KR20180135444A

KR20180135444A - 생물활성 풀베이트 분획의 조성물 및 이의 용도

Info

Publication number: KR20180135444A
Application number: KR1020187027830A
Authority: KR
Inventors: 개리 더블유. 블랙; 제인 크리스텐슨; 파르한 타기자데
Original assignee: 옴니 바이오슈티칼 이노베이션스, 인크.
Priority date: 2016-02-26
Filing date: 2016-12-01
Publication date: 2018-12-20
Also published as: EP3419634A1; WO2017146792A8; US20180250250A1; US20170246132A1; US20230255911A1; US9820953B2; AU2016393867A1; WO2017146792A1; JP2019506461A; CA3015458A1; US20200368189A1; US11376231B2; JP6921131B2; JP2021070704A; AU2016393867B2

Abstract

풀베이트 분획을 단독으로 또는 성장 인자, 생물활성 단편화 펩타이드, 또는 이들의 조합과 함께 포함하는 조성물이 본 명세서에 개시된다. 또한, 피부 장애의 치유, 치료, 또는 예방을 포함하는, 세포 재생을 촉진화하기 위해 상기 조성물을 사용하는 방법이 개시된다. 또한, 상기 조성물의 제조에 사용하기 위한 풀베이트 분획의 추출, 단리, 및 정제 방법이 개시된다.

Description

생물활성 풀베이트 분획의 조성물 및 이의 용도

관련 출원에 대한 교차 참조

본원은 2016년 11월 23일자로 출원된 U.S. 특허 출원 번호 15/360,279, 및 2016년 2월 26일자로 출원된 미국 특허 가출원 번호 62/300,541에 대한 우선권의 이점을 주장하며, 그것의 개시내용은 그 전문이 본 명세서에 참고로 편입되어 있다.

서열목록에 대한 참조

본원은 전자 형태로 서열목록과 함께 제출되었다. 서열목록은 생성되고 마지막으로 2016년 8월 29일자로 수정된 SeqListingOBINN.001A 파일로 제공되며, 크기는 1,830 바이트이다. 전자 형태의 서열목록에 관한 정보는 그 전문이 본 명세서에 참고로 편입되어 있다.

개시 분야

본 개시는 일반적으로 상처의 치유 및 피부 병태의 치료 및 개선을 포함하는 세포 재생 분야에 관한 것이다. 특히, 본 개시는 세포 재생에 사용하기 위한 단리된 생물활성 풀베이트 분획(fulvate fractions)을 갖는 조성물에 관한 것이다.

부식물 (humic substance; HS)은 사실상 아주 흔하며, 환경에 있는 식물 및 동물 잔류물의 부패로 인해 발생한다. HS는 지구 표면에 가장 널리 분포된 천연 생성물 중 하나이며, 토양 (부엽토), 호수, 강 및 지질학적 퇴적물 예컨대 토탄(peat), 열갈탄(leonardite), 리그나이트(lignite) (갈탄), 및 유기 점토의 주요 유기 성분이다. 부식화 유기물 (humified organic matter; HOM)은 상대적으로 안정적이지만, 그것의 위치, 퇴적물 유형, 깊이, 및 연령에 따라 조성이 상이할 수 있다. HOM은 유기 분자의 복합 혼합물, 예컨대 생물활성 고분자전해질 (BP)을 함유한다.

BP는 수많은 생물활성, 자연 발생, 관련되지만 동일하지 않은, 높은 분자-중량 폴리머를 포함한다. BP의 예는, 비제한적으로, 부식산 (humic acid; HA), 풀빅산 (fulvic acid; FA), 휴민, 또는 울믹산 (ulmic acid; UA)과 같은 HS의 분획을 포함한다. BP 사이의 차이는 분자량 및 크기의 상당한 차이, 작용기 (예를 들어, 카복실, 페놀계 HO)의 수, 중합이 발생하는 정도를 포함한다. HA 및 FA는 그것의 다양한 생물활성 특징으로 인해 과학계에서 광범위한 국제적 관심을 받았다. 예를 들어, 문헌(Drozd J., 1978, Studies of chemical and physiochemical properties of humus compounds of some taxonomic soil units, Rosprawy Naukowe, Zeszyt 13, AR Wroclaw pp. 65)를 참고한다. BP는 인간, 다른 동물, 및 식물에서의 여러 기능에 유용하다.

HOM의 형성 및 조성을 이해하기 위한 광범위한 연구에도 불구하고, HOM의 구성성분의 정확한 화학 구조는 알려지지 않았다. 상이한 공급원으로부터 단리된 HOM은 상이한 환경, 산화 상태, 및 부식화 과정을 겪으며; 따라서 그것은 전형적으로 광범위하게 다양한 조성을 나타낸다. 이들 차이로 인해 분자량이 60 내지 300,000 Da의 범위이고, 폴리머의 길이가 수 나노미터 내지 수 마이크론으로 다양한 광대하고 복잡한 BP의 어레이가 생성된다.

특정 HS, 예컨대 토탄-유래된 생물활성 생성물은 피부 및 다른 병태를 치료하기 위해 사용되었다. 피부는 가장 큰 기관이며, 그것의 일차 기능은 외부 환경 및 과도한 물 손실에 대한 보호 장벽의 역할을 하는 것이다. 피부는 2개의 주요 조직 층으로 구성된다: 각질 중층 표피 및 지지 및 영양을 제공하는 콜라겐-풍부 진피 결합 조직의 기저 두꺼운 층. 손상된 상처 치유는 여러 질환 과정 (예컨대 당뇨병)을 일으키는 주요 합병증이다. 효율적인 상처 치유는 저산소증 (산소 결핍), 염증, 감염, 및 유해한 반응성 산소 종 (ROS)의 생성으로 인한 산화적 스트레스를 포함하는 다양한 과정에 의해 방해된다. 상처 치유의 내재적 복잡성으로 인해 느린 치유 과정과 관련된 단일 파라미터를 표적으로 하는 대부분의 요법의 효능이 제한되었다.

요약

본 개시내용은 조직 복구 치료 및 상처 치유를 포함하는 세포 재생에 사용하기 위한 단리된 풀베이트 분획을 단독으로 또는 하나 이상의 성장 인자 또는 생물활성 펩타이드와 함께 포함하는 조성물에 관한 것이다. 또한, 상기 조성물을 추출, 정제 및 제형화하는 방법이 본 명세서에서 제공된다.

일부 구현예에서 단리된 풀베이트 분획을 포함하는 조성물이 제공된다. 일부 구현예에서, 풀베이트 분획은 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이, 80 내지 1200 Da 범위의 평균 분자량을 갖는다. 일부 구현예에서, 풀베이트 분획은 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이, 80 내지 350 Da 범위의 평균 분자량을 갖는다. 일부 구현예에서, 풀베이트 분획은 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이, 300 내지 320 Da 범위의 평균 분자량을 갖는다. 일부 구현예에서, 풀베이트 분획은 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이, 약 309 Da의 수 평균 분자량을 갖는다. 일부 구현예에서, 평균 분자량은 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이, 308.24 Da이다. 일부 구현예에서, 단리된 풀베이트 분획은 본 명세서에서 M-007로 지칭된다. 일부 구현예에서, M-007은 부식화 유기물 (HOM)로부터 단리된다. 일부 구현예에서, M-007의 근사 공식은 C₁₂H₁₆O₉이다. 일부 구현예에서, 본 조성물은 국소 조성물이다. 일부 구현예에서, 국소 조성물은 액체, 로션, 크림, 포옴, 겔, 분말, 또는 연고로서 제형화될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 조성물은 패치로서 제형화된 경피 조성물이다. 일부 구현예에서, 본 조성물은 드롭, 스프레이, 또는 연고로서 제형화된 비강 조성물이다. 일부 구현예에서, 본 조성물은 설하 조성물이다. 일부 구현예에서, 본 조성물은 주사가능 조성물이다.

일부 구현예에서, 조성물은 추가로, 예를 들어, 하나 이상의 성장 인자, 하나 이상의 생물활성 단편화 펩타이드, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 성장 인자는 아미노산, 핵산, 표피 성장 인자 (EGF), 혈소판 유래된 성장 인자 (PDGF), 섬유아세포 성장 인자 (FGF 및 bFGF), 형질전환 성장 인자 (TGF-α 및 TGF-β 1, 2, & 3), 혈관 내피 성장 인자 (VEGF), 간세포 성장 인자 (HGF), 케라틴생성세포 성장 인자 (KGF), 신경 성장 인자 (NGF), 에리트로포이에틴 (EPO), 인슐린-유사 성장 인자 (IGF-I 및 IGF-II), 인터류킨 사이토카인 (IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13), 인터페론 (IFN-α, IFN-β, 및 IFN-γ), 종양 괴사 인자 (TNFα 및 TNF-β), 집락 자극 인자 (GM-CSF 및 M-CSF), 또는 이들의 조합이다.

일부 구현예에서, 조성물은 추가로, 하나 이상의 생물활성 단편화 펩타이드를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 생물활성 펩타이드는 사슬로 연결된 2종 이상의 아미노산으로 구성된 화합물이며, 각각의 산의 카복실기는 다음 아미노 기에 =OC=NH 유형의 결합에 의해 연결된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 생물활성 단편화 펩타이드는 혈압강하 펩타이드, 항산화 펩타이드, 항혈전성 펩타이드, 저콜레스테롤혈증 펩타이드, 오피오이드 펩타이드, 미네랄-결합 펩타이드, 식욕 억제(anti-appetizing) 펩타이드, 항미생물 펩타이드, 면역조절 펩타이드, 세포조절(cytomodulatory) 펩타이드, 또는 이들의 단편 및/또는 조합이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 생물활성 펩타이드는 콜라겐분해효소-유래된 생물학적 활성 단편, 티게리닌(tigerinin)-기반 펩타이드, 또는 이들의 조합이다. 일부 구현예에서, 생물활성 단편화 펩타이드는 도롱뇽 피부 펩타이드, 예컨대 틸로토인(tylotoin)-기반 펩타이드이다. 일부 구현예에서, 단편화 펩타이드는 개구리 피부 펩타이드, 예컨대 티게리닌-기반 펩타이드이다. 일부 구현예에서, 단편화 펩타이드는 신데르민(Syndermin) 팔미토일 트리펩타이드-1 아미드, 시네핀(Synepin) 팔미토일 sh-트리펩타이드-3 아미드, 빈테린(Binterin) 팔미토일 sh-트리펩타이드-4 아미드, 윈히빈(Winhibin) 팔미토일 sh-트리펩타이드-53 아미드, 아디포닌(Adiponin) 팔미토일 sh-트리펩타이드-1 아미드, 또는 이들의 조합이다.

일부 구현예에서, 단독으로 또는 하나 이상의 성장 인자, 하나 이상의 생물활성 단편화 펩타이드, 또는 이들의 조합을 추가로 포함하는 조성물은 세포 재생이 필요한 대상체의 치료를 위해 사용된다. 일부 구현예에서, 세포 재생이 필요한 대상체는 만성, 우발적, 또는 외과적 상처로 고통 받는다. 일부 구현예에서, 세포 재생이 필요한 대상체는 피부 병태로 고통 받는다.

일부 구현예에서 피부 병태의 상처의 구제(relieving), 치료, 개선, 완화하거나 경감(causing regression)이 필요한 대상체에서 피부 병태의 상처를 구제, 치료, 개선, 완화 또는 경감시키는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 그것을 필요한 대상체를 선택하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 하나 이상의 외과적, 우발적, 또는 만성적 상처 또는 피부 병태로 고통 받는다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 풀베이트 분획을 포함하는 국소 조성물의 치료적 유효량을 국소적으로 적용하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 풀베이트 분획은 M-007이다.

일부 구현예에서, 상기 방법은 피부 병태를 구제, 치료, 개선 또는 완화하거나 경감을 초래하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 피부 병태는 추피(rhytide), 피부의 비-효소적 당화, 일광 손상, 흡연 손상, 피부의 섬유증, 여름 여드름 (마요르카 여드름(Mallorca acne)), 집족성 여드름(acne conglobate), 화장품 여드름(acne cosmetica) (코스메틱 여드름(cosmetic acne)), 전격성 여드름 (급성 열성 궤양성 여드름), 목덜미 켈로이드성 여드름 (켈로이드성 여드름, 두부 유두상 피부염, 켈로이드성 모낭염, 목덜미 켈로이드성 모낭염, 목덜미 켈로이드 여드름), 붉은 뾰루지가 흩어져 있는 성인 이마, 심상성 여드름, 발한이상, 기계적 여드름, 약물성 여드름, 좁쌀 괴사 여드름(acne miliaris necrotica) (두창성 여드름), 심상성 여드름, 안면 부종 (고형 안면 부종(solid facial edema))을 동반한 여드름, 블레파로피마(blepharophyma), 에리트로모세혈관 확장성 주사비(erythrotelangiectatic rosacea) (홍반모세혈관 확장성 주사비(erythematotelangiectatic rosacea), 혈관 주사비), 찰상성 여드름 (아크네 엑스코리에 데 죈 필레(acne excori

e des jeunes filles), 피커 여드름(Picker's acne)), 선상 주사비(glandular rosacea), 그나토피마(gnathophyma), 그램-음성 주사비, 육아종 안면 피부염, 크고 붉은 주먹코를 가진 성인 남성, 딸기코증, 육아종성 입주위 피부염, 할로겐 여드름, 화농성 한선염 (아크네 인버사(acne inversa), 피오더마 피스툴란스 시그니피카(pyoderma fistulans significa), 베르눼이뉴병(Verneuil's disease)), 특발성 안면 무균성 육아종, 유아의 여드름, 유낭창 주사비(lupoid rosacea) (육아종 주사비, 소구진성 결핵진, 레반도프스키의 주사비-유사 결핵진(rosacea-like tuberculid of Lewandowsky)), 안면 파종상 속립성낭창, 메토피마(metophyma), 신생아 여드름 (영아 여드름, 신생아 여드름, 신생아 두부 농포증), 직업 여드름, 오일 여드름, 안구 장미증(ocular rosacea) (눈 장미증(ophthalmic rosacea), 눈장미증(ophthalmorosacea)), 오토피마(otophyma), 구강 주위 피부염(periorificial dermatitis), 장미증의 지속적 부종 (만성 상부 안면 홍반성 부종, 모르비앙병(Morbihan's disease), 장미성 림프부종(rosaceous lymphedema)), 비류성 주사비(phymatous rosacea), 포마드 여드름, 구진농포성 주사비 (염증성 주사비), 농양성 천굴성 두부 모낭주위염(perifolliculitis capitis abscedens et suffodiens) (두피의 박리 연조직염, 박리 모낭염, 호프만(Hoffman)의 농양성 천굴성 두부 모낭주위염), 입주위 피부염, 안와주위 피부염 (눈주위 피부염), 안면 농피증 (전격성 주사비(rosacea fulminans)), 딸기코증, 주사비 (여드름 장미증), 응괴성 주사비(rosacea conglobate), 윤활막염-여드름-농포증-골과다증-골수염 증후군 (SAPHO 증후군), 스테로이드 주사비, 타르 여드름(tar acne), 피부암 (암종 및 흑색종), 열대 여드름, 판상 건선, 적상 건선, 역형 건선, 농포성 건선, 홍피성 건선, 네일 건선(nail psoriasis), 건선성 관절염을 포함하는 건선, 또는 이들의 조합이다.

일부 구현예에서 부식화 유기물 (HOM)로부터 생물활성 고분자전해질을 추출하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 생물활성 고분자전해질은 풀베이트 분획을 포함한다. 일부 구현예에서, 풀베이트 분획은 M-007이다. 일부 구현예에서, 추출 방법은 HOM을 포함하는 수성 슬러리를 제공하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 HOM을 포함하는 수성 슬러리를 고압 칼럼 분별화에 적용하여 분획화된 샘플을 수득하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로, 상기 분획화된 샘플을 분자 체질에 적용하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 풀베이트 분획의 단리를 포함한다. 일부 구현예에서, 풀베이트 분획은 M-007이다.

본 명세서에서 제공된 일부 구현예는 단리된 풀베이트 분획을 포함하는 경피 약물 전달 시스템에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 경피 약물 전달 시스템은 단리된 풀베이트 분획을 약 0.5 중량% 내지 약 65 중량%의 양으로 포함한다. 일부 구현예에서, 단리된 풀베이트 분획은 약 0.5 중량% 내지 약 7 중량%의 양으로 존재한다. 일부 구현예에서, 단리된 풀베이트 분획은 M-007이다. 일부 구현예에서, 경피 약물 전달 시스템은 단리된 풀베이트 분획의 양을 다른 투여 방식보다 약 10 내지 50배 더 많은 양으로 제공한다. 일부 구현예에서, 경피 약물 전달 시스템은 비-개선된 제형과 비교하여 단리된 풀베이트 분획의 전달을 약 150%에서 약 350%로 개선시킨다.

이들 특징은, 본 명세서에서 추가로 설명된 다른 특징과 함께, 도면 및 상세한 설명에 대한 다음의 설명을 읽음으로써 명백해질 것이다.

본 명세서의 설명은 수반되는 도면들과 함께 판독할 때 하기 상세한 설명으로부터 이해된다. 통상적인 실시에 따르면, 도면의 다양한 특징은 스케일링되지 않는다는 것이 강조된다. 반대로, 다양한 특징의 치수는 명백하게 하기 위해 임의로 확장되거나 감소된다. 도면에는 하기의 도가 포함된다.
도 1은 M-007의 정제 방법의 도식적 표현이다.
도 2a는 미처리된 대조군 그룹 및 다양한 처리 그룹에서 표피 세포 배양물에 대한 기준선 상처 치유를 나타낸다. 각각의 처리를 이중으로 반복하고, 그래프는 평균 상처 봉합을 일수로 도시한다. 플레이트 1 및 2 (P1-2) 미처리된 대조군; 포스페이트 완충 식염수로 처리된 P3-4; bFGF sol. No. 00373으로 처리된 P5-6; bFGF sol. No. 00376으로 처리된 P7-8; M-007 풀베이트 sol. No. 00321A로 처리된 P9-10; M-007 풀베이트 sol. No. 00321B로 처리된 P11-12; bFGF sol. No. 00373 + M-007 풀베이트 sol. No. 00321A @ 70/30 비로 처리된 P13-14; bFGF sol. No. 00373 + M-007 풀베이트 sol. No. 00321A @ 50/50 비로 처리된 P15-16; bFGF sol. No. 00373 + M-007 풀베이트 sol. No. 00321A @ 30/70 비로 처리된 P17-18; bFGF sol. No. 00376 + M-007 풀베이트 sol. No. 00321A @ 70/30 비로 처리된 P19-20; bFGF sol. No. 00376 + M-007 풀베이트 sol. No. 00321A @ 50/50 비로 처리된 P21-22; bFGF sol. No. 00376 + M-007 풀베이트 sol. No. 00321A @ 30/70 비로 처리된 P23-24.
도 2b는 도 2a에서 기재된 처리 그룹에 대한 상처 치유의 그래픽 표현을 도시한다.
도 3은 A) 미처리된 그룹 및 B) bFGF sol. No. 00376 + M-007 풀베이트 sol. No. 00321A로의 처리 그룹에서의 표피 세포 배양 상처를 나타낸다.
도 4는 치유 과정에서 본 명세서에 기재된 조성물의 효능을 결정하기 위한 스크래치 검정(scratch assay)에 사용된 상처 치유 검정 키트 및 셋업을 도시한 것이다.
도 5는 본 명세서에 기재된 상처 치유 검정을 위한 실험적 셋업의 다이어그램을 나타낸다.
도 6은 상처 부위 표면적의 예를 나타낸다. 상처 봉합은 광학 현미경 또는 이미지형성 소프트웨어로 모니터링된다. 상처 부위로의 세포의 봉합 퍼센트 또는 이동율을 측정한다. 상처 치유 결과는 위상 콘트라스트, DAPI 형광 라벨링, 또는 세포 염색으로 가시화되었다.
도 7은 0%부터 100% 상처 봉합까지 상처 치유 검정 진행을 나타낸다.
도 8은 마우스 배아 섬유아세포/SIM 마우스 배아 섬유아세포 (MEF/STO 세포)의 봉합 퍼센트을 도시한다. 대조군으로서 STO 세포는 CytoSelect™24-웰 상처 치유 검정을 사용하여 시험되었다. 세포를 단일층이 형성될 때까지 24시간 배양하고, 이때 삽입물을 제거하여 상처 치유 검정을 개시하였다. 세포는 봉합 퍼센트 (0, 50, 75, 및 100%)를 결정하기 위해 위상 콘트라스트 (도시되지 않음), DAPI 라벨링, 및 세포 염색으로 모니터링되었다.

하기 상세한 설명에서는, 그것의 일부를 형성하는 수반되는 도면들이 참조된다. 도면에서, 유사한 기호는 전형적으로, 문맥상 달리 지시되지 않는 한, 유사한 성분을 나타낸다. 상세한 설명, 도면 및 청구항들에서 기재된 예시적인 구현예는 제한하려는 것이 아니다. 본 명세서에서 제공된 요지의 정신 또는 범위로부터 벗어나지 않으면서 다른 구현예가 이용될 수 있으며, 다른 변화가 이루어질 수 있다. 본 명세서에서 일반적으로 기재되고, 도면에서 설명된 본 개시의 측면은 다양한 상이한 구성으로 배열, 치환, 조합, 분리 및 설계될 수 있으며, 이들 모두는 본 명세서에서 명백하게 고려됨이 쉽게 이해될 것이다.

상기에서 요약된 바와 같이, 풀베이트 분획의 조성물 및 풀베이트 분획을 사용한 치료 방법의 측면이 본 명세서에서 제공된다. 또한, 상기 방법은 상기 조성물을 추출, 정제 및 제형화하는 방법을 포함한다.

본 개시는 기재된 특정 구현예에 제한되지 않으며, 당연히 변경될 수 있음을 이해해야 한다. 또한, 본 명세서에서 사용된 용어는 특정 구현예만을 설명하기 위한 것이며, 제한하려는 것이 아님을 이해해야 한다.

본 개시내용을 판독함으로써 당해 분야의 숙련가에게 분명한 바와 같이, 본 명세서에 기재되고 설명된 각각의 개별 구현예는 본 개시의 범위 또는 정신으로부터 벗어나지 않으면서 임의의 다른 몇몇 구현예의 특징으로부터 쉽게 분리되거나 이와 조합될 수 있는 별개의 성분 및 특징을 갖는다. 임의의 열거된 방법은 열거된 사건의 순서로 또는 논리적으로 가능한 임의의 다른 순서로 수행될 수 있다.

정의

달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 기술 및 과학 용어들은 본 개시가 속하는 당해 분야의 숙련가에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본 개시의 목적을 위해, 다음의 용어들이 아래에 정의된다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료"는 대상체, 특히 하나 이상의 상처 또는 피부 장애를 앓고 있는 대상체에 의해 나타나는 질환, 장애 또는 생리적 병태에 대응하여 이루어진 개입을 지칭한다. 치료 목표는, 비제한적으로, 증상의 완화 또는 예방, 상처, 질환, 장애, 또는 병태의 진행 또는 악화를 늦추거나 중지시키는 것, 및 상처, 질환, 장애, 또는 병태의 차도 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, "치료"는 치료적 처치 및 예방적 또는 방지적 조치 모두를 지칭한다. 치료가 필요한 사람은 이미 질환 또는 장애 또는 원하지 않는 생리적 병태의 영향을 받는 사람 뿐만 아니라 질환 또는 장애 또는 원하지 않는 생리적 병태가 예방되어야 하는 사람을 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 치료는 질환(들)의 증상(들)을 감소, 완화 또는 근절시킨다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "예방"은 나중에 질환 증상을 나타내는 개인의 부담을 감소시키는 임의의 활동을 지칭한다. 이것은 1차, 2차, 및/또는 3차 예방 수준에서 발생할 수 있으며, 여기서: a) 1차 예방은 증상/장애/병태의 발생을 피하고; b) 2차 예방 활동은 병태/장애/증상 치료의 초기 단계를 목표로 함으로써 병태/장애/증상의 진행 및 증상의 출현을 예방하기 위한 중재 기회를 증가시키고, c) 3차 예방은, 예를 들어, 기능을 회복시키고/시키거나 임의의 병태/장애/증상 또는 관련된 합병증을 감소시킴으로써 이미 확립된 병태/장애/증상의 부정적 영향을 감소시킨다.

"약제학적으로 허용가능한" 캐리어는 이용된 투약량 및 농도에서 이에 노출된 세포 또는 포유동물에게 비독성인 것들이다. "약제학적으로 허용가능한" 캐리어는, 비제한적으로, 국소, 경구, 또는 정맥내 적용과 같이 선택된 적용 방식에 적합하고, 종래의 약제학적 제제, 예컨대 고체 예컨대 정제, 과립, 분말, 캡슐, 및 액체 예컨대 용액, 에멀젼, 현탁액, 크림, 로션, 연고, 겔, 및 기타 동종의 것의 형태로 투여되는 유기 또는 무기, 고체 또는 액체 부형제일 수 있다. 종종 생리적으로 허용가능한 캐리어는 수성 pH 완충 용액 예컨대 인산염 완충액 또는 시트레이트 완충액이다. 생리적으로 허용가능한 캐리어는 또한, 다음 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 아스코르브산을 포함하는 산화방지제, 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩타이드, 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 면역글로불린; 친수성 폴리머 예컨대 폴리비닐피롤리돈, 아미노산, 글루코스, 만노스, 또는 덱스트린을 포함하는 탄수화물, 킬레이트제 예컨대 EDTA, 당 알코올 예컨대 만니톨 또는 소르비톨, 염 형성 반대 이온 예컨대 나트륨, 및 비이온성 계면활성제 예컨대 Tween^TM, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 및 Pluronics^TM. 보조제, 안정화제, 유화제, 윤활제, 결합제, pH 조정제 컨트롤러, 등장제, 및 다른 종래의 첨가제가 또한 캐리어에 첨가될 수 있다.

약제학적으로 허용가능한 또는 적절한 캐리어는 손상된 피부 상황에 유익한 것으로 공지된 다른 화합물 (예를 들어, 산화방지제, 예컨대 비타민 C, 비타민 E, 셀레늄 또는 아연); 또는 식품 조성물을 포함할 수 있다. 식품 조성물은, 비제한적으로, 우유, 요거트, 커드(curd), 치즈, 발효유, 우유 기반 발효 제품, 아이스크림, 발효 곡물 기반 제품, 우유 기반 분말, 유아용 조유(infant formulae), 정제, 액체 박테리아 현탁액, 건식 경구 보충물, 또는 습성 경구 보충물일 수 있다.

부정관사 ("a" 및 "an")는 관사의 문법적 대상 중 하나 또는 하나 초과 (즉, 적어도 하나)를 지칭하기 위해 본 명세서에서 사용된다. 예로써, "요소(element)"는 하나의 요소 또는 하나 초과의 요소를 의미한다.

"약"은 참조 양, 수준, 값, 수, 빈도, 백분율, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이에 대해 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1%만큼 가변적인 양, 수준, 값, 수, 빈도, 백분율, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이를 의미한다.

본 명세서 전체에 걸쳐, 문맥상 달리 요구되지 않는 한, 단어 "포함하다(comprise(s))" 및 "포함하는(comprising)"은 언급된 단계 또는 요소 또는 단계 또는 요소의 그룹을 포함하지만 임의의 다른 단계 또는 요소 또는 단계 또는 요소의 그룹을 제외하지 않는다는 것을 암시하는 것으로 이해될 것이다.

"구성된(consisting of)"은 어구 "구성된"의 뒤를 잇는 모든 것을 포함하되 이에 국한되는 것을 의미한다. 따라서, 어구 "구성된"은 열거된 요소가 요구되거나 의무적이며, 다른 요소는 존재할 수 없음을 나타낸다. "본질적으로 구성된"은 상기 어구 뒤에 열거된 임의의 요소를 포함하며, 열거된 요소에 대한 개시내용에서 명시된 활성 또는 작용을 방해하지 않거나 이에 기여하는 다른 요소에 국한되는 것을 의미한다. 따라서, 어구 "본질적으로 구성된"은 열거된 요소가 요구되거나 의무적이지만, 다른 요소는 선택적이며, 열거된 요소의 활성 또는 작용에 실질적으로 영향을 미치는지 여부에 따라 존재하거나 존재하지 않을 수 있음을 나타낸다.

특정 구현예에서, 조성물 중의 임의의 주어진 제제 (예를 들어, 풀베이트 분획, 성장 인자, 등)의 "순도"가 구체적으로 정의될 수 있다. 예를 들어, 특정 조성물은, 예를 들어 및 비제한적으로, 화합물을 분리, 단리 및 정량화하기 위해 생화학 및 분석 화학에서 빈번하게 사용되는 칼럼 크로마토그래피의 공지된 형태인, 고압 액체 크로마토그래피 (HPLC)에 의해 측정된 바와 같이, 예를 들어, 적어도 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100% (그 사이의 모든 소수점 포함) 순수한 제제를 포함할 수 있다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어들 "기능" 및 "기능성" 및 기타 동종의 것은 생물학적, 효소적, 또는 치료적 기능을 지칭한다.

용어 "단리된"은 보통 그것의 원상태에서 동반된 성분으로부터 실질적으로 또는 본질적으로 벗어난 물질을 의미한다. 예를 들어, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "단리된 생물활성 풀베이트 분획"은 그것의 자연 발생 상태로부터 정제된 풀베이트 분획, 예를 들어, 그것이 천연적으로 거주하는 부식화 유기물로부터 제거된 풀베이트 분획을 포함한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "생물활성"은 살아있는 유기체에 대해 생물학적 효과를 갖는 물질을 지칭한다. 생물활성 물질은 항-염증성, 항-미생물, 항-자극, 및 산화방지 효과 뿐만 아니라 상처 치유의 촉진 및 개선을 포함하는 특성을 가질 수 있다.

용어 "반수 최대 유효 농도" 또는 "EC₅₀"은 일부 명시된 노출 시간 후 기준선과 최대치 사이의 중간쯤에서 반응을 유도하는 본 명세서에 기재된 항체 또는 다른 제제의 농도를 지칭하며; 따라서 단계적인 용량 반응 곡선의 EC₅₀은 그것의 최대 효과의 50%가 관측되는 화합물의 농도를 나타낸다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 제제의 EC₅₀은 피부 장애의 증상 또는 병리학과 관련된 활성과 관련하여 표시된다. EC₅₀은 또한, 생체내 최대 효과의 50%를 얻는데 요구되는 혈장 농도를 나타낸다. 유사하게, "EC₉ ₀"은 그것의 최대 효과의 90%가 관측되는 제제 또는 조성물의 농도를 지칭한다. "EC₉₀"은 "EC₅₀" 및 힐 기울기(Hill slope)로부터 계산될 수 있거나 당해 분야의 일상적인 지식을 사용하여 데이터로부터 직접적으로 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 항체 또는 다른 제제의 EC₅₀은 약 0.01 , 0.05, 0.1 , 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 1 1 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 1 8, 19, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100 nM 미만이다. 바람직하게는, 생물학적 치료 조성물은 약 1 nM 또는 그 미만의 EC₅₀　값을 가질 것이다.

용어 "조절(modulating)"은 전형적으로 대조군과 비교하여 통계적으로 유의미하거나 생리적으로 유의미한 양으로의 "증가(increasing)" 또는 "자극(stimulating)" 뿐만 아니라 "감소(decreasing)" 또는 "감소(reducing)"를 포함한다. "증가된" 또는 "개선된" 양은 전형적으로 "통계적으로 유의미한" 양이며, 조성물이 없거나 (제제 또는 화합물의 부재) 대조 조성물에 의해 생산된 양의 1.1, 1.2, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 1 5, 20, 30배 이상 (예를 들어, 500, 1000배) (1을 초과하고 그 사이의 모든 정수 및 소수점 포함, 예를 들어, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 등)의 증가를 포함할 수 있다. "감소된(decreased)" 또는 감소된(reduced) 양은 전형적으로 "통계적으로 유의미한" 양이며, 조성물이 없거나 (제제 또는 화합물의 부재) 대조 조성물에 의해 생산된 양의 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18% , 19%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 감소 (그 사이의 모든 정수 포함)를 포함할 수 있다. 하나의 비제한적인 예로서, 표준 및 비-표준 활성을 비교하는데 있어서 대조군은 미처리, 위약 처리, 또는 대조군 처리와 관련하여 피부 장애에 대한 제형 조성물, 예를 들어, 풀베이트 분획의 활성 (예를 들어, 길항제 활성)을 포함할 수 있다. "통계적으로 유의미한" 양의 다른 예는 본 명세서에 기재되어 있다.

용어 "용해도"는 액체 용매에 용해시켜 균질한 용액을 형성하기 위해 본 명세서에서 제공된 풀베이트 분획, 펩타이드, 또는 다른 제제의 특성을 지칭한다. 용해도는 전형적으로 용매의 단위 용적당 용질의 질량 (용질의 g / 용매의 kg, g/dL (100 mL), mg/mL, 등), 몰 농도, 몰랄 농도, 몰 분율 또는 다른 유사한 농도의 기재에 의해 농도로 표현된다. 용매의 양에 대해 용해될 수 있는 용질의 최대 평형 양은 온도, 압력, pH, 및 용매의 성질을 포함하는 명시된 조건 하에 용매 중의 용질의 용해도이다. 특정 구현예에서, 용해도는 생리적 pH에서 측정된다. 특정 구현예에서, 용해도는 물 또는 생리적 완충액 예컨대 PBS에서 측정된다. 특정 구현예에서, 용해도는 생체액 (용매) 예컨대 혈액 또는 혈청에서 측정된다. 특정 구현예에서, 온도는 대략 실온 (예를 들어, 약 20, 21, 22, 23, 24, 25℃) 또는 약 체온 (37℃)일 수 있다. 특정 구현예에서, 제제는 실온에서 또는 37℃에서 적어도 약 0.1 , 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 1 1 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 또는 30 mg/mL의 용해도를 갖는다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이 "대상체"는 본 명세서에 기재되고 당해 분야에 공지된 것들 중에서, 추피, 피부의 비-효소적 당화, 일광 손상, 흡연 손상, 피부의 섬유증, 여름 여드름 (마요르카 여드름), 집족성 여드름, 화장품 여드름 (코스메틱 여드름), 전격성 여드름 (급성 열성 궤양성 여드름), 목덜미 켈로이드성 여드름 (켈로이드성 여드름, 두부 유두상 피부염, 켈로이드성 모낭염, 목덜미 켈로이드성 모낭염, 목덜미 켈로이드 여드름), 붉은 뾰루지가 흩어져 있는 성인 이마, 심상성 여드름, 발한이상, 기계적 여드름, 약물성 여드름, 좁쌀 괴사 여드름 (두창성 여드름), 심상성 여드름, 안면 부종 (고형 안면 부종)을 동반한 여드름, 블레파로피마, 에리트로모세혈관 확장성 주사비 (홍반모세혈관 확장성 주사비, 혈관 주사비), 찰상성 여드름 (아크네 엑스코리에 데 죈 필레, 피커 여드름), 선상 주사비, 그나토피마, 그램-음성 주사비, 육아종 안면 피부염, 크고 붉은 주먹코를 가진 성인 남성, 딸기코증, 육아종성 입주위 피부염, 할로겐 여드름, 화농성 한선염 (아크네 인버사, 피오더마 피스툴란스 시그니피카, 베르눼이뉴병), 특발성 안면 무균성 육아종, 유아의 여드름, 유낭창 주사비 (육아종 주사비, 소구진성 결핵진, 레반도프스키의 주사비-유사 결핵진), 안면 파종상 속립성낭창, 메토피마, 신생아 여드름 (영아 여드름, 신생아 여드름, 신생아 두부 농포증), 직업 여드름, 오일 여드름, 안구 장미증 (눈 장미증, 눈장미증), 오토피마, 구강 주위 피부염, 장미증의 지속적 부종 (만성 상부 안면 홍반성 부종, 모르비앙병, 장미성 림프부종), 비류성 주사비, 포마드 여드름, 구진농포성 주사비 (염증성 주사비), 농양성 천굴성 두부 모낭주위염 (두피의 박리 연조직염, 박리 모낭염, 호프만의 농양성 천굴성 두부 모낭주위염), 입주위 피부염, 안와주위 피부염 (눈주위 피부염), 안면 농피증 (전격성 주사비), 딸기코증, 주사비 (장미 여드름), 응괴성 주사비, 윤활막염-여드름-농포증-골과다증-골수염 증후군 (SAPHO 증후군), 스테로이드 주사비, 타르 여드름, 피부암 (암종 및 흑색종), 열대 여드름, 판상 건선, 적상 건선, 역형 건선, 농포성 건선, 홍피성 건선, 네일 건선, 건선성 관절염을 포함하는 건선, 또는 이들의 조합과 같은 하나 이상의 장애의 증상을 나타내거나 증상을 나타낼 위험이 있는 임의의 동물을 포함한다. 또한, 진단 또는 다른 목적을 위해 장애-관련된 마커의 존재 및/또는 수준을 프로파일링하는 것이 바람직한 대상체도 포함된다. 특정 측면에서, 대상체는 본 명세서에 기재되고 당해 분야에 공지된 바와 같이, 상처 또는 피부 장애를 갖는 임의의 동물을 포함한다. 적합한 대상체 (환자)는 실험실 동물 (예컨대 마우스, 랫트, 토끼, 또는 기니아 피그), 농장 동물, 및 가축 또는 애완동물 (예컨대 고양이 또는 개)을 포함한다. 비-인간 영장류 및, 바람직하게는, 인간 환자가 포함된다.

장애

본 명세서에서 제공된 바와 같이, 필요한 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 필요한 대상체는 피부, 모발, 및/또는 손발톱의 질환, 장애, 질병(ailment), 및 또는 손상을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 입의 경구 질환을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 귀의 안구 질환을 앓고 있다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 염증으로 고통 받는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 상처를 가질 수 있다.

구조적 장벽을 제공하는 것 외에도, 피부는 침입 병원체 또는 피부 손상에 의해 활성화될 수 있는 몇 개의 면역 세포를 함유한다. 상처 치유에 관련된 가장 중요한 면역 세포 중 하나는 대식세포이며, 이것은 식균작용 및 항원-제시를 포함하여, 피부에서 상이한 면역학적 기능을 나타낸다. 게다가, 이들은 상이한 단계에 걸쳐 상처 치유 과정을 조율하기 위해 많은 사이토카인 및 케모카인을 생산할 수 있다.

본 명세서에 기재된 바와 같이 "피부 손상"은 피부 자극을 유발할 수 있는 노화, 일광 손상, 암, 피부 장애 또는 피부 질환에 의해 유발될 수 있는 피부 손상을 지칭할 수 있다. 제한 없이, "피부 질환" 및/또는 "피부 장애"는 추피, 피부의 비-효소적 당화, 일광 손상, 흡연 손상, 피부의 섬유증, 여름 여드름 (마요르카 여드름), 집족성 여드름, 화장품 여드름 (코스메틱 여드름), 전격성 여드름 (급성 열성 궤양성 여드름), 목덜미 켈로이드성 여드름 (켈로이드성 여드름, 두부 유두상 피부염, 켈로이드성 모낭염, 목덜미 켈로이드성 모낭염, 목덜미 켈로이드 여드름), 붉은 뾰루지가 흩어져 있는 성인 이마, 심상성 여드름, 기계적 여드름, 약물성 여드름, 좁쌀 괴사 여드름 (두창성 여드름), 심상성 여드름, 안면 부종 (고형 안면 부종)을 동반한 여드름, 블레파로피마, 에리트로모세혈관 확장성 주사비 (홍반모세혈관 확장성 주사비, 혈관 주사비), 찰상성 여드름 (아크네 엑스코리에 데 죈 필레, 피커 여드름), 선상 주사비, 그나토피마, 그램-음성 주사비, 육아종 안면 피부염, 크고 붉은 주먹코를 가진 성인 남성, 딸기코증, 육아종성 입주위 피부염, 할로겐 여드름, 화농성 한선염 (아크네 인버사, 피오더마 피스툴란스 시그니피카, 베르눼이뉴병), 특발성 안면 무균성 육아종, 유아의 여드름, 유낭창 주사비 (육아종 주사비, 소구진성 결핵진, 레반도프스키의 주사비-유사 결핵진), 안면 파종상 속립성낭창, 메토피마, 신생아 여드름 (영아 여드름, 신생아 여드름, 신생아 두부 농포증), 직업 여드름, 오일 여드름, 안구 장미증 (눈 장미증, 눈장미증), 오토피마, 구강 주위 피부염, 장미증의 지속적 부종 (만성 상부 안면 홍반성 부종, 모르비앙병, 장미성 림프부종), 비류성 주사비, 포마드 여드름, 구진농포성 주사비 (염증성 주사비), 농양성 천굴성 두부 모낭주위염 (두피의 박리 연조직염, 박리 모낭염, 호프만의 농양성 천굴성 두부 모낭주위염), 입주위 피부염, 안와주위 피부염 (눈주위 피부염), 안면 농피증 (전격성 주사비), 딸기코증, 주사비 (장미 여드름), 응괴성 주사비, 윤활막염-여드름-농포증-골과다증-골수염 증후군 (SAPHO 증후군), 스테로이드 주사비, 타르 여드름, 피부암, 열대 여드름, 판상 건선, 적상 건선, 역형 건선, 농포성 건선, 홍피성 건선, 네일 건선, 건선성 관절염을 포함하는 건선, 및 이들의 조합 및/또는 변형을 포함할 수 있다. 본 명세서에 기재된 일부 구현예에서, 필요한 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 상기 대상체는 본 명세서에 기재된 바와 같이 피부에 영향을 주는 질환을 가질 수 있다.

"모발 및 두피 장애"는 모발 및 두피에 영향을 주는 질환이며, 본 명세서에 또한 기재되어 있다. 모발 및 두피에 영향을 주는 질환은 비제한적으로 탈모증, 안드로겐성 탈모증, 다모증, 모간 장애, 염증, 말단비대증, 습진, 건선, 농가진, 아토피 피부염, 다리어병(darier disease), 및 모낭염을 포함할 수 있다. 두피 장애의 일반적인 원인으로는 비제한적으로 말단비대증, 아토피 피부염, 다리어병, 습진, 취약 X 증후군, 농가진, 피부비후골막증(pachydermoperiostosis), 건선, 및 로젠탈-클뢰퍼(Rosenthal-Kloepfer) 증후군을 포함할 수 있다. 본 명세서에 기재된 일부 구현예에서, 필요한 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 상기 대상체는 피부 및 두피에 영향을 주는 질환을 가질 수 있다. 일부 구현예에서 상기 대상체는 탈모증, 안드로겐성 탈모증, 다모증, 모간 장애, 염증, 말단비대증, 습진, 건선, 농가진, 아토피 피부염, 다리어병, 및/또는 모낭염을 앓고 있다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 말단비대증, 아토피 피부염, 다리어병, 습진, 취약 X 증후군, 농가진, 피부비후골막증, 건선, 및/또는 로젠탈-클뢰퍼 증후군을 앓고 있다. 일부 구현예에서, 상기 치료는 제형을 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제형은 모발 크림, 모발 겔, 두피 로션, 샴푸, 컨디셔너, 모발 스프레이, 또는 모발 무스 내에 존재한다.

"네일 질환"은 네일, 손발톱바닥, 또는 각피 부위에 영향을 주는 장애 또는 질환이며, 본 명세서에 또한 기재되어 있다. 네일 및 주변 피부면 예컨대 각피에 영향을 주는 질환은 의료 지원을 필요로 할 수 있는 감염 또는 염증으로 이어질 수 있다. 네일, 손발톱바닥, 및/또는 각피에 영향을 주는 질환은 비제한적으로 손발톱염, 감입발톱(onchyocryptosis), 손발톱이상증(onychodystophy), 손발톱굽음증(onychogryposis), 손발톱박리증(onycholysis), 손발톱탈락증(onychomadesis), 조갑진균증(onychomycosis), 손발톱 백선(tinea unguium), 오니코포시스(onychophosis), 오니콥토시스(onychoptosis), 손발톱세로갈림(onchorrhexis), 조갑주위염(paronychia), 스푼형 조갑(Koilonychia), 조갑하 혈종(subungual hematoma), 오니코마트리코마(onychomatricoma), 네일 천포창(nail pemphigus), 에리트로니키아(erythronychia), 및 흑색손발톱(melanonychia)을 포함할 수 있다. 본 명세서에 기재된 일부 구현예에서, 필요한 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 상기 대상체는 손발톱, 손발톱바닥, 및/또는 각피에 영향을 주는 질환을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 손발톱염, 감입발톱, 손발톱이상증, 손발톱굽음증, 손발톱박리증, 손발톱탈락증, 조갑진균증, 손발톱 백선, 오니코포시스, 오니콥토시스, 손발톱세로갈림, 조갑주위염, 스푼형 조갑, 조갑하 혈종, 오니코마트리코마, 네일 천포창, 에리트로니키아, 및/또는 흑색손발톱을 앓고 있다. 일부 구현예에서, 상기 치료는 제형을 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제형은 피부 크림, 로션, 각피 크림, 또는 매니큐어 내에 존재한다.

본 명세서에 기재된 바와 같이 "경구 건강"은 치아 및 주변 조직 예컨대 잇몸의 건강을 지칭한다. 좋지 못한 경구 건강은 좋지 못한 경구 위생, 충치, 잇몸병, 당뇨병, 임신, 암, HPV, 구강암 (편평상피 세포 암종, 사마귀모양 암종, 소타액샘 암종, 림프종), 양성 구강, 및 구강인두 종양 (호산구 육아종, 섬유종, 과립 세포 종양, 각질극세포종(karatoacanthoma), 평활근종, 골연골종, 지방종, 신경집종, 신경섬유종, 유두종, 뾰족 콘딜로마(condyloma acuminatum), 사마귀모양 황색종, 화농성 육아종, 횡문근종, 치원성 종양), 백반증 및 홍색판, 및 설암으로부터 발생할 수 있다. 입 안의 암은 혀, 잇몸, 입 천장 위에 및 그 주변에, 그리고 뺨 및 입술의 안쪽에서 발생할 수 있다. 일부 구현예에서, 치료는 필요한 대상체의 경구 건강을 유지하기 위해 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 좋지 못한 경구 위생, 충치, 잇몸병, 당뇨병, 암, HPV, 구강암 (편평상피 세포 암종, 사마귀모양 암종, 소타액샘 암종, 림프종), 양성 구강, 및 구강인두 종양 (호산구 육아종, 섬유종, 과립 세포 종양, 각질극세포종, 평활근종, 골연골종, 지방종, 신경집종, 신경섬유종, 유두종, 뾰족 콘딜로마, 사마귀모양 황색종, 화농성 육아종, 횡문근종, 치원성 종양), 백반증 및 홍색판, 또는 설암을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 임신중이다. 일부 구현예에서, 치료는 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제형은 가글 또는 린스 형태이다. 일부 구현예에서, 상기 제형은 겔에 존재하며, 상기 겔은 치아 트레이(teeth tray)에 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 제형은 치약, 예방용 페이스트, 치아 광택제, 치과 용액(dental solution), 경구 스프레이, 경구 린스, 구강 세정제, 치실, 츄잉검(chewing gum), 로젠지, 또는 정제이다.

본 명세서에 기재된 바와 같이 "염증"은 유해한 자극에 대한 신체 조직의 생물학적 반응을 지칭한다. 유해한 자극은 비제한적으로 병원체, 박테리아, 바이러스, 진균, 손상된 세포, 및 당해 분야의 숙련가에게 공지된 다른 자극물을 포함할 수 있다. 염증은 예를 들어, 면역 세포, 백혈구, 혈관, 분자 매개체, 및 다른 소분자를 포함할 수 있는 보호성 면역 반응일 수 있다. 염증의 징후는 비제한적으로 통증, 열, 팽윤(swelling), 및/또는 기능 상실을 포함할 수 있다. 염증은 급성 또는 만성일 수 있다. 본 명세서에 기재된 일부 구현예에서, 형성은 염증의 치료를 위해 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 염증으로 고통 받는다. 일부 구현예에서, 염증은 피부, 두피, 비강, 입, 네일 부위 예컨대 각피, 눈, 질 부위 또는 회음부에 있다.

"청각 건강"은 귀, 내이, 외이 및 주변 부위의 건강을 지칭한다. 대상체가 귀, 외이도 및 주변 조직에서 염증을 가질 때 청각 관리가 요구될 수 있다. 박테리아, 바이러스, 점액, 및 다른 피부 병태와 같은 일반적인 자극물은 귀의 염증을 유발할 수 있다. 또한, 귀의 염증을 유발할 수 있는 외부 자극이 발생할 수 있다. 예를 들어, 물이 외이도에 포획될 때, 박테리아가 확산되어 염증 및 통증을 유발할 수 있다. 내이 염증도 바이러스성 감염 예컨대 독감 또는 상기도 감염 후에 발생할 수 있다. 이후 바이러스는 균형 기관의 팽윤을 유발하여 내이 염증 동안 통증을 동반하거나 동반하지 않고 현기증을 일으킬 수 있다.

일부 구현예에서, 청각 염증 또는 귀 감염으로 고통 받는 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 단리된 풀베이트 분획 또는 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 국소 제형을 제공하는 단계, 및 단리된 풀베이트 분획 또는 국소 제형을 상기 대상체에게 적용하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 단리된 풀베이트 분획 또는 국소 제형은 귀 내에 적용된다. 상기 국소 제형은 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 방법에 의해 제조된 단리된 풀베이트 분획 또는 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 단리된 풀베이트 분획을 포함할 수 있다. 단리된 풀베이트 분획은 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 방법에 의해 추출, 정제 및 단리될 수 있다. 상기 방법은 HOM을 포함하는 수성 슬러리를 제공하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 HOM을 포함하는 수성 슬러리를 고압 칼럼 분별화에 적용하여 분획화된 샘플을 수득하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로, 분획화된 샘플을 분자 체질에 적용하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로, 풀베이트 분획을 단리하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 풀베이트 분획은 M-007이다. 일부 구현예에서, 상기 제형은 점이액, 귀 세정제, 또는 귀 연고의 형태이다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "고압 칼럼 분별화"는 미반응된 성분, 반응 부산물, 및/또는 저분자량 부형제를 분리하기 위해 고압 하에 적어도 하나의 칼럼을 사용함으로써 슬러리를 크기 및 특성에 기초하여 다양한 분획으로 분별화하는 것을 지칭한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "분자 체질"은 50, 40, 30, 20, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 또는 0.1 nm 미만의 기공 직경을 갖는 하나 이상의 다공성 물질을 통과하는 샘플의 통과를 지칭한다. 상기 샘플은 수성 슬러리로부터 다양한 크기 및 특성의 분획을 수득하기 위해 직렬로 그와 같은 분자체를 통과할 수 있다. 일부 구현예에서, 고압 칼럼 분별화는 단독으로 또는 분자 체질과 함께 사용되어 피부 질환, 장애, 또는 상처의 치료에 사용하기에 바람직한 풀베이트 분획을 수득할 수 있다.

단리된 풀베이트 분획(Isolated Fulvate Fraction)

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "생물활성 고분자전해질" 또는 "BP"는 반복 단위가 전해질 그룹을 갖는 임의의 생물활성 폴리머, 뿐만 아니라 생물활성 폴리머의 염 및 에스테르를 지칭한다. BP는 인간, 다른 동물, 및 식물에서 광범위하고 가치 있는 범위의 유익한 용도를 가질 수 있다. BP는 탄소, 수소, 질소, 산소, 및 황의 다섯 가지 (5) 기본 요소로 구성될 수 있으며, 탄소 및 산소가 주요 구성요소이다. BP의 주요 유기 그룹은, 예를 들어, 페놀계, 카복실, OH, 지방족 CH, 카보닐, 공액 카복실, 방향족 CH₂ 또는 CH₃, 이온성 카복실, 및 가능하게는 다른 것들을 포함한다. BP는, BP를 생산하는 부식화 과정의 정도 및 유형에 의해 좌우되는 것으로 보이는 특징인, 그것의 중합도, 분자량, 및 원자 입자 크기에 의해 분류되고, 어느 정도까지, 식별될 수 있다.

BP의 예는, 비제한적으로, 부식산 (HA), 풀빅산 (FA), 휴민, 및 울믹산 (UA)을 포함한다. 일반적으로, 풀빅산은 저-분자량 폴리머 화합물을 포함하며, 반면에 부식산은 고분자량 폴리머 화합물을 포함한다. BP의 부식산 및 풀빅산 분획은 콜로이드 및 나노-결정성 물질의 조합물이다. HA 및 FA 분획은 살아있는 물질에 대해 탁월한 생물활성 능력을 갖는 것으로 나타났다.

BP의 분자 크기는 매우 가변적이며, 예를 들어, FA의 경우 150-13,000 Da일 수 있다.　본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "풀빅산," "풀베이트," 또는 "FA"는 모든 pH 조건 하에서 물에 가용성인 휴믹 물질의 분획을 지칭한다. 그것은 또한 메틸 에틸 케톤, 메틸 알코올, 및 산에 가용성이다. 그것은 일반적으로 황색 (황갈색) 내지 황색-갈색 색상을 갖는다. 풀베이트는 카복실 및 페놀레이트 그룹을 함유하는 상이한 상의 혼합물 또는 집합체를 포함한다.

풀베이트의 제안된 구조는 산소-함유 작용기로 광범위하게 치환된 방향족 및 지방족 구조 둘 모두를 함유한다. 제안된 풀베이트 구조는 이전에 기재되었다 (참조: Buffle J., Greter F. L., Haerdi W., 1977, Measurements of Complexation Properties of Humic and Fulvic Acids in Natural Water, With Lead & Copper Ion-Selective Electrodes. Anal. Chem. 49: 216-222; 또한 US 특허 출원 번호 2015/0216839 참조; 이들 각각은 그 전문이 본 명세서에 참고로 편입됨). 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "풀베이트"는 풀빅산의 에스테르, 염 또는 착이온을 포함한다.

명시된 풀베이트 분획을 추출하고 단리하는 방법이 본 명세서에 제공된다. 상기 방법은, 예를 들어, 부식화 유기물 (HOM)을 갖는 수성 슬러리를 제공하는 단계; 상기 수성 슬러리를 고압 칼럼 분별화에 적용하여 분획화된 샘플을 수득하는 단계; 상기 분획화된 샘플을 분자 체질에 적용하는 단계; 및 풀베이트 분획을 단리하는 단계를 포함할 수 있다. HOM은 넓은 범위의 분자량에 이르는 풀베이트를 함유한다. 본 명세서에 기재된 바와 같이 상처 치유 및 피부 장애 및 질환의 치료에 유용한 단리된 특정 풀베이트 분획을 위한 방법이 본 명세서에 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 풀베이트 분획은 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이, 80 내지 1200 Da에 이르는 평균 분자량을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 풀베이트 분획은 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이, 80 내지 350 Da에 이르는 평균 분자량을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 풀베이트 분획은 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이, 300 내지 320 Da에 이르는 평균 분자량을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 풀베이트 분획은 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이, 약 308.24 Da의 평균 분자량을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 풀베이트 분획은 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이, 약 309 Da의 평균 분자량을 갖는다. 본 명세서에 기재된 바와 같이, "증기압 삼투압 측정법"은 폴리머의 수 평균 분자량을 측정하기 위한 비-분광적 기술을 지칭한다.

본 명세서에 기재된 방법을 사용하여, 단리된 풀베이트 분획의 수많은 범위는 약 27개의 풀베이트 분획으로 제한된다. 그러나, 분자량이 약 309 Da인 풀베이트 분획은 상처 및 장애를 치료하는데 치료상 효과적이다. 일부 구현예에서, 치료상 효과적인 단리된 풀베이트 분획은 본 명세서에서 M-007로 지칭된다. 일부 구현예에서, M-007은 약 80 내지 약 1200 Da에 이르는 허용가능한 분자량 범위를 갖는다. 일부 구현예에서, M-007은 분자량에 상응하는 허용가능한 분자식의 범위를 갖는다. 일부 구현예에서, M-007은 C₁₂H₁₆O₉의 일반식을 갖는다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, "단리된 BP 분획"은 BP 분획이 단리되는 공급원에 존재하는 비-BP 물질이 실질적으로 없는 분획이다. 단리된 BP 분획은 휴믹 물질의 단리된 분획, 예컨대 FA가 단리되는 공급원에 존재하는 비-FA 물질이 실질적으로 없는 단리된 FA 분획, HA가 단리되는 공급원에 존재하는 비-HA 물질이 실질적으로 없는 단리된 HA 분획, 등일 수 있다. 단리된 BP 분획은 또한, 휴믹 물질의 2종 이상의 단리된 분획, 예컨대 UA, HA, FA, 및 휴민 분획 중 2종 이상을 함유할 수 있으며, 이는 실질적으로 다른 물질이 없다. BP 분획은, 비-BP 물질 (또한 본 명세서에서 일명 "오염 물질")이 건조 중량으로 약 30%, 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 또는 2% 미만 및 바람직하게는 1% 미만으로 존재할 때 비-BP 물질을 "실질적으로 포함하지 않는다".

장애의 치료 방법

일부 구현예에서, 장애를 앓고 있는 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 치료적 유효량의 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 상기 조성물은 단리된 풀베이트 분획을 포함한다. 일부 구현예에서, 단리된 풀베이트 분획은 M-007이다. 일부 구현예에서, 상기 조성물 추가로, 성장 인자, 생물활성 펩타이드 단편, 또는 이들의 조합을 포함한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, "투여" 또는 "투여하는"은 치료가 필요한 포유동물 (예를 들어, 인간)에게 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물을 제공하는 것으로 정의된다. 본 명세서에 제공된 방법에 따른 단리된 풀베이트 분획의 투여는 원하는 치료적 유효량 및 결과를 제공하는 임의의 경로를 통해서일 수 있다. 일부 구현예에서, 단리된 풀베이트 분획은 단리된 풀베이트 분획의 단위 용량 및 약제학적으로 허용가능한 캐리어를 포함하는 약제학적 조성물로 투여된다. 예를 들어, 투여는 경구 또는 비경구 (예를 들어, 정맥내, 피하, 근육내),　경피, 경점막 (구강, 비강, 직장,　설하, 및 질 포함), 흡입, 또는 투약 형태의 이식된 저장소를 통해 이루어질 수 있다. 의도된 투여 방식에 따라, 약제학적 제형은 바람직하게는 정확한 투약량의 단일 투여에 적합하거나 다중 투여 투약량에 적합한 단위 투약 형태의 고체, 반-고체, 또는 액체, 예를 들어, 정제, 캡슐, 타원형 당의정, 액체, 현탁액, 에멀젼, 겔, 로션, 크림, 포옴, 연고, 좌약, 과립, 펠렛, 비드, 분말, 등일 수 있다. 적합한 약제학적 조성물 및 투약 형태는 약제학적 제형 분야의 숙련가에게 공지되고, 관련 텍스트 및 문헌, 예를 들어, 하기에 기재된 종래의 방법을 사용하여 제조될 수 있다: Remington: The Science and Practice of Pharmacy　(Easton, Pa.: Mack Publishing Co., 1995) (이는 그 전문이 본 명세서에 참고로 편입됨).

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료적 유효량"은 본 조성물의 투여가 지시되는 질환 상태를 완화, 완화, 예방, 개선 또는 제거할 수 있는 단리된 풀베이트 분획을 포함하는 조성물의 양을 의미한다. 일부 구현예에서, 치료적 유효량은 필요한 대상체에게 5, 10, 20, 30, 40, 50 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 또는 200 mg/kg의 단리된 풀베이트 분획의 양 또는 상기 언급된 양 중 어느 2개에 의해 한정된 범위 내의 양을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 또는 50 μg/mL의 단리된 풀베이트 분획, 또는 상기 언급된 값 중 어느 2개에 의해 한정된 범위 내의 값을 갖는 조성물이 제형화된다. 일부 구현예에서, 약 5% 내지 약 65% w/v의 단리된 풀베이트 분획을 갖는 조성물이 제형화된다. 따라서, 일부 구현예에서, 상기 조성물은 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 또는 65% w/v 또는 상기 언급된 값 중 어느 2개에 의해 한정된 범위 내의 값을 포함한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, "설하"는 "혀의 아래"를 의미하며, 물질이 혀 아래의 혈관을 통해 빠르게 흡수되는 방식으로 입을 통해 물질을 투여하는 것을 지칭한다. 설하 제형은 그것이 간 초회통과 대사 과정을 우회하여 더 나은 생체이용률, 작용의 급속 개시, 및 더 높은 환자 순응도를 제공하기 때문에 바람직할 수 있다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "경피"는 피부 또는 점막과 직접 접촉시켜 약물을 전달, 투여 또는 적용하는 것을 지칭한다. 그와 같은 전달, 투여 또는 적용은 진피, 경피, 경점막 및 협측으로도 공지된다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "진피"는 경구, 구강, 비강, 직장, 및 질 점막을 포함하는, 피부 및 점막을 포함한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, "경피 약물 전달 시스템"은 피부 (또는 상기 언급된 임의의 다른 표면)에 적용될 때 약물을 방출하는 조성물의 투여를 위한 시스템 또는 디바이스를 지칭한다. 경피 약물 전달 시스템은 약물-함유 층, 및, 선택적으로, 백킹층 및/또는 이형 라이너 층을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 경피 약물 전달 시스템은, 부정적인 생리적 반응 없이, 대상체에게 국소 도포 동안 수성 접촉에 의해 현저히 분해되지 않으면서 국소 도포를 용이하게 하기 위해 접촉되고 그와 같은 접촉을 유지할 수 있는 표면에 부합될 수 있는 실질적으로 비-수성, 고형 형태이다. 많은 그와 같은 시스템은 당해 분야에 공지되어 있고, 경피 약물 전달 패치와 같이 상업적으로 입수가능하다. 아래에 기재된 바와 같이, 일 구현예에서, 경피 약물 전달 시스템은 압력 감응 접착제 또는 생체접착제를 포함하는 약물-함유 폴리머 매트릭스를 포함하며, 사용자의 (예를 들어, 대상체의) 피부에 직접 도포하기 위해 채택된다. 다른 구현예에서, 폴리머 매트릭스는 비-접착성이고, 사용자의 피부에 도포 및 부착을 위한 별개의 접착 수단 (예컨대 별개의 접착제층)과 함께 제공될 수 있다.

일부 구현예에서, 투여 방식은 본 명세서의 조성물의 실질적으로 더 큰 전달을 제공한다는 것이 예기치 않게 발견되었다. 따라서, 일부 구현예에서, 투여 방식은 통상적인 전달과 비교하여 본 명세서에 기재된 조성물의 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 또는 40배 이상의 더 빠른 전달을 제공한다. 일부 구현예에서, 단리된 풀베이트 분획의 경피 전달은 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 또는 40배 이상의 더 빠른 전달을 제공한다. 일부 구현예에서, 단리된 풀베이트 분획의 경피 전달은 통상적인 전달과 비교하여 약 20 내지 약 30배 더 빠른 전달을 제공한다.

국부 및 전신 효과 모두를 위한 약물 도포 부위로서의 피부에 대해 상당한 관심이 있다. 그러나, 피부, 및 특히 각질층은 약물 침투에 막대한 장벽이 되어 국소 및 경피 생체이용률을 제한한다. 피부 침투 증진 기술은 생체이용률을 개선하고, 국소 및 경피 전달이 실행가능한 옵션인 약물의 범위를 증가시키기 위해 발달되었다. 여기에는 약물 선택, 전구약물 및 이온-쌍, 과포화된 약물 용액, 공융 시스템, 착화, 리포좀, 소포, 및 입자와 같이 약물/비히클 최적화에 기초한 증진 기술이 제공된다. 일부 구현예에서, 증진은 또한, 수화에 의한 각질층의 변형, 각질층 지질 및 케라틴의 구조에 작용하는 화학적 인핸서, 및 분배(partitioning) 및 용해도 효과를 통해 일어날 수 있다.

피부의 장벽 기능에 의해 유발되는 약물 전달의 한계는 각질층을 통한 약물의 전달을 개선하는 방법에 대한 탐색으로 이어졌다. 화학적 또는 물리적 방법을 포함하는 다양한 방법이 조사되었다. 이용된 화학적 방법은 용해도를 향상시키기 위해 약물에 에탄올 또는 프로필렌 글리콜을 첨가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 경피 약물 전달 시스템 적용에서 일반적인 포뮬러리(formulary)에 약 0.50 중량% 내지 약 7 중량%의 M-007을 첨가하면 피부 침투, 및 포뮬러리에서 활성물질의 전달을 비-증진된 포뮬라와 비교할 때 약 350%만큼, 증진 약물 전달 방법으로서 에탄올, 또는 프로필렌 글리콜을 사용한 포뮬러리보다 약 150%만큼 개선시켰다.

질병을 완화하기 위해 피부에 약물을 적용하는 것은 수천 년 동안 인류에게 이용되었고, 습포제, 겔, 연고, 크림, 및 페이스트의 적용을 포함하는 관행이다. 이들 적용은 주로 국부 국소 효과를 위한 것이다. 그러나 약물을 전신으로 전달하기 위해 접착성 피부 패치를 사용하는 것은 비교적 새로운 현상이다.

경피 약물 전달 시스템은 경구 경로에 비해 약리적 이점을 제공하며, 개선된 환자 용인성 및 순응도를 제공한다. 이와 같이, 그것은 지난 수십 년 동안 제약 연구 및 개발의 중요한 분야였다. 보다 일반적인 경피 약물 전달 시스템의 성분 및 용도의 일부가 표 1에 열거되어 있다.

[표 1]

이전의 경피 전달 사용은, 경피 전달이 일어나기 위해 약물이 패치 내에 고농도로 존재할 것을 요구하였다. 약물 방출을 위한 에너지는 시스템 내 약물의 포화 용액 및 피부에서의 훨씬 더 낮은 농도 사이에 존재하는 농도 구배로부터 유래되며; 약물 이동은 확산에 의해 일어난다. 패치 내에는 농도가 높고 혈액 내에는 농도가 낮기 때문에, 약물은 계속 확산되어 순환계 내 약물의 농도를 일정하게 유지할 것이다.

피부를 통과하는 침투 속도는 아래에 제공된다:

여기서　D는 확산 계수이고, Co는 패치 내 약물의 일정한 농도이고, P는 피부 및 배싱 용액(bathing solution) 사이의 분배 계수이고, h는 피부의 두께이다.

경피 침투는, 약물 및 또는 캐리어가 분자량 < 500 Da (따라서, 일부 구현예에서, M-007 풀베이트는 약 500 Da 미만의 분자량, 예를 들어 250-310 Da을 가짐); 친유성 및 친수성 상 모두에 대해 친화성 (따라서, 일부 구현예에서, 단리된 풀베이트 분획 둘 모두는 사실상 친유성 및 친수성임); 약물의 방출에 영향을 주는 낮은 용융점 (따라서, 일부 구현예에서 M-007은 일시적 온도가 매우 낮은 생물활성 이온성 졸(sol)임); 및 약물이 낮은 투약량에서 효과적인 고효능 (따라서, 일부 구현예에서, M-007은 매우 강한 전해질로서, 낮은 투약률(dosage rate)에서 효과적임)을 포함하는 특성을 갖는다면 개선된다. 따라서, 일부 구현예에서, M-007 풀베이트 조성물은 경피 침투를 개선시켰다. 일부 구현예에서, M-007은 에스테르 연결된 구획을 갖는 아미노산 기반 양친매성 화합물로서, 매우 낮은 독물학적 결과와 함께 국소 조성물 및 경피 패치 포뮬러리에서 피부 침투 향상을 실증하였다.

일부 구현예에서, 치료 방법은 필요한 대상체를 선택하는 단계를 포함한다. 필요한 대상체의 선택은 본 명세서에 기재된 바와 같은 장애, 질환, 또는 상처 중 하나 이상을 갖는 대상체를 식별하고, 상기 대상체에게 치료제를 투여하도록 선출하는 단계를 포함한다.

일부 구현예에서, 상기 치료는 피부 장애를 완화 또는 완화시킨다. 본 명세서에 기재된 바와 같이, 용어 "완화시키다(alleviate)" 또는 "구제시키다(relieve)"는 피부 장애, 질환, 또는 상처의 개선을 지칭한다. 일부 구현예에서, 개선은 피부 장애, 질환, 또는 상처의 치유 결과로서 표피의 표층의 시각적 및/또는 감각적 측면에서의 향상을 포함한다.

일부 구현예에서, 상기 대상체는 피부 장애로 고통 받는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 통증으로 고통 받는다. 상기 통증은 두통, 복통, 암, 자가면역 질환, 또는 유전적 장애로 인한 것일 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 통증은 피부 자극, 피부 염증, 전신 문제 예컨대 관절, 근육, 기관, 및 다른 염증 부위에서 발생하는 통증으로부터 유래된다.

일부 구현예에서, 상기 대상체는 염증으로 고통 받는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 염증으로 고통 받는다. 일부 구현예에서, 상기 염증은 피부, 두피, 비강, 입, 네일 부위 예컨대 각피, 눈, 질 부위 또는 회음부에 있다.

일부 구현예에서, 상기 대상체는 피부 장애를 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 피부 장애는 여드름, 탈모증, 원형 탈모증, 전두 탈모증, 혈관종, 무좀(athletes foot), 보웬병(Bowen's disease), 큰종기(carbuncle), 캔디다증, 연조직염, 피부염, 습진, 아토피 피부염, 접촉 피부염, 지루 피부염(seborrheoeic dermatitis), 정체 피부염, 피부섬유종, 에크티마(echtima), 수포성 표피박리증, 홍색음선, 모낭염, 화농성 한선염(Hidradentitis suppurativa), 두드러기, 다한증, 어린선, 농가진, 카포시 육종(Kaposi's sarcoma), 켈로이드, 각화극세포종, 각화증, 각화증 태선, 모낭 각화증, 편평 태선, 흑색종, 멜리스마(melisma), 땀띠, 이감염증(pedifulosis), 천포창, 장미색 비강진, 모공성 홍색 비강진, 건선, 레이노병(Raynaud's disease), 버짐, 주사비, 옴, 경피증, 피지 낭포, 피부암, 쥐젓 또는 대상포진이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 피부 노화의 영향을 받는다. 일부 구현예에서, 피부 노화의 영향은, 예를 들어, 피부의 주름, 주근깨(sun spot), 새깅(sagging), 및 피부 콜라겐의 상실을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 피부 질환 또는 장애 예컨대 여름 여드름 (마요르카 여드름), 집족성 여드름, 화장품 여드름 (코스메틱 여드름), 전격성 여드름 (급성 열성 궤양성 여드름), 목덜미 켈로이드성 여드름 (켈로이드성 여드름, 두부 유두상 피부염, 켈로이드성 모낭염, 목덜미 켈로이드성 모낭염, 목덜미 켈로이드 여드름), 붉은 뾰루지가 흩어져 있는 성인 이마, 심상성 여드름, 기계적 여드름, 약물성 여드름, 좁쌀 괴사 여드름 (두창성 여드름), 심상성 여드름, 안면 부종 (고형 안면 부종)을 동반한 여드름, 블레파로피마, 에리트로모세혈관 확장성 주사비 (홍반모세혈관 확장성 주사비, 혈관 주사비), 찰상성 여드름 (아크네 엑스코리에 데 죈 필레, 피커 여드름), 선상 주사비, 그나토피마, 그램-음성 주사비, 육아종 안면 피부염, 크고 붉은 주먹코를 가진 성인 남성, 딸기코증, 육아종성 입주위 피부염, 할로겐 여드름, 화농성 한선염 (아크네 인버사, 피오더마 피스툴란스 시그니피카, 베르눼이뉴병), 특발성 안면 무균성 육아종, 유아의 여드름, 유낭창 주사비 (육아종 주사비, 소구진성 결핵진, 레반도프스키의 주사비-유사 결핵진), 안면 파종상 속립성낭창, 메토피마, 신생아 여드름 (영아 여드름, 신생아 여드름, 신생아 두부 농포증), 직업 여드름, 오일 여드름, 안구 장미증 (눈 장미증, 눈장미증), 오토피마, 구강 주위 피부염, 장미증의 지속적 부종 (만성 상부 안면 홍반성 부종, 모르비앙병, 장미성 림프부종), 비류성 주사비, 포마드 여드름, 구진농포성 주사비 (염증성 주사비), 농양성 천굴성 두부 모낭주위염 (두피의 박리 연조직염, 박리 모낭염, 호프만의 농양성 천굴성 두부 모낭주위염), 입주위 피부염, 안와주위 피부염 (눈주위 피부염), 안면 농피증 (전격성 주사비), 딸기코증, 주사비 (장미 여드름), 응괴성 주사비, 윤활막염-여드름-농포증-골과다증-골수염 증후군 (SAPHO 증후군), 스테로이드 주사비, 타르 여드름, 피부암, 열대 여드름, 판상 건선, 적상 건선, 역형 건선, 농포성 건선, 홍피성 건선, 네일 건선, 건선성 관절염을 포함하는 건선, 또는 이들의 조합 및 변형을 앓고 있다.

일부 구현예에서, 필요한 대상체는 피부 장애를 앓고 있거나 피부 장애를 갖는 대상체가 치료제를 투여받기 위해 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 치료제는 레틴(retin) A, 하이드로퀴논, 레티놀, 또는 항진균제이다. 일부 구현예에서, 필요한 대상체는 암으로 고통 받거나 암을 갖는 대상체가 항암 요법을 받기 위해 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 진통제를 투여받기 위해 선택된다.

본 명세서에 기재된 바와 같이, 단리된 풀베이트 분획을 포함하는 조성물은 국소 제형일 수 있다. 상기 국소 제형은 추가로, 예를 들어, 단리된 풀베이트 분획의 기능 및 생존력(viability)을 방해하지 않는 약제학적 비히클을 포함할 수 있다. 본 명세서에 기재된 바와 같이 "약제학적 비히클"은 약물과 혼합되어 국소 제형의 측정 및 투여를 용이하는 불활성 물질을 지칭한다.

일부 구현예에서, 활성 성분 및 활성 성분의 혼합물은, 예를 들어, 저장 및 후속적인 투여를 위해 제조된 약제학적으로 허용가능한 캐리어를 포함하는 국소 제형에 사용될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "국소"는 피부 또는 다양한 체구(body orifice)에 제형의 투여 또는 적용을 지칭한다. 일부 구현예는 약제학적으로 허용가능한 캐리어 또는 희석제와 함께 본 명세서에 기재된 풀베이트 분획의 사용을 포함한다. 치료용으로 허용가능한 캐리어 또는 희석제는 제약 분야에 공지되어 있으며, 예를 들어, 하기에 기재되어 있다: Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa. (1990) (이는 그 전문이 본 명세서에 참고로 편입됨). 보존제 및 안정화제가 국소 제형에 제공될 수 있다. 보존제는 피부 세포를 위한 영양소가 파괴되지 못하게 하기 위해 사용될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어들 "캐리어 또는 희석제"는 고형 제형을 위한 고형 캐리어 또는 희석제, 액체 제형을 위한 액체 캐리어 또는 희석제, 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 고형 캐리어/희석제는, 비제한적으로, 검, 전분 (예를 들어, 옥수수 전분, 전젤라틴화 전분(pregelatanized starch)), 당 (예를 들어, 락토스, 만니톨, 수크로스, 덱스트로스), 셀룰로스 물질 (예를 들어, 미세결정성 셀룰로스), 아크릴레이트 (예를 들어, 폴리메틸아크릴레이트), 탄산칼슘, 산화마그네슘, 탈크, 또는 이들의 혼합물을 포함한다. 액체 제형, 예컨대 국소 또는 비경구 제형의 경우, 약제학적으로 허용가능한 캐리어는 수성 또는 비-수성 용액, 현탁액, 에멀젼 또는 오일일 수 있다. 비-수성 용매의 예는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 및 주사가능 유기 에스테르 예컨대 에틸 올레이트이다. 수성 캐리어는 염수 및 완충 매질을 포함하여, 물, 알코올성/수성 용액, 에멀젼 또는 현탁액을 포함한다. 오일의 예는 석유, 동물, 채소, 또는 합성 기원 오일, 예를 들어, 땅콩 오일, 대두 오일, 광유, 올리브 오일, 해바라기 오일, 및 어간유이다.

비경구 비히클 (피하, 정맥내, 동맥내, 또는 근육내 주사용)은 염화나트륨 용액, 링거 덱스트로스, 덱스트로스 및 염화나트륨, 락테이트화된 링거 및 고정유를 포함한다. 정맥내 비히클은 유체 및 영양소 보충물, 전해질 보충물 예컨대 링거 덱스트로스에 기초한 것들, 및 기타 동종의 것을 포함한다. 그 예는 계면활성제 및 다른 약제학적으로 허용가능한 아쥬반트가 첨가되거나 첨가되지 않은 멸균된 액체 예컨대 물 및 오일이다. 일반적으로, 물, 염수, 수성 덱스트로스 및 관련된 당 용액, 및 글리콜 예컨대 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜이 특히 주사가능 용액을 위해 바람직한 액체 캐리어이다. 오일의 예는 석유, 동물, 채소, 또는 합성 기원 오일, 예를 들어, 땅콩 오일, 대두 오일, 광유, 올리브 오일, 해바라기 오일, 및 어간유이다.

또한, 본 조성물은 추가로, 결합제 (예를 들어 아카시아, 옥수수녹말, 젤라틴, 카보머, 에틸 셀룰로스, 구아르 검, 하이드록시프로필 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸 셀룰로스, 포비돈), 붕해제 (예를 들어 옥수수녹말, 감자 전분, 알긴산, 이산화규소, 크로스카르멜로스(croscarmelose) 나트륨, 크로스포비돈, 구아르 검, 나트륨 전분 글라이콜레이트), 다양한 pH 및 이온 강도의 완충액 (예를 들어, 트리스-HCl, 아세테이트, 포스페이트), 표면 흡수를 방지하기 위한 첨가제 예컨대 알부민 또는 젤라틴, 세제 (예를 들어, Tween 20, Tween 80, Pluronic F68, 담즙산 염), 프로테아제 억제제, 계면활성제 (예를 들어 나트륨 라우릴 설페이트), 투과 증강제, 가용화제 (예를 들어, 글리세롤, 폴리에틸렌 글리세롤), 산화방지제 (예를 들어, 아스코르브산, 나트륨 메타바이설파이트, 부틸화된 하이드록시아니솔), 안정화제 (예를 들어 하이드록시프로필 셀룰로스, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스), 점도 증가제 (예를 들어 카보머, 콜로이드성 이산화규소, 에틸 셀룰로스, 구아르 검), 감미제 (예를 들어 아스파르탐, 시트르산), 보존제 (예를 들어, 티메로살, 벤질 알코올, 파라벤), 윤활제 (예를 들어 스테아르산, 스테아르산마그네슘, 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 라우릴 설페이트), 유동 조제 (예를 들어 콜로이드성 이산화규소), 가소제 (예를 들어 디에틸 프탈레이트, 트리에틸 시트레이트), 유화제 (예를 들어 카보머, 하이드록시프로필 셀룰로스, 나트륨 라우릴 설페이트), 폴리머 코팅물 (예를 들어, 폴록사머 또는 폴록사민), 코팅 및 막 형성제 (예를 들어 에틸 셀룰로스, 아크릴레이트, 폴리메타크릴레이트) 및/또는 아쥬반트를 포함할 수 있다.

단리된 풀베이트 분획을 포함하는 국소 제형은 제형화되고, 국소 도포를 위해 액체, 로션, 또는 크림으로 사용될 수 있다. 국소 제형에 적합한 성분은 예를 들어, 물, 염수, 덱스트로스, 만니톨, 락토스, 레시틴, 알부민, 또는 나트륨 글루타메이트, 및 기타 동종의 것을 포함할 수 있다. 요망하는 경우, 흡수 증진 제제 (예를 들어, 리포좀)가 이용될 수 있다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "주사가능 조성물"은 주사로 투여하기 위해 제조된 제형을 지칭한다. 이러한 주사는 정맥내, 피하, 진피내, 근육내, 관절내, 또는 척추강내와 같은 경로로 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, 약제학적 비히클은 대두, 자몽 또는 아몬드 오일, 또는 합성 지방산 에스테르, 예컨대 에틸 올레이트 또는 트리글리세라이드, 또는 리포좀이다.

코코넛 오일, 올리브 오일, 참깨 오일, 땅콩 오일, 및 콩이 국소 제형에서 현탁화제 또는 윤활제로서 사용될 수 있다.

단리된 풀베이트 분획을 포함하는 국소 제형은 추가로, 예를 들어, 하나 이상의 용매, 적어도 하나의 보타니칼(botanical), 및/또는 적어도 하나의 완화제를 포함할 수 있다.

표 2는 인간에서 만성적 상처의 치유를 촉진시키기 위해 사용된 성장 인자의 부분 목록을 제공한다. 표 3은 성장 인자 및 만성적 상처에 대한 이중맹검, 위약 대조된 시험 결과를 제공한다.

[표 2]

EGF = 표피 성장 인자; FGF = 섬유아세포 성장 인자; GMCSF = 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자; HGH = 인간 성장 호르몬; IL-1 = 인터류킨-1; IGF-1 = 인슐린 성장 인자-1; PDGF = 혈소판-유래된 성장 인자; TGF-β= 형질전환 성장 인자-β

[표 3]

EGF = 표피 성장 인자; HGH = 인간 성장 호르몬; GMCSF = 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자; TGF- β2 = 형질전환 성장 인자-β2; PDGF-BB = 혈소판-유래된 성장 인자 BB; bFGF = 염기성 섬유아세포 성장 인자; IL-1B = 인터류킨-1B; N.S. = 통계적으로 유의미하지 않음.

VEGF는 새로운 혈관의 성장을 촉진시키는 신호전달 단백질이다. VEGF는 손상된 혈액 순환으로 인해 산소화된 혈액이 박탈될 때 세포 및 조직으로의 혈액 공급을 회복시키는 기전의 일부를 형성한다.

HGF 유전자는 간세포 성장 인자 수용체에 결합하여 수많은 세포 및 조직 유형에서 세포 성장, 세포 운동성, 및 형태발생을 조절하는 단백질을 인코딩한다. 이 단백질은 간엽 세포에 의해 분비되며, 주로 상피 기원 세포에서 다기능 사이토카인으로 작용한다. 이 단백질은 또한 혈관신생, 종양형성, 및 조직 재생에서 역할을 한다. 인간 HGF는 697개의 아미노산 잔기를 함유하는 선형, 폴리펩타이드-전구체 당단백질로 발현된다. HGF는 심장 조직으로의 T 세포의 화학주성을 조절한다. T 세포에서 발현되는 cMet에 의한 HGF의 결합은 cMet, CXCR3, 및 CCR4의 상향조절을 일으키고, 차례로 심장 조직으로 이동하는 능력을 부여한다. HGF는 HGF 수용체 (HGFR)로 식별된 C-Met 종양유전자의 단백질 생성물과 상호작용하는 것으로 나타났다. Met/HGFR 수용체 단백질의 과발현 및 간세포 성장 인자 리간드의 동시 발현에 의한 Met/HGFR의 자가분비 활성화는 모두 종양형성에 연루되었다.

KGF는 FGF-7 및 헤파린-결합 성장 인자-7 (HBGF-7)로도 공지된다. KGF는 섬유아세포 성장 인자 계열의 구성원이며, 모발 성장을 자극하는 것으로 밝혀졌다. 두피에 직접 도포될 때, KGF는 세포 표면에서 KGF 수용체에 결합하여 상피성 세포 증식, 분화, 및 이동을 자극하고, 수많은 세포 보호성 기전을 촉진시킴으로써 성장 및 생존 인자 둘 모두로서 작용하고, 그렇게 함으로써 모발 성장을 자극하고 피부의 건강을 증가시킨다. 이 행동은 노화의 영향 또는 화학요법의 부작용으로 인해 탈모를 경험한 사람들에게 특히 유익하다.

KGF에 반응하는 세포는 표적 세포에서 가깝거나 먼 세포에 의해 일반적으로 생산되는 성장 인자를 인식하는 세포막 상의 수용체를 갖기 때문에 그렇게 한다. 수용체에 대한 KGF의 결합은 분자 사건의 캐스케이드를 개시하여, 결국 다른 효과들 중에서도 세포 분열로 이어질 것이다. KGF는 상피 조직에서 증식 및 분화를 조절하는 것으로 나타났고, 모발 소낭의 줄기 세포를 조절할 수 있다.

일부 구현예에서, 국소 제형은 추가로, 예를 들어, 적어도 하나의 성장 인자를 포함한다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 성장 인자는 표피 성장 인자 (EGF), 혈소판 유래된 성장 인자 (PDGF), 섬유아세포 성장 인자 (FGF), 형질전환 성장 인자 (TGF-α 및 TGF-β), 신경 성장 인자 (NGF), 에리트로포이에틴 (EPO), 인슐린-유사 성장 인자 (IGF-I 및 IGF-II), 인터류킨 사이토카인 (IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13), 인터페론 (IFN-α, IFN-β, 및 IFN-γ), 종양 괴사 인자 (TNFα 및 TNF-β), 집락 자극 인자 (GM-CSF 및 M-CSF)이다. 성장 인자 (GF)의 예는 하기에서 기재되어 있다: 2013년 8월 27일자로 발행된 미국 특허 번호 8,518,879 및 2015년 9월 1일자로 발행된 미국 특허 번호 9,119,974 (둘 모두 그 전문이 본 명세서에 참고로 편입됨).

일부 구현예에서, 국소 제형은 추가로, 하나 이상의 생물활성 단편화 펩타이드를 포함한다. 일부 구현예에서, 생물활성 단편화 펩타이드는 콜라겐분해효소-유래된 생물학적 활성 단편, 티게리닌-기반 펩타이드, 또는 이들의 조합이다. 일부 구현예에서, 생물활성 단편화 펩타이드는 도롱뇽 피부 펩타이드, 예컨대 틸로토인-기반 펩타이드이다. 일부 구현예에서, 단편화 펩타이드는 개구리 피부 펩타이드, 예컨대 티게리닌-기반 펩타이드이다.

일부 구현예에서, 국소 제형은 적어도 하나의 증점제, 적어도 하나의 휴멕턴트, 및/또는 적어도 하나의 보존제를 포함할 수 있다. 증점제는, 예를 들어, 트리글리세라이드, 팔미테이트, 미리스테이트, 스테아레이트, 폴리에틸렌 글리콜, 채소-기반 지방 알코올, 코폴리머, 셀룰로스 검, 또는 크산탄 검을 포함할 수 있다. 휴멕턴트는 그것의 보습 능력을 위해 사용될 수 있다. 제한 없이, 휴멕턴트는 비제한적으로 나트륨 PCA, 나노리피드 겔(nanolipid gel), 글리세린, 알파-하이드록시 산, 부틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 헥실렌 글리콜, 소르비톨, 하이알루론산, 우레아, 글리세릴 트리아세테이트, 네오아가로비오스, 글리세롤, 자일리톨, 말티톨, 폴리머 폴리올, 폴리덱스트로스, 퀼라야, MP 디올, 해초 및 조류 추출물, 및 락트산을 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 국소 제형은 추가로, 적어도 하나의 보존제를 포함한다. 제한 없이, 보존제는 벤조인 수지, 호호바, 비타민 E, 알코올, 페녹시탄올(phenoxytthanol), 메틸파라벤, 프로필파라벤, 디아졸리디닐 우레아, 소르브산, 및 트라이클로산을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 보존제는 벤조인 수지, 호호바, 비타민 E, 알코올, 페녹시에탄올, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 디아졸리디닐 우레아, 소르브산, 및/또는 트라이클로산이다.

제한 없이, 본 명세서에 기재된 제형은 로션, 크림, 겔, 코스메틱 (메이크업), 자외선차단제 또는 썬블록(sunblock) 내에 존재할 수 있다. 제형을 함유할 수 있는 메이크업은 비제한적으로 파운데이션, 블러쉬, BB 크림, CC 크림, 파운데이션 프라이머, 프라이머, 립스틱, 립글로스, 속눈썹 프라이머, 아이섀도, 크림 아이섀도, 크림 파운데이션, 스킨 세럼, 및 컨실러를 포함할 수 있다.

대상체를 치료하는 방법이 요구될 때, 예를 들어, 대상체가 두피에 염증을 가질 때, 상기 제형은 샴푸, 컨디셔너, 헤어스프레이, 무스, 겔, 또는 헤어 린스에서 제공될 수 있다.

대상체를 치료하는 방법이 요구될 때, 예를 들어, 대상체가 네일 또는 주변 각피 부위에 염증을 가질 때, 상기 제형은 겔, 로션, 크림, 또는 큐티클 오일에서 제공될 수 있다.

대상체를 치료하는 방법이 요구될 때, 예를 들어, 대상체가 비강 또는 주변 부위에 염증을 가질 때, 상기 제형은 비강 스프레이 또는 점비액으로서 제공될 수 있다.

대상체를 치료하는 방법이 요구될 때, 예를 들어, 대상체가 입 또는 경구 부위 예컨대 잇몸 입술, 안쪽 뺨 또는 입 천장에 염증을 가질 때, 상기 제형은 구강 세정제, 치약, 예방용 페이스트, 치아 광택제, 치과 용액, 경구 스프레이, 치실, 츄잉검, 로젠지, 정제, 구강 린스, 또는 치아 트레이 내의 겔/크림으로 제공될 수 있다.

대상체를 치료하는 방법이 요구될 때, 예를 들어, 대상체가 회음부에 염증을 가질 때, 상기 제형은 좌약, 크림, 겔, 연고, 또는 로션으로 제공될 수 있다.

대상체를 치료하는 방법이 요구될 때, 예를 들어, 대상체가 귀 또는 귀의 주변 부위에 염증을 가질 때, 상기 제형은 귀를 위해 제형화된 약물 예컨대 점이액으로 제공될 수 있다.

대상체를 치료하는 방법이 요구될 때, 예를 들어, 대상체가 눈 또는 눈의 주변 부위에서 염증을 가질 때, 상기 제형은 눈을 위해 제형화된 약물 예컨대 안약, 눈 연고 또는 눈 크림으로 제공될 수 있다. 일부 구현예에서, 속눈썹의 뿌리에 염증이 생긴 경우, 상기 제형은 속눈썹 프라이머에 사용될 수 있으며, 속눈썹 프라이머는 마스카라 브러쉬 또는 작은 브러쉬로 속눈썹 라인에 대해 투여될 수 있다.

대상체를 치료하는 방법이 요구될 때, 예를 들어, 대상체가 질 부위의 염증을 가질 때, 상기 제형은 크림, 겔, 연고, 로션, 또는 질 좌약으로 제공될 수 있다.

피부 장애를 앓고 있는 환자는 단독으로 또는 질환 또는 병태를 치료하는 것으로 공지된 다른 요법과 함께, 또는 단독으로 또는 하나 이상의 성장 인자 및/또는 하나 이상의 생물활성 단편화 펩타이드와 함께 단리된 풀베이트 분획으로 처리될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "요법"은 비제한적으로 공지된 약물을 포함한다. 또한, 본 명세서에 기재된 단리된 풀베이트 분획은 바람직하지 않은 부작용과 관련된 약물과 배합될 수 있다. 단리된 풀베이트 분획을 그와 같은 약물과 배합함으로써, 부작용이 있는 약물의 효과적인 투약량을 낮춰 부작용이 발생할 가능성을 감소시킬 수 있다.

일부 구현예에서 피부 장애로 진단되거나 피부 장애가 있는 환자를 치료적 유효량의 단리된 풀베이트 분획으로 치료하는 방법으로, 피부 장애를 완화시키거나 감소시키도록 상기 환자에게 상기 단리된 풀베이트 분획을 투여하는 단계를 포함하는 방법이 제공된다. 구현예는 피부 장애로 진단되거나 피부 장애가 있는 환자를 치료적 유효량의 단리된 풀베이트 분획으로 치료하는 방법으로, 피부 장애의 증상이 감소되거나 억제되도록 상기 환자에게 상기 단리된 풀베이트 분획을 투여하는 단계을 포함하는 방법을 포함한다. 일 구현예에서, 단리된 풀베이트 분획은 상처 치유의 동적 과정을 촉진화하는 것을 포함하여, 치유 기능을 촉진시킴으로써 기능한다. 이들 과정은 하기를 포함한다: 혈소판 응집, 혈액 응고, 및 염증 세포의 상처 부위로의 이동을 초래하는 혈액 성분의 혈관외 유출로 구성된 염증성 반응 단계; 재상피화 및 육아조직 형성으로 이어지는 케라틴생성세포, 섬유아세포, 및 내피 세포의 이동 및 증식을 포함하는 증식 단계; 및 조직 구조적 완전성 및 기능적 역량을 회복시키는 조직 리모델링 단계.

일부 구현예에서 단독으로, 성장 인자, 생물활성 단편화 펩타이드, 피부 치료와 함께, 또는 당해 분야에서 공지된 방법에 의한 상처 또는 피부 요법과 함께, 예컨대 물리적 요법, 통증 관리 치료, 또는 당해 분야의 다른 치료 또는 요법과 함께 본 명세서에 기재된 바와 같이 단리된 풀베이트 분획으로 피부 장애를 치료하는 방법이 제공된다.

약제학적 제형

본 개시의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 캐리어와 함께 유효량의 본 개시의 단리된 풀베이트 분획을 포함할 수 있다. 상기 조성물은 추가로, 본 명세서에 기재된 하나 이상의 성장 인자, 본 명세서에 기재된 하나 이상의 생물활성 단편화 펩타이드, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 상기 조성물은 추가로, 피부 질환 또는 상처의 치료에 적합한 다른 공지된 약물을 포함할 수 있다. 본 개시의 단리된 풀베이트 분획의 유효량은 장애를 완화시키거나, 단리된 풀베이트 분획 치료의 부재시 일어날 것과 비교하여 치유 과정의 촉진을 야기하는 양이다. 유효량 (및 투여 방식)은 개별적으로 결정될 것이며, 대상체의 고려 (사이즈, 연령, 일반적인 건강), 치료되는 병태의 중증도, 치료될 증상의 중증도, 추구되는 결과, 사용되는 특정 캐리어 또는 약제학적 제형, 투여 경로, 및 당해 분야의 숙련가에게 분명할 다른 인자에 기초할 것이다. 상기 유효량은 당해 분야에 공지되어 있는 기술을 사용하여 당해 분야의 숙련가에 의해 결정될 수 있다. 본 명세서에 기재된 화합물의 치료적 유효량은 당해 분야에 공지되어 있는 바와 같이, 시험관내 시험, 동물 모델 또는 다른 용량-반응 연구를 사용하여 결정될 수 있다. 본 개시의 단리된 풀베이트 분획은 단독으로 또는 다른 요법과 함께 사용될 수 있다. 상기 치료적 유효량은 단리된 풀베이트 분획이 또 다른 요법과 함께 사용될 때 감소될 수 있다.

본 개시의 약제학적 조성물은 진피내, 정맥내, 피하, 경구, 직장, 질, 비경구, 복강내, 국소, 폐, 비강내, 구강, 안과, 척추강내, 경막외, 또는 또 다른 투여 경로에 적합한 제형으로 제조, 포장 또는 판매될 수 있다. 상기 화합물은 임의의 편리한 경로, 예를 들어 주입 또는 볼러스 주사, 상피 또는 점막피부 내막(lining) (예를 들어, 경구 점막, 직장, 및 장 점막, 등)을 통한 흡수에 의해 투여될 수 있으며, 다른 생물학적 활성 제제와 함께 투여될 수 있다. 투여는 전신 또는 국소일 수 있다. 예를 들어, 본 개시의 약제학적 조성물은 미세 주입(microinfusion)을 통해 종양으로 국소적으로 투여될 수 있다. 또한, 투여는 단일 용량 또는 일련의 용량에 의한 투여일 수 있다.

약제학적 용도를 위해, 본 개시의 단리된 풀베이트 분획 치료는 약제학적으로 허용가능한 캐리어와 함께 사용될 수 있으며, 선택적으로 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 부형제를 포함할 수 있다.

따라서 본 개시는 또한 대상체로의 투여에 적합한 약제학적 조성물을 제공한다. 상기 캐리어는 본 조성물이 비경구 투여에 적합하도록 액체일 수 있거나 경구 투여를 위해 제형화된 고체, 즉, 정제 또는 알약일 수 있다. 또한, 상기 캐리어는 본 조성물이 흡입에 적합하도록 안개상 분무가능 액체 또는 고체의 형태일 수 있다. 비경구로 투여될 때, 본 조성물은 발열원이 없어여 하며, 허용가능한 비경구 캐리어 내에 존재해야 한다. 대안적으로, 활성 화합물은 공지된 방법을 사용하여 리포좀 내에 제형화 또는 캡슐화될 수 있다. 다른 고려되는 제형은 계획된 나노입자 및 면역학 기반 제형을 포함한다.

리포좀은 포획된 수성 용적을 함유하는 완전히 폐쇄된 지질 이중층 막이다. 리포좀은 단일라멜라 (단일막) 또는 다중라멜라 (다중막 이중층을 특징으로 하는 양파-유사 구조, 각각은 수성층에 의해 다음의 것과 분리됨)일 수 있는 소포이다. 상기 이중층은 소수성 "테일" 영역 및 친수성 "헤드" 영역을 갖는 2개의 지질 단일층으로 구성된다. 막 이중층에서, 지질 단일층의 소수성 (무극성) "테일"은 이중층의 중심을 향하여 배향되고, 반면에 친수성 (극성) "헤드"는 수성상을 향하여 배향된다.

투여 방법

일부 구현예는 또한 개시된 국소 제형을 제조하고 투여하는 방법을 포함한다. 그와 같은 개시된 방법은, 특히, 국소 투여를 통한 투여를 포함하며, 여기서 상기 투여는 조성물을 생체 조직과 최적으로 접촉시키기 위한 기술에서의 숙련가에 의해 적절한 것으로 간주되는 바와 같은, 수성 현탁액, 유성 제제 등 또는 고약, 연고 등으로서의 투여; 및 제어 방출 제형을 통한 투여를 포함한다.

당해 분야의 숙련가에게 쉽게 분명한 바와 같이, 투여될 유용한 투약량은 연령, 치료될 부위의 중량 크기, 이용된 특정한 성분, 및 이들 성분이 이용되는 특정 용도에 따라 달라질 것이다.

치료 방법

피부, 모발, 및 네일 관리

본 명세서에서 제공된 구현예는 필요한 대상체의 치료에 사용될 수 있다. 예시적인 구현예에서, 국소 제형은 반점, 주름, 텍스처, 모공, UV 반점, 갈색 반점, 붉은 피부면, 및 포르피린을 치료하기 위해 사용된다. 본 명세서에 기재된 바와 같이, 포르피린은 피부 내 죽은 박테리아에 기인한다. 포르피린의 측정은 그것이 피부의 발진(breakout) 또는 여드름 경향과 관련되기 때문에 피부 개선의 척도이다.

추가로, 본 명세서에 기재된 구현예는 네일 및 모발 건강에 영향을 줄 수 있는 질환의 치료를 위해 사용될 수 있다. 네일 질환은 비제한적으로 조갑주위염, 진균 감염, 조갑위축증, 및 네일 건선을 포함할 수 있다. 또한, 모발 건강에 영향을 주는 질환도 치료될 수 있다. 모발 건강에 영향을 주는 질환은 비제한적으로 탈모증, 남성 패턴 대머리 (안드로겐성 탈모증), 다모증, 모간 장애, 및 버짐을 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 피부 장애를 앓고 있는 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 단리된 풀베이트 분획 또는 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 국소 제형을 제공하는 단계 및 상기 단리된 풀베이트 분획 또는 국소 제형을 상기 대상체에게 적용하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 단리된 풀베이트 분획 또는 국소 제형은 피부에 적용된다. 일부 구현예에서, 상기 피부 장애는 건선, 피부암, 여드름, 탈모증, 큰종기, 피부염, 습진, 아토피 피부염, 접촉 피부염, 지루성 피부염, 아기머리 기름 딱지(cradle cap), 입주위 피부염, 대상포진, 버짐, 멜리스마, 및 농가진으로 구성된 군으로부터 선택된다. 구현예들에서, 상기 피부 장애는 자가면역 장애로부터 발생한다. 일부 구현예에서, 상기 자가면역 장애는 원형 탈모증, 자가면역 맥관부종, 자가면역 프로게스테론 피부염, 자가면역 두드러기, 수포성 유천포창, 반흔성 유사천포창, 포진성 피부염, 원판성 홍반성 낭창, 후천성 수포성 표피박리증, 결절 홍반, 임신성 유사천포창, 화농성 한선염, 편평 태선, 경화성 태선, 선형 IgA 질환, 반상경피증, 심상성 천포창, 잔비늘증 급성태선모양잔비늘증(Pityriasis lichenoides et varioliformis acuta), 무하-하버만(Mucha-Habermann) 질환, 건선, 전신 경피증 또는 백반증이다. 일부 구현예에서, 피부 질환 및 피부 장애는 여름 여드름 (마요르카 여드름), 집족성 여드름, 화장품 여드름 (코스메틱 여드름), 전격성 여드름 (급성 열성 궤양성 여드름), 목덜미 켈로이드성 여드름 (켈로이드성 여드름, 두부 유두상 피부염, 켈로이드성 모낭염, 목덜미 켈로이드성 모낭염, 목덜미 켈로이드 여드름), 붉은 뾰루지가 흩어져 있는 성인 이마, 심상성 여드름, 기계적 여드름, 약물성 여드름, 좁쌀 괴사 여드름 (두창성 여드름), 심상성 여드름, 안면 부종 (고형 안면 부종)을 동반한 여드름, 블레파로피마, 에리트로모세혈관 확장성 주사비 (홍반모세혈관 확장성 주사비, 혈관 주사비), 찰상성 여드름 (아크네 엑스코리에 데 죈 필레, 피커 여드름), 선상 주사비, 그나토피마, 그램-음성 주사비, 육아종 안면 피부염, 크고 붉은 주먹코를 가진 성인 남성, 딸기코증, 육아종성 입주위 피부염, 할로겐 여드름, 화농성 한선염 (아크네 인버사, 피오더마 피스툴란스 시그니피카, 베르눼이뉴병), 특발성 안면 무균성 육아종, 유아의 여드름, 유낭창 주사비 (육아종 주사비, 소구진성 결핵진, 레반도프스키의 주사비-유사 결핵진), 안면 파종상 속립성낭창, 메토피마, 신생아 여드름 (영아 여드름, 신생아 여드름, 신생아 두부 농포증), 직업 여드름, 오일 여드름, 안구 장미증 (눈 장미증, 눈장미증), 오토피마, 구강 주위 피부염, 장미증의 지속적 부종 (만성 상부 안면 홍반성 부종, 모르비앙병, 장미성 림프부종), 비류성 주사비, 포마드 여드름, 구진농포성 주사비 (염증성 주사비), 농양성 천굴성 두부 모낭주위염 (두피의 박리 연조직염, 박리 모낭염, 호프만의 농양성 천굴성 두부 모낭주위염), 입주위 피부염, 안와주위 피부염 (눈주위 피부염), 안면 농피증 (전격성 주사비), 딸기코증, 주사비 (장미 여드름), 응괴성 주사비, 윤활막염-여드름-농포증-골과다증-골수염 증후군 (SAPHO 증후군), 스테로이드 주사비, 타르 여드름, 피부암, 열대 여드름, 판상 건선, 적상 건선, 역형 건선, 농포성 건선, 홍피성 건선, 네일 건선, 및 건선성 관절염을 포함할 수 있다.

본 명세서의 구현예에 기재된 바와 같은 단리된 풀베이트 분획 또는 국소 제형은 고통받는 부위에 1일 1회, 2회, 3회, 4회 또는 그 이상 적용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 국소 제형은 피부, 모발 제품, 두피, 또는 네일 제품의 혈청 내에 존재한다. 본원의 구현예의 국소 제형은 다양한 개인 위생 용품 예컨대, 예를 들어, 비누, 로션, 샴푸, 컨디셔너, 토너, 또는 피부 크림에서 사용될 수 있다. 필요에 따라, 상기 제품은 피부, 모발 제품, 네일 제품, 및 비누부터 샴푸까지 다양한 개인 위생 용품의 세럼으로 제조될 수 있다. 본 명세서에 기재된 바와 같이, 상기 국소 제형은 영구적으로 사용될 수 있다.

네일 및 각피 부위의 치료에 있어서, 상기 제형은 크림, 겔, 연고, 각피 크림 또는 로션일 수 있다. 두피 또는 모발 건강을 개선시키기 위한 치료에 있어서, 상기 제형은 샴푸, 두피 크림 또는 로션, 겔, 스프레이 제형, 무스, 또는 모발 린스 내에 존재할 수 있다.

일부 측면에서 통증으로 고통 받는 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 본 명세서에서 제공된 임의의 구현예의 조성물 또는 본 명세서에서 제공된 임의의 구현예의 국소 제형을 제공하는 단계 및 상기 조성물 또는 국소 제형을 상기 대상체에게 적용하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 조성물 또는 국소 제형은 피부에 적용된다. 일부 구현예에서, 상기 통증은 관절염에 기인한다. 일부 구현예에서, 상기 통증은 질환에 기인한다. 일부 구현예에서, 상기 통증은 염증에 기인한다.

경구 건강

일부 측면에서 경구 건강을 개선시키는 방법이 제공된다. 경구 건강의 저하는 특정 질환의 진전 또는 기계적 이유, 예컨대 잇몸 라인 근처 치아의 거친 브러싱, 또는 치아 및 잇몸 부위의 적절한 관리 결여로 인해 발생할 수 있다. 잇몸병도 또한 당뇨병, 유전학, 심장병, 임신, 쇼그렌 증후군, HIV/AIDS, 입안 건조 (구강건조증), 구강암, 입안 건조가 잇몸 및 조직에 문제를 일으킬 수 있는 타액 및 타액샘 장애, 약물 사용, 메트암페타민 사용, 코카인 사용, 헤로인 사용, 흡연, 및 씹는 담배의 부적절한 관리로 인해 발생할 수 있다. 잇몸 라인 근처 거친 브러싱 이외에도, 질환은 또한 잇몸 라인을 가늘게 하고 약화시킬 수 있다.

본 명세서에 기재된 일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 제형은 구강 내 잇몸 라인 또는 조직의 치료에 사용될 수 있다. 상기 제형은 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 방법에 의해 단리, 정제 또는 추출된 단리된 풀베이트 분획 또는 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 단리된 풀베이트 분획을 포함할 수 있다. 상기 방법은 HOM을 포함하는 수성 슬러리를 제공하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 HOM을 포함하는 수성 슬러리를 고압 칼럼 분별화에 적용하여 분획화된 샘플을 수득하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로, 상기 분획화된 샘플을 분자 체질에 적용하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로, 풀베이트 분획을 단리하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 풀베이트 분획은 M-007이다.

상기 제형은 치약, 치아 겔, 구강 린스, 또는 구강 세정제 내에 제공될 수 있다. 투여는 1일 2회 또는 3회 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 치료는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 15, 21, 또는 28일, 상기 언급된 임의의 2개의 값 사이의 임의의 일수 동안 수행된다.

본 명세서에 기재된 일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 제형은 구강 내 잇몸 라인 또는 조직의 치료에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 나쁜 경구 건강으로 고통 받는 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 상기 제형을 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 투여는 제형을 치과 트레이 내 놓고, 잇몸이 상기 제형에 포화되도록 상기 트레이를 치아의 상부 및 하부 세트에 도포함으로써 수행된다. 일부 구현예에서, 상기 트레이는 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 35, 40, 56, 50, 55, 또는 60분 또는 상기 언급된 2개의 값 사이의 임의의 다른 시간 동안 적용된다. 일부 구현예에서, 상기 투여는 1일 2회 또는 3회 수행된다. 일부 구현예에서, 상기 치료는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 15, 21, 또는 28일, 상기 언급된 임의의 2개의 값 사이의 임의의 일수 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 필요한 대상체는 당뇨병, 유전 질환, 심장병, 쇼그렌 증후군, HIV/AIDS, 입안 건조 (구강건조증), 구강암, 또는 타액 및 타액샘 장애를 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 임신중이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 잇몸병 (치주염)을 갖는다.

일부 구현예에서, 상기 제형은 치약, 치아 겔, 구강 린스/세정제, 또는 가글 제형이다. 일부 구현예에서, 상기 투여는 치약을 뭍힌 칫솔을 사용하여 또는 입을 제형으로 린스하여 수행된다.

비강 관리

비강 건강은 비강이 호흡을 위해 공기를 여과하고, 분진, 세균, 및 자극물을 제거하기 위해 사용되기 때문에 중요하다. 비강은 또한 공기를 가온시키고 습윤시켜 폐 및 통로가 마르지 않도록 한다. 비강은 또한 냄새 뿐만 아니라 맛의 감지를 도울 수 있는 신경 세포를 함유한다. 코에 영향을 줄 수 있는 일반적인 문제는 비제한적으로 비강 용종, 코피, 마른 코, 및 비염, 알러지, 콧물, 박테리아 감염, 및 병에 의해 유발된 자극을 포함할 수 있다.

본 명세서에 기재된 일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 제형은 비강의 치료에 사용될 수 있으며, 여기서 상기 제형은 필요한 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 투여는 상기 제형을 비강 경로로 투여함으로써 수행된다. 상기 제형은 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 방법에 의해 제조된 단리된 풀베이트 분획 또는 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 단리된 풀베이트 분획을 포함할 수 있다. 상기 단리된 풀베이트 분획은 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 방법에 의해 추출, 정제, 및 단리될 수 있다. 상기 방법은 HOM을 포함하는 수성 슬러리를 제공하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 HOM을 포함하는 수성 슬러리를 고압 칼럼 분별화에 적용하여 분획화된 샘플을 수득하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로, 상기 분획화된 샘플을 분자 체질에 적용하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로, 풀베이트 분획을 단리하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 풀베이트 분획은 M-007이다. 일부 구현예에서, 상기 투여는 1일 2회 또는 3회 수행된다. 일부 구현예에서, 상기 치료는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 15, 21, 또는 28일, 상기 언급된 임의의 2개의 값 사이의 임의의 일수 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 상기 제형은 점비액, 비강 스프레이 또는 비강 린스/세정제로서 투여된다. 일부 구현예에서, 필요한 대상체는 비강 용종, 코피, 마른 코, 및 비염, 알러지, 콧물, 박테리아 비강 감염, 또는 마른 비강(dry nasal passage)을 유발할 수 있는 병에 의해 유발된 자극을 갖는다.

청각 관리

청각 관리는 대상체가 귀, 외이도 및 주변 조직의 염증을 가질 때 요구될 수 있다. 박테리아, 바이러스, 점액, 및 다른 피부 병태와 같은 일반적인 자극물은 귀의 염증을 유발할 수 있다. 귀의 염증을 유발할 수 있는 외부 자극이 또한 발생할 수 있다. 예를 들어, 물이 외이도에 포획될 때, 박테리아는 확산되어 염증 및 통증을 유발할 수 있다. 내이 염증도 바이러스성 감염 예컨대 독감 또는 상기도 감염 후에 발생할 수 있다. 이후 바이러스는 균형 기관의 팽윤을 유발하여 내이 염증 동안 통증을 동반하거나 동반하지 않고 현기증을 일으킬 수 있다.

일부 구현예에서, 청각 염증 또는 귀 감염으로 고통 받는 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 단리된 풀베이트 분획 또는 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 국소 제형을 제공하는 단계 및 상기 단리된 풀베이트 분획 또는 국소 제형을 상기 대상체에게 적용하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 단리된 풀베이트 분획 또는 국소 제형은 귀에 적용된다. 상기 국소 제형은 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 방법에 의해 제조된 단리된 풀베이트 분획 또는 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 단리된 풀베이트 분획을 포함할 수 있다. 상기 단리된 풀베이트 분획은 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 방법에 의해 추출, 정제, 및 단리될 수 있다. 상기 HOM을 포함하는 수성 슬러리를 제공하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 HOM을 포함하는 수성 슬러리를 고압 칼럼 분별화에 적용하여 분획화된 샘플을 수득하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로, 상기 분획화된 샘플을 분자 체질에 적용하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로, 풀베이트 분획을 단리하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 풀베이트 분획은 M-007이다. 일부 구현예에서, 상기 제형은 점이액, 귀 세정제, 또는 귀 연고의 형태이다.

질 염증

일부 구현예에서, 질 또는 외음질 부위에 염증 또는 불편을 갖는 대상체에 대한 치료가 제공된다. 증상은 비제한적으로 생식기 부위의 자극 및/또는 가려움, 질 또는 회음부의 염증 또는 통증을 포함할 수 있다. 원인은 비제한적으로 건강한 미생물총의 파괴, 감염, 효모, 박테리아 또는 바이러스를 포함할 수 있다. 자극을 유발할 수 있는 병원체는 비제한적으로 가드네렐라(Gardnerella), 고노리아(gonorrhea), 클라미디아(chlamydia), 마이코플라스마(Mycoplasma), 헤르페스(herpes), 캄필로박터(Campylobacter), 또는 트리초모나스 바지날리스(Trichomonas vaginalis)를 포함할 수 있다. 자극은 또한 당뇨병의 영향, 산아 제한, 나쁜 식이, 타이트한 의복, 항생제의 사용, 후-폐경 또는 산후로 인한 호르몬 질염, 또는 에스트로겐의 소실로 인해 발생할 수 있다. 자극물은 또한 콘돔, 살정제, 비누, 방향제, 및 윤활제에 기인할 수 있다. 에스트로겐의 소실 또는 호르몬 질염은 조직의 건조를 일으킬 수 있다.

일부 구현예에서, 국소 제형이 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 국소 제형은 본 명세서의 구현예에 의해 기재된 임의의 방법에 의해 제조된 단리된 풀베이트 분획 또는 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 단리된 풀베이트 분획을 포함한다. 상기 국소 제형은 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 방법에 의해 제조된 단리된 풀베이트 분획 또는 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 단리된 풀베이트 분획을 포함할 수 있다. 상기 단리된 풀베이트 분획은 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 방법에 의해 추출, 정제, 및 단리될 수 있다. 상기 방법은 HOM을 포함하는 수성 슬러리를 제공하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 HOM을 포함하는 수성 슬러리를 고압 칼럼 분별화에 적용하여 분획화된 샘플을 수득하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로, 상기 분획화된 샘플을 분자 체질에 적용하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로, 풀베이트 분획을 단리하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 풀베이트 분획은 M-007이다. 일부 구현예에서, 상기 국소 제형은 겔, 크림, 포옴 또는 질 좌약의 형태이다.

일부 구현예에서, 질 부위의 자극 또는 염증으로 고통 받는 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 본 명세서의 임의의 구현예에 기재된 단리된 풀베이트 분획 또는 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 국소 제형을 제공하는 단계 및 상기 단리된 풀베이트 분획 또는 국소 제형을 상기 대상체에게 적용하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제형은 겔, 크림, 로션, 포옴 또는 질 좌약에 존재한다. 일부 구현예에서, 상기 제형은 질 및 회음부에 적용된다. 일부 구현예에서, 상기 제형은 질 좌약으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 질 건조증을 앓고 있다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 박테리아, 진균, 또는 바이러스성 감염으로 고통 받는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 당뇨병을 갖는다.

회음 관리

본 명세서에 기재된 일부 구현예에서, 대상체는 회음부의 자극에 대해 치료된다. 회음부의 자극은 비제한적으로 치질, 항문열창, 직장 열창, 누공 및 다른 유형의 직장 감염을 포함할 수 있다. 제한 없이, 자극의 원인은 직장염증, 염증성 장 질환, 크론병, 궤양성 대장염, 고립성 직장 궤양, 직장 암종, 분만 및 외음절개술로부터 유래할 수 있다.

일부 구현예에서, 회음 관리에 사용하기 위한 제형이 제공된다. 상기 제형은 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 방법에 의해 제조된 단리된 풀베이트 분획 또는 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 단리된 풀베이트 분획을 포함할 수 있다. 상기 단리된 풀베이트 분획은 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 방법에 의해 추출, 정제, 및 단리될 수 있다. 상기 방법은 HOM을 포함하는 수성 슬러리를 제공하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 HOM을 포함하는 수성 슬러리를 고압 칼럼 분별화에 적용하여 분획화된 샘플을 수득하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로, 상기 분획화된 샘플을 분자 체질에 적용하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로, 풀베이트 분획을 단리하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 풀베이트 분획은 M-007이다. 상기 제형은 크림, 연고, 겔 또는 좌약으로 제공될 수 있다.

일부 구현예에서, 회음부의 자극으로부터 고통 받는 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 자극은 치질, 항문열창, 직장 열창, 누공, 및 다른 유형의 직장 감염, 직장염증, 염증성 장 질환, 크론병, 궤양성 대장염, 고립성 직장 궤양, 직장 암종, 분만, 및/또는 외음절개술에 의해 유발된다. 상기 방법은 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 단리된 풀베이트 분획 또는 본 명세서에 기재된 구현예 중 어느 하나의 국소 제형을 제공하는 단계 및 상기 단리된 풀베이트 분획 또는 국소 제형을 상기 대상체에게 적용하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 단리된 풀베이트 분획 또는 국소 제형은 피부 또는 회음부에 적용된다. 일부 구현예에서, 상기 제형은 좌약으로 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 투여는 좌약을 삽입함으로써 수행된다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 당뇨병을 앓고 있다.

안구 관리

안구 관리는 면역저하된 사람 또는 정기적으로 박테리아 및 자극물에 노출되는 대상체에게 필요하다. 예를 들어, 접촉 사용자 또는 알러지로 고통 받는 사람은 자극물에 정기적으로 노출되는 것으로 알려져 있다. 눈의 주요 자극물은 비제한적으로 결막염, 알러지 트리거(allergic trigger) 예컨대 분진 또는 꽃가루 및 안구 건조 증후군을 유발할 수 있는 박테리아 또는 바이러스를 포함할 수 있다.

본 명세서에 기재된 일부 구현예에서, 대상체는 눈 및 주변 부위의 자극에 대해 치료된다. 눈 부위의 자극은 비제한적으로 결막염, 박테리아 또는 바이러스성 감염, 알러지항원 또는 안구 건조 증후군을 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 눈의 관리에 사용하기 위한 제형이 제공된다. 상기 제형은 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 방법에 의해 제조된 단리된 풀베이트 분획 또는 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 단리된 풀베이트 분획을 포함할 수 있다. 상기 단리된 풀베이트 분획은 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 방법에 의해 추출, 정제, 및 단리될 수 있다. 상기 방법은 HOM을 포함하는 수성 슬러리를 제공하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 HOM을 포함하는 수성 슬러리를 고압 칼럼 분별화에 적용하여 분획화된 샘플을 수득하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로, 상기 분획화된 샘플을 분자 체질에 적용하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가로, 풀베이트 분획을 단리하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 풀베이트 분획은 M-007이다. 상기 제형은 눈 세정제, 눈 크림 또는 안약으로 제공될 수 있다. 일부 구현예에서, 속눈썹의 뿌리에 염증이 생기고, 상기 제형은 속눈썹 프라이머에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 속눈썹 프라이머는 마스카라 브러쉬 또는 작은 브러쉬로 속눈썹 라인에 대해 투여된다.

일부 구현예에서, 눈의 자극으로 고통 받는 대상체를 치료하는 방법. 일부 구현예에서, 상기 자극은 박테리아 또는 바이러스에 의한 눈 감염, 알러지항원 또는 안구 건조 증후군으로부터 유발된다. 상기 방법은 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 단리된 풀베이트 분획 또는 본 명세서에 기재된 구현예 중 어느 하나의 국소 제형을 제공하는 단계 및 상기 단리된 풀베이트 분획 또는 제형을 상기 대상체에게 적용하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 제형은 눈에 안약으로 투여된다. 일부 구현예에서, 속눈썹의 뿌리에 염증이 생기고, 상기 제형은 속눈썹 프라이머에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 속눈썹 프라이머는 마스카라 브러쉬 또는 작은 브러쉬로 속눈썹 라인에 대해 투여된다.

혈관신생 촉진

혈관신생은 기존 혈관으로부터 새로운 혈관을 형성하는 것이며, 무릎 찰과상부터 정맥 정체 궤양, 압력 궤양 및 당뇨병성 발 궤양까지 모든 유형의 상처 치유의 핵심 단계이다. 조직을 복구시키기 위해, 손상 부위에 영양소, 산소, 및 신호전달 분자를 가져오는 적절한 혈액 공급이 있어야 한다.

본 명세서에 개시되고, M-007 분획에서 발견되는 생물활성 단편화 펩타이드는 신규한 혈관 및 상피성 조직, 예컨대 피부의 성장을 통해 상처 치유를 촉진시킨다. 본 명세서에서 제공된 바와 같이, 이들 상처-치유 펩타이드는 시험관내에서 300-400 퍼센트의 혈관신생을 증가시킨다. 이들 결과는 기전 조절 상처 치유의 더 나은 이해를 제공하며, 급성 및 만성적 상처 치유를 위한 신규한 국소 요법으로 이어질 수 있다. 본 명세서에 기재된 바와 같이, M-007 분획에 존재하는 특정 생물활성 펩타이드가 확인되었다. M-007 풀베이트와 커플링된 몇 개의 핵심 펩타이드 단편의 조합을 생성함으로써, 손상-혈관 형성 및 상피화에 대한 근본적인 반응을 촉진시키는 추가 부류의 상처-치유 펩타이드가 합성될 수 있다. 이것은 펩타이드를 다양한 풀빅산 분획과 가변 농도로 펩타이드에 다양한 풀빅산 분획을 다양한 농도로 주입함으로써 달성된다. 접촉시, 클로스트리듐 히스톨리티쿰(Clostridium histolyticum)으로부터 유래된 콜라겐분해효소 효소가 방출되어 세포외 포유동물 단백질로부터 펩타이드로서 생물학적 활성 단편이 생성된다. 이들 펩타이드는 모세관 내피 세포의 증식을 자극하고, 그 자체로 미세혈관 리모델링을 향상시키는 것으로 나타났다.

실시예

상기 논의된 구현예의 일부 측면은 본 개시의 범위를 어떤 식으로든 제한하는 것이 아닌 하기 실시예에 더욱 상세하게 개시되어 있다. 당해 분야의 숙련가는, 많은 다른 구현예가 상기 본 명세서에서 및 청구항들에서 기재된 바와 같이 본 개시의 범위 내에 속한다는 것을 이해할 것이다.

이들 실시예는 물리적 장벽의 붕괴가 선천적인 면역계로 신호를 발생시키고, 주변 미생물로부터의 임박한 침입을 방지할 반응을 개시한다는 것을 입증한다. 사실상, 카텔리시딘(cathelicidin) 및 분비성 백혈구 프로테아제 억제제 (SLPI)의 발현 증가는 이전에 피부 손상 후 나타났다. 본 명세서에 기재된 바와 같이, 성장 인자는 손상 후 상처난 조직의 재생을 자극하기 위해 생성되며, 본 명세서에서 나타낸 바와 같이, M-007 풀베이트와 조합하여 항미생물 펩타이드의 유도물질이 된다. 상기 성장 인자 반응은 미생물 감염으로부터 보호된 물리적 장벽이 재확립될 때 조직 재생 후 중단된다.

본 명세서에서 나타낸 바와 같이, M-007 풀베이트는 단독으로 또는 성장 인자와 함께 상처 치유를 상당히 개선시킨다. M-007 풀베이트, IGF-I, 및 TGF-α는 또한 인간 케라틴생성세포에서 항미생물 펩타이드/폴리펩타이드 hCAP-18, hBD-3, NGAL, 및 SLPI의 발현을 유도 또는 향상시킨다. 게다가, 이들 성장 인자와 조합된 풀베이트 분획은 이들 항미생물 펩타이드/폴리펩타이드 중 일부의 발현을 유도하는데 있어서 상승/부가 효과를 갖는다. 이들 성장 인자는 타액에 존재하며, 동물이 상처를 핥았을 때 상처에서 세포의 증식을 돕는 것으로 오랫 동안 생각되어 왔다. 본 명세서에 제공된 실시예는 이들 성장 인자가 또한 상처에서 감염의 예방에도 도움을 줄 수 있음을 나타낸다.

TGF-α는 상처 치유의 중심 요소이지만, 또한 면역학적 기능이 가능하다. 사실상, 본 명세서에서 나타낸 바와 같이, TGF-α는 전-염증 사이토카인 IL-1로서 동일한 수의 항미생물 펩타이드/폴리펩타이드의 발현을 유도하였다.

M-007 및 성장 인자에 의한 항미생물 펩타이드/폴리펩타이드의 유도는 건선 및 피부 손상에서 이들 단백질/펩타이드의 존재를 설명할 수 있다. 펩타이드/폴리펩타이드 hCAP-18, SLPI, NGAL, 및 hBD-3은 건선성 병변에서 검출되었고, 상처 (피부 손상)에서 hCAP-18 및 SLPI가 증가된다.

건선성 표피에서 IGF-I 수용체 및 TGF-α가 증가되며, IGF-I 및 TGF-α 둘 모두는 상처에서 발현된다. 지난 몇 년 동안, 감염 과정에서 박테리아 및 박테리아 산물이 상피 세포에서 항미생물 펩타이드의 발현을 유도하는 방법을 이해하기 위해 많은 연구가 시도되었다. 염증성 병변에서 성장 인자의 생성은 이 반응에 기여할 수 있다. TGF-α가 존재하며, 보고에 따르면 염증 과정에서 상피로 동원된 중성구, 단핵구, 및 호산구로부터 방출된다는 것은 주목할만하다. 게다가, TGF-α의 합성은 LPS에 노출된 후 대식세포에서 유도된다. 항미생물 펩타이드 -폴리펩타이드가 전형적으로 광범위한 항미생물 활성 스펙트럼을 갖지만, 그것의 특이성에는 차이가 있다. 본 발명자들은, 인간 케라틴생성세포에서 유도된 항미생물 펩타이드/단백질의 스펙트럼은 존재하는 효능제 (성장 인자, 사이토카인)에 의해 좌우된다는 것을 발견하였다. 그 결과, 케라틴생성세포는 항미생물 효과기 분자(antimicrobial effector molecule)의 상이한 발현 패턴에 의한 상이한 병리적 자극에 반응할 수 있다. 이것은 구조적으로 및 유전자적으로 밀접하게 관련된 β-데펜신에 대해서도 마찬가지였다. 펩타이드/폴리펩타이드의 상이한 항미생물 특이성으로 인해, 방어 레퍼토리를 변경하는 능력은 기능상 중요할 수 있으며, M-007 풀베이트에 대한 노출에 의해 선택되는 것으로 여겨진다. 분화된 면역 반응을 생성하는 그것의 능력은 또한 선천적인 면역계에서 면역반응능 세포로서의 케라틴생성세포의 중요성을 강조한다.

항미생물 단백질/펩타이드의 유도는 본 명세서에 언급된 곤충 (드로소필라(Drosophila))에서 가장 잘 설명되었으며, 여기서 항미생물 펩타이드 발현의 주요 유도물질은 이전에 성장 및 발달을 조절하는 것으로 알려진 분자였다. 고등 동물에서 IGF-I 및 TGF-α 둘 모두는 이들의 주요 기능으로서 이것을 갖는다. 반대로, 항미생물 펩타이드의 발현을 유도하는 것으로 알려진 전-염증 사이토카인, IL-1, 및 IL-6은 또한, 인간 케라틴생성세포의 성장을 자극하는 것으로 밝혀졌으며, 따라서 성장 인자인 것으로도 간주될 수 있다. 따라서, 곤충부터 사람까지 항미생물 펩타이드의 성장 및 발현 과정은 뒤얽혀 있는 것처럼 보인다.

임상적인 관점에서, 인간 케라틴생성세포에서 항미생물 펩타이드/폴리펩타이드의 유도된 발현의 매개체로서의 성장 인자의 역할의 확인은 이들 인자가 감염에 대한 피부 이식편의 저항을 증가시키도록 조작될 수 있는 가능성을 제기한다.

실험 물질 및 방법

하기 기재된 실시예에 대해 하기 실험 물질 및 방법이 사용되었다.

StrataTest® 인간 피부 연구 모델

전체-두께 StrataTest® 인간 피부 모델은 시험관내 소비자 제품 시험, 약물 발견(drug discovery), 및 독성 선별을 위한 표피 및 진피 조직 모두로 구성된다. 그것은 인간 피부와 동일한 물리적, 화학적 및 조직학적 특징을 나타내며, 쉽게-이용가능한, 사용하기 쉬운 24-웰 시험 포맷으로 공급된다. 현재의 많은 동물 및 세포 기반 독성 시험 모델은 상당한 정확성, 재현성, 비용, 및 윤리적 관심으로 인해 부담을 느낀다. StrataTest® 피부 조직의 독특한 특징은 향상된, 고-품질의 시험관내 시험 모델을 제공할 뿐만 아니라, 그것은 표준, 2-차원, 단일층 배양보다 생체내 생물학적 반응의 더 나은 예측을 가능하게 한다. 표피층만을 갖는 모델과 달리, 표피 및 진피 구획 모두의 존재는 주변분비 신호전달을 허용한다. StrataTest® 플레이트에서 시험관내 성장된 조직은 새로운 인간 피부가 생체내에서 성장하는 것과 같이 정확하게 성장하여 그것의 구조 및 기능을 완전히 모사한다. 다른 공급원으로부터 배양된 인간 케라틴생성세포와 달리, 유례없이 균일한 NIKS® 세포가 실험실에서 무한정 성장하여 더 적은 배치별(batch-to-batch) 가변성을 초래할 수 있다. StrataTest® 인간 피부 모델은 원상태 인간 피부의 충실한 3차원 재현과 더불어, 일관된 세포 소싱(cell sourcing) 및 품질을 제공한다. 이러한 특징은 넓은 범위의 화학물질, 화합물, 및 다른 잠재적인 독소에 대한 시험관내 반응의 재현성이 높은 정확하고 비용-효율적인 측정을 고객에게 제공한다.

SDS-PAGE 및 면역블로팅

SDS-PAGE 및 면역블로팅은 제조자 (Bio-Rad, Hercules, CA)에 의해 제공된 지침에 따라서 Bio-Rad 시스템으로 수행되었다. 면역블로팅을 위해, 14% 폴리아크릴아미드 겔로부터 단백질을 이동시킨 후, 폴리비닐리덴 디플루오라이드 (PVDF) 막 (Millipore, Bedford, MA)을 PBS 중의 5% 탈지유로 1시간 동안 차단하였다. hCAP-18, NGAL, 및 SLPI의 검출을 위해, PVDF 막을 1차 항체와 함께 밤새 인큐베이션하였다. 다음 날, 상기 막을 세정하고, 알칼리성 포스파타제-접합된 2차 항체 (DAKO, Glostrup, Denmark)와 함께 2시간 동안 인큐베이션하고, 그 다음 세정하고, 5'-브로모-클로로-인돌릴 포스페이트 (Sigma-Aldrich) 및 니트로 블루 테트라졸륨 (Sigma-Aldrich)으로 가시화하였다.

인간 β 데펜신 (hBD-3)의 추출 및 검출

케라틴생성세포로부터의 배지를 4℃에서 밤새 MacroPrep CM Support 비드 (Bio-Rad)로 추출하였다. 이후 상기 비드를 세정하고, 결합된 물질을 30% 아세트산으로 용출시켰다. 용출된 물질을 5% 아세트산 중에서 투석하고, 산 우레아 (AU)-PAGE를 위해 샘플 완충액에 재현탁되기 전에 동결건조시켰다.

AU-PAGE 및 면역블로팅은 제조자 (Hoeffer, San Francisco, CA)에 의해 제공된 지침에 따라서 수행되었다. 12.5% 아크릴아미드 겔로부터 단백질을 이동시킨 후, PVDF 막을 0.05% 글루타르알데하이드를 포함하는 TBS (Sigma-Aldrich) 중에서 30분 동안 고정시키고, 이어서 Superblock 차단 완충액 (Pierce, Rockford, IL)으로 차단하였다. hBD-3의 가시화를 위해, PVDF 막을 1차 항체와 함께 밤새 인큐베이션하였다. 다음 날, 상기 막을 HRP-접합된 2차 항체 (Pierce)와 함께 2시간 동안 인큐베이션하고, Immun-Star HRP 내강/인핸서 및 Immun-Star 과산화물 완충액 (Bio-Rad)으로 가시화하였다.

1차 케라틴생성세포의 성장 및 자극

세포를 인슐린 없이 소 뇌하수체 추출물, 트랜스페린, 인간 표피 성장 인자 (EGF), 하이드로코르티손, 겐타마이신, 암포테리신 B, 및 에피네프린을 갖는 Clonetics (KGM-2 Bullet Kit; San Diego, CA)의 무혈청 케라틴생성세포 배지에서 성장시켰다. 완전한 합류점(confluence)에 도달하고 24시간이 지난 후 세포를 자극하였다. 세포 및 배지를 IGF-I (100 ng/mL), TGF-α (50 ng/mL), TGF-β1 (10 ng/mL), bFGF (100 ng/mL), IGF-I/TGF-α, IL-1β (20 ng/mL), IL-6 (100 ng/mL), EGF (100 ng/mL), 및 TNF-α (20 ng/mL)로의 자극 후 0, 3, 6, 12, 24, 및 48시간에 수거하였다. hCAP-18의 입증을 위해, 배지 및 세포를 IGF-I로의 자극 후 0, 24, 48, 72, 및 96시간에 수거하였다.

기관형적 배양(organotypic culture) 및 자극

인간 표피 케라틴생성세포를 함유하는 1차 표피 배양물 EPI-200-3S (MatTek, Ashland, MA)를 콜라겐-코팅된 밀리셀(Millicel) CM 막에서 성장시켰다. 상기 배양물을 제조자에 의해 공급된 배지 (소 뇌하수체 추출물 미함유)와 함께 12-웰 플레이트 내에 배치하였다. 4일째에 표피 배양물을 공기-액체 계면으로 들어 올리고, 그 다음 제조자의 지침에 따라 공기-액체 계면에서 또 다른 4일 동안 배양하였다. 배양물을 공기중 이동(airlifting)시킨 후 2일째에, 배지를 인슐린 또는 EGF가 없는 배지로 교체하였다. 공기중 이동시킨 후 4일째에 배양물을 IGF-I (100 ng/mL), TGF-α (50 ng/mL), 또는 IGF-I 및 TGF-α의 조합으로 자극하였다. 48시간의 자극 후 세포를 수거하였다.

RNA 단리

총 RNA를 제조자의 권고에 따라서 TRIzol (Life Technologies, Gaithersburg, MD)로 단리하였다. RNA를 에탄올로 침전시키고, 0.1 mM EDTA에 재현탁시켰다. 분광광도법 측정에 의해 농도를 결정하고, 아가로스 겔 상에서 샘플을 러닝(running)하여 RNA의 완전성을 평가하였다.

노던 블랏팅

노던 블랏팅을 위해, 5 μg의 RNA를 크기 분리를 위해 1x MOPS에 용해된 6% 포름알데하이드를 포함하는 1% 아가로스 겔 상에서 러닝하였다. RNA를 모세관 블랏팅에 의해 Hybond-N 막 (Amersham Pharmacia Biotech, Little Chalfont, U.K.)으로 이동시키고, UV 조사에 의해 고정시켰다. 필터를 10 mL의 ULTRAhyb (Ambion, Austin, TX)에서 42℃에서 최소 30분 동안 예비-혼성화하고, P-표지된 프로브를 함유하는 ULTRAhyb를 추가로 5 mL 첨가한 후 42℃에서 밤새 혼성화하였다. 상기 막을 2x SSC (1x SSC = 150 mM NaCl/15 mM 나트륨 시트레이트, pH 7.0)/0.1% SDS 중에서 42℃에서 매번 5분 동안 2회 세정하고, 이어서 2x SSC/0.1% SDS 중에서 매번 15분 동안 2회 세정하고, 0.2x SSC/0.1% SDS 중에서 15분 동안 1회 세정하고, 42℃에서 0.1x SSC/0.1% SDS 중에서 15분 동안 1회 세정하였다. 블랏을 현상하고, 포스포르이미저(phosphorimager) (Fuji Imager Analyzer BAS-2500, 이미지 판독기 버전 1.4E, 이미지 게이지 버전 3.01 소프트웨어; Fuji, Stockholm, Sweden)로 정량화하였다. 18S 및 28S rRNA를 참조하여 mRNA의 크기를 결정하였고, 이들은 에티듐 브로마이드 염색에 의해 가시화되었다. 재하이브리드화 전 상기 막을 0.1% SDS에서 끓음(boiling)으로써 박리하였다.

하이브리드화를 위해 사용된 프로브는 랜덤 프라이머 DNA 라벨링 시스템 (Life Technologies)을 사용하여 [α-P]dCT로 방사선표지된 cDNA 단편이었다. NGAL, hCAP-18, hBD-2, 및 β-액틴에 대한 프로브는 하기 프라이머를 사용하여 케라틴생성세포의 cDNA로부터 증폭되었다: SLPI, 5'-ATGAAGTCCAGCGGCCTC-3' (서열식별번호: 1), 및 5'-AAGAGAAATAGGCTCGTTTATTT-3' (서열식별번호: 2); hBD-1, 5'-GCTCAGCCTCCAAAGGAGC-3' (서열식별번호: 3), 및 5'-AAAAGAATGCTTATAAAAAGTTCAT-3' (서열식별번호: 4); 및 hBD-3, 5'-GGAATCATAAACACATTACAGAA-3' (서열식별번호: 5), 및 5'-CGGGAATCATAAACACATTACAGAA-3' (서열식별번호: 6). hBD-4에 대한 프로브는 하기 프라이머를 사용하여 게놈 DNA로부터 증폭되었다: 5' GCAGCCCCAGCATTATGCA-3' (서열식별번호: 7) 및 5'-AAGCTACTGAGGTCCTACTTC-3' (서열식별번호: 8). PCR-증폭된 프로브를 플라스미드 내로 클로닝하고, DNA 서열분석으로 확인하였다. 라벨링을 위한 프로브는 적합한 제한 효소로 제한함으로써 플라스미드로부터 유리되었다. 소화물(digest)을 1% 아가로스 겔 상에서 러닝하고, 프로브를 라벨링 전 겔 추출로 정제하였다.

단백질의 정량화

인간 CAP-18 및 NGAL은 이전에 기재된 바와 같이 ELISA로 측정되었다. SLPI는 재조합 SLPI를 표준으로 사용하여 샌드위치 ELISA로 측정되었다.

1차 케라틴생성세포의 면역조직화학은 아래와 같이 수행되었다. 사이토스핀을 성장 인자로 자극 후 10% 포르말린에서 10분 동안 고정시켰고; 트립신화된 PBS로부터 사이토스핀을 제조하였고, 이어서 TBS로 세정하였다. 슬라이드를 NGAL 및 hCAP-18에 대한 토끼 다클론성 항체의 1/1000 희석물 및 hBD-3에 대한 토끼 다클론성 항체의 1/666 희석물과 함께 인큐베이션하였다. 상기 항체를 1% 젤라틴, 0.05% Tween 20 (Sigma-Aldrich), 및 0.01% 티메로살을 포함하는 TBS에서 희석하고, 슬라이드를 실온에서 24시간 동안 인큐베이션하였다. 0.05% Tween 20을 포함하는 TBS에서 3회 20분 세정 후, 슬라이드를 제1 항체와 동일한 완충액에 1/1000 희석된 알칼리성 포스파타제-접합된 염소 항-토끼 IgG (Pierce)와 함께 인큐베이션하고, 또 다른 24시간 동안 인큐베이션하고, 이어서 3회 20분 세정하였다. 색상은 Tris 완충액에서 패스트 레드 발색체(Fast Red chromogen) (Sigma-Aldrich)로 현상되고, 슬라이드를 Harris 헤마톡실린 (EM Science, Gibbstown, NJ)과 대비염색하였다.

실시예 1

풀베이트 분획의 추출 및 단리

본 실시예는 부식화 유기물로부터 풀베이트 분획을 추출 및 단리하는 방법을 나타낸다.

부식화 유기물 (HOM)은 토탄, 휴민, 열갈탄, 휴밀라이트(humilite), 갈탄, 강물, 호수 물, 늪 잔류물(swamp residue), 및 풍부한 유기 진흙의 침전물로부터 수득된다. 특히, 열갈탄이 풀베이트 분획에서 높다.

원료로서 열갈탄과 같은 유기 갈탄 공급원으로부터 휴메이트(humate)를 추출 및 정제하는 효율적인 방법이 본 명세서에 제공된다. 일반적으로 다양한 석탄 퇴적물에 상부퇴적물(overburden)로 나타난 채굴된 열갈탄이 제거되고, 43-50%의 수분 함량을 갖는 것이 취해지고, 가마에서 공기 건조되어 수분 수준을 15-20%로 감소시켜 원료로서 사용될 수 있다. 그 다음 제트 밀 분쇄기를 사용하여 8 mm 미만으로 분쇄하였다. 그 후 5 내지 30%의 분쇄된 열갈탄을 1 내지 5%의 수산화칼륨을 함유하는 용액 70 내지 95%과 혼합한다. 상기 내용물은 60-80℃의 온도 범위에서 대략 2 내지 6시간의 기간 동안 연속적인 교반으로 또는 필요에 따라, 물질이 현탁 상태가 되도록 반응할 수 있다. 요구된 공정 온도는 매립된 전기 코일 히터, 외부 증기 가열, 또는 용액 자체와 접촉하여 화염이 생성되지 않는 다른 열 생성 공급원에 의해 유지될 수 있다. 배지의 pH (7 내지 12)는 휴믹 졸(humic sol)의 바람직한 추출물을 수득하기 위해 공정 중에 계속해서 조정되어야 한다. 원료의 소화 기간(digestion period) 후, 용액은 균일하게 분산되도록 1 내지 2 시간 동안 진탕되어야 한다. 그 다음 고형물과 슬러지를 분리하기 위해 고정 칼럼(settling column)으로 이동시킨다. 일정 시간 후, 일반적으로 24 내지 48 시간 후, 맑은 갈색 내지 호박색 용액이 수득된다. 상기 용액을 최대 2-4%의 농도로 만들고, pH를 8 내지 10.5로 보정하였다. 상기 용액을 주 저장 탱크로 옮기며, 이때 잔여 미반응된 열갈탄 및 미네랄, 플러스 응집체 부분은 폐기된다.

추출된 액체를 쉘 및 튜브 증발기에서 추가로 농축시켜 약 150℃의 온도에서 약 10-15%의 농도를 얻는다. 농축된 용액을 100 내지 150℃에서 전기 가열된/증기 가열된 트레이-건조기로 옮긴다. 진공 분위기를 계속해서 유지하여 증기를 배기시켜 잔여 수분이 약 8-15%인 원하는 건조 생성물을 수득한다. 진공 분위기를 계속해서 유지하여 증기를 배기시켜 약 8-15%의 잔여 수분을 함유하는 원하는 건조 생성물을 수득한다. 수득된 생성물은 50 내지 70% 부식산 (HA)을 함유하는 흑색 광택을 띤 완전 수용성 플레이크이며, 부식산의 13 내지 18%는 풀빅산 (FA) 및 울믹산의 일부분이다. 이러한 건조 분말화 농축된 부식산은 다양한 분획으로의 추가 처리를 위해 저장된다. HA/FA 분말은 1 갤런의 탈이온수당 5 파운드의 HF/FA 농축물의 비로 탈이온수를 사용하여 용액으로 투입된다. 상기 졸을 75 내지 90℃로 가열하고, 시트르산 분말을 첨가하고, pH 4.7이 될 때까지 느리게 첨가한다. 조정된 4.7 pH 졸을 75 내지 90℃의 온도를 유지하면서 저속으로 1 내지 5시간 동안 교반시킨다. 선택된 혼합 및 반응 시간 후, 상기 졸을 변형된 전류 유도 칼럼 분리기로 옮기고, 정치시킨다. DC 전류를 제곱 미터당 2.4 내지 4.2 amp의 속도로 상기 졸에 인가하여 부식산 및 풀빅산 분획의 분리를 돕는다. 24 내지 72시간 후, 칼럼 바닥의 무거운 암갈색 내지 흑색 물질 (주로 울믹산(ulmic acid) 함유) 및 부식산 농축물인 암갈색 내지 중간 갈색 졸의 제2 층, 이어서 주로 풀빅산으로 구성된 밝은 갈색 내지 황색 층의 최상층을 보여주는 분리 층이 나타날 것이다. 이들 개별 층은 추출되고, 추가의 사용 및/또는 처리를 위해 적절한 컨테이너에 저장된다.

기본 추출된 풀빅산(fulvic acid)은 평균 약 50 내지 약 1200 Da의 분자량을 가지며, 풀빅산의 일반적인 화학 조성물은 수평균 분자량 (증기압 삼투압 측정법에 의해 측정됨)이 951인 화학적으로 및 생물학적으로 비교적 안정적인 고분자전해질로서이며, 1g당 9.1 mequiv COOH, 3.3 mequiv 페놀계 OH, 3.6 mequiv 알코올성 OH, 및 3.1 mequiv C=O를 함유한다. 분석 결과 (%) 50.90, C; 3.35, H; 0.75, N; 0.25, S; 및 44.75, O를 나타내며, 이 데이터로부터 계산된 분자식은 C₁₂H₁₆- (COOH),(OH),(CO)이다.

추출된 풀빅산 농축물 (EFAC)은 추가로 처리되고, XAD-8 칼럼 (시간당 15 베드 용적의 유량에서 1 그램의 초기 샘플 건조 중량당 수지 0.15 mL)에 "FA 추출물 1"로 지정된 상청액을 통과시킴으로써 정제된다. 용리액을 폐기하고; 흡착된 풀빅산을 함유하는 XAD-8 칼럼을 0.65 칼럼 용적의 증류된 H₂O로 린스한다. XAD-8 칼럼을 1 칼럼 용적의 0.1　M　NaOH, 이어서 2 내지 3 칼럼 용적의 증류된 H₂O로 역 용출시킨다. 6　M　HCl을 사용하여 상기 용액을 pH 1.0으로 즉시 산성화시킨다. 농축된 불화수소산 (HF)을 0.3　M　HF의 최종 농도로 첨가한다. 용액의 용적은 용액 중 풀빅산을 유지하기에 충분해야 한다. 이후 "FA 추출물 2"로 지정된 상청액은 XAD-8 칼럼 (1 그램의 초기 샘플 건조 중량당 1.0 mL의 수지)을 통과한다. 상기 "FA 추출물 1"에 대해 수행된 바와 같이 역 용출 및 산성화 단계를 반복한다. 각각의 풀빅산 추출물로부터의 최종 용출액을 합하고, 유리 칼럼 (칼럼 용적은 샘플 용적의 5분의 1이어야 함) 내 XAD-8 수지를 통과한다. 칼럼을 0.65 칼럼 용적의 증류된 H₂O로 린스하고, 이어서 1 칼럼 용적의 0.1　M　NaOH, 그 다음 2 칼럼 용적의 증류된 H₂O로 역 용출한다. 용출액은 용액 내 Na 이온의 3배 몰을 사용하여 H⁺-포화된 양이온교환수지 (Bio-Rad AG-MP-5 (Bio-Rad, Richmond, CA))를 통과시킨다. 수득한 용출액을 냉동건조시켜 H⁺-포화된 풀빅산을 회수한다.

수지 처리를 사용하는 정제의 대안으로, 증류된 H₂O에 대해 완전한 투석이 사용될 수 있다. 상당한 농도의 다가 양이온 예컨대 Al³⁺이 존재한다면, 이들은 용액이 중화됨에 따라 불용성 금속-휴메이트 복합체를 형성할 수 있다. 따라서, 투석은 최종적으로 증류된 H₂O에 대해 투석되기 전에, 임의의 다가 양이온의 농도가 상당히 감소될 때까지 희석된 HCl에 대해 초기에 수행되어야 한다. 기술적으로, 이런 식으로 수득된 분획은 상당한 양의 미결합된 다당류를 함유할 가능성이 있기 때문에, 풀빅산보다는 풀빅 분획(fulvic fraction)으로 언급되어야 한다.

공지된 중요한 풀빅 분자량을 선택하기 위해, 크기 분율에 따른 풀빅산의 분자 조성의 차이는 푸리에 변환 이온 사이클로트론 공명 (Fourier transform ion cyclotron resonance; FTICR) 질량 분광분석법을 통해 온라인으로 크기-배제 크로마토그래피에 의해 검출되었다.

크기-배제 크로마토그래피를 전기분무 이온화 푸리에 변환 이온 사이클로트론 공명 질량 분광분석법 (SEC-FTICR-MS)에 커플링하여 풀빅산 단리물을 3개의 크기 분획으로 분리하고, 이들 분획 중 풀빅산의 원소 조성을 선택하였다. 200-700 Da의 질량 범위에서 약 3000 이온의 분자식이 도출되었으며, 그 중 대부분은 3개의 분획 모두에서 발생하고, 동일한 원소 조성 시스템을 따른다. 사중극자-비과시간-MS (quadrupole-time-of-flight-MS; Q-TOF-MS)에 커플링된 SEC에 의해 생성된 생성 이온 스펙트럼은, 3개의 모든 분획의 이온이 폴리카복실레이트이며, 임의의 다른 작용성 모이어티는 거의 없음을 확인하였다. 그러나, SEC-FTICR-MS 결과, 고분자량 (HMW) 분획으로부터 생성된 이온은 저분자량 (LMW) 분획과 비교하여 카복실기가 풍부하고, 더 방향족임이 드러났다. 이러한 발견은, HMW 풀빅산이 LMW 풀빅산으로부터 형성된다는 생각을 뒷받침한다. LMW로부터 HMW 분획으로 이온의 상대적 빈도의 변화는 상이한 상호작용 기전과 일치하며: HMW 풀빅산은 수소 결합 또는 다가 양이온을 통한 카복실레이트 그룹의 정전기적 상호작용에 의해 또는 그것의 탄소 골격의 소수성 상호작용에 의해 함께 보유되거나, 또는 서로 또는 (지방족) 알콜에 공유 결합된 LMW 풀빅산으로 구성되는 응집체일 수 있다. 이러한 발견에 기초하여, 본 발명자들은, 강한 양이온 교환이 바람직하고, 미네랄 및 금속 기질의 킬레이트화가 세포 성장 자극의 질산화(nitrification)를 위해 바람직한 바이오 자극 적용에서는 80 내지 350 Da의 중량을 갖는 풀빅 분획이 더 바람직하다는 것을 결정하였다. 일부 구현예에서, M-007 분자는 약 80 내지 700 Da 범위의 MW를 갖는다. 일부 구현예에서, M-007의 분자량은 약 309 Da이다.

실시예 2

풀베이트 분획의 효능

본 실시예는 분획 M-007이 특히 생물활성이고 효과가 있음을 입증한다.

상기 분획을 시험하여 효능을 결정하였고, M-007은 작고, 양이온성이고, 활성이 높고, 메신저, 수송, 및 전달 기전에 효과적이기 때문에 세포 재생을 위한 치료제로서 특히 유용하다는 것이 밝혀졌다.

실시예 3

M-007 및 성장 인자의 조합

본 실시예는 M-007을 다양한 성장 인자와 조합한 치료 효과를 보여준다.

섬유아세포 성장 인자-결합 단백질 (fibroblast growth factor-binding protein; FGF-BP) 1은 섬유아세포 성장 인자 (FGF) 1 및 2에 결합할 수 있는 분비 단백질이다. 이들 FGF는 전형적으로 세포외 기질의 헤파린 설페이트 프로테오글리칸 상에 불활성 형태로 저장되며, FGF-BP1은 국소 저장된 FGF를 동원할 수 있고, 성장 인자를 그것의 티로신 키나제 수용체에 제공하는 차페론 분자로서 기능하는 것으로 제안되었다. FGF-BP1은 편평상피 세포, 결장, 및 유방암에서 상향조절되며, 상피 세포의 악성 진행 동안 혈관신생 스위치로서 작용할 수 있다. 재조합 인간 FGF-BP1 단백질과의 FGF-1 및 -2 상호작용이 조사되었고, 신호 전달, 세포 증식, 및 혈관신생에 대한 효과가 확인되었다. 재조합 FGF-BP1은 FGF-2에 특이적으로 결합하며, 결합은 FGF-1, 헤파린 설페이트, 및 헤파린류에 의해 억제된다. 게다가, FGF-BP1은 NIH-3T3 섬유아세포의 FGF-1- 및 FGF-2-의존적 증식, 및 FGF-2-유도된 세포외 신호-조절된 키나제 2 인산화를 증진시킨다. 마지막으로, 닭 장뇨막 혈관신생 검정에서, FGF-BP1은 외인성으로 첨가된 FGF-2와 상승 작용한다. 본 발명자들은, FGF-BP1이 FGF-1 및 FGF-2에 직접적으로 결합하고, 이들 성장 인자의 생물학적 활성을 긍정적으로 조절한다고 결론 지었다. 이들 발견을 베이스 라인(base line)으로 사용하여, 본 발명자들은 이들 단백질을 풀베이트 및 풀베이트 분획, 더 구체적으로 하기 포뮬러리에서 309 Da의 분자량을 갖는 M-007 분획, 및 지시된 바와 같이, 처리된 인간 피부 세포 배양물과 함께 주입하였다.

[표 4]

식 기호 설명표

001= 5% 염수 용액 및 DI 수에 분산된 50% FGF-1

002= 5% 염수 용액 및 DI 수에 분산된 50% FGF-2

003= DI 수 중의 25 중량% M-007-1

004= DI 수 중의 35 중량% M-007-2

005= DI 수 중의 fl. vol.으로 25% FGF-1 + 25% M-007-1

006= DI 수 중의 fl. vol.으로 25% FGF-2 + 25% M-007-2

007= DI 수 중의 fl. vol.으로 20% FGF-1 + 30% M-007-1

케라틴생성세포는 상처 치유에 관련된 성장 인자 (IGF-I, TGF-α, TGF-β1, 및 bFGF) 뿐만 아니라 대표적인 전-염증 사이토카인 (IL-1β, IL-6, 및 TNF-α), 및 M-007 풀베이트로 자극되었다. 배지에 이미 존재하는 성장 인자로부터의 간섭을 피하기 위해, 세포를 인슐린 없이 (인슐린은 IGF-I 수용체에 대해 낮은 친화도로 결합함), 0.15 ng/mL의 EGF만을 갖는 무혈청 배지에서 성장시켰다. 케라틴생성세포가 항미생물 펩타이드를 발현시키기 위해 특정 수준의 분화에 도달해야 한다는 것이 앞서 주지되었다. 1차 케라틴생성세포가 합류점까지 성장한 후 24시간 뒤에 자극되는 모델이 선택되었으며, 그 이유는 이것이 성장 인자로의 자극 후 항미생물 펩타이드/폴리펩타이드의 일관된 발현을 제공하며, M-007 처리된 케라틴생성세포와 직접적으로 비교되었기 때문이다.

카텔리시딘 hCAP-18은 단백질 수준 (ELISA) 및 mRNA 수준 모두에서 IGF-I에 의해 상향조절되었다. 배지 중의 hCAP-18의 축적을 입증하기 위해 장시간의 유도 과정이 선택되었다. 자극된 케라틴생성세포에서 hCAP-18의 존재는, 자극된 및 비자극된 케라틴생성세포의 항-hCAP-18 항체를 사용하여 웨스턴 블랏 및 면역염색에 의해 추가로 확인되었다.

실시예 4

M-007 및 bFGF의 조합

이 실시예는 인간 표피 세포 배양물에서 조직 치유를 촉진시키는 염기성 섬유아세포 성장 인자 (bFGF)의 능력을 상세히 설명한다.

CBA 표피 배양물에서 4-mm 점막 결함을 수술로 만들었다. bFGF, M-007, 및 대조군 염수의 제형 Sol.을 스크래치 직후 상처 결함의 가장자리를 따라 주입하였다. 대조군 그룹은 포스페이트-완충 식염수 비히클만을 투여받았다.

bFGF 및 bFGF 플러스 M-007 풀베이트는 과립 조직 형성 및 재상피화를 상당히 촉진시켰다. 조직학적 분석으로부터, bFGF 및 M-007 처리된 샘플 모두는 상대적으로 더 빠른 콜라겐 성숙을 나타냈다. 스크래치/상처 후 3일부터, 섬유아세포 성장 인자 수용체 1 (FGFR1)-양성 세포가 bFGF-M-007 처리된 샘플 모두에서 재상피화 점막의 과립 및 가시 세포 층에서 나타났으며, 반면에 온전한 경구 점막에서는 거의 관측되지 않았다. 5일까지, 심지어 대조군 그룹에서도 FGFR1-양성 세포가 각질층 아래에서 관찰되었다. 그러나, bFGF-처리된 그룹에서 FGFR1-양성 세포의 수 및 강도는 대조군 그룹보다 더 컸으며, bFGF 플러스 M-007 처리된 그룹은 bFGF 단독보다 75% 증가되었다. 증식 세포 핵 항원에 대한 면역염색 결과는, bFGF 플러스 M-007 풀베이트가 재생 상피에서 기저 세포 층의 세포 증식을 자극하였음을 보여주었다. bFGF 및 M-007의 더 높은 용량에서, 증식 세포 핵 항원-양성 세포가 점막하 결합 조직에서 또한 관측되었다. 기준선 선별 시험 결과는 도 2에 나타나 있다. 도 2는 상처 후 상처 봉합을 위한 일수를 나타낸다. 각각의 샘플은 2중으로 반복되었고, 따라서 도 2는 각각의 샘플의 평균을 나타낸다. P1-2는 대조군 플레이트 1 및 2이고, 외부 처리가 없는 표피 세포 배양이다. P3-4는 포스페이트 완충 식염수만으로 처리된 표피 세포 배양이다. P5-6은 bFGF로 처리된 표피 세포 배양이다. P7-8은 bFGF sol. No. 00376로 처리된 표피 세포 배양이다. P9-10은 M-007 풀베이트 sol. No. 00321A로 처리된 표피 세포 배양이다. P11-12는 M-007 풀베이트 sol. No. 00321B로 처리된 표피 세포 배양이다. P13-14는 bFGF No. 00373 + M-007 풀베이트 sol. No. 00321A @ 70/30 비로 처리된 표피 세포 배양이다. P15-16은 bFGF No. 00373 + M-007 풀베이트 sol. No. 00321A @ 50/50 비로 처리된 표피 세포 배양이다. P17-18은 bFGF No. 00373 + M-007 풀베이트 sol. No. 00321A @ 30/70 비로 처리된 표피 세포 배양이다. P19-20은 bFGF sol No. 00379 + M-007 풀베이트 sol. No. 00321A @ 70/30 비로 처리된 표피 세포 배양이다. P21-22는 bFGF sol. No. 00376 + M-007 풀베이트 sol. No. 00321A @ 50/50 비로 처리된 표피 세포 배양이다. P23-24는 bFGF sol. No. 00376 + M-007 풀베이트 sol. No. 00321A @ 30/70 비로 처리된 표피 세포 배양이다.

성장 인자의 최적의 전달을 위해서는 종종 복잡하게 조작된 생체적합물질 매트릭스를 필요로 하며, 이는 임상적 번역에 대한 규제 문제에 직면할 수 있다. 전달 시스템을 간소화하고, 전략을 더 적합하게 하기 위해, 성장 인자는 임상적으로 승인된 생체적합물질 또는 전달 부위에 존재하는 내인성 ECM과 최적으로 기능하도록 조작될 수 있다. 도 2는 M-007 풀베이트가 선택된 성장 인자의 전달, 반감기, 및 효과적인 커뮤니케이션을 75 내지 85%만큼 개선시킬 수 있음을 보여준다. 또한, 상처의 천연 치유 기전은 도 2의 곡선 프로파일에서 표시된 바와 같이 촉진된다. 이들 개선된 서열과 관련된 기전이 완전히 이해되지는 않았지만, 본원에서 시험된 모든 농도의 풀베이트 분자 M-007이 치유 사이클을 개선시키고, 상처(scaring)를 감소시킨다는 것은 의심의 여지가 없다.

도 3은 B) bFGF sol. No. 00376 + M-007 sol. No. 00321A로 처리된, 처리된 표피 세포 배양판과 비교된 A) 미처리된 대조군 그룹에 대한 표피 세포 배양판을 보여준다.

실시예 5

M-007 및 인터류킨의 조합

이 실시예는 M-007을 인터류킨과 조합한 치료 효과를 보여준다.

이 연구에 사용된 주요 항-염증성 사이토카인은 인터류킨 (IL)-1 수용체 길항제, IL-4, IL-6, IL-10, IL-11, 및 IL-13을 포함한다. IL-1, 종양 괴사 인자-α, 및 IL-18에 대한 특정 사이토카인 수용체는 또한 전-염증 사이토카인 억제제로서 기능한다.

선별 시험 결과, 사이토카인의 수준이 24, 및 48 시간에 걸쳐 시험 세포 플레이트 상의 혈장에서만 적당히 증가하였음을 보여주었다. 상처 유체 중의 사이토카인 수준은 몇 배 더 높았다. 상처 유체 중의 IL-6은 세포 플레이트 제조 후 7시간에 피크에 도달하였고 (271 +/- 135.8 pg/mL); IL-8은 4시간 후 (11 +/- 9.4 ng/mL); sTNFR-1은 수술후 2일째 (11.1 +/- 3.4 ng/mL)에 피크에 도달하였다. TGF-베타는 수술후 1일째 (15.2 +/- 8.6 ng/mL) 및 2일째 (11.7 +/- 5.0 ng/mL)에 감소하였다. 이러한 선별 시험을 토대로, 사이토카인 IL-6이 M-007 풀베이트와 조합하도록 선택되었다.

실시예 6

인간 β 데펜신에 대한 M-007의 효과

이 실시예는 M-007이 hBD를 상향조절한다는 것을 입증한다.

데펜신 hBD-1은 다양한 상피에서 구성적으로 발현된다. 그러나, 케라틴생성세포에서 hBD-1의 기저 구성적 발현은 하우스키핑 유전자 β-액틴과 비교하여 시간 경과에 따라 증가한다 (β-액틴과 비교하여 IGF-1 자극된 케라틴생성세포에 대해 24시간에 3배 증가가 발견되었고, 48시간에 7배 증가가 발견되었음). 그러나, 발현은 IL-6으로의 24시간 및 48시간 자극 후 mRNA 수준에서 대조군에 비해 약 50% 상향조절되었고, M-007 처리 그룹에 대해서는 85 내지 90% 상향조절되었다.

또 다른 데펜신, hBD-2는 케라틴생성세포 내 IL-1에 의해 케라틴생성세포에서 상향조절되는 것으로 밝혀졌다. 다른 사이토카인/성장 인자 중 어느 것도 hBD-2의 발현을 유도하지 못했다. hBD-3에 대한 mRNA는 비자극된 케라틴생성세포에서 검출되지 않았지만, TGF-α에 의해 상당히 유도되었다. IGF-I이 hBD-3의 발현을 유도하지는 않았지만, M-007 풀베이트 처리는 8-배 더 높은 mRNA 수준을 나타냈다. 이러한 결과는 TGF-α 단독으로의 자극과 비교하여 48시간의 자극 후 IGF-I, M-007 풀베이트 및 TGF-α의 조합에 대한 반응에서 발견되었다. 이것은 IGF-I 및 M-007 풀베이트가 EGF 수용체의 트랜스-활성화 및　트랜스-조절을 유발하여 EGF 수용체에 결합하는 TGF-α의 효과를 잠재적으로 증가시킨다는 발견과 일치한다. 전-염증 사이토카인 또는 다른 성장 인자 중 어느 것도 hBD-3을 유도하지 못했다. 면역블랏에 의해, hBD-3은 TGF-α, M-007 풀베이트, 및 IGF-I/TGF-α로 자극된 케라틴생성세포로부터의 배지에서 검출되었지만, 비자극된 세포로부터의 배지에서는 검출되지 않았고, 따라서 단백질 수준에서의 hBD-3의 유도를 입증하였다. hBD-3에 대한 항체를 갖는 1차 케라틴생성세포의 면역염색(Immunostain)에 의해, hBD-3 펩타이드가 M-007 풀빅 분자에 의해 더 큰 정도로, 그리고 TGF-α 단독보다 IGF-I/TGF-α에 의해 더 적은 정도로 유도되었엄을 확인하였다.

실시예 7

M-007과 생물활성 단편화 펩타이드의 조합

이 실시예는 세포 재생을 위한 M-007과 생물활성 단편화 펩타이드의 조합의 효능을 입증한다.

2개의 항미생물 펩타이드 (티게리닌-RC1: RVCSAIPLPICH (서열식별번호: 9); 티게리닌-RC2: RVCMAIPLPLCH (서열식별번호: 10))는 페제르바르야 칸크리보라(Fejervarya cancrivora)의 피부 분비물로부터 이전에 확인되었다. 이들은 상처-치유 활성을 발휘하는 것으로 밝혀졌다. 여기서, 잠재적인 상처-치유 능력을 갖는 후보를 선별하기 위해 티게리닌을 기반으로 하는 몇 개의 펩타이드를 합성한다. 이들 펩타이드 중에서도, M-007 풀베이트를 함유하는 작은 펩타이드가 피부 상처의 강력한 치유자(healer)인 것으로 밝혀졌다. M-007 풀베이트 단리된 펩타이드 (c [WCKPKPKPRCH-NH₂] (서열식별번호: 11))를 추가로 합성하고, HPLC 및 질량 분광분석법에 의해 분석하여 순도를 확인하였다. M-007 풀베이트 펩타이드의 분자량은 MALDI-TOF 질량 스펙트럼 분석에 의해 결정될 때 1209.20 Da이었고, 이는 펩타이드가 환형 형태였음을 나타냈다. M-007 함유된 펩타이드는 표준 염수 용액 중에서 다양한 농도로 피부 세포 플레이트에서 평가되었고, 나중에 투약량 선택 후 M-007 풀빅 혈청 내로 배합되었다.

실시예 8

모델 진피 상처에 대한 M-007의 영향

이 실시예는 상처 치유에 대한 M-007의 효능을 입증한다.

상처-치유는 주요 건강 부담, 예컨대 당뇨병-유도된 피부 궤양 및 작열(burning)을 나타낸다. M-007은 전체 두께 진피 상처의 쥣과 모델에서 강한 상처 치유-촉진 활성을 나타낸다. M-007 풀베이트는 (1) 염증 반응 단계에서 상처 부위로 대식세포의 동원 유도; (2) 재상피화 및 육아조직 형성을 초래하는 케라틴생성세포 및 섬유아세포 둘 모두에서 이동 및 증식 촉진; (3) 쥣과 대식세포에서 형질전환 TGF-β1 및 인터류킨 6 (IL-6)의 방출의 촉진, 및 미토겐-활성화된 단백질 키나제 (MAPK) 신호전달 경로의 활성화에 의한 조직 리모델링 단계를 포함하는, 3 단계의 상처 치유 진행에 상당한 영향을 끼쳤다. 그것의 용이한 생산, 저장 및 운반 및 내인성 상처 치유 제제 (TGF-β)의 생산을 촉진시키는 기능을 감안하면, M-007 풀베이트는 신규한 상처-치유 제제의 개발을 위한 생체적합물질 또는 템플레이트로 작용한다.

실시예 9

동물 항-염증 효과

이 실시예는 랫트에서 M-007의 안전성 및 항-염증 및 상처-치유 특징을 입증한다.

M-007 풀베이트 (≥100 mg/kg p.o.)는 랫트에서 카라기난-유도된 발의 부종을 효과적으로 감소시켰으며, 이것은 10 mg/kg p.o. 인도메타신에 필적하였다. M-007 풀베이트의 국소 적용은 pH 4.98의 멸균된 바셀린 연고에서 3.75% 활성 생성물을 함유하도록 제형화하였고, 유리하게는 스타필로코쿠스 아우레스(Staphylococcus aureus)로 감염된 절제된 상처의 치유를 촉진시키는데 있어서 통상적으로 사용된 후시딘산 크림 (10 mg/g)과 비교하였다. M-007 풀베이트 (100 mg/kg p.o.)로의 6-일 급성 및 3-개월 만성 치료 동안 독성의 징후는 관측되지 않았다. UEA 크림으로 제형화되고, 1일 및 7-38일에 체중 1g당 400 mg으로 마우스의 오른쪽 귀에 도포된 M-007 풀베이트의 국소 도포는 유해 사례를 일으키지 않았다. M-007 풀베이트가 수정 3일 전에서 임신 14일까지 임신한 암컷 마우스에게 100 mg/kg p.o.로 투여되는 기형발생성 연구에서도 독성의 징후가 관측되지 않았다. 결론적으로, M-007 풀베이트는 항-염증 및 상처-치유 특성을 갖는 안전한 화합물이며, 유사한 병태를 앓고 있는 환자의 치료에 대한 추가의 평가를 받을 가치가 있다.

실시예 10

M-007은 세포 증식을 촉진시킴

이 실시예는 M-007 풀베이트가 HaCat 세포 증식 및 이동을 촉진시킨다는 것을 입증한다.

케라틴생성세포, 섬유아세포 또는 대식세포 (2×10⁴　세포/mL)를 96-웰 플레이트의 웰들에서 따로 따로 배양하고, 세포를 다양한 농도의 M-007 풀베이트 (2.5, 5, 10, 20 μg/mL) 또는 멸균된 H₂O 단독과 24시간 동안 인큐베이션하였다. 5 mg/mL 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드 (MTT)와 4시간 동안 인큐베이션 후, 흡광도를 결정하였다. HaCat 케라틴생성세포 및 인간 피부 섬유아세포 (HSF) 둘 모두는, M-007 풀베이트로 처리될 때, 농도 의존 방식으로 증가하였다. 값은 3번의 독립적인 실험의 평균 ± SE이다. M-007 풀베이트-자극된 및 비-자극된 세포 사이에 비교된 것으로서 *P<0.05, **P<0.01.

실시예 11

상처 치유 스크래치 검정

이 실시예는 M-007이 시험관내 상처 치유 검정에서 상처를 치유하는데 효과적임을 입증한다.

HaCat 케라틴생성세포 세포 (1x10⁶)를 6-웰 플레이트에 씨딩하고, 24시간 동안의 혈청 기아(serum starvation) 전에 밤새 합류점까지 단일층으로 배양하였다. 이후 단일층을 황색 200 μl 피펫 팁으로 스크래치하여 대략 1-mm-폭의 상처 부위를 만들고, PBS로 2회 세정하여 부유 세포를 제거하였다. 라인 스크래치 후, 2 mL DMEM을 모든 웰에 첨가하여 케라틴생성세포 이동에 대한 M-007 풀베이트의 효과를 관측하였다. 세포를 세포 증식의 억제를 위해 미토마이신 C (5 μg/mL)의 존재 하에 다양한 기간 (0시간 내지 36시간) 동안 M-007 (20 μg/mL)과 인큐베이션하였다.

상처난 조직은 손상된 부위를 치유하기 위해 복잡하고 구조화된 일련의 사건을 개시한다. 이러한 사건은 혈관신생 인자에 의한 혈관형성 증가, 세포 증식 및 세포외 기질 침착 증가, 및 괴사 조직을 파괴하는 과정의 일부로서 염증성 면역 세포에 의한 침윤을 포함할 수 있다. 상처 치유 과정은 세포가 상처를 향해 분극화되고, 돌출을 개시하고, 이동되고, 상처 부위를 봉합할 때 개시된다. 이러한 과정은 개별 세포 뿐만 아니라 전체 조직 복합체의 행동을 반영한다. 상처 치유 검정은 세포 분극화, 조직 매트릭스 리모델링을 연구하거나, 또는 상이한 세포의 세포 증식 및 이동률 및 배양 조건을 평가하기 위해 수년간 연구자에 의해 이용되었다. 상처 치유 검정은 Rho 계열 GTPases의 역할, 미세소관 및 골지체 배향, 세포 이동에서 p53의 역할, 뿐만 아니라 다른 생리 과정을 통해 세포 극성 및 액틴 세포골격 구조 조절을 연구하기 위해 사용되었다. 이러한 검정은 전형적으로 융합성 세포 단일층을 배양하고, 그 다음 단일층을 통과하는 라인을 스크래칭함으로써 세포 그룹을 옮겨 놓거나 파괴하는 것을 포함한다. 그 다음 이러한 "상처"에 의해 생성된 개방 갭은 세포가 손상된 부위로 이동하여 이를 채움에 따라 경시적으로 현미경으로 검사된다.

이러한 "치유" 효과는 세포 유형, 상태, 및 "상처난" 부위의 표면적에 따라 몇 시간에서 며칠이 걸릴 수 있다. 이러한 "스크래치 상처" 검정의 약점은 한정된 상처 표면적, 또는 세포 간의 갭이 없다는 것이다. 대부분의 이러한 상처는 크기 및 폭이 다양하여 일관된 결과를 얻지 못하게 하고, 웰들마다 차이가 생긴다. 또한, "스크래치 상처" 검정은 종종 상처의 가장자리에 있는 세포를 손상시켜 상처 부위로의 세포 이동 및 치유를 막을 수 있다. 이러한 상황은 본 명세서에서, 특정 두께의 불활성 삽입물이 스크래치/상처 부위에 삽입된 후 한정된 상처 영역 또는 갭을 생성하는 자동 전분 스타일러스(automatic starch stylus)를 개발함으로써 극복된다. 이 방법은 도 4 및 도 5에서 묘사된다. 세포는 삽입물 주위에 단일층을 형성할 때까지 배양된다. 삽입물을 제거하여 세포 간에 정확한 0.9 mm 개방 "상처 영역"을 남긴다. 이 시점에서 세포를 처리하고, 상처 영역으로의 이동 및 증식에 대해 모니터링할 수 있다. 이러한 사건의 진행은 특정 시점에 고정된 샘플을 이미지화함으로써 또는 시간 경과 현미경검사(time-lapse microscopy)에 의해 측정될 수 있다. 도 7에서 나타낸 바와 같이, 이동성 세포는 돌출을 확장시킬 수 있고 궁극적으로 상처 영역을 침범하고 봉합할 수 있다. 세포 증식 및 이동률은 매뉴얼 고정 및 현미경적 이미지화를 사용하여 결정될 수 있다. 필요에 따라 특정 시점에서 세포를 중지시키기 위해 고정액이 제공된다. 빛 및 형광 현미경검사로 결과를 관찰하기 위해 세포 염색 및 DAPI 염색이 또한 사용된다.

CytoSelect™ 상처 치유 삽입물을 갖는 24-웰 플레이트를 실온에서 10분 동안 가온되도록 하였다. 멸균된 겸자를 사용하여 원하는 수의 삽입물이 플레이트 웰들에서 배향되고, "상처 영역"은 동일한 방향으로 정렬된다. 삽입물은 플레이트 웰의 바닥과 잘 닿아 있다. 모든 샘플은 삼중으로 실행된다.

10% 우태 혈청 (FBS)을 함유하는 배지 중의 0.5-1.0 x 10⁶ 세포/mL를 함유하는 세포 현탁액. 여기에 삽입물의 상단에 있는 개방 말단을 통해 피펫 팁을 조심스럽게 삽입하여 각 웰에 500 μL의 세포 현탁액을 첨가한다. 최적의 세포 분산을 위해, 본 발명자들은 삽입물의 상단에 있는 개방 말단의 양쪽에 250 μL의 세포 현탁액을 첨가한다. 세포를 세포 배양 인큐베이터에서 밤새 또는 단일층이 형성될 때까지 인큐베이션한다. 삽입물을 웰로부터 조심스럽게 제거하여 상처 치유 검정을 개시한다. 멸균된 겸자를 사용하여 플레이트 웰로부터 삽입물을 집어 들어올린다. 웰들을 서서히 흡인하고, 배지를 폐기한다. 웰들을 배지로 세정하여 죽은 세포 및 잔해를 제거한다. 그 다음 배지를 웰들에 첨가하여 세포를 수화된 상태로 유지한다. 그 다음 웰들을 광학 현미경으로 시각화한다. 웰들이 잔해 또는 미부착된 세포를 여전히 갖는다면, 세정을 반복한다. 세정이 완료되면, 세포 배양 및 상처 치유 과정을 계속하기 위해 FBS 및/또는 화합물을 갖는 배지를 첨가한다. 세포 이동을 억제 또는 자극하는 제제가 웰들에 직접 첨가될 수 있다. 세포를 세포 배양 인큐베이터에 넣는다. 최상의 결과를 위해, 레티클 마이크로미터 측정이 상처의 봉합 또는 "치유"를 모니터링하기 위해 한정된 표면적을 생성하는 데 사용된다. 상처 영역의 중심이 표적화되고, 스케일 사이트(scale sight)에 표시된다. 한정된 표면적은 도 6에서 나타낸 바와 같이, 상처 영역의 폭 (0.9 mm)에 길이를 곱하여 생성된다.

상처의 봉합 퍼센트 결과를 계산하기 위해, 한정된 상처 부위의 표면적을 결정한다 (도 6 참조). 총 표면적 = 0.9 mm x 길이. 다음으로, 상처 부위에서 이동된 세포의 표면적을 결정한다. 이동된 세포 표면적 = 세포 이동 길이 (mm) x 2 x 길이. 마지막으로, 봉합 퍼센트 (%) = 이동된 세포 표면적/총 표면적 x 100. 이동률은 한정된 상처 부위로 세포의 이동률을 측정함으로써 결정된다. 따라서, 이동률 = 세포 이동 길이 (nm)/이동 시간 (hr). 도 8은 CytoSelect™ 24-웰 상처 치유 검정 키트의 전형적인 결과를 입증한다.

상처난 세포 단일층의 이미지는 스크래치 상처 후 0, 24, 및 36시간에 현미경(Olympus, Tokyo, Japan)을 사용하여 촬영하였다. 세포 이동 활성은 이미지 J 소프트웨어 (National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA)를 사용하여, 난절법(scarification)의 치유율로 명명된, 스크래치 직후 무세포 영역의 총 면적에 대한 갭의 백분율로 표현되었다. 난절법의 치유율 (%)에 대한 식 = (0 시간의 갭 폭 - 일시적 갭 폭)/0 시간의 갭 폭 x 100%. 각각의 플레이트에 대해, 6개의 무작위로 선택된 이미지가 획득되었다. 모든 시험은 독립적으로 3중으로 수행되었다. 값은 3번의 독립적인 실험의 평균 ± SE이다. 값은 이전에 기재된 바와 같이, 시간 (일)에 대한 상체 봉합 퍼센트로 결정된다.

피부 상처의 치유 동안, 케라틴생성세포 이동은 중요하다. 선구 케라틴생성세포는 조기에 상처 부위로 이동하고, 네오-상피성 혀(neo-epithelial tongue)를 형성하여, 결과적으로, 적절하고 시기적절한 상처 수선에 도움이 되도록 상처 절개부를 커버한다. 케라틴생성세포 이동에 대한 M-007 풀베이트의 효과를 조사하기 위해 시험관내　세포 스크래치 검정를 수행하였다. 케라틴생성세포 이동률은 0 내지 36시간 동안 M-007 풀베이트 처리로 상처 영역을 침입하는 단일층 세포의 효율에 기초하였다. M-007 풀베이트 처리는 상처 부위로 케라틴생성세포의 이동률을 상당히 증가시켰다. 기대된 대로, 전-상처 영역은 비히클 대조군보다 더 좁게 보였으며, 24시간 동안 M-007 풀베이트 처리 후 상당히 더 큰 무결함 부위(denuded area)를 나타냈다. 36시간 동안의 처리 후, M-007 풀베이트-처리된 상처는 거의 완전히 봉합되었으며, 반면에 대조군은 넓은 갭을 유지하였다. 난절법의 치유율은 이미지 비교에 의해 계산되었다.

실시예 12

사이토카인 분비에 대한 M-007의 영향

이 실시예는 쥣과 세포주에서 사이토카인 배출에 대한 M-007 풀베이트의 효과를 입증한다.

많은 사이토카인, 예컨대 TGF-β1, IL-1β, IL-6 및 TNF-α는 상처 치유에서의 그것의 중요한 역할 때문에 최근 연구에서 특히 주목 받았다. 쥣과 대식세포 세포주 RAW264.7에서 사이토카인 분비에 대한 M-007 풀베이트의 효과는 ELISA를 사용하여 시험되었다. TGF-β1 생산은 대조군과 비교하여 M-007 풀베이트-자극된 상청액에서 상당히 증가하였다. 상청액 중의 TGF-β1 농도는 16시간 동안 2.5, 5, 10, 및 20 μg/mL의 M-007 풀베이트와 인큐베이션한 후 607.69에서 718.96 pg/mL (18.31%), 836.92 pg/mL (37.72%) 및 951.92 pg/mL (56.65%)로 증가하였다. IL-6 분비도 M-007 풀베이트-처리된 세포에서 농도 의존 방식으로 증가하였다. 51 pg/mL의 기준선 수준과 비교하여, 2.5, 5, 10, 및 20 μg/mL M-007 풀베이트는 각각 58, 60, 73 및 81 pg/mL의 IL-6 분비를 유도하였다. M-007 풀베이트는 또한 wt. vol. M-007 풀베이트로 3.6 및 4.1%에서 IL-1β 및 TNF-α 분비에 영향을 미쳤다. M-007 풀베이트는 대식세포 동원, TGF-β1의 상향-발현 및 근섬유아세포 분화를 촉진시켰다.

실시예 13

생체외 인간 피부 처리

이 실시예는 M-007이 인간 피부 외식편에서 상처 봉합을 유도한다는 것을 입증한다.

피부는 가장 큰 기관이며, 그것의 일차 기능은 외부 환경 및 과도한 물 손실에 대한 보호 장벽의 역할을 하는 것이다. 피부는 2개의 주요 조직 층으로 구성된다: 각질 중층 표피 및 지지 및 영양을 제공하는 콜라겐-풍부 진피 결합 조직의 기저 두꺼운 층. 손상된 상처 치유는 여러 질환 과정 (예컨대 당뇨병)을 일으키는 주요 합병증이다. 효율적인 상처 치유는 저산소증 (산소 결핍), 염증, 감염, 및 유해한 반응성 산소 종 (ROS)의 생성으로 인한 산화적 스트레스를 포함하는 다양한 과정에 의해 방해된다. 상처 치유의 내재적 복잡성으로 인해 느린 치유 과정과 관련된 단일 파라미터를 표적으로 하는 대부분의 요법의 효능이 제한되었다. 풀베이트 분획은 휴믹 공급원으로부터의 유기 생물활성 고분자전해질 산이며, 광범위한 생물학적 활성을 나타내는 것으로 이전에 밝혀졌다. 이들 분자가 강력한 항-염증제 및 산화방지제로서 밝혀졌음을 고려해 볼 때, 본 발명자들은 이들 특성을 기반으로 풀베이트 분획이 상처 치유에 도움이 될 수 있다는 것을 가정하였다. 본 발명자들은 풀베이트 유도체의 패널을 설계하고 합성하였으며, 변형된 스크래치 검정 프로토콜, 생체외 인간 피부 모델, 및 피부 자극의 마우스 모델을 사용하여 상처 치유를 촉진시키는 그것의 능력을 조사하였다. 몇 개의 유도체, 및 특히 M-007은 세포 이동을 지지하고, 인간 피부 외식편에서 상처 봉합을 유도하고, 생체내에서 상처 치유가 일어나는 속도를 크게 촉진시켰다. 따라서, 풀베이트 유도체는 상처 치유 치료에 도움이 될 수 있는 상처 치유 요법에 효과적이고, 피부 상처 치유 국소 및 주사가능 조성물에서 유용하다.

상기 제공된 실시예는 M-007 풀베이트 단독 또는 성장 인자 및/또는 생물활성 단편화 펩타이드와 조합된 M-007 풀베이트의 치료 효능을 보여준다. M-007은 아미노 이온 방출 수소-결합된 분자이다. M-007은 핵자기 공명 (NMR)을 사용하여 일련의 정교한 시험에 의한 검증을 위해 시험되었다. 모든 시험 결과는, 이러한 신규 분자가 본질적으로 무독성이며, 부작용이 없고, 증류수만큼 안전한 것으로 간주된다는 것을 나타낸다. M-007은 경구, 흡입제, 국소, 및 동맥간 및 동맥내 또는 정맥 투여를 통해 전달되는 자연계 치유 약제를 구현하는 풀빅 화합물에서 자연적으로 발견되는 아미노산의 수용성 블렌드이다. M-007은 떠 있는 함수 용액(hydrous solution) 내의 유리 아미노 이온과 기능장애 세포의 불안정한 단백질 내의 핵산과의 결합을 통해 광범위한 의료적 질병 및 건강 상태에 대한 치유를 용이하게 한다. 생합성 결과로 불안정한 단백질이 정렬되고 안정화되어 그것의 DNA 구조 내에 여전히 이식된 그것의 최초 DNA 코딩에 의해 프로그래밍된대로 세포를 그것의 정상적인 기능으로 되돌린다. 이 기전은 또한 DNA에 의해 조절되는 증식 단계의 재활성화를 일으키며, 따라서 치유 과정을 상당히 촉진시킨다. M-007은 천연에서 유래하며, 원상태 풀빅산 분획 내 천연 아미노산 뿐만 아니라 가장 효과적인 상처 치유 및 세포 성장 선별을 제공하는 아미노 및 펩타이드를 선택하는 풀빅산 분자의 분별화에 의해 증강된 펩타이드 및 효소와 함께 아미노산을 기초로 한다. 풀빅산 분획 M-007의 천연, 무독성 성질은 FDA GRAS (일반적으로 안전한 것으로 인식됨) 상태를 보장한다. 상기 분자는 의약품이 아니다. 본 명세서에 기재된 바와 같이, 그것은 인간 및 동물 건강 문제 모두의 치료에서 여러 용도를 갖는다. 기본 M-007 풀베이트는 추가의 아미노산, 핵산, 펩타이드 및 다양한 성장 인자가 첨가될 수 있는 연속 슬러리 내로 편입되어 일련의 독특한 포뮬러 조합을 이용할 수 있게 한다. M-007 풀베이트는 화학적으로 순수한 약품 등급 용액으로, 아미노 풀빅 분자로 증강될 뿐만 아니라 현재 이용가능한 가장 효과적인 무독성, 모든-천연 광범위 스펙트럼 항-진균, 항균, 항-미생물, 항-바이러스제 상처 치유 공급원을 생산하기 위한 (GF)의 다양한 선택이라는 추가 이점을 갖는다. 이러한 신규 제형은 세포 단백질 내의 핵산에 보다 쉽게 결합하는 경향을 제공하며, 핵이 본래 그것의 DNA에 의해 프로그래밍된대로 기능하도록 한다. M-007로의 풀빅산의 첨가는, 풀베이트가 모든 단백질에 강하게 결합하기 때문에 결합 과정을 돕는다. 독성 미생물, 바이러스 및 진균은 미생물 세포, 바이러스 형태 및 진균의 외피 막의 단백질 부분에 결합하는 탁월한 능력으로 인해 M-007 모이어티의 풀베이트 성분의 작용에 대한 면역을 형성하지 못하며, 형성할 수 없다. M-007 풀베이트는 바이러스 코트 단백질에 대한 비-특이적 진입 억제제이다. 그것은 H5N1을 포함하여, 백시니아(Vaccinia), 헤르페스(Herpes), HIV, C형 간염, 및 인플루엔자와 같은 대부분의 엔빌로프 바이러스(envelope virus)에 대해 광범위한 스펙트럼의 항-바이러스 활성을 나타낸다.

이전에 기재된 구현예 중 적어도 일부에서, 일 구현예에서 사용된 하나 이상의 요소는 그와 같은 대체가 기술적으로 실행가능하지 않는 한 또 다른 구현예에서 상호교환적으로 사용될 수 있다. 기타 여러 누락, 첨가 및 변형이 청구된 요지의 범위로부터 벗어나지 않으면서 상기 기재된 방법 및 구조에서 이루어질 수 있음이 당해 분야의 숙련가에 의해 이해될 것이다. 그와 같은 모든 변형 및 변화는 첨부된 청구항들에 의해 정의된 바와 같은 요지의 범위 내에 속하는 것으로 의도된다.

본 명세서에서 실질적으로 임의의 복수 및/또는 단수 용어들의 사용과 관련하여, 당해 분야의 기술을 갖는 사람은 문맥 및/또는 적용에 적절한 경우 복수를 단수로 및/또는 단수를 복수로 해석할 수 있다. 다양한 단수/복수 순열은 명료성을 위해 본 명세서에서 명확히 제시될 수 있다.

일반적으로, 본 명세서, 및 특히 첨부된 청구항들 (예를 들어, 첨부된 청구항들의 바디)에 사용된 용어들은 일반적으로 "개방형(open)" 용어들로서 의도됨이 당해 분야의 숙련가에 의해 이해될 것이다 (예를 들어, 용어 "포함하는(including)"은 "비제한적으로 포함하는(including but not limited to)"으로 해석되어야 하며, 용어 "갖는(having)"은 "적어도 갖는(having at least)"으로 해석되어야 하며, 용어 "포함하다(includes)"는 "비제한적으로 포함하다(includes but is not limited to)"로 해석되어야 함). 도입된 청구항 인용의 특정 번호가 의도되는 경우, 그와 같은 의도는 청구항에서 명백하게 언급될 것이며, 그와 같은 인용이 없는 경우 그와 같은 의도는 존재하지 않음이 당해 분야의 숙련가에 의해 추가로 이해될 것이다. 예를 들어, 이해를 돕기 위해, 하기 첨부된 청구항들은 청구항 인용을 도입하기 위해 "적어도 하나" 및 "하나 이상"의 도입 어구의 사용을 포함할 수 있다. 그러나, 그와 같은 어구의 사용은, 규정되지 않은 부정관사 ("a" 또는 "an")에 의한 청구항 인용의 도입이, 동일한 청구항이 "하나 이상" 또는 "적어도 하나"의 도입 어구 및 규정되지 않은 단수 표시(부정관사, 예컨대 "a" 또는 "an") (예를 들어, "a" 및/또는 "an"은 "적어도 하나" 또는 "하나 이상"을 의미하는 것으로 해석되어야 함)를 포함하는 경우에도, 그와 같이 도입된 청구항 인용을 포함하는 임의의 특정 청구항을 단 하나의 그와 같은 인용을 포함하는 구현예로 제한한다는 것을 암시하는 것으로 해석되어서는 안되며; 청구항 인용을 도입하기 위해 사용된 확실한 항목의 사용에 대해서도 마찬가지이다. 또한, 도입된 청구항 인용의 특정 번호가 명백하게 언급되더라도, 당해 분야의 숙련가는 그와 같은 인용이 적어도 인용된 번호를 의미하는 것으로 해석되어야 함을 인식할 것이다 (예를 들어, 다른 수식어 없이 "2개의 인용"의 단순 인용(bare recitation)은 적어도 2개의 인용, 또는 2개 이상의 인용을 의미함). 게다가, "A, B, 및 C 중 적어도 하나, 등"과 유사한 협약이 사용되는 경우에, 일반적으로 그와 같은 구성은 당해 분야의 숙련가가 상기 협약을 이해할 것이라는 의미에서 의도된다 (예를 들어, "A, B, 및 C 중 적어도 하나를 갖는 시스템"은 비제한적으로 A 단독, B 단독, C 단독, A 및 B 함께, A 및 C 함께, B 및 C 함께, 및/또는 A, B, 및 C 함께, 등을 갖는 시스템을 포함할 것임). "A, B, 또는 C 중 적어도 하나, 등"과 유사한 협약이 사용되는 경우에, 일반적으로 그와 같은 구성은 당해 분야의 숙련가가 상기 협약을 이해할 것이라는 의미에서 의도된다 (예를 들어, " A, B, 또는 C 중 적어도 하나를 갖는 시스템"은 비제한적으로 A 단독, B 단독, C 단독, A 및 B 함께, A 및 C 함께, B 및 C 함께, 및/또는 A, B, 및 C 함께, 등을 갖는 시스템을 포함할 것임). 설명, 청구항들, 또는 도면에서 사실상 2종 이상의 대안적인 용어들을 제시하는 임의의 이접적(disjunctive) 단어 및/또는 어구는 용어들 중 하나, 용어들 중 어느 하나, 또는 용어들 둘 모두를 포함할 가능성을 고려하는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 어구 "A 또는 B"는 "A" 또는 "B" 또는 "A 및 B"의 가능성을 포함하는 것으로 이해될 것이다.

또한, 본 개시의 특징 또는 측면이 마쿠쉬 그룹으로 기재되는 경우, 당해 분야의 숙련가는 본 개시내용도 마쿠쉬 그룹의 임의의 개별 구성원 또는 구성원의 하위그룹의 관점에서 기재된다는 것을 인식할 것이다.

당해 분야의 숙련가에 의해 이해되는 바와 같이, 예컨대 서면 설명을 제공함에 있어서 임의의 및 모든 목적을 위해, 본 명세서에 개시된 모든 범위는 또한 임의의 및 모든 가능한 하위-범위 및 이들의 하위-범위의 조합을 포함한다. 임의의 열거된 범위는 충분히 설명되고, 동일한 범위가 적어도 동일한 절반, 3분의 1, 4분의 1, 5분의 1, 10분의 1, 등으로 쪼개질 수 있는 것으로 쉽게 인식될 수 있다. 비제한적인 예로서, 본 명세서에서 논의된 각각의 범위는 하위 3분의 1, 중간 3분의 1 및 상위 3분의 1 등으로 쉽게 쪼개질 수 있다. 당해 분야의 숙련가에 의해 또한 이해되는 바와 같이, "최대", "적어도", "초과", "미만" 및 기타 동종의 것과 같은 모든 언어는 언급된 수를 포함하며, 차후 상기에 논의된 바와 같이 하위-범위로 쪼개질 수 있는 범위를 지칭한다. 마지막으로, 당해 분야의 숙련가에 의해 이해되는 바와 같이, 범위는 각각의 개별 구성원을 포함한다. 따라서, 예를 들어, 1-3개의 항목을 갖는 그룹은 1, 2, 또는 3개의 항목을 갖는 그룹을 지칭한다. 유사하게, 1-5개의 항목을 갖는 그룹은 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 항목을 갖는 그룹을 지칭한다.

다양한 측면 및 구현예가 본 명세서에 개시되었지만, 다른 측면 및 구현예가 당해 분야의 숙련가에게 분명할 것이다. 본 명세서에 개시된 다양한 측면 및 구현예는 설명을 위한 것이며, 제한하려는 것이 아니며, 실제 범위 및 진의는 하기 청구항들에 의해 지시된다.

<110> OMNI BIOCEUTICAL INNOVATIONS, INC Black, Gary W. Christensen, Jane Taghizadeh, Farhan <120> COMPOSITIONS OF BIOACTIVE FULVATE FRACTIONS AND USES THEREOF <130> OBINN.001A <150> 62/300541 <151> 2016-02-26 <160> 11 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SLPI Primer 1 <400> 1 atgaagtcca gcggcctc 18 <210> 2 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SLPI Primer 2 <400> 2 aagagaaata ggctcgttta ttt 23 <210> 3 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hBD-1 Primer 1 <400> 3 gctcagcctc caaaggagc 19 <210> 4 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hBD-1 Primer 2 <400> 4 aaaagaatgc ttataaaaag ttcat 25 <210> 5 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hBD-3 Primer 1 <400> 5 ggaatcataa acacattaca gaa 23 <210> 6 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hBD-3 Primer 2 <400> 6 cgggaatcat aaacacatta cagaa 25 <210> 7 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hBD-4 Primer 1 <400> 7 gcagccccag cattatgca 19 <210> 8 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hBD-4 Primer 2 <400> 8 aagctactga ggtcctactt c 21 <210> 9 <211> 12 <212> PRT <213> Fejervarya cancrivora <400> 9 Arg Val Cys Ser Ala Ile Pro Leu Pro Ile Cys His 510 514 519 <210> 10 <211> 12 <212> PRT <213> Fejervarya cancrivora <400> 10 Arg Val Cys Met Ala Ile Pro Leu Pro Leu Cys His 510 514 519 <210> 11 <211> 11 <212> PRT <213> Fejervarya cancrivora <400> 11 Trp Cys Lys Pro Lys Pro Lys Pro Arg Cys His 510 514 519

Claims

세포 재생이 필요한 대상체를 치료하기 위한 조성물로서, 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이, 80 내지 1200 Da 범위의 평균 분자량을 갖는 단리된 풀베이트 분획(fulvate fraction)을 포함하는, 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 단리된 풀베이트 분획은 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이, 80 내지 350 Da 범위의 평균 분자량을 갖는, 조성물.
청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 단리된 풀베이트 분획은 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이, 300 내지 320 Da 범위의 평균 분자량을 갖는, 조성물.
청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 풀베이트 분획은 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이, 약 308.24 Da의 평균 분자량을 갖는, 조성물.
청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 풀베이트 분획은 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이, 309 Da의 평균 분자량을 갖는, 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 단리된 풀베이트 분획은 C₁₂H₁₆O₉의 근사 분자식을 갖는, 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 단리된 풀베이트 분획은 C₁₂H₁₆(COOH)(OH)(CO)의 근사 분자식을 갖는, 조성물.
청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 국소, 경피, 비강, 설하, 또는 주사가능 조성물로 제형화되는, 조성물.
청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, 성장 인자를 추가로 포함하는, 조성물.
청구항 9에 있어서, 상기 성장 인자는 EGF, PDGF, FGF, TGF-α, TGF-β, NGF, EPO, IGF-I, IGF-II, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, TNFα, TNF-β, GM-CSF, M-CSF, VEGF, HGF, KGF, 또는 이들의 조합인, 조성물.
청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 생물활성 펩타이드를 추가로 포함하는, 조성물.
청구항 11에 있어서, 상기 하나 이상의 생물활성 펩타이드는 티게리닌-기반 펩타이드인, 조성물.
청구항 11에 있어서, 상기 하나 이상의 생물활성 펩타이드는 신데르민(Syndermin) 팔미토일 트리펩타이드-1 아미드, 시네핀(Synepin) 팔미토일 sh-트리펩타이드-3 아미드, 빈테린(Binterin) 팔미토일 sh-트리펩타이드-4 아미드, 윈히빈(Winhibin) 팔미토일 sh-트리펩타이드-53 아미드, 아디포닌(Adiponin) 팔미토일 sh-트리펩타이드-1 아미드, 또는 이들의 조합인, 조성물.
청구항 1 내지 13 중 어느 한 항에 있어서, 약제학적으로 허용가능한 캐리어를 추가로 포함하는, 조성물.
상처 또는 피부 병태의 구제, 개선, 또는 경감이 필요한 대상체에서 상처 또는 피부 병태를 구제, 개선, 또는 경감시키는 방법으로서,
필요한 대상체를 선별하는 단계; 및
풀베이트 분획을 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 적용하는 단계로서, 상기 풀베이트 분획은 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이 80 내지 1200 Da 범위의 평균 분자량을 갖는 단계
를 포함하는, 방법.
청구항 15에 있어서, 상기 단리된 풀베이트 분획은 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이, 80 내지 350 Da 범위의 평균 분자량을 갖는, 방법.
청구항 15 또는 16에 있어서, 상기 단리된 풀베이트 분획은 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이, 300 내지 320 Da 범위의 평균 분자량을 갖는, 방법.
청구항 15 내지 17 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 풀베이트 분획은 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이, 약 308.24 Da의 평균 분자량을 갖는, 방법.
청구항 15 내지 18 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 풀베이트 분획은 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이, 309 Da의 평균 분자량을 갖는, 방법.
청구항 15 내지 19 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 추가로, 하나 이상의 성장 인자를 포함하는, 방법.
청구항 16에 있어서, 상기 하나 이상의 성장 인자는 EGF, PDGF, FGF, TGF-α, TGF-β, NGF, EPO, IGF-I, IGF-II, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, TNFα, TNF-β, GM-CSF, M-CSF, VEGF, HGF, KGF, 또는 이들의 조합인, 방법.
청구항 15 내지 21 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 추가로, 하나 이상의 생물활성 펩타이드를 포함하는, 방법.
청구항 22에 있어서, 상기 하나 이상의 생물활성 펩타이드는 티게리닌-기반 펩타이드인, 방법.
청구항 22에 있어서, 상기 하나 이상의 생물활성 펩타이드는 신데르민 팔미토일 트리펩타이드-1 아미드, 시네핀 팔미토일 sh-트리펩타이드-3 아미드, 빈테린 팔미토일 sh-트리펩타이드-4 아미드, 윈히빈 팔미토일 sh-트리펩타이드-53 아미드, 아디포닌 팔미토일 sh-트리펩타이드-1 아미드, 또는 이들의 조합인, 방법.
청구항 15 내지 24 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 국소로, 설하로, 경피로, 또는 비강으로 적용되는, 방법.
청구항 15 내지 25 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 국소, 경피, 비강, 또는 설하 조성물인, 방법.
청구항 15 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 하나 이상의 외과적, 우발적, 또는 만성적 상처 또는 피부 병태로 고통 받는, 방법.
청구항 27에 있어서, 상기 피부 병태는 추피(rhytide), 피부의 비-효소적 당화, 일광 손상, 흡연 손상, 피부의 섬유증, 여름 여드름 (마요르카 여드름(Mallorca acne)), 집족성 여드름(acne conglobate), 화장품 여드름(acne cosmetica) (코스메틱 여드름(cosmetic acne)), 전격성 여드름 (급성 열성 궤양성 여드름), 목덜미 켈로이드성 여드름 (켈로이드성 여드름, 두부 유두상 피부염, 켈로이드성 모낭염, 목덜미 켈로이드성 모낭염, 목덜미 켈로이드 여드름), 붉은 뾰루지가 흩어져 있는 성인 이마, 심상성 여드름, 발한이상, 기계적 여드름, 약물성 여드름, 좁쌀 괴사 여드름(acne miliaris necrotica) (두창성 여드름), 심상성 여드름, 안면 부종 (고형 안면 부종(solid facial edema))을 동반한 여드름, 블레파로피마(blepharophyma), 에리트로모세혈관 확장성 주사비(erythrotelangiectatic rosacea) (홍반모세혈관 확장성 주사비(erythematotelangiectatic rosacea), 혈관 주사비), 찰상성 여드름 (아크네 엑스코리에 데 죈 필레(acne excori
e des jeunes filles), 피커 여드름(Picker's acne)), 선상 주사비(glandular rosacea), 그나토피마(gnathophyma), 그램-음성 주사비, 육아종 안면 피부염, 크고 붉은 주먹코를 가진 성인 남성, 딸기코증, 육아종성 입주위 피부염, 할로겐 여드름, 화농성 한선염 (아크네 인버사(acne inversa), 피오더마 피스툴란스 시그니피카(pyoderma fistulans significa), 베르눼이뉴병(Verneuil's disease)), 특발성 안면 무균성 육아종, 유아의 여드름, 유낭창 주사비(lupoid rosacea) (육아종 주사비, 소구진성 결핵진, 레반도프스키의 주사비-유사 결핵진(rosacea-like tuberculid of Lewandowsky)), 안면 파종상 속립성낭창, 메토피마(metophyma), 신생아 여드름 (영아 여드름, 신생아 여드름, 신생아 두부 농포증), 직업 여드름, 오일 여드름, 안구 장미증(ocular rosacea) (눈 장미증(ophthalmic rosacea), 눈장미증(ophthalmorosacea)), 오토피마(otophyma), 구강 주위 피부염(periorificial dermatitis), 장미증의 지속적 부종 (만성 상부 안면 홍반성 부종, 모르비앙병(Morbihan's disease), 장미성 림프부종(rosaceous lymphedema)), 비류성 주사비(phymatous rosacea), 포마드 여드름, 구진농포성 주사비 (염증성 주사비), 농양성 천굴성 두부 모낭주위염(perifolliculitis capitis abscedens et suffodiens) (두피의 박리 연조직염, 박리 모낭염, 호프만(Hoffman)의 농양성 천굴성 두부 모낭주위염), 입주위 피부염, 안와주위 피부염 (눈주위 피부염), 안면 농피증 (전격성 주사비(rosacea fulminans)), 딸기코증, 주사비 (여드름 장미증), 응괴성 주사비(rosacea conglobate), 윤활막염-여드름-농포증-골과다증-골수염 증후군 (SAPHO 증후군), 스테로이드 주사비, 타르 여드름(tar acne), 피부암 (암종 및 흑색종), 열대 여드름, 판상 건선, 적상 건선, 역형 건선, 농포성 건선, 홍피성 건선, 네일 건선(nail psoriasis), 및 건선성 관절염인, 방법.
부식화 유기물 (humified organic matter; HOM)로부터 생물활성 고분자전해질을 추출하는 방법으로서, 상기 생물활성 고분자전해질은 풀베이트 분획을 포함하고, 상기 방법은
HOM을 포함하는 수성 슬러리를 제공하는 단계;
상기 수성 슬러리를 고압 칼럼 분별화에 적용하여 분획화된 샘플을 수득하는 단계;
상기 분획화된 샘플을 분자 체질에 적용하는 단계; 및
풀베이트 분획을 단리하는 단계로서, 상기 풀베이트 분획은 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이 80 내지 1200 Da 범위의 평균 분자량을 갖는 단계
를 포함하는, 방법.
청구항 29에 있어서, 상기 단리된 풀베이트 분획은 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이, 80 내지 350 Da 범위의 평균 분자량을 갖는, 방법.
청구항 29 또는 30에 있어서, 상기 단리된 풀베이트 분획은 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이, 300 내지 320 Da 범위의 평균 분자량을 갖는, 방법.
청구항 29 내지 31 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 풀베이트 분획은 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이, 약 308.24 Da의 평균 분자량을 갖는, 방법.
청구항 29 내지 32 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 풀베이트 분획은 증기압 삼투압 측정법에 의해 측정된 바와 같이, 309 Da의 평균 분자량을 갖는, 방법.
청구항 29 내지 33 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 풀베이트 분획은 하나 이상의 생물활성 단편화 펩타이드를 포함하는, 방법.
청구항 34에 있어서, 상기 하나 이상의 생물활성 단편화 펩타이드는 티게리닌-기반 펩타이드인, 방법.
청구항 34에 있어서, 상기 하나 이상의 생물활성 단편화 펩타이드는 신데르민 팔미토일 트리펩타이드-1 아미드, 시네핀 팔미토일 sh-트리펩타이드-3 아미드, 빈테린 팔미토일 sh-트리펩타이드-4 아미드, 윈히빈 팔미토일 sh-트리펩타이드-53 아미드, 아디포닌 팔미토일 sh-트리펩타이드-1 아미드, 또는 이들의 조합인, 방법.
청구항 29에 있어서, 상기 단리된 풀베이트 분획은 C₁₂H₁₆O₉의 근사 분자식을 갖는, 방법.
청구항 29에 있어서, 상기 단리된 풀베이트 분획은 C₁₂H₁₆(COOH)(OH)(CO)의 근사 분자식을 갖는, 방법.