CN113813315A

CN113813315A - 一种缓解视疲劳和干眼症的中药组合物、其应用和所制成的眼罩

Info

Publication number: CN113813315A
Application number: CN202110936000.2A
Authority: CN
Inventors: 徐中菊; 冯辉
Original assignee: Shanghai Guanghua Hospital Of Integrated Traditional Chinese And Western Medicine
Current assignee: Shanghai Guanghua Hospital Of Integrated Traditional Chinese And Western Medicine
Priority date: 2021-08-16
Filing date: 2021-08-16
Publication date: 2021-12-21

Abstract

本发明涉及一种缓解视疲劳和干眼症的中药组合物、其应用和所制成的眼罩，它具体是由下列重量份配比的原料药制成：白菊花5‑10份、桑叶5‑10份、密蒙花3‑9份、青葙子9‑15份、蔓荆子5‑10份、薄荷5‑10份、木贼3‑9份、夏枯草3‑9份、炒决明子9‑15份、冰片5‑10份。本发明还提供了上述中药组合物在制备缓解视疲劳和干眼症的中药眼罩中的应用。其优点表现在：药味符合“君臣佐使”配伍原则，疗效显著，原料易获得，无毒副作用，患者接受度高。

Description

一种缓解视疲劳和干眼症的中药组合物、其应用和所制成的眼罩

技术领域

本发明涉及中药组合物技术领域，具体地说，涉及一种缓解视疲劳和干眼症的中药组合物、其应用和所制成的眼罩。

背景技术

视疲劳是一种眼科常见病，它所引起的眼干、眼涩、眼酸胀，视物模糊甚至视力下降直接影响着人的工作与生活。眼疲劳主要是由于人们平时全神贯注看电视、电脑或手机等电子产品屏幕时，眼睛眨眼次数减少，造成眼泪分泌相应减少，同时闪烁荧屏强烈刺激眼睛而引起的。视疲劳还会引发和加重各种眼病。视疲劳在中医学上称为肝劳。肝劳：因劳损伤肝引起的虚损之症。《诸病源候论·虚劳病诸候》：“肝劳者，面目干黑，口苦，精神不守，恐畏不能独卧，目视不明。”《太平圣惠方·治肝劳诸方》分为虚热、虚寒两种；肝劳虚热，其证两目赤涩，烦闷宛转，热气壅滞，胸里炎炎，治宜泻肝除热，用柴胡散。肝劳虚寒，胁痛胀满，气急，昏不思饮食，宜服鳖甲散。参见虚劳、五劳条。

干眼症是指由多种因素所导致的、以眼睛干涩为主要症状的泪液分泌障碍性眼病，常伴有双眼痒感、异物感、烧灼感，或畏光、视物模糊、视力波动等表现。常见之症状包括眼睛干涩、容易疲倦、眼痒、有异物感、痛灼热感、分泌物黏稠、怕风、畏光、对外界刺激很敏感；有时眼睛太干，基本泪液不足，反而刺激反射性泪液分泌，而造成常常流泪；较严重者眼睛会红肿、充血、角质化、角膜上皮破皮而有丝状物黏附，这种损伤日久则可造成角结膜病变，并会影响视力。干眼症在中医学上称为白涩症，本病为眼部赤肿不显，而只觉眼内干涩不舒的慢性眼病，《审视瑶函·卷之三·白痛》谓：“不肿不赤，爽快不得，沙涩昏朦，名曰白涩。”药物治疗难取速效，类似于西医学之慢性结膜炎或浅层点状角膜炎。

中国专利文献CN110478122A公开了一种主治视觉疲劳的纯中药眼罩及其制备方法。它由以下重量份的原料制备而成：艾叶60-70份、茉莉花60-70份、当归60-70份、茶叶60-70份、决明子60-70份、野菊花60-70份、夏枯草60-70份、牡丹皮60-70份、茯苓60-70份、夜交藤60-70份、丹参60-70份、黄柏60-70份、川芎60-70份、千里光60-70份、辛夷40-60份、薄荷脑5-10份、冰片5-10份。中国专利文献CN111840422A公开了具有眼部保养和眼部问题改善效果的中药眼罩。它由以下重量份的原料制备而成：决明子3-7份、珍珠母3-4份、密蒙花2-5份、龙脑0.5-1.5份、艾叶4-6份、薄荷4-6份、杭白菊8-12份、檀香1-3份、桑叶1-3份、苍术1-3份、谷精草2-4份、青葙子2-4份、玳玳花8-12份和陈皮8-12份。但是关于本发明治疗视疲劳和干眼症的中药组合物目前还未见报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种缓解视疲劳和干眼症的中药组合物。

本发明的再一的目的是，提供所述中药组合物的制备方法。

本发明的另一的目的是，提供所述中药组合物的用途。

本发明的第四个目的是，提供一种缓解视疲劳和干眼症的眼罩。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

一种缓解视疲劳和干眼症的外用中药组合物，它是由下列重量份配比的原料药制成：白菊花5-10份、桑叶5-10份、密蒙花3-9份、青葙子9-15份、蔓荆子5-10份、薄荷5-10份、木贼3-9份、夏枯草3-9份、炒决明子9-15份、冰片5-10份。

作为一个优选例，所述外用中药组合物由以下重量份配比的原料药制成：白菊花7-10份、桑叶7-10份、密蒙花6-9份、青葙子12-15份、蔓荆子5-8份、薄荷7-10份、木贼4-8份、夏枯草4-8份、炒决明子12-15份、冰片7-10份。

更优选地，所述外用中药组合物由以下重量份配比的原料药制成：白菊花10份、桑叶10份、密蒙花9份、青葙子15份、蔓荆子6份、薄荷10份、木贼6份、夏枯草6份、炒决明子15份、冰片10份。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

如上任一所述的外用中药组合物的制备方法，包括以下步骤：按重量份配比称取原料药：白菊花、桑叶、密蒙花、青葙子、蔓荆子、薄荷、木贼、夏枯草、炒决明子、冰片，粉碎成细粉，混匀制成松散粉剂。

为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：

如上任一所述的外用中药组合物在制备外用治疗视疲劳或干眼症药物中的应用。

作为一个优选例，所述视疲劳为中医诊断肝劳。

更优选地，所述肝劳为肝肾不足型肝劳、气血亏虚型肝劳、肝郁气滞型肝劳或脾虚气弱型肝劳。

作为另一优选例，所述干眼症为泪液不足型干眼症、蒸发过强型干眼症、黏蛋白缺乏型干眼症、泪液动力学异常型干眼症或混合型干眼症。

为实现上述第四个目的，本发明采取的技术方案是：

一种缓解视疲劳和干眼症的眼罩，所述眼罩内容物为如上任一所述的外用中药组合物。

本发明优点在于：

1、本发明中药组合物符合“君臣佐使”配伍原则，白菊花、桑叶、密蒙花、青葙子清肝明目为君药，其中桑叶配菊花相须为用以增强疏散风热、平肝清肝明目之功，青葙子配密蒙花，青葙子苦而微寒，功能清泄肝火明目，密蒙花甘而微寒，功擅清肝养血明目，四药相伍共襄清肝、平肝、养肝、明目之功效；蔓荆子、薄荷、炒决明子疏风热、清利头目为臣药，木贼、决明子、疏风夏枯草明目为佐，冰片通窍去翳明目为使。

2、本发明中药组合物疗效显著，无毒副作用，患者接受程度高。

3、本发明中药组合物原料组分少，原料易获得，制备工艺简单，适合推广使用。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1本发明外用中药组合物的制备(一)

按重量份配比称取白菊花10份、桑叶10份、密蒙花9份、青葙子15份、蔓荆子6份、薄荷10份、木贼6份、夏枯草6份、炒决明子15份、冰片10份，研碎，混合均匀。

实施例2本发明外用中药组合物的制备(二)

按重量份配比称取白菊花5份、桑叶5份、密蒙花3份、青葙子9份、蔓荆子5份、薄荷5份、木贼3份、夏枯草4份、炒决明子12份、冰片5份，研碎，混合均匀。

实施例3本发明外用中药组合物的制备(三)

按重量份配比称取白菊花8份、桑叶8份、密蒙花6份、青葙子12份、蔓荆子8份、薄荷8份、木贼6份、夏枯草6份、炒决明子12份、冰片8份，研碎，混合均匀。

实施例4本发明外用中药组合物的制备(四)

按重量份配比称取白菊花5份、桑叶5份、密蒙花3份、青葙子9份、蔓荆子5份、薄荷5份、木贼3份、夏枯草3份、炒决明子9份、冰片5份，研碎，混合均匀。

实施例5本发明外用中药组合物的制备(五)

按重量份配比称取白菊花10份、桑叶10份、密蒙花9份、青葙子15份、蔓荆子10份、薄荷10份、木贼9份、夏枯草9份、炒决明子15份、冰片10份，研碎，混合均匀。

实施例6本发明外用中药组合物的制备(六)

按重量份配比称取白菊花6份、桑叶8份、密蒙花8份、青葙子12份、蔓荆子10份、薄荷10份、木贼9份、夏枯草9份、炒决明子15份、冰片10份，研碎，混合均匀。

实施例7本发明外用中药组合物的制备(七)

按重量份配比称取白菊花7份、桑叶7份、密蒙花7份、青葙子12份、蔓荆子7份、薄荷10份、木贼9份、夏枯草9份、炒决明子15份、冰片10份，研碎，混合均匀。

实施例8本发明外用中药组合物的制备(八)

按重量份配比称取白菊花7份、桑叶7份、密蒙花8份、青葙子12份、蔓荆子8份、薄荷8份、木贼8份、夏枯草9份、炒决明子15份、冰片10份，研碎，混合均匀。

实施例9本发明外用中药组合物的制备(九)

按重量份配比称取白菊花9份、桑叶8份、密蒙花7份、青葙子12份、蔓荆子7份、薄荷10份、木贼6份、夏枯草14份、炒决明子10份、冰片10份，研碎，混合均匀。

实施例10本发明外用中药组合物的制备(十)

按重量份配比称取白菊花10份、桑叶8份、密蒙花7份、青葙子6份、蔓荆子5份、薄荷10份、木贼8份、夏枯草13份、炒决明子10份、冰片10份，研碎，混合均匀。

实施例11本发明外用中药组合物眼罩的制备

按照实施例1-10任一所述的重量份配比称取各原料药，灌入眼罩内，得到本发明外用中药组合物眼罩。

实施例12本发明外用中药组合物眼罩治疗视疲劳的动物试验

1实验材料

1.1实验动物

3月龄中缅树鼩60只，体重100-120克，雌雄兼用。动物由中国科学院昆明动物研究所实验动物中心提供(动物合格证：云动管9713号)。饲养条件：室温23-25℃，相对湿度50％-60％；饲料为全价蒸料，由中国科学院昆明动物研究所实验动物中心提供。

1.2实验药品及试剂

1.2.1实验药品

本发明眼罩，组成：白菊花10份、桑叶10份、密蒙花9份、青葙子15份、蔓荆子6份、薄荷10份、木贼6份、夏枯草6份、炒决明子15份、冰片10份。

中药眼罩，组成：白菊花10份、蝉蜕10份、密蒙花9份、青葙子15份、蔓荆子6份、薄荷10份、木贼6份、谷精草6份、炒决明子15份、冰片10份。

杞菊地黄丸(浓缩丸)，购于北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂。

1.2.2 M受体检测用试剂

³H-QNB(³H-二苯羟乙酸奎宁酯)：NEN Life Science 1mCi/ml 37Ci/mmol；

50mM磷酸缓冲液(KH₂ PO₄/N₂PO₄)：含EDAT-Na₂ 10mM，pH7.45；

硫酸阿托品(Sigma A0257)：用蒸馏水稀释为所需浓度；

闪烁液配方：二甲苯1000ml，PPO 5g，POPOP 0.4g；

蔗糖：分析纯。

1.2.3α-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth Muscle Action，α-SMA)免疫组化染色用试剂

α-平滑肌肌动蛋白试剂盒，购于北京鼎国生物科技公司。

1.3实验仪器

1.3.1 M受体检测用仪器

Sarturius-BS124S电子天平，北京赛多利斯天平有限公司；

Sorvall LYNX 6000超高速离心机，赛默飞世尔科技(中国)有限公司；

ZT-Ⅱ型多头细胞收集器，上海华岩仪器设备有限公司；

HFJ-25内切式匀浆机，天津市恒奥科技发展有限公司；

Triathler液体闪烁及发光测定仪，东乐自然基因生命科学公司。

1.3.2病理组织切片分析用仪器

光学显微镜，奥林巴斯(北京)销售服务有限公司；

LeicaAriol病理玻片扫描与图像分析系统。

1.3.3一般材料

K49型玻璃纤维滤膜，德州华沃环境科技有限公司；

50安全变压器、20可调电阻、12指示灯泡，直径2cm活动玩具。

2实验方法

2.1动物分组

动物购回后，分笼饲养一周，观察动物的一般状态。将被毛稀疏、进食减少、行动迟缓的动物剔除。余下60只动物随机分为5组；

空白对照组、模型组、实验组1、实验组2、阳性对照组各12只。

2.2造模方法

根据前期实验研究结果，具体的造模方法如下：

空白对照组树鼩置于安放有睡盒的笼中，睡盒开放，动物可自由出入。每日两次投食饮水。昼夜光照循环，昼30Lux，夜0Lux。

模型组树鼩笼具中的睡盒每日白昼(7时-19时)关闭，树鼩只能在睡盒外活动；夜间(20时-次日6时)开放，树鼩可进入睡盒内休息。每日两次给食饮水。昼夜光照循环，昼30Lux，夜0Lux。每日白昼另予直径2cm活动玩具置于笼中，动物进行诱视，共造模6天。

2.3给药方法

造模6天后，实验组1使用本发明中药眼罩，原料：白菊花10份、桑叶10份、密蒙花9份、青葙子15份、蔓荆子6份、薄荷10份、木贼6份、夏枯草6份、炒决明子15份、冰片10份。每日使用2次，每次6小时。

实验组2使用中药眼罩，原料：白菊花10份、蝉蜕10份、密蒙花9份、青葙子15份、蔓荆子6份、薄荷10份、木贼6份、谷精草6份、炒决明子15份、冰片10份。每日使用2次，每次6小时。

模型组和空白对照组不予中药眼罩治疗。阳性对照组喂食杞菊地黄丸每日3次，每次1丸，连续6天。6天后，处死全部动物，取虹膜检测相应指标。

3观测指标及方法

3.1一般状态的观察

观察动物的行为、状态、体征。

3.2树鼩虹膜中M受体的检测方法

采用放射性配基结合分析法(radioligand binding assay，RLBA)测定虹膜中M受体的最大结合容量(RT)及平衡解离常数(K_D)。

活杀动物，迅速摘除双侧眼球，在手术显微镜下仔细分离虹膜。生理盐水冲洗后，滤纸吸干。将双侧虹膜合为一个标本，电子天平称重。在水浴条件下，用眼科剪将虹膜组织剪碎，加入适量体积的缓冲液，用内切式匀浆机8000rpm匀浆，每次匀浆6s间隔10s，共计5次。制成的匀浆用缓冲液做5倍稀释，搅匀后800g离心15min，收集上清，27000g离心20min，收集沉淀，3.5ml沉淀样品加入70％蔗糖7.5ml(w/w)，使样品的蔗糖终浓度为48％，将该样品装入离心管底部，在其上依次加入45％、41％、37％的蔗糖液(w/w)各9ml、8ml、7ml。78000g离心3h，收集37％与41％界面层，用缓冲液适当稀释后27000g离心20min，收集沉淀，适当稀释后-20℃贮存，膜蛋白浓度用Lowry法测定。

取一次性塑料试管编号后放试管架上。在水浴中依次加入缓冲液、3H-DHA、阿托品和膜制剂。混匀后，置37℃水浴箱孵育10分钟。标准孵育后立即置水浴中以终止反应。用ZT-Ⅱ型多头细胞收集器将管中内容物收集在双层滤膜上，用缓冲液共15ml冲洗3次。将第一、二层滤膜80℃孵育烘干后分别放入闪烁瓶中，加闪烁液5ml，2h后用液体闪烁记数仪测定放射性计数CMP值。

选用单位点模型，求得受体最大结合容量RT及平衡解离常数K_D。

3.3树鼩虹膜组织病理学染色及观察方法

3.3.1组织病理学染色方法

于用药6天后活杀树鼩，立即摘除双侧眼球，迅速放入10％甲醛溶液中固定，同时将该固定液注入玻璃体腔内，行组织病理学观察，将固定好的眼球逐级酒精脱水，常规石蜡包埋、切片，采用HE、Masson染色。α-SMA染色用SP法。

3.3.2组织病理学观察方法

虹膜HE、Masson和α-SMA染色平均光密度、平均黑度测定。

以病理玻片扫描与图像分析系统对三种染色的切片进行图象分析。每张切片均选取从虹膜的瞳孔游离缘起向虹膜根部连续2个视野框，双侧虹膜共4个视野框进行观察。以瞳孔括约肌为测量框，分别对HE、Masson、α-SMA染色的平均光密度、平均黑度进行测定。

HE染色所测平均光密度、平均黑度表示虹膜瞳孔括约肌染成红色的肌纤维和胶原组织含量的值。

Masson染色所测面积、平均光密度、积分光密度、平均黑度表示虹膜瞳孔括约肌染成紫红色的平滑肌组织含量的值。

α-SMA染色所测平均光密度、平均黑度表示虹膜瞳孔括约肌染成棕黄色的肌动蛋白含量的值。

4统计方法

各项指标结果均以均数±标准差

表示，实验数据计量资料采用SPSS21.0软件包进行处理，多组间比较采用单因素方差分析(One-Way-ANOVA)，多组间两两比较用q检验Student-Newman-Keuls(SNK)法和最小显著差异Least-Significant-Difference(LSD)法。

5结果

5.1一般观察

空白对照组树鼩在实验期间其行为、状态、体征未见明显变化。模型组树鼩在第1-3天期间开始对诱视物持续注视观察；4天后树鼩逐渐易激惹，烦躁不安；第6天时，树鼩仍能持续注视诱视物，但食欲下降，活动减少。用药期间，各组树鼩的食欲恢复，活动增多，烦躁情况及易激性得到改善，而模型组树鼩未见明显改善。

5.2树鼩虹膜中M受体的RT及K_D值的变化

M受体向上调节过度，K_D值降低，副交感神经持续兴奋，睫状肌和瞳孔括约肌持续收缩，导致机能亢进，引起眼痛、头痛等视疲劳症状。

空白对照组与模型组的RT值比较，差异无显著性(P>0.05)，无统计学意义；空白对照组K_D值与模型组和阳性对照组比较，差异有显著性(P<0.05)；模型组K_D值与实验组1、实验组2、阳性对照组比较，差异有显著性(P<0.05)；实验组1K_D值与模型组、实验组2、阳性对照组比较，差异有显著性(P<0.05)，见表1。

表1树鼩虹膜中M受体的RT及K_D值

组别	数量	RT(f mol/mg Pro)	K<sub>D</sub>(nM)
				空白对照组	12	341.21±218.23	5.7419±1.19
模型组	12	282.23±230.44	3.7717±0.84*^
				实验组1	12	301.24±109.32	5.6103±1.61#
实验组2	12	253.64±42.37	4.9701±0.97#^
				阳性对照组	12	237.81±39.65	4.6058±0.83*#^

注：与空白对照组比较，*P<0.05；与模型组比较，#P<0.05；与实验组1比较，^P<0.05。

5.3树鼩虹膜组织病理学变化

HE染色所测平均光密度表示瞳孔括约肌染成红色的肌纤维和胶原组织的染色强度。Masson染色所测平均光密度表示瞳孔括约肌染成紫红色的平滑肌组织的染色强度。

α-SMA染色所测平均黑度表示虹膜瞳孔括约肌中肌动蛋白阳性细胞的表达强度。瞳孔括约肌的平滑肌纤维组织越多，平均黑度越高，副交感神经兴奋程度越高。胶原纤维主要由纤维母细胞及平滑肌分泌，瞳孔括约肌中增多的平滑肌纤维也能够导致胶原组织的增多。

5.3.1 HE染色结果

细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色；细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色，胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。例如，细胞在新生时期，胞浆受伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。采用LeicaAriol病理玻片扫描与图像分析系统加以测定、比较。

空白对照组的平均光密度与模型组、实验组2和阳性对照组相比，差异有显著性(P<0.05)；模型组与实验组1、实验组2和阳性对照组相比，差异有显著性(P<0.05)；实验组1与模型组、实验组2、阳性对照组相比，差异有显著性(P<0.05)，见表2。

表2树鼩虹膜HE染色

组别	数量	平均光密度
			空白对照组	6	3687.63±327.81
模型组	6	5735.24±951.77*^
			实验组1	6	3773.52±476.37#
实验组2	6	4379.28±683.43*#^
			阳性对照组	6	4131.83±651.20*#^

5.3.2 Masson染色结果

经过Masson染色，胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色(如光绿液染色为绿色)，胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色，胞核黑蓝色。Masson染色下，可见瞳孔括约肌层为点状、被染成紫红色的环形平滑肌纤维的横断面，其中间杂有蓝色的胶原组织。实验各组镜下观察无明显差别，采用LeicaAriol病理玻片扫描与图像分析系统加以测定、比较。

模型组的平均光密度高于空白对照组，差异无显著性(P>0.05)；各组的平均黑度均高于模型组，差异无显著性(P>0.05)，见表3。

表3树鼩虹膜Mason染色

组别	数量	平均光密度	平均黑度
				空白对照组	6	1723.65±737.55	151.27±13.49
模型组	6	2371.52±741.47	139.67±21.37
				实验组1	6	1771.26±717.64	147.66±17.38
实验组2	6	1974.32±756.37	145.79±18.41
				阳性对照组	6	2183.59±597.71	141.69±15.77

5.3.3α-SMA染色结果

α-SMA染色下，可见虹膜瞳孔括约肌有棕黄色颗粒状染色，为肌动蛋白染色的阳性表达。瞳孔括约肌层肌动蛋白染色的阳性表达呈点状，分布较密集。实验各组在镜下观察无明显差别，采用病理玻片扫描与图像分析系统加以测定、比较。

空白对照组与模型组、实验组2和阳性对照组相比，差异有显著性(P<0.05)；模型组与实验组、实验组2和阳性对照组相比，差异有显著性(P<0.05)；实验组1与模型组、实验组2和阳性对照组相比，差异有显著性(P<0.05)，见表4。

表4树鼩虹膜α-SMA染色

组别	数量	平均黑度
			空白对照组	6	151.33±4.67
模型组	6	173.45±9.01*^
			实验组1	6	153.27±4.29#
实验组2	6	161.85±5.47*#^
			阳性对照组	6	163.91±7.36*#^

持续视近后出现眼胀、头痛、头晕、眼眶痛等症状称为肝劳(视疲劳)。视疲劳的主要症状眼痛、头痛等是由于支配虹膜和睫状肌的副交感神经异常兴奋，导致睫状肌和瞳孔扩约肌持续性收缩，成为视疲劳的主要病因。实验结果表明，实验组1(使用本发明中药眼罩组)能够对支配树鼩虹膜瞳孔括约肌的副交感神经的兴奋产生积极影响。模型组M受体的K_D值明显低于空白对照组，表示持续视近状态可导致树鼩虹膜瞳孔括约肌M受体的向上调节，其副交感神经处于持续兴奋状态。各组的K_D值均高于模型组，表明各组均能降低副交感神经的持续兴奋状态，其中，实验组1(使用本发明中药眼罩组)作用效果最为明显，与实验组2和阳性对照组相比，疗效显著。

HE染色所测平均光密度表示染成红色的瞳孔括约肌肌纤维和胶原组织的染色强度。模型组树鼩的瞳孔括约肌HE染色的平均光密度较空白对照组明显增高，各组平均光密度值均低于模型组。Masson染色所测平均光密度表示瞳孔括约肌染成紫红色的平滑肌组织的染色强度，表示模型组树鼩瞳孔括约肌的胶原组织相较于空白对照组增多。两组染色结果都说明视疲劳模型组的瞳孔括约肌中胶原组织的增多，胶原结构能够维持组织的正常功能，正常生理状况下，胶原组织可以固定平滑肌，防止肌纤维的过度伸展，但本实验条件下，模型组树鼩瞳孔括约肌的胶原组织增多可能是机体试图维持正常生理机能的一种表现。

α-SMA染色所测平均黑度表示虹膜瞳孔括约肌中肌动蛋白阳性细胞的表达强度，提示模型组树鼩瞳孔括约肌的平滑肌纤维组织相较于空白对照组增多。模型组树鼩的瞳孔括约肌α-SMA染色的平均黑度较正常对照组明显增高，各组的平均黑度值均低于模型组。胶原纤维主要由纤维母细胞及平滑肌分泌，说明树鼩瞳孔括约肌中其胶原组织增多是由于平滑肌纤维的增多导致。视疲劳模型组树鼩瞳孔括约肌肌纤维处于收缩状态，并且其副交感神经处于异常兴奋状态，本发明眼罩能有效缓解其瞳孔括约肌肌纤维的收缩，抑制其副交感神经的异常兴奋，改善其视疲劳的症状。

实施例13本发明外用中药组合物眼罩治疗干眼症的动物试验

1材料与方法

1.1材料

1.1.1动物

普通级新西兰兔50只，雌雄各半；体质量1.8～2.4kg；购于上海斯莱克实验动物有限责任公司。饲养管理：单养，饲养温度与湿度：18～26℃，40％～70％，采用10h:14h昼夜间断照明；饲养室条件始终保持稳定，以保证试验结果的可靠性。实验期间动物自由进食和饮水，使用全价颗粒饲料和饮用水。

1.1.2药物

障眼明片(广州白云山中一药业有限公司，批号R00035)。

1.1.3仪器与试剂

实验用溶媒或乳化剂：去离子水；

主要仪器：电子天平ME204T/02，梅特勒-托利多国际有限公司；1005024X裂隙灯显微镜，苏州工业园康捷医疗器械有限公司；

主要试剂：95％乙醇，上海阿拉丁生化科技股份有限公司；碘伏，桂林漓峰医药用品有限责任公司；盐酸赛拉嗪注射液，吉林省华牧动物保健品有限公司；戊巴比妥钠，德国默克；泪液检测滤纸条，英格尔检测技术服务(上海)有限公司；荧光素钠，源叶生物。

1.2方法

1.2.1去势兔模型制备

于手术前1天对新西兰兔进行禁食不禁水处理。术前通过先后肌注盐酸塞拉嗪注射液(每只约0.5mL)和耳缘静脉注射3％戊巴比妥钠溶液(每只约1mL)麻醉新西兰兔。雄性新西兰兔麻醉后消毒并切开双侧阴囊，分离双侧睾丸并结扎睾丸两端后切除双侧睾丸；雌性新西兰兔麻醉后剃去腹部两侧毛发，以75％乙醇和碘伏消毒皮肤，逐层切开皮肤和肌肉，分离双侧卵巢，结扎卵巢两端后切除双侧卵巢。手术后，以75％乙醇和碘伏消毒手术创面，归笼饲养。术后每只新西兰兔每天肌注青霉素钠40万单位，连续注射3d。

1.2.2分组及用法

完成检疫的50只新西兰兔进行Schirmer I试验，挑选眼部Schirmer试验值>10mm/5min的新西兰兔，随机分成空白对照组10只和模型组40只，雌雄各半。建模成功后，再随机分为4组，每组10只，雌雄各半。模型组滴加每眼2滴去离子水，每天1次；实验组1采用本发明中药眼罩，每日2次，每次6h；实验组2采用中药眼罩，每日2次，每次6h；阳性对照组采用障眼明片，其临床用法用量为口服，每片0.21g，每次4片，每天3次，新西兰兔的剂量为0.18g/kg，相当于等效剂量的1.5倍；空白对照组不作任何治疗，连续8周。

1.2.3指标检测

于给药后2、4、6、8周分别检测Schirmer I试验、泪膜破裂时间(BUT)；给药8周后，以空气栓塞法处死动物，每组按随机数字大小取6只新西兰兔(雌雄各半)剪取角膜组织，光镜下观察组织病理学改变。解剖取兔左眼泪腺，称量泪腺重量。

1.3统计学方法

应用SPSS 21.0软件进行统计分析，计量资料采用

表示，计量资料数据方差齐，或数据经转换后方差齐，则采用单因素方差分析；若数据经转换后方差仍不齐，采用秩和检验进行统计分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1实验期间动物临床观察

模型组和各给药组新西兰兔在造模手术2周后均能较好恢复，实验过程中未见新西兰兔出现感染情况。实验期间空白对照组、模型组和各给药组动物均未见异常，实验中眼睛未发生肉眼可见病变。

2.2药物对各组动物泪液分泌量的影响

与空白对照组比较，模型组在去势造模4周后可见泪液分泌降低并随着去势时间延长，泪液分泌量逐渐减少，6～8周模型组泪液分泌量低于空白对照组，差异有显著性(P<0.05)，具有统计学意义。与模型组比较，实验组1、实验组2和阳性对照组(障眼明片组)泪液分泌量高于模型组，6～8周时，差异有显著性(P<0.05)。与实验组1比较，6～8周时，实验组2和阳性对照组泪液分泌量显著低于实验组1(P<0.05)，见表5。

表5各组泪液分泌量(

mm)

组别

数量

造模前

2周

4周

6周

8周

空白对照组

10

20.1±2.3

20.5±3.3

21.8±4.1

23.3±3.7

22.4±3.8

模型组

10

20.0±3.1

20.7±3.2

19.1±3.7^

16.9±4.6^

13.8±2.3^

实验组1

10

20.3±2.7

21.2±4.0

23.0±3.6*

24.1±4.7*

21.9±3.8*

实验组2

10

20.2±2.8

20.4±2.9

20.8±3.3

20.5±2.8*^

17.7±3.7*^

阳性对照组

10

20.1±3.0

20.3±3.2

20.9±2.6

20.7±4.1*^

18.1±4.3*^

注：与模型组比较，*P<0.05；与实验组1比较，^P<0.05。

2.2药物对各组动物泪膜破裂时间(BUT)的影响

与空白对照组比较，模型组在去势造模8周后BUT低于空白对照组，差异有显著性(P<0.05)；8周后模型组BUT与造模前比较，差异有显著性(P<0.05)，具有统计学意义。阳性对照组(障眼明片组)在模型建立后8周时BUT较模型组延长，差异具有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较，8周时实验组1、实验组2与阳性对照组BUT显著高于模型组(P<0.05)。与实验组1比较，8周时实验组2和阳性对照组BUT显著低于实验组1(P<0.05)。其余各组间BUT变化差异无统计学意义，见表6。

表6各组泪膜破裂时间(

s)

注：与模型组比较，*P<0.05；与实验组1比较，^P<0.05。

2.3造模8周后各组动物左侧泪腺重量比较

模型组在去势8周后泪腺重量显著低于空白对照组(P<0.05)；实验组1泪腺重量显著高于模型组、实验组2和阳性对照组(P<0.05)。其余各组间无显著差异(P>0.05)，见表7。

表7造模8周后各组泪腺重量(

g)

注：与模型组比较，*P<0.05；与实验组1比较，^P<0.05。

2.4病理检查

造模8周后，解剖摘取泪腺和角膜经HE染色后，光镜下检查各组新西兰兔泪腺和角膜均未见异常和病变。

干眼症的病因极为复杂，与炎症反应、细胞凋亡和性激素水平改变等各类因素相关。性激素能够靶向作用于眼部，通过调节机体及局部的免疫功能，调控泪腺及眼睑板的形态、发育、分化以及分泌功能。雄激素能够影响泪腺的形态、生理和免疫等方面，对睑板腺的脂质分泌意义重大，泪膜的脂质层能够防止泪液与空气接触，蒸发过强而导致干眼。通过摘除新西兰兔性腺，人为地降低新西兰兔体内性激素水平，从而制备干眼症模型。

以上结果表明本发明眼罩能有效增加去势所致干眼新西兰兔基础泪液分泌量，延长泪膜破裂时间，对干眼症具有缓解作用。在本试验条件下，本发明眼罩与实验组2和阳性对照组相比，效果最为突出，各项数据都更加接近健康新西兰兔。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种缓解视疲劳和干眼症的外用中药组合物，其特征在于，它是由下列重量份配比的原料药制成：白菊花5-10份、桑叶5-10份、密蒙花3-9份、青葙子9-15份、蔓荆子5-10份、薄荷5-10份、木贼3-9份、夏枯草3-9份、炒决明子9-15份、冰片5-10份。

2.根据权利要求1所述的外用中药组合物，其特征在于，它是由下列重量份配比的原料药制成：白菊花7-10份、桑叶7-10份、密蒙花6-9份、青葙子12-15份、蔓荆子5-8份、薄荷7-10份、木贼4-8份、夏枯草4-8份、炒决明子12-15份、冰片7-10份。

3.根据权利要求2所述的外用中药组合物，其特征在于，它是由下列重量份配比的原料药制成：白菊花10份、桑叶10份、密蒙花9份、青葙子15份、蔓荆子6份、薄荷10份、木贼6份、夏枯草6份、炒决明子15份、冰片10份。

4.一种缓解视疲劳和干眼症的眼罩，其特征在于，所述眼罩的内容物为权利要求1-3任一所述的外用中药组合物。

5.权利要求1-3任一所述的外用中药组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：按重量份配比称取原料药白菊花、桑叶、密蒙花、青葙子、蔓荆子、薄荷、木贼、夏枯草、炒决明子、冰片，粉碎成细粉，混匀制成松散粉剂。

6.权利要求1-3任一所述的外用中药组合物在制备缓解视疲劳或干眼症的药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的视疲劳为中医诊断肝劳。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的肝劳为肝肾不足型肝劳、气血亏虚型肝劳、肝郁气滞型肝劳或脾虚气弱型肝劳。

9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的干眼症为泪液不足型干眼症、蒸发过强型干眼症、黏蛋白缺乏型干眼症、泪液动力学异常型干眼症或混合型干眼症。