CN113893303A - 一种重楼提取物的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种重楼提取物的制备方法，涉及重楼提取技术的领域。重楼提取物的制备方法，包括如下步骤，混合浸润：将重楼粉与溶剂按1:(9~15)的重量比混合均匀，得到混合溶液；回流提取：将混合溶液回流提取1.5~2.5h，过滤后得到A滤渣和A滤液，再将A滤渣与溶剂混合后回流提取0.8~1.2h，过滤后得到B滤液；浓缩制取：将A滤液与B滤液合并，得到合并液，将合并液浓缩后，得到重楼提取物。本申请的方法通过控制重楼粉和乙醇的重量比，减少了提取步骤，可以减少因多次过滤、洗脱等步骤造成的损失，有助于提高重楼提取物的得率，而且，提取步骤少、反应条件温和、可操作性强，便于进行工业化制备重楼提取物。
Description
技术领域
本发明涉及重楼提取技术的领域，尤其是涉及一种重楼提取物的制备方法。
背景技术
重楼是一种珍贵的中药材，是百合科植物云南重楼或七叶一枝花的干燥根茎。重楼味苦、性微寒、有小毒，具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊之功效。经过多年的发展，重楼不仅在医药中使用，还在许多保健产品中使用。一般将重楼的提取物添加到保健产品中，可以提高保健产品的保健效果。
在用重楼制备保健产品之前，需要选择合适的制备方法，制取重楼提取物。在相关技术中，先将重楼接菌种发酵一段时间后，滤干水份并进行灭菌处理后，进行微波加热回流提取，再将提取液经过脱色、脱脂、减压浓缩、离心沉淀后，得到的上清液，通过大孔吸附树脂柱，用乙醇溶液洗脱，然后将乙醇洗脱液浓缩后，采用反相液相色谱分离得到乙醇和提取物，所得提取物经过结晶、干燥，制得重楼提取物。
针对上述中的相关技术，发明人认为在上述制备方法中，重楼需要经过发酵、回流提取、过滤、脱色脱脂、浓缩沉淀、洗脱、分离和结晶等多个步骤，才能制备得到重楼提取物，容易造成重楼提取物损失过多，不利于提高重楼提取物的得率。
发明内容
为了改善重楼提取物损失过多的问题，本申请提供一种重楼提取物的制备方法。
本申请提供的一种重楼提取物的制备方法采用如下的技术方案：
一种重楼提取物的制备方法，包括如下步骤，
混合浸润：将重楼粉与溶剂按1:(9～15)的重量比混合均匀，得到混合溶液；
回流提取：将混合溶液回流提取1.5～2.5h，过滤后得到A滤渣和A滤液，再将A滤渣与溶剂混合后回流提取0.8～1.2h，得到B滤液；
浓缩制取：将A滤液与B滤液合并，得到合并液，将合并液浓缩后，得到重楼提取物。
本申请通过试验优化重楼粉与溶剂的重量比，发明人发现，将重楼粉与乙醇的重量比控制在1:(9～15)的范围内，便于重楼粉内的有效物质溶解在溶剂中，而且，在上述条件下，将重楼粉与溶剂混合浸润后，直接进行回流提取和浓缩制取，即可得到重楼提取物。本申请通过控制重楼粉和乙醇的重量比，减少了提取步骤，可以减少因多次过滤、洗脱等步骤造成的损失，有助于提高重楼提取物的得率，而且，提取步骤少、反应条件温和、可操作性强，便于进行工业化制备重楼提取物。
优选的，混合浸润步骤中，将重楼粉与溶剂混合后，每隔5～15min搅拌1～5min，混合0.8～1.5h后，得到混合溶液。
当重楼粉与溶剂混合后，重楼粉内的有效物质会逐渐溶解在溶剂中，但是溶解一段时间之后，在重楼粉颗粒的周围，有效物质的浓度较高，不便于有效物质继续溶解在溶剂中。本申请的方法通过间隔一段时间，搅拌一次混合溶液，便于已经溶解在溶剂中的有效物质分散在溶剂中，使得重楼粉颗粒周围的有效物质浓度降低，有助于重楼粉中剩余的有效物质溶解在溶剂中，还可以缩短溶解时间，便于提高重楼提取物的得率和提取效率。
优选的，混合浸润步骤中的重楼粉与回流提取步骤中的溶剂的重量比为1:(5～12)。
由于滤渣A中还存在有效物质，本申请的方法通过将滤渣A与溶剂进行二次提取，可以提高重楼提取物的得率。本申请通过试验优化二次提取中溶剂的用量，发明人发现，将溶剂的用量控制在上述范围内，便于提取出滤渣A中的有效物质，有助于进一步提高重楼提取物的得率。
优选的，浓缩制取步骤中，重楼提取物的重量为合并液重量的21％～25％。
提取物中含有的溶剂过多，会导致提取物不符合使用条件，浓缩时间过长，不利于提高提取效率。发明人发现，当回流提取步骤中的溶剂与混合浸润步骤中的重楼粉的重量比在1:(5～12)的范围内时，将合并液浓缩至原重量的21％～25％，剩余的提取物中基本无液滴，呈膏状，得到的提取物的得率高，而且，得到的提取物满足电子烟烟液的使用要求，缩短了浓缩时间，便于提高提取效率。
优选的，所述重楼粉的细度为20～60目。
粉末在溶液中会发生团聚现象，粉末团聚在一起，在受热过程中，会造成粉末团的外部与内部受热不均匀，容易导致粉末发生焦糊现象。当重楼粉与溶剂的重量比控制在1:(9～15)的范围内时，将重楼粉控制在20～60目，重楼粉颗粒之间的间隙较大，不易团聚，便于溶剂浸润重楼粉颗粒，有助于重楼粉中的有效物质溶解在溶剂中。
因此，本申请将重楼粉控制在20～60目，可以减少重楼粉在回流提取的过程中团聚，从而减少重楼粉因受热不均而造成的焦糊现象，便于进一步提高重楼提取物的得率。
优选的，所述溶剂为浓度85％～95％的乙醇。
本申请的方法选用浓度85％～95％的乙醇作为溶剂，乙醇的沸点较低，反应条件温和，在进行回流提取的过程中，可以减少安全隐患；工业酒精的浓度超过95％时，便难于制备，本申请的方法选择浓度为85％～95％的乙醇，在工业生产中易于生产，便于进行工业化提取重楼提取物，有助于降低提取成本；而且，在浓缩制取步骤中，容易将乙醇与重楼提取物进行分离，便于得到重楼提取物。
优选的，回流提取步骤中，回流提取的温度为78～85℃。
当回流提取的温度过高时，容易导致溶解在乙醇中的有效成分被破坏；当回流提取的温度过低时，不利于重楼粉中的有效物质溶解在乙醇中；由于乙醇在常压下的沸点为78℃，本申请的方法将回流提取的温度控制在上述范围内，乙醇蒸发的速度适中，而且对有效物质的损害小，有助于提高重楼提取物的得率。
优选的，浓缩制取步骤中，在-0.08～-0.12MPa中进行浓缩，浓缩过程的温度为52～62℃。
减小浓缩过程中的压力，可以降低乙醇的沸点。本申请通过试验优化浓缩过程中压力和温度，发明人发现，将浓缩过程中的压力控制在-0.08～-0.12MPa的范围内，并将浓缩过程中的温度控制在52～62℃的范围内，有助于提高重楼提取物的得率。
综上所述，本申请具有以下有益效果：
1、本申请的方法，通过控制重楼粉和乙醇的重量比，减少了提取步骤，可以减少因多次过滤、洗脱等步骤造成的损失，有助于提高重楼提取物的得率，而且，提取步骤少、反应条件温和、可操作性强，便于进行工业化制备重楼提取物。
2、本申请中的重楼粉的细度为20～60目，可以减少重楼粉在回流提取的过程中团聚，从而减少重楼粉因受热不均而造成的焦糊现象，便于进一步提高重楼提取物的得率。
3、本申请的溶剂为浓度85％～95％的乙醇，便于得到，有助于降低提取成本，而且，在浓缩制取步骤中，容易将乙醇与重楼提取物进行分离，便于得到重楼提取物。
具体实施方式
以下结合实施例对本申请作进一步详细说明。
本发明中的重楼粉是含水量为30％的滇重楼的根茎粉碎成的粉。
实施例
实施例1-7
如表一所示，实施例1-7的区别在于重楼粉和溶剂的重量比不同。其中，第一份溶剂和第二份溶剂均是浓度为95％的乙醇。
以下以实施例1为例进行详细说明.
实施例1的重楼提取物的制备方法，包括如下步骤：
混合浸润：按配比，称取细度为20～40目的重楼粉和第一份溶剂，将重楼粉和第一份溶剂放入混合器中，每隔10min搅拌3min，混合1h后，得到混合溶液；
回流提取：将混合溶液加入回流提取设备中，将回流提取设备内的温度保持在80℃，回流提取2h后得到提取液A，使用抽滤机过滤提取液A，得到A滤渣和A滤液，再将A滤渣和第二份溶剂加入回流提取设备中，将回流提取设备内的温度保持在80℃，回流提取1h后得到提取液B，使用抽滤机过滤提取液B，得到B滤液；
浓缩制取：将A滤液与B滤液加入反应釜中，得到合并液，将反应釜内的压力保持在-0.1MPa、温度保持在57℃，对合并液进行浓缩，浓缩过程中测试合并液的剩余重量，当剩余重量为合并液原重量的23％时，停止浓缩，剩余的膏状物即为重楼提取物。
表一
实施例8
本实施例与实施例2的区别之处在于，重楼粉的细度为40-60目。
实施例9
本实施例与实施例2的区别之处在于，重楼粉的细度为60-80目。
实施例10
本实施例与实施例2的区别之处在于，重楼粉的细度为10-20目。
实施例11
本实施例与实施例2的区别之处在于，溶剂是浓度为90％的乙醇。
实施例12
本实施例与实施例2的区别之处在于，溶剂是浓度为85％的乙醇。
实施例13
本实施例与实施例2的区别之处在于，溶剂是浓度为80％的乙醇。
实施例14
本实施例与实施例2的区别之处在于，当合并液的剩余重量为合并液原重量的21％时，停止浓缩，剩余的膏状物即为重楼提取物。
实施例15
本实施例与实施例2的区别之处在于，当合并液的剩余重量为合并液原重量的25％时，停止浓缩，剩余的膏状物即为重楼提取物。
实施例16
本实施例与实施例2的区别之处在于，当合并液的剩余重量为合并液原重量的20％时，停止浓缩，剩余的膏状物即为重楼提取物。
实施例17
本实施例与实施例2的区别之处在于，当合并液的剩余重量为合并液原重量的26％时，停止浓缩，剩余的膏状物即为重楼提取物。
实施例18
本实施例与实施例2的区别之处在于，混合浸润步骤中，将重楼粉和第一份溶剂放入混合器中，每隔5min搅拌1min，混合0.8h后，得到混合溶液。
实施例19
本实施例与实施例2的区别之处在于，混合浸润步骤中，将重楼粉和第一份溶剂放入混合器中，每隔15min搅拌5min，混合1.5h后，得到混合溶液。
实施例20
本实施例与实施例2的区别之处在于，混合浸润步骤中，将重楼粉和第一份溶剂放入混合器中，连续搅拌1h后，得到混合溶液。
实施例21
本实施例与实施例2的区别之处在于，回流提取步骤中，将回流提取设备内的温度保持在78℃。
实施例22
本实施例与实施例2的区别之处在于，回流提取步骤中，将回流提取设备内的温度保持在85℃。
实施例23
本实施例与实施例2的区别之处在于，回流提取步骤中，将回流提取设备内的温度保持在76℃。
实施例24
本实施例与实施例2的区别之处在于，回流提取步骤中，将回流提取设备内的温度保持在87℃。
实施例25
本实施例与实施例2的区别之处在于，浓缩制取步骤中，将反应釜内的压力保持在-0.08MPa、温度保持在62℃。
实施例26
本实施例与实施例2的区别之处在于，浓缩制取步骤中，将反应釜内的压力保持在-0.12MPa、温度保持在52℃。
实施例27
本实施例与实施例2的区别之处在于，浓缩制取步骤中，将反应釜内的压力保持在-0.06MPa、温度保持在70℃。
实施例28
本实施例与实施例2的区别之处在于，浓缩制取步骤中，将反应釜内的压力保持在-0.14MPa、温度保持在45℃。
对比例
对比例1
本对比例提供一种从重楼中提取纯化重楼皂苷Ⅰ的方法，包括以下步骤：
S1：将重楼粉碎为粗粉，放入密闭容器中，接菌种在60℃下发酵48h，菌种为酵母菌、放线菌、枯草杆菌、芽孢杆菌的组合物，发酵完成后使用无菌蒸馏水洗涤3次，滤干水份并进行灭菌处理，加入9倍的95％的乙醇，微波加热回流提取2次，每次提取15min，同时通过控制微波辐照量来控制回流加热的温度为95℃，提取完毕后过滤，合并提取液；
S2：将步骤S1中的提取液使用活性炭进行脱色，再使用丙酮进行脱脂，置于65℃的旋转蒸发器中，减压至0.02MPa,浓缩至重楼皂苷含量为15％；向浓缩液中加入85％的乙醇溶液，在3000r/min的离心仪中连续离心3次，合并上清液；
S3：将步骤S2中的上清液通过D101大孔吸附树脂柱，条件为：解析剂为58％的乙醇溶液，其用量是大孔吸附树脂体积的3.2倍，再生溶剂为3.5％的KOH溶液，吸附区流速10BV/h，解吸区流速20BV/h，再生区流速10BV/h，切换时间为650s，温度为60℃，压力为0.1MPa，依次用55％、80％的乙醇溶液洗脱，收集80％的乙醇洗脱液，浓缩得到浓缩液；
S4：将步骤S3中的浓缩液采用反相液相色谱分离得到的乙醇和提取物，回收乙醇，所得提取物在16℃条件下进行结晶，在70℃条件下干燥3h，制得纯度为98.5％的重楼皂苷Ⅰ，得率为2.5％。
对比例2-3
如表二所示，对比例2-3与实施例1的区别之处在于，重楼粉、第一份溶剂和第二份溶剂的重量比不同。
表二
性能检测试验
得率计算
将实施例1-28和对比例2-3得到的重楼提取物放入烘箱中，在70℃条件下干燥3h，得到固体提取物，固体提取物与混合浸润步骤中的重楼粉的重量比，即为重楼提取物的得率，结果见表三。
纯度计算
依次取实施例1-28和对比例1-3得到的重楼提取物，加入到高效液相色谱中，其中色谱条件为InertsilODS-3C18色谱柱(150mm×4.6mm，5μm)；流动相为乙腈-水(45∶55)；检测波长为210nm；流速为1.0mL·min-1；柱温为35℃；进样量为20.0μL。利用面积归一化法计算重楼提取物的纯度，结果见表三。
提取效率计算
依次计算实施例1-28和对比例1-3从实验开始至实验结束耗费的时间，以分钟为单位，用时短越短，提取效率越高，结果见表三。
表三
以下结合表三提供的检测数据，详细说明本申请。
实施例1和对比例1针对重楼提取物的提取方法进行了对比。可以看出，相比于对比例1，实施例1得到重楼提取物的纯度相差不大，但是实施例1的重楼提取物的得率和提取效率显著提高。这说明，在本申请的制备方法下，有助于显著提高重楼提取物的得率和提取效率。
实施例1-3和对比例2-3针对重楼粉与第一份溶剂的重量比进行了对比。可以看出，相比于实施例1，实施例,2-3得到的重楼提取物的纯度和提取效率变化不大，收率均较大；对比例2-3得到的重楼提取物的纯度和提取效率变化不大，但是得率明显减小。这说明在重楼粉与第一份溶剂的质量比为1:(9～15)的范围内时，有助于提高重楼提取物的得率。
实施例2和实施例4-7针对重楼粉与第二份溶剂的重量比进行了对比。可以看出，相比于实施例2，实施例4-7的重楼提取物的纯度和提取效率均变化不大，但是实施例4和5重楼提取物的得率变化较小，实施例6和7的重楼提取物的得率显著减小，而且比实施例4和5重楼提取物的得率更小。这说明，在重楼粉与第二份溶剂的重量比为1:(5～12)的范围内时，有助于进一步提高重楼提取物的得率。
实施例2和实施例8-10针对重楼粉与第二份溶剂的重量比进行了对比。可以看出，相比于实施例2，实施例8得到的重楼提取物的得率、纯度和提取效率变化均不大，实施例9得到的重楼提取物的得率和纯度均较小，实施例10得到的重楼提取物的得率较小，纯度变化不大。这说明，在重楼粉的细度为20-60目的范围内，有助于提高重楼提取物的得率，当重楼粉的细度大于60目时，不利于提高重楼提取物的纯度。
实施例2和实施例11-13针对溶剂的浓度进行了对比。可以看出，相比于实施例2，实施例11-13得到的重楼提取物的得率依次减小，而且实施例13得到的重楼提取物的得率最小。这说明，当溶剂采用乙醇时，提高乙醇的浓度，有助于提高重楼提取物的得率，当乙醇的浓度在85-95％的范围内时，对重楼粉的提取效果较好。
实施例2和实施例14-17针对重楼提取物与合并液原重量的重量比进行了对比。可以看出，相比于实施例2，实施例14-17的得率均变化不大，但是，实施例14和16的提取效率依次降低，实施例14和16的纯度依次增大，实施例15和17的提取效率依次提高，实施例15和17得到的重楼提取物的纯度依次减小。这说明，重楼提取物与合并液原重量的重量比增大，容易导致提取效率较低，重楼提取物与合并液原重量的重量比减小，容易导致重楼提取物的纯度较小，当重楼提取物与合并液原重量的重量比在21％～25％时，可以将重楼提取物的提取效率和纯度均保持在较大的数值范围内。
实施例2和实施例18-20针对混合浸润步骤中的搅拌间隔时间进行了对比。可以看出，相比于实施例2，实施例18-20的重楼提取物的得率、纯度和提取效率均变化不大。这说明，在实施例2和实施例18-20的搅拌条件下，均有助于提高重楼提取物的得率、纯度和提取效率。
实施例2和实施例21-24针对回流提取步骤中的提取温度进行了对比。可以看出，相比于实施例2，实施例21和22的重楼提取物的得率、纯度和提取效率均变化不大，实施例23的重楼提取物的得率明显降低，实施例24的重楼提取物的纯度较小。这说明，当回流提取步骤中的提取温度在78～85℃之间时，有助于提高重楼提取物的得率和纯度。
实施例2和实施例25-28针对浓缩制取步骤中的浓缩条件进行了对比。可以看出，相比于实施例2，实施例25和26的重楼提取物的得率和纯度均变化不大，实施例27和28的得率较小，实施例25和实施例27的提取效率较低，实施例26和实施例28的提取效率较高。这说明，当浓缩制取步骤中的浓缩压力为-0.08～-0.12MPa、温度为52～62℃时，可以提高重楼提取物的得率和提取效率。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (8)
1.一种重楼提取物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤，
混合浸润：将重楼粉与溶剂按1:(9~15)的重量比混合均匀，得到混合溶液；
回流提取：将混合溶液回流提取1.5~2.5h，过滤后得到A滤渣和A滤液，再将A滤渣与溶剂混合后回流提取0.8~1.2h，过滤后得到B滤液；
浓缩制取：将A滤液与B滤液合并，得到合并液，将合并液浓缩后，得到重楼提取物。
2.根据权利要求1所述的一种重楼提取物的制备方法，其特征在于：混合浸润步骤中，将重楼粉与溶剂混合后，每隔5~15min搅拌1~5min，混合0.8~1.5h后，得到混合溶液。
3.根据权利要求1所述的一种重楼提取物的制备方法，其特征在于：混合浸润步骤中的重楼粉与回流提取步骤中的溶剂的重量比为1:(5~12)。
4.根据权利要求3所述的一种重楼提取物的制备方法，其特征在于：浓缩制取步骤中，重楼提取物的重量为合并液重量的21%~25%。
5.根据权利要求3所述的一种重楼提取物的制备方法，其特征在于：所述重楼粉为20~60目。
6.根据权利要求1所述的一种重楼提取物的制备方法，其特征在于：溶剂是浓度为85%~95%的乙醇。
7.根据权利要求6所述的一种重楼提取物的制备方法，其特征在于：回流提取步骤中，回流提取的温度为78~85℃。
8.根据权利要求6所述的一种重楼提取物的制备方法，其特征在于：浓缩制取步骤中，在-0.08~-0.12MPa中进行浓缩，浓缩过程的温度为52~62℃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| CN202111139355.5A CN113893303A (zh) | 2021-09-28 | 2021-09-28 | 一种重楼提取物的制备方法 |
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Citations (2)
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| CN1899491A (zh) * | 2006-06-30 | 2007-01-24 | 浙江大学 | 一种重楼总皂苷的制备方法及其用途 |
| CN107619427A (zh) * | 2017-11-03 | 2018-01-23 | 隆安县荣胜养殖有限公司 | 一种从重楼中提取纯化重楼皂苷ⅰ的方法 |
-
2021
- 2021-09-28 CN CN202111139355.5A patent/CN113893303A/zh active Pending
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| 叶方等: "紫外-可见分光光度法测定武当山区重楼属植物总皂苷的含量", 《中国药师》 * |
| 潘梦等: "UPLC-MS/MS同时测定大鼠血浆中9种重楼皂苷类成分及其药代动力学研究", 《湖北医药学院学报》 * |
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