CN105727285A

CN105727285A - 一种单克隆抗体在治疗神经退行性疾病中的应用

Info

Publication number: CN105727285A
Application number: CN201410757478.9A
Authority: CN
Inventors: 王春明; 李佳; 俞德超
Original assignee: Innovent Biologics Suzhou Co Ltd
Current assignee: Innovent Biologics Suzhou Co Ltd; Innovent Biologics Inc
Priority date: 2014-12-10
Filing date: 2014-12-10
Publication date: 2016-07-06
Anticipated expiration: 2034-12-10
Also published as: CN105727285B

Abstract

本发明公开了一种单克隆抗体在治疗神经退行性疾病中的应用。具体地，本发明提供了一种单克隆抗体的用途，用于制备治疗神经退行性疾病的药物组合物；其中，所述的单克隆抗体的序列如SEQ ID NO.1所示。实验证明，本发明单克隆抗体和制剂对神经退行性疾病有显著的治疗作用，且该作用具有显著的剂量依赖性。

Description

一种单克隆抗体在治疗神经退行性疾病中的应用

技术领域

本发明术语生物医药领域，具体地，涉及一种单克隆抗体在神经退行性疾病中的应用。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease，AD)是一种慢性渐进性的神经退行性疾病，临床主要表现为认知功能不断下降，同时伴有多种行为异常，最终导致死亡。AD主要包括家族性和散发性：前者发病早，与淀粉样前体蛋白(amyloidprecursorprotein，APP)、早老素1(presenilin1，PS1)和早老素2(presenilin2，PS2)基因突变有关；后者病例多，多数在65岁以后发病，与载脂蛋白E(ApolipoproteinE，ApoE)的多态性有关。AD目前在所有死亡原因中居第六位，在65岁以上人群的死亡原因中居第五位。2010年，全球AD病例有3600万；到2030年，可能会达到6600万；到2050年，可能会达到11500万。AD的发病原因非常复杂，至今尚未确切阐明。

目前临床上AD的主要治疗药物为多奈哌齐，该药为胆碱酯酶抑制剂，通过减少乙酰胆碱的降解而发挥改善学习记忆的作用，只能够缓解AD病人的学习记忆损伤症状，并不能减轻神经炎症、老年斑沉积等病理损伤。

因此，本领域迫切需要开发一种疗效更好、副作用少的治疗神经退行性疾病的药物。

发明内容

本发明的目的是提供一种疗效更好、副作用少的治疗神经退行性疾病的药物。

在本发明的第一方面，提供了一种单克隆抗体的用途，所述单克隆抗体用于制备治疗神经退行性疾病的药物组合物，其中所述的单克隆抗体具有如SEQIDNO.:1所示序列。

在另一优选例中，所述的药物组合物含有SEQIDNO.:1所示序列的单克隆抗体，和药学上可接受的载体。

在另一优选例中，所述的神经退行性疾病选自下组：阿尔茨海默病、帕金森氏病和脑中风等(Aβ诱导的学习记忆障碍、LPS诱导的学习记忆障碍)。

在另一优选例中，所述的药物组合物中所述单克隆抗体的浓度为1-100mg/ml。

在另一优选例中，所述单克隆抗体的施用剂量为0.1-100mg/kg。

在另一优选例中，所述的药物组合物还用于：(i)抑制炎症因子与受体结合和/或(ii)抑制小胶质细胞的增殖和活化；和/或(iii)抑制炎症因子分泌。

在另一优选例中，所述炎症因子选自下组：IL-1、IL-2、和IL-6。

在另一优选例中，所述的药物组合物的剂型包括：注射剂、冻干粉。

在另一优选例中，所述的药物组合物为注射剂，并优选地含有：

(i)治疗有效量的抗TNF-α抗体(即SEQIDNO.:1所示序列的单克隆抗体)；

(ii)含0.8-6.2mg/ml组氨酸的缓冲体系；

(iii)渗透压调节剂；以及

(iv)表面活性剂，

其中，所述制剂的pH为5.5-6.5。

在另一优选例中，所述抗TNF-α抗体的浓度为40-60mg/ml。

在另一优选例中，所述抗TNF-α抗体的浓度为45-55mg/ml，优选为48-52mg/ml，最优选为50mg/ml。

在另一优选例中，所述组氨酸的浓度为1.6-5.0mg/ml，优选为3.0-3.8mg/ml。

在另一优选例中，所述组氨酸的pH为5.5-6.5，优选为5.8-6.2。

在另一优选例中，所述抗TNF-α抗体为单克隆抗体。

在另一优选例中，所述单克隆抗体为全长抗体。

在另一优选例中，所述单克隆抗体为IgG1抗体。

在另一优选例中，所述单克隆抗体为人源化抗体。

在另一优选例中，所述单克隆抗体为包含抗原结合区的抗体片段。

在另一优选例中，所述抗体片段为Fab或F(ab′)₂片段。

在另一优选例中，所述单克隆抗体结合TNF-α。

在另一优选例中，所述抗TNF-α抗体选自：阿达木单抗(adalimumab)、英夫利昔单抗(infliximab)、戈利木单抗(Golimumab)。

在另一优选例中，所述抗TNF-α抗体为SEQIDNO.:1所示序列的单克隆抗体。

在另一优选例中，所述制剂的pH为5.8-6.2，优选为5.9-6.1，最优选为6.0。

在另一优选例中，所述渗透压调节剂包括多元醇和氯化钠。

在另一优选例中，所述多元醇为甘露醇或山梨醇。

在另一优选例中，所述多元醇的浓度为8-20mg/ml，优选为10-15mg/ml。

在另一优选例中，所述NaCl的浓度为2-10mg/ml，优选为4-8mg/ml，更优选为5.5-6.5mg/ml。

在另一优选例中，所述表面活性剂的浓度为0.6-1.0mg/ml，优选为0.8-1.0mg/ml。

在另一优选例中，所述表面活性剂为聚山梨酯。

在另一优选例中，所述聚山梨酯为聚山梨酯80。

在另一优选例中，所述制剂具有下组的一种或多种特征：

(a)所述制剂在2-8℃可保存至少2年；

(b)所述制剂适合皮下注射。

在另一优选例中，所述制剂包括：

(a)40-60/ml抗TNF-α单克隆抗体(即SEQIDNO.:1所示序列的单克隆抗体)；

(b)0.8-6.2mg/ml组氨酸；

(c)8-20mg/ml多元醇；

(d)2-10mg/mlNaCl；

(e)0.6-1.0mg/ml聚山梨酯，

并且所述制剂的pH为5.5-6.5。

在另一优选例中，所述药物组合物中不含柠檬酸。

在另一优选例中，所述的单克隆抗体由CHO细胞表达，经纯化获得。

在另一优选例中，所述治疗神经退行性疾病的治疗效果呈剂量依赖型。

本发明第二方面提供了一种治疗神经退行性疾病的药物组合物，所述的药物组合物含有安全有效量的SEQIDNO.:1所示序列的单克隆抗体，和药学上可接受的载体。

在另一优选例中，所述的药物组合物包括：

(ii)含0.8-6.2mg/ml组氨酸的缓冲体系；

(iii)渗透压调节剂；以及

(iv)表面活性剂，

其中，所述制剂的pH为5.5-6.5。

本发明的第三方面提供了一种治疗神经退行性疾病的方法，所述方法包括步骤：将具有SEQIDNO.:1所示序列的单克隆抗体或其药物组合物施用于需要的对象。

在另一优选例中，所述的需要的对象为哺乳动物，例如人、非人灵长类、大鼠、小鼠。

本发明的第四方面提供了一种体外非治疗性的抑制炎症因子分泌的方法，所述方法包括步骤：

在SEQIDNO.:1所示单克隆抗体的存在下，培养细胞，从而抑制所述细胞分泌炎症因子。

在另一优选例中，所述的细胞包括小胶质细胞。

在另一优选例中，所述炎症因子包括下组：IL-1、IL-2、和IL-6。

本发明第五方面提供了一种体外非治疗性的抑制小胶质细胞的增殖和/或活化的方法，所述方法包括步骤：

在SEQIDNO.:1所示单克隆抗体的存在下，培养小胶质细胞，从而抑制所述小胶质细胞的增殖和/或活化。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1显示了重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体与TNF-α的结合动力学曲线。

图2显示了重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体与不同种类细胞因子的结合情况比较。

图3显示了重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对TNF-α与重组p55或p75结合的抑制作用。

图4显示了重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对TNF-α介导的细胞毒性的中和作用。

图5显示了重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对oAβ_1-42诱导学习记忆损伤小鼠在Y迷宫中自发交替反应率的影响。###p<0.001，与saline组比较；*p<0.05，**p<0.01，与oAβ_1-42组比较。

图6显示了重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对oAβ_1-42诱导小鼠海马内小胶质细胞活化的抑制作用。A：saline组；B：oAβ_1-42组；C：重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体5mg/kg组；D：重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体15mg/kg组；E：重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体50mg/kg组；F：多奈哌齐5mg/kg组。###p<0.001，与saline组比较；*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，与oAβ_1-42组比较。

图7显示了重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对oAβ_1-42诱导学习记忆损伤小鼠海马内TNF-α水平的影响。###p<0.001，与saline组比较；*p<0.05，**p<0.01，与oAβ_1-42组比较。

图8显示了重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对LPS诱导学习记忆损伤小鼠在Y迷宫中自发交替反应率的影响。###p<0.001，与saline组比较；***p<0.001，与LPS组比较。

图9显示了重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对LPS诱导小鼠海马内小胶质细胞活化的抑制作用。A：saline组；B：LPS组；C：重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体5mg/kg组；D：重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体15mg/kg组；E：重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体50mg/kg组；F：米诺环素50mg/kg组。###p<0.001，与saline组比较；***p<0.001，与LPS组比较。

图10显示了重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对LPS诱导学习记忆损伤小鼠海马内TNF-α水平的影响。###p<0.001，与saline组比较；**p<0.01，***p<0.001，与LPS组比较。

具体实施方式

本发明人经过广泛而深入的研究，首次意外地发现，具有SEQIDNO.:1所示序列的单克隆抗体虽然分子量大，但是居然能够非常有效地透过血脑屏障，从而对神经退行性疾病具有良好的治疗作用。具体地，本发明人发现在神经炎症模型小鼠中，通过腹腔注射给药的本发明单克隆抗体和相应制剂能够有效地抑制动物脑部小胶质细胞活化和小鼠学习记忆能力的损伤。实验证明，本发明单克隆抗体通过抑制炎症因子与其受体结合来达到对神经退行性疾病的治疗作用，效果与阳性对照组相当，且该作用具有显著的剂量依赖性。此外，本发明单克隆抗体还能够有效地中和TNF-α介导的细胞毒作用。

此外，本发明还对药物组合物进行改进，结果发现，抗TNF-α抗体(即SEQIDNO.:1所示序列的单克隆抗体)与特定浓度的含组氨酸的缓冲体系、多元醇(如甘露醇或山梨醇)、氯化钠以及表面活性剂(如聚山梨酯)组成的液体制剂在pH为5.5-6.5的条件下，不仅在外观、蛋白浓度、浊度、纯度等方面保持优异的稳定性，而且制剂的化学稳定性得到显著地提高，制剂中电荷异构体的生成速率明显降低，制剂的存放时间得到有效延长。由于该特定制剂的稳定性好、杂质低且不含易引起不良反应的柠檬酸等物质，因此可消除或减轻患者的注射部位不良反应，提高病人的用药舒适度。在此基础上，完成了本发明。

单克隆抗体

如本文所用，术语“重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体”、“本发明单克隆抗体”、“抗TNF-α抗体”、“抗TNF-α单克隆抗体”可互换使用，均指序列为如SEQIDNO.:1所示的单克隆抗体。

活性成分

本发明的活性成分是指具有如SEQIDNO.:1所示氨基酸序列的单克隆抗体，对神经退行性疾病有显著的治疗作用。

此外，所述术语还包括具有与治疗神经退行性疾病功能的、SEQIDNO：1序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)：对SEQIDNO.:1所示的序列进行1-10个，较佳地为1-5个，更佳地为1-3个氨基酸的替换、添加或删除。应理解，通常，在C末端和/或N末端添加或缺失一个或数个氨基酸通常不会改变蛋白质的结构和功能。对本发明SEQIDNO.:1所示序列的氨基端或羧基端分别进行1-10个氨基酸的添加，并不会影响本发明多肽的基本功能。

在实际应用中，还可对本发明单克隆抗体进行进一步修饰以加强其稳定性。优选的例子包括对所述多肽加入保护基团，如乙酰基、叔丁氧羰基等。

本发明还包括附加的氨基酸序列融合于此多肽序列而形成的多肽(与前导序列、分泌序列或6His等标签序列融合而形成的衍生蛋白)。根据本文的教导，这些片段、衍生物和类似物属于本领域熟练技术人员公知的范围。

发明还提供本发明多克隆抗体的类似物。这些类似物与本发明多克隆抗体的差别可以是氨基酸序列上的差异，也可以是不影响序列的修饰形式上的差异，或者兼而有之。类似物还包括具有不同于天然L-氨基酸的残基(如D-氨基酸)的类似物，以及具有非天然存在的或合成的氨基酸(如β、γ-氨基酸)的类似物。应理解，本发明的多肽并不限于上述例举的代表性的多肽。

药物组合物和施用方法

本发明的药物组合物包含安全有效量的本发明的单克隆抗体以及药理上可接受的赋形剂或载体。

其中，“安全有效量”指的是：单克隆抗体的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有0.1-100mg/kg本发明的单克隆抗体/剂，更佳地，含有0.3-30mg/kg本发明单克隆抗体/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个安瓿。

“药学上可以接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的单克隆抗体以及它们之间相互掺和，而不明显降低单克隆抗体的药效。

本发明的单克隆抗体或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：肠胃外给药(如腹腔内注射剂、皮下注射剂和静脉注射剂等)。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。

本发明单克隆抗体可以单独给药，或者与其他药学上可接受的药物联合给药。

使用药物组合物时，是将安全有效量的活性成分适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，给药剂量通常为20-100mg/次，优选40-80mg/次,每1-4周给药1次，优选每2周给药1次。当然，具体剂量还应考虑给药途径、患者病情等因素。

高稳定性的液体制剂

本发明还提供了一种适用于治疗神经退行性疾病抗体液体制剂，它主要包括以下组分或由以下组分构成：

(ii)含0.8-6.2mg/ml组氨酸的缓冲体系；

(iii)渗透压调节剂；和

(iv)表面活性剂。

其中，可用于本发明制剂中的抗TNF-α抗体包括单克隆抗体，重组抗体，单链抗体，杂合抗体，嵌合抗体，人源化抗体，或它们的片段。还可以使用包括一个或两个用于结合抗原的结合位点和免疫球蛋白的Fc-部分的抗体分子。本发明优选为单克隆抗体，本发明所述的抗TNF-α单克隆抗体可来源以下文献：GuidingtheselectionofhumanantibodiesfromphagedisplayrepertoirestoasingleepitopeofanantigenBiotechnology(NY).1994，12(9):899-903)和专利：CN1935260B。通过本领域所公知的方法进行制备，也可以选用其它基因工程技术获得的抗TNF-α单克隆抗体。一类优选的由其它基因工程技术获得的抗TNF-α单克隆抗体包括阿达木单抗(adalimumab)、英夫利昔单抗(infliximab)、戈利木单抗(Golimumab)等。用于本发明制剂中的优选抗体是人抗体，它是从人细胞或从代表人抗体所有组成成分的基因文库中克隆的。特别优选的人抗体是针对抗原TNF-α，包括人TNF-α(或hTNFα)的抗体。

存在于本发明制剂中的抗体的治疗有效量是通过考虑需要的剂量体积和施用模式决定的。在本发明中，抗体的浓度为40-60mg/ml，优选45-55mg/ml，更优选为48-52mg/ml，最优选为50mg/ml。本发明包括使用上述任意值的组合作为上限和/或下限的值的范围。

用于本发明制剂中的缓冲体系为包含组氨酸的缓冲体系，该缓冲体系中组氨酸可以单独存在，或以以下形式存在，如组氨酸盐酸盐、组氨酸乙酸盐、组氨酸磷酸盐、组氨酸硫酸盐等。在一个优选实施方案中，缓冲体系中的组氨酸单独存在或以组氨酸盐酸盐形式存在。

本发明的渗透压调节剂主要由多元醇和氯化钠组成，其中“多元醇”是具有多个羟基的物质，并且包括糖(还原糖和非还原糖)，糖醇和糖酸。“还原糖”是包括半缩醛基的糖，它能够还原金属离子或与蛋白中的赖氨酸和其他氨基共价反应，而“非还原糖”是不具备还原糖的上述特征的糖。还原糖的例子包括果糖，甘露糖，麦芽糖，乳糖，阿拉伯糖，木糖。非还原糖包括蔗糖，海藻糖，山梨糖，松三糖和棉子糖。糖醇的例子包括甘露糖醇，木糖醇，赤藓糖醇，苏糖醇，山梨糖醇和甘油。至于糖酸，包括L-葡糖酸和它的金属盐。如果需要所述制剂是冻-融稳定的，所述多元醇优选是在冷冻温度(例如，-20℃)下不会结晶的，以便它使所述制剂中的抗体去稳定化。

多元醇的用量可以根据所需要的制剂的等渗性而改变。本发明的制剂优选是等渗透的。所添加的多元醇的量还可以根据多元醇的分子量而改变。本发明优选的多元醇为糖醇。在本发明的优选实施方案中，多元醇为甘露醇或山梨醇，甘露醇或山梨醇的浓度为8-20mg/ml，更优选为10-15mg/ml，更优选为11-13mg/ml，本发明包括使用上述任意值的组合作为上限和/或下限的值的范围。

氯化钠的浓度为2-10mg/ml，优选为4-8mg/ml，更优选为5.5-6.5mg/ml。

本发明制剂中的表面活性剂优选非离子表面活性剂，如失水山梨醇聚氧乙烯醚脂肪酸酯(例如失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚月桂酸酯，失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚油酸酯等)或泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)。所添加的表面活性剂的量使其能减少制剂中的抗体的聚集和/或减少颗粒在制剂中的形成和/或减少吸附。在本发明的优选的表面活性剂为聚山梨酯，如吐温80。在一优选的实施方案中，聚山梨酯的浓度为0.6-1.0mg/ml，优选为0.8-1.0mg/ml，更优选为0.9-1.0mg/ml。本发明包括使用上述任意值的组合作为上限和/或下限的值的范围。

本发明通过缓冲体系来调节制剂的pH值，以控制pH在5.5-6.5的范围内，在某些实施方案中，制剂的pH处于5.5至6.4、5.6至6.3、5.7至6.2、5.8至6.1、5.9至6.0之间，本发明包括使用上述任意值的组合作为上限和/或下限的值的范围。在一些优选的实施方案中，制剂pH为5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4或6.5。

应理解，本发明的缓冲体系除包括组氨酸以外，还可进一步包括一种或多种其他缓冲组分，通过与其他缓冲组分的组合将制剂的pH值控制在上述范围。适合的其他缓冲组分包括柠檬酸盐、磷酸盐、乙酸盐(例如乙酸钠)，琥珀酸盐(例如琥珀酸钠)等。

本发明优选的实施方案中，缓冲体系为组氨酸—盐酸，其中组氨酸浓度为0.8-6.2mg/ml，优选为1.6-5.0mg/ml，更优选为3.0-3.8mg/ml。本发明包括使用上述任意值的组合作为上限和/或下限的值的范围。在另一种实施方案中，所述制剂的pH是用柠檬酸、乙酸或磷酸等无机酸调节的。

发明人经过大量的实验和数据筛选发现，当本发明制剂中组氨酸的浓度低于0.8mg/ml时，缓冲体系的缓冲能力将受到明显的限制，当组氨酸的浓度高于6.2mg/ml时，对制剂稳定性并无提高作用，并且可能引起不良反应。

此外，发明人经过反复的试验，对各类缓冲体系的组分及含量进行了大量的筛选，并最终从大量的缓冲体系中筛选得到了本发明的组氨酸体系，并且发现在该体系中，抗体蛋白的稳定性明显提高。

本发明的制剂中可包括一种或多种其它药学可接受载体、赋形剂或稳定剂，诸如那些在Remington’sPharmaceutica1Sciences16thedition,Osol,A.Ed.(1980)中记载的，只要它们对制剂的期望特征没有不利影响。可接受载体、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度对接受者是无毒的，而且包括别的共溶剂；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；整合剂，诸如EDTA；金属复合物(例如Zn一蛋白质复合物)；生物可降解聚合物，诸如聚醋；和/或成盐反荷离子。

本发明的制剂可采用本领域公知的方法将各种组分按一定的浓度进行组合制备。

一类优选的方法主要包括以下步骤：

用Ultracel-30K超滤离心管将抗TNF-α单克隆抗体通过离心(4500rpm，4-10℃)浓缩换液至不同制剂缓冲液中，用制剂缓冲液将蛋白浓度调整到所需浓度。采用0.22μmMillex针头滤器将制剂过滤除菌。对所制备的制剂进行包装以方便使用，选用的包材可以是玻璃瓶、预填充注射器或笔式注射器。

本发明的主要优点包括：

(1)本发明发现了单克隆抗体重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体可有效地治疗神经退行性疾病，减轻学习记忆能力的损伤，其效果与现有的神经退行性疾病治疗用药多奈哌齐相当，且副作用小。此外，本发明人还发现，重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对神经退行性疾病的治疗作用有明显的剂量依赖性，达到更好的治疗目的。

(2)本发明的制剂能有效降低抗TNF-α单克隆抗体的化学降解反应速率，提高抗体的化学稳定性，延长产品的货架期。

(3)通过控制本发明制剂的pH值和去除潜在的引起不良反应的组分(如柠檬酸)，可消除或减轻患者的注射部位不良反应，提高病人的用药舒适度。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。

实施例1重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体与可溶性TNF-α的亲和能力测定

1.实验材料

实验药品：重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体注射液，序列如SEQIDNO.:1所示，4℃冰箱保存。

重组人TNF-α：购自上海近岸蛋白质科技有限公司，货号：C008，批号：0327018。

AmineCouplingKit(LotNo.2057704)，HBS-EP+buffer(10×)(LotNo.BCBJ0266V)，HumanAntibodyCaptureKit(LotNo.10137214)：均购自GEHealthcare。

BiacoreT200、CM5传感芯片(SerialNo.10148134)：购自GEHealthcare。

2.实验方法

2.1溶液配制

流动相缓冲溶液：HBS-EP⁺缓冲溶液(10mMHEPES,150mMNaCl,3mMEDTA,0.05％P20，pH7.4)。

样品稀释溶液：HBS-EP⁺缓冲溶液。

再生溶液：3MMgCl₂。

2.2Anti-HumanIgG(Fc)Antibody与CM5传感芯片表面结合

将CM5传感器芯片嵌入BiacoreT200，流动相采用过滤的HBS-EP+缓冲盐溶液，用10mM醋酸钠缓冲液(pH5.0)配制Anti-HumanIgG(Fc)Antibody溶液，按照Immobilization程序设定中样品摆放方法，将AmineCouplingKit中溶液放置在Biacore自动进样器的适当位置。点击Immobilization程序自动进行Fc3，Fc4通道氨基偶联固定。以Fc3通道作为参比通道，Fc4通道作为检测通道。

2.3测定重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体与TNF-α的亲和动力学

以结合重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体的流通池(Fc4)为检测通道，未结合重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体的流通池(Fc3)为参比通道，以HBS-EP+缓冲溶液作为流动相，分别注入不同浓度的TNF-α溶液，根据表面测试试验用runningbuffer倍比稀释，配制不同浓度标准品，TNF-α浓度梯度为25.6、12.8、6.4、3.2、1.6、0.8、0.4、0.2及0.1nM。同时设0浓度点。设置Kinetics方法并运行：检测温度：25℃；流速：30μl/min；结合时间：6分钟；解离时间：60分钟。

BiacoreT200ControlSoftware采集SPR信号并保存，进而利用BiacoreT200Evaluation分析软件进行数据处理。每个浓度TNF-α注射到结合了重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体的流通池(Fc4)得到的响应值均减去相应参比流通池(Fc3)响应值，进行校正。1：1Binding结合动力学模型用于曲线拟合以最恰当地描述反应动力学，并用于计算ka，ka和KD值。

3.实验结果

实验结果表明，重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体和TNF-α能够高亲和力结合，结合动力学曲线(彩色线)及1:1Binding结合模型处理后的拟合曲线(黑色线)(图1)，经计算所得到的亲和常数KD值5.284×10^-11M(见表1)。

表1重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体与TNF-α的结合动力学常数

实施例2重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体结合特异性

1.实验材料

供试品：重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体注射液，序列如SEQIDNO.:1所示，4℃冰箱保存。

重组人TNF-β：购于SinoBiologicalInc.公司，货号：10270-HNAE，批号：LC05JL0410；重组猴TNF-α：购于SinoBiologicalInc.公司，货号：90018-CNAE，批号：LC06DE1213；重组犬TNF-α：购于SinoBiologicalInc.公司，货号：70003-DNAE，批号：LC05JU2002；重组小鼠TNF-α：购于ShanghaiPrimeGeneBio-TechCo.,Ltd.公司，货号：123-01，批号：810588；重组大鼠TNF-α：购于ShanghaiPrimeGeneBio-TechCo.,Ltd.公司，货号：143-01，批号：Y14301011；猴血清吸附的羊抗人IgG-HRP规格为1mg/ml购于BETHYL公司,货号A80-319A；TMB单组分显色液：购于Solarbio公司，货号：PR1200。

2.实验方法

取人、猴、犬、小鼠、大鼠的TNF-α以及人TNF-β配制成不同浓度溶液(19.53～2500ng/ml)，在96孔板不同孔中加入上述溶液(100μl/孔)，4℃条件下避光孵育过夜。次日，弃溶液，加入1％BSA200μl/孔，37℃孵育1小时后，弃封闭液，加入0.1％BSA稀释的重组人抗肿瘤坏死因子-Α单克隆抗体(1μg/ml)，25℃孵育1小时。洗涤后加入用0.1％BSA稀释的猴血清吸附过的羊抗人IgG-HRP二抗，25℃孵育1小时，洗涤后加入TMB显色底物，然后在450nm波长下测定吸光度值。

3.实验结果

实验结果表明，随着重组人TNF-α浓度的增大，其与重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体的结合量越大，在浓度为312.5ng/ml时达到饱和，而重组猴TNF-α和重组犬TNF-α在浓度低于312.5ng/ml处于0点水平，而后逐步升高，在浓度为2500ng/ml时与重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体有一定量的结合。重组小鼠TNF-α在浓度为2500ng/ml时与重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体有轻微的结合，其余浓度均处于0点水平。重组人TNF-β、重组大鼠TNF-α以及随着浓度的增大，其与重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体的结合量几乎没有变化，都处于0点水平，与重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体亲和力低(见表2和图2)。

表2重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体与不同种类细胞因子的结合情况

实施例3重组人抗肿瘤坏死因子-α单抗对TNF-α与其受体结合的抑制作用

1.实验材料

重组人TNF-α购自上海近岸蛋白质科技有限公司，货号：C008，批号：0327018；重组TNFRI(p55)和TNFRII(p75)购自R&D公司，货号分别为372-R1-050和726-R2-050，批号分别为APJ0712071和BVD0312111；羊抗人IgG-Fc购于Kirkegaard&PerryLaboratories,Inc.，货号：01-10-20，批号：110078；BSA购自于Roche公司，批号：10735078001。

2.实验步骤

(1)用PBS将1mg/ml的羊抗人IgG-Fc稀释成10μg/ml，50μl/孔加到96孔酶标板中，4℃过夜；

(2)次日，用PBST洗板3次，拍干后，分别加入0.1％BSA稀释成5μg/ml的重组p55和p75，50μl/孔，其中1～6加重组p55，7～12条加重组p75，37℃孵育1小时；

(3)将重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体用0.1％BSA进行梯度稀释(1000、250、62.5、15.6、3.9、0.98、0.24、0.06、0.03、0.015和0μg/ml)，使之与1:200000的Biotin-TNF-α等体积混合，于37℃孵育30分钟；

(4)用PBST洗板6次，拍干后，将(3)中孵育后的混合物加入到96孔酶标板中，100μl/孔，其中1～3和7～9加入人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体混合物，4～6和10～12加入阿达木单抗混合物，37℃孵育2小时；

(5)用PBST洗板6次，加入放大剂Streptavidin-HRP1:200，100μl/孔。37℃孵育15分钟；

(6)用PBST洗板6次，加入TMB单组分显色液100μl/孔，37℃孵育15分钟；

(7)加入1MH₂SO₄终止，100μl/孔。在波长450nm读数。

3.实验结果

实验结果表明，重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体可以抑制p55或p75受体与TNF-α之间的结合，在0.015～1000μg/ml剂量范围内，抑制作用呈剂量依赖性的增高。经Logistic回归，重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对p55和p75与TNF-α之间结合的半数抑制浓度(IC₅₀)分别为0.502±0.013和0.119±0.001μg/ml(见表3及图3)。

表3重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对TNF-α与重组p55和p75结合的半数抑制浓度

实施例4重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对TNF-α对TNF-α介导的细胞毒性的中和作用

1.实验材料

重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体注射液，序列如SEQIDNO.:1所示，4℃冰箱保存。

CellCountingKit-8(CCK-8)购于Dojindo公司；RPMI1640培养液、FBS购于GIBCO公司。

WEHI164：购于ATCC，货号：CRL-1751。

2.实验方法

取对数生长期的WEHI164细胞以1.2×10⁴个/孔接种于96孔板，培养过夜后，吸取原培养液，加入含有不同浓度重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体和TNF-α(10ng/ml)的混合溶液，作用16～20小时后，在培养液中加入CCK-8溶液，于细胞培养箱中孵育1～4小时，在450nm/630nm下，用酶标仪检测OD值。

3.实验结果

实验结果表明，重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体能够对TNF-α介导的WEHI164细胞毒性具有明显的中和作用，在一定范围内均随着浓度的增加而增强，EC₅₀值为22.75±3.94ng/ml(见图4)。

实施例5重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对Aβ1-42诱导小鼠学习记忆损伤的抑制作用

1.实验对象和材料

1.1实验对象

C57BL/6J小鼠，雄性，体重18-22克，北京华阜康生物科技股份有限公司，实验动物质量合格证明：SCXK(京)2009-0007。

1.2实验材料

阳性对照品：多奈哌齐，购于卫材(中国)药业有限公司。

Aβ_1-42：购于Sigma公司，货号为A9810。

2.实验方法

寡聚肽Aβ_1-42(oAβ_1-42)制备：

Aβ_1-42先用微量二甲基亚砜(<1‰)溶解，然后用双蒸水稀释至0.5mM，在4℃条件下静置24小时。

小鼠按体重分为生理盐水组，oAβ_1-42组，重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体5、15、50mg/kg组和多奈哌齐5mg/kg组。各组动物水合氯醛轻微麻醉后固定头部，颅骨表面皮肤用75％乙醇消毒，在两眼连线中点偏右1mm和后眼角连线后2mm处为参考定位侧脑室(AP：-0.3mm，ML：±1.0mm，DV：-2.5mm)，垂直颅骨表面刺入无菌微量注射器2mm，然后缓慢注射oAβ_1-42溶液(2nmol/4μl/只)，生理盐水组动物注射等体积的溶液。自oAβ_1-42注射后当日起，各重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体给药组动物每3天腹腔注射相应剂量的药物，多奈哌齐组每天灌胃相应剂量的药物，生理盐水组和oAβ_1-42组每天腹腔注射等体积生理盐水。各组动物在oAβ_1-42注射后第7天进行Y迷宫实验，次日一半动物经心脏灌流固定后取海马组织用于免疫组织化学实验，另一半动物经心脏灌流后取海马组织用于ELISA实验。

Y迷宫实验：

Y迷宫由三个相同规格的成120度角的臂构成，分别命名为A、B和C，材料为喷涂黑色油漆的铁板。每个臂的臂长为40cm，高为12cm，底部宽为3cm，顶部宽为10cm，三个臂的交汇处为等边三角形。Y迷宫底部铺一层新鲜垫料并且每只动物检测结束后及时更换，并用75％乙醇消毒以消除上一只动物留下的气味对下一只动物的干扰。实验时小鼠随机面向迷宫的某一壁放到迷宫的中央三角形区域，然后让其在迷宫中自由探索8min，记录每只小鼠的进臂总次数(除尾部外小鼠身体全部进入臂内即为进臂一次)和进臂顺序，计算自发交替反应率。

ELISA实验：

酶标板采用抗小鼠TNF-α单克隆抗体包被过夜后，加入海马组织匀浆液或者标准品溶液50μl，室温孵育后加入检测抗体，室温孵育后洗涤，加入显色底物，然后用酶标仪读取450nm波长下吸光度值。根据标准品的吸光度值绘制标准曲线，然后计算每个样本的TNF-α浓度。

免疫组织化学实验：

小鼠脑组织经过灌流、固定和脱水后进行冰冻切片，切片经过抗原修复后用3％过氧化氢溶液灭活。山羊血清封闭后加入兔抗小鼠Iba-1一抗溶液，4℃孵育过夜。次日平衡至室温后弃一抗溶液，洗涤后滴加生物素偶联山羊抗兔二抗溶液，室温孵育后弃二抗溶液，洗涤，滴加亲和素偶联辣根过氧化物酶复合物溶液，室温孵育后弃亲和素偶联辣根过氧化物酶复合物溶液，洗涤，滴加底物显色液，显色后洗涤，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，显微镜下观察并拍照，Image-Plus软件统计分析。

3.统计分析

采用spss13.0forwindows软件进行单因素方差分析结合t检验，p<0.05认为具有统计学差异。

4.实验结果

4.1重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对oAβ1-42诱导小鼠学习记忆损伤的保护作用

(1)重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对小鼠在Y水迷宫中学习记忆能力的影响

实验结果表明，oAβ_1-42能够明显降低小鼠在Y迷宫中的自发交替反应率，重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体能够剂量依赖性的增加小鼠的自发交替反应率，在15和50mg/kg剂量下具有明显的统计学意义，阳性对照药多奈哌齐也能够明显增加小鼠的自发交替反应率。LPS、重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体和多奈哌齐对小鼠在Y迷宫中的总进壁次数没有明显影响(见图5)。

(2)重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对小胶质细胞增殖和活化的影响

实验结果表明，小鼠侧脑室注射oAβ_1-42后海马内IBA-1阳性的小胶质细胞数量明显增加(图6B)，重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体能够剂量依赖性的减少海马内小胶质细胞的数量(图6C、D、E)，在15和50mg/kg剂量下具有明显的统计学意义，阳性对照药多奈哌齐也能够明显减少海马内小胶质细胞的数量(图6F)。

(3)重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对TNF-α释放的影响

实验结果表明，oAβ_1-42能够明显增加小鼠海马内TNF-α的水平，重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体能够剂量依赖性的降低小鼠海马内的TNF-α水平，在15和50mg/kg剂量下具有明显的统计学意义，阳性药物多奈哌齐也能够明显降低海马内TNF-α的水平(见图7)。

实施例6重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对LPS诱导小鼠学习记忆损伤的抑制作用

1.实验对象与材料

1.1实验对象

1.2实验材料

阳性对照品：米诺环素，购于Sigma公司，货号为M2280000。

脂多糖(LipopolysaccharidesfromEscherichiacoli0111:B4，LPS)：购于Sigma公司，货号为L2637。

2.实验方法

LPS配置：

LPS用生理盐水溶解，终浓度为20mg/ml。

小鼠按体重分为生理盐水组、LPS组和重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体5、15和50mg/kg组以及米诺环素50mg/kg组，各组动物水合氯醛轻微麻醉后固定头部，颅骨表面皮肤用75％乙醇消毒，在两眼连线中点偏右1mm和后眼角连线后2mm处为参考定位侧脑室(AP：-0.3mm，ML：±1.0mm，DV：-2.5mm)，垂直颅骨表面刺入无菌微量注射器2mm，然后LPS组、各重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体给药组和米诺环素组动物缓慢注射LPS溶液40μg/只，生理盐水组给予同体积的生理盐水(2μl/只)。LPS注射后各重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体给药组动物每3天腹腔注射相应剂量的药物，米诺环素组动物每天腹腔注射米诺环素溶液，生理盐水和LPS组动物腹腔注射等体积生理盐水。各组动物在LPS注射后第7天进行Y迷宫实验，次日一半动物经心脏灌流PBS后取海马组织用于ELISA实验，另一半动物脑组织经灌流固定后用于免疫组织化学实验。

Y迷宫实验：

Y迷宫由三个相同规格的成120度角的臂构成，分别命名为A、B和C，材料为喷涂黑色油漆的铁板。每个臂的臂长为40cm，高为12cm，底部宽为3cm，顶部宽为10cm，三个臂的交汇处为等边三角形。Y迷宫底部铺一层新鲜垫料并且每只动物检测结束后及时更换，并用75％乙醇消毒以消除上一只动物留下的气味对下一只动物的干扰。实验时小鼠随机面向迷宫的某一壁放到迷宫的中央三角形区域，然后让其在迷宫中自由探索8min，记录每只小鼠的进臂总次数(除尾部外小鼠身体全部进入臂内即为进臂一次)和进臂顺序，计算自发交替反应率^[16,17]。

ELISA实验：

免疫组织化学实验：

3.统计分析

4.实验结果

(1)重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对小鼠在Y迷宫中学习记忆能力的影响

实验结果表明，LPS能够明显降低小鼠在Y迷宫中的自发交替反应率，重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体能够剂量依赖性的增加小鼠的自发交替反应率，在15和50mg/kg剂量下具有明显的统计学意义，阳性对照药米诺环素也能够明显增加小鼠的自发交替反应率。LPS、重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体和米诺环素对小鼠在Y迷宫中的总进壁次数没有明显影响(见图8)。

实验结果表明，小鼠侧脑室注射LPS后海马内IBA-1阳性的小胶质细胞数量明显增加(图9B)，重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体能够剂量依赖性的减少海马内小胶质细胞的数量(图9C、D、E)，在15和50mg/kg剂量下具有明显的统计学意义，阳性对照药米诺环素也能够明显减少海马内小胶质细胞的数量(图9F)。

(3)重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对TNF-α释放的影响

实验结果表明，LPS能够明显增加小鼠海马内TNF-α的水平，重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体能够剂量依赖性的降低小鼠海马内的TNF-α水平，在15和50mg/kg剂量下具有明显的统计学意义，阳性药物米诺环素也能够明显降低海马内TNF-α的水平(见图10)。

在实施例7-8中，通用方法和设备如下：

IEC测试方法

按照《中华人民共和国药典》(2010年版，三部)附录ⅢB进行测定，用弱阳离子交换柱ThermoWCX-104.0×250mm色谱柱，保护柱为ThermoWCX-10G4.0×50mm，流动相A、B进行梯度洗脱(A：10mMNaH₂PO₄·2H₂OpH7.5；B：10mMNaH₂PO₄·2H₂O+500mMNaClpH7.5)。流速1.0ml/分钟，检测波长280nm，柱温35℃，连续进样2次，进样量100μg。

设备：美国安捷伦1260高效液相色谱分析仪

本发明以下实施例、对比例中的液体抗体制剂通过常规方法，将各组分进行混合来制备。

以下实施例中的抗TNF-α单克隆抗体的分子来源参见文献：GuidingtheselectionofhumanantibodiesfromphagedisplayrepertoirestoasingleepitopeofanantigenBiotechnology(NY).1994，12(9):899-903)和专利：CN1935260B。采用本领域公知的抗体制备工艺，经过基因工程细胞培养，ProteinA层析及其它分离纯化步骤精制而成。

实施例7

制剂中各组分与含量如表1所示：

表1

实施例8

制剂中各组分与含量如表2所示：

表2

对比例1

制剂中各组分与含量如表3所示：

表3

通过高效阳离子交换色谱(IEC-HPLC)表征抗TNF-α单克隆抗体的化学稳定性，以IEC-HPLC主峰下降和酸性组分上升百分比作为判定手段，测试结果见表4和表5。

表437℃±2℃蛋白电荷异构变化结果(IEC主峰下降百分比)

	14天	1个月
			对比例1	13.1％	19.2％
实施例7	7.4％	12.9％
			实施例8	7.1％	10.3％

表537℃±2℃蛋白电荷异构变化结果(IEC酸性组分上升百分比)

	14天	1个月
			对比例1	7.6％	14.2％
实施例7	5.2％	10.1％
			实施例8	5.0％	9.9％

从表4可以看出，与对比例1相比，本发明制剂(实施例7和8)中抗体电荷异构变化分别在14天和1个月的IEC主峰下降百分比和IEC主峰上升百分比均显著降低，上述结果表明，制剂中抗体的化学降解反应速率明显降低，抗体的化学稳定性得到了明显提高，因此提高了产品质量的均一性和一致性，有助于延长抗TNF-α单克隆抗体的货架期。

通过对实施例7、实施例8和对比例1的制剂分别进行SEC检测，判断制剂中抗体纯度的变化，测试结果如表6所示：

表637℃±2℃蛋白纯度变化结果(SEC主峰百分比)

	0天	14天	1个月
				对比例1	99.5％	98.0％	94.8％
实施例7	99.3％	97.9％	95.4％
				实施例8	99.5％	98.2％	95.5％

从表6可以看出，本发明制剂(实施例7和8)中抗体分别在0天、14天和1个月的SEC主峰百分比与对比例的SEC主峰百分比相当，该结果表明，本发明制剂中的抗体任具有较高的蛋白纯度，保持优异的稳定性。

发明人还分别对实施例7、实施例8和对比例1的制剂的其它稳定性指标，包括外观、蛋白浓度、浊度均进行了测试比较，结果发现上述的稳定性指标均与对比例1中制剂的指标相当，该结果表明，本发明的制剂保持优异的稳定性。

此外，本发明中的制剂由于不含柠檬酸组分，因此可减轻或消除由其引起的病人注射部位的不良反应，提高病人的用药舒适度。

对比例2

本对比例中的制剂各组分和含量均与实施例7相同，不同之处在于对比例2中制剂pH为5.0。

对比例3

本对比例中的制剂各组分和含量均与实施例7相同，不同之处在于对比例3中制剂pH为7.0。

通过高效阳离子交换色谱(IEC-HPLC)表征本发明的制剂(实施例7)和对比例2和3制剂中抗TNF-α单克隆抗体的化学稳定性，以IEC-HPLC主峰下降和酸性组分上升百分比作为判定手段，测试结果见表7。

表737℃±2℃下12天的蛋白电荷异构变化结果

	实施例7	对比例2	对比例3
				IEC主峰下降(％)	6.5	10.4	11.6
IEC酸性组分上升(％)	5.8	6.1	11.8

从表7可以看出，与对比例2和3相比，本发明制剂中抗体的IEC主峰下降百分比和IEC主峰上升百分比均显著降低，上述结果表明，本发明制剂中抗体的化学降解反应速率明显降低，抗体的化学稳定性得到了明显提高。

通过对实施例7、对比例2和对比例3的制剂分别进行SEC检测，判断制剂中抗体纯度的变化，测试结果如表8所示：

表837℃±2℃下的蛋白纯度变化(SEC)

	实施例7	对比例2	对比例3
				0天	99.6％	99.5％	99.2％
12天	99.3％	97.8％	98.3％

表8显示了抗体在35-39℃下放置12天后蛋白纯度的变化结果，从上表可以看出，本发明的制剂在放置12天后，其抗体纯度的下降程度明显低于对比例2和3中的抗体纯度的下降值。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1.一种单克隆抗体的用途，其特征在于，用于制备治疗神经退行性疾病的药物组合物，其中所述的单克隆抗体具有如SEQIDNO.:1所示序列。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物含有SEQIDNO.:1所示序列的单克隆抗体，和药学上可接受的载体。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的神经退行性疾病选自下组：阿尔茨海默病、帕金森氏病和脑中风。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物还用于：(i)抑制炎症因子与受体结合和/或(ii)抑制小胶质细胞的增殖和活化；和/或(iii)抑制炎症因子分泌。

5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物的剂型包括：注射剂、冻干粉。

6.如权利要求1-5中任一项所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物为注射剂并含有：

(ii)含0.8-6.2mg/ml组氨酸的缓冲体系；

(iii)渗透压调节剂；以及

(iv)表面活性剂，

其中，所述制剂的pH为5.5-6.5。

7.一种治疗神经退行性疾病的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物含有安全有效量的SEQIDNO.:1所示序列的单克隆抗体，和药学上可接受的载体。

8.一种治疗神经退行性疾病的方法，包括步骤：将具有SEQIDNO.:1所示序列的单克隆抗体或其药物组合物施用于需要的对象。

9.一种体外非治疗性的抑制炎症因子分泌的方法，其特征在于，包括步骤：

10.一种体外非治疗性的抑制小胶质细胞的增殖和/或活化的方法，其特征在于，包括步骤：