CN113813265A - 灵芝酸a在治疗银屑病药物中的应用 - Google Patents

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陈翔
刘洪�
周星辰
陈军臣
李旺
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Abstract

本发明公开了灵芝酸A在治疗银屑病中的应用以及灵芝酸A的提取方法,灵芝酸A直接从灵芝中提取获得,成分天然,无毒,无副作用,且灵芝酸对于银屑病有显著的治疗作用,可长期使用。

Description

灵芝酸A在治疗银屑病药物中的应用
技术领域
本发明属于银屑病治疗技术领域,具体涉及灵芝酸A在治疗银屑病药物中的应用。
背景技术
银屑病俗称“牛皮癣”,是一种常见的高复发性皮肤疾病。银屑病具有病程长、迁延难愈等特点,严重时可致残甚至危及患者生命,给患者造成生理-心理的双重负担。然而,银屑病的发病机制复杂,时至今日临床仍无根治性药物可用。
目前银屑病的口服及外用药物以阻断过度活化的免疫系统为主,但仍有少部分银屑病患者对现有的生物制剂响应轻微、无效或伴随严重不良反应,大部分治疗有效的患者存在停药复发、继发耐药的问题,由于上述药物均只能暂时来缓解银屑病症状,且继发感染、肝肾功能损伤等毒副作用大,价格昂贵,难以长期维持,故寻找一种可长期维持的使用,同时可调节过度活化的免疫系统的药物迫在眉睫。
发明内容
为了解决上述技术问题,本发明提供了利用灵芝酸A治疗银屑病,药物成分天然无毒害,效果显著。
为了达到上述技术效果,本发明是通过以下技术方案实现的:
灵芝酸A在治疗银屑病药物中的应用;
优选的,所述药物为口服类药物;
优选的,所述口服类药物包括颗粒剂、胶囊、片剂;
优选的,所述药物为外用类药物;
优选的,所述外用类药物包括软膏剂、乳膏剂、霜剂;
优选的,所述灵芝酸A的提取方法,包括以下步骤:
S1:取灵芝在烘干机中进行充分干燥;
S2:将干燥后的灵芝用粉碎机进行粉碎至200-300目;
S3:将粉碎后的灵芝粉末用乙醇水溶液浸提3次,每次取浸提液,最后一次合并3次浸提液;
S4:将S3中得到的浸提液在温度为60-70°,压力为-0.1MPa条件下减压浓缩得到灵芝酸浸膏;
S5:将S4中的灵芝酸浸膏与水按照1:5-1:7的比例进行混合,得到混合液,然后加入混合液质量5%的NaHCO3,搅拌均匀后过滤,滤液用质量百分比浓度为10%的盐酸水溶液调PH值为2;
S6:将S5中PH值为2的滤液用5倍体积的氯仿萃取3次,每次均取氯仿层,合并3次的氯仿层;在温度40-50°,压力为-0.1MPa条件下浓缩得浓缩液;
S7:将S6所得浓缩液用硅胶柱进行纯化,以氯仿作为装柱溶剂,氯仿:丙酮体积比为10:1-3:1梯度冲洗,收集得到灵芝酸A粗品;
S8:在LH-20常压凝胶柱上,用质量百分比浓度为51%的甲醇水溶液对灵芝酸A粗品将其全部洗脱,然后在温度40°,压力为-0.1MPa下浓缩至干,得到纯度为99%以上的灵芝酸A;
S9:将S8得到的99%的灵芝酸A用氯仿溶解,再加入甲醇,在4°条件下放置至其有白色晶体析出,过滤,得到灵芝酸A。
本发明的有益效果是:
本发明利用灵芝酸A治疗银屑病,灵芝酸A直接从灵芝中提取获得,成分天然,无毒害,不会对人体造成毒副作用,且灵芝酸对于银屑病有显著的治疗作用;无毒,可长期维持服用,不易复发。
附图说明
图1是动物实验结果实物图片;
图2是HE染色切片观察结果图;
图3是细胞实验结果数据统计图。
具体实施方式
为了进一步体现本发明的方案及作用效果,下面通过具体实施例来详细说明。
实施例1
灵芝酸A在治疗银屑病药物中的应用;
优选的,所述药物为乳膏剂。
实施例2
灵芝酸A的提取方法,包括以下步骤:
S1:取灵芝在烘干机中进行充分干燥;
S2:将干燥后的灵芝用粉碎机进行粉碎至200目;
S3:将粉碎后的灵芝粉末用乙醇水溶液浸提3次,每次取浸提液,最后一次合并3次浸提液;
S4:将S3中得到的浸提液在温度为60°,压力为-0.1MPa条件下减压浓缩得到灵芝酸浸膏;
S5:将S4中的灵芝酸浸膏与水按照1:5的比例进行混合,得到混合液,然后加入混合液质量5%的NaHCO3,搅拌均匀后过滤,滤液用质量百分比浓度为10%的盐酸水溶液调PH值为2;
S6:将S5中PH值为2的滤液用5倍体积的氯仿萃取3次,每次均取氯仿层,合并3次的氯仿层;在温度50°,压力为-0.1MPa条件下浓缩得浓缩液;
S7:将S6所得浓缩液用硅胶柱进行纯化,以氯仿作为装柱溶剂,氯仿:丙酮体积比为10:1-3:1梯度冲洗,收集得到灵芝酸A粗品;
S8:在LH-20常压凝胶柱上,用质量百分比浓度为51%的甲醇水溶液对灵芝酸A粗品将其全部洗脱,然后在温度40°,压力为-0.1MPa下浓缩至干,得到纯度为99%以上的灵芝酸A;
S9:将S8得到的99%的灵芝酸A用氯仿溶解,再加入甲醇,在4°条件下放置至其有白色晶体析出,过滤,得到灵芝酸A。
实施例3
为了进一步验证实施例1中含有灵芝酸A的乳膏剂对银屑病的治疗作用,设计以下动物实验;
银屑病动物模型制作:选取6-8周龄,体重约18-20g,雌鼠40只,饲养于标准的清洁级动物饲养室;将小鼠用脱毛膏脱毛,脱毛面积为2cm*4cm;
将5%咪喹莫特乳膏按照62.5mg/只的剂量均匀涂抹于脱毛部位,持续5-7天,银屑病小鼠成模;
实验分组:正常对照组、银屑病组、银屑病+溶剂对照组,银屑病+灵芝酸A处理组;每组10只小鼠;
实验方法:灵芝酸A灌胃,2mg/kg,每日1次,正常对照组不予处理,溶剂对照组给予等量的溶剂,不加药。
实验结果:结果如图1所示,其中a为正常对照组,b为银屑病无处理组,c为银屑病+溶剂对照组,d为银屑病+灵芝酸A组;
银屑病无处理组:患部皮肤有明显成片红斑,鳞屑脱落多,大面积显著角化过度,棘层肥厚,皮表异常褶皱;
银屑病+溶剂对照组:较银屑病组无明显差异;
银屑病+灵芝酸A组:患部皮肤红斑基本消退,皮褶厚度变薄,鳞屑减少。
实施例4
细胞切片染色实验;
实验试剂:固定液:95%乙醇和冰丙酮;苏木精染液:称取苏木精0.5g,铵矾24g溶于70ml蒸馏水中,称取NaCl31g,水5ml,再加入甘油30ml和冰醋酸2ml,混合均匀,过滤,取滤液得苏木精染液;伊红染液:称取0.5g水溶性伊红染液,溶于100ml蒸馏水中;稀盐酸乙醇溶液:用75%乙醇配制1%盐酸;
实验准备:取各组小鼠背部皮肤,制成切片;
实验步骤:S1:石蜡切片脱蜡:依次将切片放入二甲苯I10min-二甲苯Ⅱ10min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗;
S2:苏木素染细胞核:切片入Harris苏木素染3-8min,自来水洗,1%的盐酸酒精分化数秒,自来水冲洗,0.6%氨水返蓝,流水冲洗;
S3:伊红染细胞质:切片入伊红染液中染色1-3min;
S4:脱水封片:将切片依次放入95%酒精I 5min-95%酒精II 5min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-二甲苯Ⅰ5min-二甲苯Ⅱ5min中脱水透明,将切片从二甲苯拿出来稍晾干,中性树胶封片;
S5:显微镜镜检,图像采集分析;
实验结果:如图2所示,其中a为正常对照组,b为银屑病无处理组,c为银屑病+软膏组,d为银屑病+灵芝酸A组;
切片结果分析:银屑病组表皮明显增厚,真皮层炎性细胞浸润明显,经灵芝酸A治疗后,表皮增殖明显改善,炎性细胞浸润减少(如图2中箭头所指方向)。
实施例5
细胞实验;
实验准备:取永生化人Hacat角质形成细胞,用不同的灵芝酸A进行干预(5μM/10μM/20μM/40μM)
实验方法:复苏人Hacat角质形成细胞,待长势良好时,种板,96孔板,每板5000个细胞,将培养皿置CO2培养箱内,5%CO2,37℃静置培养24小时后,加入不同浓度的灵芝酸A培养液,继续培养24小时,去除培养液,用CCK8后再孵育1-3小时,450nm度数,检测灵芝酸A对角质形成细胞增殖的抑制作用。
实验结果:如图3所示,灵芝酸A可明显抑制角质形成细胞的增殖,且呈浓度依赖性。
结果分析:灵芝酸A可明显抑制角质形成细胞的增殖。

Claims (6)

1.灵芝酸A在治疗银屑病药物中的应用。
2.根据权利要求1所述灵芝酸A在治疗银屑病药物中的应用,其特征在于,所述所述药物为口服类药物。
3.根据权利要求2所述灵芝酸A在治疗银屑病药物中的应用,其特征在于,所述口服类药物包括颗粒剂、胶囊、片剂。
4.根据权利要求1所述灵芝酸A在治疗银屑病药物中的应用,其特征在于,所述药物为外用类药物。
5.根据权利要求4所述灵芝酸A在治疗银屑病药物中的应用,其特征在于,所述外用类药物包括软膏剂、乳膏剂、霜剂。
6.根据权利要求1所述灵芝酸A在治疗银屑病药物中的应用,其特征在于,所述灵芝酸A的提取方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1:取灵芝在烘干机中进行充分干燥;
S2:将干燥后的灵芝用粉碎机进行粉碎至200-300目;
S3:将粉碎后的灵芝粉末用乙醇水溶液浸提3次,每次取浸提液,最后一次合并3次浸提液;
S4:将S3中得到的浸提液在温度为60-70°,压力为-0.1MPa条件下减压浓缩得到灵芝酸浸膏;
S5:将S4中的灵芝酸浸膏与水按照1:5-1:7的比例进行混合,得到混合液,然后加入混合液质量5%的NaHCO3,搅拌均匀后过滤,滤液用质量百分比浓度为10%的盐酸水溶液调PH值为2;
S6:将S5中PH值为2的滤液用5倍体积的氯仿萃取3次,每次均取氯仿层,合并3次的氯仿层;在温度40-50°,压力为-0.1MPa条件下浓缩得浓缩液;
S7:将S6所得浓缩液用硅胶柱进行纯化,以氯仿作为装柱溶剂,氯仿:丙酮体积比为10:1-3:1梯度冲洗,收集得到灵芝酸A粗品;
S8:在LH-20常压凝胶柱上,用质量百分比浓度为51%的甲醇水溶液对灵芝酸A粗品将其全部洗脱,然后在温度40°,压力为-0.1MPa下浓缩至干,得到纯度为99%以上的灵芝酸A;
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