CN113817677A - 泛酸或其衍生物与α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸或其衍生物在促进DC迁移中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物医药领域，具体涉及代谢产物泛酸和α‑D‑葡萄糖‑1,6‑二磷酸在促进树突状细胞(DCs)体内迁移至淋巴结，增强DC疫苗效果中的用途。本发明要解决的技术问题是提高DC从注射部位迁移至淋巴结的效率，从而提高DC疫苗的抗肿瘤效果。解决技术问题的方案是提供了代谢产物泛酸和α‑D‑葡糖‑1.6二磷酸在促进DC迁移中的用途。本发明发现代谢产物具有促进DC迁移从而提高DC疫苗抗肿瘤效果的能力，具有很好的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及代谢产物在促进DCs体内迁移至淋巴结，增强DC疫苗效果中的用途。
背景技术
树突状细胞(DCs)是最有效的抗原提呈细胞，能够吞噬、处理并将抗原呈递给T细胞和其他免疫细胞，从而启动癌症特异性免疫反应。自1995年首次使用体外负载黑素瘤抗原的DCs治疗黑素瘤以来，已经进行了400多项基于DC疫苗治疗恶性肿瘤的临床试验。然而迄今为止，虽然基于DCs的肿瘤疫苗在动物实验和某些恶性肿瘤的早期临床试验中均取得了很好的治疗效果，但在临床试验中其客观反应率很少超过15％。
目前，限制DC疫苗发挥作用的因素主要有：抗原的来源和剂量、抗原的负载方法、DCs的来源及培养方式、刺激DCs成熟的条件、制备的DCs表型、施用的DCs数量、疫苗的给药途径及DCs迁移至淋巴结的能力等。近年来，关于如何进一步增强DC疫苗在体内发挥作用受到了广泛的关注，大量研究(包括我们前期的研究)集中于改善抗原选择和负载方法、DCs的制备和培养方法以及疫苗的给药途径来增强DC疫苗的效果。然而目前仍然缺乏通过改善DCs迁移至淋巴结(LNs)的能力来增强DC疫苗抗肿瘤效果的相关研究。
在DCs的各种功能特性中，DCs的内源性迁移，或注射体外制备的DC疫苗后，DCs从注射部位迁移到LNs的能力是非常关键的，DCs迁移的过程控制着DCs与适应性免疫细胞相互作用并激活适应性免疫反应。了解和操纵DCs迁移将有助于开发新的治疗和疫苗接种策略。研究发现在施用DC疫苗时，DCs从注射部位迁移到LNs的效率通常小于5％，而增强DCs向LNs迁移能发挥更强的抗肿瘤免疫反应并改善患者存活率，迁移到LNs的DCs越多，则更有利于DC疫苗发挥其效果。因此，改善DCs向LNs的迁移情况，能够有助于进一步提高DC疫苗的抗肿瘤效果。目前对于DCs迁移的研究主要集中于机制方面，比如趋化因子、黏附分子等，而缺乏寻找通用的、能够用于促进DCs迁移的物质的相关研究。因此找到促进DCs迁移的通用物质，从促进DCs迁移方面进一步增强DC疫苗的抗肿瘤效果显得尤为重要。
维生素B5又叫泛酸，是一种水溶性维生素，化学式为C9H17NO5。维生素B5在体内转变成辅酶A(CoA)或酰基载体蛋白(ACP)参与脂肪酸代谢反应，同时是脂肪酸合成类固醇所必需的物质；也可参与类固醇紫质、褪黑激素和亚铁血红素的合成；还是体内柠檬酸循环、胆碱乙酰化、合成抗体等代谢所必需的中间物。泛酸结构式为：
α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸是α-D-葡萄糖的双磷酸化衍生物，在碳水化合物代谢中发挥作用。它是葡萄糖-1-或6-磷酸与葡萄糖-1,6-二磷酸合酶(PGM2LI)在1,3-二磷酸甘油酯转化为3-磷酸甘油酯过程中反应的产物，它也是细菌酶磷酸戊mutase的辅助因子。α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸已用于碳水化合物代谢的研究，其分子式为C6H14O12P2，结构式为：
发明内容
本发明要解决的技术问题是提高DC迁移至淋巴结的效率，进一步提高DC疫苗的抗肿瘤效果。
本发明解决上述技术问题的技术方案是提供了泛酸和/或其衍生物，和/或α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸和/或其衍生物中的至少一种在促进树突状细胞迁移中的用途。
其中，上述的用途中所述的促进树突状细胞迁移是指向淋巴结迁移。
其中，上述的用途中所述的泛酸衍生物为D-泛酸钙、D-泛醇和泛硫乙胺中的至少一种；
或者，所述的α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的衍生物为α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的盐或α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的盐或其水合物中的至少一种。
其中，上述的α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的盐为α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸钠盐、α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸钾盐、α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸四环己铵盐中的至少一种；
或者，上述的α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的盐的水合物为α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸酯四(环己基铵)盐水合物。
其中，上述泛酸和/或其衍生物，和/或α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸和/或其衍生物中的至少一种在体外处理DC细胞时，使用浓度为0.1μM-100mM。
进一步的，上述泛酸和/或其衍生物优选使用浓度为1μM-30μM；α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸和/或其衍生物优选使用浓度为1mM-10mM。
同时，本发明提供了泛酸或其衍生物，和/或α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸或其衍生物中的至少一种在制备树突状细胞迁移促进剂中的用途。
其中，上述的用途中所述的促进树突状细胞迁移是指向淋巴结迁移。
其中，上述的用途中所述的树突状细胞迁移促进剂可在体外与树突状细胞共孵育以提高其迁移能力，或与树突状细胞直接配合进一步提高其迁移能力。
其中，上述的直接配合使用是指注射使用。
在此基础上，本发明还提供了一种树突状细胞疫苗。该树突状细胞疫苗其是由泛酸或其衍生物，和/或α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸或其衍生物中的至少一种处理后的树突状细胞作为主要活性成分。
其中，上述的树突状细胞为髓样DC细胞或为淋巴样DC细胞。
其中，上述的树突状细胞为由患者自体获取的离体树突状细胞。
其中，上述树突状细胞疫苗中所述的处理，是指与树突状细胞共孵育后制成疫苗使用；或者，与树突状细胞混合后制成疫苗使用。
进一步的，上述树突状细胞疫苗可以用以下方法制备得到：
a、取诱导培养后的未成熟树突状细胞(imDCs)；
b、向培养基中加入泛酸或其衍生物，和/或α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸或其衍生物中的至少一种，以及加入刺激树突状细胞成熟的试剂和抗原，孵育后获得负载有抗原且成熟的树突状细胞；
c、将步骤b获得的负载有抗原且成熟的树突状细胞制备为树突状细胞疫苗。
其中，刺激DC成熟的细胞因子可以为如TNF-α(10ng/ml)+IL-1β(10ng/ml)+IL-6(1000U/ml)+PGE2(10μg/ml)或LPS(1μg/ml)+CpG(10μg/ml)+IFN-γ(50ng/ml)等组合，可成功刺激DC成熟。
进一步的，上述的树突状细胞疫苗，其特征在于：还包括有药学上可接受的辅助性成分。
其中，上述的的树突状细胞疫苗中所述的在药学上可接受的辅助性成分为保护剂、赋型剂、免疫佐剂、分散剂或细胞培养基中的至少一种。
本发明还提供了一种疫苗。该疫苗包含有抗原和树突状细胞迁移促进剂；所述的树突状细胞迁移促进剂为泛酸或其衍生物，和/或α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸或其衍生物中的至少一种
其中，上述的疫苗中所述的抗原为重组蛋白疫苗、多肽疫苗、mRNA疫苗、灭活疫苗、肿瘤细胞疫苗或树突状细胞疫苗中提供抗原的组分中的至少一种。
其中，所述的抗原和树突状细胞迁移促进剂处于同一包装或独立的不同包装中。
进一步的，上述的疫苗还包括有药学上可接受的辅助性成分。
其中，上述疫苗中所述的在药学上可接受的辅助性成分为保护剂、赋型剂、免疫佐剂、分散剂或细胞培养基中的至少一种。
进一步的，上述提供的树突状细胞疫苗中，或上述提供的疫苗中，所述的泛酸衍生物为D-泛酸钙、D-泛醇和泛硫乙胺中的至少一种；
或者，所述的α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的衍生物为α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的盐或α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的盐或其水合物中的至少一种。
进一步的，上述的的α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的盐为α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸钠盐、α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸钾盐、α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸四环己铵盐中的至少一种。
或者，上述的α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的盐的水合物为α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸酯四(环己基铵)盐水合物。
本发明的有益效果在于：本发明创造性地发现用泛酸或α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸处理DC细胞后可提高DC迁移至淋巴结的效率，增强DC疫苗的效果，表明其具有树突状细胞迁移促进剂的作用。在DC疫苗制备过程中只需要将其与抗原共同添加到DCs中即可，制备方法简单，成本低，有助于后续推广使用，具有很好的应用前景。
附图说明
图1：泛酸和α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸增强DC体外迁移效果验证。图中从左到右分别为空白对照组、泛酸组、α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸组。(***表示p<0.001)。
图2：泛酸和α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸促进DC体内迁移至淋巴结效果验证。途中从左到右分别为空白对照组、泛酸组、α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸组。(***表示p<0.001)。
图3：泛酸增强DC疫苗的抗肿瘤效果验证。a.代表性肺肿瘤拍照以及肺组织切片。b.肺重统计图。c.肺结节数统计图。(**表示p<0.01，***表示p<0.001)。
图4：α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸增强DC疫苗的抗肿瘤效果验证。a.代表性肺肿瘤拍照以及肺组织切片。b.平均肿瘤生长曲线。(*表示p<0.05，**表示p<0.01，***表示p<0.001)。
具体实施方式
以下通过具体实施方式的介绍对本发明进行具体的说明。
本发明在前期的DC细胞迁移能力的研究中发现，在对DC细胞进行一些前处理后，会改变DC细胞的迁移能力，尤其是DC细胞向淋巴结迁移的能力。而在这些迁移能力提升的DC细胞中的泛酸、α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸等代谢产物含量发生了明显上调。
本发明创造性地想到施用泛酸或其衍生物和/或α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸或其衍生物对DC细胞进行处理，可能会促进DC细胞向淋巴结迁移，进而提高DC细胞疫苗的疗效。
本发明技术方案包括两个方面，一方面是提供了泛酸和/或其衍生物中的至少一种在促进树突状细胞迁移中的用途，以及在制备树突状细胞迁移促进剂和制备疫苗中的用途。另一方面是提供了α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸和/或其衍生物中的至少一种在促进树突状细胞迁移中的用途，以及在制备树突状细胞迁移促进剂和制备疫苗中的用途。当然，泛酸和/或其衍生物与α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸和/或其衍生物配合使用在促进树突状细胞迁移中的用途，以及在制备树突状细胞迁移促进剂和制备疫苗中的用途也在本发明的范围之内。
其中，上述的泛酸衍生物为D-泛酸钙、D-泛醇和泛硫乙胺中的至少一种；
泛酸及泛酸衍生物在体外处理DC细胞时，优选使用浓度为1μM-30μM。
其中，上述的α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的衍生物为α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的盐或α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的盐或其水合物。进一步的，所述的α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的盐为α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸钠盐、α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸钾盐、α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸四环己铵盐中的至少一种。所述的α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的盐的水合物为α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸钾盐水合物、α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸钠盐水合物或α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸酯四(环己基铵)盐水合物中的至少一种。α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸及其衍生物体在体外处理DC细胞时，优选使用浓度为1mM-10mM。
本发明使用泛酸或其衍生物和/或α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸或其衍生物对DC细胞进行处理一般是将其与DC细胞进行混合即可。优选在体外与DC细胞共孵育。孵育后可以洗涤细胞去除掉细胞外游离的泛酸或其衍生物和/或α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸或其衍生物。
本领域技术人员知道，直接注射的普通疫苗，如重组蛋白疫苗、多肽疫苗、mRNA疫苗等，在注射进人体后，体内会有DC募集到疫苗的注射部位，而当将上述的疫苗，统称为新抗原注射疫苗时，募集到疫苗注射部位来摄取、加工处理和递呈抗原的树突状细胞会受到上述的树突状细胞迁移促进剂的刺激，从而增强向淋巴结迁移的能力。这些注射的重组蛋白疫苗、多肽疫苗、mRNA疫苗等，通过树突状细胞来发挥作用，在本发明中称为体内靶向DC的疫苗。当制备体内靶向DC的疫苗时，可直接与体内靶向DC的疫苗混合注射或分别注射泛酸或其衍生物和/或α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸或其衍生物。
也就是说，本发明提供的可用作树突状细胞迁移促进剂的物质有两种使用方法。一是用于树突状细胞疫苗的制备，其可与树突状疫苗协同注射进体内，促进树突状细胞向淋巴结迁移从而增强效果；另外也可与树突状细胞疫苗在体外共孵育一段时间(比如4-24h有较好效果，优选采用24小时)，然后可以洗涤或者不洗涤树突状细胞，将其与其他的辅助性成分一起进行注射。二是用于直接注射的普通疫苗，如重组蛋白疫苗、多肽疫苗、mRNA疫苗等的配合使用，可直接与体内靶向DC的疫苗混合后注射或分别注射配合发挥作用，这些疫苗在注射部位附近被体内DC细胞摄取后，配合注射的树突状细胞迁移促进剂可以与之起作用促进这些摄取了疫苗的DC细胞向淋巴结迁移。
在本发明提供的实例中。使用泛酸和α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸在体外处理DCs，具有显著的促进DCs迁移的效果。此外，本发明实例中进行了上述处理的DCs肿瘤疫苗的体内实验，结果表明，用上述树突状细胞迁移促进剂处理后的DCs肿瘤疫苗均表现出了显著提升的抗肿瘤疗效。
以下通过对实施例对本发明进行更进一步的举例详述。
实施例中主要使用的实验材料和设备如下：
1、实验用细胞株及实验动物
LL2细胞系、EG7-OVA细胞系购自美国模式菌种收藏所(American Type CultureCollection,ATCC)。用含10％胎牛血清(Fetal bovine serum,FBS,Gibico公司)的DMEM或RPMI-1640(Gibico公司)培养基进行细胞培养。实验所用6-8周龄的C57/BL6J雌性小鼠购自北京维通利华实验动物有限公司，饲养于SPF级环境中。
2、主要试剂材料及试剂盒
实验用细胞培养基：1640培养基(RPMI-1640)、DMEM培养基和胎牛血清(Fetalbovine serum,FBS)均购自于美国Gibco公司。
细胞因子CCL19、CCL21购自absin生物科技有限公司。
0.5μm的24孔Transwell小孔购自康宁生物科技有限公司。
GM-CSF、IFN-γ购自上海普欣生物科技有限公司。
LPS和CFDA-SE细胞标记试剂盒购自碧云天生物科技有限公司。
3、主要仪器设备
流式细胞仪：FACSCalibur，普通光学显微镜：CHS，Olympus。
实施例1泛酸和α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸增强DC体外迁移效果实验
1、DC细胞的获取及培养
①取6周龄左右的成年C57BL/6J雌性小鼠的胫骨和腓骨,放置于75％乙醇中浸泡5min以杀死细菌，接着剔除肌肉组织，将腿骨浸泡在RPMI 1640+1％PS的培养基中；用灭菌的剪刀剪除腿骨两端，再用注射器吸取新鲜的RPMI 1640+1％PS培养基吹出骨髓细胞，直至将骨髓细胞全部吹出为止；
②用70μm的筛网将收集的含有骨髓细胞的培养基进行过滤，1200rpm离心3min，弃去上清，再用红细胞裂解液(称取1.3g Tris-base和3.74g NH4Cl，用490ml超纯水溶解，用浓盐酸将溶液pH值调至7.2-7.4，再加入超纯水定容至500ml，0.22μm滤器去除细菌，4℃保存，现配现用)重悬细胞，室温静置3min，1200rpm离心3min，最后使用RPMI 1640+10％FBS+1％PS培养基将红细胞裂解液洗除，并重悬细胞；
③将重悬的细胞分至培养皿中，每皿2×106-3×106个细胞，每皿加入10ml的RPMI1640+10％FBS+1％PS培养基，并加入20ng/ml GM-CSF细胞因子，将培养皿置于37℃细胞培养箱中培养，在培养的第三天加入新鲜的含有20ng/ml GM-CSF的RPMI 1640+10％FBS+1％PS培养基，直至培养到第8天得到未成熟DCs(imDCs)。取培养至第8天培养的DCs，使用1mlPBS洗去培养基后，用100μl的PBS重悬细胞，加入1μl APC Hamster Anti-Mouse CD11c流式抗体，轻轻混匀后置于4℃避光孵育40min；待孵育结束后用PBS洗去多余抗体，再用200μlPBS重悬细胞，使用流式细胞仪检测CD11c+DCs所占比例。当CD11c比例大于80％时，则说明DC诱导成功。
2、泛酸和α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸体外促进DCs迁移效果验证
取培养第8天的未成熟的DC铺于24孔板中，每孔3×105个细胞。分别加入泛酸(1mM),α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸(15μM)处理24h。将细胞消化后使用1640双无培养基洗涤3遍后，使用1640培养基重悬。将细胞铺于24孔板的transwell小孔中(孔径为5.0μm)，每孔1×105个细胞体积为100μl。下室分别加入：
①500μl 1640完全培养基；
②500μl 1640完全培养基+CCL19(250ng/ml)+CCL21(250ng/ml)；
24h后将下室细胞进行计数，计算DCs迁移的效率。
结果显示与对照组相比，泛酸和α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸能够将DC体外迁移效率从33.97％分别提高到97.90％和99.54％，结果具有统计学差异。说明泛酸和α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸能够提高DC体外迁移效率(图1)。
实施例2泛酸和α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸促进DC体内迁移至淋巴结实验
取培养第8天的未成熟的DC。分别加入泛酸(1mM)和α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸(15μM)处理24h。将细胞消化后使用1640双无培养基洗涤后，每3-5×106个细胞加入1ml的CFDASE标记液悬浮细胞，置于15ml BD管中，加入1ml CFDA SE存储液(2×)，轻轻混匀，37℃避光孵育30min；接着加入10ml RPMI 1640+10％FBS+1％PS培养基，混匀终止标记，再用RPMI1640培养基洗涤一次，取1×106个细胞加入50μl RPMI 1640培养基重悬。将各个组CFSE标记的细胞注射入小鼠右后足垫，24h后取小鼠近端和远端淋巴结检测淋巴结中CFSE阳性细胞的比例。
结果显示泛酸和α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸显著提高了近端淋巴结和远端淋巴结中DC的比例，结果具有统计学差异，说明泛酸和α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸具有促进DCs体内迁移至淋巴结的能力(图2)。
实施例3泛酸增强DC疫苗的抗肿瘤效果实验
1、负载次氯酸氧化的肿瘤裂解物(TCL)的DC疫苗的制备
向培养第8天的未成熟的DCs中分别加入以下成分继续培养：
(1)LPS(1μg/ml)+CPG(10μg/ml)+IFN-γ(50ng/ml)+TCL
(2)泛酸(1mM)+LPS(1μg/ml)+CPG(10μg/ml)+IFN-γ(50ng/ml)+TCL
其中TCL的量与DCs量按照1:1的比例加入，比如3×106的DCs中加入3×106个LL2的裂解物。
继续培养24h后收集细胞，使用1640双无培养基洗涤3次后，将细胞重悬至3×106/100μl。2、PA增强负载次氯酸氧化的肿瘤裂解物的DC疫苗的抗肿瘤效果验证
取6-8周C57雌性小鼠分为3组，每组6只小鼠。分别为PBS组、负载TCL的DC疫苗组、负载PA和TCL的DC疫苗组。在第0天通过尾静脉接种2×105个LL2细胞，接种体积为100μl。分别于第4、11、18天皮下接种DC疫苗，每只小鼠接种100μl含有3×106个处理后的DCs。在第21天处死小鼠，对小鼠肺组织进行拍照和HE染色以及称量肺重，计算肺表面结节数来评价疫苗抗肿瘤效果。
结果显示PA处理组肺组织表面肿瘤数少于其它组(图3a)。通过称量肺重，发现PA组肺重明显低于其它组(图3b)，并且肺组织结节数明显低于其它组(图3c)。这说明泛酸处理组具有更好的抗肿瘤效果。
实施例4α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸增强DC疫苗的抗肿瘤效果实验
将6-8周龄C57BL/6J雌性小鼠随机分组。在第0天每只小鼠右背部皮下接种1×106个EG7-OVA肿瘤细胞，分别在第1、4、11、15和18天在培养液中加入抗原肽LPS(1μg/ml)+CpG(10μg/ml)+IFN-γ(50ng/ml)+OVA257-264(10μg/ml)，LPS(1μg/ml)+CpG(10μg/ml)+IFN-γ(50ng/ml)+α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸(15μM)+OVA257-264(10μg/ml)与DC共同孵育24h的2×106个DC皮下各免疫一次，待肿瘤长出后每隔2天测量肿瘤大小，瘤体积计算公式为0.52×长×宽2。记录每组内每只小鼠肿瘤生长曲线和各组肿瘤平均生长曲线。接种后第22天处死小鼠，进行肿瘤拍照和记录肿瘤重量。
结果显示α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸处理组肿瘤生长最缓慢，平均肿瘤重量最低(图4a-4b)。这说明α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸处理组具有更好的抗肿瘤效果。
本发明上述实例使用了代谢产物泛酸和α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸，验证了它们在促进DC迁移进一步提高DC疫苗效果中的用途。该研究为因DCs迁移效率低而导致疫苗效果受到限制的问题提供了一种选择，为从促进DCs迁移方面进一步增强DC疫苗抗肿瘤效果奠定了基础。
Claims (24)
1.泛酸和/或其衍生物，和/或α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸和/或其衍生物中的至少一种在促进树突状细胞迁移中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的促进树突状细胞迁移是指向淋巴结迁移。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述的泛酸衍生物为D-泛酸钙、D-泛醇和泛硫乙胺中的至少一种；
或者，所述的α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的衍生物为α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的盐或α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的盐或其水合物中的至少一种。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：
所述的α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的盐为α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸钠盐、α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸四环己铵盐中的至少一种；
或者，所述的α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的盐的水合物为α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸酯四(环己基铵)盐水合物。
5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于所述泛酸和/或其衍生物，和/或α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸和/或其衍生物中的至少一种在体外处理DC细胞时，使用浓度为0.1μM-100mM。
6.根据权利要求4所述的用途，其特征在于所述泛酸和/或其衍生物优选使用浓度为1μM-30μM；α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸和/或其衍生物优选使用浓度为1mM-10mM。
7.泛酸或其衍生物，和/或α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸或其衍生物中的至少一种在制备树突状细胞迁移促进剂中的用途。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于：所述的促进树突状细胞迁移是指向淋巴结迁移。
9.根据权利要求7所述的用途，其特征在于：所述树突状细胞迁移促进剂可在体外与树突状细胞共孵育以提高其迁移能力，或与树突状细胞直接配合进一步提高其迁移能力。
10.根据权利要求8所述的用途，其特征在于：所述的直接配合使用是指注射使用。
11.树突状细胞疫苗，其特征在于：由泛酸或其衍生物，和/或α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸或其衍生物中的至少一种处理后的树突状细胞作为主要活性成分。
12.根据权利要求11所述的树突状细胞疫苗，其特征在于：所述的树突状细胞为髓样DC细胞或为淋巴样DC细胞。
13.根据权利要求11所述的树突状细胞疫苗，其特征在于：所述的树突状细胞为由患者自体获取的离体树突状细胞。
14.根据权利要求11-13任一项所述的树突状细胞疫苗，其特征在于：所述的处理，为与树突状细胞共孵育后制成疫苗使用；或者，与树突状细胞混合后制成疫苗使用。
15.根据权利要求11-14任一项所述的树突状细胞疫苗，其特征在于使用以下方法制备得到：
a、取诱导培养后的未成熟树突状细胞(imDCs)；
b、向培养基中加入泛酸或其衍生物，和/或α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸或其衍生物中的至少一种，以及加入刺激树突状细胞成熟的试剂和抗原，孵育后获得负载有抗原且成熟的树突状细胞；
c、将步骤b获得的负载有抗原且成熟的树突状细胞制备为树突状细胞疫苗。
16.根据权利要求11～15任一项所述的树突状细胞疫苗，其特征在于：还包括有药学上可接受的辅助性成分。
17.根据权利要求16所述的树突状细胞疫苗，其特征在于：所述的在药学上可接受的辅助性成分为保护剂、赋型剂、免疫佐剂、分散剂或细胞培养基中的至少一种。
18.疫苗，其特征在于包含有抗原和树突状细胞迁移促进剂；所述的树突状细胞迁移促进剂为泛酸或其衍生物，和/或α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸或其衍生物中的至少一种。
19.根据权利要求18所述的疫苗，其特征在于，所述的抗原为重组蛋白疫苗、多肽疫苗、mRNA疫苗、树突状细胞疫苗中提供抗原的组分。
20.根据权利要求18或19所述的疫苗，其特征在于：所述的抗原和树突状细胞迁移促进剂处于同一包装或独立的不同包装中。
21.根据权利要求18～20任一项所述的疫苗，其特征在于：还包括有药学上可接受的辅助性成分。
22.根据权利要求21所述的疫苗，其特征在于：所述的在药学上可接受的辅助性成分为保护剂、赋型剂、免疫佐剂、分散剂或细胞培养基中的至少一种。
23.根据权利要求11～17任一项所述的树突状细胞疫苗，或权利要求18～21任一项所述的疫苗，其特征在于：
所述的泛酸衍生物为D-泛酸钙、D-泛醇和泛硫乙胺中的至少一种；
或者，所述的α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的衍生物为α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的盐或α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的盐或其水合物中的至少一种。
24.根据权利要求23所述的树突状细胞疫苗或疫苗，其特征在于：
所述的α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的盐为α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸钠盐、α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸四环己铵盐中的至少一种；
或者，所述的α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸的盐的水合物为α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸α-D-葡萄糖-1,6-二磷酸酯四(环己基铵)盐水合物。
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|---|---|
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Citations (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020146396A1 (en) * | 1998-02-20 | 2002-10-10 | Albert Matthew L. | Methods for use of apoptotic cells to deliver antigen to dendritic cells for induction or tolerization of T cells |
| US20050238627A1 (en) * | 2004-03-02 | 2005-10-27 | Tsuneya Ohno | Methods and compositions for hybrid cell vaccines for the treatment and prevention of cancer |
| CN101156952A (zh) * | 2006-09-15 | 2008-04-09 | 四川大学 | Dc细胞靶向载体、纳米粒子及制备方法 |
| US20090041792A1 (en) * | 2007-07-19 | 2009-02-12 | Istituto Superiore Di Sanita | Dendritic cells, uses therefor, and vaccines and methods comprising the same |
| US20090304714A1 (en) * | 2008-03-25 | 2009-12-10 | The Regents Of The University Of Michigan | IKKi Inhibitor Therapies and Screening Methods, and Related IKKi Diagnostics |
| US20160237429A1 (en) * | 2013-09-25 | 2016-08-18 | Cornell University | Compounds for inducing anti-tumor immunity and methods thereof |
| CN107428845A (zh) * | 2015-03-16 | 2017-12-01 | 阿尔勒治疗公司 | 包括细胞穿透肽、货物和tlr肽激动剂的新型复合物 |
| CN110438074A (zh) * | 2019-07-16 | 2019-11-12 | 广州沙艾生物科技有限公司 | 一种免疫细胞复苏培养液及其制备方法 |
| CN111655289A (zh) * | 2018-01-22 | 2020-09-11 | Ucl商业有限责任公司 | 组合治疗剂 |
| WO2020223550A1 (en) * | 2019-04-30 | 2020-11-05 | Myeloid Therapeutics, Inc. | Engineered chimeric fusion protein compositions and methods of use thereof |
| CN113855634A (zh) * | 2020-06-30 | 2021-12-31 | 四川大学 | 多肽修饰的脂质体、mRNA传递系统及树突状细胞疫苗 |
| WO2022098776A1 (en) * | 2020-11-03 | 2022-05-12 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Compositions and methods to promote thymic function |
| US20220193125A1 (en) * | 2019-04-19 | 2022-06-23 | Peking University | Manganese composition for enhancing immunity |
| CN115120713A (zh) * | 2021-03-25 | 2022-09-30 | 四川大学 | 氢氧化铝-CpG寡核苷酸-多肽复合佐剂、疫苗及制备方法和用途 |
| CN115300641A (zh) * | 2022-08-01 | 2022-11-08 | 深圳市人民医院 | 一种靶向树突状细胞促进抗原溶酶体逃逸激活免疫系统的抗原递送载体其制备方法与应用 |
| CN116162138A (zh) * | 2023-02-24 | 2023-05-26 | 四川大学 | 树枝状多肽及其用途 |
-
2021
- 2021-09-29 CN CN202111149390.5A patent/CN113817677B/zh active Active
Patent Citations (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020146396A1 (en) * | 1998-02-20 | 2002-10-10 | Albert Matthew L. | Methods for use of apoptotic cells to deliver antigen to dendritic cells for induction or tolerization of T cells |
| US20050238627A1 (en) * | 2004-03-02 | 2005-10-27 | Tsuneya Ohno | Methods and compositions for hybrid cell vaccines for the treatment and prevention of cancer |
| CN101156952A (zh) * | 2006-09-15 | 2008-04-09 | 四川大学 | Dc细胞靶向载体、纳米粒子及制备方法 |
| US20090041792A1 (en) * | 2007-07-19 | 2009-02-12 | Istituto Superiore Di Sanita | Dendritic cells, uses therefor, and vaccines and methods comprising the same |
| US20090304714A1 (en) * | 2008-03-25 | 2009-12-10 | The Regents Of The University Of Michigan | IKKi Inhibitor Therapies and Screening Methods, and Related IKKi Diagnostics |
| US20160237429A1 (en) * | 2013-09-25 | 2016-08-18 | Cornell University | Compounds for inducing anti-tumor immunity and methods thereof |
| CN107428845A (zh) * | 2015-03-16 | 2017-12-01 | 阿尔勒治疗公司 | 包括细胞穿透肽、货物和tlr肽激动剂的新型复合物 |
| CN111655289A (zh) * | 2018-01-22 | 2020-09-11 | Ucl商业有限责任公司 | 组合治疗剂 |
| US20220193125A1 (en) * | 2019-04-19 | 2022-06-23 | Peking University | Manganese composition for enhancing immunity |
| WO2020223550A1 (en) * | 2019-04-30 | 2020-11-05 | Myeloid Therapeutics, Inc. | Engineered chimeric fusion protein compositions and methods of use thereof |
| CN110438074A (zh) * | 2019-07-16 | 2019-11-12 | 广州沙艾生物科技有限公司 | 一种免疫细胞复苏培养液及其制备方法 |
| CN113855634A (zh) * | 2020-06-30 | 2021-12-31 | 四川大学 | 多肽修饰的脂质体、mRNA传递系统及树突状细胞疫苗 |
| WO2022098776A1 (en) * | 2020-11-03 | 2022-05-12 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Compositions and methods to promote thymic function |
| CN115120713A (zh) * | 2021-03-25 | 2022-09-30 | 四川大学 | 氢氧化铝-CpG寡核苷酸-多肽复合佐剂、疫苗及制备方法和用途 |
| CN115300641A (zh) * | 2022-08-01 | 2022-11-08 | 深圳市人民医院 | 一种靶向树突状细胞促进抗原溶酶体逃逸激活免疫系统的抗原递送载体其制备方法与应用 |
| CN116162138A (zh) * | 2023-02-24 | 2023-05-26 | 四川大学 | 树枝状多肽及其用途 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| ERHARDT M等: "Transfection of human monocyte-derived dendritic cells with CpG oligonucleotides.", vol. 83, no. 3, pages 278 - 285 * |
| RUI ZHANG等: "Cholesterol modified DP7 and pantothenic acid induce dendritic cell homing to enhance the efficacy of dendritic cell vaccines", vol. 2, no. 37, pages 1 - 16 * |
| 朱旬等: "前列腺素E_2对小鼠树突状细胞迁移能力及抗乳腺癌免疫作用的影响", vol. 21, no. 5, pages 59 - 61 * |
| 李成刚等: "ROS对树突细胞表型和功能成熟作用的研究进展", 《第四军医大学学报》, vol. 25, no. 4, pages 382 - 384 * |
| 赵翰卿等: "维生素家族对免疫细胞影响的研究进展", vol. 32, no. 4, pages 343 - 348 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113817677B (zh) | 2023-08-18 |
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