CN113855716A

CN113855716A - 红石榴在制备抑制多种肠道菌繁殖的产品中的应用

Info

Publication number: CN113855716A
Application number: CN202111400133.4A
Authority: CN
Inventors: 刘庆军; 沈鹤霄; 李国龙; 刘慧敏; 张帆; 熊云; 彭文聪
Original assignee: Maintain Biomedical Wuhan Co ltd
Current assignee: Maintain Biomedical Wuhan Co ltd
Priority date: 2021-11-19
Filing date: 2021-11-19
Publication date: 2021-12-31

Abstract

本发明公开了红石榴在制备抑制多种肠道菌繁殖的产品中的应用，涉及生物技术领域。发明人创造性地发现红石榴对多种肠道菌有抑制作用，如巨球型菌、单形巨单胞菌、罗斯氏菌、多尔氏菌和琥珀酸弧菌，可以有效降低人体肠道这些菌的含量，可以进一步制备形成这些低含量肠道菌的产品，还可以用于这些肠道菌含量升高所导致的疾病人群。

Description

红石榴在制备抑制多种肠道菌繁殖的产品中的应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及红石榴在制备抑制多种肠道菌繁殖的产品中的应用。

背景技术

红石榴性味甘、酸涩、温，果实中含有丰富的维生素C、石榴多酚和花青素等物质，有很好的排毒、抗氧化功效。在药用、美容、食疗方面都很有效果。然而，其对于肠道微生物的调节作用，目前未见相关报道。

人体肠道中存在的微生物种类繁多，这些微生物依赖于人体的肠道生存，与此同时人体能够在微生物的帮助下完成各种生理生化的功能。人体肠道中的微生物的代谢产物也具有一定调节人体健康的作用，与人体的健康是密切相关。

目前研究表明，人体的多种疾病都与肠道微生物具有密切关联，多个文献报道Megasphaera(巨球型菌)，Megamonas(单形巨单胞菌)，Roseburia(罗斯氏菌)，Dorea(多尔氏菌)的含量升高与T2DM、肥胖和便秘等有关联，若能够有效抑制这几种菌的繁殖则可以对以上几种病症起到效果。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供红石榴在制备抑制多种肠道菌繁殖的产品中的应用。

本发明的另一目的在于提供一种用于抑制肠道菌繁殖的产品，旨在有效抑制多种肠道菌的繁殖。

本发明的第三目的在于提供红石榴在制备用于治疗肠道菌含量升高所导致的疾病的药物中的应用。

本发明是这样实现的：

第一方面，本发明提供红石榴在制备抑制多种肠道菌繁殖的产品中的应用。

在可选的实施方式中，肠道菌包括巨球型菌、单形巨单胞菌、罗斯氏菌、多尔氏菌和琥珀酸弧菌。

在可选的实施方式中，肠道菌选自巨球型菌、单形巨单胞菌、罗斯氏菌和多尔氏菌中的至少一种。

在可选的实施方式中，肠道菌选自巨球型菌、罗斯氏菌和多尔氏菌中的至少一种。

在可选的实施方式中，肠道菌选自巨球型菌和多尔氏菌中的至少一种。

在可选的实施方式中，肠道菌为巨球型菌。

在可选的实施方式中，红石榴为红石榴浓缩粉。

第二方面，本发明提供一种用于抑制肠道菌繁殖的产品，包括红石榴。

第三方面，本发明提供红石榴在制备用于治疗肠道菌含量升高所导致的疾病的药物中的应用。

在可选的实施方式中，肠道菌含量升高所导致的疾病包括二型糖尿病、肥胖和便秘中的至少一种。

本发明具有以下有益效果：发明人创造性地发现红石榴对多种肠道菌有抑制作用，可以有效降低人体肠道菌的含量，可以进一步制备形成用于抑制肠道菌繁殖的产品，还可以制备成药物，用于治疗肠道菌含量升高所导致的疾病。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为经红石榴浓缩粉干预前后的菌群丰度变化。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

发明人创造性地发现：红石榴可以有效抑制肠道菌的繁殖，对多种肠道菌效果显著，可以在制备抑制肠道菌繁殖的产品中得到应用。

进一步地，肠道菌包括巨球型菌(Megasphaera)、单形巨单胞菌(Megamonas)、罗斯氏菌(Roseburia)、多尔氏菌(Dorea)和琥珀酸弧菌(Succinivibrio)。发明人发现，红石榴可以对以上5种菌均具有抑制作用，可以对以上5种菌形成的菌群起到显著的抑制作用。

在一些实施例中，肠道菌选自巨球型菌、单形巨单胞菌、罗斯氏菌和多尔氏菌中的至少一种。发明人发现，红石榴对巨球型菌、单形巨单胞菌、罗斯氏菌和多尔氏菌这四种肠道菌的抑制效果要明显好于琥珀酸弧菌，抑制率可以达到90％以上。

在优选的实施例中，肠道菌选自巨球型菌、罗斯氏菌和多尔氏菌中的至少一种。发明人发现，红石榴对巨球型菌、罗斯氏菌和多尔氏菌这三种肠道菌的抑制效果要好于单形巨单胞菌，对这三种肠道菌的抑制效果可以达到93％以上。

在更优选的实施例中，肠道菌选自巨球型菌和多尔氏菌中的至少一种。红石榴对巨球型菌和多尔氏菌这两种肠道菌的抑制效果要好于罗斯氏菌，对这两种肠道菌的抑制效果可以达到96％以上。

在进一步优选的实施例中，肠道菌为巨球型菌，巨球型菌在肠道中易于繁殖，其含量本身远大于多尔氏菌，因此红石榴能够对巨球型菌达到显著的抑制效果，更具有应用价值。

进一步地，红石榴为红石榴浓缩粉，红石榴浓缩粉为市购原料，采用该原料即可有效针对上述肠道菌起到显著的抑制效果。

在其他实施例中，红石榴也可以为其他形式，不限于红石榴浓缩粉，包括红石榴中的成分。

本发明实施例提供一种用于抑制肠道菌繁殖的产品，包括红石榴，可以是以红石榴浓缩粉的形式加入，产品的形式不限，可以为食品、保健品、药品等。

需要说明的是，用于抑制肠道菌繁殖的产品除包括红石榴之外，还可以包括红石榴中能够抑制肠道菌繁殖的成分。

本发明实施例还提供红石榴在制备用于治疗肠道菌含量升高所导致的疾病的药物中的应用，根据现有技术的记载，巨球型菌、单形巨单胞菌、罗斯氏菌和多尔氏菌等肠道菌的繁殖会引起多种疾病，如二型糖尿病(T2DM)、肥胖和便秘等。因此，可以应用红石榴制备成药物，用于治疗肠道菌含量升高所导致的疾病，包括用于粪菌移植(FMT)的供体细菌。

多个现有技术文献报道MegaspHaera、Megamonas、Roseburia、Dorea与T2DM、肥胖和便秘等有关联，如：

De la Cuesta-Zuluaga,J.,Mueller,N.T.,Corrales-Agudelo,V.,Velásquez-Mejía,E.P.,Carmona,J.A.,Abad,J.M.,&Escobar,J.S.(2016).Metformin Is AssociatedWith Higher Relative Abundance of Mucin-DegradingAkkermansia mucinipHilaandSeveral Short-Chain Fatty Acid–Producing Microbiota in the Gut.Diabetes Care,40(1),54–62.这一文献公开了以上肠道菌繁殖会引起T2DM。

Zhao,Y.,&Yu,Y.-B.(2016).Intestinal microbiota and chronicconstipation.SpringerPlus,5(1).这一文献公开了以上肠道菌繁殖会引起便秘。

Grigor’eva,I.N.(2020).Gallstone Disease,Obesity and the Firmicutes/Bacteroidetes Ratio as a Possible Biomarker of Gut Dysbiosis.Journal ofPersonalized Medicine,11(1),13.这一文献公开了以上肠道菌繁殖会引起肥胖。

因此，基于红石榴能够抑制肠道菌MegaspHaera、Megamonas、Roseburia和Dorea的繁殖，红石榴可以在制备用于治疗肠道菌含量升高所导致的疾病的药物中得到应用，如二型糖尿病(T2DM)、肥胖和便秘等。

试验例1

由于来源于人体的肠道菌群无法完全在小鼠体内进行定殖，导致菌群丰度测定结果不准确的问题，在体外进行体内模拟实验，取人体粪便作为肠道菌群样品，观察红石榴浓缩粉干预对于肠道菌群的作用，具体操作过程如下：

1、粪便样品处理

以10g为例，最终浓度为10％。

称取10g粪便样品，取适量灭菌磷酸缓冲盐溶液(pH＝7.4)加至离心管中，充分混匀。然后将完全混匀的样品平均分装至新50mL离心管中，每管再加适量磷酸缓冲盐溶液。

混匀后进行过滤，把稀释好的样品依次通过20目、50目、100目、200目的滤网。收集滤液至离心管中，将离心管放入离心机，6000G，4℃离心15min，弃上清。将沉淀称量之后，以终浓度为10％用PBS溶液定容，得到肠道微生物样品。

2、红石榴浓缩粉干预实验

(1)基础培养基配制

配制用于培养肠道微生物的基础培养基：GAM培养基，以1000mL为例。称取60g改良GAM肉汤药品，用量筒量取800mL超纯水倒入烧杯中，通过磁力加热搅拌器搅拌至完全溶解。将上述完全溶解的溶液转移至1000mL容量瓶，将容量瓶中的液体用超纯水定容。

将定容后的溶液倒入玻璃瓶，每1000mL的瓶子内放500mL培养基，防止高压灭菌时喷出。将装有培养基玻璃瓶，瓶盖拧松，放入脉冲高压灭菌锅，使用液体程序，121℃，15分钟。灭菌完后，立即把瓶盖拧紧，冷却至室温。

(2)红石榴浓缩粉-GAM培养基配制

移取上述GAM培养基分装至玻璃管中，每管2mL，将黑色盖子放在瓶口上微掩。再移取红石榴浓缩粉溶液(红石榴浓缩粉为市购，纯度99％，用磷酸缓冲盐溶液溶解至质量百分浓度为：5％)，加入上述装有GAM培养基的玻璃管中，每管2mL，作为试验组。同时还设置有空白对照组，每组3个重复，分组具体如下：

试验组：2mL GAM培养基+2mL红石榴浓缩粉溶液+1mL磷酸缓冲盐溶液；

对照组：2mL GAM培养基+3mL磷酸缓冲盐溶液；

确认好每个玻璃管盖拧紧后，转移至厌氧箱传递箱中，放置之前需用84消毒液消毒处理。放入厌氧箱后，拧松瓶盖，置换氧气，需置换12个小时。将上述处理后得到的肠道微生物样品分别接种至试验组(红石榴浓缩粉-GAM培养基)以及空白对照组(GAM培养基-磷酸缓冲盐溶液)中，每管1mL。于厌氧箱中培养72小时后，观察菌群的生长状况。

分别将试验组样品和对照组样品，10000rpm，3min离心，弃上清，将沉淀用液氮处理，并利用二代测序法(16S rDNA)分别测定试验组和对照组中的肠道菌群丰度，即不同肠道微生物在检测到的所有菌种中所占的百分比，其中部分肠道菌群的丰度测定结果如表1所示。

对部分肠道菌群经红石榴浓缩粉干预前后的丰度变化进行显著性分析，结果如图1所示，图中**表示P＜0.01，即丰度变化有极显著差异；*表示P＜0.05，即丰度变化有显著差异。

表1不同处理组的肠道菌群丰度

其中，抑制率的计算是通过如下公式计算：(对照组均值-试验组均值)/对照组均值。

由图1和表1的测试结果可知，红石榴对Megasphaera，Megamonas，Roseburia，Dorea四种肠道菌有极其显著性的降低，对Succinivibrio变化不明显。

综上所述，本发明实施例提供红石榴在制备抑制多种肠道菌繁殖的产品中的应用，通过体外模拟肠道环境，并以健康人体粪便中收集的肠道菌群作为样本，将红石榴浓缩粉提取物应用到抑制这些菌增殖发酵，为临床应用和特异性产品开发提供科学依据。

以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.红石榴在制备抑制多种肠道菌繁殖的产品中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肠道菌包括巨球型菌、单形巨单胞菌、罗斯氏菌、多尔氏菌和琥珀酸弧菌。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肠道菌选自巨球型菌、单形巨单胞菌、罗斯氏菌和多尔氏菌中的至少一种。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述肠道菌选自巨球型菌、罗斯氏菌和多尔氏菌中的至少一种。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述肠道菌选自巨球型菌和多尔氏菌中的至少一种。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述肠道菌为巨球型菌。

7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述红石榴为红石榴浓缩粉。

8.一种用于抑制肠道菌繁殖的产品，其特征在于，包括红石榴。

9.红石榴在制备用于治疗肠道菌含量升高所导致的疾病的药物中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，肠道菌含量升高所导致的疾病包括二型糖尿病、肥胖和便秘中的至少一种。