CN113840622B - 一种稳定的苏金单抗注射剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种稳定的苏金单抗注射剂及其制备方法，提供了一种稳定的苏金单抗注射剂，由以下成分构成：苏金单抗50mg/ml‑300mg/ml、组氨酸及组氨酸盐酸盐5‑50mmol/L、甲硫氨酸5‑50mmol/L、低级糖醇150mmol/L‑400mmol/L、聚山梨酯800.01％‑0.02％，其余成分为注射用水，pH5.0‑7.0，所述稳定的苏金单抗注射剂通过稳定性试验证明该注射剂质量稳定，且稳定性优于市场上的商业品种，各项指标符合中国药典的有关规定，具有良好的应用前景。
Description
本申请要求于2019年05月17日提交中国专利局、申请号为201910412754.0、发明名称为“一种稳定的苏金单抗注射剂及其制备方法”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。
技术领域
本发明属于生物制药和制剂领域，具体涉及一种稳定的苏金单抗注射剂及其制备方法。
背景技术
银屑病是一种慢性免疫介导的皮肤疾病，全球患病人数大约1.25亿，中国银屑病患者多达650万。
苏金单抗是一种全人源化单克隆抗IL-17A炎性细胞因子IgG1抗体，通过与IL-17A结合，直接阻断了IL-17A与其受体的相互作用，从而改变免疫和炎症反应达到治疗目的。
(活性成分：Secukinumab，苏金单抗)是诺华公司开发的全球首款靶向IL-17A的重磅生物药，已经证实其在治疗银屑病疗效上超越Enbrel和Humira等传统靶向TNFα的生物制剂，目前暂未在中国上市，并且中国缺乏相应的药物品种。作为生物抗体类药物，抗体制剂的稳定性为药物质控的重点项目，申请人在前期检索中发现，原研药物(CN201580076632.9)通常采用海藻糖作为稳定剂进行制剂，其他稳定剂目前尚不确定，造成该药在国际和国内的药物品种极少，可替代性差。
发明内容
为解决上述技术问题，因此本发明提供了一种稳定的苏金单抗注射剂，所述注射剂由以下成分组成：苏金单抗50mg/ml-250mg/ml、组氨酸及组氨酸盐酸盐5-50mmol/L、甲硫氨酸5-40mmol/L、低级糖醇150mmol/L-370mmol/L、聚山梨酯80 0.01％-0.02％，其余成分为注射用水，pH5.0-7.0。
在本发明申请中，申请人筛选到一类低级糖醇，优选山梨醇或木糖醇，在注射剂领域，山梨醇常用作无糖制剂的载体以及药物的稳定剂，常用浓度范围10％-25％。
木糖醇，常用浓度范围5％-10％，作用是糖尿病患者糖代用品。
目前尚未发现山梨醇和木糖醇应用于苏金单抗注射剂的报道。
发明人经过前期的文献检索和实验筛查，发现了新的稳定剂，即一类低级糖醇，特别是山梨醇或木糖醇。发明人在稳定剂筛选过程中，加入低级糖醇后，分别与原研药优选实施例进行对比，并在长期(4℃)、加速(25℃)和高温(40℃)下进行稳定性研究，包括物理稳定性(SEC-HPLC(SEC高分子蛋白：中国药典2015版通则)、通过光阻法测得的可见颗粒(参考中国药典2015版通则0904)和不溶性微粒(参考中国药典2015版通则0903))、化学稳定性(CEX-HPLC赖氨酸变体，参考中国药典2015版三部附录IIIB)，稳定性结果显示：本发明所制备的稳定的苏金单抗注射剂的稳定性优于现有技术中的稳定的苏金单抗注射剂(海藻糖作为稳定剂，即原研药注射液配方)。
优选地，本发明提供一种稳定的苏金单抗注射剂，所述注射剂由以下成分组成：苏金单抗100mg/ml-250mg/ml、组氨酸及组氨酸盐酸盐10-40mmol/L、甲硫氨酸5-40mmol/L、低级糖醇180mmol/L-350mmol/L、聚山梨酯80 0.01％-0.02％，其余成分为注射用水，pH5.5-6.5。
优选地，本发明提供一种稳定的苏金单抗注射剂，所述注射剂由以下成分组成：苏金单抗140mg/ml-200mg/ml、组氨酸及组氨酸盐酸盐10-35mmol/L、甲硫氨酸5-30mmol/L、低级糖醇180mmol/L-300mmol/L、聚山梨酯80 0.02％，其余成分为注射用水，pH5.5-6.5。
优选地，本发明提供一种稳定的苏金单抗注射剂，所述注射剂由以下成分组成：苏金单抗140mg/ml-160mg/ml、组氨酸及组氨酸盐酸盐10-30mmol/L、甲硫氨酸5-20mmol/L、低级糖醇210mmol/L-280mmol/L、聚山梨酯80 0.02％，其余成分为注射用水，pH5.5-6.5。
优选地，在上述所述稳定的苏金单抗注射剂中，所述低级糖醇为山梨醇或木糖醇。
进一步优选低级糖醇为木糖醇。
进一步优选pH为5.8。
本发明进一步提交一种上述稳定的苏金单抗注射剂的制备方法，由以下步骤组成：
1)缓冲液配制
缓冲液A，按处方量称量组氨酸、甲硫氨酸、低级糖醇，用注射用水稀释至处方浓度，搅拌混合均匀；
缓冲液B，按处方量组氨酸盐酸盐、甲硫氨酸、低级糖醇，用注射用水定稀释至处方浓度，搅拌混合均匀；
将缓冲液A加入至缓冲液B中调节为最终pH，此为最终缓冲液；
2)成品制备
a.将纯化后的苏金单抗超滤浓缩；
b.浓缩蛋白浓度测定，取出浓缩后的蛋白样品，测量体积，测定其蛋白浓度，当蛋白浓度达到100-120mg/ml时开始置换缓冲液；
c.置换操作，将与浓缩后的蛋白液体积等体积的最终缓冲液加入样品杯中，混匀并浓缩至蛋白浓度为100-120mg/ml，重复多次置换操作；
d.将置换缓冲液后的苏金单抗超滤浓缩，加入聚山梨酯80，无菌过滤即得。
进一步地，具体配置方法为：
缓冲液配制：
缓冲液A：按处方量称量组氨酸10-30mmol/L，甲硫氨酸5-20mmol/L，山梨醇210mmol/L-280mmol/L，注射用水定至总体积7000ml，搅拌混合均匀。
缓冲液B：按处方量组氨酸盐酸盐10-30mmol/L，甲硫氨酸5-20mmol/L，山梨醇210mmol/L-280mmol/L，注射用水定至总体积7000ml，搅拌混合均匀。
将缓冲液A加入至缓冲液B中调节pH，使pH至5.5-6.5，此为最终缓冲液。
成品制备：
a.将纯化后的苏金单抗倒入超滤系统样品杯中，启动超滤系统，使透过速度在20-30ml/min，压力不大于20PSI。PSI(Pounds per square inch)
b.浓缩蛋白浓度测定：取出浓缩后的蛋白样品，测量体积，并用超微量分光光度计测定其蛋白浓度，浓度达到100-120mg/ml时开始置换缓冲液。
c.置换缓冲液：将与浓缩后的蛋白体积等体积的缓冲液加入样品杯中，混匀并浓缩至蛋白浓度为100-120mg/ml，上述置换操作进行8次；每次置换后检测透过端液体的pH、电导率，直至超滤系统透过端流出液体与配制的缓冲液pH和电导率相同或相近，标志置换缓冲液结束。
d.将置换缓冲液后的苏金单抗接着上述步骤进行超滤过浓缩至170-180mg/ml，收集样品并记录其体积，用缓冲液冲洗超滤系统管路，收集冲洗液并加入至过浓缩的蛋白中，使蛋白浓度为140-160mg/ml，体积为1100ml，加入聚山梨酯80，使聚山梨酯80终浓度为0.02％。将所得原液在无菌环境下用0.22μm滤膜过滤并分装至预灌封注射器中，分装体积为1ml/支，共1000支，贴好标签。
上述苏金单抗原料的制备工艺参考专利原研专利CN101001645A，得到与原研厂家具有相同理化性质的苏金单抗产品，纯化后的苏金单抗含有醋酸盐缓冲成分，pH值在5左右，该条件下不利于制剂稳定。为保证制剂稳定性，需要置换缓冲液。
本发明进一步提供了上述稳定的苏金单抗注射剂在制备治疗银屑病中的应用。
发明人通过大量实验筛选，筛选范围包括了表面活性剂、糖或糖醇、氨基酸、赋形剂等，筛选出山梨醇及木糖醇这类低级糖醇，分别通过pH、缓冲剂的筛选，制备相应的注射剂，对比原研药制备优选稳定的苏金单抗注射剂，本发明的稳定性显著提高，克服了现有技术的缺点，进一步提高了苏金单抗注射剂的稳定性，具有突出的工业应用性。
具体实施方式
本发明公开了稳定的苏金单抗注射剂及其制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供的稳定的苏金单抗注射剂及其制备方法中所用原料及试剂均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实验例1：缓冲液
在预灌封注射器中评价缓冲液种类(磷酸盐、组氨酸、枸橼酸盐)的影响。
处方1：苏金单抗150mg/ml，磷酸二氢钠及磷酸氢二钠20mmol/L，甲硫氨酸5mmol/L，海藻糖200mmol/L，聚山梨酯80 0.02％，pH5.8；
处方2：苏金单抗150mg/ml，组氨酸及组氨酸盐酸盐20mmol/L，甲硫氨酸5mmol/L，海藻糖200mmol/L，聚山梨酯80 0.02％，pH5.8；
处方3：苏金单抗150mg/ml，枸橼酸及枸橼酸钠20mmol/L，甲硫氨酸5mmol/L，海藻糖200mmol/L，聚山梨酯80 0.02％，pH5.8。
将上述三组处方注射液填充到预灌封注射器中，并在长期(4℃)、加速(25℃)和高温(40℃)下进行稳定性研究，评价物理稳定性(SEC-HPLC(SEC高分子蛋白：中国药典2015版通则)、通过光阻法测得的可见颗粒(参考中国药典2015版通则0904)和不溶性微粒(参考中国药典2015版通则0903))、化学稳定性(CEX-HPLC赖氨酸变体，参考中国药典2015版三部附录IIIB)。从结果可知，组氨酸缓冲盐体系品种稳定性较优。
表1 SEC-HPLC检测结果(40℃ 4周)
表2 CEX-HPLC检测结果(40℃ 4周)
表3 SEC-HPLC检测结果(25℃ 12周)
表4 CEX-HPLC检测结果(25℃ 12周)
表5 SEC-HPLC检测结果(4℃ 16周)
表6 CEX-HPLC检测结果(4℃ 16周)
实验例2：pH
以处方苏金单抗150mg/ml，组氨酸及组氨酸盐酸盐20mmol/L，甲硫氨酸5mmol/L，海藻糖200mmol/L，聚山梨酯80 0.02％为基础，调节pH分别至4.5、5.0、5.5、5.8、6.0、6.5、7.0，考察不同pH对苏金单抗稳定性的影响。将样品在高温条件下储存4周，通过SEC-HPLC、CEX-HPLC评价苏金单抗稳定性。从SEC-HPLC、CEX-HPLC确定蛋白聚集和水解在pH6.0左右最小。
实验例3：稳定剂
为注射剂型进行的初步处方开发致力于评价不同稳定剂在长期(4℃)、加速(25℃)和高温(40℃)储存条件下储存期间对苏金单抗可溶性和不溶性团聚体形成(SEC-HPLC、DLS、通过光阻法测得的可见颗粒和不溶性微粒)、化学稳定性(CEX-HPLC)的影响。稳定剂选择山梨醇、木糖醇和海藻糖，处方如下：
处方1：苏金单抗150mg/ml，组氨酸及组氨酸盐酸盐20mmol/L，甲硫氨酸5mmol/L，山梨醇239mmol/L，聚山梨酯80 0.02％，pH5.8；
处方2：苏金单抗150mg/ml，组氨酸及组氨酸盐酸盐20mmol/L，甲硫氨酸5mmol/L，木糖醇241mmol/L，木糖醇0.02％，pH5.8；
处方3：苏金单抗150mg/ml，组氨酸及组氨酸盐酸盐20mmol/L，甲硫氨酸5mmol/L，海藻糖200mmol/L，聚山梨酯80 0.02％，pH5.8
经前期单独稳定性试验，所用山梨醇和木糖醇浓度为稳定性最优浓度。
通过试验结果可知，选择木糖醇和山梨醇作为稳定剂的处方，与海藻糖相比，稳定性优于海藻糖组，根据原研药的专利配方公布，原研药CN201580076632.9的最优配方为处方3。因此本发明克服了现有的技术问题，进一步提高了注射剂的稳定性。
表7 SEC-HPLC检测结果(40℃ 4周)
表8 CEX-HPLC检测结果(40℃ 4周)
表9 SEC-HPLC检测结果(25℃ 6个月)
表10 CEX-HPLC检测结果(25℃ 6个月)
表11 SEC-HPLC检测结果(4℃ 6个月)
表12 CEX-HPLC检测结果(4℃ 6个月)
实施例1
苏金单抗150mg/ml、组氨酸及组氨酸盐酸盐20mmol/L、甲硫氨酸5mmol/L、山梨醇239mmol/L、聚山梨酯80 0.02％，其余成分为注射用水，pH5.8。
制备方法参考发明内容。
实施例2
苏金单抗150mg/ml、组氨酸及组氨酸盐酸盐20mmol/L、甲硫氨酸5mmol/L、木糖醇241mmol/L、聚山梨酯80 0.02％，其余成分为注射用水，pH5.8.
制备方法参考发明内容。
实施例3
苏金单抗150mg/ml、组氨酸及组氨酸盐酸盐20mmol/L、甲硫氨酸5mmol/L、山梨醇210mmol/L、聚山梨酯80 0.02％，其余成分为注射用水，pH5.8.
制备方法参考发明内容。
实施例4
苏金单抗150mg/ml、组氨酸及组氨酸盐酸盐20mmol/L、甲硫氨酸5mmol/L、山梨醇280mmol/L、聚山梨酯80 0.02％，其余成分为注射用水，pH5.8.
制备方法参考发明内容。
实施例5
苏金单抗140mg/ml、组氨酸及组氨酸盐酸盐10mmol/L、甲硫氨酸5mmol/L、山梨醇210mmol/L、聚山梨酯80 0.02％，其余成分为注射用水，pH5.8.
制备方法参考发明内容。
实施例6
苏金单抗160mg/ml、组氨酸及组氨酸盐酸盐30mmol/L、甲硫氨酸20mmol/L、木糖醇280mmol/L、聚山梨酯80 0.02％，其余成分为注射用水，pH5.8.
制备方法参考发明内容。
实施例7
苏金单抗150mg/ml、组氨酸及组氨酸盐酸盐20mmol/L、甲硫氨酸5mmol/L、木糖醇210mmol/L、聚山梨酯80 0.02％，其余成分为注射用水，pH5.8.
制备方法参考发明内容。
实施例8
苏金单抗150mg/ml、组氨酸及组氨酸盐酸盐20mmol/L、甲硫氨酸5mmol/L、木糖醇280mmol/L、聚山梨酯80 0.02％，其余成分为注射用水，pH5.8.
制备方法参考发明内容。
效果例
以上实施例和实验的各项辅料参考表13。
表13
以上对本发明所提供的稳定的苏金单抗注射剂及其制备方法进行了详细介绍。本文应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
Claims (8)
1.一种稳定的苏金单抗注射剂，其特征在于，所述注射剂由以下成分组成：苏金单抗50mg/ml-250mg/ml、组氨酸及组氨酸盐酸盐5-50mmol/L、甲硫氨酸5-40mmol/L、低级糖醇150mmol/L-370mmol/L、聚山梨酯80 0.01％v/v-0.02％v/v，其余成分为注射用水，pH5.0-7.0，所述低级糖醇为木糖醇。
2.根据权利要求1所述稳定的苏金单抗注射剂，其特征在于，所述注射剂由以下成分组成：苏金单抗100mg/ml-250mg/ml、组氨酸及组氨酸盐酸盐10-40mmol/L、甲硫氨酸5-40mmol/L、低级糖醇180mmol/L-350mmol/L、聚山梨酯80 0.01％v/v-0.02％v/v，其余成分为注射用水，pH5.5-6.5。
3.根据权利要求1所述稳定的苏金单抗注射剂，其特征在于，所述注射剂由以下成分组成：苏金单抗140mg/ml-200mg/ml、组氨酸及组氨酸盐酸盐10-35mmol/L、甲硫氨酸5-30mmol/L、低级糖醇180mmol/L-300mmol/L、聚山梨酯80 0.02％v/v，其余成分为注射用水，pH5.5-6.5。
4.根据权利要求1所述稳定的苏金单抗注射剂，其特征在于，所述注射剂由以下成分组成：苏金单抗140mg/ml-160mg/ml、组氨酸及组氨酸盐酸盐10-30mmol/L、甲硫氨酸5-20mmol/L、低级糖醇210mmol/L-280mmol/L、聚山梨酯80 0.02％v/v，其余成分为注射用水，pH5.5-6.5。
5.根据权利要求1所述稳定的苏金单抗注射剂，其特征在于，所述注射剂由以下成分组成：苏金单抗150mg/ml、组氨酸及组氨酸盐酸盐20mmol/L、甲硫氨酸5mmol/L、低级糖醇210mmol/L-280mmol/L、聚山梨酯80 0.02％v/v，其余成分为注射用水，pH5.5-6.5。
6.根据权利要求1所述稳定的苏金单抗注射剂，其特征在于，所述pH为5.8。
7.一种权利要求1至6任一项所述稳定的苏金单抗注射剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)缓冲液配制
缓冲液A，按处方量称量组氨酸、甲硫氨酸、低级糖醇，用注射用水稀释至处方浓度，搅拌混合均匀；
缓冲液B，按处方量组氨酸盐酸盐、甲硫氨酸、低级糖醇，用注射用水定稀释至处方浓度，搅拌混合均匀；
所述低级糖醇为木糖醇；
将缓冲液A加入至缓冲液B中调节为最终pH，此为最终缓冲液；
2)成品制备
a.将纯化后的苏金单抗超滤浓缩；
b.浓缩蛋白浓度测定，取出浓缩后的蛋白样品，测量体积，测定其蛋白浓度，当蛋白浓度达到100-120mg/ml时开始置换缓冲液；
c.置换操作，将与浓缩后的蛋白液体积等体积的最终缓冲液加入样品杯中，混匀并浓缩至蛋白浓度为100-120mg/ml，重复多次置换操作；
d.将置换缓冲液后的苏金单抗超滤浓缩，加入聚山梨酯80，无菌过滤即得。
8.一种权利要求1至6任一项所述稳定的苏金单抗注射剂在制备治疗银屑病的药物中的应用。
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| US20240101659A1 (en) * | 2020-11-25 | 2024-03-28 | Dr. Reddy’S Laboratories Limited | Stable therapeutic protein formulation and methods of making the same |
| KR20240141083A (ko) * | 2023-03-17 | 2024-09-25 | (주)셀트리온 | 안정한 약제학적 제제 및 완제의약품의 제조공정 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000186046A (ja) * | 1998-10-14 | 2000-07-04 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 慢性関節リウマチ治療剤及び診断方法 |
| CN104666242A (zh) * | 2013-11-26 | 2015-06-03 | 信达生物制药(苏州)有限公司 | 一种稳定的抗TNF-α抗体制剂及其用途 |
| CN104922668A (zh) * | 2014-12-10 | 2015-09-23 | 信达生物制药(苏州)有限公司 | 一种稳定的抗vegf抗体制剂及其用途 |
| CN105727285A (zh) * | 2014-12-10 | 2016-07-06 | 信达生物制药(苏州)有限公司 | 一种单克隆抗体在治疗神经退行性疾病中的应用 |
| CN107257692A (zh) * | 2014-12-22 | 2017-10-17 | 诺华股份有限公司 | Il‑17抗体的药物产品和稳定液体组合物 |
| WO2018011555A1 (en) * | 2016-07-11 | 2018-01-18 | Crescendo Biologics Limited | Composition for treatment of disorders |
| WO2018060210A1 (en) * | 2016-09-27 | 2018-04-05 | Ares Trading S.A. | Liquid pharmaceutical composition |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB0417487D0 (en) * | 2004-08-05 | 2004-09-08 | Novartis Ag | Organic compound |
| US9345661B2 (en) * | 2009-07-31 | 2016-05-24 | Genentech, Inc. | Subcutaneous anti-HER2 antibody formulations and uses thereof |
| KR20180019247A (ko) * | 2010-11-05 | 2018-02-23 | 노파르티스 아게 | Ｉｌ-１７ 길항제를 사용한 류마티스성 관절염의 치료 방법 |
| KR20170018810A (ko) * | 2014-06-10 | 2017-02-20 | 메이지 세이카 파루마 가부시키가이샤 | 안정한 아달리무맙 수성 제제 |
| SG10202106970XA (en) * | 2015-08-19 | 2021-07-29 | Astrazeneca Ab | Stable anti-ifnar1 formulation |
| JP2021008406A (ja) * | 2017-09-29 | 2021-01-28 | アステラス製薬株式会社 | 改良型ヒト化抗ヒトα９インテグリン抗体含有医薬組成物 |
| CN110179746A (zh) * | 2019-05-17 | 2019-08-30 | 通化东宝生物科技有限公司 | 一种稳定的苏金单抗注射剂及其制备方法 |
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Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000186046A (ja) * | 1998-10-14 | 2000-07-04 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 慢性関節リウマチ治療剤及び診断方法 |
| CN104666242A (zh) * | 2013-11-26 | 2015-06-03 | 信达生物制药(苏州)有限公司 | 一种稳定的抗TNF-α抗体制剂及其用途 |
| CN104922668A (zh) * | 2014-12-10 | 2015-09-23 | 信达生物制药(苏州)有限公司 | 一种稳定的抗vegf抗体制剂及其用途 |
| CN105727285A (zh) * | 2014-12-10 | 2016-07-06 | 信达生物制药(苏州)有限公司 | 一种单克隆抗体在治疗神经退行性疾病中的应用 |
| CN107257692A (zh) * | 2014-12-22 | 2017-10-17 | 诺华股份有限公司 | Il‑17抗体的药物产品和稳定液体组合物 |
| WO2018011555A1 (en) * | 2016-07-11 | 2018-01-18 | Crescendo Biologics Limited | Composition for treatment of disorders |
| WO2018060210A1 (en) * | 2016-09-27 | 2018-04-05 | Ares Trading S.A. | Liquid pharmaceutical composition |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 张志宏等.木糖醇作为渗透泵制剂新辅料的双重作用研究.中国新药杂志.2009,18(第23期),全文. * |
| 谷祥富等.甲磺酸帕珠沙星木糖醇注射液的制备与质量控制.中国药业.2008,(第07期),全文. * |
Also Published As
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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