离心后的底物倒入烘干的称量瓶，用蒸馏水冲洗，装有底物的称量瓶于105℃烘箱中干燥2h，称重记为M3；
(4)通过计算公式微晶纤维素含量＝(M3-M2)/M1*100％，计算得出微晶纤维素含量。
实施例3
一种胶原蛋白肠衣中微晶纤维素含量的检测方法，包括以下步骤：
(1)剪取胶原蛋白肠衣于锥形瓶中，记录肠衣重量M1；加入10wt％盐酸和胶原蛋白水解酶，在锥形瓶上放上漏斗，于85℃水浴锅中水浴加热4h；
然后蘸取少量溶液，在显微镜下观察是否消解完全，纤维素完全裸露为消解完全；
盐酸与胶原蛋白肠衣的体积质量比为5mL：2g。
胶原蛋白水解酶用量为0.16％，10％盐酸用量为5mL。
(2)将消解完全的消解液倒入离心管，于4500rpm下离心35min；溶液过多无法一次装入，分次离心，每次离心后倒出上清液，再将剩余消解液倒入离心，并加蒸馏水离心洗涤；
(3)对烘干的称量瓶进行称重，记为M2，离心后的底物倒入烘干的称量瓶，用蒸馏水冲洗，装有底物的称量瓶于110℃烘箱中干燥3h，称重记为M3；
(4)通过计算公式微晶纤维素含量＝(M3-M2)/M1*100％，计算得出微晶纤维素含量。
对比例1
(1)剪取胶原蛋白肠衣于锥形瓶中，记录肠衣重量M1；加入10wt％盐酸，在锥形瓶上放上漏斗，于75℃水浴锅中水浴加热1h；
然后蘸取少量溶液，在显微镜下观察是否消解完全，纤维素完全裸露为消解完全；
盐酸与胶原蛋白肠衣的体积质量比为60mL：2g。
(2)将消解完全的消解液倒入离心管，于3500rpm下离心25min；溶液过多无法一次装入，分次离心，每次离心后倒出上清液，再将剩余消解液倒入离心，并加蒸馏水离心洗涤；
(3)对烘干的称量瓶进行称重，记为M2，离心后的底物倒入烘干的称量瓶，用蒸馏水冲洗，装有底物的称量瓶于100℃烘箱中干燥1h，称重记为M3；
(4)通过计算公式微晶纤维素含量＝(M3-M2)/M1*100％，计算得出微晶纤维素含量。
计算实施例1-3和对比例1的样品中检测的含量，结果见表2。
表2
Claims (7)
1.一种胶原蛋白肠衣中微晶纤维素含量的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)剪取胶原蛋白肠衣于锥形瓶中，记录肠衣重量M1；加入10wt％盐酸和蛋白酶制剂，在锥形瓶上放上漏斗，水浴加热；
(2)将消解完全的消解液倒入离心管进行离心；每次离心后倒出上清液，再将剩余消解液倒入离心，并加蒸馏水离心洗涤；
(3)对烘干的称量瓶进行称重，记为M2，离心后的底物倒入烘干的称量瓶，用蒸馏水冲洗，装有底物的称量瓶于烘箱中干燥，称重记为M3；
(4)通过计算公式微晶纤维素含量＝(M3-M2)/M1*100％，计算得出微晶纤维素含量。
2.根据权利要求1所述的胶原蛋白肠衣中微晶纤维素含量的检测方法，其特征在于：步骤(1)中，于75-85℃水浴锅中水浴加热1-4h。
3.根据权利要求1所述的胶原蛋白肠衣中微晶纤维素含量的检测方法，其特征在于：步骤(1)中，盐酸与胶原蛋白肠衣的体积质量比为5mL：2g。
4.根据权利要求1所述的胶原蛋白肠衣中微晶纤维素含量的检测方法，其特征在于：步骤(1)中，蛋白酶制剂用量为0.16％，10％盐酸用量为5mL。
5.根据权利要求1所述的胶原蛋白肠衣中微晶纤维素含量的检测方法，其特征在于：步骤(1)中，蛋白酶制剂为胶原蛋白水解酶。
6.根据权利要求1所述的胶原蛋白肠衣中微晶纤维素含量的检测方法，其特征在于：步骤(2)中，于3500-4500rpm下离心25-35min。
7.根据权利要求1所述的胶原蛋白肠衣中微晶纤维素含量的检测方法，其特征在于：步骤(3)中，装有底物的称量瓶于100-110℃烘箱中干燥1-3h。
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