KR20200027493A

KR20200027493A - 펩티드의 항-염증 용도

Info

Publication number: KR20200027493A
Application number: KR1020207000339A
Authority: KR
Inventors: 벵트 잉에마르 사무엘손; 밍 구
Original assignee: 장인 우선 파마슈티컬 컴퍼니 리미티드
Priority date: 2017-07-05
Filing date: 2018-07-04
Publication date: 2020-03-12
Also published as: EP3648785A4; JP7198785B2; CN110139662B; CN110139662A; JP2020527135A; CN114533850A; EP3648785A1; WO2019007355A1; US20200148722A1; MA52988A; US20210317166A1; TW201920232A; US11059859B2

Abstract

염증, 염증성 장애 및/또는 염증을 특징으로 하는 이온 테아(thea) 병태, 예컨대, 상처, 화상, 건선, 여드름 및 아토피성 피부염의 치료 용도를 위한 서열 Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-DOPA-Lys의 펩티드 또는 이의 염이 제공된다.

Description

펩티드의 항-염증 용도

본 발명은 공지된 화합물의 새로운 용도에 관한 것이다.

염증은 전형적으로 예컨대, 미생물, 특정 항원, 손상된 세포 또는 물리적 및/또는 화학적 인자의 침입에 대한 국부적인 조직 반응으로서 특징지워진다. 염증 반응은 일반적으로 조직 치유를 개시할뿐만 아니라 해로운 작용제 및 손상된 조직 둘 다를 파괴, 희석 또는 격리시키는 역할을 하는 보호 메카니즘이다.

염증은 물리적 외상, 감염, 일부 만성 질환(예컨대, 건선 및 자가 면역 질환, 예컨대, 류마티스 관절염) 및/또는 외부 자극에 대한 화학적 및/또는 생리적 반응(예컨대, 알레르기 반응의 일부)으로 인해 발생할 수 있다. 염증 매개체가 혈류 및 국소 혈관의 팽창을 증가시켜 발적 및 열, 체액 분비, 종종 국소 종창, 염증성 부위로의 백혈구 이동 및 통증을 유발하는 복잡한 일련의 사건이 포함될 수 있다.

많은 병태/장애은 비정상적인 조직-손상 염증을 특징으로 하고/하거나 그에 의해 유발된다. 이러한 병태는 일반적으로 면역 방어 메커니즘의 활성화를 특징으로 하며, 숙주에게 유익한 것보다 더 해로운 영향을 미치며, 일반적으로 다양한 정도의 조직 발적 또는 충혈, 종창, 고열, 통증, 가려움증, 세포 사멸, 조직 파괴, 세포 증식 및/또는 기능 상실과 관련이 있다. 예로는 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, 다발성 경화증, 건선, 사구체 신염 및 이식 거부를 포함한다.

일반적으로 복잡한 일련의 사건은 염증 변화, 예컨대, 국소 혈관의 팽창을 통해 증가된 혈류로 인해 발적 및 열, 백혈구 및 혈장의 혈관외유출을 유발하여 국부적인 종창, 감각 신경의 활성화(일부 조직에서 통증 발생) 및 기능 상실을 초래한다. 이러한 염증 변화는 호중구, 단핵구, 대식세포 및 림프구와 같은 세포와 함께 혈관성 아민, 사이토카인, 보체 인자 및 반응성 산소 종과 같은 염증 매개체를 포함하는 일련의 세포성 및 생화학적 사건에 의해 유발된다.

무엇보다도 염증은 상처 치유 과정에서 중요한 역할을 한다. 따라서 상처 및 화상은 염증과 관련된 병태로서 분류될 수 있다. 당업계의 통상적인 생각은 항염증제는 상처 치유의 진행에 해로울 수 있으므로 상처 개방에 직접 적용해서는 안된다는 것이다.

미틸러스 에두리스 족사 단백질(Mytilus edulis foot protein (mefp))으로 또한 알려진 홍합 접착 단백질(MAP)은 해양 조개류 종, 예컨대, 미틸러스 에두리스, 미틸러스 코르스쿠스(Mytilus coruscus) 및 페르나 비리디스(Perna viridis)에 의해 분비되는 단백질이다. 접착 단백질은 그것이 생성되어 저장되는 족사선(byssus gland)으로부터 홍합에 의해 분비된다. 고체, 예컨대, 암석의 표면뿐만 아니라 다른 고체 물체, 예컨대, 금속, 목재, 유리 등에 분비되는 경우, 홍합을 고체 물체에 고정시키는 방수 결합이 형성된다. 홍합은 일반적으로 그룹으로 해안 암초 또는 선박 바닥에 부착된다. 결합은 놀라울 정도로 강하며 해안에서 파도 영향을 견딜 수 있는 능력을 갖는다.

따라서, 미틸러스 에두리스(Mytilus edulis), 미틸러스 갈로프로빈시아리스(Mytilus galloprovincialis), 미틸러스 캘리포니아(Mytilus californias) 및 페르나 비리디스에 대한 연구는 홍합으로부터 유래된 11개의 분리된 접착 단백질 아형이 지금까지 확인되었다: mfp-1 (때때로 "mefp-1"이라고도 하며, 이하 상호 교환 가능하게 사용됨), mfp-2/mefp-2, mfp-3/mefp-3, mfp-4/mefp-4, mfp-5/mefp-5, mfp-6/mefp-6; 콜라겐 pre-COL-P, pre-COL-D 및 pre-COL-NG; 및 홍합 족사 매트릭스 단백질 PTMP (근위 스레드 매트릭스 단백질(proximal thread matrix protein)), 및 DTMP (원위 근위 스레드 매트릭스 단백질(distal proximal thread matrix protein)). 예를 들어, Zhu et al, Advances in Marine Science, 32, 560 (2014) 및 Gao et al, Journal of Anhui Agr. Sci., 39, 19860 (2011)) 참고.

아형을 포함하는 모든 홍합 접착 단백질은 다음을 포함한다는 점에서 2가지 구조적 특징을 갖는다: (1) 단백질이 (NH₂ 말단으로 인해) 고부하의 양전하를 보유하도록, 리신; (2) 카테콜 부분이 강한 공유 결합의 형성 및 결과적으로 홍합 접착 단백질이 고체 표면에 결합하는 능력을 담당하는 3,4-디하이드록시페닐알라닌(DOPA, 도파민).

홍합 접착 단백질 생성물에 기반한 제품은 현재 제한된 수의 분야(조직 결합제 및 상처 및 화상의 치료로서 미세-세포 결합 포함)에서 사용된다. 상업용 제품은 홍합 접착 단백질 용액으로서 직접 사용되거나 사용 전에 용해를 위해 동결 건조된 분말로서 저장된다.

서열의 데카펩티드: Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-DOPA-Lys (이후 "MAP 펩티드"라고도 함)는 MAP의 약학적으로 허용가능한 저 분자량 유도체이며, 이는 처음에 Waite in Int. J. Adhesion and Adhesives, 7, 9 (1987)에 의해 개시되었다. MAP 펩티드는 자연 발생 MAP의 저 분자량 유도체로서 유래 및/또는 단리될 수 있거나, 예를 들어, Yamamoto in J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 613 (1987)에 의해 기술된 바와 같이 합성될 수 있다. 또한 Dalsin et al, J. Am. Chem. Soc., 125, 4253 (2003) 참고.

출원인의 지식에 따르면, 염증 또는 염증성 장애의 치료에서의 MAP 펩티드의 사용은 선행 기술에 개시되어 있지 않다.

발명의 내용

본 발명에 따르면, 염증의 치료 용도를 위한, 서열 Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-DOPA-Lys의 (단리된) 펩티드 화합물(MAP 펩티드) 또는 이의 염이 제공된다.

언급될 수 있는 MAP 펩티드의 염은 약학적으로 허용가능한 염, 및 화장품학적으로 허용가능한 염, 예컨대, 약제학적으로 또는 화장품학적으로 허용가능한 산 부가 염 및 염기 부가 염을 포함한다. 이러한 염은 종래의 수단에 의해, 예를 들어, 선택적으로 용매 내에서 또는 염이 불용성인 배지 내에서, 유리 펩티드와 하나 이상의 당량의 적절한 산 또는 염기와 반응시킨 후, 표준 기술(예컨대, 진공 내에서, 동결-건조에 의해 또는 여과에 의해)을 사용하여 상기 용매 또는 상기 배지의 제거에 의해 형성될 수 있다. 염은 또한, 예를 들어, 적합한 이온 교환 수지를 사용하여 염 형태의 활성 성분의 반대-이온을 다른 반대-이온과 교환함으로써 제조될 수 있다.

바람직한 염은 예를 들어, 하이드로클로라이드, 바이설페이트, 말레에이트, 메실레이트, 토실레이트, 알칼리 토금속 염, 예컨대, 칼슘 및 마그네슘, 또는 알칼리 금속 염, 예컨대, 소듐 및 포타슘 염을 포함한다.

MAP 펩티드 및 이의 염은 생물학적(예컨대, 약리학적) 활성을 갖기 때문에 유용하다. 따라서, MAP 펩티드/염은 인간 및 동물 약제로서 유용하다. 따라서 이들은 화장품 및/또는 의료 기기의 일부로서 사용될 수 있지만, 약학 (및/또는 수의학)으로서 표시된다.

MAP 펩티드/염은 이러한 약리학적 활성을 가질 수 있지만, 이의 특정 약학적으로 허용가능한 (예컨대, "보호된") 유도체는 존재하거나 제조될 수 있되, 이는 이러한 활성을 갖지 않을 수 있지만, 투여된 이후에 대사되거나 화학적으로 변형되어 MAP 펩티드를 형성할 수 있다. 따라서, 이러한 화합물(일부 약리학적 활성을 가질 수 있되, 단, 이러한 활성은 이들 화합물이 대사된/변형된 활성 화합물의 활성보다 현저하게 낮음)은 MAP 펩티드의 "전구약물"로서 기술될 수 있다.

본원에 사용된 바와 같이, 전구약물에 대한 언급은 투여 후 예정된 시간 내에 실험적으로 검출 가능한 양으로 MAP 펩티드를 형성하는 화합물을 포함할 것이다. MAP 펩티드의 모든 전구약물은 본 발명의 범위 내에 포함된다.

"염증의 치료"는 원인에 관계없이 신체의 임의의 기관 (연조직, 관절, 신경, 혈관계, 내부 기관, 특히, 점막 표면, 특히, 피부 포함)에서의 염증 치료를 포함하고, 모든 이러한 염증성 장애 또는 병태, 및/또는 (예컨대, 증상으로서) 염증을 특징으로 하는 장애 또는 병태를 또한 포함한다.

염증성 병태는 면역 방어 메커니즘의 활성화에 의해 특징 지워질 수 있으며 (및 전형적으로 특징 지워지며), 이는 숙주에게 유익한 것보다 더 해로운 영향을 미칠 수 있다. 이러한 병태는 일반적으로 다양한 정도의 조직 발적 또는 충혈, 종창, 고열, 통증 (동통 포함), 체액 삼출, 가려움증 (소양감), 세포 사멸 및 조직 파괴, 세포 증식 및/또는 기능 상실과 관련이 있다.

언급될 수 있는 염증성 병태는 동맥염, 당뇨병, 대사 증후군, 주사, 천식과 알레르기, 강직성 척추염, 만성 폐쇄성 폐 질환, 통풍 관절염, 염증성 장 질환(예컨대, 크론병 및 궤양성 대장염), 다발성 경화증, 퇴행성 관절염, 췌장염, 전립선염, 건선 관절염, 류마티스 관절염, 건염, 점액낭염, 쇼그렌 증후군, 전신성 홍반 루푸스, 포도막염, 두드러기, 비만 세포증, 당뇨병성 혈관 합병증, 편두통, 죽상 동맥 경화증 및 연관된 심혈관 장애을 포함한다. 구체적으로 언급될 수 있는 질환 상태는 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD)이다.

보다 구체적으로 언급될 수 있는 염증성 병태는 피부 또는 점막(구강, 비강, 눈, 질, 자궁 경부 및/또는 항문 직장 점막, 보다 특히 구강 또는 비강 점막 포함)의 염증, 예컨대, 감염(예컨대, 바이러스성 및/또는 세균성 감염)으로 인한 염증 또는 알레르기성/아토피성 병태(예컨대, 비염, 인두염, 치주염, 치은염, 안구건조증, 결막염, 피부염, 두드러기 (담마진) 및 음식 알레르기); 및 다른 염증성 병태, 예컨대, 헤르페스, 약물 발진, 다형성 광 발진, 일광화상, 피부암의 초기 징후 (홍반-유사 피부 병변), 병리학적 탈모(피부 이식 후 포함), 화학 발진, 건선, 다형 홍반, 모낭염, 습진 및 외이염을 포함한다. 구체적으로 언급될 수 있는 질환 상태는 다형성 광 발진이다.

보다 특히, MAP 펩티드 및 이의 염은 염증을 특징으로 하고/하거나 염증과 관련된 특정 병태를 치료하는데 사용될 수 있다. 이러한 병태에는 상처 (찰과상(포도창), 절개(수술 절개 포함), 열상, 천자, 박리, 타박상 및 흉터 포함), 화상(화상으로 인한 수술, 예컨대, 피부 이식으로 인한 염증 포함) 및 기타 병태, 예컨대, 치핵이 포함될 수 있다.

피부 또는 점막의 상처는 막 표면에 대한 내부 또는 외부의 신체적 상해로 인해 발생할 수 있거나 (즉, 근본적인 생리적 장애의 증상)에 의해 발생할 수 있다.

물리적 (예컨대, "개방") 상처는 날카로운 물체 (절단, 절개, 천자) 또는 둔한 물체/기계적 힘 (열상, 찰과상, 박리), 물리적 타격 (타박상), 열 또는 화학 물질 (화상 및 물집), UV선 (일광화상), 추위 (동창 또는 동상)에 의해 발생할 수 있다. 상처는 표면상(표피 및/또는 진피에만 손상)이거나 전체 두께 상처 (표피 및/또는 진피 아래의 손상)일 수 있다. 심각한 경우, 피하 및/또는 점막하 조직, 예컨대, 근육, 뼈, 관절 및 심지어 내부 장기가 손상될 수 있다.

MAP 펩티드 및 이의 염은 상처 자체 및 치유 과정과 관련된 염증, 통증 (동통 포함) 및/또는 소양감 (가려움증) 뿐만 아니라, 상처로부터의 체액의 삼출, 감염의 위험을 예방 및 흉터 및 멜라닌 색소 침착과 같은 염증 및/또는 상처 치유 과정으로 인한 생리적 반응의 예방하는데 사용될 수 있다.

흉터는 염증 및/또는 상처 치유의 결과이며, 이러한 염증/치유의 결과인 섬유성 조직의 형성에 대한 일반적인 용어이다.

MAP 펩티드 및 이의 염은 또한 염증 및/또는 상처 치유로 인한 것일 수 있는 멜라닌 색소 생성의 억제에 유용할 수 있다. 따라서, MAP 펩티드 및 이의 염은 또한 멜라닌 색소 침착과 연관된 장애, 예컨대, 기미, 주근깨, 흑피증, 뺨 발진 및 기타 침착증, 흑색종을 갖는 피부암, 및 태양 또는 피부 질환, 예컨대, 여드름에 노출되어 야기되는 침착증의 억제에 유용할 수 있다.

상처는 또한 질환이나 장애의 결과로서 발생할 수 있다. 이는 피부 및 점막의 물집 및/또는 궤양을 포함할 수 있다. 이들은 종종 오래 지속되고 치료하기 어려운 일반적인 상태이다. 피부 조직은 종종 손상, 제거, 액화, 감염 및/또는 괴사될 수 있다. 궤양은 특히 감염되어 치유가 어렵고 비용이 많이 드는 경우 건강에 이차적인 결과를 초래할 수 있다. 또한 환자에게 유의한 심리적 스트레스와 경제적 손실을 유발할 수 있으며 일반적인 웰빙 및 삶의 질에 영향을 미친다.

대안적으로는, MAP 펩티드 및 이의 염이 특정 유용성을 발견할 수 있는 염증성 피부 병태 또는 질환은 건선, 여드름, 습진 및 피부염, 특히, 알레르기/아토피성 피부염을 포함한다.

건선은 재발하는 경향 (일부 환자들은 평생 동안 치유되지 않음)을 갖는 만성, 염증성 피부 질환이다. 건선의 임상 증상에는 주로 홍반과 인설이 포함된다. 이는 전신에 발생할 수 있지만 두피와 팔다리에서 보다 일반적으로 관찰된다.

여드름은 여포성(털피지샘 단위(pilosebaceous unit)) 만성, 염증성 피부 질환이며, 이러한 증상은 피지의 과잉분비, 차단된 모피지 관 (폐쇄성 및 개방성 면포 포함), 세균 감염 및 염증 반응과 같은 주요 요인과 밀접한 관련이 있으며, 이는 청소년기 동안 발생하며, 안면 상에 여러 형태의 피부 병변을 특징으로 한다. 따라서 용어 여드름은 규칙적인 여드름 및 주사성 좌창 (즉, 딸기 코)를 포함한다.

습진은 다양한 내부 및 외부 요인으로 인한 강한 가려움증을 갖는 피부 염증 반응이다. 이는 급성, 아-급성 및 만성의 3가지 단계를 갖는다. 급성기에는 삼출물 생성 경향이 있는 반면, 만성기에는 침윤 및 비대를 포함한다. 피부 병변은 종종 가렵고 쉽게 재발한다.

피부염은 섬유조도, 발진, 가려움증, 습진 및 건조를 특징으로 하는 흔한 피부 질환이다. 피부염으로 인한 소형 알갱이, 난치성 궤양 및 색소 반은 즉시 치료하지 않는 경우 기저 세포 암종, 편평 세포 암종 및 악성 흑색종으로 진행될 수 있다. 피부염은 다양한 내부 및 외부 감염성 또는 비감염성 요인, 예컨대, 물질 (접촉 피부염) 또는 알레르기 (알레르기/아토피성 피부염)에 의해 발생될 수 있다. 또한, 지루성 피부염 (지루성 습진) 및 다양한 형태의 스테로이드-의존성 피부염(예컨대, 광-민감성 지루, 구주위 피부염, 주사-유사 피부염, 스테로이드-주사, 스테로이드-유도된 주사, 이아트로사케아(iatrosacea), 주사 유사 스테로이드 피부염, 국소 코르티코스테로이드-유도 주사-유사 피부염, 보다 특히, 안면 코르티코 스테로이드 중독성 피부염(FCAD) 또는 안면 코스티코스테로이드-의존성 피부염(FCDD)이 포함되며, 이는 국소 코르티코스테로이드(제어되지 않은 사용, 남용 또는 오용을 포함)를 이용하여 장기간 치료 후에 안면 부위의 홍조, 홍반, 모세 혈관 확장증, 위축, 구진 및/또는 농포로 특징지어진다; 예컨대, Xiao et al, J. Dermatol., 42, 697 (2015) 및 Lu et al, Clin. Exp. Dermatol., 35, 618 (2009) 참고).

MAP 펩티드 및 이의 염이 본원에 일반적으로 및 구체적으로 언급된 것들을 포함하여 다양한 병태에 의해 유발되는 홍반, 발진 및 종창, 부종, 물집 및 수포성 유사천포창을 완화시키는데 긍정적인 효과를 가질 수 있으며, 피하 조직액의 삼출을 억제하고 이러한 염증성 병태에 의해 야기되는 가려움증 및 통증을 억제할 수 있는 것으로 밝혀졌다.

언급될 수 있는 다른 염증성 병태는 다음을 포함한다:

(a) 점막 염증, 예컨대, 구강 점막염, 아프타성 궤양, 중이염, 후두염, 기관염, 식도염, 위염, 장염 및 소장대장염 (세균성 이질, 만성 아메바성 이질, 주혈흡충병, 비특이적 궤양성 대장염 및 국소 장염 포함), 자궁 경부염 및 자궁경내막염, 자궁내막염, 흡입 손상에 의해 야기된 염증 등 뿐만 아니라 점막 표면, 예컨대, 구강, 비인두, 귀, 인후, 기관, 위장관, 자궁 경부 등의 것들에 영향을 끼치는, 암과 관련된 점막 염증, 및 감염들(예컨대, 바이러스 감염, 예컨대, 일반적인 감기 또는 인플루엔자).

(b) 예를 들어, 골절과 관련된 정형 외과적 염증, 뼈 및 관절의 화농성 감염, 류마티스성 뼈 질환에 의해 야기된 염증 뿐만 아니라 화농성 골수염 (급성, 만성, 국소, 경화성, 외상 후), 화농성 관절염; 골 종양 (골종, 유골골증, 연골종), 골낭종, 파골세포종종, 원발성 골육종 (골육종, 연골육종, 골섬유육종, 유잉 육종, 비-호지킨 림프종, 골수종, 척색종), 전이성 골종양, 뼈의 종양-유사 병증(골낭종, 동맥류성 골낭종, 호산구성 육아종, 섬유 이형성증); 류마티스성 관절염.

(c) 신경 염증, 예컨대, 말초 다발성 신경염, 안면 신경염, 말초 신경염, 피하 신경염, 척골 신경염, 늑간 신경염 등.

(d) 피하 및 점막하 연조직 염증, 예컨대, 근염, 인대염, 건염, 지방층염, 피막염, 림프절염, 부보나덴티티스(bubonadentitis), 편도염, 윤활막염 근막염, 및 근육, 인대, 근막, 건, 관절낭 윤활막, 지방, 관절 주머니(articular capsules) 및 림프구 조직의 손상, 좌상 또는 열상에 의해 야기되는 연조직 염증.

(e) 혈관 염증, 예컨대, 알레르기성 백혈구파괴 혈관염, 알레르기성 피부 혈관염, 결절성 다발동맥염, 혈전 혈관염, 육아종성 혈관염, 림프구성 혈관염, 혈액 조성에 이상이 있는 혈관염, 및 류마티스 혈관염 뿐만 아니라 알레르기성 백혈구파괴 혈관염, 알레르기성 피부 혈관염, 결절성 다발동맥염, 혈전 혈관염, 육아종성 혈관염, 림프구성 혈관염, 혈액 조성에 이상이 있는 혈관염, 및 류마티스 혈관염에 의해 야기되는 혈관 암과 관련된 혈관 염증.

(f) 내부 장기, 예컨대, 심장, 위, 대장, 폐, 간, 비장, 신장, 췌장, 방광, 난소 및 전립선의 염증을 포함하지만, 심낭염, 심근염, 심내막염, 폐렴, 간염, 비장염, 신장염, 췌장염, 방광염, 난소염, 전립선염 및 위궤양의 치료에 제한되지 않음.

본 발명의 추가 양태에 따르면, 염증, 염증성 장애 및/또는 (예를 들어, 증상으로서) 염증을 특징으로 하는 장애/병태의 치료 방법이 제공되며, 이 방법은 이러한 치료를 필요로 하는 환자에게 MAP 펩티드 또는 이의 염의 투여를 포함한다.

의심의 여지를 없애기 위해, 본 발명의 맥락에서, 용어 "치료", "요법" 및 "요법 방법"은 이를 필요로 하는 환자의 치료적 또는 완화적 치료 뿐만 아니라 염증 및/또는 염증성 장애에 민감한 환자의 예방 치료 및/또는 진단을 포함한다.

"환자"는 파충류 및 바람직하게는 포유 동물 (특히, 인간) 환자를 포함한다.

본 발명에 따르면, MAP 펩티드/염은 바람직하게는 국부적으로 또는 전신적으로, 예를 들어, 경구, 정맥 내 또는 동맥 내 (예컨대, 혈관 내 및 기타 혈관주위 장치/투여 형태 (예컨대, 스텐트)에 의해)), 근육 내, 피부, 피하, 경점막 (예컨대, 설하 또는 협측), 직장, 질내, 경피, 비강, 폐 (예컨대, 기관 또는 기관지)로, 국소적으로 또는 임의의 다른 비경구 경로에 의해, 약학적으로 허용가능한 투여 형태(들)의 화합물(들)을 포함하는 약학 제형의 형태로 투여된다. 흡입 (예컨대, 비강)에 의한 투여는 치료될 상태가 비염 또는 기도의 바이러스 감염 (일반적인 감기, 인플루엔자)으로 인한 염증인 경우 특히 유용하다. 폐 투여는 치료될 상태가 COPD인 경우 특히 유용하다. 국소 투여 형태는 활성 성분을 포함하는 스프레이를 생성함으로써, 예컨대, 분말 에어로졸을 사용함으로써 또는 적절한 분무 기술 또는 장치, 예컨대, 분무기를 사용하여 수성 미스트를 이용하는 방법을 통해 향상시킬 수 있다.

MAP 펩티드/이의 염의 바람직한 전달 방식은 적절한 (예를 들어, 약학적으로 허용가능한) 비히클 및/또는 상업적으로 이용 가능한 제형에서 염증 부위에 국소적으로 포함되지만, 경구, 정맥 내, 피부 또는 피하, 비강, 근육 내 또는 복강 내 전달을 또한 포함할 수 있다.

MAP 펩티드 및 이의 염은 일반적으로 (예컨대, 약학적으로 허용가능한) 보조제(adjuvant), 희석제 또는 담체와 혼합하여 하나 이상의 (예컨대, 약학) 제형의 형태로 투여될 것이며, 이는 의도된 투여 경로 및 표준 약학 또는 다른 (예컨대, 화장품) 관례와 관련하여 선택될 수 있다. 이러한 약학적으로 허용가능한 담체는 활성 화합물에 대해 화학적으로 불활성일 수 있고 사용 조건 하에서 유해한 부작용 또는 독성을 갖지 않을 수 있다. 이러한 약학적으로 허용가능한 담체는 또한 활성 성분의 즉각적인 또는 변형 된 방출을 제공할 수 있다.

적합한 약학 제형은 문헌, 예컨대, Remington The Science and Practice of Pharmacy, 22^nd edition, Pharmaceutical Press (2012) 및 Martindale - The Complete Drug Reference, 38^th Edition, Pharmaceutical Press (2014) 및 여기에 언급된 문헌에 기술된 기술에 따라 상업적으로 이용 가능하거나 달리 제조될 수 있으며, 모든 문헌에서의 관련 개시는 본원에 참고로 원용된다. 그렇지 않으면, MAP 펩티드 및 이의 염을 포함하는 적합한 제형의 제조는 통상의 기술을 사용하여 당업자에 의해 비발명적으로 달성될 수 있다.

MAP 펩티드/염은 수성 제형, 예컨대, 유화제, 현탁액 및/또는 용액(예컨대, (선택적으로) 완충된 수성 제형(예컨대, 용액), 예컨대, 생리 식염수-함유 제형(예컨대, 용액), 포스페이트-함유 제형(예컨대, 용액), 아세테이트-함유 제형(예컨대, 용액) 또는 보레이트-함유 제형(예컨대, 용액)) 또는 동결-건조된 분말의 형태일 수 있다.

대안적으로 활성 성분은 적절한 부형제와 조합하여 제조될 수 있다:

·겔 제형(적합한 겔 매트릭스 물질에는 셀룰로오스 유도체, 카보머 및 알기네이트, 구미 트라가칸타에(gummi tragacanthae), 젤라틴, 펙틴, 카라기난, 겔란 검, 전분, 크산탄 검, 양이온 구아 검, 한천, 비셀룰로오스 다당류, 비닐 중합체, 아크릴 수지, 폴리비닐 알콜, 카복시비닐 폴리머 및, 특히, 히알루론산을 포함함);

·로션(응축물; 적합한 매트릭스 물질로는 셀룰로오스 유도체, 글리세린, 비셀룰로오스 다당류, 상이한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜 및 프로판디올을 포함함);

·페이스트 또는 연고(적합한 페이스트 매트릭스 물질에는 글리세린, 바셀린, 파라핀, 상이한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜 등을 포함함);

·크림 또는 폼(foam)(적합한 부형제(예컨대, 기포제)에는 하이드록시프로필 메틸 셀룰로오스, 젤라틴, 상이한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 도데실 설페이트, 소듐 지방 알콜 폴리옥시에틸렌 에테르 설포네이트, 옥수수 글루텐 분말 및 아크릴아미드를 포함함);

·분말 에어로졸(적합한 부형제에는 만니톨, 글리신, 덱스트린, 덱스트로스, 수크로스, 락토스, 소르비톨 및 폴리소르베이트를 포함함); 및/또는

·경구 용도용 또는 흡입용 액체(에어로졸) 스프레이(적합한 부형제에는 점도 개질제, 예컨대, 히알루론산, 유화제, 완충제, 알콜, 물, 보존제, 감미료, 향료 등을 포함함).

보습제, 예컨대, 글리세롤, 글리세린, 폴리에틸렌 글리콜, 트레할로스, 글리세롤, 광유, 파라핀 오일, 히알루론산 및 이의 염(예컨대, 소듐 및 포타슘 염), 옥타노익/카프익 트리글리세리드 등; 및/또는 항산화제, 예컨대, 비타민 및 글루타티온; 및/또는 pH 개질제, 예컨대, 산, 염기 및 pH 완충제가 또한 적절한 경우에 이러한 제형에 포함될 수 있다. 또한, 계면 활성제/유화제, 예컨대, 헥사데칸올(세틸 알콜), 지방산(예컨대, 스테아르산), 소듐 도데실 설페이트(소듐 라우릴 설페이트), 소르비탄 에스테르(예컨대, 소르비탄 스테아레이트, 소르비탄 올레에이트 등), 모노아실 글리세리드(예컨대, 글리세릴 모노스테아레이트) 폴리에톡실화된 알콜, 폴리비닐 알콜, 폴리올 에스테르, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르(예컨대, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트), 폴리옥시에틸렌 캐스터 오일 유도체, 에톡실화 지방산 에스테르, 폴리옥실글리세리드, 라우릴 디메틸 아민 옥사이드, 담즙산 염(예컨대, 소듐 데옥시콜레이트, 소듐 콜레이트) 인지질, N, N-디메틸도데실아민-N-옥사이드, 헥사데실트리메틸-암모늄 브로마이드, 폴록사머, 레시틴, 스테롤(예컨대, 콜레스테롤), 당 에스테르, 폴리소르베이트 등; 보존제, 예컨대, 페녹시에탄올, 에틸헥시 글리세린 등; 및 증점제, 예컨대, 아크릴로일디메틸타우레이트/VP 공중합체가 포함될 수 있다. 특히, 스테아르 산, 글리세릴 모노스테아레이트, 헥사데칸올, 소르비탄 스테아레이트, 세틸 알콜, 옥타노익/카프릭 글리세리드 등이 특히, 크림 제형에 포함될 수 있다.

MAP 펩티드/염 및 이들을 포함하는 (예컨대, 약학) 제형 (예컨대, 상기 기술한 것과 같은 수용액, 겔, 크림, 연고, 로션/응축물, 폼 및/또는 페이스트(paste))은, 이들을 추가로 적절한 매트릭스 물질과 조합하여 생물학적 표면, 예컨대, 피부 또는 점막 표면에 적용하기 위한 드레싱 또는 치료용 패치를 제조할 수 있다. 따라서, 이러한 제형은 매트릭스 물질, 예컨대, 거즈, 부직포 또는 실크 종이를 함침시키는 데 사용될 수 있다. 치료용 패치는 대안적으로 예를 들어, 밴드-에이드, 안면 마스크, 눈 마스크, 손 마스크, 발 마스크 등일 수 있다.

바셀린은 이러한 드레싱을 상처에 적용하는 것의 용도를 위해 사용될 수 있지만, PEG (예컨대, PEG400)에 기초한 연고가 매트릭스 물질과 조합되어 바셀린을 사용할 필요없이 드레싱을 제조할 수 있음을 발견하였다.

MAP 펩티드 및 이의 염은 혈소판-형 성장 인자(예컨대, 혈소판-유래 성장 인자, PDGFs); 골육종-유래 성장 인자(ODGF), 표피 성장 인자 (EGFs), 변형 성장 인자(TGFα 및 TGFβ), 섬유 아세포 성장 인자(αFGF, βFGF), 인슐린-유사 성장 인자(IGF-I, IGF-II), 신경 성장 인자(NGF), 인터루킨-형 성장 인자(IL-1, IL-1, IL-3), 에리스로포이에틴(EPO) 및 콜로니 자극 인자(CSF)로부터 선택된 하나 이상의 성장 인자를 이용한 치료 시 조합될 수 있다.

본 발명의 추가의 양태에 따르면, 이의 염의 MAP 펩티드 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제, 예컨대, 보조제, 희석제 또는 담체를 포함하는 (예컨대, 약학) 조성물이 제공된다. 바람직한 조성물은 피부 또는 점막 표면에 국소 투여하기 위한 것이다.

활성 성분의 투여는 연속적이거나 간헐적일 수 있다. 투여 방식은 또한 투여의 시기 및 빈도에 의해 결정될 수 있지만, 염증의 치료학적 치료의 경우 병태의 중증도에 의존한다.

투여 경로뿐만 아니라 치료될 장애 및 환자에 따라, MAP 펩티드 및 이의 염은 이를 필요로 하는 환자에게 다양한 치료학적 유효량으로 투여될 수 있다.

유사하게, 제형 중 활성 성분의 양은 치료될 병태 및 환자의 중증도에 의존할 것이나, 당업자에 의해 결정될 수 있다.

임의의 경우에, 의사 또는 다른 숙련자는 병태의 심각성 및 투여 경로에 따라 개별 환자에게 가장 적합할 것인 실제 투여량을 통상적으로 결정할 수 있을 것이다. 본원에 언급된 투여량은 평균 사례를 예시하는 것이며; 물론, 더 높거나 더 낮은 투여량 범위가 상응되는 개별 경우가 존재할 수 있으며, 이는 본 발명의 범위 내에 있다.

용량은 매일 1회 내지 4회 투여될 수 있다.

수용액 제품 중 MAP 펩티드 또는 이의 염의 적절한 농도는, 유리 (비-염) 펩티드로서 계산된 모든 경우에서, 약 0.01 (예컨대, 약 0.1) 내지 약 15.0 (예컨대, 약 1.5)㎎/㎖일 수 있고, 적절한 pH 값은 약 1.0 내지 약 7.0 (예를 들어, 약 3.0 내지 약 6.5)의 범위이다.

MAP 펩티드/염의 적절한 국소 용량은, 유리 (비-염) 펩티드로서 계산된 모든 경우에서, 치료되는 영역에 대해 약 0.1 내지 약 50㎍/cm², 예컨대, 치료되는 영역에 대해 약 1 내지 약 20㎍/cm², 예컨대, 치료되는 영역에 대해 약 2 내지 약 10㎍/cm², 예컨대, 치료되는 영역에 대해 약 5㎍/cm²의 범위이다.

임의의 경우에, 본 발명의 맥락에서 포유 동물, 특히, 인간에게 투여되는 용량은 (전술한 바와 같이) 합리적인 기간에 걸쳐 포유 동물에서 치료 반응에 영향을 미치기에 충분해야한다. 당업자는, 정확한 용량 및 조성물 및 가장 적절한 전달 양생법의 선택이 그 중에서도 제형의 약리학적 특성, 치료되는 병태의 본질 및 중증도, 및 수령인의 물리적 병태 및 정신력 뿐만 아니라 치료받는 환자의 연령, 병태, 체중, 성별 및 반응, 및 질환의 단계/중증도 뿐만 아니라 환자들 간의 유전적 차이에 의해 영향을 받을 것임을 인식할 것이다.

본원에 기술된 용도 및 방법에서, MAP 펩티드 및 이의 염은 또한 염증 및/또는 염증성 장애 (다른 항염증제)의 치료에 유용한 하나 이상의 활성 성분과 조합될 수 있다. 따라서, 이러한 환자는 또한 하나 이상의 이러한 다른 활성 성분의 투여에 기초하여 요법을 (및/또는 이미) 받고 있을 수 있으며, 이는 MAP 펩티드/염을 이용한 치료 전에, 추가로 및/또는 후에 본원에 언급된 하나 이상의 이러한 활성 성분의 처방된 용량을 투여받는 것을 의미한다.

염증의 치료에서 MAP 펩티드/이의 염과 조합하여 사용될 수 있는 이러한 항염증제는 염증 및/또는 증상 중 하나로서 염증을 특징으로 하는 질환의 치료에 유용한 치료제를 포함한다. 치료될 병태에 따라, 이러한 항염증제는 또한 NSAID, 류코트리엔 수용체 길항제 (예컨대, 몬테루카스트), 코르티코스테로이드, 진통제 및 특정 효소, 예컨대, 이하에 기술된 트립신을 포함할 수 있다. MAP 펩티드/염은 또한 류코트리엔 B4(LTB4)와 조합될 수 있다.

이 문맥에서, MAP 펩티드/염은 또한 하나 이상의 홍합 MAP로 염증을 치료하는데 사용하기 위해 조합될 수 있으며, 이는 홍합 종, 예컨대, 미틸러스 에두리스 (청색 홍합)로부터 유래될 수 있는 임의의 접착성 단백질, 예컨대, 홍합으로부터 유래되거나 유래될 수 있는 모든 서브-타입을 포함하는 전장 단백질, 예컨대, 콜라겐 pre-COL-P, pre-COL-D 및 pre-COL-NG, 홍합 족사 매트릭스 단백질 PTMP 및 DTMP, 및, 보다 바람직하게는, mfps 또는 mefps, 예컨대, mefp-2, mefp-3, mefp-4, mefp-5, mefp-6 및 특히, mefp-1를 포함하고, 임의의 이들 단백질, 예컨대, mefp의 혼합물 또는 조합을 포함한다. 상기 언급된 MAP 서브-타입의 혼합물/조합이 MAP "구성요소"로서 제공될 수 있지만, 주요 MAP 서브-타입(예컨대, mefp-1)의 순도가 임의의 이러한 혼합물의 총량의 중량 대비 25% 이상인 것이 바람직하다.

자연 발생 MAP는 예를 들어, 혼합 흡착 크로마토그래피(중국특허 제ZL200710179491.0호 참고), 카복시메틸 이온 교환 크로마토그래피(중국특허 제ZL200710179492.5호 참고), 및/또는 염석 및 투석(중국특허 제ZL200910087567.6호 참고)에 의해 제조될 수 있다. MAP의 상업적인 공급원은 USUN Bio Co. (China; MAP Medical Device®로서 판매), BD 바이오사이언스(USA), 콜로디스(South Korea) 및 바이오폴리머(Sweden)를 포함한다. MAP는 대안적으로 알려진 재조합 DNA 방법을 사용하여 생성될 수 있다.

MAP의 다른 (예컨대, 약학적으로 허용가능한) 유도체는 또한 MAP 펩티드/이의 염과 조합될 수 있으며, 예컨대, 약 500 Da 내지 약 2,000 (예컨대, 약 1,200, 예컨대, 약 800)Da의 범위의 분자량을 갖는 화합물을 포함할 수 있다. 이러한 유도체는 또한 자연 발생 MAP에서 확인되고 화학적 및/또는 생물학적 공정(예컨대, 자연 발생 MAP의 화학적 변형 또는 직접 합성)에 의해 합성될 수 있는 서열과 동일하거나 (예컨대, 경미한) 변이체인 아미노산 서열을 포함하는 다른 화합물을 포함할 수 있다. "(예컨대, 경미한) 자연 발생 MAP에서 확인된 아미노산 서열의 변형"에서, 측정 가능한 정도로 관련 자연 발생 MAP의 필수 특성에 부정적인 영향을 미치지 않는 서열의 변이를 의미한다.

MAP 펩티드/염과 조합될 수 있는 다른 바람직한 약제는 (예컨대, 상처 및 화상을 치료하기 위한) LTB4, (예컨대, 일반적으로 염증을 치료하기 위한) 몬테루카스트 및 (예컨대, 바이러스 감염과 관련된 점막의 염증을 치료하기 위한) 트립신을 포함한다.

MAP 펩티드/염은 또한 투여되는 경우 부작용으로서 염증을 일으키는 것으로 알려진 다른 치료제와 조합될 수 있다.

MAP 펩티드/염이 이러한 방법으로 다른 치료제와 "조합"되는 경우, 활성 성분은 동일한 제형으로 함께 투여되거나, 상이한 제형으로 개별적으로 (동시 또는 순차적으로) 투여될 수 있다.

이러한 조합 생성물은 다른 치료제와 함께 MAP 펩티드 및 이의 염의 투여를 제공하고, 따라서 별도의 제형으로서 제시될 수 있으며, 여기서 이들 제형 중 하나 이상은 MAP 펩티드/염을 포함하고, 하나 이상은 다른 치료제를 포함하거나, 조합 제제(즉, MAP 펩티드 및 다른 치료제를 포함하는 단일 제형으로서 제시됨)로서 제시될 수 있다(즉, 제형화될 수 있다).

따라서, 다음이 추가로 제공된다:

(1) MAP 펩티드 또는 이의 염을 포함하는 약학 제형; 다른 소염제 또는 부작용으로 염증을 일으키는 것으로 알려진 약제; 및 약학적으로 허용가능한 보조제, 희석제 또는 담체 (이하, 제형은 "조합 제제"로서 지칭됨); 및

(2) 키트 중 다음 구성 요소를 포함하는 부품으로서,

(A) 약학적으로 허용가능한 보조제, 희석제 또는 담체와 혼합된 MAP 펩티드 또는 이의 염을 포함하는 약학 제형; 및

(B) 약학적으로 허용가능한 보조제, 희석제 또는 담체와 혼합된, 다른 항염증제 또는 부작용으로서 염증을 일으키는 것으로 알려진 약제를 포함하는 약학 제형

을 포함하고, 구성 요소 (A) 및 (B)는 각각, 다른 것과 함께 투여되기에 적합한 형태로 제공된다.

예를 들어, 활성 성분의 농도 및/또는 용량, 분자량 또는 pH와 같은 양의 맥락에서 "약"이라는 단어가 본원에 사용되는 경우, 이러한 변수는 근사치이며, 여기에 명시된 수로부터 ± 10%, 예컨대, ± 5%, 바람직하게는 ± 2% (예컨대, ± 1%)로 변할 수 있음을 이해할 것이다. 이와 관련하여, 용어 "약 10%"는 예컨대, 숫자 10에 대해 ± 10%, 즉, 9% 내지 11%를 의미한다.

MAP 펩티드/염은, 그 병태가 그 자체가 유기 염증성 질환인지 또는 염증 (예컨대, 상처, 화상 또는 바이러스 감염)과 관련되거나 특징이 있는지 여부에 관계없이, 염증을 특징으로 하는 다양한 병태에서 사용될 수 있다는 이점을 갖는다.

본원에 기술된 용도 및 방법은 또한 상기 언급된 병태의 치료에서, 염증성 질환 또는 다른 치료에 사용하기 위한 선행 기술에 공지된 유사한 방법 (치료)에 비해, 의사 및/또는 환자에게 보다 편리하고, 보다 효과적이고, 보다 독성이 적고, 보다 넓은 범위의 활성을 갖고, 보다 강력하고, 보다 적은 부작용을 유발한다는 점 또는 다른 유용한 약리학적 특성을 가질 수 있다는 점에서 이점을 가질 수 있다.

본 발명은 하기 실시예에 의해 설명되며, 도 1 및 2는 각각 실시예 1 및 2에 따라 마우스에서 유도된 공기 주머니로부터의 삼출물로부터 수득된 다양한 염증성 마커에 대한 ELISA 테스트 결과를 나타내고, 도 3은 급성 상처 마우스 모델에서 다양한 제형에 대한 상처 치유를 나타낸다.

실시예

실시예 1

공기 주머니(air pouch) 모델

체중이 20 내지 30g인 건강한 성체 수컷 C57BL/6 마우스는 중국 난징 대학교의 난징 생물 의학 연구소(NBRI)에 의해 공급되었다. 실험을 수행하기 전에, 마우스를 표준화된 조건 하에서 (12시간 주기의 명암으로 일정한 온도 또는 22 ± 2℃에서) 수용하였고, 약 일주일 동안 물과 함께 표준 마우스 식이를 공급하였다.

전신 마취는 복강 내 3% 염소 수화물(Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd., Shanghai, China); 1mL/체중의 10g을 사용하여 유도하였다. 등 전체의 모발을 멸균 공기 주입 1일 전에 면도하고 탈모시켰다.

공기 주머니는 마우스의 견갑골 사이(intrascapular) 영역 내에 멸균 공기(5mL)을 피하 주입하여 생성되었다. 3일 후, 주머니를 유지하기 위해 또 다른 공기 주입(3mL)을 수행하였다. 이러한 최종 주입 후 3일차에 급성 염증을 유도하기 위해, 동물은 멸균된 카라기난 용액(CP Kelco, Taixing, Jiangsu Province, China; 1%, 0.5mL; 카라기난 분말 0.1g을 10mL의 0.9% 식염수 용액을 함유하는 비커에 첨가하고 교반함으로써 생성됨)의 주입을 받았다. 마우스는, 카라기난을 피하 공기 주머니 내에 주입하기 1시간 전 및 23시간 후에 테스트 샘플 또는 비히클로 전처리되었다. 동물을, 카라기난 주입 후 24시간 째에 희생시켰다.

공기 주머니로부터 피부 생검을 획득하였다. 생검의 일부를 포르말린에 고정시키고(총 부피 500mL까지 40% 포름알데히드 용액(Nanchang Rain Dew Experimental Equipment Co., Ltd., Nanchang, Hubei Provence, China) 50mL에 초순수를 첨가함으로써 생성됨), 파라핀 왁스에 조직학적 포매, 절편 및 염색에 의해 분석하였다.

공동을 4mL의 멸균 인산 완충액(pH 7.4; 4g의 NaCl, 0.1g의 KCl, 1.749g의 Na₂HPO₄·12H₂O 및 0.1g의 KH₂PO₄를 초순수에 용해시키고, HCl로 pH를 7.4로 조정하고, 물로 총 부피 500mL로 희석함으로써 제조함)으로 세척하였다.

삼출물을 수집하고 부피를 정량화하였다. 세포의 총 수는 조혈계(ADVIA 2120 Hematology System, Siemens Healthineers)로 측정하였다. 삼출물을 4℃에서 3000rpm으로 10분 동안 원심 분리하고, 상청액을 수집하고 표준 ELISA 테스트 키트 (Dakewe Biotech Co., Beijing, China로부터의 Biolegend^TM 또는 Abcam^TM, Abcam (Shanghai) Trading Co. Ltd, China) 및 조직 괴사 인자 알파(TNF-α), 인터루킨 1 베타(IL-1β), 인터루킨 6(IL-6), 인터루킨 10(IL-10), 프로스타글란딘 E2(PGE2), 인터페론 감마(IFN-γ) 및 5-하이드록시트립타민(5-HT; 세로토닌)을 위한 ELISA 판독기(SH-1000 Hitachi, Japan)를 사용하여 ELISA 분석을 위해 -20℃에서 보관하였다.

모델을 검증하기 위해 일부 예비 실험을 수행한 후, 하기 표 1에 따라 테스트 샘플 또는 비히클을 투여함으로써 마우스를 처리하는 실험을 수행하였다.

표 1에서, M1-B, M2-B, M1-A 및 M2-A 샘플은 표에 명시된 바와 같이 카라기난 주입과 비교하여 상이한 시간에 투여되는 특정 농도의 MAP(Mefp-1) 용액이다. 용액을 다음과 같이 제조하였다. 푸른 홍합은 중국 산둥성 연안 지역에서 수확되었다. 홍합 족사를 수집하고, 작은 조각으로 절단하고, 4mol/L의 수성 우레아 중 5% 아세트산을 포함하는 추출 완충액에서 균질화시켰다. 조추출물을 원심 분리 후 수집한 다음 액체 크로마토래피로 정제하였다. 정제된 단백질(반제품; 농도 8mg/mL; HPLC로 측정한 순도 91.72%; pH 4.2)을 0℃에서 보관하였다. 아래에 사용된 용액은 식염수 용액을 이 반제품에 첨가하여 표 1에 기술된 농도를 수득함으로써 제조되었다.

또한 표 1에서, "테스트"는 MAP 펩티드이고, 이는 스웨덴 Innovagen AB로부터 수득되었다. 펩티드는 관련 Mefp-1 아미노산 서열에 따라 합성되었다. 펩티드 분말을 -20℃에서 보관하고, 식염수에 pH 5.5, 3.0mg/mL의 농도로 용해시켰다.

덱사메타손(MedChemExpress, Shanghai, China)을 분말 형태로 수득하고 초순수에 용해시켜 표 1에 기술된 농도의 용액을 수득하였다.

표 1에 열거된 모든 물질은 공기 주머니에 직접 주입함으로써 국소적으로 투여하였다.

표 1

각 그룹에 대한 삼출물의 부피 및 공기 주머니 벽의 중량(평균 ± SD)는 아래 표 2에 정리되어 있다.

표 2

총 세포 갯수 및 분류(x10⁶/mL)는 하기 표 3에 정리되어 있다.

표 3

조직학적 표본을 분석하고 염증 점수, 운동 점수, 부종 점수 및 운동 점수를 다음과 같이 추정하였다.

HE 염색된 슬라이스를 광학 현미경 하에서 관찰하고 인지된 염증 수준(영역에 흩어져 있는 소량의 염증 세포만 보이는 경우 - 1점(경증); 많은 염증 세포가 관찰되는 경우 - 2점(중간); 및 확산 침윤이 있는 경우 - 3점(중증))에 따라 점수(1, 2 또는 3점)를 매겼다. 전반적인 관찰 후 부종 수준 (가장 중증인 경우 3점, 경증인 경우 1점)에 대해 유사한 점수 시스템을 사용하였다. 운동성 점수는 호중구의 밀도를 나타내며, 이는 염증성 세포에 사용된 것과 동일한 방법론을 사용하였다.

표 4

대조군에서, 주머니 벽은 소량의 흩어진 염증성 세포 침윤, 경증 부종을 나타내었고 명백한 호중구 침윤은 나타내지 않았다.

모델군에서, 주머니 벽은 전체 층에서 중간 내지 중증의 만성 염증 세포 침윤, 중간 내지 중증 부종 및 흩어진 호중구 침윤을 나타내었다.

양성 대조군에서, 주머니 벽은 중간 만성 염증 세포 침윤, 중간 간질성 부종 및 소량의 호중구 침윤을 나타내었다.

M1-B군에서, 주머니 벽은 전체 층에서 중간 내지 중증 만성 염증성 세포 침윤, 중간 내지 중증 부종 및 소량의 호중구 침윤을 나타내었다.

M2-B군에서, 주머니 벽은 중간 부종 및 소량의 호중구 침윤과 함께 전체 층에서 중간 만성 염증성 세포 침윤을 나타내었다.

테스트(MAP 펩티드) 군에서, 주머니 벽은 경증 내지 중간 만성 염증성 세포 침윤, 간질 부종, 소량의 호중구 침윤을 나타내었다.

M1-A 군에서, 주머니 벽은 경증 만성 염증성 세포 침윤, 경증 부종 및 일부 호중구 침윤을 나타내었다.

M2-A 군에서, 주머니 벽은 중간 만성 염증성 세포 침윤, 중간 간질 부종 및 소량의 호중구 침윤을 나타내었다.

TNF-α, IL-6, IL-10 및 IFN-γ에 대한 삼출물의 ELISA 테스트 결과는 항상 유사한 변이 경향으로 안정하고 높은 반응을 나타냈다. TNF-α, IL-6 및 IFN-γ(± SD)에 대한 결과는 아래 표 5에 표로 정리되어 있으며 도 1에 그래픽으로 표시되어 있다.

표 5

실시예 2

공기 주머니 모델 II

상기 실시예 1에 기술된 것과 본질적으로 동일한 절차를 따라, 하기 표 6에 따른 테스트 샘플 또는 비히클을 투여함으로써 마우스를 처리하였다.

이 실시예에서, MAP 펩티드 분말을 pH 5.5에서 0.6mg/mL의 농도로 식염수에 용해시켰다. 이어서, 0.5mL의 용액을 각각의 군의 공기 주머니 내에 주입하였다.

표 6

조직학적 표본을 표 7에 나타낸 바와 같이 상기 실시예 1에 요약된 바와 같이 분석하고 점수를 매겼다.

표 7

이 실시예에서, ELISA 분석은 TNF-α, IL-1β 및 IL-6에 대해 수행되었으며, 이는 도 2에 그래프로 도시되어 있다. 결과는 MAP 펩티드가 매우 강력한 항-염증 효과를 나타냄을 보여주었다.

실시예 3

급성 상처 모델

6-8주령 수컷 C57BL/6 마우스는 Changzhou Cvens Experimental Animal Co. Ltd(Changzhou, Jiangsu Province, China)에 의해 공급되었다. 임의의 실험을 수행하기 전에, 마우스를 표준화된 조건 하에서 (12시간 주기의 명암으로 22 ± 2℃의 일정한 온도에서) 수용하였고, 약 일주일 동안 물과 함께 표준 마우스 식이를 공급하였다.

전신 마취는 복강 내 3% 염소 수화물(1mL/10g의 체중)을 사용하여 유도하였다. 등의 모발을 유아 털 면도기로 면도하고 크림으로 탈모시켰다. 피부 부위를 닦아내고 75% 알콜로 2회 멸균하였다.

직경 8mm의 EMS 피부 생검 펀치(Electron Microscopy Sciences, P.O. Box 550, 1560 Industry Road, Hatfield, PA, USA)를 사용하여 등 중앙선에 대한 각 측면에 둥근 상처를 입혔다. 피부의 전체 두께를 제거하고 상처의 깊이가 근막에 도달하였다. 상처는 봉합사없이 열린 채로 두었다.

상이한 약물을 하기 표 8에 나타낸 바와 같이, 0일차부터 12일차까지 매일 1회, 50μL/상처로 국소 투여하였다. 대조군은 상처를 입지 않았다. 모델군은 동일한 양의 정상 식염수가 제공되었다. 각각의 군에는 12 마리의 마우스가 있었다.

이 실험을 위해, GL Biochem (Shanghai) Ltd.로부터 MAP 펩티드를 수득하였다. 펩티드 분말을 -20℃에서 보관하고 식염수에 33μg/mL의 농도로 용해시켰다.

20μL의 각각의 용액을 관련군에서 각각의 상처 표면 상에 도포하였다.

표 8

약물 투여 후 상처를 거즈 및 투명한 드레서로 드레싱하였다. 0일차부터 이틀마다 각각의 상처에 대한 사진을 찍었다. 사진을 컴퓨터로 스캔하고, 상처 부위를 ImageJ 이미지 분석 소프트웨어(National Institutes of Health, China)를 사용하여 계산하였다.

0일차부터 이틀마다 각각의 상처에 대한 사진을 찍었다. 상처 치유는 상처 수축률(WCR)에 의해 계산되었다

WCR = (A₀-A_t)/A₀ × 100%

여기서 A₀ 및 A_t는 각각 0일차의 초기 영역과 측정 시기(시간 t)의 상처 영역을 지칭한다.

상처 치유에 대한 MAP 펩티드의 효과는 표 9 및 도 3에 도시되어 있으며, 이는 상이한 군에서의 WCR을 나타낸다(표 9의 경우에는 ± SD).

표 9

상기 데이터는 MAP 펩티드가 MAP보다 상처 치유에 더 강한 영향을 미친다는 것을 보여준다. MAP 펩티드 개선율은 (WCR MAP 펩티드 군 - WCR MAP 군)/ WCR MAP 군 x 100%로 정의된다. 6일차는 MAP 군보다 52.96% 더 크다.

각각의 군에서 상처 후 4일차 및 7일차에 각각 3마리의 마우스를 경추 탈구에 의해 희생시켰다. 상처 치유를 관찰하기 위해 2마리의 마우스를 14일 동안 유지시켰다. 상처 조직은 상처를 생성하는데 사용된 것과 동일한 생검 펀치에 의해 만들어졌다. 이어서, 샘플의 중심으로부터 5mm의 조직을 잘라 내고 10% 중성 완충된 포르말린 (Nanchang Rain Dew Experimental Equipment Co., Ltd., Nanchang, Hubei Provence, China)에 보존하고 파라핀 왁스에서 조직학적 포매(HE), 절편 및 염색에 의해 분석하였다.

HE 및 Masson 염색된 파라핀 절편을 광학 현미경 하에서 관찰하였다. 피부 재생, 섬유 아세포 증식, 콜라겐 재생 점수 및 염증 점수를 추정하였다.

다른 샘플을 검출하기 위해 나머지 샘플을 -80℃에서 보관하였다. 조직을 작은 조각으로 절단하고 액체 질소를 첨가하여 취성(brittleness)을 증가시켰다. 9mL의 일반 식염수를 1g의 조직에 첨가한 다음, Tissuelyser(Shanghai Jingxin Industrial Development Co., Ltd., Shanghai, China)를 사용하여 55Hz에서 60초 동안 분쇄하고 4℃, 8000rpm에서 10분 동안 원심분리하였다.

상층액을 수집하고 추출된 단백질을 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 및 하이드록시프롤린(Hyp) 분석을 위한 표준 ELISA 테스트 키트 및 ELISA 판독기(SH-1000 Hitachi, Japan)를 사용하여 ELISA 분석에 사용하였다. ELISA 키트는 Beijing 4A Biotech Co., Ltd. (Beijing, China)로부터 구입하였다.

실시예 4

다형성 광 발진을 치료하기 위한 MAP 펩티드 액체 스프레이

MAP 펩티드를 주입을 위해 물에 용해시켰다(WFI; prepared from TC-RO-0.25T/h-2 water treatment system, Yangzhou Tiancheng Water Treatment Devices & Engineering Co., Ltd., Yangzhou, China). 용액의 농도는 1.5mg/mL이었다. 용액을 분무 장치에 로딩시켰다.

연구에 등록된 대상체는 다형성 광 발진(햇빛에 발달된 민감도를 갖는 사람들의 태양 노출로 인한 발진으로 특징지어지는 염증 병태)으로 진단되었다. 치료 이전에 환자는 피부 발적, 구진, 가려움증 및 종창을 포함한 증상을 나타냈다.

대상체는 안면 세정 후 아침과 저녁에 액체 스프레이를 사용해야 했다.

MAP 펩티드 스프레이의 사용은 1분 이내에 가려움증을 경감시키고 불쾌감을 억제시켰다. 관찰된 홍반의 대부분은 1분 이내에 완화되었다. 테스트된 대상체의 50%가 1분 이내에 가려움이 완전히 경감되었다. 50% 대상체의 홍반은 몇 시간 안에 완전히 사라졌다.

MAP(WFI에서 동일한 농도의 스프레이)를 포함하는 유사한 용액으로 치료하는 것과 비교하여, MAP 펩티드는 이 조건에서 훨씬 더 빠른 홍반 완화 효율을 나타냄을 관찰하였다.

실시예 5

(일반 감기를 치료하기 위한) MAP 펩티드 스프레이

MAP 펩티드(30mg)를 10mL의 물에 용해시켰다. 트립신(30mg; Sichuan Deebio Pharmacutical Co. Ltd., Guanhan, China)을 다른 10mL의 물에 용해시켰다.

칼슘 클로라이드(0.1g), 에탄올(0.5g), 수용성 멘톨(0.01g), 락트산 0.01g 및 글리세롤(30g) (모두 Sinopharm Chemical Reagent Co. Ltd)을 49.32mL의 물에 함께 혼합하였다.

MAP 펩티드 및 트립신을 함유하는 용액을 교반하면서 혼합물에 첨가하여 분무용 액체를 제공하였다.

실시예 6

흡입을 위한 MAP 펩티드/Trpysin 에어로졸

에어로졸 제형은 이번에는 글리세롤 없이 총 99.32mL의 물에서, 20mg의 MAP 펩티드 및 30mg의 트립신으로부터, 상기 실시예 5에 기술된 바와 같이 본질적으로 제조되었다.

Claims

염증, 염증성 장애(inflammatory disorder) 및/또는 염증을 특징으로 하는 장애 또는 병태의 치료 용도를 위한 화합물 Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-DOPA-Lys 또는 이의 염.
염증, 염증성 장애 및/또는 염증을 특징으로 하는 장애 또는 병태의 치료용 의약의 제조를 위한, 화합물 Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-DOPA-Lys 또는 이의 염의 용도.
염증, 염증성 장애 및/또는 염증을 특징으로 하는 장애 또는 병태의 치료 방법으로서, 이러한 치료를 필요로 하는 환자에게 화합물 Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-DOPA-Lys 또는 이의 염의 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
제1항, 제2항 내지는 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 염증성 장애가 건선, 여드름, 습진 및 피부염으로부터 선택되는, 용도를 위한 화합물, 용도 또는 방법.
제4항에 있어서,
상기 피부염이 아토피성 피부염인, 용도를 위한 화합물, 용도 또는 방법.
제4항에 있어서, 염증을 특징으로 하는 병태 또는 장애가 상처 또는 화상인, 용도를 위한 화합물, 용도 또는 방법.
제6항에 있어서, 상기 상처가 찰과상, 긁힘, 절개, 열상, 피부 천자, 결출, 타박상, 흉터 또는 물집인, 용도를 위한 화합물, 용도 또는 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-DOPA-Lys 또는 이의 염이 국소 제형의 형태로 국소적으로 투여되는, 용도를 위한 화합물, 용도 또는 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 염증, 염증성 장애 및/또는 염증을 특징으로 하는 병태가 피부에 직접적인 국소 투여 방식에 의해 치료되는, 용도를 위한 화합물, 용도 또는 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 염증, 염증성 장애 및/또는 염증을 특징으로 하는 병태가 점막 표면으로의 직접적인 국소 투여 방식에 의해 치료되는, 용도를 위한 화합물, 용도 또는 방법.
Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-DOPA-Lys 또는 이의 염을, 약학적으로 또는 화장품학적으로(cosmetically) 허용가능한 보조제(adjuvant), 희석제 또는 담체와 혼합하여 포함하는, 조성물.
제11항에 있어서, 염증 부위로의 국소 투여에 적합한, 조성물.
제12항에 있어서, 상기 염증 부위가 피부 또는 점막 표면인, 조성물.
염증, 염증성 장애 및/또는 염증을 특징으로 하는 장애 또는 병태의 치료용 의약의 제조를 위한, 제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 정의된 조성물의 용도.
제14항에 있어서, 상기 염증성 장애 또는 염증을 특징으로 하는 병태 또는 장애가 제4항 내지 제7항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 것인, 용도.