JP3319597B2 - 細胞培養及び治療に有用なβ―アレチン - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 政府の権利 本発明は、ナショナル インスチツート オブ ヘルス
と共に許可＃HL 16、796、＃AM 10、628及び＃SO7RR
05583−25の下の研究の成果で為されたものであり、
アメリカ合衆国政府がある権利を有する。

1.発明の技術分野 本発明は、細胞分化誘導、細胞の培養への順応及び細
胞形質発現の促進、生体性、寿命及び生産性のための化
合物を提供する。特に、本発明は、先駆細胞を特別の細
胞中に分化させるに有用で、また、悪機能細胞の機能を
正常化するために、また、扱い難い細胞（即ち、“回
復、救助或いは制御に耐性”のある細胞:Dorland's Ill
ustrated Medical Dictionary,26th Edition,1974,W.B.
Saunders,Philadelphia）を除去するために有用な細胞
分化化合物を提供する。

細胞分化は、良く知られる現象で、先駆細胞（通常、
“幹細胞”と広く称する）が、特別の細胞中に発現する
方法と広く称するものである。分化化合物、即ち、細胞
の分化を誘導する化合物は、成長因子、即ち、細胞増殖
を行うこれらの因子から明確に区別されており、（文献
では例えば、“成長、分化及び悪性の逆転”、Scientif
ic American pp.40〜47,1986,1月及び本明細書に示す文
献；を参照），そして、身体の病気、異常の処理の治療
学的使用に関する意味が、現在の関心事になっている。

本出願は、非−細胞−系統−依存の分化化合物とし
て、β−アレチンの分化に関し、β−アレチンの使用
は、分化及び或いは、細胞、特に、治療学的利点のため
に、種々の細胞の機能の正常化を行なうものである。

“表現型細胞発現”は、ここで、細胞染色体列の発現
にのみ関している“遺伝子型細胞発現”とは逆に、遺伝
学的に及び環境的に決定された個々の細胞の物理学的、
生化学的及び生理学的特性の全領域にわたり、表示され
ているものとして定義されるものである。（例えば、Do
rland's Illustrated Medical Dictionary,26th Editio
n,1974,W.B.Saunders,Philadelphiaを参照）．従って、
本発明の化合物の生化学的活性は、条件により影響され
るとして、培養物中の細胞の遺伝的物質の発現の変調を
含み、細胞の年齢、用いた培養或いは条件、及び、適宜
に添加した生物学的効果体の存在をも含むものである。

2.従来技術の簡単な説明 β−アレチンは、生体内で生理的経路の副産物として
生産されると知られている。それは、既知の栄養利点を
有するビタミンであるパントテン酸への経路を経て、関
係しており（例えば、J.Reprod.Fert.57;505〜510（197
9参照）及び関連化合物は，ラジオプロテクターとして
のラヂオテラピイと一緒の使用を示唆している（J.Med.
Chem.29;2217〜2225,1986;WO35/00517,1985.1.17.）。
この化合物の他の関連の確定的な生物学的機能は、先行
技術に説明されていない。この化合物は、関係化合物の
化学合成のための出発原料として一義的に良く知られて
いる（例えば、日本特許出願（83）198461号，（83）46
063A2号；（81）156256A2号；（81）104861A2;（80）12
4755号；（75）62932号；（80）07222号；及び米国特許
第2,835,704号及び第4,552,765号；β−アレチン、β−
アレテイン、パンテツエイン及びその誘導体或いは中間
体の製造の例として、また、コエンザイムＡ及びコエン
ザイムＡ誘導体或いは中間体として）。

3.発明の概略 本発明は、従って、細胞分化及び細胞機能の正常化の
方法及び細胞形質発現、生体性、寿命を高める方法及び
β−アレチンを分化化合物として使用する製造方法を提
供する。本発明は、試験管内及び生体内の両方のヒト細
胞を含む哺乳動物細胞の分化に特別の適用性を有し、特
に、細胞成熟化及び分化依存細胞成長の双方に関する細
胞展開の正常化（ノーマリザイション）にためである
が、レプチリアン、アビアン（鳥類）、植物、昆虫、ク
モ形類動物、リケッチア、バクテリア、イースト、モー
ルド、プロトソアン及びファンガスの細胞のような他の
細胞に対しての分化化合物としてβ−アレチンを使用す
ることを意図している。例示的適用例としては、次のよ
うなものである。（特に、哺乳動物及び特別にヒトの、
免疫不足及び自己免疫の病気及び異常の処理において、
β−アレチンの治療的使用を含む）免疫不足及び自己免
疫細胞機能を正常にすること；細胞形質発現、生産性及
び生体活性そして、それから誘導される治療学的利点を
高めること、及び、培養への耐性のある細胞の順応化及
びそれから誘導される診察的及び治療的な使用である。

本発明の範囲内には、β−アレテイン、β−アレチン
の還元形があり、本発明を実施する目的のためのβ−ア
レチンと生物学的に等価なものと考えられるべきものと
して、β−アレチンは、容易に生体内でβ−アレテイン
に還元される。例えば、過剰な細胞内チオール化合物及
び哺乳動物内のグルタチオン及びチオール−ヂサルフィ
ド イソメラーゼのような酵素により容易に還元され
る。両方の化合物は、固有の抗酸化特性を有する利点を
有するが、β−アレチンは、β−アレテインよりも抗酸
化性に化学的に耐性を有し、本発明でのβ−アレチンの
使用は、一般的に、この理由により好適である。

4.図面の簡単な説明 第１図は、IMR−90ヒト胎児肺繊維芽細胞（フィブロ
ブラスト）のレベル最大２倍数（PDL）でのβ−アレチ
ン効果をテストする一連の実験からのデータを示す。

第２図は、試験管内のヒト外縁血液ロイコシテス（HP
BL）による非抗原特定免疫合成へのβ−アレチン効果の
テストする一連の実験からのデータを示す。

第３図は、非特定の免疫グロブリンのネズミの脾臓
（スプレノシト）生成物へのβ−アレチン効果を研究す
る一連の実験からのデータを示す。

第４図は、生体内から試験管内へ取られた細胞を順応
化する能力へのβ−アレチン効果を研究する一連の実験
からのデータを示す。

第５〜７図は、非−分泌性の骨髄腫細胞（NS−１）で
接種され、種々の投与量のβ−アレチンで処理されたマ
ウスでの早期及び晩期の腫細を示す。

第８図は、第５〜７図のデータの３次元構成図であ
る。

第９図は、第８図の85度時計周り回転した図である。

第10図は、β−アレチンの種々の投与量に対するマウ
スの腫瘍の調整を示す。

5.好適な具体的実施例の説明 前記に示すように、β−アレチンは、既知の化合物
［（H₂NCH₂CH₂（Ｃ＝Ｏ）NHCH₂CH₂S）_２及び次の式Ｉ）
であり、通常、相当するモノサルフィドの酸化により製
造され、β−アレテイン（H₂NCH₂CH₂（Ｃ＝Ｏ）NHCH₂CH
₂SH及び次の式II）は、空気中及び水溶液で不安定であ
る［メルクインデックス、９版（＃221），メルク＆カ
ンパニイ、Rahway,NJ］ 双方の化合物は、その酸塩として安定化され、特に、塩
化水素塩及び特に塩酸塩とする。（Ｎ、N'−ビス−カル
ボベンゾキシ）ブロック化β−アレチンをデブロックす
ることに基づくβ−アレチンの合成の種々の技術は、文
献に記載されている（カルボベンゾキシはよくCBZとし
て示される）；然し乍ら、ほんどの既知の方法では、収
率或いは純度、或いはその両方で不十分である。従っ
て、本発明の方法に有用なβ−アレチンは、純度を確保
し、好適には、最大の収率をとる方法により製造するこ
とが好適である。例えば、Ｎ−CBZ−ブロック化β−ア
ラニンをＮ−ヒドロキシサクシンイミドとカップリング
して、相当する活性エステルを作り、次に、システアミ
ンを過酸化水素で酸化して作ったシスタミンとカップリ
ングし、ビス−CBZ−ブロック化 β−アレチンを生成
し、それを回収し、デブロックする方法により製造する
ことが好適である。この方法は、実施例に詳細に説明さ
れるが、製薬使用に適する高い収率と高い純度の生成物
を得る。

本発明に従って、β−アレチンは、細胞−系統で特定
しなく、表現型特定に関係ない細胞に共通である遺伝子
分化機構の組を調整するようである。この前提に一致す
るように、本発明によりβ−アレチンを使用すること
は、下記のものを除いて、細胞サイクルにおいて、細胞
系統、表現型或いはインターベンションに関して、著し
く投与量−依存でない。広く、約100pg/ml培養物からの
投与量が、細胞分化に有用である。生体内の適用のため
に、約10pg/身体重量1kgからの投与量が推薦され、特
に、約10pg/kg〜200μg/kgの量、或いはそれ以上の量、
約100μg/kgまでの量が推薦され、通常の担体（例え
ば、静脈注射を含む非経口のための生理的食塩液或いは
経口での適用なエンテロ被覆と共に）の存在により、通
常の経由で投与され、好適には、毎日或いは隔日に詳細
には下記のレジムで、所望の結果が達成されるまで投与
される。だが、他のレジム、例えば、周間隔で、二周間
隔でも、特に結果が顕著な場合、充分である。即ち、正
常化が進むにつれて、投与量を減らすことが適当であ
る。必要な分化、細胞機構の正常化或いは他の所望の効
果に必要な量より過剰のβ−アレチン量を用いること
は、勧められない。即ち、過剰投与量は、逆の生産性と
なり得、また、少なくとも、効果的でない。試験管内適
用のために、約10pg/ml培養物からの投与量が勧めら
れ、下記のように、補充もある。

β−アレチンは、一般的に、生きている生物、一般的
に、特にヒト、哺乳動物、レプチリアン、アビアン（鳥
類）、植物、昆虫、クモ形類動物、リケッチア、バクテ
リア、イースト、モールド、プロトソアン及びファンガ
スの細胞の分化に有用であると意図している。即ち、そ
れは、ここに報告される実験及び報告されない実験の双
方で観察される相当する投与量で得られた結果の普遍性
による。生きているシステムでのβ−アレチンに対する
先駆物質が偏在するものである。更に、β−アレチン
は、肝細胞のような（培養物−耐性細胞と称する）順応
性として一般的に見做されない培養細胞に順応するため
に有用である。

本発明によると、β−アレチンは、細胞機能を正常化
し（即ち、不十分な機能を改良し、或いは過剰機能を低
減せしめ）；細胞寿命及び／或いはバイオ生産性を促進
し、及び／或いは細胞機能を強化する（即ち、表現型細
胞発現を伸長せしめる）分化化合物をなす。β−アレチ
ンの特別機能は、（１）培養物耐性細胞を順化するこ
と；（２）老化が広く、細胞自体の培養物中の再生産を
不能力の増大と定義され、典型的には、特定の数の倍化
レベル（PDL）の細胞ジェネレイション時間（T_g）を著
しく増加せしめることにより特徴ずけられる老化におい
て、試験管内の細胞の老化を遅らせること；（３）免疫
サーベイランス（処置困難な細胞の認識と除去）のよう
に機能を正常化或いは改良すること、及び／或いは細
胞、特に、免疫システム（免疫細胞）のものを生産する
ことである。特に、細胞培養での老化遅延のために、顕
著な細胞悪性化（この場合、老化の開始）の前に、処理
される細胞をβ−アレチンに接触せしめることが好適で
ある。これは、例えば、一旦始まった細胞老化を逆転す
ることは困難であると分かったためであり、従って、本
発明によるβ−アレチンでの処理は、下記のように、細
胞分化の悪性化を防止すること、及び、多種の病気或い
は異常に伴うような、存在する分化悪性化を治療的処理
すること、を含むものである。初期の病気或いは異常に
示される異常細胞分化機能のマーカーは、研究細胞老化
のマーカーも含み、良く知られており、先行技術で開発
され、実施者は、そのようなマーカーを評価する方法と
して文献に参照される。

培養物中の細胞の寿命サイクルの正常化のために、即
ち、老化及び死亡に関して、細胞の生長及び熟成を最適
化し、培養物に耐性の細胞を順応化するために、老化開
始の前に、細胞を、β−アレチンに接触せしめることは
好適である。細胞のエイジングは、徐々の過程であるた
めに、老化は、ある程度、寿命の後の段階ではその化合
物に接触せしめられて、停止され得る。それは、細胞タ
イプ、培養物条件及び他の因子に依存している。然し乍
ら、老化細胞は、定義によりライビル及び生産性の少な
く、従って、寿命期間の遅い段階でそれを保持すること
は、本研究が老化細胞に関心のあるのでも、本発明の範
囲で、逆の生産性となる。従って、多くの場合、最適の
結果を得るために、（例えば、細胞寿命及び機能の最適
化が望ましい場合）、細胞をその寿命サイクルの早期
に、該化合物に接触せしめることが好適である。

培養−耐性細胞（即ち、通常の培養条件下で短い寿命
期間、例えば、２週間或いはそれ以下、を有する細胞；
培養物中で正常の生体機能を表現しない細胞、例えば、
ホルモン、酵素或いは他の生体生産物が、試験管内で抑
制される正常な生産性を表現しない細胞）は、その化合
物の順応量に早くに接触せしめることにより、培養物に
順応化せしめる。好適には、細胞に導入する前に培養媒
体に該化合物を結合することによる。例示の耐性細胞
は、リンパ腺、肝、脾臓、神経、甲状線及び胸線の哺乳
動物細胞を含むものである。

β−アレチンは、既知の培養物媒体に添加でき、時に
より、血漿、例えば、死亡或いは新生牛血清のようなプ
ロテイン成分を補給し、本発明の結果を得る。用いた媒
体は、本発明の部分を形成しない。例示の媒体には、イ
ーグル基底媒体；イーグルミニマルエッセンシャル媒
体；ディルベッコの変成イーグル媒体、ハムの媒体、例
えば、F10媒体或いはF12媒体、パックのN15媒体、パッ
クのN16媒体、ワイモス（Wamoth）のMB5421媒体,McCoy
の5A媒体,RPMI媒体1603,1534及び1640;LeibovitzのL15
媒体;ATCC（アメリカンタイプカルツアコレクション）C
RCM30;MCDB媒体101,102,103,104;CMRL媒体1066,1415及
びHank或いはEarlのバランス塩溶液である。用いた基底
媒体は、既知のように、培養中の細胞の成長を支持する
ための栄養素、基本的アミノ酸、脂肪酸及び炭水化物を
含む。媒体は典型的には更にビタミン、助因子、痕跡性
元素及び同化し得る量の塩のような基本的成分を含む。
細胞の成長及び保持を促進する他のファクターは、細胞
の生存、機能、生産及び／或いは増殖に必要な化合物及
び因子；例えば、ホルモン、特にペプチジル或いはステ
ロイド ホルモン、成長因子及び抗生物質が含まれる。
また、媒体は、一般的に、緩衝溶液、pH調整剤、pHイン
ヂケータ等を含む。

本発明のモジュレイターを含有する媒体は、多種の細
胞、特に真核生物細胞に適用できる。本発明の媒体は、
動物、特にヒトを含む哺乳動物、植物細胞、昆虫細胞、
バクテリア、ファンジ、モールド（黴）、原虫類（プロ
トーゾア）及びリッケチア、特に、抗生物質生産細胞の
培養に適する。β−アレチンは、広く、多種の生きてい
る細胞を、そのような細胞の培養物に適応する言わば組
織培養物媒体の広いスペクトルにおいて、促進するため
に広く有効である。例示の適用としては、ハイブリドー
マ細胞系統のようなクローン化細胞、特に、ヒト細胞で
の哺乳動物細胞、細胞生産物の生産のために、特に、プ
ロテイン及びホルモン、酵素及び免疫因子のようなペプ
チド；ワクチンの生産のためのビールス感染細胞；例え
ば、分裂組織或いはカルルス培養での植物細胞；傷をい
やすための組織を供する上皮細胞；医学的或いは治療的
用途のための耐性細胞；及び生物学的な期間及び埋め込
み組織の生産おす保持の適する媒体中でのものがある。

本発明の方法において培養物に有用な特定の細胞タイ
プは、哺乳動物組織、期間及び腺から誘導される細胞を
含み、例えば、脳、心臓、肺、胃、腸、甲状線、副腎、
胸線、上皮小体、睾丸、肝臓、腎臓、ぼうこう、脾臓、
膵臓、胆嚢、卵巣、子宮、前立線、及び皮膚；再生細胞
（精子、卵子）；リンパ線、骨、軟骨及び間質細胞；免
疫細胞、マクロファージのようなシトファージ、リンパ
球、白血球、赤血球及び血漿板のような血液細胞を含
む。更に、細胞テイプには、植物の幹、葉、花粉及び子
房細胞を含み、微生物、上記のようなビールス；及び昆
虫組織、器官及び腺から誘導される細胞を含む。

本発明のモジュレイターと一緒に有用な培養技術は、
固体支持体（特に、例えば、モノレイヤ或いは懸濁培養
での接極子（アンカレッジ;anchorage）依存細胞のた
め）、例えば、ガラス、炭素、セルロース、中空繊維
膜、懸濁粉体膜及び固体基板を用いることであり、例え
ば、化合物がビーズ内に取り込まれ、マトリックス内に
トラップされ、或いは混合ジサルフィドのような共有結
合の場合に、アガロースゲルを用いることである。β−
アレチンは、第一の培養物に有用であり、系統培養、サ
ブ培養、培養物の保持、氷結或いは乾燥培養物；及びカ
プセル化細胞に有用で、培養物は、通常の媒体から該化
合物含有の媒体に、既知のトランスファ技術により移動
せしめる。

本発明のこの点を実施に従って、細胞を、試験管内の
これらの細胞の培養物を促進するに効果的な量、β−ア
レチンに処理する。例えば、細胞生存性或いは寿命期間
の増加、細胞バイオマスの増加或いは細胞生体生産性の
増加が著しいことにより測定できる。試験管内適用のた
めに、約10pg/細胞培養物ml（約10⁵〜10⁷細胞/mlの密度
に基づいて）が推奨される。培養物は、必要により化合
物が補充され、一般的に、日に基づいて補充され、再
び、隔日で或いは二週間間隔で処理すると、所望の結果
に依存して、充分である。

免疫の適用において、免疫細胞に、β−アレチンに接
触せしめ、白血球、リンパ球、脾臓細胞、Ｔ−細胞、Ｂ
−細胞、自然キラー（NK）細胞及びマクロファージのよ
うなシトファージのようま免疫細胞の機能を促進し、或
いは／或いは強化する。特に、β−アレチンは、生体内
或いは試験管内で、モノクローナルの抗体システムに使
用する抗体の脾臓細胞或いはリンパ球生産を改良するに
有用であり、免疫グロブリン生産を強化或いは改良する
のにも、また、免疫細胞の通常の免疫機能を一般的に促
進するのにも、また、特に、免疫システムでの病気或い
は異常を処置するのにも、有効であり、生物、特に、ヒ
トを含む哺乳動物を、効果量のβ−アレチンで処置する
ことにより、好適には、上記の細胞の成長及び維持を促
進する剤を含有するが、或いは悪化された細胞を除去
し、それを、試験管内で、処置し、それを再び、悪化さ
れた生物内に入れることにより、有効である。これらの
治療に反応するとされるヒトの病気は、自己免疫病、ハ
イプガンマグロブリン症及びエイズ（AIDS;acquired im
mune deficiency syndrome）を含む。

6.実施例 I.β−アレチンの製造： β−アレチンは、次のように製造されたN,N'−ビス−
カルボベンゾキシ（CBZ）ブロックされたβ−アレチン
を解離（デブロック）することにより製造された。

A.N,N'−ビス−（CBZ）−β−アレチン或いは5,5−ビス
［Ｎ−カルボベンゾキシ−β−アラニル）−２−アミノ
エチル］ヂサルフィドの製造 ジシクロヘキシルカルボジイミド（23.3g）溶液を、
ジクロロメタン中の乾燥10％アセトニトリル全容量約50
0mlのＮ−CBZβ−アラニン（24.84g）とＮ−ヒドロキシ
サクシンイミド（12.92g）の溶液中に添加した。ジシク
ロヘキシルウレア（24.51g）が、活性エステル形成の副
産物として沈殿した。活性エステルは、オイルで乾燥さ
せ、無水エチルエーテルで粉末化する。沈殿物は、ジク
ロロメタン中で再懸濁し、更にジクロロヘキシルウレア
を沈殿させる。得られた活性エステルのジクロロメタン
溶液を過し、シスタミン（8.5g）の予め得た溶液に添
加した。所望の生成物:N,N'−ビス−（CBZ）−β−アレ
チンがこの混合物から沈殿した。母液、無水エーテル、
生成物のジクロロメタン抽出物及び上記のように回収し
た活性エステルを乾燥し、粉末化、再結合して、生成物
の収率を出した。生成物は、ほとんど水、熱（約70℃以
上）エチルアセテート及び熱（約30℃以上）エーテル中
に不溶であり、従って、これらは、不純物を抽出するに
使用できる。生成物は、アセトニトリル或いは水と一緒
のジメチルサルフォキシドから再結晶化することがで
き、再び、エチルアセテート或いはエーテルで洗浄し
た。後者方法では、生成物融点で１℃上昇、即ち180か
ら181℃（補正せず）になった。N,N'−ビス−（CBZ）−
β−アレチンの収率を理論値に上げる試みが為される。
理論値の85〜90％の収率は通常で得られた。真空中でP₂
O₅上で乾燥すると、生成物は一モル当量の水を保持して
い、従って、一水和塩として分析した。

分析:C₂₆H₃₄N₄O₆S₂H₂Oとしての計算値;C,53.78;H,6.25;
N,9.65 実験値:C,54.23;H,6.56;N,9.66 試料は、ニューメキシコ州アルバカーキイ、ユニバシ
テイ オブ ニューメキシコ、化学科のRuby Juにより
分析された。

B.上記のI.Aから得られるCBZ−ブロック化β−アレチン
のデブロック［β−アレチン・2HCl或いはN,N'−ビス−
β−アラニル）−シスタミン或いはN,N'−ビス−（β−
アラニル−２−アミノエチル）ジサルフィドの製造］ カンボベンゾキシ基を完全に除去することは、J.Am.C
hem.Soc.86;1202−1206（1964）に説明される方法によ
り行なわれる。N,N'−ビス−（CBZ）−１−アレチンの
１モル当り、氷酢酸中の４当量の臭化水素で15時間でデ
ブロックした後、β−アレチンは、アセトニトリルで沈
殿させることにより精製し、無水エチルエーテルで洗浄
し、水で再懸濁し、過し、アセトニトリルで生成物と
の混合塩として沈殿させる。当初の収率は、理論最大値
の80％以上であった。β−アレチンは、予め1MのKClで
溶離させたダウックス（Dowex AG 1×８（塩化形）（Do
w Chemical Corp,Midland,Michigan）の30ml×15cmの長
いカラム上を通過させ、DI（脱イオン化）水で完全に洗
浄することにより、塩化水素塩に変換した。Ca（OH）_２
で中和し、水からβ−アレチンHClを再結晶化すると、
細かい針状で、224〜225℃融点（補正せず）のものが得
られた。

分析:C₁₀H₂₂N₄O₂S₂・2HClとしての計算値;C,32.69;H,6.
59;N,15.25 実験値:C,32.52;H,6.69;N,15.32 試料は、ニューメキシコ州アルバカーキイ、ユニバシ
テイ オブ ニューメキシコ、化学科のRuby Juにより
分析された。

β−アレチンは、pHの変化［Ca（OH）_２による中和］
で異常であり、IRバンドの位置と強度の変化を大きくす
る。

ピーク（HCl塩）:3270s,3170s,2970s,2700w,2550w,2022
w,1657s,1595m,1560s,1450s,1409m,1390w,1354w,1325m,
1300w,ショルダー/12512m/ショルダー,1188m,1129m,109
7m,1079w,1030w,950w,905w,829m. ピーク（中和）:3250s,3180s,2940m/ブロード,2375s、2
230s,2157s,1936w,1620s,1555w,1462s,1432ショルダー,
1400m,1342m,1286m,1217m,1188m,1128s,1020m,810w,719
m,660w. ビス−（CBZ）−β−アレチンは、β−アレチンに存在
する共鳴の２、３のみを表示する。

ピーク:3345s,3310s,1682s,1640s,1545mショルダー,153
5s,1450w,1427w,1375w,1332m,1270m,1231m,1178w,1120
w,1030m/ブロード． II.β−アレチンによる繊維芽細胞の細胞老化の遅れ． 第１図は、IMR−90ヒト胎児肺線維芽細胞（フィブロ
ブラスト）のレベル最大２倍数（PDL）でのβ−アレチ
ン効果をテストする一連の実験からのデータを示す。そ
の細胞系は、アメリカン タイプ カルチュア コレク
ション（ATCC、ベセスダ、メリーランド州、米国）から
得られる。そして試験管内細胞老化試験のための標準と
して使用される。細胞老化は、培養中に、細胞自身を補
充する細胞能力がなくなる結果となるこれらの細胞の過
程として曖昧に定義される。このモデルは、生体内での
エイジング過程を示し、異なる年齢のヒトから発現した
細胞系は、試験管内でPDLを有し、それは、ドナーの時
間的な年齢とは逆に関係している。IMR−90細胞系は、
約45のPDLの理想的組織培養条件下で、最大のPDLを有す
るものとして示されたものである。IMR−90細胞は、第
１図に示されるように、10mMのHEPES緩衝液、100単位ペ
ニシリンG/ml及び標準濃度で100μｇストレプトマイシ
ン/mlで補強されたマッコイ（McCoy）の5A合成媒体;20
％（V/V）の新誕生カーフ血漿（NBCS）；及び2mMのＬ−
グルタミンでの理想的な条件下で成長された。処理細胞
培養は、燐酸緩衝生理的食塩液（PBS）に溶解した異な
る濃度のβ−アレチンで増加された−何時も培養当り30
マイクロリットルの標準的量である。β−アレチンを、
PDL35の培養物に添加した、これは、細胞が通過する時
間の時間的な意味で中間寿命、フェイスIIと考えられ
る。培養方法は、細胞を0.25％トリプシン/EDTA（エチ
レンジアミン テトラ酢酸）溶液で２〜５分間処理する
ことにより、その基体から固有細胞を除去することによ
る。次に、完全な媒体で２回洗浄し、そして、２倍のノ
イエバウエル（Neubauer）血球計算器で数えた;2百万の
細胞を定量し、20mlの新鮮な完全培養を有する新鮮な組
織培養フラスコ（Ｔ−75、ポリスチレン;LUX,Flow Gene
ral,マクリーン、メリーランド州、米国）に入れた。こ
の方法を、細胞が約80％表面全面になる48〜72時間毎に
繰り返した。このように、細胞を指数関数的に増える条
件下に維持し、即ち、30〜80％表面全面に成長するよう
にした。このような条件下で、IMR−90細胞を約PDL45−
47（グラフの第１の棒）で老化する。β−アレチンで処
理した細胞は、この点を越えて良く成長続け、最終的に
は、PDL67からPDL101.2まで投与量依存して、老化し
た。β−アレチン依存成長期間にわたり、フェイスII線
維芽細胞と同様の表現型を有すると観察された。終局の
老化の点で、これらの表現型は、処理されない基準のPD
L47と同様である。細胞の寿命の伸びは、２倍にした成
長増大そして、２倍で、55或いは3.6×10¹⁶倍に上がっ
た細胞数（バイオマス）の増加を示す絶対的意味で、示
された。これは分化現象であり、通常の老化点を越え
て、β−アレチンでの処理の前と後についての、処理さ
れた細胞を同じジェネレイション数（分割の１つの完全
な回数に必要な時間）を有すると観察されたことに基づ
いて分かる。

III.β−アレチンによる末梢リンパ様器官の分化 第２図は、試験管内のヒト外縁血液ロイコシテス（HP
BL）による非抗原特定免疫合成へのβ−アレチン効果の
テストする一連の実験からのデータを示し、一般的に、
末梢リンパ線器官として、中間サイズの成熟リンパ球に
より特徴ずけられる末梢血液リンパ球により試験管内で
評価される。これらの実験では、血液は、健康な男から
採取され、血液は、ガラスビーズで脱繊維素され、たリ
ンパ球は、遠心力で分離された（バッフィ コート技
術）。残査の赤い血液細胞は、0.85％塩化アンモニアで
短い間処理され、溶菌された。リンパ球を数え、24のウ
エル組織培養トレイ（LUX,Flow General,McClean,MD,US
A）に、ペニシリン、ストレプトマイシン、10％牛血漿
及びＬ−グルタミンで補給されたRPMI基底媒体1mlに分
散させた。β−アレチンをテスト培養物中に種々の濃度
で30マイクロリットル投与量で分散させた。細胞を、第
２図に示すように72〜144時間の種々の培養時間で収穫
し、通常のプロテイン−Ａ容易化プラクアッセイ（Ａ−
PFC或いはIg−PFC）を用いて、抗体生産性をテストし
た。このアッセイで、プロテイン−Ａは、洗浄羊赤血液
細胞（SRB's）と、生理的食塩水中の塩化クロム（6gm/1
00ml）を用いて、共有接合された。そして、プラクアッ
セイ中でターゲットとして用いた。更に、この細胞少量
をとって、沈降チミジン（６〜9Ci/モル）で処理して、
新しく合成したDNA中にラジオアクテイビテイを入れる
ことにより、テストした。第２図は、β−アレチンが、
HPBLを刺激し、約60回投与量依存で免疫グロブリンを生
産し、処理しないコントロールレベルと比較する。最適
の濃度は、約５ナノグラム/ml培養物であった。増殖率
は、増加したチミジン含有量5ng/mlの投与量で低いレベ
ルであった。これを２〜３倍に増加すると、LPS（リポ
ポリサッカライド）或いはPHA（フィトヘマググルチニ
ン；植物性血球凝集素）のような本当の増殖刺激と比較
して、少しの顕著性を有し、同様な条件下で、ラジオア
クテイビテイ約200、000cpm、コントロール・レベルの
約100−200−倍になっている。実験で観察された増殖の
レベルは、β−アレチンで刺激された独立の増殖過程よ
りも、分化−依存性の増殖によった、即ち、活性細胞に
あるデオキシリボ核酸に対する細胞の生存と保持力の両
方での増加によっていると結論された。

IV.β−アレチンによる中心リンパ用器官の分化 第３図は、非特定の免疫グロブリンのネズミの脾臓
（スプレノシト）生成物へのβ−アレチン効果を研究す
る一連の実験からのデータを示す。アッセイと培養物の
技術は、上記の（実施例III）のHPBLに対するものと同
じである。実験動物は、４〜６週間の歳の雌BALBc/Jマ
ウスであり、頚部が変位することにより、犠牲にされ
た。その脾臓は、無菌力に除去され、90メッシュのステ
ンレス鋼スクリーンを通して押し付けて得た。完全な媒
体で数回洗浄された後、細胞を数えた、そして、24のウ
エルトレイに分散され、テスト培養物は、β−アレチン
を投与された。これらの培養物は、72〜144時間の種々
の培養時間で収穫され、第３図に示すように、抗体生産
と増殖についてテストされた。第３図は、β−アレチン
はネズミ脾臓細胞を顕著に刺激し、投与量依存で免疫グ
ロブリンを生産し、約10ng/mlの投与量で最適に提示さ
れていることを示している。この場合、実施例IIIで説
明したチミジン アッセイに基づいて、増殖を顕著に刺
激するものではない。

V.β−アレチンによる培養に対する培養耐性細胞（肝細
胞）の順応化 第４図は、生体内から試験管内へ取られた細胞を順応
化する能力へのβ−アレチン効果を研究する一連の実験
からのデータを示す。用いた培養−耐性細胞（ヘパトシ
テス）は、生体内から試験管内成長で採取された。ネズ
ミのヘパトシテス（肝細胞）は、その細胞を培養物に順
化するのが困難されるが、選択細胞の分化の比較程度に
関連していると示唆された；即ち、細胞の分化がより高
いと、その培養がより困難である。従って、細胞タイプ
のヘパトシテス混合の数は、この実験のために、これら
細胞の分化が高いなるように選択された。この実験にお
いて、BALc/Jマウスの１つからの単一肝葉を、実験し、
90メッシュステンレス鋼スクリーンを通して押し付け
て、Ｔ−25組織培養物フラスコ（10、LUX,Flow Genera
l,McClean,MD,米国）中に入れた。全ての培養物を10ml
の実施例III（RPMI−1640＋胎児牛血清＋ペン／連鎖球
菌＋Ｌ−グルタミン）と同じ媒体中に維持し、テスト培
養物を、種々のβ−アレチン濃度に、第４図に示すよう
に、接触せしめた。第４図は、ヘパトシテスのコロニー
が、コントロール培養物中にはないが、約50のコロニー
が10ng/mlのβ−アレチンと処理された培養物中で観察
したことを示す。コントロール培養物からいくらかの活
性コロニーを得ることは可能であるが、10−から20−倍
のより高い初期細胞濃度を用いたときのである。従っ
て、β−アレチンが500〜1000倍、ネズミのヘパトシテ
スを、試験管内培養物に順化することに、コントロー
ル、即ち、生理的食塩水処理の媒体よりも、効率が高
い。更に、長期間培養で不安定なコントロール培養物に
比べて、β−アレチン処理培養物は、培養中安定してお
る。効果は、前記のように、投与量−依存性である。

VI.β−アレチンによる腫瘍の処理 本発明は、更に、腫瘍をβ−アレチンで処置する方法
を提供する。特に、本発明は、腫瘍を低減し、腫瘍成長
を抑制し、腫瘍の脈管内成長（イントラバスキュラリゼ
イション）、例えば、腫瘍の転移を抑制するような、多
種の新形成を処置する方法を提供する。β−アレチン
は、細胞に分化を誘導し、そして、細胞成長、表現型発
現（ビオ生産及び機能を含む）、生活力及び寿命（上
記）をモジュレイトする化合物である。出願中の米国特
許出願第07/549,104号、細胞分化及び悪性化の逆転を示
唆している。例えば、“Growth,Differentiation,and t
he Reversal of Malignancy"Scinetific American第40
〜47頁,1月,1986及びここで引用した文献を参照。

本発明は、更に、β−アレチンを非細胞系統依存の抗
腫瘍化合物とすること、及び、β−アレチンを種々の腫
瘍性細胞の機能を定常化するように使用することに関し
ている。従って、本発明は、更に、特に、癌の処置にた
めの腫瘍性細胞を認識し、正常化し、消失せしめる方法
を提供する。

本発明によると、β−アレチンは、細胞系統特定でな
く、表現型特定に関係なく、細胞の共通の遺伝子分化機
構の組を調節するようである。この前提に一致するよう
に、本発明による抗腫瘍剤としてβ−アレチンを使用す
ることは、細胞系統、表現型或いは細胞サイクルのイン
ターベンションに関して、下記のものを除いて投与量依
存でない。生体内適用では、β−アレチン約10pg/kg体
重からが推薦される。特に、約10pg/kgから約200μg/k
g、また、更に、約100μg/kgまでが好適である。それ
は、非経口的に、（例えば、i.p.）、或いは、生理的食
塩水ような通常の担体を用いて、非経口ルートで、経肛
門で投与でき、また、適当な腸コーテイングで経口的に
投与することができる。この化合物は、好適には、毎
日、隔日で、下記に説明するように、投与され、所望の
結果が得られるまで、行なう。また、他のレジメ、毎
週、又は隔週でのレジメが、特に、結果が明らかな時
は、充分である。正常化が進むに従って、或いは腫瘍が
低減するに従って、投与量を低減することは、好適であ
り、そして、過剰の生理学的なストレスを生物に与える
ことによる急速過ぎる腫瘍の後退を避けることは好適で
ある。分化、細胞機能の正常化、腫瘍の低減或いはここ
に示す他の結果を得るに必要な量より過剰な量でのβ−
アレチンを用いることは、推奨されない。即ち、過剰な
投与量は、逆な生産性を与え、或いは少なくとも、不効
果的である。試験管内の適用では、腫瘍性細胞の正常化
のために、約10pg/ml培養物から始まる投与量が、毎日
或いは隔日の補給で示唆される。

β−アレチンは、一般的に生きている生物の細胞の腫
瘍の処置のために有用であり、それは、哺乳動物、特に
ヒト、レプチリアン、アビアン及び植物細胞を含み、実
験でここに報告された、或いは報告されない実験で、相
当する投与量で得られた結果の共通性による。本発明に
よると、β−アレチンは、細胞機能を正常化する（即
ち、不充分な機能を増大し、過剰機能を低減する）抗−
腫瘍の化合物である。β−アレチンは、特に、（１）腫
瘍成長、特に、悪性腫瘍の成長を抑制すること、（２）
腫瘍、特に、悪性腫瘍を後退せしめること、（３）腫瘍
転移を抑制すること、（４）腫瘍性細胞の成長特性を正
常化すること、或いは／或いは（５）腫瘍性細胞の認識
及び／或いは消失を改良することの機能を有する。

癌適用においては、腫瘍性細胞或いは免疫細胞或いは
その両方は、β−アレチンに接触せしめ、細胞の分化を
促進し、細胞サイクルを正常化せしめる。腫瘍細胞の処
置は、感染されたヒトを含む哺乳動物から免疫細胞を除
去することにより、効果的に免疫細胞から分離した。次
に、免疫細胞は、培養物中でβ−アレチンで処理し、或
いは、β−アレチンと感染哺乳動物から導入した腫瘍免
疫の組合せと共に処置する。これは、免疫細胞が達成さ
れるか或いは腫瘍細胞が完全に、健康のために、減衰さ
れるかいずれかになるまで行なう。活性化免疫細胞は好
適には転移腫瘍細胞を欠けている、従って、特に、ヒト
を含む哺乳動物中のソフトな（ヘマトリンフオイド）腫
瘍種を低減し、腫瘍細胞の脈管内伝送を抑制し、特に、
不安定腫瘍の細胞を抑制するために生体内で有用であ
る。この化合物は、従って、腫瘍成長を抑制することに
より、また、腫瘍転移を抑制することにより、また、そ
の両方により、腫瘍低減で有用である。特に、β−アレ
チンは、多くのソフトでリンパ線の悪性腫瘍、例えば、
リンパ線腫瘍、白血病、ヘパト細胞腫瘍；肝腫瘍及びホ
ドキンス病；特に、黒腫のような腫瘍を処理することに
有用である。β−アレチンは、なかんずく、腫瘍の処置
に有用であり、（１）予防的に、（２）腫瘍成長、特
に、遅い成長の腫瘍を抑制する一義的な治療；及び
（３）腫瘍を除去し、特にビールス製或いは一義的腫瘍
を除去するための外科的なインターベンションに続く補
給的治療法として、有用である。β−アレチンによる処
置は、腫瘍を後退し、腫瘍マスを低減し、腫瘍成長を抑
制し、腫瘍転移を抑制し及び腫瘍腹水生産を抑制すると
見出された。

抗腫瘍治療は、初期の腫瘍段で開始し、特に、大きな
腫瘍の不安定性により生じる末梢生理的な複雑化を避け
るようにする。腫瘍治療のためのβ−アレチンは、上記
のような通常の方法で投与され、例えば、i.v.或いはi.
p.で、少なくとも、治療的に閾値量で、生理的食塩水の
ような適当な担体で、約1ng/kg体重から約100μg/kg
が、腫瘍の段階に依存して、特に適する。ステイジIIの
腫瘍に対しては、治療範囲の高い範囲での投与が推奨さ
れ、一方、低い範囲では、ステイジＩ或いは初期腫瘍に
対して適する。癌予防に対しては、約10pg/kg体重、好
適には、約11ng/kgから約100μg/kg体重が意図される。
癌処置のために、上記の投与量に対して、交替日で治療
レジメが適し、β−アレチン治療に反応すると考えられ
る酵素のようなバイオ薬剤を生体内に入れることも、約
48時間での化学刺激となるようである観察に基づいて好
適である。予防レジメは、毎日、行なうことができる。

少なくとも、示す投与量レベルにおいて、β−アレチ
ンは、健康なマウスにおいて、ほぼ非毒性化合物であ
り、悪の副作用は見られない。

A.NS−１骨髄腫細胞によるマウスの接種． NS−１骨髄腫細胞（ATCC TIB 18、P3/NS1/1−Ag4−
１）を接種として用いた；これらの細胞を骨髄腫をマウ
ス中に確立するに約90％効果的であり、そして、処理す
ない骨髄腫は、約２週間内にほとんど死亡する。

細胞を、37℃で、CO₂下での湿分チャンバー中で、10
％胎児牛血清（Hyclone Laboratories,Logan,UT,米
国）、2mMのＬ−グルタミン、５、000単位のペニシリン
及び5mgストレプトマイシンを、75cm²のポリスチレン組
織培養フラスコ中で含有するRPMI（ウィトカー、M.A.Bi
oproducts,ウオカーヒル，メリーランド，米国）よりな
る滅菌環境中で、数回（好適には一週間）成長せしめ
る。生体内でNS−１の成長を確実にするために、DMSO
（冷凍剤ジメチル サルフォキサイド）を、数媒体変更
と希釈により、除去することが本質的である。これは、
細胞を長期フェイズ成長に維持するのに役立つものであ
る。雌BALBc/Jマウスに、0.1mlの標準的燐酸塩緩衝液中
の10⁴細胞を、引き離し、伝送及びインデックスイング
の後、なるべく直ぐに、i.p.注射した。用いたNS−１細
胞系統は、成熟の、或いは、この環境と同等である動物
に、一般的に、最適に達成できなかったことが見出され
た。マウスは、Wayne Roden Blox（Wayne Research Ani
mal Diets,シカゴ，イリノイ州，米国）任意量と水道水
で維持された。

B.β−アレチン（初期インターベンション）による接種
マウスの処理 1.上記の（実施例Ｉ）のような得られたβ−アレチン濃
度;1ng/kg、1pg/kg、10μg/kg及び100μg/kg（接種マウ
スの体重に基づいて）を、0.1ml生理的食塩水中で、i.
p.注射した。腫瘍接種（日２）の第２日目に始められ、
毎水曜日、木曜日及び金曜日、日47を通して続けられ
た。このレジメ（処方箋）は、この化合物の反応での酵
素及び公告された結果が、化学的刺激後、48時間で誘導
されたとのことを見て、予見された。接種されたマウス
は、ａ）処理されないコントロール及びｂ）担体−注射
（生理的食塩水）コントロールと比較した。

2.結論 β−アレチンは、10pgβ−アレチン/kgマウスから100
μg/kgマウスの濃度範囲にわたり、BALBc/JマウスのNS
−１黒腫の開始を予防するに効果的である。処置なしで
は、実験の75％のマウスは、腫瘍の発展の結果として、
静死或いは死亡した。効果的閾値以下、［即ち、約10pg
/kg以下或いは約10pg/kg、或いは1ng/kg（データが示し
ていない）のβ−アレチン投与量では、1/3から2/3の動
物が究極的に腫瘍を起こした。最大投与量（即ち、約10
μg/kg以上或いは約10μg/kg或いは1ng/kg）の近い投与
量では、１つだけのマウスは触診できる腫瘍があった、
そして、20日耐えて、徐々に復帰した。

第５〜７図は、非−分泌性の骨髄腫細胞（NS−１）で
接種され、種々の投与量（正常体重ゲインに対する関連
しないマウスの体重に基づいて）で、低減する濃度（各
々、100μｇ、10μｇ及び10pg/kg）でβ−アレチンで処
理されたマウスでの早期及び遅い腫瘍発現を示す。第７
図において、中心のバイシャテック曲線は、早期及び後
期の腫瘍発現を示し、このβ−アレチンの投与量（10pg
/kg）では、２つの死亡に相当し、モデル（第10図）で
のこの化合物での治療的最小の閾値である。正常のマイ
ス体重ゲインは、100μg/kg（第５図）で少し抑制され
るが、10μg/kg（第６図）では顕著でない。10μg/kg
（第６図）では、１とのマウスが、触診腫瘍を発現し、
29日間耐えたが、最終的に復帰した。抗新形成化合物β
−アレチンの効果的投与量（約10pg/kg体重から約10μg
/kg体重）では、マウスの重量について（腫瘍程度を反
射して）、処置なしのコントロール群（ビーヘクル注射
コントロール群）と、処置された群を比較すると、大き
な差がある。

NS−１黒腫瘍の処置においてβ−アレチン効果性を、
更に、第８図に示す。それは、研究を３次元的に示すも
のである。そして、第９図においては、第８図の提示図
を時計回りで85゜回転させたものであり、フロントの薬
剤の高い投与量からバックでの薬剤投与なしまでのもの
である。腫瘍接種のコントロール（最も左側、第８図）
で、腫瘍を得て、従って、、研究日（Ｙ軸）に関して大
きい点で、重量（Ｚ軸）を示す。β−アレチンの高い投
与量のマウス（最も左側）は、ほとんど正常なもので、
慢性腫瘍の印を示さない。高さでの峰或いは増加は、低
い濃度で（Ｘ軸で右側）腫瘍発現を示し、それは、発現
腫瘍の形態のためのコードされ（Ta＝腹水症とTs＝固い
腫瘍）、そして、腹水症或いは固い腫瘍（各々Ta或いは
Ts）から得られた死亡のためである。完全な復帰は、腫
瘍が最早触診できない点でＲにより示される。コントロ
ール群のマウスの最初の重量に対して正常化され、プロ
ットされ（第５〜７図に示すように分析される）、コン
トロールマウス（生理的食塩水のみ注射される）は、正
常な成長を示し、マウス受腫瘍の成長と発現になり、10
μｇβ−アレチン/kgマウス（第６と８図）を示す。こ
れは、第10図に更に示され、腫瘍がβ−アレチンの異な
る濃度でモジュレイトされる。正常な成長曲線からの離
れは、触診される腫瘍の出現と喪失と一致する。

腫瘍は、出現し、10μg/kgのβ−アレチン治療（第６
図）の行なったマウスで、印或いは検査を示さないで、
復帰した。促進されると期待されるが、処置しないコン
トロールで出現する腫瘍は、腹水症となるが、β−アレ
チンで治療されたマウスで出現する腫瘍は、固体マスが
なく；β−アレチンは、腫瘍の凝集を促進し、離れたマ
スにし、β−アレチンは、外科的切除を含む処置レジメ
において、価値があるものでできる。

C.β−アレチンによる接種マウス（前記）の処理（後イ
ンターベンション） 実験の後期で腫瘍を出現する単一マウス（第８図での
Ｘ軸上の４で、10pgβ−アレチン/kgマウスの処置の
後、約40日で停止される）は、100μｇβ−アレチン/kg
マウスで処置され、後期の治療インターベンションの、
骨髄膜への効果を測定した（第10図）。腫瘍の多くのlo
g−相成長は、肩から尻へ、マウスの右側に沿って持続
し、そして、より高い投与量で処置を開始した後、10〜
14日間、腹で持続した。それは、腹腔外の組織中に腫瘍
が進められ、処置が効果的になる前に、相当のlog−相
となる。次に、成長が停止し、腫瘍マスとマウスの重量
の急速な低減となる。そして、短い期間、倦怠があり、
マウスの粗いコートが改良された。これは、マウス重量
の一時的な安定と一致し（約１週間）、腫瘍はこの時の
間、安定化したことを示唆している。これは、次いで、
マウス重量の他の沈降落下となり、腫瘍マスの低減が明
らかである。触診マスが腹に残っていたが、マウスは、
重量が正常になったとき、静死した。マウスが静死した
時、日当り約10％の体重に等価する腫瘍の過程からの静
脈炎が、手足に生じた。組織学的に明らかな壊死となっ
た後、元の腫瘍の85〜90％が、壊死したか、再吸収され
た。再吸収速度を考えると、治療が完全な月間に維持さ
れたならば、腫瘍の完全な喪失が生じた。

腫瘍の喪失と適するマウスでないことが、切除された
死体の重量を測定することにより、確認された。このマ
ウスでは、処置されないコントロールと異なり、腫瘍に
より器官への進出の証拠はなく、残りの腫瘍は、壊死し
（黄色帯緑色で、粒状で古いスポンジのような）たよう
に見える。組織を解剖学的に検査すると、腹壁に、皮下
の組織及び乳房腺に隣接して、骨格筋肉中に腫瘍細胞が
のこっていることを示す。肝、泌尿生殖器及び胃腸腫瘍
及び他の多種の腫瘍は、処置されないマウスで観察され
たものと一致しており、NS−１細胞系統の浸透して半安
定特性を示しているが、処置されたマウスでは、残りの
器官では腫瘍細胞を含んでいないことを示す。病理学的
骨挫傷がこのマウスで観察されるが、この骨の骨髄中で
は、腫瘍細胞は見られない。腫瘍が急速に成長するため
に脱変成された骨は、カルシウムと燐酸を要する過程
で、そして、次の燐酸カルシウムの急速な外骨格析出
は、腫瘍が再吸収されるにつれ、破損となることが試験
的に決められた。

この研究及び他の研究に基づいて、集合的新形成（例
えば、ステイジII或いは上記の腫瘍）の存在下で、少な
くとも一義的な腫瘍をβ−アレチン治療と合わせて、外
科的に切除すべきであり、β−アレチン治療の開始前或
いは後まもなく、切除すべきであると推奨される。更
に、ある場合には、後期インターベンション治療に使用
された約100μg/kgのβ−アレチンの初期投与量は、徐
々に低減され、再吸収過程を遅くし、生物が治療に調節
されるようにすることが推奨される。約100μg/kgから
約1ng/kgへの投与量を、腫瘍が治療に反応するにつれ
て、徐々に低減（48時間レジメで変えられる）すること
が示唆される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 スカレン，テレンス，ジョセフ アメリカ合衆国，ニューメキシコ州, 87110，アルバカーキイ，エヌ イー, エル モルロ ロード，7412 (56)参考文献 特開 平３−170411（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A61K 31/16 A61P 35/00 A61P 37/00 A61P 43/00 105 C12N 5/06 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims (11)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】試験管中或いは生体中で、細胞を、ベータ
   ー−アレチン或いはその生理的に受容できる塩に、細胞
   の機能或いは細胞生産性を正常化或いは向上するよう
   に、接触させ、免疫細胞、腫瘍性細胞、繊維芽細胞、肝
   細胞、老化細胞の分化を調整するための、活性成分とし
   て、ベーター−アレチン或いはその生理的に受容できる
   塩を含有する、製薬学的な組成物。
2. 【請求項２】免疫グロブリン生産性および／或いは免疫
   細胞機能を改善する活性成分として、ベーター−アレチ
   ンを、疾病に対して、免疫性を補助するために十分な量
   を含有することを特徴とする免疫補助用の製薬学的な組
   成物。
3. 【請求項３】腫瘍荷重を減少し、腫瘍の発展を退行さ
   せ、腫瘍の成長或いは転移を抑制するように、腫瘍性細
   胞を処置するための、活性成分として、ベーター−アレ
   チン或いはその生理的に受容できる塩を含有する、製薬
   学的な組成物。
4. 【請求項４】該腫瘍は、血管リンパ管腫である請求項３
   に記載の腫瘍性細胞を処置するための、活性成分とし
   て、ベーター−アレチン或いはその生理的に受容できる
   塩を含有する、製薬学的な組成物。
5. 【請求項５】腫瘍の処置或いは予防のための活性成分と
   して、ベーター−アレチン或いはその生理的に受容でき
   る塩を、腫瘍の処置或いは予防のための十分な量、含有
   することを特徴とする腫瘍の処置或いは予防のための製
   薬学的な組成物。
6. 【請求項６】放射線、化学的治療或いは外科治療を伴う
   腫瘍治療と結合させて使用する請求項５に記載の腫瘍の
   処置或いは予防のための製薬学的な組成物。
7. 【請求項７】ベーター−アレチン或いはその生理的に受
   容できる塩を、哺乳動物の免疫機能或いは生体生産性を
   改善し、或いは正常化されるに十分な量、哺乳動物に投
   与することにより、免疫疾病を処置するための、活性成
   分として、ベーター−アレチン或いはその生理的に受容
   できる塩を含有する、製薬学的な組成物。
8. 【請求項８】該免疫疾病は、自己免疫疾病、或いは免疫
   欠乏性疾病である請求項７に記載の、免疫疾病を処置す
   るための、活性成分として、ベーター−アレチン或いは
   その生理的に受容できる塩を含有する、製薬学的な組成
   物。
9. 【請求項９】該哺乳動物から、免疫細胞を抽出し、該免
   疫細胞を試験管中で、ベーター−アレチン或いはその生
   理的に受容できる塩に、その免疫機能或いは生体生産性
   を刺激するために、接触せしめ、その後、刺激された免
   疫細胞を、感染された哺乳動物に再導入することによ
   り、免疫疾病を処置するための、請求項８に記載の製薬
   学的な組成物。
10. 【請求項１０】老化細胞を、試験管中或いは生体中にお
    いて、ベーター−アレチン或いはその生理的に受容でき
    る塩に、その老化を遅延させるに十分な量、接触せしめ
    ることにより、細胞老化を遅延するための、活性成分と
    して、ベーター−アレチン或いはその生理的に受容でき
    る塩を含有する、製薬学的な組成物。
11. 【請求項１１】試験管中或いは生体中において、耐性細
    胞を、ベーター−アレチン或いはその生理的に受容でき
    る塩に、接触せしめることにより、培養耐性細胞を順化
    するための、活性成分として、ベーター−アレチン或い
    はその生理的に受容できる塩を含有する、製薬学的な組
    成物。