CN113862335A - 一种检测回复突变的探针库、检测方法以及试剂盒 - Google Patents
一种检测回复突变的探针库、检测方法以及试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113862335A CN113862335A CN202111236808.6A CN202111236808A CN113862335A CN 113862335 A CN113862335 A CN 113862335A CN 202111236808 A CN202111236808 A CN 202111236808A CN 113862335 A CN113862335 A CN 113862335A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- artificial sequence
- dna
- detecting
- probe
- mutation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Oncology (AREA)
Abstract
本发明提供一种检测BRCA1/2基因和部分同源重组修复(HRR)通路基因(PALB2、RAD51C、RAD51D)回复突变的探针及检测方法,所述DNA探针库包括一个或多个能够与BRCA1、BRCA2、PALB2、RAD51C、RAD51D基因部分外显子及相邻内含子进行杂交的DNA探针。所述DNA探针可以如SEQIDNO.1~192所示。此外,本发明提供利用该探针库BRCA1、BRCA2、PALB2、RAD51C、RAD51D基因外显子及相邻内含子进行富集及检测的方法,采用此方法与下一代测序技术(NGS)相结合可以极大地提高BRCA1、BRCA2、PALB2、RAD51C、RAD51D基因检测的敏感性,准确性与全面性。
Description
技术领域
本发明涉及基因检测领域,具体而言,本发明涉及一种检测BRCA1、BRCA2、PALB2、RAD51C、RAD51D基因回复突变的探针及检测方法。该方法可以精准地富集BRCA1、BRCA2、PALB2、RAD51C、RAD51D基因外显子突变序列,所得DNA样本库可进一步结合下一代测序技术(NGS),精准地判断病人的BRCA1、BRCA2、PALB2、RAD51C、RAD51D基因回复突变情况,并为相关肿瘤的诊断,预后,及临床治疗方案的设计提供指导及理论基础。
背景技术
同源重组修复(Homologous Recombination Repair,HRR)通路是一种DNA双链损伤的重要修复方式,其中BRCA1和BRCA2基因编码蛋白是该通路的关键蛋白,此外参与该通路的基因还包括PALB2、RAD51C、RAD51D等。如果BRCA1/2基因或其它HRR基因出现突变导致蛋白失去功能,就会引起HRR功能异常,即出现DNA同源重组缺陷(HomologousRecombination Deficiency,HRD),此类癌细胞对铂类药物和多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶抑制剂(poly adenosine diphosphate–ribose polymerase inhibitor,PARPi)PARP抑制剂的敏感性相关。PARP抑制剂基于“合成致死”效应来杀死存在错配修复基因缺陷的癌细胞。目前已有多款PARP抑制剂先后获批上市,在卵巢癌,乳腺癌,胰腺癌等治疗中取得巨大成功,在抗肿瘤领域占有重要地位。然而,PARP抑制剂治疗过程中随之而来的耐药问题也受到了研究者的关注。研究发现,PARP抑制剂耐药机制是多因素的,其中一个重要的耐药机制为:同源重组信号通路的恢复中报道较多的是BRCA1/2基因回复突变(reverse mutation)。
BRCA1/2基因回复突变是一种体细胞突变,它可以恢复现有生殖系和/或体细胞功能缺失的BRCA1/2基因突变的开放阅读框(ORF),重建BRCA蛋白功能,使细胞恢复同源重组修复的功能,从而导致细胞对PARP抑制剂和DNA损伤因子的敏感性降低。回复突变的类型包括小的插入与缺失(Indels)、单核苷酸变异(SNV)、基因内大片段缺失(Large GenomicRearrangement,LGR),且不仅与原发突变是顺式关系(cis),还呈现多克隆异质性,同一个标本的回复突变可能多达十几或几十种。目前检测大片段重排最常用的方法为多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA),但该方法通量低、周期长,无法及时出结果来指导临床治疗方案的制定。
除了BRCA1/2基因发生回复突变外,其他HRR基因也可能出现回复突变,影响治疗疗效。有研究显示,携带生殖系BRCA1、BRCA2突变患者检测到回复突变的比例分别为11%(1/9)、 24%(8/33)。除BRCA1/2外,在PALB2、RAD51C、RAD51D基因中,也检出过回复突变,同样可以恢复原有生殖系和/或体细胞功能缺失的基因突变的开放阅读框(ORF),重建蛋白功能,使细胞恢复同源重组修复的功能。
发明内容
针对上述技术问题,本发明人通过大量实验,开发了用于检测BRCA1、BRCA2、PALB2、 RAD51C、RAD51D基因回复突变的方法,该方法利用探针液相捕获、二代测序技术,不仅可以实现几千倍地富集的BRCA1、BRCA2、PALB2、RAD51C、RAD51D基因外显子及其附近内含子的DNA片段,而且实现了较高的检测特异性和敏感性。
本发明同时在采用上述的探针库进行相关临床样本检测中,找到了新的应用于铂类化疗药物耐药评估的标志物,
一种检测回复突变的探针库,所述的回复突变包括BRCA1、BRCA2、PALB2、RAD51C、RAD51D基因回复突变,所述的探针库中包含有核苷酸序列如SEQ ID NO.1~192所示的探针,或者与其具有相同功能的探针。
所述的具有相同功能的探针是指具有80%、90%或者95%以上相同的碱基。
一种检测回复突变的方法,包括如下步骤:
步骤1,提取样本的DNA并进行片段化;
步骤2,将片段化的DNA与探针库中的探针进行杂交,富集后并分离;
步骤3,将分离的DNA片段进行扩增后进行测序。
所述的步骤1中,片段化是指将DNA破碎150~200bp。
所述的步骤2中,通过探针上的生物素和磁珠上的链霉亲和素的相互作用进行富集。
一种用于检测回复突变的试剂盒,其含有上述的探针库。
本发明第三个目的,提供了:
用于检测PALB2基因回复突变的试剂在用于制备检测乳腺癌患者对铂类药物耐药的试剂中的应用。
本发明第四个目的,提供了:
用于检测BRCA2基因回复突变的试剂在用于制备检测结肠癌患者对铂类药物耐药的试剂中的应用。
本发明第五个目的,提供了:
用于检测RAD51D基因回复突变的试剂在用于制备检测乳腺癌患者对铂类药物耐药的试剂中的应用。
所述的铂类药物选自顺铂、锡铂、顺氯氨铂、奈达铂、依铂、卡波铂、碳铂、洛铂、奥沙利铂、诺贝铂或者赛特铂。
有益效果
本发明提供了一种具有较高检测灵敏度的用于检测BRCA1、BRCA2、PALB2、RAD51C、RAD51D基因回复突变的检测探针库以及检测方法。
本发明同时也找到了新的用于对铂类药物耐药的回复突变靶点,可以更好地用于临床治疗效果评估。
附图说明
图1为本发明的探针覆盖范围示意图。
图2是上机测序结果示意图。
图3是患者耐药后的分析结果。
具体实施方式
下面通过具体实施方式对本发明作进一步详细说明。但本领域技术人员将会理解,下列实施例仅用于说明本发明,而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者,按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。
在本文中所使用的术语”DNA”为脱氧核糖核酸(英文:Deoxyribonucleicacid,缩写为 DNA)是一种由脱氧核糖核苷酸组成的双链分子。可组成遗传指令,引导生物发育与生命机能运行,其碱基排列顺序构成了遗传信息,所以在遗传病的诊断中具有重要的作用。
在本文中所使用的术语“高通量测序技术”指的是第二代高通量测序技术及之后发展的更高通量的测序方法。第二代高通量测序平台包括但不限于Illumina-Solexa(Miseq、Hiseq-2000、 Hiseq-2500、Hiseq X ten等)、ABI-Solid和Roche-454测序平台等。随着测序技术的不断发展,本领域技术人员能够理解的是还可以采用
其他方法的测序方法和装置进行本检测。根据本发明的具体示例,可以将根据本发明实施例的核酸标签用于Illumina-Solexa、ABI-Solid和Roche-454测序平台等的至少一种进行测序。高通量测序技术,例如Miseq测序技术具有以下优势:(1)高灵敏度:高通量测序,例如Miseq的测序通量大,目前一个实验流程下来可以产生最多15G碱基数据,高的数据通量可以再测序序列数确定的情况下,使得每条序列获得高的测序深度,所以可以检测到含量更低的突变,同时因其测序深度高,其测序结果也更为可靠。(2)高通量,低成本:利用根据本发明实施例的标签序列,通过一次测序可以检测上万份样本,从而大大降低了成本。
本发明中的“突变”、“核酸变异”、“基因变异”可通用,本发明中的“SNP”(SNV)、“CNV”、“插入缺失”(indel)和“结构变异”(SV)同通常定义,但本发明中对各种变异的大小不作特别限定,这样这几种变异之间有的有交叉,比如当插入/缺失的为大片段甚至整条染色体时,也属于发生拷贝数变异(CNV)或是染色体非整倍性,也属于SV。这些类型变异的大小交叉并不妨碍本领域人员通过上述描述执行实现本发明的方法和/或装置并且达到所描述的结果。
DNA样本的提取和片段化
采用商品化的DNA提取试剂盒对组织样本、血浆样本、腹水样本或者胸水样本进行DNA 的提取,通过Nanodrop和Qubit进行定量质控,对于组织和胸腹水DNA样本,由于DNA片段较长,需要采用超声破碎。
DNA样本的纯化及末端修复
将上述步骤得到的DNA样本加无酶水补齐至100ul,再加入150ul的Axygen beads磁珠,重悬后磁力分离除上清,并加入200ul的80%乙醇洗涤于磁力架上孵育后去乙醇,干燥至所有乙醇挥发干净;加入28ul无酶水混合均匀,将DNA从磁珠上洗脱下来,取1ug进入末端修复,加无水酶补至25ul。加入末端修复试剂于适当条件下进行末端修复。
接头连接及产物纯化
使用浓度为15uM的通用接头,并根据进入末端修复的DNA总量进行接头稀释工作。向接头连接反应液中加入如下试剂:
将上述反应液短暂离心后,至于PCR仪上于20℃孵育15分钟后,在上述反应液加入9.5ulAxygen beads重悬,磁力分离后除上清,再加入200ul的80%乙醇清洗,于室温下孵育后去乙醇,晾干,加20ul无酶水洗脱磁珠。
文库扩增
上述的纯化产物采用如下所示的反应体系进行PCR扩增,使产物达到测序要求。
扩增条件为:98℃预变性45秒,98℃变性15秒,65℃退火30秒,72℃延伸30秒,循环12次;72℃延伸1分钟。
探针的设计、DNA片段的捕获和富集
针对5个HRR基因(BRCA1、BRCA2、PALB2、RAD51C、RAD51D)外显子准备DNA 探针库。本领域技术人员知晓:捕获的特异性受各种因素影响,如捕获探针的设计不佳,捕获条件不理想,基因组DNA中重复序列的封闭不充分及基因组DNA与捕获探针的比例不合适等因素都会影响捕获的特异性、敏感性、测序覆盖率等诸多结果。为了实现目标基因的高度富集和低脱靶率,本领域技术人员需要对探针的类型、长度、序列、杂交条件等进行大量实验摸索,需要通过创造性的探索工作才能够获得最佳的参数组合,如果探针特异性太高,在DNA捕获时就会产生有利于参考序列(与探针完全互补的序列)的选择,这在后期数据统计上就会产生明显的偏差,同时太短的探针结合目标DNA片段的结合力度不足以将目标 DNA捕获下来;而探针太长,探针合成的效率降低,并且合成成本大大增加。探针设计策略见图1和图2。其中,侧翼序列长度为内含子序列,内含子序列的重复性较高。探针重叠区域为每个探针之间的重叠碱基数目。重叠区域越大,目标区域覆盖率越高;重叠区域越小,甚至探针间隔分布,测序成本则越低。探针长度越长,测序时对于单核苷酸多态性(SNP) 的容忍度越高。最终合成得到的探针序列如SEQ ID NO.1-192所示,且5’端有生物素(Biotin)。
将DNA样本库与杂交缓冲液(10mMTris-HCl,2%牛血清白蛋白,pH8.0)混合(混合后, DNA样本库浓度至多不超过50ng/ul),反应条件为95℃5分钟,之后保持在65℃。反应在PCR扩增仪中进行。然后以DNA样本库:探针库为1:100的摩尔比,将探针库加入上述混合物,反应条件为65℃5分钟。将杂交反应置于PCR扩增仪中,65℃孵育24小时。
将50ul的Dynabeads磁珠与200ul结合缓冲液(含10mM Tris-HCl、2%BSA)进行混合,并通过磁选机分离出磁珠,重复3次;再将杂交反应产物与链霉亲和素磁珠混合,在磁选机中分离后,向磁珠中加入500ul的洗涤缓冲液(含有0.1%Tween-20、0.1%SDS),并于60℃下孵育15min,重复3次;将磁珠与50ul的洗脱缓冲液(含有10mM的NaOH)混合,20℃下孵育15min,通过磁选机分离出磁珠,上清液中获得检测文库。
上述的文库采用如下所示的反应体系进行PCR扩增,使产物达到测序要求。
扩增条件为:98℃预变性45秒,98℃变性20秒,65℃退火30秒,72℃延伸25秒,循环5次;72℃延伸3分钟。
测序与分析
使用Illumina HiSeq2000下一代测序系统进行测序,并进行数据分析,获得基因突变信息。
探针设计的优化
根据上述的探针设计思路,在设定于2X覆盖倍数的条件下考察了探针长度对于测序结果的影响,分别测试了100bp/120bp/140bp长度的探针,每次实验重复三次,结果如下:
通过以上的测试可以看出,长度为140bp的探针具有最高的中靶率,而100bp探针最低, 120bp的探针与140bp的接近,从经济的角度上来看,优选采用120bp。
另外,在设定于120bp长度探针的情况下考察了覆盖倍数对于测序结果的影响,分别测试了1X、1.5X、2X和2.5X,结果如下:
并且我们分析了每个探针目标区域DNA序列的测序深度,结果如下:
注:>0.2x平均覆盖占比的意思是大于目标区域DNA序列平均覆盖倍数20%的区域在总区域中的占比,同理0.5x和1x平均覆盖占比的意思是大于目标区域平均覆盖倍数50%/100%的区域在总区域中的占比。
根据测序结果可以得到,随着探针覆盖倍数的增加,目标区域的平均覆盖倍数逐渐增加,并且均一性更好。但是外显子的探针捕获效率与内含子的探针捕获效率不一样,外显子在2X 探针覆盖的情况下可以得到较好的目标区域覆盖,而内含子在2.5X探针覆盖的情况下才能得到与2X探针外显子类型的目标区域覆盖。综合中靶率、经济性,最后选择2X的探针作为外显子区域的覆盖倍数,选择2.5X探针作为内含子预期的覆盖倍数。
采用下一代测序技术检测BRCA1、BRCA2、PALB2、RAD51C、RAD51D的基因结构突变对临床诊疗的指导价值。
对13例存在回复突变的患者样本和7例阴性样本进行DNA提取,并通过本发明优选的探针和方法进行测序,结果中见下表,阳性样本和阴性样本的测序结果与MLPA/Sanger测序法所得结果相同,证明了本方法的可靠性,结果见表1。
1、本发明的探针组合可用于经铂类药物治疗进展患者的耐药机制检测。
从世和基因生物技术股份有限公司数据库中随机筛选出10例患者铂类药物治疗进展的患者,这10例患者样本携带BRCA1、BRCA2、PALB2、RAD51D等基因的种系突变,并且耐药后样本中检测到相关基因的继发体细胞回复突变。其中6例患者为乳腺癌,3例卵巢癌,1例结肠癌。本发明的探针组合不仅能检测相关基因的种系突变,还能检测基因继发体细胞回复突变。检测的突变类型具有多样性,包括错义突变、移码突变、非移码突变、大片段缺失突变、无义突变等。7例患者检测到基因种系无义突变,其中4例患者在耐药样本中检测到基因对应氨基酸上的错义突变,其他3例患者是检测基因对应氨基酸前的非移码突变,可能恢复开放阅读框架,导致药物耐药。对于临床耐药机制探究,指导患者临床转归具有重要意义。患者耐药回复突变见表2。
2、本发明的探针组合检测的样本类型具有多样性。
10例铂类/Parp抑制剂治疗进展的患者合计检测了16个样本,其中13个样本中检测到了回复突变,包括4个组织样本(4/5)、6个血浆样本(6/8)、2个腹水样本(2/2)、1个胸水样本(1/1)。100%的胸水和腹水样本中检测HRR种系突变和体细胞回复突变。此外有一例患者组织样本中未检测到回复突变,但是其胸水样本中检测到相关回复突变,说明组织可能由于时间或空间异质性问题,导致耐药突变漏检,而血浆或胸腹水等体液样本可以克服肿瘤异质性,揭示患者耐药机制。患者耐药后如图3所示。
表1本发明探针NGS测序结果与MLPA/Sanger测序结果比对表
续表1
表2本发明探针检测基因继发耐药的回复突变结果
序列表
<110> 南京世和基因生物技术股份有限公司
南京世和医疗器械有限公司
<120> 一种检测回复突变的探针库、检测方法以及试剂盒
<130> 无
<160> 192
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
tgcgtgtgct gcgtgtcgcg tcacggcgtc acgtggccag cgcgggcttg tggcgcgagc 60
ttctgaaact aggcggcaga ggcggagccg ctgtggcact gctgcgcctc tgctgcgcct 120
<210> 2
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
tcccccgtcc aggaagtctc agcgagctca cgccgcgcag tcgcagtttt aatttatctg 60
taattcccgc gcttttccgt tgccacggaa accaaggggc taccgctaag cagcagcctc 120
<210> 3
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ctaactaccc attttcctcc cgcaattcct agaaaatatt tcagtgtccg ttcacacaca 60
aactcagcat ctgcagaatg aaaaacactc aaaggattag aagttgaaaa caaaatcagg 120
<210> 4
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
tgtagacaaa ctgaaaatct caaaacatca aaaagtatct ttttgaaagt taaagtacat 60
gaaaatgtag aaaaagaaac agcaaaaagt cctgcaactt gttacacaaa tcagtcccct 120
<210> 5
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
tggttttatg cagcagatgc aaggtattct gtaaaggttc ttggtatacc tgttttcata 60
acaacatgag tagtctcttc agtaattaga ttagttaaag tgatgtggtg ttttctggca 120
<210> 6
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
ttttccgttg ccacggaaac caaggggcta ccgctaagca gcagcctctc agaatacgaa 60
atcaaggtac aatcagagga tgggagggac agaaagagcc aagcgtctct cggggctctg 120
<210> 7
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
cgggtgtctt ttgcggcggt gggtcgccgc cgggagaagc gtgaggggac agatttgtga 60
ccggcgcggt ttttgtcagc ttactccggc caaaaaagaa ctgcacctct ggagcgggtt 120
<210> 8
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
aatgttgtta agtcttagtc attagggaga tacatatgga tacactcaca aattcttctg 60
gggtcaggcc agacaccacc atggacattc ttttgttgac cctttctgtt gaagctgtca 120
<210> 9
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
cttttaaatc tctaaaatta gggttctttt tttcttattt tactttcaga agttgggata 60
tctaaagcag aagccttaga aactctgcaa attatcagaa gagaatgtct cacaaataaa 120
<210> 10
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
gagtagtctc ttcagtaatt agattagtta aagtgatgtg gtgttttctg gcaaacttgt 60
acacgagcat ctgaaattaa atcaaatatt ccattatcat gagttacctc tagcacacag 120
<210> 11
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
tattcagtca ttgaaaattc agccttagct ttttacacaa gttgtagtag aaaaacttct 60
gtgagtcaga cttcattact tgaagcaaaa aaatggctta gagaaggaat atttgatggt 120
<210> 12
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
ataaggaatg catccctgtg taagtgcatt ttggtcttct gttttgcaga cttatttacc 60
aagcattgga ggaatatcgt aggtaaaaat gcctattgga tccaaagaga ggccaacatt 120
<210> 13
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
gacagatttg tgaccggcgc ggtttttgtc agcttactcc ggccaaaaaa gaactgcacc 60
tctggagcgg gttagtggtg gtggtagtgg gttgggacga gcgcgtcttc cgcagtccca 120
<210> 14
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
ccaagatatg ctggtacatc tgagtcacac aagaagtgta cagcactgga acttcttgag 60
caggagcata cccagggctt cataatcacc ttctgttcag cactagatga tattcttggg 120
<210> 15
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
attctggctt ctccctgctc acactttctt ccattgcatt atacccagca gtatcagtag 60
tatgagcagc agctggactc tgggcagatt ctgcaacttt caattgggga actttcaatg 120
<210> 16
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
aaaatgccta ttggatccaa agagaggcca acattttttg aaatttttaa gacacgctgc 60
aacaaagcag gtattgacaa attttatata actttataaa ttacaccgag aaagtgtttt 120
<210> 17
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
atttgtctgt cactggttaa aactaaggtg ggattttttt tttaaataga tttaggacca 60
ataagtctta attggtttga agaactttct tcagaagctc caccctataa ttctgaacct 120
<210> 18
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
caaccagaaa gaataaatac tgcagattat gtaggaaatt atttgtatga aaataattca 60
aacagtacta tagctgaaaa tgacaaaaat catctctccg aaaaacaaga tacttattta 120
<210> 19
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
ggggtggagt gcccttaatg aaaacaacag aaatttgtgg tgcaccaggt gttggaaaaa 60
cacaattatg gtaaaataaa gtgttctcct tttaagggtg ggtttaataa catattatga 120
<210> 20
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
cagaggttga agatggtatg ttgccaacac gagctgactc tggggctctg tcttcagaag 60
gatcagattc agggtcatca gagaagaggc tgattccaga ttccaggtaa ggggttccct 120
<210> 21
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
ccttagatca tcatcatgat ttggttgttt gtcatctttc tgttgacagt atgcagttgg 60
cagtagatgt gcagatacca gaatgttttg gaggagtggc aggtgaagca gtttttattg 120
<210> 22
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
gcagaagaat ctgaacataa aaacaacaat tacgaaccaa acctatttaa aactccacaa 60
aggaaaccat cttataatca gctggcttca actccaataa tattcaaaga gcaagggctg 120
<210> 23
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
agtaacagta gcatgtctaa cagctattcc taccattctg atgaggtata taatgattca 60
ggatatctct caaaaaataa acttgattct ggtattgagc cagtattgaa gaatgttgaa 120
<210> 24
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
tcttcagaag gatcagattc agggtcatca gagaagaggc tgattccaga ttccaggtaa 60
ggggttccct ctgaaaggaa tgggagaagt ttaatttaca caacgatgaa tgttgaatta 120
<210> 25
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
tcagagtaaa atcaaagtgt ttgttccaat acagcagatg aaatattacc tagatcttgc 60
cttggcaagt aagatgtttc cgtcaaatcg tgtggcccag actcttccag ctgttgctcc 120
<210> 26
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
atacagaggg aagttttatg gttgatagag tggtagacct tgctactgcc tgcattcagc 60
accttcagct tatagcagaa aaacacaagg gagagggtaa gttagtaaat gatcttcttt 120
<210> 27
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
gagcaagggc tgactctgcc gctgtaccaa tctcctgtaa aagaattaga taaattcaaa 60
ttagacttag gtaagtaatg caatatggta gactggggag aactacaaac taggaattta 120
<210> 28
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
ttataatcca gagtatatac attctcactg aattattgta ctgtttcagg aaggaatgtt 60
cccaatagta gacataaaag tcttcgcaca gtgaaaacta aaatggatca agcagatgat 120
<210> 29
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
gatcaaaaaa acactagttt ttccaaagta atatccaatg taaaagatgc aaatgcatac 60
ccacaaactg taaatgaaga tatttgcgtt gaggaacttg tgactagctc ttcaccctgc 120
<210> 30
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
caatacatcc aaacaggtaa aactaattaa gagtgttttg ttgtttcaga acaccgaaaa 60
gctttggagg atttcactct tgataatatt ctttctcata tttattattt tcgctgtcgt 120
<210> 31
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
tccacatcaa caaccttaat gagctcctct tgagatgggt agtttctatt ctgaagactc 60
ccagagcaac tgtgcatgta ccacctatca tctaatgatg ggcatttaga aggggatgac 120
<210> 32
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
agagtggtag accttgctac tgcctgcatt cagcaccttc agcttatagc agaaaaacac 60
aagggagagg gtaagttagt aaatgatctt ctttttttct gtattaataa aagtaatttg 120
<210> 33
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
ctgaagactc ccagagcaac tgtgcatgta ccacctatca tctaatgatg ggcatttaga 60
aggggatgac ctagaaagat aaatggaagg agaaaaccat cgccaccaat tgtgaaagga 120
<210> 34
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
taaataaaga tgtcagatac cacagcatct ttacattgat gtttcttacc tttccactcc 60
tggttcttta tttttactgg tagaactatc tgcagacacc tcaaacttgt cagcagaaag 120
<210> 35
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
ttgccagttt tttaaaataa cctaagggat ttgctttgtt ttattttagt cctgttgttc 60
tacaatgtac acatgtaaca ccacaaagag ataagtcagg tatgattaaa aacaatgctt 120
<210> 36
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
cagtgaaaac taaaatggat caagcagatg atgtttcctg tccacttcta aattcttgtc 60
ttagtgaaag gtatgatgaa gctattatat taaaatattt aaatgaaaca ttttcctaca 120
<210> 37
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 37
aaaaataaaa atgcagccat taaattgtcc atatctaata gtaataattt tgaggtaggg 60
ccacctgcat ttaggatagc cagtggtaaa atcgtttgtg tttcacatga aacaattaaa 120
<210> 38
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 38
ctgtcgtgac tacacagagt tactggcaca agtttatctt cttccagatt tcctttcaga 60
acactcaaag gtatgagtca gactactgaa atgtaactaa ccaagtattt tttgaggtgt 120
<210> 39
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 39
ttgtcagcag aaaggccttc tggattctgg cttatagggt attcactact tttctgtgaa 60
gttaatactg ctttaaatgg aatgagaaaa caaatctact ttactgcttt gttctgatag 120
<210> 40
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 40
aaggaaagaa ttttgcttaa gatatcagtg tttggccaac aatacacacc tttttctgat 60
gtgctttgtt ctggatttcg caggtcctca agggcagaag agtcacttat gatggaaggg 120
<210> 41
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 41
tttattctta gaatactaga aatgttaata aaaataaaac ttaacaattt tccccttttt 60
ttacccccag tggtatgtgg gagtttgttt catacaccaa agtttgtgaa ggtaaatatt 120
<210> 42
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 42
aaagtgaaag acatatttac agacagtttc agtaaagtaa ttaaggaaaa caacgagaat 60
aaatcaaaaa tttgccaaac gaaaattatg gcaggttgtt acgaggcatt ggatgattca 120
<210> 43
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 43
taacaatttt cccctttttt tacccccagt ggtatgtggg agtttgtttc atacaccaaa 60
gtttgtgaag gtaaatattc tacctggttt atttttatga cttagtaatt gagaatttga 120
<210> 44
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 44
aatgatcagg gcatttctat aaaaaataaa ctattttctt tcctcccagg gtcgtcagac 60
accaaaacat atttctgaaa gtctaggagc tgaggtggat cctgatatgt cttggtcaag 120
<210> 45
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 45
tagctgttag aaggctggct cccatgctgt tctaacacag cttctagttc agccatttcc 60
tgctggagct ttatcaggtt atgttgcatg gtatccctct gcttcaaaaa cgataaatgg 120
<210> 46
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 46
gaggatattc ttcataactc tctagataat gatgaatgta gcacgcattc acataaggtt 60
tttgctgaca ttcagagtga agaaatttta caacataacc aaaatatgtc tggattggag 120
<210> 47
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 47
gcaaaggaca ccacacacac gcatgtgcac acacacacac gctttttacc tgagtggtta 60
aaatgtcact ctgagaggat agccctgagc agtcttcaga gacgcttgtt tcactctcac 120
<210> 48
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 48
tttgcattct agtgataata tacaatacac ataaattttt atcttacagt cagaaatgaa 60
gaagcatctg aaactgtatt tcctcatgat actactgctg taagtaaata tgacattgat 120
<210> 49
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 49
gtggatcctg atatgtcttg gtcaagttct ttagctacac cacccaccct tagttctact 60
gtgctcatag gtaataatag caaatgtgta tttacaagaa agagcagatg aggttgataa 120
<210> 50
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 50
ctaacacagc ttctagttca gccatttcct gctggagctt tatcaggtta tgttgcatgg 60
tatccctctg cttcaaaaac gataaatggc accaagaaaa tgaaatactt tgagaagctt 120
<210> 51
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 51
cataaatttt tatcttacag tcagaaatga agaagcatct gaaactgtat ttcctcatga 60
tactactgct gtaagtaaat atgacattga ttagactgtt gaaattgcta acaattttgg 120
<210> 52
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 52
gtgcattgag agtttttata ctagtgattt taaactataa tttttgcaga atgtgaaaag 60
ctatttttcc aatcatgatg aaagtctgaa gaaaaatgat agatttatcg cttctgtgac 120
<210> 53
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 53
ctctgagagg atagccctga gcagtcttca gagacgcttg tttcactctc acacccagat 60
gctgcttcac cttaaataac aaaaacagag gttcagatgt aaaagcagac tataaacgct 120
<210> 54
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 54
tcacttctat aaatagactg gggcaaacac aaaaacctgg ttccaatacc taagtttgaa 60
tccatgcttt gctcttcttg attattttct tccaagcccg ttcctctttc ttcatcatct 120
<210> 55
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 55
aaagtttcta aaatatcacc ttgtgatgtt agtttggaaa cttcagatat atgtaaatgt 60
agtataggga agcttcataa gtcagtctca tctgcaaata cttgtgggat ttttagcaca 120
<210> 56
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 56
aaaaatgata gatttatcgc ttctgtgaca gacagtgaaa acacaaatca aagagaagct 60
gcaagtcatg gtaagtcctc tgtttagttg aactacaggt ttttttgttg ttgttgtttt 120
<210> 57
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 57
ttatatggct tataaaatat taatgtgctt ctgttttata ctttaacagg atttggaaaa 60
acatcaggga attcatttaa agtaaatagc tgcaaagacc acattggaaa gtcaatgcca 120
<210> 58
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 58
gaaaccaatt ccttgtcact cagaccaact ccctggcttt cagactgatg cctcatttgt 60
ttggaagaac caatcaagaa aggatcctgg gtgtttgtat ttgcagtcaa gtcttccaat 120
<210> 59
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 59
gcaagtggaa aatctgtcca ggtatcagat gcttcattac aaaacgcaag acaagtgttt 60
tctgaaatag aagatagtac caagcaagtc ttttccaaag tattgtttaa aagtaacgaa 120
<210> 60
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 60
aatgtcctag aagatgaagt atatgaaaca gttgtagata cctctgaaga agatagtttt 60
tcattatgtt tttctaaatg tagaacaaaa aatctacaaa aagtaagaac tagcaagact 120
<210> 61
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 61
tcactgcact gtgaagaaaa caagctagca gaacattttg tttcctcact aaggtgatgt 60
tcctgagatg cctttgccaa tattacctgg ttactgcagt catttaagct attcttcaat 120
<210> 62
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 62
cattcagacc agctcacaag agaagaaaat actgctatac gtactccaga acatttaata 60
tcccaaaaag gcttttcata taatgtggta aattcatctg ctttctctgg atttagtaca 120
<210> 63
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 63
aggaaaaaaa ttttccatga agcaaacgct gatgaatgtg aaaaatctaa aaaccaagtg 60
aaagaaaaat actcatttgt atctgaagtg gaaccaaatg atactgatcc attagattca 120
<210> 64
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 64
gataataaat tctcctctgt gttcttagac agacactcgg tagcaacggt gctatgccta 60
gtagactgag aaggtatatt gtttacttta ccaaataaca agtgttggaa gcagggaagc 120
<210> 65
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 65
gcaagtggaa agcaagtttc cattttagaa agttccttac acaaagttaa gggagtgtta 60
gaggaatttg atttaatcag aactgagcat agtcttcact attcacctac gtctagacaa 120
<210> 66
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 66
aatgtagcaa atcagaagcc ctttgagagt ggaagtgaca aaatctccaa ggaagttgta 60
ccgtctttgg cctgtgaatg gtctcaacta accctttcag gtctaaatgg agcccagatg 120
<210> 67
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 67
tcttcatcct cactagataa gttctcttct gaggactcta atttcttggc ccctcttcgg 60
taaccctgag ccaaatgtgt atgggtgaaa gggctaggac tcctgctaag ctctcctttc 120
<210> 68
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 68
aatgtatcaa aaatacttcc tcgtgttgat aagagaaacc cagagcactg tgtaaactca 60
gaaatggaaa aaacctgcag taaagaattt aaattatcaa ataacttaaa tgttgaaggt 120
<210> 69
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 69
gagaaaatac ccctattgca tatttcttca tgtgaccaaa atatttcaga aaaagaccta 60
ttagacacag agaacaaaag aaagaaagat tttcttactt cagagaattc tttgccacgt 120
<210> 70
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 70
tggacgcttt tgctaaaaac agcagaactt tccttaatgt cattttcagc aaaactagta 60
tcttccttta tttcaccatc atctaacagg tcatcaggtg tctcagaaca aacctgagat 120
<210> 71
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 71
ggttcttcag aaaataatca ctctattaaa gtttctccat atctctctca atttcaacaa 60
gacaaacaac agttggtatt aggaaccaaa gtgtcacttg ttgagaacat tcatgttttg 120
<210> 72
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 72
atttctagcc taccaaaatc agagaagcca ttaaatgagg aaacagtggt aaataagaga 60
gatgaagagc agcatcttga atctcataca gactgcattc ttgcagtaaa gcaggcaata 120
<210> 73
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 73
gcatgactac ttcccatagg ctgttctaag ttatctgaaa tcagatatgg agagaaatct 60
gtattaacag tctgaactac ttcttcatat tcttgctttt ttatttcagg atgcttacaa 120
<210> 74
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 74
ggaaaagaac aggcttcacc taaaaacgta aaaatggaaa ttggtaaaac tgaaactttt 60
tctgatgttc ctgtgaaaac aaatatagaa gtttgttcta cttactccaa agattcagaa 120
<210> 75
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 75
tctggaactt ctccagtggc ttcttcattt cagggtatca aaaagtctat attcagaata 60
agagaatcac ctaaagagac tttcaatgca agtttttcag gtcatatgac tgatccaaac 120
<210> 76
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 76
ttacttccag gaagactttg tttatagacc tcaggttgca aaacccctaa tctaagcata 60
gcattcaatt ttggccctct gtttctacct agttctgctt gaatgttttc atcactggaa 120
<210> 77
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 77
aactactttg aaacagaagc agtagaaatt gctaaagctt ttatggaaga tgatgaactg 60
acagattcta aactgccaag tcatgccaca cattctcttt ttacatgtcc cgaaaatgag 120
<210> 78
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 78
tttaaaaaag aaactgaagc ctctgaaagt ggactggaaa tacatactgt ttgctcacag 60
aaggaggact ccttatgtcc aaatttaatt gataatggaa gctggccagc caccaccaca 120
<210> 79
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 79
cctatttcat taatactgga gcccacttca ttagtactgg aacctacttc attaatattg 60
cttgagctgg cttctttaaa aacattttct ctaatgttat tacggctaat tgtgctcact 120
<210> 80
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 80
gaaaatgagg aaatggtttt gtcaaattca agaattggaa aaagaagagg agagcccctt 60
atcttagtgg gtaagtgttc atttttacct ttcgtgttgc caatcactat ttttaaagtg 120
<210> 81
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 81
aaactgatat tatttgcctt aaaaacatat atgaaatatt tctttttagg agaaccctca 60
atcaaaagaa acttattaaa tgaatttgac aggataatag aaaatcaaga aaaatcctta 120
<210> 82
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 82
cagaattctg tagctttgaa gaatgcaggt ttaatatcca ctttgaaaaa gaaaacaaat 60
aagtttattt atgctataca tgatgaaaca tcttataaag gaaaaaaaat accgaaagac 120
<210> 83
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 83
gtacttggaa tgttctcatt tcccatttct ctttcaggtg acattgaatg ttcctcaaag 60
ttttcctcta gcagattttt cttacattta gttttaacaa atgacttgat gggaaaaagt 120
<210> 84
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 84
attctcttag attttaacta atatgtaata taaaataatt gtttcctagg cacaataaaa 60
gatcgaagat tgtttatgca tcatgtttct ttagagccga ttacctgtgt accctttcgg 120
<210> 85
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 85
ttaaatgaat ttgacaggat aatagaaaat caagaaaaat ccttaaaggc ttcaaaaagc 60
actccagatg gtaaaattag ctttttattt atatctgttc tccctctata ggtatggtat 120
<210> 86
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 86
gcacaataaa agatcgaaga ttgtttatgc atcatgtttc tttagagccg attacctgtg 60
taccctttcg gtaagacatg tttaaatttt tctaaattct aatacagtat gagaaaagtc 120
<210> 87
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 87
tttatatgtg tactagtcaa taaacttata tattttctcc ccattgcagc acaactaagg 60
aacgtcaaga gatacagaat ccaaatttta ccgcacctgg tcaagaattt ctgtctaaat 120
<210> 88
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 88
caaaaatcag aactaattaa ctgttcagcc cagtttgaag caaatgcttt tgaagcacca 60
cttacatttg caaatgctga ttcaggtacc tctgtctttt tttttttgta aatagtacat 120
<210> 89
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 89
attaactgtt cagcccagtt tgaagcaaat gcttttgaag caccacttac atttgcaaat 60
gctgattcag gtacctctgt cttttttttt ttgtaaatag tacatatagt tttatagatg 120
<210> 90
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 90
atgtgattga tggtacttta attttgtcac tttgtgtttt tatgtttagg tttattgcat 60
tcttctgtga aaagaagctg ttcacagaat gattctgaag aaccaacttt gtccttaact 120
<210> 91
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 91
ggtggtatac gatatgggtt ttgtaaaagt ccatgtttat ttggagtaat gagtccagtt 60
tcgttgcctc tgaactgaga tgatagacaa aacctagagc ctcctttgat actacatttg 120
<210> 92
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 92
ctcatttgta tgaacatctg actttggaaa aatcttcaag caatttagca gtttcaggac 60
atccatttta tcaagtttct gctacaagaa atgaaaaaat gagacacttg attactacag 120
<210> 93
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 93
agctcttttg ggacaattct gaggaaatgt tctagaaatg aaacatgttc taataataca 60
gtaatctctc aggatcttga ttataaagaa gcaaaatgta ataaggaaaa actacagtta 120
<210> 94
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 94
gcattatcaa ctggcttatc tttctgacca accacaggaa agcctgcagt gatattaact 60
gtctgtacag gcttgatatt agactcattc tttccttgat tttcttcctt ttgttcacat 120
<210> 95
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 95
gcagaccaac caaagtcttt gttccacctt ttaaaactaa atcacatttt cacagagttg 60
aacagtgtgt taggaatatt aacttggagg aaaacagaca aaagcaaaac attgatggac 120
<210> 96
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 96
tttattaccc cagaagctga ttctctgtca tgcctgcagg aaggacagtg tgaaaatgat 60
ccaaaaagca aaaaagtttc agatataaaa gaagaggtct tggctgcagc atgtcaccca 120
<210> 97
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 97
tcaaaagtga cttttggact ttgtttcttt aaggacccag agtgggcaga gaatgttgca 60
cattcctctt ctgcatttcc tggatttgaa aacggagcaa atgactggcg ctttgaaacc 120
<210> 98
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 98
atggctctga tgatagtaaa aataagatta atgacaatga gattcatcag tttaacaaaa 60
acaactccaa tcaagcagta gctgtaactt tcacaaagtg tgaagaagaa cctttaggta 120
<210> 99
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 99
gtacaacatt caaaagtgga atacagtgat actgactttc aatcccagaa aagtctttta 60
tatgatcatg aaaatgccag cactcttatt ttaactccta cttccaagga tgttctgtca 120
<210> 100
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 100
ttgaatgtat tctgcaaata ctgagcatca agttcacttt cttccatttc tatgcttgtt 60
tcccgactgt ggttaacttc atgtcccaat ggatacttaa agccttctgt gtcatttcta 120
<210> 101
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 101
gttaactttc atcatcatca tcatcatcat caaacacatc ttgatttacc tttcacttga 60
ataaataatt tttcgtgctg atatttgtgt gaggtgactt cttccttgga cctgttaaca 120
<210> 102
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 102
cagtttaaca aaaacaactc caatcaagca gtagctgtaa ctttcacaaa gtgtgaagaa 60
gaacctttag gtattgtatg acaatttgtg tgatgaattt ttgcctttca gttagatatt 120
<210> 103
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 103
aacctagtca tgatttctag aggcaaagaa tcatacaaaa tgtcagacaa gctcaaaggt 60
aacaattatg aatctgatgt tgaattaacc aaaaatattc ccatggaaaa gaatcaagat 120
<210> 104
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 104
ttatctttgg aacaaccatg aattagtccc ttggggtttt caaatgctgc acactgactc 60
acacatttat ttggttctgt ttttgccttc cctagagtgc taacttccag taacgagata 120
<210> 105
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 105
atcgacaggc tagaagttgg caaaagtggt tcacaatgat ctgatgctgg ggtgcaggct 60
gattttcttt ttcctgtgta tcttctacca ggtgcttggg caactgcctt cctagacaag 120
<210> 106
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 106
gtatgtgctt taaatgaaaa ttataaaaac gttgagctgt tgccacctga aaaatacatg 60
agagtagcat caccttcaag aaaggtacaa ttcaaccaaa acacaaatct aagagtaatc 120
<210> 107
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 107
ctttcctgag tgccataatc agtaccaggt accaatgaaa tactgctact ctctacagat 60
ctttcagttt gcaaaaccct ttctccactt aacatgagat ctttggggtc ttcagcatta 120
<210> 108
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 108
tcattatctt cagtgggccc agcgggagag ctgactttag ttaatgagag aagtttctga 60
gaggttcttg aacttggttg tcctgtgcat gtgccagaca tcctaatttc actttggtca 120
<210> 109
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 109
caaaaaaatc aagaagaaac tacttcaatt tcaaaaataa ctgtcaatcc agactctgaa 60
gaacttttct cagacaatga gaataatttt gtcttccaag tagctaatga aaggaataat 120
<210> 110
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 110
ttagacactt taactgtttc tagtttctct tctttttctt ctcttggaag gctaggattg 60
acaaattctt taagttcact ggtatttgaa cacttagtaa aagaaccagg tgcatttgtt 120
<210> 111
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 111
gtttcctcat tggaaaggtt taaattttta cttgcatcct tatttttatt tttaaaccct 60
tttttcttga catccaaatg actctgaatg acagcctcca cggctacttt cctctggcaa 120
<210> 112
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 112
cttgctttag gaaatactaa ggaacttcat gaaacagact tgacttgtgt aaacgaaccc 60
attttcaaga actctaccat ggttttatat ggagacacag gtgataaaca agcaacccaa 120
<210> 113
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 113
aacttcagct ctgggaaagt atcgctgtca tgtcttttac ttgtctgttc atttggcttg 60
ttactcttct tggctccagt tgcaggttct ttaccttcca tgagttgtag gtttctgctg 120
<210> 114
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 114
ttggacatgc ttcgtgttgt tctaacataa tattctgcag gaaacagaag gccttcaggc 60
actgtgcaag aatgtttttc tgcagaaaga ggagaggttg cttccaggct aagactctta 120
<210> 115
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 115
gtgtcaatta aaaaagattt ggtttatgtt cttgcagagg agaacaaaaa tagtgtaaag 60
cagcatataa aaatgactct aggtcaagat ttaaaatcgg acatctcctt gaatatagat 120
<210> 116
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 116
tgcctgactg gcatttggtt gtactttttt ttctttatct cttcactgct agaacaacta 60
tcaatttgca attcagtaca attaggtggg cttagatttc tactgactac tagttcaagc 120
<210> 117
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 117
ggttgactta gaatctcact ttcctgaaga ttttcattcc tgccatcaag agtgtcactg 60
ggagatttta aagatttctc tgtttgattt tgttctttta agttttggtt ttcatttgct 120
<210> 118
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 118
aaaataccag aaaaaaataa tgattacatg aacaaatggg caggactctt aggtccaatt 60
tcaaatcaca gttttggagg tagcttcaga acagcttcaa ataaggaaat caagctctct 120
<210> 119
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 119
gcatgaatat gcctggtaga agacttcctc ctcagcctat tctttttagg tgcttttgaa 60
ttgtggatat ttaattcgag ttccatattg cttatactgc tgcttatagg ttcagctttc 120
<210> 120
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 120
ggtaagttat tgtaggtgag ttcatttaga gaacatgaaa tatttgcctc taaattagaa 60
cttgtgggca gttggccact tttacttata gctttattta caaggaggtt atctgtagag 120
<210> 121
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 121
gaacataaca ttaagaagag caaaatgttc ttcaaagata ttgaagaaca atatcctact 60
agtttagctt gtgttgaaat tgtaaatacc ttggcattag ataatcaaaa gaaactgagc 120
<210> 122
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 122
gttttgaaag cagattcttt ttcgagtgat tctattgggt taggattttt ctcattctga 60
atagaatcac cttttgtttt attctcatga ccactattag taatattcat cacttgacca 120
<210> 123
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 123
acagtcattt ttttgccttg tgcctccaaa cttacaggtg aagtaaatct aatgtttttt 60
aggtcgtgag tagtaagttc actgctacct ttaggaggaa tgtgttcaag gtgctgacta 120
<210> 124
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 124
aagcctcagt caattaatac tgtatctgca catttacaga gtagtgtagt tgtttctgat 60
tgtaaaaata gtcatataac ccctcagatg ttattttcca agcaggattt taattcaaac 120
<210> 125
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 125
ttctgctccg tttggttagt tccctgattt atcatttcag gagtcttttg aactgccaaa 60
tctgctttct tgataaaatc ctcaggatga aggcctgatg taggtctcct tttacgcttt 120
<210> 126
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 126
ctaccgctat ctgatagagt ctgtaaagga actgtagtcg ccctggtgaa attaggtctt 60
cttaggaatg tatcaacacc tttttctggt tgggcagttg gtggaattaa tacactgtct 120
<210> 127
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 127
cataatttaa cacctagcca aaaggcagaa attacagaac tttctactat attagaagaa 60
tcaggaagtc agtttgaatt tactcagttt agaaaaccaa gctacatatt gcagaagagt 120
<210> 128
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 128
aatttatttg tgaggggacg ctcttgtatt atctgtggct cagtaacaaa tgctcctata 60
attagatttt cagttacatg gcttaagttg gggaggcttg ccttcttccg ataggttttc 120
<210> 129
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 129
tcattaattt ctgtaactgg ttctggagaa tctggaagtt cagatttaag acttaaaagg 60
tgagttctta tttcagttac tggtgatcta gcaggatttt tgctactgat ttcttcctgt 120
<210> 130
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 130
acatttgaag tgcctgaaaa ccagatgact atcttaaaga ccacttctga ggaatgcaga 60
gatgctgatc ttcatgtcat aatgaatgcc ccatcgattg gtcaggtaga cagcagcaag 120
<210> 131
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 131
ccaaatattt tgtcttcaat attactctct actgatttgg agtgaactct ttcactttta 60
catattaaag cctcatgagg atcactggcc agtaagtcta ttttctctga agaaccagaa 120
<210> 132
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 132
tcctttagtc ttttcccaga caatctgagt gaatcagtgc caaagacaca gtctctctcc 60
tgtgaaataa atgtcctctt ctgctgcttc tttcttctgc ttggcagctt ctgcttttgc 120
<210> 133
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 133
caatttgaag gtacagttga aattaaacgg aagtttgctg gcctgttgaa aaatgactgt 60
aacaaaagtg cttctggtta tttaacagat gaaaatgaag tggggtttag gggcttttat 120
<210> 134
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 134
tattcatcta cctcatttag aacgtccaat acatcagcta ctttggcatt tgattcagac 60
tccccatcat gtgagtcatc agaacctaac agttcatcac ttctggaaaa ccactcatta 120
<210> 135
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 135
tcaccactag ggtcactgac cctgtgggga aaatgttctt gggtgtcatc tgttctttgt 60
ataggtaatc ctcctgggcc atctccaggg ttaaaggact caggcccaac atcaagtgtg 120
<210> 136
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 136
tctgctcatg gcacaaaact gaatgtttct actgaagctc tgcaaaaagc tgtgaaactg 60
tttagtgata ttgagaatat tagtgaggaa acttctgcag aggtacatcc aataagttta 120
<210> 137
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 137
actttctgaa tgctgctatt tagtgttatc caaggaacat cttcagtatc tctaggattc 60
tctgagcatg gcagtttctg cttattccat tcttttctct cacacagggg atcagcattc 120
<210> 138
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 138
atagatgtct tttctccagt ttcttcatca agatgggttt tgatgtgtaa cttgtcataa 60
acacatattt tatttttagg ttctgaggag gaaaaaaatg tatataactt atatttttct 120
<210> 139
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 139
tctccagttt cttcatcaag atgggttttg atgtgtaact tgtcataaac acatatttta 60
tttttaggtt ctgaggagga aaaaaatgta tataacttat atttttctta taaaataaaa 120
<210> 140
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 140
gcacctagaa agctgaatta agcaaggagg ggcagaacag caggctcacc tgctgggcca 60
cagtgcctcg gagctcctgc agcacatcca gcatctggaa gatgtcaaat gcatgcacca 120
<210> 141
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 141
tcttcaagta aatgtcatga ttctgttgtt tcaatgttta agatagaaaa tcataatgat 60
aaaactgtaa gtgaaaaaaa taataaatgc caactgatat tacaaaataa tattgaaatg 120
<210> 142
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 142
agatctacct ttttttctgt gctgggagtc cgcctatcat tacatgtttc cttacttcca 60
gcccatctgt tatgttggct ccttgctaag ccaggctgtt tgcttttatt acagaattca 120
<210> 143
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 143
gggttttcct gtgtcagaat ctcaatggaa cccagcatcc tgcccttacc tgttcctcct 60
catcctgggt tttagcctga agcagctgga ggaggcggga agctgtcagc cctccattgg 120
<210> 144
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 144
cctgcagcac atccagcatc tggaagatgt caaatgcatg caccacctgg atcctccgga 60
gagcttctgc ctgaagcggt ggaaaagaaa agcaaggact ttggataaga gggagtaggg 120
<210> 145
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 145
actactggca cttttgttga agaaattact gaaaattaca agagaaatac tgaaaatgaa 60
gataacaaat atactgctgc cagtagaaat tctcataact tagaatttga tggcagtgat 120
<210> 146
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 146
gccttttcta cattcattct gtctttagtg agtaataaac tgctgttctc atgctgtaat 60
gagctggcat gagtatttgt gccacatggc tccacatgca agtttgaaac agaactaccc 120
<210> 147
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 147
cattggaatc tacatatagg acgttttgct gcaggccatg ggccacattt gctgccatac 60
agagacatac ctgggggtgg gggcattgga tgaacttgac acttcagaga gggtccagat 120
<210> 148
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 148
tctaccaccc tcacccctaa atcctcctga ctgctggcct cacatgtacc tgagttttgc 60
cgctacctgg gcctcctaca atttcagtca cttctccagt atagagacca gcatcaagca 120
<210> 149
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 149
gctacctggg cctcctacaa tttcagtcac ttctccagta tagagaccag catcaagcag 60
tttatcaaga ctgatggcag aagagaagaa aatcaacaca agaggttagg aggaagacag 120
<210> 150
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 150
tgactctctg cctttgtgaa cacagggttt tagagaagta aacttaggga aaccagctat 60
tctcttgagg ccaagccact ctgtgcttcc agccctaagc caacaacagc ctgaatagaa 120
<210> 151
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 151
tcaagtaaaa atgatactgt ttgtattcat aaagatgaaa cggacttgct atttactgat 60
cagcacaaca tatgtcttaa attatctggc cagtttatga aggagggaaa cactcagatt 120
<210> 152
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 152
tgatactttt ctggatgcct ctcagctgca cgcttctcag tggtgttcaa atcattatta 60
ctgggttgat gatgttcagt atttgttaca tccgtctcag aaaattcaca agcagctgaa 120
<210> 153
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 153
ttcaaatcat tattactggg ttgatgatgt tcagtatttg ttacatccgt ctcagaaaat 60
tcacaagcag ctgaaaatat acaaaaataa caaggtactc aaaaactgaa ttgtcattaa 120
<210> 154
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 154
tacccactct cttttcagtg cctgttaagt tggcaaactt tgccattacc cttttttgca 60
gaatccaaac tgatttcatc cctggttcct tgaggggtga tttgtaacaa ttcttgatct 120
<210> 155
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 155
agaatagggc tgataaataa tgaatcagca tcttgctcaa ttggtggcgt ttaaatggtt 60
ttaaaatctt ctcaggtgaa aaattaccat aattttgtgc tcatggcaga tttccaaggg 120
<210> 156
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 156
aaagaagatt tgtcagattt aacttttttg gaagttgcga aagctcaaga agcatgtcat 60
ggtaatactt caaataaaga acagttaact gctactaaaa cggagcaaaa tataaaagat 120
<210> 157
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 157
tgcagaatcc aaactgattt catccctggt tccttgaggg gtgatttgta acaattcttg 60
atctcccaca ctatagggaa aagacagagt cctaataaga aacactagtt acatgtatgc 120
<210> 158
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 158
ctaaatagga aaataccagc ttcatagaca aaggttctct ttgactcacc tgcaataagt 60
tgccttatta acggtatctt cagaagaatc agatcctaaa aaatttcccc ccaaaaaata 120
<210> 159
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 159
agacaaaggt tctctttgac tcacctgcaa taagttgcct tattaacggt atcttcagaa 60
gaatcagatc ctaaaaaatt tccccccaaa aaataaatca ataaaagttt tcttaattaa 120
<210> 160
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 160
aggaatccag caattattat taaatactta aaaaacctga gacccttacc caattcaatg 60
tagacagacg tcttttgagg ttgtatccgc tgctttgtcc tcagagttct cacagttcca 120
<210> 161
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 161
agacttcaag cagaaaatct ttaagggacc cttgcatagc cagaagtcct tttcaggctg 60
atgtacataa aatatttagt agccaggaca gtagaaggac tgaagagtga gaggagctcc 120
<210> 162
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 162
tttgagactt ctgatacatt ttttcagact gcaagtggga aaaatattag tgtcgccaaa 60
gagtcattta ataaaattgt aaatttcttt gatcagaaac cagaagaatt gcataacttt 120
<210> 163
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 163
tccgctgctt tgtcctcaga gttctcacag ttccaaggtt agagagttgg acactgagac 60
tggtttcctg ctaaacagta tggtaaagaa cagtcaagca attgttggcc agttctgtgc 120
<210> 164
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 164
aaaaaaaaga aaagaagaag aagaagaaga agaaaacaaa tggttttacc aaggaaggat 60
tttcgggttc actctgtaga agtcttttgg cacggtttct gtagcccata ctttggatga 120
<210> 165
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 165
cagggcctgg aaaggccact ttgtaagctc attcttgggg tcctgtggct ctgtacctgt 60
ggctggctgc agtcagtagt ggctgtgggg gatctggggt atcaggtagg tgtccagctc 120
<210> 166
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 166
tccttaaatt ctgaattaca ttctgacata agaaagaaca aaatggacat tctaagttat 60
gaggaaacag acatagttaa acacaaaata ctgaaagaaa gtgtcccagt tggtactgga 120
<210> 167
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 167
atagaaactt catcttttag atgttcagga gagttatttt ccttttttgc aaaattatag 60
ctgtttgcat ctgtaaaata caagggaaaa cattatgttt gcagttagag aaaaatgtat 120
<210> 168
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 168
ttttcatgga cagcacttga gtgtcattct tgggatattc aacacttaca ctccaaacct 60
gtgtcaagct gaaaagcaca aatgattttc aatagctctt caacaagttg actaaatctc 120
<210> 169
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 169
ctggcactgg tagagtgcta cactgtccaa cacccactct cgggtcacca caggtgcctc 60
acacatctgc ccaattgctg gagacagaga acacaagcag agattagtgt caattcattc 120
<210> 170
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 170
aatcaactag tgaccttcca gggacaaccc gaacgtgatg aaaagatcaa agaacctact 60
ctattgggtt ttcatacagc tagcgggaaa aaagttaaaa ttgcaaagga atctttggac 120
<210> 171
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 171
acccatgcaa aaggacccca tatagcacag gtacatgcag gcaccttacc atggaagcca 60
ttgtcctctg tccaggcatc tggctgcaca accacaattg ggtggacacc ctggatcccc 120
<210> 172
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 172
tttcctactg tggttgcttc caacctagca tcattaccaa attatatacc ttttggttat 60
atcattctta cataaaggac actgtgaagg ccctttcttc tggttgagaa gtttcagcat 120
<210> 173
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 173
ctgaaaagca caaatgattt tcaatagctc ttcaacaagt tgactaaatc tcgtactttc 60
ttgtaggctc ctgaaattaa attgtttgag aaacacactc agcaagtgat tatcaacctt 120
<210> 174
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 174
tggtagagtg ctacactgtc caacacccac tctcgggtca ccacaggtgc ctcacacatc 60
tgcccaattg ctggagacag agaacacaag cagagattag tgtcaattca ttctcctgga 120
<210> 175
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 175
gcaccttacc atggaagcca ttgtcctctg tccaggcatc tggctgcaca accacaattg 60
ggtggacacc ctggatcccc aggaaggaaa gagcattcaa agtgtcaaag taggactact 120
<210> 176
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 176
aggagagaat attgtgtcct ccctctctga cagggcaccc aatacttact gtgccaaggg 60
tgaatgatga aagctccttc accacagaag caccacacag ctgtaccatc cattccagtt 120
<210> 177
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 177
tatatcattc ttacataaag gacactgtga aggccctttc ttctggttga gaagtttcag 60
catgcaaaat ctataaatta taaagaaaga aagaacaatt taatttactt ccttttgtag 120
<210> 178
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 178
gacaaaaaca aaagctaata atggagccac ataacacatt caaacttact tgcaaaatat 60
gtggtcacac tttgtggaga caggttcctt gatcaactcc agactagcag ggtagggggg 120
<210> 179
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 179
aaagtgaaaa acctttttga tgaaaaagag caaggtacta gtgaaatcac cagttttagc 60
catcaatggg caaagaccct aaagtacaga gaggcctgta aagaccttga attagcatgt 120
<210> 180
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 180
gtaagacaaa ggctggtgct ggaactctgg ggttctccca ggctcttacc tgtgggcatg 60
ttggtgaagg gcccatagca acagatttct agccccctga agatctggaa gaagagagga 120
<210> 181
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 181
ggagataatc ataggaatcc caaattaata cactcttgtg ctgacttacc agatgggaca 60
ctctaagatt ttctgcatag cattaatgac attttgtact tcttcaacgc gaagagcaga 120
<210> 182
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 182
ccaagggtga atgatgaaag ctccttcacc acagaagcac cacacagctg taccatccat 60
tccagttgat ctaaaatgga catttagatg taaaatcact gcagtaatct gcatacttaa 120
<210> 183
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 183
acacattcaa acttacttgc aaaatatgtg gtcacacttt gtggagacag gttccttgat 60
caactccaga ctagcagggt agggggggag aaaaagaaaa taaatgaggc tcaataattt 120
<210> 184
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 184
ctcccaggct cttacctgtg ggcatgttgg tgaagggccc atagcaacag atttctagcc 60
ccctgaagat ctggaagaag agaggaagag agagggacag gggaatggag agaaggaaaa 120
<210> 185
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 185
acagagtggt ggggtgagat ttttgtcaac ttgagggagg gagctttacc tttctgtcct 60
gggattctct tgctcgcttt ggaccttggt ggtttcttcc attgaccaca tctcctctga 120
<210> 186
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 186
agcattaatg acattttgta cttcttcaac gcgaagagca gataaatcca tttctttctg 60
ttccaatgaa ctttaacaca ttagaaaaac atatatatat atctttttaa aaggtttata 120
<210> 187
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 187
ccccagagca tcacttgggc cccctgtccc tttcccggga ctctactacc tttacccaga 60
gcagagggtg aaggcctcct gagcgcaggg gcccagttat ctgagaaacc ccacagcctg 120
<210> 188
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 188
gagaccattg agatcacagc tgccccaaag tgtaaagaaa tgcagaattc tctcaataat 60
gataaaaacc ttgtttctat tgagactgtg gtgccaccta agctcttaag tgataattta 120
<210> 189
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 189
attctcttgc tcgctttgga ccttggtggt ttcttccatt gaccacatct cctctgactt 60
caaaatcatg ctgaaagaaa ccaaacacaa cccatcagga taagagaaag agaagcttcc 120
<210> 190
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 190
atatgactga atgaatatct ctggttagtt tgtaacatca agtacttacc tcattcagca 60
tttttctttc tttaatagac tgggtcaccc ctaaagagat catagaaaag acaggttaca 120
<210> 191
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 191
ctggttagtt tgtaacatca agtacttacc tcattcagca tttttctttc tttaatagac 60
tgggtcaccc ctaaagagat catagaaaag acaggttaca tacagcagaa gaacgtgctc 120
<210> 192
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 192
caattctgag gtgttaaagg gaggagggga gaaatagtat tatacttaca gaaatagcta 60
actacccatt ttcctcccgc aattcctaga aaatatttca gtgtccgttc acacacaaac 120
Claims (9)
1.一种检测回复突变的探针库,其特征在于,所述的回复突变包括BRCA1、BRCA2、PALB2、RAD51C、RAD51D基因回复突变,所述的探针库中包含有核苷酸序列如SEQ ID NO.1~192所示的探针,或者与其具有相同功能的探针。
2.根据权利要求1所述的测回复突变的探针库,其特征在于,所述的具有相同功能的探针是指具有80%、90%或者95%以上相同的碱基。
3.一种检测回复突变的方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤1,提取样本的DNA并进行片段化;步骤2,将片段化的DNA与权利要求1所述的探针库中的探针进行杂交,富集后并分离;步骤3,将分离的DNA片段进行扩增后进行测序。
4.根据权利要求3所述的检测回复突变的方法,其特征在于,所述的步骤1中,片段化是指将DNA破碎150~200bp。
5.根据权利要求3所述的检测回复突变的方法,其特征在于,所述的步骤2中,通过探针上的生物素和磁珠上的链霉亲和素的相互作用进行富集。
6.一种用于检测回复突变的试剂盒,其含有权利要求1所述的探针库。
7.用于检测PALB2基因回复突变的试剂在用于制备检测乳腺癌患者对铂类药物耐药的试剂中的应用。
8.用于检测BRCA2基因回复突变的试剂在用于制备检测结肠癌患者对铂类药物耐药的试剂中的应用。
9.用于检测RAD51D基因回复突变的试剂在用于制备检测乳腺癌患者对铂类药物耐药的试剂中的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202111236808.6A CN113862335B (zh) | 2021-10-23 | 2021-10-23 | 一种检测回复突变的探针库、检测方法以及试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202111236808.6A CN113862335B (zh) | 2021-10-23 | 2021-10-23 | 一种检测回复突变的探针库、检测方法以及试剂盒 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN113862335A true CN113862335A (zh) | 2021-12-31 |
CN113862335B CN113862335B (zh) | 2023-04-28 |
Family
ID=78997370
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202111236808.6A Active CN113862335B (zh) | 2021-10-23 | 2021-10-23 | 一种检测回复突变的探针库、检测方法以及试剂盒 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN113862335B (zh) |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103667254A (zh) * | 2012-09-18 | 2014-03-26 | 邵阳 | 目标基因片段的富集和检测方法 |
CN110863048A (zh) * | 2019-12-06 | 2020-03-06 | 苏州卫生职业技术学院 | 一种检测dna同源重组修复通路有效性的探针库、检测方法和试剂盒 |
-
2021
- 2021-10-23 CN CN202111236808.6A patent/CN113862335B/zh active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103667254A (zh) * | 2012-09-18 | 2014-03-26 | 邵阳 | 目标基因片段的富集和检测方法 |
CN110863048A (zh) * | 2019-12-06 | 2020-03-06 | 苏州卫生职业技术学院 | 一种检测dna同源重组修复通路有效性的探针库、检测方法和试剂盒 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
JANE GOODALL等: "Circulating Cell-Free DNA to Guide Prostate Cancer Treatment with PARP Inhibition", 《CANCER DISCOVERY》 * |
OLGA KONDRASHOVA等: "Secondary somatic mutations restoring RAD51C and RAD51D associated with acquired resistance to the PARP inhibitor rucaparib in high-grade ovarian carcinoma", 《CANCER DISCOVERY》 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN113862335B (zh) | 2023-04-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2022203184A1 (en) | Sequencing controls | |
KR102114412B1 (ko) | 위장관췌장 신경내분비 신생물 (GEP-NENs)의 예측 방법 | |
CN110331189B (zh) | 一种ntrk融合基因的检测方法、试剂盒以及探针库 | |
WO2019024598A1 (zh) | 一种用于与微卫星不稳定性相关微卫星位点进行杂交的dna探针库、检测方法和试剂盒 | |
CN106834515B (zh) | 一种检测met基因14外显子突变的探针库、检测方法和试剂盒 | |
CN106148323B (zh) | 一种用于构建alk基因融合突变检测文库的方法和试剂盒 | |
CN106399546B (zh) | 高通量测序检测人循环肿瘤dna egfr基因的捕获探针及试剂盒 | |
CN110241183B (zh) | 一种fgfr融合基因的检测方法、试剂盒以及探针库 | |
CN110628894A (zh) | 用于帕金森病基因突变检测的靶向捕获测序试剂盒及其应用 | |
CN107988362A (zh) | 一种肺癌相关33基因靶向捕获测序试剂盒及其应用 | |
CN111690748B (zh) | 使用高通量测序检测微卫星不稳定的探针组、试剂盒及微卫星不稳定的检测方法 | |
CN110863048A (zh) | 一种检测dna同源重组修复通路有效性的探针库、检测方法和试剂盒 | |
CN111575379B (zh) | 甲状腺癌相关58基因检测试剂盒及其使用方法 | |
CN108624686B (zh) | 一种检测brca1/2突变的探针库、检测方法和试剂盒 | |
CN110387400A (zh) | 一种同时捕获基因组目标区域正反义双链的平行液相杂交捕获方法 | |
JP2007528227A (ja) | 診断検査のための人工的な突然変異対照 | |
KR101783994B1 (ko) | 위암 진단방법 및 이를 이용한 위암 진단키트 | |
CN113862335B (zh) | 一种检测回复突变的探针库、检测方法以及试剂盒 | |
CN112359116A (zh) | 一种检测dna跨损伤合成修复通路关键突变基因的试剂盒 | |
CN110904212B (zh) | 性发育异常相关基因捕获试剂盒及其应用 | |
CN113151447A (zh) | 原发性特应性疾病相关基因的捕获探针、试剂盒及其应用 | |
CN112375820A (zh) | 一种检测dna核苷酸切除修复通路关键突变基因的试剂盒 | |
CN114561467B (zh) | 一种met融合基因的检测方法、试剂盒以及探针库 | |
CN114410776B (zh) | 一种nrg1融合基因的检测方法及试剂盒 | |
CN110863049A (zh) | 一种检测dna错配修复通路有效性的探针库、检测方法和试剂盒 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |