CN113893826A - 一种高性能悬浮磁珠的制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种高性能悬浮磁珠的制备方法及应用，方法包括如下步骤：Fe3O4磁性颗粒的制备及筛选：铁盐在碱性环境中，采用超声辅助水相共沉淀方法合成Fe3O4，以柠檬酸根修饰Fe3O4磁性颗粒表面，使颗粒呈分散状态，减少团聚，得到超顺磁性Fe3O4纳米颗粒；Fe3O4磁性颗粒的表面包被修饰：取纳米Fe3O4分散液，均质化，加入硅酸盐溶液，使二氧化硅包被修饰到纳米Fe3O4表面，获得的磁粒用去离子水洗至上清液呈无色澄清且pH为中性，制备得到Fe3O4/Si‑OH纳米磁粒分散液。这样，使得颗粒呈分散状态，减少团聚，提高了纳米粒的单分散性；得到具有良好亲水分散性的Fe3O4磁性颗粒，使得磁珠粒径均一、磁响应性能强、分散性、悬浮性好，可广泛用于各种样本中核酸的提取与纯化。
Description
技术领域
本发明涉及磁性材料制备技术领域，尤其涉及一种高性能悬浮磁珠的制备方法及应用。
背景技术
生物磁珠是涉及纳米材料科学和生物科学的一种新型功能化材料。生物磁珠表面易于改性修饰，可以包被生物活性基团，生物活性基团可以与多种生物活性物质发生偶联，兼具有液体的流动性和固体磁性颗粒材料的双重特点，通过外加磁场便可快速实现固液分离，操作简便，是近年来快速发展起来的应用于新的免疫学技术的核心材料，广泛应用于病理、生理、药理、微生物、生化以及分子遗传学等各个领域，其在免疫检测、细胞分离、生物大分子提取纯化和分子生物学等方面也得到了越来越广泛的应用。因此，快速高效地分离得到高纯度核酸是现代分子生物学领域进行各种科学研究的重要先决条件。对于核酸提取技术而言，磁珠法具有常规提取方法无法比拟的独特优势，诸如提取和纯化一步完成，定量提取，实现提取自动化，操作安全简便等特点。
但现有技术存在以下问题：进口磁珠价格昂贵，且在货期和运输上有一定的限制；而绝大部分国产磁珠粒径为亚微米级，粒径不够均一，比表面积小，静置悬浮性差，黏壁，重分散性差，并且生物相容性差，因此提取过程中核酸容易丢失，导致得率低，使得检测灵敏度降低，无法满足目前自动化、大通量、高得率的核酸提取的要求。
发明内容
本发明的目的是提供一种高性能悬浮磁珠的制备方法及应用。
本发明所提供的高性能悬浮磁珠的制备方法，包括如下步骤：
S1用于Fe3O4磁性颗粒的制备及筛选的步骤：铁盐在碱性环境中，采用超声辅助水相共沉淀方法合成Fe3O4，以柠檬酸根修饰Fe3O4磁性颗粒表面，使颗粒呈分散状态，减少团聚，得到超顺磁性Fe3O4纳米颗粒；S2用于Fe3O4磁性颗粒的表面包被修饰的步骤：取纳米Fe3O4分散液，均质化，加入硅酸盐溶液，使二氧化硅包被修饰到纳米Fe3O4表面，获得的磁粒用去离子水洗至上清液呈无色澄清且pH为中性，制备得到Fe3O4/Si-OH纳米磁粒分散液。
所述S1用于Fe3O4磁性颗粒的制备及筛选的步骤，包括如下步骤：S11分别配置0.1-1mol的Fe3+水溶液与Fe2+水溶液，按照Fe3+与Fe2+物质的量的比为3：4混合置于三口瓶中；S12将上述混合液搅拌均匀后，通入氮气除氧30min，向混合液中加入氨水调整pH值为10-12，同时开启超声并剧烈搅拌0.5小时，加入0.1-2mol柠檬酸钠溶液至体系内，继续超声搅拌0.5小时，停止超声用水浴锅加热至90℃反应2.5小时，期间继续机械搅拌并通入氮气；S13反应结束，冷却至室温后，反应产物磁分离，用去离子水反复洗涤至中性，然后超声分散，得到具有良好亲水分散性的超顺磁性Fe3O4磁性颗粒。所述步骤S12中，通过梯度设置转速和溶液中柠檬酸根的浓度，合成多组Fe3O4磁性颗粒。进行Fe3O4磁性颗粒合成时，搅拌速度分别设置为600r/min、800r/min、1000r/min共三个梯度的转速。在三个转速条件下，溶液中柠檬酸根的浓度设置为0.02mol、0.04mol、0.06mol、0.08mol、0.1mol共五种，共合成了15个组合的Fe3O4磁性颗粒，调整其固含量为100mg/ml，然后对这15个组合的Fe3O4磁性颗粒进行筛选。所述步骤S13中，对于步骤S12中合成的多组Fe3O4磁性颗粒根据磁响应时间、粒径大小、悬浮性三个方面进行筛选：S131磁响应时间：分别吸取混合均匀的1.5ml Fe3O4磁性颗粒置于1.5ml离心管，放置于磁力架上进行吸附，记录完全磁分离时间；S132粒径大小：用粒度仪测试，平均粒径为600nm左右；S133悬浮性：分别吸取2ml Fe3O4磁性颗粒置于2ml离心管，混合2min，自然沉降，记录液面沉到离心管1ml处时间。S134最后筛选出搅拌速度为800r/min、柠檬酸根的浓度为0.06mol时合成的Fe3O4磁性颗粒综合表现最好，然后再进行表面的包被修饰。所述S2用于Fe3O4磁性颗粒的表面包被修饰的步骤包括：S21取5-200g Fe3O4磁性颗粒，用无水乙醇清洗三次，分散到80％的无水乙醇中，移入三颈烧瓶中，室温下以200r/min-600r/min速度搅拌；S22加入质量浓度为25％氨水，将pH值调节为11，开启超声，滴加经过重蒸处理过的正硅酸四乙酯的溶液，滴加完毕后超声反应2h-12h；S23反应结束后用无水乙醇清洗两遍，再用1mol的稀盐酸清洗2次，然后用去离子水洗涤至中性，得到Fe3O4/SiO2复合磁性颗粒，将上述方法制得的Fe3O4/SiO2复合磁性颗粒经超声分散处理1h后，用纳米激光粒度仪测得其二次粒径为500nm-4μm，饱和磁化强度为60.0-85emu/g。所述步骤S22中，正硅酸四乙酯溶液滴加量为2-200ml，滴加速度为每分钟2ml。
本发明所提供的高性能悬浮磁珠的制备方法制得磁珠的应用方法，包括如下步骤：S3用于自动核酸提取仪提取核酸的步骤；在自动核酸提取纯化仪中设定并运行核酸提取程序，运行完成后，将洗脱产物转移到新的离心管，即获得基因组DNA,进行后续检测或储存于-20℃以下备用；S4用于电泳检测的步骤：制备浓度1％琼脂糖凝胶，取上述提取的样本基因组进行电泳，50min后在凝胶成像系统上观察电泳结果并分析；S5用于核酸测定仪检测的步骤：提取全血基因组DNA洗脱液3μl，使用Q5000微量核酸测定仪检测基因组DNA的浓度和纯度并输出测定结果。
本发明所提供的高性能悬浮磁珠的制备方法，采用超声辅助水相共沉淀方法制备Fe3O4磁性颗粒，以柠檬酸根修饰Fe3O4磁性颗粒表面，使颗粒呈分散状态，减少团聚，与普通机械搅拌相比，超声不仅加快了纳米粒的生成，而且显著提高了纳米粒的单分散性，工艺流程简单，操作方便；设置梯度转速和梯度柠檬酸根的浓度，合成了15个组合的Fe3O4磁性颗粒，然后在这些组合中选出最优组合，最后进行包被筛选后，能够得到具有良好亲水分散性的Fe3O4磁性颗粒，制得的核酸提取用纳米生物磁珠粒径均一、磁响应性能强、分散性、悬浮性好，所得磁性颗粒可以很好地应用于自动化核酸提取；在Fe3O4磁性颗粒表面包被硅羟基，能很大程度地降低粒子的零电点和屏蔽磁偶极子的互相作用，磁性颗粒具有优良的生物相容性、亲水性以及非常好的化学稳定性和胶体稳定性，可使复合粒子容易进一步生物功能化，能够有效吸附大量核酸，可以广泛用于全血、血清、血浆、组织、血斑、拭子洗液、病毒保存液、环境等样本，以及唾液、精液、尿液、淋巴液、各种体液等样本中核酸的提取与纯化。
附图说明
图1为本发明实施例一所述的高性能悬浮磁珠的制备方法的步骤示意图；
图2为本发明提供的实施例一、二、三所制备的磁性颗粒应用到猪全血DNA提取的样本基因组电泳检测图；
图3为本发明实施例四所述的高性能悬浮磁珠的制备方法制得磁珠的应用方法的步骤示意图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一
如图1所示，本实施例提供一种高性能悬浮磁珠的制备方法，包括如下步骤：
S1用于Fe3O4磁性颗粒的制备及筛选的步骤：铁盐在碱性环境中，采用超声辅助水相共沉淀方法合成Fe3O4，以柠檬酸根修饰Fe3O4磁性颗粒表面，使颗粒呈分散状态，减少团聚，得到超顺磁性Fe3O4纳米颗粒。与普通机械搅拌相比，超声不仅加快了纳米粒的生成，而且显著提高了纳米粒的单分散性和悬浮性；
S2用于Fe3O4磁性颗粒的表面包被修饰的步骤：取纳米Fe3O4分散液，均质化，加入硅酸盐溶液，使二氧化硅包被修饰到纳米Fe3O4表面，获得的磁粒用去离子水洗至上清液呈无色澄清且pH为中性，制备得到Fe3O4/Si-OH纳米磁粒分散液。
进一步，所述S1用于Fe3O4磁性颗粒的制备及筛选的步骤，包括如下步骤：
S11分别配置0.1-1mol的Fe3+水溶液与Fe2+水溶液，按照Fe3+与Fe2+物质的量的比为3：4混合置于三口瓶中；
S12将上述混合液搅拌均匀后，通入氮气除氧30min，向混合液中加入氨水调整pH值为10-12，同时开启超声并剧烈搅拌0.5小时，加入0.1-2mol柠檬酸钠溶液至体系内，继续超声搅拌0.5小时，停止超声用水浴锅加热至90℃反应2.5小时，期间继续机械搅拌并通入氮气；
S13反应结束，冷却至室温后，反应产物磁分离，用去离子水反复洗涤至中性，然后超声分散，得到具有良好亲水分散性的超顺磁性Fe3O4磁性颗粒。
进一步，所述步骤S12中，通过梯度设置转速和溶液中柠檬酸根的浓度，合成多组Fe3O4磁性颗粒。
进一步，进行Fe3O4磁性颗粒合成时，搅拌速度分别设置为600r/min、800r/min、1000r/min共三个梯度的转速。
进一步，在三个转速条件下，溶液中柠檬酸根的浓度设置为0.02mol、0.04mol、0.06mol、0.08mol、0.1mol共五种，一共合成了15个组合的Fe3O4磁性颗粒，调整其固含量为100mg/ml，然后对这15个组合的Fe3O4磁性颗粒，进行筛选。
进一步，所述步骤S13中，对于步骤S12中合成的多组Fe3O4磁性颗粒根据磁响应时间、粒径大小、悬浮性三个方面进行筛选：
S131磁响应时间：分别吸取混合均匀的1.5ml Fe3O4磁性颗粒置于1.5ml离心管，放置于磁力架上进行吸附，记录完全磁分离时间；
S132粒径大小：用粒度仪测试，平均粒径为600nm左右；
S133悬浮性：分别吸取2ml Fe3O4磁性颗粒置于2ml离心管，混合2min，自然沉降，记录液面沉到离心管1ml处时间。
S134最后筛选出搅拌速度为800r/min、柠檬酸根的浓度为0.06mol时合成的Fe3O4磁性颗粒综合表现最好，然后再进行表面的包被修饰。
进一步，所述S2用于Fe3O4磁性颗粒的表面包被修饰的步骤包括：
S21取5-200g Fe3O4磁性颗粒，用无水乙醇清洗三次，分散到80％的无水乙醇中，移入三颈烧瓶中，室温下以200r/min-600r/min速度搅拌；
S22加入质量浓度为25％氨水，将pH值调节为11，开启超声，滴加经过重蒸处理过的正硅酸四乙酯的溶液，滴加完毕后超声反应2h-12h；
S23反应结束后用无水乙醇清洗两遍，再用1mol的稀盐酸清洗2次，然后用去离子水洗涤至中性，得到Fe3O4/SiO2复合磁性颗粒，将上述方法制得的Fe3O4/SiO2复合磁性颗粒经超声分散处理1h后，用纳米激光粒度仪测得其二次粒径为500nm-4μm，饱和磁化强度为60.0-85emu/g。
进一步，所述步骤S22中，正硅酸四乙酯溶液滴加量为2-200ml，滴加速度为每分钟2ml。
本领域技术人员可以理解，本发明采用超声辅助水相共沉淀方法制备Fe3O4磁性颗粒，以柠檬酸根修饰Fe3O4磁性颗粒表面，使颗粒呈分散状态，减少团聚，与普通机械搅拌相比，超声不仅加快了纳米粒的生成，而且显著提高了纳米粒的单分散性，工艺流程简单，操作方便；设置梯度转速和梯度柠檬酸根的浓度，合成了15个组合的Fe3O4磁性颗粒，然后在这些组合中选出最优组合，最后进行包被筛选后，能够得到具有良好亲水分散性的Fe3O4磁性颗粒，制得的核酸提取用纳米生物磁珠粒径均一、磁响应性能强、分散性、悬浮性好，所得磁性颗粒可以很好地应用于自动化核酸提取；在Fe3O4磁性颗粒表面包被硅羟基，能很大程度地降低粒子的零电点和屏蔽磁偶极子的互相作用，磁性颗粒具有优良的生物相容性、亲水性以及非常好的化学稳定性和胶体稳定性，可使复合粒子容易进一步生物功能化，能够有效吸附大量核酸，可以广泛用于全血、血清、血浆、组织、血斑、拭子洗液、病毒保存液、环境等样本，以及唾液、精液、尿液、淋巴液、各种体液等样本中核酸的提取与纯化。
实施例二
本实施例提供了一种高性能悬浮磁珠的制备方法，包括如下步骤：
S1用于Fe3O4磁性颗粒的制备及筛选的步骤：铁盐在碱性环境中，采用超声辅助水相共沉淀方法合成Fe3O4，以柠檬酸根修饰Fe3O4磁性颗粒表面，使颗粒呈分散状态，减少团聚；
进一步，S1具体包括如下步骤：
S14称取15g FeCl3与20g FeCl2溶于100ml超纯水中混合均匀，转移到三口瓶中；
S15上述混合液搅拌均匀后，通入氮气除氧30min，向混合液中加入碱溶液调整pH值为10-12，同时开启超声并剧烈搅拌0.5小时，转速800r/min，加入1.35g柠檬酸三钠溶液至体系，继续超声搅拌0.5小时，停止超声用水浴锅加热至90℃反应2.5小时，期间继续机械搅拌并通入氮气；
S16反应结束，冷却至室温后，反应产物磁分离，用去离子水反复洗涤至中性，然后超声分散，得到具有良好亲水分散性的Fe3O4磁性颗粒；
S2用于Fe3O4磁性颗粒的表面包被修饰的步骤：在Fe3O4磁性颗粒表面用SiO2包被修饰；
进一步，S2具体步骤如下包括：
S24取10g Fe3O4磁性颗粒，用无水乙醇清洗三次，分散到100ml 80％的无水乙醇中，移入三颈烧瓶中，室温下以300r/min速度搅拌；
S25加入质量浓度为25％氨水，将pH值调节为11，开启超声，滴加经过重蒸处理过的正硅酸四乙酯的溶液20ml，控制滴加速度为每分钟2ml，滴加完毕后超声反应6h；
S26反应结束后用无水乙醇清洗两遍，再用1mol的稀盐酸清洗2次，然后用去离子水洗涤至中性，得到Fe3O4/SiO2-OH复合磁性颗粒。
实施例三
本实施例所提供了一种提高磁珠悬浮性能的制备方法，包括以下制作步骤：
S1用于Fe3O4磁性颗粒的制备及筛选的步骤：铁盐在碱性环境中，采用超声辅助水相共沉淀方法合成Fe3O4，以柠檬酸根修饰Fe3O4磁性颗粒表面，使颗粒呈分散状态，减少团聚；
进一步，所述S1具体包括如下步骤：
S17称取150gFeCl3·6H2O与200g FeCl2·7H2O溶于1L超纯水中混合均匀，转移到三口瓶中；
S18上述混合液搅拌均匀后，通入氮气除氧30min，向混合液中加入氨水溶液调整pH值为10-12，同时开启超声并剧烈搅拌0.5小时，转速800r/min，加入13.5g柠檬酸三钠溶液至体系，继续超声搅拌0.5小时，停止超声用水浴锅加热至90℃反应2.5小时，期间继续机械搅拌并通入氮气；
S19反应结束，冷却至室温后，反应产物磁分离，用去离子水反复洗涤至中性，然后超声分散，得到具有良好亲水分散性的Fe3O4磁性颗粒；
进一步，所述S2用于Fe3O4磁性颗粒的表面包被修饰的步骤：在Fe3O4磁性颗粒表面用SiO2包被修饰；
所述S2具体包括如下步骤：
S27取100g Fe3O4磁性颗粒，用无水乙醇清洗三次遍，分散到1L 80％的无水乙醇中，移入三颈烧瓶中，室温下以300r/min速度搅拌；
S28加入质量浓度为25％氨水，将pH值调节为11，开启超声，滴加经过重蒸处理过的正硅酸四乙酯的溶液200ml，控制滴加速度为每分钟2ml，滴加完毕后超声反应12h；
S29反应结束后用无水乙醇清洗两遍，再用1mol的稀盐酸清洗2次，然后用去离子水洗涤至中性，得到Fe3O4/SiO2-OH复合磁性颗粒。
实施例四
本实施例提供了将上述实施例1-3中得到的磁性颗粒应用到猪全血DNA的提取，包括如下步骤：
S3用于自动核酸提取仪提取核酸的步骤：(以LJbio32H自动核酸提取纯化仪为例)
(1)在96孔板第1列和第7列加入400μl裂解结合液。
(2)在96孔板第2列和第8列加入600μl洗涤液Ⅰ。
(3)在96孔板第3列和第9列加入500μl洗涤液Ⅱ。
(4)在96孔板第4列和第10列加入500μl洗涤液Ⅱ。
(5)在96孔板第5列和第11列加入100mg/ml混匀的纳米磁珠20μl和300μl超纯水；
(6)在96孔板第6列和第12列加100μl洗脱液；
(7)在96孔板第1列和第7列加入200μl全血样本,按照表1设定并运行核酸提取程序。
(8)运行完成后，将96孔板中的洗脱产物转移到新的离心管，即获得基因组DNA,进行后续检测或储存于-20℃以下备用。
表1核酸提取上机程序
S4用于电泳检测的步骤：
制备浓度1％琼脂糖凝胶，取上述提取的样本基因组进行电泳，50min后在凝胶成像系统上观察电泳结果；结果如图2所示，M:DL 100-2000bp marker；重复1-4为实施二；重复5-8为实施三。图2中显示为单一条带，条带清晰，该结果表明，本发明优选的实施例提取的全血基因组DNA得率高。
S5用于核酸测定仪检测的步骤：
取实施例二至三中提取的猪全血基因组DNA洗脱液3μl，使用Q5000微量核酸测定仪检测基因组DNA的浓度和纯度，结果如表2所示。
表2实施例二至三中提取的猪全血基因组DNA测定表
参照表2所示，本发明优选实施例提取的全血基因组DNA核酸含量高、纯度好，完全适用于下游生物实验。
本发明通过对上述实施例磁性颗粒的制备和应用检测，结果证明：本发明制备的磁性颗粒具有优良的生物相容性、亲水性以及非常好的化学稳定性和胶体稳定性、粒径均一、磁响应性能强、分散性好、悬浮性好，所得磁性颗粒可以很好地配合自动化核酸提取仪，广泛用于全血、血清、血浆、组织、血斑、拭子洗液、病毒保存液、环境等样本，以及唾液、精液、尿液、淋巴液、各种体液等样本中核酸的提取与纯化。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (9)
1.一种高性能悬浮磁珠的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1用于Fe3O4磁性颗粒的制备及筛选的步骤：铁盐在碱性环境中，采用超声辅助水相共沉淀方法合成Fe3O4，以柠檬酸根修饰Fe3O4磁性颗粒表面，使颗粒呈分散状态，减少团聚，得到超顺磁性Fe3O4纳米颗粒；
S2用于Fe3O4磁性颗粒的表面包被修饰的步骤：取纳米Fe3O4分散液，均质化，加入硅酸盐溶液，使二氧化硅包被修饰到纳米Fe3O4表面，获得的磁粒用去离子水洗至上清液呈无色澄清且pH为中性，制备得到Fe3O4/Si-OH纳米磁粒分散液。
2.如权利要求1所述的高性能悬浮磁珠的制备方法，其特征在于，所述S1用于Fe3O4磁性颗粒的制备及筛选的步骤，包括如下步骤：
S11分别配置0.1-1mol的Fe3+水溶液与Fe2+水溶液，按照Fe3+与Fe2+物质的量的比为3：4混合置于三口瓶中；
S12将上述混合液搅拌均匀后，通入氮气除氧30min，向混合液中加入氨水调整pH值为10-12，同时开启超声并剧烈搅拌0.5小时，加入0.1-2mol柠檬酸钠溶液至体系内，继续超声搅拌0.5小时，停止超声用水浴锅加热至90℃反应2.5小时，期间继续机械搅拌并通入氮气；
S13反应结束，冷却至室温后，反应产物磁分离，用去离子水反复洗涤至中性，然后超声分散，得到具有良好亲水分散性的超顺磁性Fe3O4磁性颗粒。
3.如权利要求2所述的高性能悬浮磁珠的制备方法，其特征在于，所述步骤S12中，通过梯度设置转速和溶液中柠檬酸根的浓度，合成多组Fe3O4磁性颗粒。
4.如权利要求3所述的高性能悬浮磁珠的制备方法，其特征在于，进行Fe3O4磁性颗粒合成时，搅拌速度分别设置为600r/min、800r/min、1000r/min共三个梯度的转速。
5.如权利要求4所述的高性能悬浮磁珠的制备方法，其特征在于，在三个转速条件下，溶液中柠檬酸根的浓度设置为0.02mol、0.04mol、0.06mol、0.08mol、0.1mol共五种，共合成了15个组合的Fe3O4磁性颗粒，调整其固含量为100mg/ml，然后对这15个组合的Fe3O4磁性颗粒，进行筛选。
6.如权利要求5所述的高性能悬浮磁珠的制备方法，其特征在于，所述步骤S13中，对于步骤S12中合成的多组Fe3O4磁性颗粒根据磁响应时间、粒径大小、悬浮性三个方面进行筛选：
S131磁响应时间：分别吸取混合均匀的1.5ml Fe3O4磁性颗粒置于1.5ml离心管，放置于磁力架上进行吸附，记录完全磁分离时间；
S132粒径大小：用粒度仪测试，平均粒径为600nm左右；
S133悬浮性：分别吸取2ml Fe3O4磁性颗粒置于2ml离心管，混合2min，自然沉降，记录液面沉到离心管1ml处时间。
S134最后筛选出搅拌速度为800r/min、柠檬酸根的浓度为0.06mol时合成的Fe3O4磁性颗粒，然后再进行表面的包被修饰。
7.如权利要求6所述的高性能悬浮磁珠的制备方法，其特征在于，所述S2用于Fe3O4磁性颗粒的表面包被修饰的步骤包括：
S21取5-200g Fe3O4磁性颗粒，用无水乙醇清洗三次，分散到80％的无水乙醇中，移入三颈烧瓶中，室温下以200r/min-600r/min速度搅拌；
S22加入质量浓度为25％氨水，将pH值调节为11，开启超声，滴加经过重蒸处理过的正硅酸四乙酯的溶液，滴加完毕后超声反应2h-12h；
S23反应结束后用无水乙醇清洗两遍，再用1mol的稀盐酸清洗2次，然后用去离子水洗涤至中性，得到Fe3O4/SiO2复合磁性颗粒，将上述方法制得的Fe3O4/SiO2复合磁性颗粒经超声分散处理1h后，用纳米激光粒度仪测得其二次粒径为500nm-4μm，饱和磁化强度为60.0-85emu/g。
8.如权利要求7所述的高性能悬浮磁珠的制备方法，其特征在于，所述步骤S22中，正硅酸四乙酯溶液滴加量为2-200ml，滴加速度为每分钟2ml。
9.一种如权利要求1至8中任一项所述的高性能悬浮磁珠的制备方法制得磁珠的应用方法，其特征在于，包括如下步骤：
S3用于自动核酸提取仪提取核酸的步骤；在自动核酸提取纯化仪中设定并运行核酸提取程序，运行完成后，将洗脱产物转移到新的离心管，即获得基因组DNA,进行后续检测或储存于-20℃以下备用；
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