CN109663100B - 一种治疗视神经炎的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及中药技术领域，公开了一种治疗视神经炎的中药组合物及其制备方法和应用，所述治疗视神经炎的中药组合物，按重量份计，其组成为：柴胡6～24份、黄芪9～36份、当归4～18份、赤芍4～18份、郁金3～9份、地龙3～9份。本发明的中药组合物配方合理，各组分配伍相宜，具有疏肝解郁、益气活血功效，对视神经炎尤其是肝郁气滞证视神经炎具有显著可靠的疗效，疗程短、见效快、安全无毒副作用，可以达到标本兼治的目的，治疗后不易复发；同时，本发明的各药物组分均采用天然的中草药，来源广、成本低，制备方法简单，易于推广应用。

Description

一种治疗视神经炎的中药组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及中药技术领域，更具体的，涉及一种治疗视神经炎的中药组合物及其制备方法和应用。
背景技术
视神经炎，是指视神经的炎症反应性病变而引起的一系列症状和体征，如视力下降、视野异常、视盘水肿等等。祖国传统医学认为视神经炎的病机转归与肝有相关性，肝窍为目，肝主疏泄，肝气通达则气血流畅上输于目则目明：肝主疏泄失职，气血不畅不能上输于目则目不明；肝受血能视，目系受肝阴肝血滋养目能视。视神经炎属于中医“目系暴盲”的范畴，《中医病证诊断与疗效标准》将本病分为肝经实热、肝郁气滞、阴虚火旺、气血两虚 4型。临床病症中目系暴盲以肝郁气滞型为多，患者常因悲伤过度或忿怒暴悖，导致肝失条达，气机郁滞，上壅目系，神光受遏。
视神经炎是青壮年的多发病，临床疑难病之一，虽不是极重病种，但是若治疗不及时致盲对青壮年患者的身心健康及日常生活工作都会造成严重的影响。目前对视神经炎的治疗主要以西医手段为主，主要包括激素药物治疗及免疫抑制剂治疗，但治疗后的复发率和低效率以及长期应用激素药和免疫抑制药的毒副作用，往往使患者苦不堪言，很难坚持治疗，因此，近些年来应用现代中医药学手段对视神经炎的治疗渐渐成为眼科热点研究方向之一。
综上所述，研发一种治疗视神经炎的中药组合物实为必要。
发明内容
为克服上述现有技术所述的至少一种缺陷（不足），本发明提供一种治疗视神经炎的中药组合物及其制备方法和应用，本发明的中药组合物配方合理，各组分配伍相宜，具有疏肝解郁、益气活血功效，对视神经炎尤其是肝郁气滞证视神经炎有显著可靠的疗效。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种治疗视神经炎的中药组合物，其特征在于，按重量份计，其组成为：柴胡6～24份、黄芪9～36份、当归4～18份、赤芍4～18份、郁金3～9份、地龙3～9份。
作为一种优选方案，所述的治疗视神经炎的中药组合物，其特征在于，按重量份计，其组成为：柴胡24份、黄芪36份、当归18份、赤芍4份、郁金3份、地龙9份。
作为一种优选方案，所述的治疗视神经炎的中药组合物，其特征在于，按重量份计，其组成为：柴胡6份、黄芪9份、当归4份、赤芍18份、郁金9份、地龙6份。
作为一种优选方案，所述的治疗视神经炎的中药组合物，其特征在于，按重量份计，其组成为：柴胡12份、黄芪18份、当归9份、赤芍9份、郁金6份、地龙3份。
本发明还公开了一种治疗视神经炎的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：
①.按配方称取相应重量份的柴胡、当归、郁金，加10～12倍量水，用水蒸气蒸馏法提取挥发油4～5h，将收集的挥发油用相当于挥发油4～6倍量的β-环糊精包合，再低温干燥、粉碎，得到的β-环糊精包合物备用，将提取挥发油后的药渣和药液进行过滤分离，备用；
②.在步骤①中分离得到的药渣中加入配方量的黄芪、赤芍、地龙三味药材，加水煎煮2次，第一次加水煎煮1～2h，加水量为所煎煮药材总量的6～8倍，煎煮后滤出煎煮液，第二次加水煎煮0.5～2h，加水量为所煎煮药材总量的4～6倍，煎煮后滤出煎煮液，合并两次煎煮得到的煎煮液，与步骤①中分离得到的药液合并，进行过滤后，将滤液在50～60℃条件下进行浓缩，浓缩后的滤液相对密度为1.10～1.30；
③.将步骤②中浓缩后的滤液进行喷雾干燥，所得的喷干粉与步骤①中得到的β～环糊精包合物混合，即得治疗视神经炎的中药组合物。
本发明的中药组合物可以结合药学上可接受的辅料，制成多种剂型，例如可以为胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、口服液等，优选为颗粒剂，所述颗粒剂的制备方法为：将本发明制得的治疗视神经炎的中药组合物与可压性淀粉、甜菊苷按1:1:0.001的重量比混合均匀，干压制粒，即得治疗视神经炎的中药组合物的颗粒剂。
本发明的另一目的在于，还公开了所述中药组合物在治疗视神经炎尤其是在治疗肝郁气滞证视神经炎中的应用。
本发明所用中药的药性如下：
柴胡：性味：辛、苦，微寒；归肝、胆、肺经；功能与主治：疏肝解郁，活血止痛，疏散退热，升举阳气，用于肝郁气滞，肝郁血虚，感冒发热，寒热往来，胸胁胀痛等。
黄芪：性味：甘，微温；归肺、脾、肝、肾经；功能与主治：生精养血，行滞通痹，补气升阳，固表止汗，利水消肿，托毒排脓，敛疮生肌，用于气虚乏力，中气下陷，表虚自汗，气虚水肿，内热消渴，血虚萎黄，半身不遂，痹痛麻木，痈疽难溃，久溃不敛等。
当归：性味：甘、辛、温，归肝、心、脾经；功能与主治：补血活血，调经止痛，润肠通便，用于血虚萎黄，眩晕心悸，虚寒腹痛，风湿痹痛，跌扑损伤等。
赤芍：性味：苦、微寒；归肝经；功能与主治：清热凉血，散瘀止痛，用于肝郁胁痛，热入营血，温毒发斑，吐血衄血，目赤肿痛，症瘕腹痛，跌扑损伤等。
郁金：性味：辛、苦、寒；归肝、心、肺经；功能与主治：活血止痛，行气解郁，清心凉血，利胆退黄，用于胸胁刺痛，胸痹心痛，热病神昏，癫痫发狂，血热吐衄，黄疸赤尿等。
地龙：性味：咸、寒；归肝、脾、膀胱经；功能与主治：清热定惊，通络，平喘，利尿，用于高热神昏，关节痹痛，肢体麻木，半身不遂，肺热喘咳等。
在本发明的治疗视神经炎的中药组合物的配方中，柴胡长于疏达肝、胃、胆、三焦之气机，主治肝郁气滞证，疏肝解郁，行气止痛,使气机调畅，为君药；黄芪大补脾胃之元气，使气旺血行，瘀去络通；赤芍活血化瘀，当归补血活血，化瘀而不伤血，共为臣药；郁金行气解郁，凉血破瘀，调理气机；地龙通经活络，为佐药。
与现有技术相比，本发明技术方案的有益效果是：
本发明的中药组合物配方合理，各组分配伍相宜，具有疏肝解郁、益气活血功效，对视神经炎尤其是肝郁气滞证视神经炎有显著可靠的疗效，疗程短、见效快、安全无毒副作用，可以达到标本兼治的目的，治疗后不易复发；同时，本发明的各药物组分均采用天然的中草药，来源广、成本低，制备方法简单，易于推广应用。
具体实施例
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明，以下实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受下述实施例的限制，因此本发明要求保护的范围并不局限于所述。
实施例1：
一种治疗视神经炎的中药组合物，按重量份计，其组成为：柴胡24份、黄芪36份、当归18份、赤芍4份、郁金3份、地龙9份。
所述治疗视神经炎的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：
①.按配方称取相应重量份的柴胡、当归、郁金，加11倍量水，用水蒸气蒸馏法提取挥发油5h，将收集的挥发油用相当于挥发油6倍量的β-环糊精包合，再低温干燥、粉碎，得到的β-环糊精包合物备用，将提取挥发油后的药渣和药液进行过滤分离，备用；
②.在步骤①中分离得到的药渣中加入配方量的黄芪、赤芍、地龙三味药材，加水煎煮2次，第一次加水煎煮2h，加水量为所煎煮药材总量的7倍，煎煮后滤出煎煮液，第二次加水煎煮2h，加水量为所煎煮药材总量的5倍，煎煮后滤出煎煮液，合并两次煎煮得到的煎煮液，与步骤①中分离得到的药液合并，进行过滤后，将滤液在50～60℃条件下进行浓缩，浓缩后的滤液相对密度为1.10～1.15；
③.将步骤②中浓缩后的滤液进行喷雾干燥，所得的喷干粉与步骤①中得到的β～环糊精包合物混合，即得治疗视神经炎的中药组合物。
将制得的治疗视神经炎的中药组合物与可压性淀粉、甜菊苷按1:1:0.001的重量比混合均匀，干压制粒，可制得本发明的治疗视神经炎的中药组合物的颗粒剂。
实施例2：
一种治疗视神经炎的中药组合物，按重量份计，其组成为：柴胡6份、黄芪9份、当归4份、赤芍18份、郁金9份、地龙6份。
所述治疗视神经炎的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：
①.按配方称取相应重量份的柴胡、当归、郁金，加10倍量水，用水蒸气蒸馏法提取挥发油4h，将收集的挥发油用相当于挥发油6倍量的β-环糊精包合，再低温干燥、粉碎，得到的β-环糊精包合物备用，将提取挥发油后的药渣和药液进行过滤分离，备用；
②.在步骤①中分离得到的药渣中加入配方量的黄芪、赤芍、地龙三味药材，加水煎煮2次，第一次加水煎煮1h，加水量为所煎煮药材总量的6倍，煎煮后滤出煎煮液，第二次加水煎煮0.5h，加水量为所煎煮药材总量的4倍，煎煮后滤出煎煮液，合并两次煎煮得到的煎煮液，与步骤①中分离得到的药液合并，进行过滤后，将滤液在50～60℃条件下进行浓缩，浓缩后的滤液相对密度为1.25～1.30；
③.将步骤②中浓缩后的滤液进行喷雾干燥，所得的喷干粉与步骤①中得到的β～环糊精包合物混合，即得治疗视神经炎的中药组合物。
将制得的治疗视神经炎的中药组合物与可压性淀粉、甜菊苷按1:1:0.001的重量比混合均匀，干压制粒，可制得本发明的治疗视神经炎的中药组合物的颗粒剂。
实施例3：
一种治疗视神经炎的中药组合物，按重量份计，其组成为：柴胡12份、黄芪18份、当归9份、赤芍9份、郁金6份、地龙3份。
所述治疗视神经炎的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：
①.按配方称取相应重量份的柴胡、当归、郁金，加12倍量水，用水蒸气蒸馏法提取挥发油5h，将收集的挥发油用相当于挥发油4倍量的β-环糊精包合，再低温干燥、粉碎，得到的β-环糊精包合物备用，将提取挥发油后的药渣和药液进行过滤分离，备用；
②.在步骤①中分离得到的药渣中加入配方量的黄芪、赤芍、地龙三味药材，加水煎煮2次，第一次加水煎煮1.5h，加水量为所煎煮药材总量的8倍，煎煮后滤出煎煮液，第二次加水煎煮1h，加水量为所煎煮药材总量的6倍，煎煮后滤出煎煮液，合并两次煎煮得到的煎煮液，与步骤①中分离得到的药液合并，进行过滤后，将滤液在50～60℃条件下进行浓缩，浓缩后的滤液相对密度为1.15～1.20；
③.将步骤②中浓缩后的滤液进行喷雾干燥，所得的喷干粉与步骤①中得到的β～环糊精包合物混合，即得治疗视神经炎的中药组合物。
将制得的治疗视神经炎的中药组合物与可压性淀粉、甜菊苷按1:1:0.001的重量比混合均匀，干压制粒，可制得治疗视神经炎的中药组合物的颗粒剂。
实验例1
通过药效试验验证本发明的中药组合物对视神经炎的治疗作用，实验方法及结果如下：
1.实验材料
1.1实验动物
动物采用SPF级SD大鼠，生产许可证号SCXKC（苏）20170001，体重180g～220g。常规饲养一周后，随机分为空白对照组10只、视神经炎组15只、本发明治疗组15只、甲钴胺对照组15只。空白对照组大鼠10只一笼，正常饲养，其他3组大鼠均单笼孤养，分别编号、称重，采用动物房饲养，基本条件及光暗周期、背景噪音、温度均相同。
1.2实验药物
①本发明的治疗视神经炎的中药组合物颗粒剂；
②甲钴胺片：卫材（中国）药业有限公司，130325A。
1.3主要实验仪器与试剂
EDTA抗凝管（武汉博士德）；
电子分析天平（德国 Sartorius）；
光学显微镜（日本 OlympusBX50）；
低速离心机（Sigma 2k15）；
石蜡包埋机（德国Leica公司，EXCELSIOR ES）；
全封闭组织脱水机（SAKURA Tissue-tek，VIP5）；
恒温烤箱（Boxun ANY90）；
漩涡混合器（上海仪器厂，XW-80A）；
切片机（德国Leica公司，RM2245）；
石蜡包埋机（德国Leica公司，EXCELSIOR ES）；
Rat促肾上腺皮质激素（ACTH）ELISA检测试剂盒（博士德，批号：CK-E30596R）；
百白破疫苗（国药中生武汉公司，批号：20141049-2）；
水合氯醛（武汉博士德，批号：0120336）；
完全弗氏佐剂（Sigma公司，批号：SLBJ2846V）；
大鼠NMDAR1抗体（博士德，批号：10Z06B）；
4%多聚甲醛固定液（博士德，批号：08H19B69）；
DAB显色试剂盒（博士德，批号：20147892）；
SABC超敏试剂盒（博士德，批号：20141209-12）；
0.01mol/L磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline, PBS）（由山西医科大学免疫组化室提供）；
0.9% 生理盐水（武汉博士德）。
2.实验过程
2.1抗原制备
将健康普通级豚鼠用5%水合氯醛10ml腹腔注射处死后，暴露脊髓，在延髓下段离断脊髓，剥离，称重，加入无菌冰生理盐水（1g脊髓中加入1ml盐水），在冰浴中研成豚鼠脊髓匀浆（GPSCH）,研磨至无粘性，加入等体积完全弗氏佐剂（CFA），制成油包水样乳剂，放置于4℃冰箱保存备用。
2.2模型制备
除空白对照组外，其余3组大鼠用5%水合氯醛（1ml/100g）腹腔麻醉后，四足足垫内各注射上述步骤2.1中制备的免疫抗原0.1ml，同时后肢皮下注射百日咳疫苗0.1ml（含百日咳杆菌1×1010个），制备视神经炎大鼠模型。
2.3给药治疗
造模的同时，对空白对照组、视神经炎组大鼠给予蒸馏水灌胃，本发明治疗组大鼠给予本发明中药组合物颗粒剂水溶液（相当于原药材2.2g/mL）灌胃，甲钴胺对照组大鼠给予甲钴胺水溶液（浓度5mg/L）灌胃，两组大鼠给药体积均为2ml/100g，每天1次，连续14天。
2.4大鼠视皮质NR1和外侧膝状体NR1检测
于造模第15天，将大鼠固定于鼠板上，用水合氯醛腹腔麻醉，打开胸腔，进行心脏灌注固定，将插管针头从左心室插入主动脉，剪开右心耳形成出口，先用生理盐水迅速灌注冲洗血液，待血液变为淡粉色，再以输液器快速注入4%多聚甲醛液，至大鼠身体僵直，尾巴翘起即可，迅速剥离鼠脑，放置冰台，根据大鼠脑立体定位图谱，切取双侧视皮质、外侧膝状体，将标本修块为1*1*1mm3大小，随即放入4℃、4%多聚甲醛固定液中保存标记；
利用石蜡包埋机将组织块平整放入机器内，按程序制作组织石蜡包块，利用切片机切将石蜡组织包块按要的组织切面切5μm薄片，放入摊片机上，用免疫组化防脱片将组织放于玻片上，并标记，用中性树胶封片晾干；
在光学显微镜下观察，NR1表达的阳性细胞胞浆着色呈棕黄色，阳性细胞胞体呈不规则多角形、锥体形、梭形，有1个或多个突起；每张切片在高倍镜(40×)下选取随机的3个视野并照相，图像选用Image-Pro Plus5.1专业图像分析系统处理，测量每个视野中免疫组化染色阳性细胞的积分光密度（IOD），取3张图片阳性细胞面积、IOD值平均值作为此张切片代表值，2张切片平均值作为此标本的最终代表值。
3.实验结果
实验数据用
Figure DEST_PATH_IMAGE002
±S表示，利用SPSS 21.0统计软件包进行统计学处理，数据采用单因素方差分析，对数据进行正态检验后，对各独立样本的均数进行t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
表1 NR1蛋白表达积分光密度（IOD）比较
组别 n 视皮质NR1 外侧膝状体NR1
空白对照组 10 0.050±0.00 0.050±0.00
视神经炎组 14 0.88±0.11<sup>**</sup> 0.14±0.045<sup>**</sup>
甲钴胺对照组 13 0.61±0.041<sup>#</sup> 0.057±0.012<sup>##</sup>
本发明治疗组 14 0.62±0.053<sup>#</sup> 0.059±0.014<sup>##</sup>
注：**表示与空白对照组相比P﹤0.01；#表示与视神经炎组相比P﹤0.05，##表示P﹤0.01。
从表1可以看出，与空白对照组相比，视神经炎组大鼠视皮质、外侧膝状体NR1表达面积明显增大，有统计学意义（P＜0.01）；与视神经炎组相比，甲钴胺对照组与本发明治疗组大鼠视皮质NR1表达面积减少（P＜0.05）、外侧膝状体NR1表达面积减少（P＜0.01），有统计学意义。由于NR1广泛存在于中枢神经系统，可以反映视觉障碍对视路的影响情况，能作为有效指标评价药物治疗视神经炎大鼠的病理情况，因此实验表明，本发明的中药组合物具有治疗视神经炎的功效。
实验例2
通过药效试验验证本发明的中药组合物对肝郁气滞证视神经炎的治疗作用，实验方法及结果如下：
1.实验材料
1.1实验动物
动物采用SPF级SD大鼠，生产许可证号SCXKC（苏）20170001，体重180g～220g。常规饲养一周后，随机分为空白对照组10只、肝郁气滞证视神经炎组15只、本发明治疗组15只、逍遥散对照组15只。空白对照组10只一笼，正常饲养，其他3组大鼠均单笼孤养，分别编号、称重，采用动物房饲养，基本条件及光暗周期、背景噪音、温度均相同。
1.2实验药物
①本发明的治疗视神经炎的中药组合物颗粒剂；
②逍遥散：按照《太平惠民和剂局方》的记载，药物和剂量：柴胡12g、当归10g、白术10g、白芍10g、茯苓10g、生姜6g、薄荷3g、炙甘草3g（各中药材均购于北京市同仁堂有限责任公司，山西中医药大学中药教研室鉴定为正品），水煎浓缩为2.44 g/ml（相当于生药量），置4℃冰箱备用。
1.3主要实验仪器与试剂
EDTA抗凝管（武汉博士德）；
电子分析天平（德国 Sartorius）；
光学显微镜（日本 OlympusBX50）；
低速离心机（Sigma 2k15）；
石蜡包埋机（德国Leica公司，EXCELSIOR ES）；
全封闭组织脱水机（SAKURA Tissue-tek，VIP5）；
恒温烤箱（Boxun ANY90）；
漩涡混合器（上海仪器厂，XW-80A）；
切片机（德国Leica公司，RM2245）；
石蜡包埋机（德国Leica公司，EXCELSIOR ES）；
Rat促肾上腺皮质激素（ACTH）ELISA检测试剂盒（博士德，批号：CK-E30596R）；
百白破疫苗（国药中生武汉公司，批号：20141049-2）；
水合氯醛（武汉博士德，批号：0120336）；
完全弗氏佐剂（Sigma公司，批号：SLBJ2846V）；
大鼠NMDAR1抗体（博士德，批号：10Z06B）；
4%多聚甲醛固定液（博士德，批号：08H19B69）；
DAB显色试剂盒（博士德，批号：20147892）；
SABC超敏试剂盒（博士德，批号：20141209-12）；
0.01mol/L磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline, PBS）（由山西医科大学免疫组化室提供）；
0.9% 生理盐水（武汉博士德）。
2.实验过程
2.1抗原制备
将健康普通级豚鼠用5%水合氯醛10ml腹腔注射处死后，暴露脊髓，在延髓下段离断脊髓，剥离，称重，加入无菌冰生理盐水（1g脊髓中加入1ml盐水），在冰浴中研成豚鼠脊髓匀浆（GPSCH）,研磨至无粘性，加入等体积完全弗氏佐剂（CFA），制成油包水样乳剂，放置于4℃冰箱保存备用。
2.2模型制备
除空白对照组外，其余3组大鼠用5%水合氯醛（1ml/100g）腹腔麻醉后，四足足垫内各注射上述步骤2.1中制备的免疫抗原0.1ml，同时后肢皮下注射百日咳疫苗0.1ml（含百日咳杆菌1×1010个）；
对注射抗原的3组大鼠于造模后的第2天,采用不可预知的慢性应激刺激结合孤养的方法继续造模，刺激包括：禁食24h；禁水24h；冰水游泳5min；45℃热环境5min；夹尾刺激1min；24h明暗颠倒。上述刺激每日1种，随机安排，使大鼠不能预知次日的刺激，连续28天，制备肝郁气滞证视神经炎大鼠模型。
2.3给药治疗
造模的同时，空白对照组、肝郁气滞证视神经炎组给予蒸馏水灌胃，本发明治疗组大鼠给予本发明中药组合物颗粒剂水溶液（相当于原药材2.0g/mL）灌胃，逍遥散对照组大鼠给予逍遥散浓缩液（相当于原药材2.44g/mL）灌胃，两组大鼠给药体积均为2ml/100g，每天1次，连续28天。
2.4实验指标
2.4.1一般情况
造模期间观察大鼠行为、反应、饮食等一般情况的变化，并在第14、28天称量大鼠体重。
2.4.2糖水偏好实验
实验前训练大鼠适应含糖饮水，每笼同时放置2个水瓶，第1个24h两瓶均装1%蔗糖水，随后的24h，1个瓶装1%蔗糖水，1个瓶装纯净水。24h禁水后，进行大鼠的糖水/纯水消耗实验，同时给每只大鼠事先定量好的两瓶水：1瓶1%蔗糖水，1瓶纯水，观察1h内糖水和纯水消耗，糖水偏爱值=糖水消耗/总液体消耗×100%，分别在造模的第14、28天测取各组大鼠的糖水偏爱值。
2.4.3血浆ACTH检测
于造模第28天，将各组大鼠用5%水合氯醛（1ml/100g）腹腔麻醉，腹主动脉取血，放入含有EDTA的抗凝管中，4℃环境下静置2h，3000r/min离心15min，取上游血浆用移液器枪头吸出放到试管里，于-20℃条件下保存，待检。
2.4.4大鼠视皮质NR1和外侧膝状体NR1检测
将步骤2.4.3中经腹主动脉取血后的大鼠固定于鼠板上，进行解剖，打开胸腔，进行心脏灌注固定，将插管针头从左心室插入主动脉，剪开右心耳形成出口，先用生理盐水迅速灌注冲洗血液，待血液变为淡粉色，再以输液器快速注入4%多聚甲醛液，至大鼠身体僵直，尾巴翘起即可，迅速剥离鼠脑，放置冰台，根据大鼠脑立体定位图谱，切取双侧视皮质、外侧膝状体，将标本修块为1*1*1mm3大小，随即放入4℃、4%多聚甲醛固定液中保存标记；
利用石蜡包埋机将组织块平整放入机器内，按程序制作组织石蜡包块，利用切片机切将石蜡组织包块按要的组织切面切5μm薄片，放入摊片机上，用免疫组化防脱片将组织放于玻片上，并标记，用中性树胶封片晾干；
在光学显微镜下观察，NR1表达的阳性细胞胞浆着色呈棕黄色，阳性细胞胞体呈不规则多角形、锥体形、梭形，有1个或多个突起；每张切片在高倍镜(40×)下选取随机的3个视野并照相，图像选用Image-Pro Plus5.1专业图像分析系统处理，测量每个视野中免疫组化染色阳性细胞的积分光密度（IOD），取3张图片阳性细胞面积、IOD值平均值作为此张切片代表值，2张切片平均值作为此标本的最终代表值。
3.实验结果
统计学处理，数据用
Figure DEST_PATH_IMAGE002A
±S表示，利用SPSS 21.0统计软件包进行统计学处理，数据采用单因素方差分析，对数据进行正态检验后，对各独立样本的均数进行t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
3.1一般情况
造模后第3天，肝郁气滞证视神经炎组、逍遥散对照组、本发明治疗组组出现活动量减少，食欲减退，体重增长缓慢，与之相反，空白对照组小鼠未出现任何症状，体重变化和自发活动都正常。
表2 大鼠体重比较(g,
Figure DEST_PATH_IMAGE002AA
±S)
组别 n 造模前 造模第14天 造模第28天
空白对照组 10 205.12±12.23 239.27±14.94 264.36±15.01
肝郁气滞证视神经炎组 13 206.34±11.15 214.21±15.24<sup>**</sup> 228.87±13.66<sup>**</sup>
逍遥散对照组 12 208.15±12.89 225.34±13.17<sup>#</sup> 242.87±15.46<sup>#</sup>
本发明治疗组 12 207.15±13.45 229.76±14.09<sup>#</sup> 248.87±13.69<sup>#</sup>
注：**表示与空白对照组相比P﹤0.01；#表示与肝郁气滞证视神经炎组相比 P﹤0.05。
由表2可见，与空白对照组相比，肝郁气滞证视神经炎组大鼠体重体重增长缓慢，有统计学意义（P＜0.01）；与肝郁气滞证视神经炎组相比，逍遥散对照组、本发明治疗组大鼠体重体重增长较快，有统计学意义（P＜0.05），说明肝郁气滞证视神经炎组大鼠生长缓慢可能与造模过程中外界环境因素干扰其正常作息规律有关，导致其病情加重，而经过治疗药物干预后，其病情好转，生长正常。
3.2糖水偏好实验结果
表3 大鼠糖水偏爱值比较（
Figure DEST_PATH_IMAGE002AAA
±s）
组别 n 造模前 造模第14天 造模第28天
空白对照组 10 17.92±2.37 17.25±5.47 18.03±2.13
肝郁气滞证视神经炎组 13 18.32±2.36 10.59±2.82<sup>**</sup> 9.42±1.97<sup>**</sup>
逍遥散对照组 12 17.86±2.13 13.22±2.38<sup>#</sup> 14.95±2.11<sup>##</sup>
本发明治疗组 12 17.83±2.65 13.96±2.54<sup>#</sup> 15.87±1.86<sup>##</sup>
注：**表示与空白对照组相比P﹤0.01；#表示与肝郁气滞证视神经炎组相比P﹤0.05，##表示P﹤0.01。
由表3可见，与空白对照组相比，肝郁气滞证视神经炎组大鼠在造模后，第14、28天糖水偏爱值明显降低，有显著差异 (P﹤0.01)；与肝郁气滞证视神经炎组相比，逍遥散对照组与本发明治疗组第14、28天糖水偏爱值明显增加，有显著差异 (P﹤0.05 、P﹤0.01)；从
大鼠发病过程看，各种刺激因素造成了大鼠肝郁气滞，大鼠的糖水偏爱值降低，经治疗药物干预后，大鼠的糖水偏爱值又明显增加，说明本发明的中药组合物具有治疗肝郁气滞的功效。
3.3血浆ACTH检测结果
表4 大鼠血浆ACTH含量比较（
Figure DEST_PATH_IMAGE002AAAA
±sd，pg/ml)
组别 n 造模第28天
空白对照组 10 9.97±1.37
肝郁气滞证视神经炎组 13 18.48±2.01<sup>**</sup>
逍遥散对照组 12 13.11±1.59<sup>#</sup>
本发明治疗组 12 11.69±1.72<sup>##</sup>
注：**表示与空白对照组相比P﹤0.01；#表示与肝郁气滞证视神经炎组相比P﹤0.05，##表示P﹤0.01。
由表4可见，与空白对照组相比，肝郁气滞证视神经炎组大鼠血浆ACTH含量明显升高，有显著差异 (P﹤0.01)；与肝郁气滞证视神经炎组相比，逍遥散对照组与本发明治疗组大鼠血浆ACTH含量明显降低，有显著差异 (P﹤0.05 、P﹤0.01)。肝郁气滞证视神经炎组造模后，对大鼠的肾上腺分泌有一定的刺激作用，而在长时间慢性刺激应激下，刺激了大鼠血浆ACTH 的分泌，本实验的肝郁气滞证视神经炎组大鼠血浆 ACTH升高幅度明显，符合肝郁气滞证特点，在治疗药物干预下，本发明治疗组、逍遥散对照组大鼠的血浆ACTH含量与肝郁气滞证视神经炎组大鼠相比明显降低，进一步说明本发明的中药组合物具有治疗肝郁气滞的功效。
3.4大鼠视皮质NR1和外侧膝状体NR1检测结果
表5 NR1蛋白表达积分光密度（IOD）比较（
Figure DEST_PATH_IMAGE002AAAAA
±S）
组别 n 视皮质NR1 外侧膝状体NR1
空白对照组 10 0.055±0.00 0.055±0.00
肝郁气滞证视神经炎组 13 0.95±0.021<sup>**</sup> 0.11±0.055<sup>**</sup>
逍遥散对照组 12 0.69±0.012<sup>#</sup> 0.045±0.016<sup>##</sup>
本发明治疗组 12 0.60±0.021<sup>#</sup> 0.040±0.014<sup>##</sup>
注：**表示与空白对照组相比P﹤0.01；#表示与肝郁气滞证视神经炎组相比P﹤0.05，##表示P﹤0.01。
由表5可见，与空白对照组相比，肝郁气滞证视神经炎组大鼠视皮质、外侧膝状体NR1表达面积明显增大，有统计学意义（P＜0.01）；与肝郁气滞证视神经炎组相比，逍遥散对照组与本发明治疗组大鼠视皮质NR1表达面积减少（P＜0.05）、外侧膝状体NR1表达面积减少（P＜0.01），有统计学意义。由于NR1广泛存在于中枢神经系统，可以反映视觉障碍对视路的影响情况，能作为有效指标评价药物治疗肝郁气滞证视神经炎大鼠的病理情况，因此实验表明，本发明的中药组合物具有治疗视神经炎的功效。
综上所述，通过结合各组大鼠的体重、糖水偏爱值、血浆ACTH含量以及视皮质NR1和外侧膝状体NR1表达等指标，对比分析，可以得出，本发明的中药组合物具有治疗肝郁气滞证视神经炎的功效。
临床资料：
1.病例选择：选择视神经炎患者95例临床治疗观察，其中，男65例，女30例，年龄25岁～59岁，平均年龄42岁，病程1个月～1年，平均0.5年。
2.治疗方法：患者服用本发明的中药组合物颗粒剂，一日3次，每次10g，早、中、晚开水冲服，7天为1个疗程，一般治疗1～3个疗程，严重者可酌情增加疗程。
3.疗效判断标准：
①治愈：由视神经炎引起的眼痛、角膜混浊、视力障碍、瞳孔异常、眼球压痛、味觉性流泪、视神经乳头苍白等临床症状全部消失，视力恢复正常，半年未复发；
②有效：上述临床症状减轻或好转；
③无效：上述临床症状未减轻，甚至加重。
4.治疗结果：经一个疗程治疗后，大部分患者的症状均不同程度减轻，经1～3个疗程的治疗，95例患者中治愈84例，有效8例，无效3例，治愈率88.4％，总有效率96.8％，治疗过程中患者均未出现不良副反应。
典型病例1：
赵某，女，34岁，患者右眼不适，视力下降，眼球转动时眼球后部牵引样疼痛，眶深部压痛，瞳孔对光反射迟钝，经检查诊断为视神经炎，服用本发明中药组合物治疗1个疗程后，症状明显减轻，继续服用1个疗程，痊愈，1年随访未复发。
典型病例2：
李某，男，年龄29岁，性情急躁易怒，与人争吵后视力骤降，头目胀痛，眼珠压痛，眼球转动时牵拉痛，视神经乳头充血、水肿，口苦咽干，胸闷不舒，舌红，苔黄，脉弦数，经诊断为视神经炎，证属肝郁气滞，服用本发明的中药组合物2个疗程，上述症状得到明显缓解，继续服用1个疗程，上述症状消失，痊愈，9个月随访未复发。
典型病例3：
王某，男，52岁，嗜好烟酒，平日情志抑郁，不善言谈，因家中突发事故搅扰，寝食难安，继而视力骤降，头目胀痛，眼珠压痛，口苦咽干，胸胁胀痛，视神经乳头轻度充血、水肿，舌红，苔黄，脉弦数，经诊断为视神经炎，证属肝郁气滞，服用本发明的中药组合物2个疗程，视神经乳头充血、头目胀痛明显减轻、水肿消退，继续服用2个疗程，所有症状完全消失，视力恢复，痊愈，半年随访未复发。
本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施例的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无需也无法对所有的实施例予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种治疗视神经炎的中药组合物，其特征在于，按重量份计，其组成为：柴胡6～24份、黄芪9～36份、当归4～18份、赤芍4～18份、郁金3～9份、地龙3～9份。
2.根据权利要求1所述的治疗视神经炎的中药组合物，其特征在于，按重量份计，其组成为：柴胡24份、黄芪36份、当归18份、赤芍4份、郁金3份、地龙9份。
3.根据权利要求1所述的治疗视神经炎的中药组合物，其特征在于，按重量份计，其组成为：柴胡6份、黄芪9份、当归4份、赤芍18份、郁金9份、地龙6份。
4.根据权利要求1所述的治疗视神经炎的中药组合物，其特征在于，按重量份计，其组成为：柴胡12份、黄芪18份、当归9份、赤芍9份、郁金6份、地龙3份。
5.如权利要求1～4任一项所述的治疗视神经炎的中药组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
①.按配方称取相应重量份的柴胡、当归、郁金，加10～12倍量水，用水蒸气蒸馏法提取挥发油4～5h，将收集的挥发油用β-环糊精包合，再低温干燥、粉碎，得到的β-环糊精包合物备用，将提取挥发油后的药渣和药液进行过滤分离，备用；
②.在步骤①中分离得到的药渣中加入配方量的黄芪、赤芍、地龙三味药材，加水煎煮2次，第一次加水煎煮1～2h，滤出煎煮液，第二次加水煎煮0.5～2h，滤出煎煮液，合并两次煎煮得到的煎煮液，与步骤①中分离得到的药液合并，进行过滤后，将滤液在50～60℃条件下进行浓缩；
③.将步骤②中浓缩后的滤液进行喷雾干燥，所得的喷干粉与步骤①中得到的β～环糊精包合物混合，即得治疗视神经炎的中药组合物。
6.根据权利要求5所述的治疗视神经炎的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤①中β-环糊精的用量为挥发油量的4～6倍。
7.根据权利要求5所述的治疗视神经炎的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤②中第一次煎煮加水量为所煎煮药材总量的6～8倍，第二次煎煮加水量为所煎煮药材总量的4～6倍。
8.根据权利要求5所述的治疗视神经炎的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤②中浓缩后的滤液相对密度为1.10～1.30。
9.根据权利要求6～8任一项所述的治疗视神经炎的中药组合物的制备方法，其特征在于，将步骤③制得的治疗视神经炎的中药组合物与可压性淀粉、甜菊苷按1:1:0.001的重量比混合均匀，干压制粒，即得治疗视神经炎的中药组合物的颗粒剂。
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