CN113897317B - 解淀粉芽孢杆菌a-1及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)A‑1，所述解淀粉芽孢杆菌A‑1保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间2021年04月27日，保藏编号CGMCC No.22250。本发明还公开了所述解淀粉芽孢杆菌A‑1在抑制真菌生长、降解真菌毒素和/或者发酵生产γ‑聚谷氨酸中的应用。本发明的解淀粉芽孢杆菌A‑1可高效抑制真菌生长，并高效降解真菌毒素，还能高产低分子量的γ‑聚谷氨酸，本发明的解淀粉芽孢杆菌A‑1在开发抑制真菌毒素产生菌生长的微生物制剂以及高产低分子量γ‑聚谷氨酸的微生物制剂方面都有很好的应用前景。

Description

解淀粉芽孢杆菌A-1及其应用

技术领域

本发明属于微生物技术领域。更具体地说，本发明涉及一种解淀粉芽孢杆菌A-1及其应用。

背景技术

黄曲霉毒素(Aflatoxins，AFs)是一类主要由黄曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉(A.parasiticus)等真菌产生的有毒次级代谢产物。其中以AFB₁最为常见，毒性最大，致癌性最强，在1993年被世界卫生组织(WHO)的国际癌症研究机构(IARC)列为I级致癌物，其急性毒性是氰化钾的10倍、砒霜的68倍，在常规食品检测中也以AFB₁为首要污染检测指标。赭曲霉毒素A(OchratoxinA，OTA)是曲霉属和青霉属等产毒菌株产生的一组结构类似的有毒代谢产物，广泛存在于各种食品、饲料及其他农副产品中。OTA具有肾脏毒性、肝脏毒性、免疫毒性，以及致畸、致癌和致突变作用等多种毒性，对动物和人体健康有很大的潜在危害。因此，开展真菌毒素的抑制与去除技术研究，对于保护人类和动物健康，确保国家食品安全和粮食安全具有重大的意义。

对真菌或者其毒素的危害的防治方法主要为生物防治。生物防治是指利用微生物拮抗真菌，以抑制真菌的生长以及对其产生的毒素进行降解，该方式是一种比较绿色环保，有效的防治方式。芽孢杆菌是一种对环境友好，并且能够分泌很多抗菌物质的一种细菌。目前，芽孢杆菌可以通过分泌一定的抗菌物质来抑制真菌及其毒素的产生。现有很多研究者筛得很多有益细菌，如乳酸菌和芽孢杆菌等，对真菌的生长产生了拮抗。由于芽孢杆菌的无毒无害性，现在广受生物防治学家们的欢迎。

聚谷氨酸(聚-γ-谷氨酸，英文poly-γ-glutamicacid，简称PGA)是自然界中微生物发酵产生的水溶性多聚氨基酸。聚-γ-谷氨酸具有优良的水溶性、超强的吸附性和生物可降解性，降解产物为无公害的谷氨酸，是一种优良的环保型高分子材料，可作为保水剂、重金属离子吸附剂、絮凝剂、缓释剂以及药物载体等，在化妆品、环境保护、食品、医药、农业、沙漠治理等产业均有很大的商业价值和社会价值。因此，筛选出具有高产聚谷氨酸的细菌将会对聚谷氨酸的生产具有重要的意义。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一株解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)A-1，其能够抑制真菌的生长，降解真菌毒素以及代谢合成低分子量γ-聚谷氨酸。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)A-1，所述解淀粉芽孢杆菌A-1保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间2021年04月27日，保藏编号CGMCC No.22250。

所述的解淀粉芽孢杆菌A-1的应用，所述解淀粉芽孢杆菌A-1用于抑制真菌生长、降解真菌毒素和/或者发酵生产γ-聚谷氨酸。

优选的是，所述解淀粉芽孢杆菌A-1用于抑制黄曲霉、串珠镰刀菌、禾谷镰刀菌的生长。

优选的是，所述解淀粉芽孢杆菌A-1用于降解黄曲霉毒素B₁和赭曲霉毒素A。

优选的是，所述解淀粉芽孢杆菌A-1在通入氧气的条件下发酵生产γ-聚谷氨酸。

本发明至少包括以下有益效果：本发明的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)A-1可高效抑制真菌生长，并高效降解真菌毒素，还能高产低分子量的γ-聚谷氨酸，在开发抑制真菌毒素产生菌生长的微生物制剂以及高产低分子量γ-聚谷氨酸的微生物制剂方面都有很好的应用前景。

本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。

附图说明

图1为本发明解淀粉芽孢杆菌A-1在营养琼脂之平板上的菌落形态图；

图2为本发明解淀粉芽孢杆菌A-1在扫描电镜下的显微形态图；

图3为本发明解淀粉芽孢杆菌A-1的系统发育树；

图4为本发明解淀粉芽孢杆菌A-1拮抗黄曲霉的平板对峙图；

图5为本发明解淀粉芽孢杆菌A-1拮抗串珠镰刀菌的平板对峙图；

图6为本发明解淀粉芽孢杆菌A-1拮抗禾谷镰刀菌的平板对峙图；

图7为黄曲霉毒素B₁降解效果液相色谱图；

图8为赭曲霉毒素A降解效果液相色谱图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排除一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。

需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

<试验材料>

NA(牛肉膏蛋白胨琼脂培养基)：购买于北京陆桥公司，现配现用，称取33g于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，121℃高压灭菌15min，冷却至46℃倒平板。

LB液体培养基：由溶剂和溶质组成，溶质为蛋白胨、牛肉膏和NaCl，溶剂为水；蛋白胨在LB液体培养基中的浓度为1g/100mL，牛肉膏在LB液体培养基中的浓度为0.3g/100mL，NaCl在LB液体养基中的浓度为0.5g/100mL，并用NaOH调节该培养基的pH值至7.4。

PDA(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)：购买于北京陆桥公司，现配现用，称取33g于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，121℃高压灭菌15min，冷却至46℃倒平板。

黄曲霉，编号为NRRL3357，于中国科学院微生物研究所尹文兵教授处获得。

串珠镰刀菌，编号为FV7600，于中国科学院微生物菌种保藏中心购买。

禾谷镰刀菌，编号为PH-1，于中国农业科学院农产品加工研究所郭维教授处获得。

黄曲霉毒素B₁标准品：美正生物MZ standard，产品编号AF031。

赭曲霉毒素A(OTA)标准品：美正生物MZ standard，产品编号M44001。

黄曲霉毒素B₁免疫亲和柱：美正生物MZ standard，产品编号HCM0350A。

赭曲霉毒素A免疫亲和柱：美正生物MZ standard，产品编号HCM0725。

1×0.1％Tween PBS缓冲液：美国VICAM公司，产品编号G1112。

<菌株的筛选、鉴定>

以菜市场腐烂的胡萝卜所携带的土壤为细菌来源，取5g该土壤放入50mL离心管中，加入45mL去离子水，于摇床上震荡30min，静置30s，制成10^-1g/mL；取100μL 10^-1稀释液加900μL去离子水装入1mL EP管中，旋涡3-5s，制成10^-2g/mL，取100μL 10^-2稀释液加900μL去离子水装入1mL EP管中，旋涡3-5s，制成10^-3g/mL，以此类推至10^-6g/mL；采用NA平板，取300μL稀释液涂板，于37℃下培养24h；采用四区划线法从NA平板中挑单菌落(形状、大小、粘稠度各异)，并将单菌落加入LB液体培养基中，于37℃，180rpm(转/分钟)下培养48h，得细菌菌液，备用。

采用平板对峙培养法筛选黄曲霉抑制菌，将10⁷CFU/mL的黄曲霉孢子悬浮液点10μL于PDA平板的中央，等距离3cm处点涂10μL不同细菌菌液，其中一处滴10μL的LB液体培养基做空白对照组，待液体晾干后封口，37℃倒置培养5d，观察，选取抑制黄曲霉生长结果更好的菌株，命名A-1，将菌株A-1于-80℃甘油保存，备用。

将33％甘油保存的菌株A-1用平板划线法接种于营养琼脂培养基平板上活化后，于37℃培养24h后，观察菌落的形态特征，如图1所示。菌株A-1的菌落呈乳白色不透明状，表面具有粘稠感，粗糙有褶皱皮，边缘不平整，单菌落为圆形。

用2％的戊二醇进行固定，经电镜室中的日立S-750的扫描电镜(SEM)观察其形态，如图2所示。图2左侧图为单菌落的菌株A-1，呈短杆状，表面有细小颗粒感，两端圆滑无凸起，图2右侧图为聚类在一起的菌株A-1，每个都出现杆状，且部分表面出现褶皱。

使用通用引物扩增16s rDNA片段，并对扩增产物进行测序，得到该菌株的16srDNA序列SEQ.NO.1，然后将所得序列SEQ.NO.1用BLAST比对，并构建系统发育树，结果如图3所示。

经鉴定，该菌株A-1为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，解淀粉芽孢杆菌A-1保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间2021年04月27日，保藏编号CGMCC No.22250，保藏地址北京是朝阳区北辰西路1号院3号。

<解淀粉芽孢杆菌A-1抑菌试验>

1、解淀粉芽孢杆菌A-1对真菌抑菌试验

采用平板对峙培养法进行筛选，取10μL的1×10⁷CFU/mL待试真菌孢子悬液滴在PDA平板中央，在四周等距离3cm处，取10μL解淀粉芽孢杆菌A-1(OD₆₀₀＝0.8)悬液滴在四周，其中一处滴10μL的LB液体培养基做空白对照组，在超净工作台的酒精灯处，待液体在PDA培养基上变干，放进恒温培养箱中28℃下培养，5d后观察初筛结果。

待试真菌为黄曲霉，结果如图4所示，表明解淀粉芽孢杆菌A-1对黄曲霉具有抑制作用。

待试真菌为串珠镰刀菌，结果如图5所示，表明解淀粉芽孢杆菌A-1对串珠镰刀菌具有抑制作用。

待试真菌为禾谷镰刀菌，结果如图6所示，表明解淀粉芽孢杆菌A-1对禾谷镰刀菌具有抑制作用。

2、解淀粉芽孢杆菌A-1对真菌抑菌率试验

采用倾注平板法把制备好的解淀粉芽孢杆菌A-1无菌上清液，倒入约45℃未凝固的PDA培养基中混匀，迅速倒平板。待PDA培养就凝固后，在PDA培养基的中央滴10μL浓度为1×10⁷CFU/mL的待试真菌孢子悬浮液，以无菌空白培养基代替上清液做对照，于恒温培养箱中28℃，倒置培养5d左右，隔一天观察菌丝的生长情况，直至菌丝长满平板。每个试验重复3次。待试真菌的直径使用游标卡尺采用十字交叉法测量，取平均值作为测定结果。抑菌率按照以下的公式计算：

抑菌率(％)＝(对照组菌落生长直径—处理组菌落生长直径)/对照组菌落生长直径×100％。

待试真菌为黄曲霉，解淀粉芽孢杆菌A-1对黄曲霉的抑菌率为84％。

待试真菌为串珠镰刀菌，解淀粉芽孢杆菌A-1对串珠镰刀菌的抑菌率为72％。

待试真菌为禾谷镰刀菌，解淀粉芽孢杆菌A-1对禾谷镰刀菌的抑菌率为65％。

<解淀粉芽孢杆菌A-1的应用试验>

1、解淀粉芽孢杆菌A-1抑制花生粒上黄曲霉的应用试验

1)将解淀粉芽孢杆菌A-1接种于LB培养基中，37℃培养过夜，6000g离心10min，去上清，加入50mM磷酸盐缓冲液(pH 7.0)重悬，使菌浓度达到10⁸CFU/mL，选择无损伤、无病害的花生粒，用清水清洗后，以1％次氯酸钠消毒花生粒3min后以无菌水冲洗干净，处理组置于解淀粉芽孢杆菌A-1的菌悬液中浸泡1min，对照组中以10μL磷酸盐缓冲液代替菌悬液；

2)取出步骤1)获得的处理组和对照组的花生粒，置于超净台中晾干，分别对处理组和对照组的花生粒表面均匀喷洒黄曲霉孢子悬浮液(10⁵个/mL)；

3)在超净台中晾干步骤2)获得的处理组和对照组的花生粒，在灭菌培养皿中放置一张灭菌圆片滤纸，加灭菌水使滤纸湿润，在滤纸上均匀摆放处理后的花生粒，盖上培养皿盖，放置于28℃培养箱中培养6天；每个试验含6个重复，每个试验含3个平行，每个平行含6粒花生粒。

结果表明对照组的花生粒表面长满黄曲霉菌丝和孢子，而处理组的花生粒未发病，说明解淀粉芽孢杆菌A-1可显著抑制花生黄曲霉的污染。

2、解淀粉芽孢杆菌A-1抑制小麦籽粒上禾谷镰刀菌的应用试验

1)将解淀粉芽孢杆菌A-1接种于LB培养基中，37℃培养过夜，6000g离心10min，去上清，加入50mM磷酸盐缓冲液(pH 7.0)重悬，使菌浓度达到10⁸CFU/mL，选择无损伤、无病害的小麦籽粒，用清水清洗后，以1％次氯酸钠表面消毒3min后以无菌水冲洗干净，处理组置于解淀粉芽孢杆菌A-1菌悬液中浸泡1min，对照组中以10μL磷酸盐缓冲液代替菌悬液；

2)取出步骤1)处理获得的处理组和对照组小麦籽粒，置于超净台中晾干，在小麦籽粒表面均匀喷洒禾谷镰刀菌孢子悬浮液(10⁵个/mL)；

3)将步骤2)处理获得的处理组和对照组小麦籽粒于超净台中晾干后，在灭菌培养皿中放置一张灭菌圆片滤纸，加灭菌水使滤纸湿润，在滤纸上均匀摆放处理后的小麦籽粒，盖上培养皿盖，放置于28℃培养箱中培养6天；每个试验含6个重复，每个试验含3个平行，每个平行含6粒小麦籽粒。

结果表明对照组小麦籽粒表面长满禾谷镰刀菌菌丝，而处理组小麦籽粒未发病。说明解淀粉芽孢杆菌A-1可显著抑制小麦禾谷镰刀菌的污染。

3、解淀粉芽孢杆菌A-1抑制玉米粒上串珠镰刀菌的应用试验

1)将解淀粉芽孢杆菌A-1接种于LB培养基中，37℃培养过夜，6000g离心10min，去上清，加入50mM磷酸盐缓冲液(pH 7.0)重悬，使菌浓度达到10⁸CFU/mL，选择无损伤、无病害的玉米颗粒，用清水清洗后，以1％次氯酸钠表面消毒3min后以无菌水冲洗干净，处理组置于解淀粉芽孢杆菌A-1菌悬液中浸泡1min，对照组中以10μL磷酸盐缓冲液代替菌悬液；

2)取出步骤1)处理获得的处理组和对照组的玉米粒，置于超净台中晾干，在玉米表面均匀喷洒串珠镰刀菌的孢子悬浮液(10⁵个/mL)；

3)将步骤2)处理获得的处理组和对照组于超净台中晾干，在灭菌培养皿中放置一张灭菌圆片滤纸，加灭菌水使滤纸湿润，在滤纸上均匀摆放处理后的玉米粒，盖上培养皿盖，放置于28℃培养箱中培养6天；每个试验含6个重复，每个试验含3个平行，每个平行含6粒玉米。

结果表明对照组玉米粒表面长满串珠镰刀菌菌丝，而处理组玉米粒未发病。说明解淀粉芽孢杆菌A-1可显著抑制串珠镰刀菌的污染。

4、解淀粉芽孢杆菌A-1生产γ-聚谷氨酸的应用试验

1)种子液的制备：将解淀粉芽孢杆菌A-1(接种浓度OD₆₀₀＝0.8，接种量1％)接种到种子培养基中，摇床转速180rpm，37℃下培养24h至OD₆₀₀值大于3.0，得到种子液，其中，种子培养基的配方为：10g/L胰蛋白胨、5g/L酵母提取物、10g/L氯化钠，蒸馏水配制；

2)发酵培养：将步骤1)中的种子液以3％的接种量接种于发酵培养基中，7.5L发酵罐的发酵培养基装液量为4L，通气比控制在1.0vvm(每分钟通气量与罐体实际料液体积的比值)，初始pH值为6.5、在28℃培养48h，得到发酵液，其中，发酵培养基的配方为：45g/L谷氨酸钠、50g/L柠檬酸、40g/L豆饼粉、1g/L磷酸二氢钾、0.05g/L硫酸锰、1.2g/L硫酸镁，蒸馏水配制；

3)检测：将步骤2)中得到的发酵液经过稀释处理(控制浓度在1g/L以下)，然后通过高效液相色谱对稀释液中γ-聚谷氨酸分子量和产量进行检测。

结果表明，发酵液中的γ-聚谷氨酸分子量约为96kDa，发酵液中γ-聚谷氨酸产量为77.7g/L。

5、解淀粉芽孢杆菌A-1对黄曲霉毒素B₁(AFB₁)的降解作用

1)将解淀粉芽孢杆菌A-1(接种浓度OD₆₀₀＝0.8，接种量1％)接种于LB液体培养基中至初始OD₆₀₀＝0.05，37℃条件下，200rpm(旋转半径20mm)震荡培养24h，10 000r/min离心10分钟，收集上清液；

2)将1mg AFB₁标准品溶解于10mL色谱纯甲醇中获得浓度为100ppm(mg/L)的AFB₁溶液；

3)制备实验组溶液：

取5mL步骤1)收集的上清液，置于10mL离心管中，向离心管中加入5μL步骤2)得到的AFB₁溶液，充分混匀后37℃静置72h，然后10 000g离心10min并收集上清，得到实验组溶液；

4)制备对照组溶液：

按照步骤3)的方法，取5mLLB液体培养基替代5mL步骤1)收集的上清液，其余操作不变，得到对照组溶液；

5)对实验组溶液和对照组溶液分别作为待测溶液，进行如下操作：

a)向4体积份待测溶液中加入6体积份无水甲醇，室温震荡提取5分钟，12000r/min离心5分钟，取上清液用于下一步净化操作；

b)取步骤a)得到的上清液，使用AFB₁免疫亲和柱进行除杂，具体操作为：取步骤a)得到的上清液，使其通过AFB₁免疫亲和柱，调节流速为1-2滴/s，直至空气完全通过免疫亲和柱；用10mL纯水以1-2滴/s的流速通过亲和柱，对亲和柱进行清洗；最后用1mL无水甲醇以1-2滴/s的流速淋洗亲和柱，将此洗脱液收集于1.5mL的离心管中，用0.22μm有机相尼龙膜过滤后，装入2mL色谱进样小瓶中，得到样品液；

c)取步骤b)得到的样品液，用HPLC(柱后光化学衍生)对净化提取得到的样品进行检测；

HPLC检测条件为流动相甲醇:水＝7:3；流速1mL/min；色谱柱C18 150mm×4.6mm，5μm；激发波长350nm，检测波长450nm；柱温30℃；进样量20μL；

6)根据步骤5)检测结果，计算黄曲霉毒素B₁(AFB₁)降解率，计算方法为：

AFB₁降解率(％)＝(对照组残留AFB₁含量－实验组残留AFB₁含量)/对照组残留AFB₁含量×100。

实验重复五次，结果取平均值。

检测结果如图7所示，其中，A为黄曲霉毒素标准品(AFB₁的保留时间为5.705min)；B为对照组(AFB₁的保留时间为5.716min)；C为实验组(AFB₁的保留时间为5.712min)。

对照组残留AFB₁含量为96.95±0.96μg/L。

实验组残留AFB₁含量为13.83±1.49μg/L。

结果表明，解淀粉芽孢杆菌对AFB₁有较好的降解效果，降解率为85.73％。

6、解淀粉芽孢杆菌A-1对赭曲霉毒素A(OTA)的降解作用试验

1)将解淀粉芽孢杆菌A-1接种于LB液体培养基中至初始OD₆₀₀＝0.05，37℃条件下，200rpm(旋转半径20mm)震荡培养24h，10 000r/min离心10分钟收集上清液：

2)将1mg OTA标准品(MZ standard，货号M44001)溶解于10mL色谱纯甲醇中获得浓度为100ppm的OTA标准品溶液：

3)制备实验组溶液：取5mL步骤1)收集的上清液，置于10mL离心管中，向离心管中加入5μL步骤2)得到的OTA溶液，充分混匀后37℃静置72h，然后10000g离心10min并收集上清，得到实验组溶液：

4)制备对照组溶液：按照步骤3)的方法，取5mL LB液体培养基替代5mL步骤1)收集的上清液，其余操作不变，得到对照组溶液：

5)实验组溶液和对照组溶液分别作为待测溶液，进行如下步骤：

a)向4体积份待测溶液中加入6体积份无水甲醇，室温震荡提取5分钟，12 000r/min离心5分钟，取上清液用于下一步净化操作；

b)取步骤a)得到的上清液，使用OTA免疫亲和柱进行除杂，具体操作为：取步骤a)得到的上清液，使其通过OTA免疫亲和柱，调节流速为1-2滴/s，直至空气完全通过免疫亲和柱；用10mL纯水以1-2滴/s的流速通过亲和柱，对亲和柱进行清洗；最后用1mL无水甲醇以1-2滴/s的流速淋洗亲和柱，将此洗脱液收集于1.5mL的离心管中，用0.22μm有机相尼龙膜过滤后，装入2mL色谱进样小瓶中，得到样品液：

c)取步骤b)得到的样品液，用HPLC(柱后光化学衍生)对净化提取得到的样品进行检测；

HPLC检测条件为流动相乙腈:水:乙酸＝99:99:2；流速1mL/min；色谱柱C18 150mm×4.6mm，5μm；激发波长333nm，检测波长460nm；柱温30℃；进样量20μL；

6)计算赭曲霉毒素A(OTA)降解率，计算方法为：

OTA降解率(％)＝(对照组残留OTA含量—实验组残留OTA含量)/对照组残留OTA含量×100。

实验重复五次，结果取平均值。

检测结果如图8所示，其中，A为赭曲霉毒素A标准品(OTA的保留时间为14.036min)；B为对照组(OTA的保留时间为14.005min)；C为实验组(OTA的保留时间为13.945min)。

对照组残留OTA含量为95.40±0.96μg/L。

实验组残留OTA含量为21.67±0.55μg/L。

结果表明，解淀粉芽孢杆菌A-1对赭曲霉毒素A(OTA)有一定的降解效果，降解率为77.29％。

尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。

<110>中国农业科学院农产品加工研究所

<120>解淀粉芽孢杆菌A-1及其应用

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 2101

<212> DNA

<213> Bacillus amyloliquefaciens

<400> 1

ggggcggcgt atactgcaag tcgagcggac agatgggagc ttgctccctg atgttagcgg 60

cggacgggtg agtaacacgt gggtaacctg cctgtaagac tgggataact ccgggaaacc 120

ggggctaata ccggatgctt gtttgaaccg catggttcag acataaaagg tggcttcggc 180

taccacttac agatggaccc gcggcgcatt agctagttgg tgaggtaacg gctcaccaag 240

gcaacgatgc gtagccgacc tgagagggtg atcggccaca ctgggactga gacacggccc 300

agactcctac gggaggcagc agtagggaat cttccgcaat ggacgaaagt ctgacggagc 360

aacgccgcgt gagtgatgaa ggttttcgga tcgtaaagct ctgttgttag ggaagaacaa 420

gtgccgttca aatagggcgg caccttgacg gtacctaacc agaaagccac ggctaactac 480

gtgccagcag ccgcggtaat acgtaggtgg caagcgttgt ccggaattat tgggcgtaaa 540

gggctcgcag gcggtttctt aagtctgatg tgaaagcccc cggctcaacc ggggagggtc 600

attggaaact ggggaacttg agtgcagaag aggagagtgg aattccacgt gtagcggtga 660

aatgcgtaga gatgtggagg aacaccagtg gcgaaggcga ctctctggtc tgtaactgac 720

gctgaggagc gaaagcgtgg ggagcgaaca ggattagata cccctggtag tccacgccgt 780

aaacgatgag tgctaagtgg ttagggggtt tccgcccctt tagtgctgca gctaacgcat 840

taagcactcc gcctggggga gtacggtcgc aagactgaaa ctcaaaggaa ttgacggggg 900

cccgcccagc ggtggaacat gtggtttatt ccaagcaacg cgaagaacct taccaggtct 960

tgactcctct gacatcctaa aaataggacg tccctttcgg ggcaaaatga cgggtggggc 1020

tggttgtcct cactcctggc ctggaaatgt gggtaaatcc cattctgtca tcttcggcgg 1080

ctggctccta aaaggttacc tcaccgactt cgggtgttac aaactctcgt ggtgtgacgg 1140

gcggtgtgta caaggcccgg gaacgtattc accgcggcat gctgatccgc gattactagc 1200

gattccagct tcacgcagtc gagttgcaga ctgcgatccg aactgagaac agatttgtgg 1260

gattggctta acctcgcggt ttcgctgccc tttgttctgt ccattgtagc acgtgtgtag 1320

cccaggtcat aaggggcatg atgatttgac gtcatcccca ccttcctccg gtttgtcacc 1380

ggcagtcacc ttagagtgcc caactgaatg ctggcaacta agatcaaggg ttgcgctcgt 1440

tgcgggactt aacccaacat ctcacgacac gagctgacga caaccatgca ccacctgtca 1500

ctctgccccc gaaggggacg tcctatctct aggattgtca gaggatgtca agacctggta 1560

aggttcttcg cgttgcttcg aattaaacca catgctccac cgcttgtgcg ggcccccgtc 1620

aattcctttg agtttcagtc ttgcgaccgt actccccagg cggagtgctt aatgcgttag 1680

ctgcagcact aaggggcgga aaccccctaa cacttagcac tcatcgttta cggcgtggac 1740

taccagggta tctaatcctg ttcgctcccc acgctttcgc tcctcagcgt cagttacaga 1800

ccagagagtc gccttcgcca ctggtgttcc tccacatctc tacgcatttc accgctacac 1860

gtggaattcc actctcctct tctgcactca agttccccag tttccaatga ccctccccgg 1920

ttgagccggg ggctttcaca tcagacttaa gaaaccgcct gcgagccctt tacgcccaat 1980

aattccggac aacgcttgca cctacgttta ccgggctgct ggcactaatt agccggggtt 2040

tctggtaagg accgtcaggt gccgcctatt tgaacggact tgtcttccta aaacaaagtt 2100

t 2101

Claims (3)

1.一株解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）A-1，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌A-1保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间2021年04月27日，保藏编号CGMCC No. 22250。

2.如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌A-1的应用，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌A-1用于抑制真菌生长、降解真菌毒素和/或者发酵生产γ-聚谷氨酸，所述真菌为黄曲霉、串珠镰刀菌和禾谷镰刀菌，所述真菌毒素为黄曲霉毒素B₁和赭曲霉毒素A，所述应用为非疾病治疗目的。

3.根据权利要求2所述的解淀粉芽孢杆菌A-1的应用，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌A-1在通入氧气的条件下发酵生产γ-聚谷氨酸。