CN104288093B - 纳米药物透皮制剂在肿瘤中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及纳米药物透皮制剂的应用，所述的纳米药物透皮制剂在制备治疗肿瘤药物中的应用，所述的纳米药物透皮制剂是由下列方法制备得到的，先将药物制备成纳米药物，然后再将纳米药物制备成水凝胶透皮制剂、软膏透皮制剂或微针透皮制剂。本发明选择了合适的凝胶基质、软膏基质、微针材料、促透剂等材料，制备的纳米药物透皮制剂使用方便，具有很好的生物相容性和较高的生物利用度，提高病人的适应性；该纳米药物透皮制剂能降低病变细胞的耐药性，治疗效果好。

Description

纳米药物透皮制剂在肿瘤中的应用

本申请是纳米药物透皮制剂及其制备方法的分案申请，原申请的申请日：2013年5月31日、申请号：201310211362.0、发明创造名称：纳米药物透皮制剂及其制备方法。

技术领域

本发明涉及制药技术领域，具体地说，是纳米药物透皮制剂在肿瘤中的应用。

背景技术

制药行业从药物发现，到临床的应用，最后一个环节是药物制剂。其中有一部分药物需要长期给药才能治愈，还有一部分需要靶向等局部给药。要达到这些目的，原料药必须要制备成相应的剂型。对于体外局部病灶，需要局部体表给药，如小孩血管瘤疾病，只需要局部给药。

血管瘤是小孩常见的一种疾病，新生婴儿发病率为2%～3%，0～1岁发病率为10%左右，早产或偏轻的新生儿发病率约为20%～30%。目前有手术治疗、激光治疗等，但是这些方法均有不同程度的毒副作用。2008年《新英格兰医学》杂志报道了口服普萘洛尔（心得安）能起到很好的疗效，但是口服普萘洛尔存在潜在的心脏毒副作用。外用的擦剂、软膏剂或凝胶剂可根据需要局部给药，提高药物局部浓度，延长药物的释放或扩散过程，毒性低、起效快且使用方便。中国专利申请CN201210420731.2，申请公布日2013年1月16日，公开了一种治疗婴幼儿浅表血管瘤的盐酸普萘洛尔凝胶，由于是单个盐酸普萘洛尔分子起治疗作用，对于肿瘤来说，很容易产生耐药性，导致不再起作用，甚至治疗失败。

为了克服这个久攻不克的问题，需要一种新的药物制剂，不仅能解决普萘洛尔存在的潜在心脏毒副作用的问题，还能直接杀死肿瘤细胞而不至于产生耐药性。除了普萘洛尔，对于其他可透皮治疗的药物，也有必要制备成这样的透皮制剂。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种纳米药物透皮制剂在制备治疗肿瘤药物中的应用。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

一种纳米药物透皮制剂在制备治疗肿瘤药物中的应用，所述的纳米药物透皮制剂是由下列方法制备得到的，所述方法步骤如下：

（1）将药物制备成纳米药物，所述药物在纳米药物中的重量百分比为0.1%～90%，优选为10%～50%，所述的纳米药物的粒径为10～5000纳米，优选为10～500纳米；

（2）将步骤（1）制备的纳米药物按照1:1～1:10的重量比分散在重量百分比浓度为0.5%～80%的水凝胶溶液中，水凝胶溶液的浓度优选为5%～30%（w/w），同时加入促透剂、防腐剂和保湿剂，充分混匀后放到0～4℃保存，然后放到－40～－20℃预冻4～12小时，其中0～4℃保存和－40～－20℃预冻步骤按顺序可重复1～4次，最后再置于0～4℃保存得到纳米药物水凝胶透皮制剂，混匀方式可选择乳化、涡旋或超声，混匀时间优选为1～5分钟；或

将步骤（1）制备的纳米药物按照1:1～1:10的重量比分散在软膏基质中，混合均匀后即得到纳米药物软膏透皮制剂，分散方式可选择乳化、涡旋或超声，分散时间优选为1～5分钟，所述的软膏基质选自水溶性基质、油脂性基质或乳剂型基质中的一种；或

将步骤（1）制备的纳米药物按照1:1～1:10的重量比黏附在微针表面或装载在微针内部或与微针材料充分混匀后浇制在微针模具里得到纳米药物微针透皮制剂。

步骤（1）中所述的纳米药物的制备包括以下步骤：将药物溶解在水中，然后加入多孔纳米颗粒，搅拌使得药物充分吸附在多孔纳米颗粒里，离心去除上清液，再充分洗涤，然后冻干形成纳米药物。

所述的纳米颗粒为有机纳米颗粒或无机纳米颗粒，可选自聚苯乙烯纳米颗粒、交联葡聚糖纳米颗粒、二氧化硅纳米颗粒、二氧化钛纳米颗粒、羟基磷灰石纳米颗粒、四氧化三铁纳米颗粒、三氧化二铁颗粒、金纳米颗粒、三氧化二铝纳米颗粒、碳酸钙纳米颗粒、磷酸钙纳米颗粒、碳酸镁纳米颗粒、氢氧化镁纳米颗粒或银纳米颗粒中的一种或几种。

步骤（1）中所述的纳米药物的制备包括以下步骤：将药物溶解在水中形成药物水溶液，然后将药物水溶液转移到聚乙二醇水溶液中，充分混匀后于冰箱中预冻，之后冻干，再用二氯甲烷溶解聚乙二醇并离心除去聚乙二醇得到纳米药物；或

将药物包裹在脂质体、聚合物纳米颗粒中形成纳米药物；或

将药物溶解在水中形成药物水溶液，通过加入不良的溶剂使药物以纳米颗粒的形式析出而得到纳米药物；或

将药物用超细粉粉碎仪器进行粉碎直接制备成纳米药物。

步骤（1）中所述的纳米药物的制备包括以下步骤：将药物溶解在水中，然后与含有聚乳酸-羟基乙酸-聚乙二醇的二氯甲烷溶液搅拌混匀，再转移至聚乙烯醇水溶液中并进行匀浆，形成纳米药物胶束。

步骤（2）中所述的水凝胶溶液中的凝胶基质选自聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、乙基纤维素、聚乙二醇、羧基乙烯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、交联聚丙烯酸钠、聚乳酸-聚乙二醇-聚乳酸聚合物、聚乙二醇-聚乳酸-聚乙二醇聚合物、聚乳酸-羟基乙酸-聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸聚合物、聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸-聚乙二醇聚合物、海藻酸钠、淀粉、甘油、明胶中的一种或几种。

步骤（2）中所述的促透剂选自薄荷醇、十四烷基硫酸钠、香叶醇、茴香脑或癸基甲基亚砜中的一种，所述的防腐剂选自苯甲酸钠、三氯叔丁醇、苯扎溴铵、山梨酸、羟苯乙酯或尼泊金丁酯中的一种，所述的保湿剂为甘油、丙二醇或二者的混合物。

步骤（2）中所述的软膏基质选自硬脂酸甘油酯、硬脂酸、蜂蜡、羊毛脂、凡士林、石蜡、硅酮、薄荷油、桉叶油、植物油、明胶或羧甲基纤维素钠中的一种或几种。

步骤（2）中所述的微针是指金属微针、无机微针或聚合物微针，所述的无机微针是指无机硅微针。

所述的药物包括小分子药物和大分子药物，所述的小分子药物选自普萘洛尔、阿霉素、环磷酰胺、更生霉素、博莱霉素、柔红霉素、表阿霉素、丝裂霉素、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、卡铂、卡莫司汀、司莫司汀、顺铂、依托泊苷、喜树碱及其衍生物、苯芥胆甾醇、紫杉醇及其衍生物、多西紫杉醇及其衍生物、长春碱、长春新碱、它莫西芬、哌泊舒凡、环磷酰胺、氟他胺及其衍生物、泼尼松、雷帕霉素、环孢素、左氧氟沙星、氧氟沙星或盐酸依匹斯汀中的一种，所述的大分子药物选自促红细胞生成素、重组人粒细胞集落刺激因子、粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子、疫苗、干扰素、生长激素、胰岛素、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、转化生长因子、胰岛素生长因子、血管内皮细胞生长因子、血小板生长因子、内皮生长因子、神经生长因子、骨衍生性生长因子、骨形成蛋白、组织多肽抗原、抗体、凝血因子VIII、凝血因子IX、遗传因子、反义核苷酸、小分子RNA或基因中的一种。

所述的肿瘤药物为血管瘤药物。

本发明优点在于：

第一、本发明选择了合适的凝胶基质、软膏基质、微针材料、促透剂等材料以及透皮制剂的制备方法，制备的纳米药物透皮制剂的包封率高，可以达到90％以上，克服了口服或注射等全身性给药带来的毒副作用，尤其是在治疗小孩血管瘤疾病中，可以克服普萘洛尔全身给药带来的毒副作用；

第二、采用本发明方法可制备纳米药物水凝胶透皮制剂、纳米药物软膏透皮制剂、纳米药物微针透皮制剂，这些剂型可以根据不同病情需要进行控制，且制备过程不污染环境，透皮制剂使用方便，具有很好的生物相容性和较高的生物利用度，提高病人的适应性；

第三、采用本发明方法制备纳米药物透皮制剂，可以使药物在整个制备过程和治疗过程中保持高活性而不失活，大大降低了药物突释，释放的药物可以局部高效被病变细胞摄取，从而减少药物本身的毒副作用，可以应用到各种药物透皮制剂的制备中；

第四、本发明纳米药物透皮制剂的制备方法，可以运用到各种局部治疗的药物制剂的制备及疫苗的佐剂制备中，尤其是婴幼儿血管瘤的局部治疗，可以提高肿瘤细胞摄取药物的效率，因为肿瘤细胞容易摄取颗粒状的纳米药物，一旦摄取了纳米药物，会使得肿瘤细胞的GP蛋白难于外排药物，直接杀死肿瘤细胞，而不至于产生耐药性。

附图说明

附图1是普萘洛尔纳米药物的扫描电镜图。

附图2是实施例1、对比例1和对比例2所得制剂对肿瘤细胞耐药率的影响。

附图3是实施例1、对比例1和对比例2所得制剂对裸鼠肿瘤体积大小的影响。

附图4是实施例1、对比例1和对比例2所得制剂对睑血管瘤的治疗情况，A图为用药前，B图是对比例1组治疗情况，C图是对比例2组治疗情况，D图为实施例1组治疗情况。

附图5是实施例2所得制剂对肿瘤细胞耐药率的影响。

附图6是实施例2所得制剂对裸鼠肿瘤体积大小的影响。

附图7是实施例6所得制剂对肿瘤细胞耐药率的影响。

附图8是实施例6所得制剂对裸鼠肿瘤体积大小的影响。

附图9是实施例8所得制剂对肿瘤细胞耐药率的影响。

附图10是实施例8所得制剂对裸鼠肿瘤体积大小的影响。

具体实施方式

下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。

实施例1 普萘洛尔纳米药物水凝胶透皮制剂的制备（一）

将小分子药物普萘洛尔制备成纳米药物水凝胶透皮制剂，制备过程如下：

（1）精确称取0.2g普萘洛尔溶解在10mL水中，然后加入1g多孔二氧化硅纳米颗粒，搅拌过夜使得普萘洛尔充分吸附在二氧化硅颗粒里，离心去除上清液，再充分洗涤，然后冻干形成普萘洛尔纳米药物，纳米药物的粒径为20～500纳米；

（2）制备聚乙烯醇（分子量4万）重量百分比为12%、聚乙二醇（分子量400）重量百分比为1%的水凝胶溶液；

（3）将步骤（1）制备的普萘洛尔纳米药物按照1:1的重量比分散在步骤（2）制备的水凝胶溶液中，同时加入终重量百分比浓度为0.5%的苯甲酸钠、1%的薄荷醇和5%的甘油，超声混匀2分钟；充分混匀后放到0～4℃保存，然后放到－40～－20℃预冻6小时，其中0～4℃保存和－40～－20℃预冻步骤按顺序重复2次，最后再置于0～4℃保存得到普萘洛尔纳米药物水凝胶透皮制剂。

对比例1 普萘洛尔水凝胶透皮制剂的制备

将小分子药物普萘洛尔直接制备成水凝胶透皮制剂，制备过程如下：

（1）制备聚乙烯醇（分子量4万）重量百分比为12%、聚乙二醇（分子量400）重量百分比为1%的水凝胶溶液；

（2）精确称取一定量的普萘洛尔分散在步骤（1）制备的水凝胶溶液中，确保普萘洛尔在水凝胶透皮制剂中的终浓度与实施例1中普萘洛尔的终浓度一样，同时加入终重量百分比浓度为0.5%的苯甲酸钠、1%的薄荷醇和5%的甘油，超声混匀2分钟；充分混匀后放到0～4℃保存，然后放到－40～－20℃预冻6小时，其中0～4℃保存和－40～－20℃预冻步骤按顺序重复2次，最后再置于0～4℃保存得到普萘洛尔水凝胶透皮制剂。

对比例2 普萘洛尔纳米药物普通水剂的制备

将小分子药物普萘洛尔制备成纳米药物普通水剂，制备过程如下：

（1）精确称取0.2g普萘洛尔溶解在10mL水中，然后加入1g多孔二氧化硅纳米颗粒，搅拌过夜使得普萘洛尔充分吸附在二氧化硅颗粒里，离心去除上清液，再充分洗涤，然后冻干形成普萘洛尔纳米药物，纳米药物的粒径为20～500纳米；

（2）将步骤（1）制备的普萘洛尔纳米药物按照1:1的重量比分散在水中；充分混匀后放到0～4℃保存，然后放到－40～－20℃预冻6小时，其中0～4℃保存和－40～－20℃预冻步骤按顺序重复2次，最后再置于0～4℃保存得到普萘洛尔纳米药物普通水剂。

对实施例1制备得到的普萘洛尔纳米药物水凝胶透皮制剂、对比例1制备得到的普萘洛尔水凝胶透皮制剂和对比例2制备得到的普萘洛尔纳米药物普通水剂进行形貌表征、耐药性和抗癌测试。图1所示为普萘洛尔纳米药物的扫描电镜图，微粒形态好，纳米药物的粒径为20～500纳米。实施例1和对比例1制备的药剂均匀性好，涂抹比较容易，对比例2制备的药剂稳定性较差，药物沉淀严重。

肿瘤细胞耐药率的测定：将实施例1、对比例1和对比例2制得的药物制剂与细胞培养一段时间，总的细胞个数控制在5×10⁵～20×10⁵范围内，确保各组普萘洛尔的用量一致，然后用流式细胞术检测耐药肿瘤细胞数，耐药率=（耐药肿瘤细胞数/总肿瘤细胞数）×100%。具体步骤如下：肿瘤细胞MCF27/A培养于含10%（w/w）小牛血清、1%（w/w）青霉素、2%（w/w）链霉素、1%（w/w）普萘洛尔、5mg/L阿霉素的RPMI21640 培养液中，在37℃、5% CO₂的条件下培养。当MCF27/A细胞生长到70%～80%满底后用胰酶消化，收获在1mL的EP 管中，每个EP管中约含7×10⁵个细胞。用PBS清洗3次后，离心去上清液，细胞用FACS^TM透化溶液于避光、室温下孵育，使细胞膜更具渗透性。然后细胞液于400g下离心3min，弃去上清悬浮物。细胞用PBS清洗1次后加入100μL JBS21工作液于37℃下孵育一定时间，再用PBSBN清洗2次，弃去未结合的JBS21，避免非特异性吸附，然后添加100μL GAMIF工作液于37℃孵育后，用PBSBN清洗3次，以排除GAMIF所造成的非特异性吸附。处理后的细胞用1mL PBS悬浮，4℃放置待检。K562/A细胞直接收获于1mL的EP管中，后续处理同MCF27/A细胞。MCF27/A的对照组细胞也同上法处理，只是不添加JBS21抗体而用相同体积的PBSBN代替。相同处理条件下的细胞均检测2次。结果如图2所示，从图中可看出，相比对比例1和对比例2，实施例1制备的普萘洛尔纳米药物水凝胶透皮制剂的耐药率最低。

对裸鼠的肿瘤进行用药，用棉签蘸实施例1、对比例1和对比例2的药物制剂局部涂擦，每天3次，间隔6～8小时，观察肿瘤的体积变化。结果如图3所示，实施例1组的肿瘤体积最小。同时用于临床治疗睑血管瘤，给药方法：用棉签蘸药物制剂局部涂擦，每天3次，间隔6～8小时，结果如图4，结果发现实施例1组的制剂治愈的最快，对比例的对照组仍然没有治愈好。说明实施例1制备的普萘洛尔纳米药物水凝胶透皮制剂的抗肿瘤效果明显优于对比例1和对比例2的制剂。

结果表明，采用本发明方法先将药物制备成纳米药物，再进一步做成水凝胶透皮制剂可以局部给药治疗，能克服肿瘤细胞的耐药性，降低普萘洛尔全身毒副作用，抗肿瘤效果好且使用方便。

实施例2 普萘洛尔纳米药物水凝胶透皮制剂的制备（二）

将小分子药物普萘洛尔制备成纳米药物水凝胶透皮制剂，制备过程如下：

（1）精确称取10g普萘洛尔溶解在100mL水中，然后加入20g多孔羟基磷灰石纳米颗粒，搅拌过夜使得普萘洛尔充分吸附在羟基磷灰石颗粒里，离心去除上清液，再充分洗涤，然后冻干形成普萘洛尔纳米药物，纳米药物的粒径为20～700纳米；

（2）制备聚乙烯醇（分子量4万）重量百分比为4%、聚乙烯醇（分子量13.6万）重量百分比为4%、聚乙二醇（分子量400）重量百分比为2%的水凝胶溶液；

（3）将步骤（1）制备的普萘洛尔纳米药物按照1:5的重量比分散在步骤（2）制备的水凝胶溶液中，同时加入终重量百分比浓度为0.5%的苯甲酸钠、1%的十四烷基硫酸钠、1.5%的甘油和3.5%的丙二醇，涡旋混匀5分钟；充分混匀后放到0～4℃保存，然后放到－40～－20℃预冻4小时，其中0～4℃保存和－40～－20℃预冻步骤按顺序重复3次，最后再置于0～4℃保存得到普萘洛尔纳米药物水凝胶透皮制剂。

对实施例2制备得到的普萘洛尔纳米药物水凝胶透皮制剂进行耐药性和抗癌测试。肿瘤细胞耐药率和抗肿瘤效果的测定方式同实施例1，图5所示为实施例2制备的普萘洛尔纳米药物水凝胶透皮制剂的耐药率，从图中可看出，耐药率较低。图6所示为对裸鼠肿瘤体积大小的影响，结果表明抗肿瘤效果较好。采用本发明方法先将药物制备成纳米药物，再进一步做成水凝胶透皮制剂可以局部给药治疗，能克服肿瘤细胞的耐药性，降低普萘洛尔全身毒副作用，抗肿瘤效果好且使用方便。

实施例3 普萘洛尔纳米药物水凝胶透皮制剂的制备（三）

将小分子药物普萘洛尔制备成纳米药物水凝胶透皮制剂，制备过程如下：

（1）精确称取10g普萘洛尔溶解在100mL水中，然后加入40g多孔银纳米颗粒，搅拌过夜使得普萘洛尔充分吸附在银纳米颗粒里，离心去除上清液，再充分洗涤，然后冻干形成普萘洛尔纳米药物，纳米药物的粒径为10～1000纳米；

（2）制备羧甲基纤维素钠重量百分比为8%、聚乙烯醇（分子量10万）重量百分比为5%、聚乙二醇（分子量400）重量百分比为1.5%的水凝胶溶液；

（3）将步骤（1）制备的普萘洛尔纳米药物按照1:10的重量比分散在步骤（2）制备的水凝胶溶液中，同时加入终重量百分比浓度为0.5%的苯甲酸钠、1%的茴香脑、2%的甘油和1.5%的丙二醇，涡旋混匀4分钟；充分混匀后放到0～4℃保存，然后放到－40～－20℃预冻10小时，其中0～4℃保存和－40～－20℃预冻步骤按顺序重复4次，最后再置于0～4℃保存得到普萘洛尔纳米药物水凝胶透皮制剂。

实施例4 普萘洛尔纳米药物水凝胶透皮制剂的制备（四）

将小分子药物普萘洛尔制备成纳米药物水凝胶透皮制剂，制备过程如下：

（1）精确称取2g普萘洛尔溶解在10mL水中形成药物水溶液，然后将药物水溶液转移到10mL浓度为5%（w/w）的聚乙二醇（分子量8000）水溶液中，充分混匀，然后在－80℃冰箱预冻12小时，之后冻干，再用二氯甲烷溶解聚乙二醇并离心除去聚乙二醇得到纳米药物，纳米药物的粒径为50～5000纳米；

（2）制备聚乙烯醇（分子量4万）重量百分比为12%、聚乙二醇（分子量400）重量百分比为1%的水凝胶溶液；

（3）将步骤（1）制备的普萘洛尔纳米药物按照1:8的重量比分散在步骤（2）制备的水凝胶溶液中，同时加入终重量百分比浓度为0.5%的苯甲酸钠、1%的薄荷醇和5%的甘油，超声混匀2分钟；充分混匀后放到0～4℃保存，然后放到－40～－20℃预冻6小时，其中0～4℃保存和－40～－20℃预冻步骤按顺序重复1次，最后再置于0～4℃保存得到普萘洛尔纳米药物水凝胶透皮制剂。

实施例5 普萘洛尔纳米药物水凝胶透皮制剂的制备（五）

将小分子药物普萘洛尔制备成纳米药物水凝胶透皮制剂，制备过程如下：

（1）精确称取10g普萘洛尔溶解在60mL水中，然后与含聚乳酸-羟基乙酸-聚乙二醇浓度为10%（w/w）的二氯甲烷溶液搅拌混匀，再转移至聚乙烯醇浓度为5%（w/w）的水溶液中并进行匀浆，形成纳米药物胶束；

（2）制备聚乙烯醇（分子量4万）重量百分比为4%、聚乙烯醇（分子量13.6万）重量百分比为4%、聚乙二醇（分子量400）重量百分比为2%的水凝胶溶液；

（3）将步骤（1）制备的普萘洛尔纳米药物胶束按照1:4的重量比分散在步骤（2）制备的水凝胶溶液中，同时加入终重量百分比浓度为0.5%的苯甲酸钠、1%的十四烷基硫酸钠和5%的丙二醇，涡旋混匀5分钟；充分混匀后放到0～4℃保存，然后放到－40～－20℃预冻4小时，其中0～4℃保存和－40～－20℃预冻步骤按顺序重复3次，最后再置于0～4℃保存得到普萘洛尔纳米药物水凝胶透皮制剂。

对实施例3、实施例4和实施例5制备得到的普萘洛尔纳米药物水凝胶透皮制剂进行耐药性和抗癌测试。肿瘤细胞耐药率和抗肿瘤效果的测定方式同实施例1，结果表明，制备的普萘洛尔纳米药物水凝胶透皮制剂的耐药率较低，抗肿瘤效果较好。采用本发明方法先将药物制备成纳米药物，再进一步做成水凝胶透皮制剂可以局部给药治疗，能克服肿瘤细胞的耐药性，降低普萘洛尔全身毒副作用，抗肿瘤效果好且使用方便。

实施例6 普萘洛尔纳米药物软膏透皮制剂的制备（一）

将小分子药物普萘洛尔制备成纳米药物软膏透皮制剂，制备过程如下：

（1）精确称取10g普萘洛尔溶解在50mL水中，然后加入20g多孔交联葡聚糖纳米颗粒，搅拌过夜使得普萘洛尔充分吸附在交联葡聚糖颗粒里，离心去除上清液，再充分洗涤，然后冻干形成普萘洛尔纳米药物，纳米药物的粒径为500～2000纳米；

（2）取硬脂酸甘油酯、硬脂酸、凡士林、石蜡加热熔化为油相，另将甘油及水加热至90℃，再加入十二烷基硫酸钠及羟苯乙酯溶解得到水相，水相缓缓倒入油相中，边加入边搅拌，冷凝得到软膏基质；

（3）将步骤（1）制备的普萘洛尔纳米药物按照1:9的重量比分散在步骤（2）制备的软膏基质中，充分混匀后得到普萘洛尔纳米药物软膏透皮制剂。

对实施例6制备得到的普萘洛尔纳米药物软膏透皮制剂进行耐药性和抗癌测试。肿瘤细胞耐药率和抗肿瘤效果的测定方式同实施例1，图7所示为实施例6制备的普萘洛尔纳米药物软膏透皮制剂的耐药率，从图中可看出，耐药率较低。图8所示为对裸鼠肿瘤体积大小的影响，结果表明抗肿瘤效果较好。采用本发明方法先将药物制备成纳米药物，再进一步做成软膏透皮制剂可以局部给药治疗，能克服肿瘤细胞的耐药性，降低普萘洛尔全身毒副作用，抗肿瘤效果好且使用方便。

实施例7 普萘洛尔纳米药物软膏透皮制剂的制备（二）

将小分子药物普萘洛尔制备成纳米药物软膏透皮制剂，制备过程如下：

（1）精确称取8g普萘洛尔用超细粉粉碎仪器磨碎，得到粒径为500～2000纳米的普萘洛尔纳米药物；

（2）将樟脑、薄荷脑混合研磨使之共熔，然后与薄荷油、桉叶油混合均匀，另将凡士林、石蜡、蜂蜡加热至110℃除去水分，混合后冷至70℃，加入芳香油等搅拌，最后冷却得到软膏基质；

（3）将步骤（1）制备的普萘洛尔纳米药物按照1:9的重量比分散在步骤（2）制备的软膏基质中，充分混匀后得到普萘洛尔纳米药物软膏透皮制剂。

对实施例7制备得到的普萘洛尔纳米药物软膏透皮制剂进行耐药性和抗癌测试，肿瘤细胞耐药率和抗肿瘤效果的测定方式同实施例1，结果表明采用本发明方法先将药物制备成纳米药物，再进一步做成软膏透皮制剂可以局部给药治疗，能克服肿瘤细胞的耐药性，降低普萘洛尔全身毒副作用，抗肿瘤效果好且使用方便。

实施例8 普萘洛尔纳米药物微针透皮制剂的制备（一）

将小分子药物普萘洛尔制备成纳米药物微针透皮制剂，制备过程如下：

（1）精确称取5g普萘洛尔溶解在20mL水中，然后与含聚乳酸-羟基乙酸-聚乙二醇浓度为5%（w/w）的二氯甲烷溶液搅拌混匀，再转移至聚乙烯醇浓度为5%（w/w）的水溶液中并进行匀浆，形成纳米药物胶束；

（2）将步骤（1）制备的普萘洛尔纳米药物胶束按照1:4的重量比分散在聚乙烯醇微针溶液中，混合均匀后浇制在微针模具里，然后放到－80℃预冻10小时，再转移至4℃冰箱中解冻，反复3次，最后干燥得到普萘洛尔纳米药物微针透皮制剂。

对实施例7制备得到的普萘洛尔纳米药物微针透皮制剂进行耐药性和抗癌测试。肿瘤细胞耐药率和抗肿瘤效果的测定方式同实施例1，图9所示为实施例8制备的普萘洛尔纳米药物微针透皮制剂的耐药率，从图中可看出，耐药率较低。图10所示为对裸鼠肿瘤体积大小的影响，结果表明抗肿瘤效果较好。采用本发明方法先将药物制备成纳米药物，再进一步做成微针透皮制剂可以局部给药治疗，能克服肿瘤细胞的耐药性，降低普萘洛尔全身毒副作用，抗肿瘤效果好且使用方便。

实施例9 普萘洛尔纳米药物微针透皮制剂的制备（二）

将小分子药物普萘洛尔制备成纳米药物微针透皮制剂，制备过程如下：

（1）精确称取20mg普萘洛尔制备成多糖普萘洛尔纳米颗粒，多糖纳米颗粒的制备详见中国专利：申请号200610029127.1，专利名称为“低温水相－水相乳液制备蛋白质－多糖玻璃体缓释微球的方法”；

（2）将步骤（1）制备的普萘洛尔纳米药物按照1:4的重量比分散在含有10%（w/w）空心微针、2.5%（w/w）甘油和0.5%（w/w）苯甲酸钠的水溶液中，混合均匀后浸泡10个小时，然后冻干得到普萘洛尔纳米药物微针透皮制剂。

对实施例9制备得到的普萘洛尔纳米药物微针透皮制剂进行耐药性和抗癌测试，肿瘤细胞耐药率和抗肿瘤效果的测定方式同实施例1，结果表明采用本发明方法先将药物制备成纳米药物，再进一步做成微针透皮制剂可以局部给药治疗，能克服肿瘤细胞的耐药性，降低普萘洛尔全身毒副作用，抗肿瘤效果好且使用方便。

实施例10 生长素纳米药物水凝胶透皮制剂的制备

将大分子药物生长素制备成纳米药物水凝胶透皮制剂，制备过程如下：

（1）精确称取10g生长素溶解在100mL水中，然后加入40g多孔羟基磷灰石纳米颗粒，搅拌过夜使得生长素充分吸附在羟基磷灰石纳米颗粒里，离心去除上清液，再充分洗涤，然后冻干形成生长素纳米药物，纳米药物的粒径为500～1000纳米；

（2）制备羧甲基纤维素钠重量百分比为8%、聚乙烯醇（分子量10万）重量百分比为5%、聚乙二醇（分子量400）重量百分比为1.5%的水凝胶溶液；

（3）将步骤（1）制备的生长素纳米药物按照1:10的重量比分散在步骤（2）制备的水凝胶溶液中，同时加入终重量百分比浓度为0.5%的苯甲酸钠、1%的茴香脑、2%的甘油和1.5%的丙二醇，涡旋混匀4分钟；充分混匀后放到0～4℃保存，然后放到－40～－20℃预冻10小时，其中0～4℃保存和－40～－20℃预冻步骤按顺序重复4次，最后再置于0～4℃保存得到生长素纳米药物水凝胶透皮制剂。

实施例11 生长素纳米药物软膏透皮制剂的制备

将大分子药物生长素制备成纳米药物软膏透皮制剂，制备过程如下：

（1）精确称取10g生长素溶解在50mL水中，然后加入20g多孔交联葡聚糖纳米颗粒，搅拌过夜使得生长素充分吸附在交联葡聚糖颗粒里，离心去除上清液，再充分洗涤，然后冻干形成生长素纳米药物，纳米药物的粒径为500～2000纳米；

（2）取硬脂酸甘油酯、硬脂酸、凡士林、石蜡加热熔化为油相，另将甘油及水加热至90℃，再加入十二烷基硫酸钠及羟苯乙酯溶解得到水相，水相缓缓倒入油相中，边加入边搅拌，冷凝得到软膏基质；

（3）将步骤（1）制备的生长素纳米药物按照1:9的重量比分散在步骤（2）制备的软膏基质中，充分混匀后得到生长素纳米药物软膏透皮制剂。

实施例12 生长素纳米药物微针透皮制剂的制备

将大分子药物生长素制备成纳米药物微针透皮制剂，制备过程如下：

（1）精确称取5g生长素溶解在20mL水中，然后与含聚乳酸-羟基乙酸-聚乙二醇浓度为5%（w/w）的二氯甲烷溶液搅拌混匀，再转移至聚乙烯醇浓度为5%（w/w）的水溶液中并进行匀浆，形成生长素纳米药物胶束；

（2）将步骤（1）制备的生长素纳米药物胶束按照1:4的重量比分散在聚乙烯醇微针溶液中，混合均匀后浇制在微针模具里，然后放到－80℃预冻10小时，再转移至4℃冰箱中解冻，反复3次，最后干燥得到生长素纳米药物微针透皮制剂。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (4)

1.一种纳米药物透皮制剂在制备治疗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的纳米药物透皮制剂是由下列方法制备得到的，所述方法步骤如下：

(1)将药物制备成纳米药物，所述药物在纳米药物中的重量百分比为0.1％～90％，所述的纳米药物的粒径为10～5000纳米；

(2)将步骤(1)制备的纳米药物按照1:1～1:10的重量比分散在重量百分比浓度为0.5％～80％的水凝胶溶液中，同时加入促透剂、防腐剂和保湿剂，充分混匀后放到0～4℃保存，然后放到－40～－20℃预冻4～12小时，其中0～4℃保存和－40～－20℃预冻步骤按顺序可重复1～4次，最后再置于0～4℃保存得到纳米药物水凝胶透皮制剂；或

将步骤(1)制备的纳米药物按照1:1～1:10的重量比分散在软膏基质中，混合均匀后即得到纳米药物软膏透皮制剂，所述的软膏基质选自水溶性基质、油脂性基质或乳剂型基质中的一种；或

将步骤(1)制备的纳米药物按照1:1～1:10的重量比黏附在微针表面或装载在微针内部或与微针材料充分混匀后浇制在微针模具里得到纳米药物微针透皮制剂，

步骤(2)中所述的水凝胶溶液中的凝胶基质选自聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、乙基纤维素、聚乙二醇、羧基乙烯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、交联聚丙烯酸钠、聚乳酸-聚乙二醇-聚乳酸聚合物、聚乙二醇-聚乳酸-聚乙二醇聚合物、聚乳酸-羟基乙酸-聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸聚合物、聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸-聚乙二醇聚合物、海藻酸钠、淀粉、甘油、明胶中的一种或几种；

步骤(2)中所述的促透剂选自薄荷醇、十四烷基硫酸钠、香叶醇、茴香脑或癸基甲基亚砜中的一种，所述的防腐剂选自苯甲酸钠、三氯叔丁醇、苯扎溴铵、山梨酸、羟苯乙酯或尼泊金丁酯中的一种，所述的保湿剂为甘油、丙二醇或二者的混合物；

步骤(2)中所述的软膏基质选自硬脂酸甘油酯、硬脂酸、蜂蜡、羊毛脂、凡士林、石蜡、硅酮、薄荷油、桉叶油、植物油、明胶或羧甲基纤维素钠中的一种或几种；

步骤(2)中所述的微针是指金属微针、无机微针或聚合物微针，所述的无机微针是指无机硅微针；

步骤(1)中所述的纳米药物的制备包括以下步骤：

(a)将药物溶解在水中，然后加入多孔纳米颗粒，搅拌使得药物充分吸附在多孔纳米颗粒里，离心去除上清液，再充分洗涤，然后冻干形成纳米药物；或

(b)将药物溶解在水中形成药物水溶液，然后将药物水溶液转移到聚乙二醇水溶液中，充分混匀后于冰箱中预冻，之后冻干，再用二氯甲烷溶解聚乙二醇并离心除去聚乙二醇得到纳米药物；或

(c)将药物包裹在脂质体、聚合物纳米颗粒中形成纳米药物；或

(d)将药物溶解在水中形成药物水溶液，通过加入不良的溶剂使药物以纳米颗粒的形式析出而得到纳米药物；或

(e)将药物用超细粉粉碎仪器进行粉碎直接制备成纳米药物；

所述药物为普萘洛尔。

2.根据权利要求1所述的纳米药物透皮制剂，其特征在于，所述的纳米颗粒为有机纳米颗粒或无机纳米颗粒，可选自聚苯乙烯纳米颗粒、交联葡聚糖纳米颗粒、二氧化硅纳米颗粒、二氧化钛纳米颗粒、羟基磷灰石纳米颗粒、四氧化三铁纳米颗粒、三氧化二铁颗粒、金纳米颗粒、三氧化二铝纳米颗粒、碳酸钙纳米颗粒、磷酸钙纳米颗粒、碳酸镁纳米颗粒、氢氧化镁纳米颗粒或银纳米颗粒中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的纳米药物透皮制剂，其特征在于，步骤(1)中所述的纳米药物的制备包括以下步骤：将药物溶解在水中，然后与含有聚乳酸-羟基乙酸-聚乙二醇的二氯甲烷溶液搅拌混匀，再转移至聚乙烯醇水溶液中并进行匀浆，形成纳米药物胶束。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤药物为血管瘤药物。