CN113876738A - 一种安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂及其制备方法 - Google Patents

一种安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂及其制备方法，该槲皮素纳米缓释制剂包括聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒以及负载在聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒上的槲皮素。本发明提供一种以醋酸为引发剂的自发聚合法制备安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂，此法没有使用有毒的有机溶剂溶解不溶于水的槲皮素而是使用冰醋酸溶解。冰醋酸为弱酸，调pH时酸度值变化缓慢，易控制pH值，而强酸盐酸不能，且醋酸易在水中电离出醋酸根阴离子，此阴离子可为引发剂，当单体加入水中自动引发其聚合为聚合物，纳米粒从而包裹槲皮素，增加了槲皮素的溶解性和生物利用度。此法具有低成本、易操作、耗能低、无污染、安全性高等优点。

Description

一种安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂及其 制备方法
技术领域
本发明属于槲皮素纳米缓释制剂技术领域，主要涉及一种安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂及其制备方法。
背景技术
我国是煤炭大国，生产性粉尘是煤矿的主要职业危害因素，井下生产过程中能生产大量粉尘，作业人员由于在长期劳动过程中吸入危害性粉尘且在肺部储留而患上尘肺病，尘肺病中最常见的是煤工尘肺和矽肺。矽肺，即矽尘肺纤维化，是由于长期吸入大量矽尘(主要成分为SiO2)所引起，以肺部弥漫性纤维化为主的全身性疾病，其临床病理主要表现为矽结节、巨噬细胞性肺泡炎及尘性肺纤维化，是尘肺中最常见、进展最快、危害最严重的一种类型。
肺纤维化是指正常的肺组织被损坏后由于异常修复而造成的肺部疤痕性变化，医学上将其归属为肺间质病。其病理早期以下呼吸道急性炎症反应为主，包括肺泡上皮细胞损伤、成纤维细胞增殖、炎性细胞浸润等，继而肺组织过度修复、正常结构破坏，细胞外基质代谢紊乱和沉积，肺实质损伤，最终发生肺纤维化。我国矽尘肺纤维化的发病率呈上升趋势，其造成的危害已受到广泛关注，成为影响社会健康持续发展的重大公共卫生问题。目前，临床上用于治疗矽尘肺纤维化的主要是化学药物和生物药。这些药物虽然能抑制肺纤维化，但长期临床应用的治疗效果差强人意且毒副作用大。中药在我国具有悠久的使用传统，种植成本低，资源遍地都是，具有低毒连续且缓慢、多层次和多靶点的治疗策略，在世界范围内逐渐发挥防治矽尘肺纤维化上的优势，特别是中药中的活性成分如苷类、萜类、黄酮类和生物碱类等都显示出对肺组织纤维化不同程度的保护或治疗作用。
槲皮素属天然多羟基黄酮类化合物，广泛存在于多种中草药中，来源广、价格低、安全性高等优点。具有多种生物活性在抗氧化、抗肿瘤、抗菌、抗炎等药理作用。目前已有大量报道其对肺部补充营养，滋养肺阴，清除自由基而清肺的抗肺纤维化作用。尽管槲皮素治疗肺纤维化的疗效确切，但它低水溶性，差吸收性，弱内在活性和快速体内代谢和低血药浓度等限制了其临床应用。目前，纳米技术作为药物载体在疾病治疗中具有重要的应用价值。已有学者致力于槲皮素制剂的研究，如：槲皮素纳米粒，槲皮素纳米乳，槲皮素纳米脂质体，槲皮素聚合物胶束等。这些制剂虽可提高槲皮素水溶性和生物利用度，但对疾病的治疗效果却不是很理想，同时制剂还有一定毒性，制备工艺要求高、复杂等不足。
发明内容
本发明是针对目前临床上治疗矽尘肺纤维化的药物与技术的不足，提供了一种安全有效的对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂及其制备方法。
为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：一种安全有效的对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂，包括聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒以及负载在聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒上的槲皮素。
进一步地，所述槲皮素纳米缓释制剂的包封率为87.63～93.58％，粒径为138～163nm。
槲皮素纳米缓释制剂的制备方法包括以下步骤：
步骤一：将槲皮素完全溶于冰醋酸中，逐步缓慢地加水并加适量的冰醋酸调节pH并得到一定体积的混合终溶液。
步骤二：将十二烷基硫酸钠和泊洛沙姆-68加入到上述步骤一所得溶液中并超声使成混合均匀的溶液。
步骤三：在连续磁力搅拌下，将α-氰基丙烯酸正丁酯溶液逐滴缓慢地加入到上述步骤二的搅拌混合介质中。室温搅拌后，再用氢氧化钠调整pH可初步得到槲皮素载进聚氰基丙烯酸正丁酯的纳米混悬液。
步骤四：将右旋糖酐-70的水溶液缓慢逐滴的加入上述步骤三中的槲皮素载入聚氰基丙烯酸正丁酯的纳米混悬液中，搅拌反应后，可获得右旋糖酐-70覆盖的、稳定性较高的聚合物包裹的槲皮素纳米粒。
进一步地，上述步骤二中的十二烷基硫酸钠为槲皮素纳米粒的乳化剂和口服制剂中的渗透促进剂，其不仅可以通过增加纳米粒的电负性电势进而增加槲皮素纳米粒的稳定性，而且还增加了槲皮素的口服生物利用度，泊洛沙姆-68为槲皮素纳米粒的乳化剂和粒子分散剂，步骤四中的右旋糖酐-70为槲皮素纳米粒的稳定剂和外层纳米粒的覆盖剂，也增加了槲皮素纳米粒的稳定性。
作为上述技术方案的进一步优化，步骤一中槲皮素0.04～0.10克，初始冰醋酸为1毫升，pH调节为2.8-3.3，混合溶液终体积为80毫升。
作为上述技术方案的进一步优化，步骤二中的十二烷基硫酸钠0.05-0.10克，泊洛沙姆-68为0.5～0.8克，超声3-5分钟。
作为上述技术方案的进一步优化，步骤三中，在磁力搅拌速度900～1100r/min下，将150-200微升的α-氰基丙烯酸正丁酯溶液逐滴缓慢加入步骤二中的混合均匀溶液，室温下维持900～1100r/min的速度搅拌1.5～2.5小时后，用0.01mol/L的氢氧化钠调节pH为7.0±0.1可初步得到槲皮素载进聚氰基丙烯酸正丁酯的纳米混悬液。
作为上述技术方案的进一步优化，步骤四中将0.8～1.1克右旋糖酐-70的20毫升水溶液缓慢逐滴加入步骤三中的槲皮素载入聚氰基丙烯酸正丁酯的纳米混悬液中，以900～1100r/min的搅拌速度搅拌0.5～1小时可获得右旋糖酐-70覆盖的、稳定性较高的聚合物包裹的槲皮素纳米粒。
一种如上所述的方法制备的一种安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂。
一种如上所述的一种安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂在抗矽尘肺纤维化领域上的应用。
本发明的有益效果体现在：
1.本发明提供的一种安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂的制备方法中，进行自发聚合反应时，没有使用有毒的有机溶剂溶解不溶于水的槲皮素，而是使用的冰醋酸，所以制备过程中无有机溶剂残留的问题，而且冰醋酸为弱酸，调pH时酸度值变化缓慢，易控制pH值。
2.本发明提供的一种安全有效的对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂的制备方法中，使用了一种阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠，它是经FDA批准的在口服制剂中常使用的赋形剂，具有增溶剂，稳定和促渗吸收的作用，且FDA规定其在人类口服使用安全剂量可高达95毫克，而本次制备过程中所加入的十二烷基硫酸钠的量很少，控制在95毫克以内，对人体几乎无毒副作用，因此本发明提供的槲皮素纳米缓释制剂是一种安全的可增强口服吸收的制剂。
3.本发明提供的一种安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂的制备方法，制备工艺简单，绿色低耗能。制备过程的反应前后均无有害、有毒物质参与或生成，无毒副，安全性高，适用于大规模药物制剂的生产。同时因槲皮素包裹进表面还有乳化剂SDS的聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒，使得槲皮素的溶解性增加，稳定性增强，释药缓慢，促渗透吸收时间延长，药效增强，生物利用度增加，进而发挥对抗矽尘肺纤维化的药理效果。
附图说明
图1为实施例1制得的对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂的扫描电镜图；
图2为实施例1制得的对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂的Zeta电位图；
图3是实施例1制得的对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂的槲皮素释放图；
图4为实施例1制得的对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂对人内皮细胞生存率(安全性)图；
图5为实施例1的抗矽尘肺纤维化过程中大鼠体重变化图；
图6为实施例1的抗矽尘肺纤维化H&E染色病理实验结果图。
具体实施方式
下面将结合实施例来详细说明本发明。
实施例1
一种安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂的制备方法
步骤一：将0.04克槲皮素完全溶于1毫升冰醋酸中，逐步缓慢地加水并加适量的冰醋酸调节pH至3.3，并使得混合终体积为80毫升。
步骤二：将0.10克十二烷基硫酸钠和0.8克泊洛沙姆-68加入到上述步骤一所得溶液中并超声5分钟使其成为混合均匀的溶液。
步骤三：在连续磁力搅拌1100r/min下，将200微升α-氰基丙烯酸正丁酯溶液逐滴缓慢地加入到上述步骤二中的搅拌混合介质中。室温维持此搅拌速率2.5小时后，用0.01mol/L的氢氧化钠调节pH至7.0，可初步得到槲皮素载进聚氰基丙烯酸正丁酯的纳米混悬液。
步骤四：将1.1克右旋糖酐-70溶于20毫升水中，缓慢逐滴的加入到上述步骤三中的槲皮素载入聚氰基丙烯酸正丁酯的纳米混悬液中，1100r/min搅拌反应1小时后，可获得右旋糖酐-70覆盖的、稳定性较高的聚合物包裹的槲皮素纳米粒。
本实施例制得的安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂的扫射电镜图见图1，Zeta电位图见图2。由图1可知，本实施例制得到了形态均匀，为球形或椭球形，粒径在136～163nm的槲皮素纳米缓释制剂。由图2可知，在测定槲皮素纳米粒的Zeta电位时，同时也测定了空白纳米粒，无SDS(十二烷基硫酸钠)槲皮素纳米粒，无SDS空白纳米粒，槲皮素的Zeta电位，其中槲皮素纳米粒的Zeta电位最高，约为-34毫伏，通过Zeta电位图可说明槲皮素纳米缓释制剂的稳定性较高。本实施例制得一种安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂的包封率为92.14％。
本实施例制得的槲皮素纳米缓释制剂的槲皮素释放情况：以pH值为7.4的0.5％十二烷基硫酸钠磷酸盐缓冲液为释放介质，准确称取槲皮素对照品溶液4毫克与20毫升释放介质均匀混合，槲皮素纳米粒混悬液与释放介质均匀混合后总体积为20毫升，转入经蒸馏水浸泡处理过的透析袋中，将透析袋两端扎紧，绑于浆上，分别置于盛有250毫升释放介质的溶出三角瓶中，在恒温(37℃)摇床(120r/min)中恒速震荡。分别于设定时间点取样2毫升置-20℃冰箱冷冻保存，每次取样后再补充2毫升的释放介质溶液，将所取样品经高速低温离心机2000r/min、-4℃离心15分钟，取上清液1毫升经0.45微米微孔滤膜过滤，取续滤液。采用高效液相色谱法测定不同时间点样品上清液含量，每次进样20微升，测定槲皮素的峰面积，并按标准曲线回归方程计算槲皮素的浓度，得出累积释药百分数并绘制释药曲线，实验结果见图3所示。由图3可知，槲皮素纳米粒与槲皮素相比较，槲皮素纳米粒在体外释放缓慢，并在一段时间后释放率达到稳定，此结果表明槲皮素纳米粒是一种缓释制剂，与普通试剂相比，其作用时间更持久，毒副作用低，用药次数减少，药物缓慢进入体内，血药浓度“峰谷”波动小，能保持在有效浓度范围内以维持疗效。
本实施例制得的对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂对人内皮细胞生存率(安全性)的影响，其实验过程为：将细胞数为1×104置于96孔板中，加入100微升DMEM培养基中培养，每孔补充10％胎牛血清和1.0％青霉素-链霉素双抗，在37℃的5％CO2中培养24小时，使细胞附着。然后，用不同浓度的空白纳米粒、槲皮素纳米粒在37℃下培养细胞。用培养基培养细胞，不加入样品的作为对照组。培养48小时后，将10微升MTT溶液(PBS中为5mg/ml，pH7.4)加入到每个孔中，并进一步培养4小时。去除细胞培养基，用100微升DMSO替换，用微孔板阅读器(Biorad 550型)在570纳米处测量其吸光度。实验至少进行3次。细胞生存率百分比(％)根据以下公式计算：
细胞生存率(％)＝(A1–A2)/(A0–A2)×100％
注：A1，A2和A0分别指测试样品的吸光度，空白样品的吸光度和对照样品吸光度。实验结果见图4，由图4可知槲皮素纳米粒对人内皮细胞的毒性很小，由此可知该制剂的安全性较高。
本实施例制得的槲皮素纳米缓释制剂在抗矽尘肺纤维化过程中大鼠体重变化：将60只大鼠随机分为六组，分别为正常生理盐水组、SiO2+生理盐水组(模型组)、SiO2+强的松组、SiO2+空白纳米粒组、SiO2+槲皮素组和SiO2+槲皮素纳米粒组。除生理盐水组给予气管内滴注等体积0.9％NaCl外，其余各组均一次性气管内滴注SiO2复制大鼠肺纤维化模型。造模二天后，给予相应组大鼠0.9％NaCl、强的松、空白纳米粒、槲皮素和槲皮素纳米粒连续灌胃28天。分别在给药后图5设定的时间点对各组大鼠体重进行记录测量。由图5实验结果可知，相比于生理盐水组，模型组大鼠体重增加显著下降，SiO2+空白纳米粒组与之相差不大，体重增加缓慢也显著下降；而相比于模型组大鼠，SiO2+强的松组、SiO2+槲皮素组和SiO2+槲皮素纳米粒组大鼠的体重增加量均不同程度的高于模型组，尤其是SiO2+槲皮素纳米粒组体重增加最为显著，由此可说明槲皮素纳米粒可对抗矽尘肺纤维化。
本实施例制得的槲皮素纳米缓释制剂在抗矽尘肺纤维化过程中大鼠肺系数变化：将60只大鼠随机分为六组，分别为正常生理盐水组、SiO2+生理盐水组(模型组)、SiO2+强的松组、SiO2+空白纳米粒组、SiO2+槲皮素组和SiO2+槲皮素纳米粒组。除正常生理盐水组给予气管内滴注等体积0.9％NaCl外，其余各组均气管内滴注SiO2复制大鼠肺纤维化模型。造模第二天后，给予相应组大鼠0.9％NaCl、强的松、空白纳米粒、槲皮素和槲皮素纳米粒连续灌胃28天。分别在第14天、28天用10％水合氯醛(0.25ml/100g)麻醉并处理各组大鼠一半，收集全肺称重，测定大鼠肺系数。
实验结果如表1所示，与正常生理盐水组相比，模型组和SiO2+空白纳米粒组大鼠的肺系数在14天和28天中显著增加(P<0.01)，而且模型组和SiO2+空白纳米粒组大鼠的肺系数变化无太大差别。与模型组相比，泼尼松组大鼠的肺系数在14天和28天中明显下降(P<0.05)，SiO2+槲皮素组大鼠的肺系数在14天和28天中明显下降，SiO2+槲皮素纳米粒组大鼠的肺系数显著下降(P<0.01)。由上述结果可知，空白纳米粒并无治疗效果，而SiO2+槲皮素纳米粒组较SiO2+槲皮素组大鼠的肺系数在14天和28天中下降更为明显，表明纳米粒提高槲皮素的生物活性和生物利用度，从而高效发挥抗矽尘肺纤维化作用。
表1药物对矽尘肺纤维化大鼠肺系数变化分析
Figure BDA0003288091880000061
Figure BDA0003288091880000062
注：与正常组比较##P<0.01；与模型组比较*P<0.05,**P<0.01
本实施例制得的槲皮素纳米缓释制剂在抗肺纤维化过程H&E病理染色实验：将测定大鼠肺系数变化中得到的肺叶分离后，剪取左肺下缘适量，以纱布包裹，置于10％甲醛中固定48h后进行苏木精-伊红(H&E)染色。H&E染色具体步骤:大鼠左肺组织经10％的甲醛固定48小时，经梯度乙醇脱水、石蜡包埋、制成5微米切片、粘于载玻片、在烤箱中烤干(98℃)，保存于干燥处备用。实验前取出肺组织切片干烤20分钟，趁热浸入二甲苯Ⅰ内，5分钟后先后静置5分钟二甲苯Ⅱ、5分钟二甲苯Ⅲ、5分钟无水乙醇、5分钟95％乙醇和5分钟75％乙醇，再用自来水荡洗1分钟。浸入苏木素中3分钟，水冲洗后温水(40～50℃)返蓝1分钟，水洗，显微镜下观察核染色情况。细胞核染色后浸入伊红10秒，水冲洗，再镜检胞浆染色情况。胞浆染色完成后在烤箱中烤干，加松柏油、盖玻片封片，待室温干燥后(约1天)，在光学显微镜下观察肺组织病理变化。H&E染色结果如图6所示。生理盐水组大鼠肺泡结构基本正常，无明显细胞浸润及纤维化改变。SiO2造模后第14天，可见模型组大鼠肺泡结构破坏，肺泡壁增厚，肺泡内有大量细胞浸润；第28天肺泡间隔明显增厚，肺泡结构严重破坏，肺实变明显，有大量ECM产生。相对于模型组，其余给药组大鼠肺部的病理情况有所减轻，尤其是SiO2+槲皮素纳米粒组的上述病理改变的情况最好，由此说明槲皮素纳米粒对矽尘肺纤维化有良好的改善作用。
实施例2
一种安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂的制备方法
制备方法包括以下步骤：
步骤一：将0.06克槲皮素完全溶于1毫升冰醋酸中，逐步缓慢地加水并加适量的冰醋酸调节pH至3.1并使得混合终体积为80毫升。
步骤二：将0.08克十二烷基硫酸钠和0.7克泊洛沙姆-68加入到上述步骤一所得溶液中并超声4分钟使成混合均匀的溶液。
步骤三：在连续磁力搅拌1000r/min下，将180微升α-氰基丙烯酸正丁酯溶液逐滴缓慢地加入到上述步骤二中的搅拌混合介质中。室温维持此搅拌速率2.0小时后，用0.01mol/L的氢氧化钠调节pH至7.0，可初步得到槲皮素载进氰基丙烯酸正丁酯的纳米混悬液。
步骤四：将1.0克右旋糖酐-70的20毫升水溶液缓慢逐滴的加入步骤三中的槲皮素载入聚氰基丙烯酸正丁酯的纳米混悬液中，1000r/min搅拌反应0.8小时后，可获得右旋糖酐-70覆盖的、稳定性较高的聚合物包裹的槲皮素纳米粒。
本实施例制得的一种安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂的包封率为90.89％，扫描电镜图，Zeta电位图，槲皮素释放图，对人内皮细胞生存率(安全性)图，抗肺纤维化过程中大鼠体重变化图，大鼠肺系数变化分析表，H&E染色病理实验结果图与实施例1相近。
实施例3
一种安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂的制备方法
制备方法包括以下步骤：
步骤一：将0.08克槲皮素完全溶于1毫升冰醋酸中，逐步缓慢地加水并加适量的冰醋酸调节pH至2.9并使得混合终体积为80毫升。
步骤二：将0.06克十二烷基硫酸钠和0.6克泊洛沙姆-68加入到上述步骤一所得溶液中并超声3分钟使成混合均匀的溶液。
步骤三：在连续磁力搅拌950r/min下，将160微升α-氰基丙烯酸正丁酯溶液逐滴缓慢地加入到上述步骤二中的搅拌混合介质中。室温维持此搅拌速率1.8小时后，用0.01mol/L的氢氧化钠调节pH至7.0，可初步得到槲皮素载进氰基丙烯酸正丁酯的纳米混悬液。
步骤四：将0.9克右旋糖酐-70的20毫升水溶液缓慢逐滴的加入步骤三中的槲皮素载入聚氰基丙烯酸正丁酯的纳米混悬液中，950r/min搅拌反应0.6小时后，可获得右旋糖酐-70覆盖的、稳定性较高的聚合物包裹的槲皮素纳米粒。
本实施例制得的一种安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂的包封率为89.64％，扫描电镜图，Zeta电位图，槲皮素释放图，对人内皮细胞生存率(安全性)图，抗肺纤维化过程中大鼠体重变化图，大鼠肺系数变化分析表，H&E染色病理实验结果图与实施例1相近。
实施例4
一种安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂的制备方法
制备方法包括以下步骤：
步骤一：将0.10克槲皮素完全溶于1毫升冰醋酸中，逐步缓慢地加水并加适量的冰醋酸调节pH至2.8并使得混合终体积为80毫升。
步骤二：将0.05克十二烷基硫酸钠和0.5克泊洛沙姆-68加入到上述步骤一所得溶液中并超声3分钟使成混合均匀的溶液。
步骤三：在连续磁力搅拌900r/min下，将150微升α-氰基丙烯酸正丁酯溶液逐滴缓慢地加入到上述步骤二中的搅拌混合介质中。室温维持此搅拌速率1.5小时后，用0.01mol/L的氢氧化钠调节pH至7.0，可初步得到槲皮素载进氰基丙烯酸正丁酯的纳米混悬液。
步骤四：将0.8克右旋糖酐-70的20毫升水溶液缓慢逐滴的加入步骤三中的槲皮素载入聚氰基丙烯酸正丁酯的纳米混悬液中，900r/min搅拌反应0.5小时后，可获得右旋糖酐-70覆盖的、稳定性较高的聚合物包裹的槲皮素纳米粒。
本实施例制得的一种安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂的包封率为88.13％，扫描电镜图，Zeta电位图，槲皮素释放图，对人内皮细胞生存率(安全性)图，抗肺纤维化过程中大鼠体重变化图，大鼠肺系数变化分析表，H&E染色病理实验结果图与实施例1相近。
应当理解本文所述的例子和实施方式仅为了说明，并不用于限制本发明，本领域技术人员可根据它做出各种修改或变化，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：将槲皮素完全溶于冰醋酸中，逐步缓慢加水，并加适量的冰醋酸调节pH，得到一定体积的混合终溶液。
步骤二：将十二烷基硫酸钠和泊洛沙姆-68加入到上述步骤一所得溶液中，超声使其成为混合均匀的溶液。
步骤三：在连续磁力搅拌下，将α-氰基丙烯酸正丁酯溶液逐滴缓慢地加入到上述步骤二的搅拌混合介质中。室温相同速率下搅拌一段时间后，用氢氧化钠调整pH，可初步得到槲皮素载进聚氰基丙烯酸正丁酯的纳米混悬液。
步骤四：将右旋糖酐-70的水溶液缓慢逐滴地加入上述步骤三中的槲皮素载入聚氰基丙烯酸正丁酯的纳米混悬液中，搅拌反应后，可获得右旋糖酐-70覆盖的、稳定性较高的聚合物包裹的槲皮素纳米粒。
2.如权利要求1所述的一种安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂的制备方法，其特征在于，步骤一中所述槲皮素0.04～0.10克，初始冰醋酸为1毫升，pH调节为2.8～3.3，混合溶液终体积为80毫升。
3.如权利要求1所述的一种安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂的制备方法，其特征在于，步骤二中所述十二烷基硫酸钠0.05～0.10克，泊洛沙姆-68为0.5～0.8克，超声3～5分钟。
4.如权利要求1所述的安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂的制备方法，其特征在于，步骤三中所述磁力搅拌速度为900～1100r/min，α-氰基丙烯酸正丁酯溶液为150～200微升，搅拌时间为1.5～2.5小时，氢氧化钠浓度为0.01mol/L，pH调节为7.0±0.1。
5.如权利要求1所述的安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂的制备方法，其特征在于，步骤四中所述右旋糖酐-70水溶液为0.8～1.1克右旋糖酐-70溶于20毫升水中，磁力搅拌速度为900～1100r/min，搅拌时间0.5～1小时。
6.如权利要求1所述的一种安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂的制备方法，其特征在于，十二烷基硫酸钠为槲皮素纳米粒的乳化剂和口服制剂中的渗透促进剂，其不仅可以通过增加纳米粒的电负性电势进而增加槲皮素纳米粒的稳定性，而且还增加了槲皮素的口服生物利用度，泊洛沙姆-68为槲皮素纳米粒的乳化剂和粒子分散剂，右旋糖酐-70为槲皮素纳米粒的稳定剂和外层纳米粒的覆盖剂，也增加了槲皮素纳米粒的稳定性。
7.一种根据权利要求1-5任一所述的方法制备的安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂。
8.一种根据权利要求7所述的安全有效对抗矽尘肺纤维化的槲皮素纳米缓释制剂在抗肺纤维化领域的应用。
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