CN113784642A - 用于皮肤抗老化的方法以及装置 - Google Patents

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Abstract

提供一种用于皮肤抗老化的方法以及装置。涉及用于皮肤抗老化的方法以及装置，其包括：给与对象的皮肤以60Hz以下的振动频率进行的物理刺激。根据本发明，提供实现对表皮这样的浅层好的皮肤抗老化作用的方法以及装置。

Description

用于皮肤抗老化的方法以及装置
技术领域
本发明涉及用于皮肤抗老化的方法以及装置，尤其涉及包括向对象的皮肤给予以60Hz以下的振动频率进行的物理刺激的用于皮肤抗老化的方法以及装置。
背景技术
皮肤老化是由多种因素引起的皮肤变化，包括年龄增加、荷尔蒙、代谢等内部原因、以及紫外线、干燥等外部原因。皮肤老化例如有时也能够根据色斑、皱纹、松弛、干枯等外观进行判断，但例如皮肤内部组织的构造、构成成分的变化这样的不可见的老化也可能在进展。这样的老化多会在未注意到的时候不断发展，因此，难以采取预防对策。采取用于对皮肤老化进行预防、改善的适当的对策是很重要的。
在此，当前存在各种美容方法。例如，专利文献1公开了引起角质物质的位移的电活性材料致动器。专利文献2公开了在使皮肤进行了伸展的状态下进行光照射的光照射美容器具。专利文献3公开了一种使皮下脂肪减少的瘦身方法，该方法组合了使皮下脂肪细胞伸展的拉伸(stretch)和调配脂肪积累抑制成分以及/或者脂肪细胞分化抑制成分而得到的皮肤外用剂。专利文献4公开了含有燕麦属植物的提取物或者补骨脂属植物的提取物的伸展刺激介导的胶原蛋白分解酶生成抑制剂。专利文献5公开了起因于伸展应力的皱纹改善剂或者NF－κB活性抑制剂。在非专利文献1中，推荐了65～85Hz下的机械性刺激。另外，在与非专利文献1所记载的装置关联的专利文献6中，公开了以约65～约120Hz这样的频率对皮肤进行刺激的末端执行器。
但是，在通过皮肤表面给与刺激的情况下，首先对作为表层部分的表皮施加刺激，因此，存在会对表皮造成损伤这一问题。另外，认为在表皮正下也具有在构造上非常有特征性的基底膜(起伏构造)，感受机械刺激的可能性高。实际上由在先文献也报告了通过给与物理刺激而表层会较大地变化(非专利文献2)。由此，要求实现对于包括了表皮、基底膜的皮肤好的抗老化作用的方法、装置。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本特表2011－505897号公报
专利文献2:日本特开2009－28271号公报
专利文献3:日本特开2015－127315号公报
专利文献4:日本特开2011－162507号公报
专利文献5:日本特开2014－108924号公报
专利文献6:日本特表2018－501000号公报
非专利文献
非专利文献1:Caberlotto et al.PLoS One.2017Mar 1；12
非专利文献2:Naruse et al.PLoS One.2015Nov 3；10
非专利文献3:Furukawa et al.,2017,Cell Reports 20,1435-1447
非专利文献4:Cell Death and Disease(2014)5,e1519；doi:10.1038/cddis.2014.476
非专利文献5:Current Biology Vol 24No 17m 8September 2014,Pages 2012-2017
非专利文献6:Nature Communications volume 8,Article number:15206(2017)
非专利文献7:Development 138,3907-3914(2011)doi:10.1242/dev.0709872017
非专利文献8:Cell Reports 19,1495-1502,May 23,2017
非专利文献9:Nature Communications volume 9,Article number:2961(2018)；DOI:10.1038/s41467-018-05388-x
非专利文献10:Nature Cell Biology volume 20,pages262-271(2018)
非专利文献11:Trends Cell Biol.2018Jul；28(7):560-573.doi:10.1016/j.tcb.2018.03.001
非专利文献12:Nature Communications volume 8,Article number:15206(2017；DOI:10.1038/ncomms15206
非专利文献13:Cancer Res；73(12)June 15,2013；DOI:10.1158/0008-5472.CAN-12-3793
发明内容
发明要解决的课题
本发明的课题在于，提供一种用于皮肤抗老化的方法以及装置。
用于解决问题的技术方案
本发明人认真研究的结果，发现了在以特定的伸展率和振动频率给与了皮肤伸展等物理刺激的情况下，能实现对表皮这样的浅层好的皮肤抗老化作用，想到了本发明。
本申请提供以下的发明：
(1)一种美容方法，是用于对象的皮肤抗老化的美容方法，包括对皮肤应用微弱的物理刺激的步骤，
在此，该步骤例如包括给与对象的皮肤物理刺激，所述物理刺激是以60Hz以下的振动频率进行包括(a)和(b)以及/或者(a－1)和(b－1)的周期，
所述(a)为：使所述对象的皮肤伸展到0.1％以上且50.0％以下的伸展率，
所述(b)为：使所述对象的皮肤从伸展状态恢复，
所述(a－1)为：将所述对象的皮肤按压1μm～1000μm，
所述(b－1)为：使所述对象的皮肤从按压状态恢复，
在此，伸展率通过如下式1来算出，
Figure BDA0003308228800000041
式中，定点A和定点B是表皮或者表皮附着的基质上的任意位置，在此，通过定点A和定点B的直线与伸展方向平行。
(2)根据(1)所述的美容方法，进行1组或者多组的进行2～500个周期的所述周期的组。
(3)根据(1)或者(2)所述的美容方法，
所述皮肤抗老化是指：在测定了具有核定位YAP的细胞数相对于全部角化细胞数的比例来作为指标的情况下，在对皮肤应用了所述美容方法之后，在伸展角化细胞中测定的具有核定位YAP的细胞数的比例比应用所述美容方法之前的该比例增加，在此，具有核定位YAP的细胞数的比例通过如下式2来算出，
Figure BDA0003308228800000042
(4)根据(1)或者(2)所述的美容方法、
所述皮肤抗老化是指：在测定了具有肌动蛋白应力纤维的细胞数相对于全部角化细胞数的比例来作为指标的情况下，在对皮肤应用了所述美容方法之后，在伸展角化细胞中测定的具有肌动蛋白应力纤维的细胞数的比例增加，在此，具有肌动蛋白应力纤维的细胞数的比例通过如下式3来算出，
Figure BDA0003308228800000043
(5)一种美容装置，是用于皮肤抗老化的美容装置，
所述装置具备：
刺激产生部，其产生物理刺激；和
刺激给与部，其给与皮肤由刺激产生部产生的物理刺激，
在此，该装置是用于进行对皮肤应用微弱的物理刺激的步骤的装置，在此，该步骤例如是以60Hz以下的振动频率进行包括(a)和(b)以及/或者(a－1)和(b－1)的周期，
所述(a)为：使皮肤伸展到0.1％以上且50.0％以下的伸展率，
所述(b)为：使所述对象的皮肤从伸展状态恢复，
所述(a－1)为：将所述对象的皮肤按压1μm～1000μm，
所述(b－1)为：使所述对象的皮肤从按压状态恢复，
在此，伸展率通过上述式1来算出。
(6)一种美容方法，用于皮肤抗老化，包括：将(5)所述的美容装置应用于对象的皮肤。
(7)根据(1)～(4)和(6)中任一项所述的美容方法，用于增加皮肤中的透明质酸。
(8)一种美容咨询方法，进行对象的美容行为的辅助，包括：向对象提示(1)～(4)、(6)以及(7)中任一项所述的美容方法或者(5)所述的美容装置。
发明效果
根据本发明，能提供实现对表皮这样的浅层好的皮肤抗老化作用的方法以及装置。其结果，能期待色斑、皱纹、松弛这样的皮肤老化的预防、改善。
附图说明
图1表示在实验1、3中进行了的伸展刺激的设定。
图2a表示在实验1中对从44岁的供体(donor)得到的角化细胞的单层培养物未给与伸展刺激的状态以及刚给与之后的YAP(红)和肌动蛋白(绿)的定位。
图2b表示在实验1中对从各年龄的供体(0岁、18岁、64岁)得到的角化细胞的单层培养物未给与伸展刺激的状态和刚给与伸展刺激后的YAP(红)和肌动蛋白(绿)的定位。
图3表示在实验1中对从各年龄的供体(0岁、18岁、62岁)得到的角化细胞培养物未给与伸展刺激的状态和刚给与伸展刺激后的具有核定位YAP的细胞数的比例。图中，＊表示通过双侧t检验(两个总体的方差相等的情况)而具有显著差异(p<0.05％)。
图4表示在实验1中对从各年龄的供体(0岁、18岁、62岁)得到的角化细胞培养物未给与伸展刺激的状态和刚给与伸展刺激后的具有肌动蛋白应力纤维的细胞数的比例。图中，＊表示通过双侧t检验(两个总体的方差相等的情况)而具有显著差异(p<0.05％)。
图5表示在实验1中对从各年龄的供体(0岁、68岁)得到的成纤维细胞的培养物未给与伸展刺激的状态和刚给与伸展刺激后的YAP(红)、肌动蛋白(绿)以及核(蓝)的定位。
图6表示在实验2所使用的装置和离体(ex vivo)皮肤试料。
图7表示在实验2、4、5中进行了的伸展刺激的设定。
图8表示在实验2中对从44岁的供体得到的皮肤试料未给与按下刺激的状态和刚给与按下刺激后的YAP(绿)和核(蓝)的定位。
图9表示在实验3中对从44岁的供体得到的角化细胞的单层培养物分别未给与伸展刺激的条件、给与了一次伸展刺激的条件、给与了两次伸展刺激的条件之后，在进行了1周的通常培养之后的YAP和BrdU的定位。
图10表示在实验4中所使用的装置和皮肤试料。
图11表示在实验4中对从44岁的供体得到的两个皮肤试料(试料#1和#2)未给与一次伸展刺激的状态和进行了给与的条件之后，进行了1周的通常培养之后的YAP(绿)、Ki67(红)以及核(蓝)的定位。
图12表示在实验4中对从44岁的供体得到的两个皮肤试料(试料#1和#2)未给与两次伸展刺激的状态和进行了给与的条件之后，进行了1周的通常培养之后的YAP(绿)、Ki67(红)以及核(蓝)的定位。
图13表示在实验5中对从44岁的供体得到的两个皮肤试料(试料#1和#2)未给与两次伸展刺激的状态和进行了给与的条件之后，进行了1周的通常培养之后的透明质酸(绿)、胶原蛋白(红)、核(蓝)。
图14表示本发明的装置的一个例子。
图15a表示实验6中的经皮水分流失测量仪(VapoMeter)和皮肤水份测试仪(Corneometer)的测定结果。＊表示在dunnett’s test中与第0天的值具有显著差异(***：p<0.005，**：p<0.01，*：p<0.05)。
图15b表示实验6中的通过皮肤弹性测试仪(Cutometer)得到的R0值。＊表示在dunnett’s test中与第0天的值具有显著差异(***：p<0.005，**：p<0.01，*：p<0.05)。
图15c表示实验6中的主观评价的结果。＊表示在wilcoxon的带符号顺位检验中与第0天的值具有显著差异(***：p<0.005，**：p<0.01，*：p<0.05)。
图16的左上方表示实验7的设定。图16的右上方表示实验7的按压刺激的波形的一个例子(矩形波)。图16的下方表示实验7的按压刺激的条件(波形：Shape of wave、振动频率：Frequency/Hz、深度：Displacement/μm、期间：Day)。
图17表示在实验7中对从44岁的供体得到的两个皮肤试料(试料#1和#2)未给与按压刺激的条件(Cont)和给与了矩形波的按压刺激的条件(0.5Hz/100μm)下的第1天(d1)和第5天(d5)的Ki67(绿)和核(蓝)的定位。
图18表示在实验7中对从44岁的供体得到的皮肤试料未给与一次按压刺激的条件(Cont)和进行了给与的条件(矩形波：0.5Hz、5Hz、50Hz/100μm)下的对第1天(左)和第5天(右)的整体细胞数中的呈现Ki67阳性的细胞数的比例。
图19的上方表示实验8的设定，下方表示所采用的按压刺激的波形(矩形波)。
图20a是实验8的结果，左方表示给与了按压刺激的情况，右方表示给与了按压刺激的情况下(control)的第0天和第7天的结果。图20a是皮肤水份测试仪的测定结果。
图20b是实验8的结果，左方表示给与了按压刺激的情况，右方表示未给与按压刺激的情况下(control)的第0天和第7天的结果。图20b是经皮水分流失测量仪的测定结果。
图20c是实验8的结果，左方表示未给与按压刺激的情况(control)，右方表示给与了按压刺激的情况下的第0天和第7天的结果。图20c表示通过皮肤弹性测试仪得到的R0值。*表示在dunnett’s test中与第0天的值具有显著差异(*:p<0.05)。
具体实施方式
当前，存在许多将比真皮深的层作为了目标的美容方法，例如可举出以表情肌的强化、脂肪的分解促进、真皮纤维的强化为目标等方法。另外，例如也存在如专利文献1那样着眼于角质物质的美容法，但多是通过电刺激实现的或者是给与高振动频率的强刺激。然而，存在如下问题：当如上述的那样由皮肤表面给与刺激时，会对表皮产生损伤。进一步，也存在如专利文献4、5等所记载那样，伸展刺激对皮肤给与恶劣影响这一见解，实际上，在非专利文献2中报告了因给与伸展刺激而表层会较大地变化。
在此，本发明人着眼于皮肤表层部而进行了认真研究。其结果，发现了角化细胞中的YAP的行为、肌动蛋白纤维的构造与老化相关联。例如，在对皮肤给与了伸展等的物理刺激的情况下，在老化角化细胞中，具有核定位YAP的细胞、具有肌动蛋白应力纤维的细胞数的比例显著减少了。进而，本发明人也发现了：将YAP的行为、肌动蛋白纤维的构造作为皮肤老化的指标，当给与对象的皮肤特定的物理刺激时，能对包括表皮的皮肤实现好的效果。更具体而言，启示了如下效果：即使是老化了的表皮，当以特定的伸展率给与例如以1Hz以下、10Hz以下这样的60Hz以下的振动频率进行的物理刺激时，作为结果，对在老化角化细胞具有特征性的核定位YAP或者肌动蛋白应力纤维的细胞数的比例的减少进行抑制。进一步，对于这样的物理刺激，也了解到不仅是表皮、连真皮中的透明质酸量也会增加，证实了对皮肤老化的预防改善是有效的。
本发明提供包括向对象的皮肤给与物理刺激的、用于对象的皮肤抗老化的方法。另外，本发明提供用于皮肤抗老化的装置，其具备产生物理刺激的刺激产生部和对皮肤给与由刺激产生部产生的物理刺激的刺激给与部。
本发明的方法包括对皮肤应用微弱的物理刺激的步骤，本发明的装置是用于进行对皮肤应用微弱的物理刺激的步骤的装置，在此，该步骤例如也可以是以60Hz以下的振动频率进行包括(a)使皮肤伸展到0.1％以上且50.0％以下的伸展率和(b)从伸展状态恢复的周期。
伸展率通过上述式1来算出。物理刺激也可以以0.001％以上且80.0以下、0.01％以上且60.0％以下、0.1％以上且50.0％以下、优选0.1％以上且50.0％以下的伸展率进行。例如，可以采用0.1％以上且1.0％以下、0.1％以上且5.0％以下、0.1％以上且10.0％以下、0.1％以上且20.0％以下、0.1％以上且30.0％以下、1.0％以上且5.0％以下、1.0％以上且10.0％以下、1.0％以上且20.0％以下、1.0％以上且30.0％以下、1.0％以上且50.0％以下、10.0％以上且20.0％以下、10.0％以上且30.0％以下等任意范围的伸展率。
伸展速度是指在1个周期中到到达最大伸展率(％)为止的速度(％/s(秒))。恢复速度是指从最大伸展率恢复到非伸展状态的速度(％/s)。伸展速度、恢复速度也可以以0.010％/s～40％/s、0.05％/s～30％/s、0.10％/s～20％/s、0.2％/s～15％/s、0.3％/s～10％/s等任意速度来进行。伸展速度和恢复速度既可以相同，也可以不同。
本发明的方法包括对皮肤应用微弱的物理刺激的步骤，本发明的装置是用于进行对皮肤应用微弱的物理刺激的步骤的装置，在此，该步骤例如也可以是以60Hz以下的振动频率进行包括(a－1)将所述对象的皮肤按压1μm～1000μm和(b－1)使所述对象的皮肤从按压状态恢复的周期。
“将皮肤按压1μm～1000μm”是指，将皮肤从皮肤的最表面按压到1μm～1000μm的深度。按压的深度可以为从皮肤的最表面起的1μm～1000μm、10μm～1000μm、10μm～300μm、10μm～100μm等任意地进行设定。
振动频率是指在将从开始伸展或者按压到恢复到非伸展或者非按压状态的周期作为了1个周期的情况下的每1秒的周期数。1个周期也可以包括维持一定时间的伸展或者按压状态以及/或者在非伸展或者非按压状态下停止。例如，也可以在1个周期中还包括：(a’)在(a)之后且(b)之前或者在(a－1)之后且(b－1)之前，保持0秒～30分钟期间、1秒～20分钟期间、5秒～10分钟期间或者10秒～5分钟期间的伸展或者按压状态；以及/或者(b’)在(b)之后且下一周期的(a)之前或者在(a－1)之后且(b－1)之前，在非伸展或者非按压状态下进行0秒～30秒期间、0秒～20秒期间、0秒～10秒期间、1秒～10秒期间、1秒～20秒期间、1秒～10秒期间的停止。振动频率例如也可以是0.0000001Hz以上且10kHz以下、0.000001Hz以上且1kHz以下、0.00001Hz以上且100Hz以下、优选0.0001Hz以上且60Hz以下、0.0001Hz以上且10Hz以下。例如，可以采用0.001Hz以上且60Hz以下、0.01Hz以上且60Hz以下、0.001Hz以上且10Hz以下、0.01Hz以上且10Hz以下、0.1Hz以上且60Hz以下、0.1Hz以上且10Hz以下、0.5Hz以上且60Hz以下、0.5Hz以上且50Hz以下、0.5Hz以上且10Hz以下、0.5Hz以上且5Hz以下、0.5Hz以上且1Hz以下、0.001Hz以上且0.01Hz以下、0.001Hz以上且0.1Hz以下、0.001Hz以上且1Hz以下、0.01Hz以上且1Hz以下、0.1Hz以上且1Hz以下、1Hz以上且60Hz以下、1Hz以上且10Hz以下、1Hz以上且5Hz以下等任意范围的振动频率。
市售的美颜器、按摩设备等存在使用具有RF波这样的0.3～300MHz左右的频率的电磁波的产品、使用具有1MHz～7MHz左右的频率的超声波的产品。与这些频率/振动频率相比，本发明的方法/装置所采用的振动频率极低。当如以往的美颜器等那样给与皮肤强的振动频率时，存在会对皮肤产生变红、压力痕、伤、痛、炎症这样的恶劣影响的风险，但当采用如本发明这样的振动频率时，能够上述的风险低地实现非侵袭的物理刺激。这是由于，由本发明人发现了：当伸展率、按压度、振动频率等过高时，刺激过强，因此，通过将这些值调节为适当值，温和地刺激皮肤为好。
另外，以往以来，利用在该领域中一般所利用的马达等机构的美容设备类只能根据该马达的机械机构选择超过60Hz的振动频率，这是本领域技术人员的技术常识。要采用如作为现有技术中的美容设备类的极限的“60Hz”以下的振动频率、例如60Hz以下、10Hz以下、1Hz以下这样的本发明的振动频率，要求了必须制作特别的机械。进一步，在这样低的振动频率下，要实现本发明的效果，也存在“过弱”这一固定概念，到目前为止几乎没有进行研究。然而，本发明人尝试了使用从以往的技术常识考虑为非常低的振动频率来实际地对皮肤给与物理刺激时，惊奇地发现即使是这样低的振动频率的温和的刺激，也实现了良好的效果。
在EMS设备等中，也市售有低中频率的装置，但这些装置被特别地设计为在肌肉、皮下脂肪等的深层起作用，如本发明这样的对于皮肤表层的影响不明。另外，这样的装置尽管频率低，但有时在流动电流时也伴随有哔哩哔哩这样的刺激，与对皮肤给与温和的刺激的本发明不同。另一方面，本发明能够实现基于不施加超声波、电流、磁场这样的能量、而直接对皮肤给与伸展或者按压刺激这一简便的方法的美容法。进一步，具有这样的振动频率的伸展或者按压刺激是温和的刺激，并且，如实施例所记载那样对于表皮细胞、真皮细胞都能实现良好的效果。由此，当使用本发明的方法/装置时，不会对皮肤产生恶劣影响，能期待短期地对皮肤的表皮实现美容效果、长期地对真皮实现美容效果。
物理刺激既可以是通过使用了美颜器等器具、实验的装置、人的手、器具的按摩、面部的锻炼实现的，也可以是通过接触或者非接触实现的。在一个技术方案中，可以使用具备产生物理刺激的刺激产生部和通过接触或者非接触给与物理刺激的刺激给与部的设备，对皮肤给与以机械的方式产生的物理刺激。物理刺激例如既可以由拉伸、按压、拍打、揉搓、吸引皮肤这样的接触来实现，以及/或者例如也可以由如超声波、空气压力那样的通过对皮肤给与冲击波来使之位移这样的非接触来实现。作为面部的锻炼，可以进行使脸颊鼓起来、睁开眼睛等。作为按摩，可举出使用了接受施术的对象自身或者美容人员等的施术人员的手、滚子等的器具的按摩。然而，只要在本发明的物理刺激的范围内，就不被限定。
作为本发明的装置，例如可举出具备与使用者的皮肤接触并给与本发明的物理刺激的皮肤接触部的美容装置。例如也可以是由把持部和皮肤伸展部或者皮肤按压部构成的。例如，图14的左方所记载的装置被设计为通过皮肤接触部与皮肤触碰，使皮肤以特定的振动频率和伸展率进行伸展。
另外，例如也可以为，本发明的装置具备电源、刺激产生部以及皮肤刺激部，电源产生电信号，刺激产生部将来自电源的电信号变换为物理性的刺激来产生物理刺激，皮肤刺激部接受由刺激产生部产生的物理刺激，对使用者的皮肤给与物理刺激。
例如，图14的左方所示的装置具备把持部、电源、对物理性的刺激进行控制的控制部、刺激产生部、包括皮肤刺激部和皮肤固定部的皮肤接触部。设计为：使用者对把持部进行保持来将皮肤接触部抵接于皮肤，使得通过皮肤固定部对皮肤进行固定，通过对控制部进行操作，来自电源的电信号被通过刺激产生部变换为物理性的刺激，物理刺激传至皮肤刺激部，皮肤在被固定于皮肤固定部的同时，通过皮肤刺激部而被以特定的振动频率和伸展率进行伸展。例如也可以为刺激产生部由马达等进行驱动，将电信号变换为物理刺激。另外，图14左方所记载的皮肤刺激部对皮肤给与伸展刺激，例如也可以为对皮肤给与按压刺激。
或者，本发明的装置也可以是美容装置，该美容装置具备电源、对物理性的刺激进行控制的控制部、刺激产生部、由片状的材料构成的包括皮肤接触面的皮肤接触部。作为例子，在图14的右方示出这样的美容装置的皮肤接触部。片状的材料也可以为能够流动电流，将来自电源的电信号变换为物理性的刺激的材料。作为那样的片状的材料，可举出介电弹性体致动器(DEA)、导电聚合物、IPMC、PVC凝胶、Mckinnen型材料等。
本发明的装置的电源既可以是内部电源或者外部电源，也可以是充电式电源。另外，本发明的装置例如既可以是使用保存于移动电话、云等的数据的装置，也可以是被以无线的方式进行远程操作的装置。
物理刺激也可以是通过给与如上述那样的接触或者非接触的物理性的刺激来实现皮肤的伸展或者按压的物理刺激。物理刺激既可以沿着平行方向、即横向对皮肤表面进行施加，也可以沿着垂直方向、即纵向对皮肤表面进行施加，或者可以采用倾斜方向、扭斜方向等任意方向。
进行物理刺激的周期数不被限定。例如，也可以进行2～500个周期、10～500个周期、20～400个周期、30～300个周期、40～200个周期、50～100个周期这样的任意数量的周期。例如，如实施例所记载的那样，也有时进行27个周期就足够了。
进一步，也可以将这些任意数量的周期作为1组，进行任意数量组、例如1～100组、2～50组或者3～10组的该组。
进行物理刺激的时间也不被限定。例如，也可以设置或者不设置停止时间地反复进行周期而进行5分钟～3小时、10分钟～2小时、30分钟～1小时这样的一定时间。
周期之间或者组之间的时间间隔也不被限定。例如，伸展或者按压刺激，既可以单独地进行1组或者多组，也可以每天、每2天、每3天、每4天、每5天、每6天、每7天进行一次的1组或者多组、每1周、每2周、每3周、每4周进行一次的1组或者多组等地以连续的方式或者断续的方式定期地或者不定期地进行。
然而，只要实现足以发挥皮肤抗老化作用的刺激，则不限定为如上述那样的振动频率、伸展率、周期数、频度。进行物理刺激的波形也可以设定为矩形波、正弦波、三角波、锯齿波等任意波形。
应用本发明的方法的对象，既可以是客观上或者主观上认为皮肤老化的对象，也可以是希望预防皮肤老化的对象。例如也可以为被判断为了透明质酸等的皮肤构成成分不足的对象。在一个实施方式中，也可以是将角层细胞中的YAP的行为以及/或者肌动蛋白纤维的构造作为指标而判断为了皮肤老化度高的对象。例如，在伸展角化细胞中进行了测定的情况下，也可以是判断为了具有核定位YAP的细胞数相对于全部角化细胞数的比例以及/或者具有肌动蛋白应力纤维的细胞数相对于全部角化细胞数的比例低的对象。或者，也可以是介意皮肤的老化、例如色斑、皱纹、松弛、暗淡、毛孔明显、或者光滑度、紧绷、弹力感、光泽、弹力降低等的对象。色斑、皱纹、松弛、暗淡、毛孔明显、光滑度、紧绷、弹力感、光泽、弹力等能够通过视感判定、主观的或者客观的评价、使用皮肤弹性测试仪的值等公知的指标来进行决定。
皮肤抗老化也可以通过测定具有核定位YAP的角化细胞数相对于全部角化细胞数的比例来进行决定。对于核定位YAP的有无，能够如实施例所记载的那样，通过对细胞内的YAP进行染色，用显微镜对处于核或者细胞质的内在性YAP进行观察、拍摄，使用图像处理解析软件用荧光强度的程度对核内YAP与细胞质内YAP之比进行数值化，从而决定该核定位YAP的有无。或者，也能够通过非专利文献6、非专利文献7所记载的方法进行测定。具有核定位YAP的角化细胞数相对于全部角化细胞数的比例通过上述式2来算出。例如，也可以对在如上述那样的方法中确定为了具有核定位YAP的细胞的数量进行计数，例如对通过DAPI、Hoechst33342等的核染色染上了核的细胞进行计数来作为全部细胞数，通过式2进行算出。
在一个实施方式中，YAP的核定位是指：对于角化细胞中的内在性的YAP，其总表达量的增减在实施前后保持在2倍以下的范围内，作为转录共活化因子而定位于核。这是因为从非专利文献3～5确认到：使YAP的阻碍因子缺失，即使使YAP的核定位得到促进，也未引起蛋白量等级的表达量的显著性的亢进(例如在非专利文献5中，YAP的蛋白量为平均2倍以下)。
YAP是指Yes-associated protein，是有时被称为YAP1、YAP65等的约65kDa的蛋白质。YAP被报告了作为转录调节因子发挥功能、参与细胞增殖、细胞凋亡等、与干细胞(巢)的维持、建立、肿瘤、癌的产生有关联等。YAP当存在于细胞质时会被分解，但当转移到核内时会活性化而对转录进行调节。这样的YAP的定位也被报告了与细胞外基质的硬度、细胞密度、细胞增殖、自我复制等有关联(非专利文献11～13)。
另外，已知作为YAP上游因子的肌动蛋白的细胞质中的应力纤维形成与YAP核定位具有相关性、且积极地参与YAP核定位。由此，本发明的皮肤抗老化也可以将角化细胞中的肌动蛋白应力纤维的有无决定为指标。例如，皮肤抗老化也可以通过对具有肌动蛋白应力纤维的角化细胞数相对于全部角化细胞数的比例进行测定来决定。对于肌动蛋白应力纤维的有无，如实施例所记载的那样，通过交联了荧光化合物的鬼笔环肽(phalloidin)对肌动蛋白纤维进行染色，在即使是具有一个存在于细胞质中、核周边的肌动蛋白应力纤维的情况下，也能够决定为具有肌动蛋白应力纤维。或者，也能够通过非专利文献9、非专利文献10所记载的方法来进行测定。具有肌动蛋白应力纤维的角化细胞数相对于全部角化细胞数的比例通过上述式3来算出。例如也可以对通过如上述那样的方法确定为了具有肌动蛋白应力纤维的细胞的数量进行计数，例如如上述的那样通过DAPI染色对全部细胞数进行计数，通过式3来算出。
在一个实施方式中，具有肌动蛋白应力纤维的角化细胞是指不伴随有肌动蛋白表达量的亢进而形成了肌动蛋白应力纤维的角化细胞。这是由于如非专利文献8所记载的那样，即使YAP的有无、YAP的存在位置(核、细胞质等)不同，也没有肌动蛋白量的变动。
因此，本发明的皮肤抗老化例如有时也意味着：通过本发明的方法/装置，对向皮肤试料给与了伸展刺激后的角化细胞中的具有核定位YAP或者肌动蛋白应力纤维的细胞数相对于全部角化细胞数的比例的降低进行抑制。抑制例如也可以是将显著水平设为了5％的具有统计学的显著差异(例如学生t检验)的上述比例的降低的抑制以及/或者例如10％以上、20％以上、30％以上、40％以上、50％以上、60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、100％的抑制。
已知核定位YAP和肌动蛋白应力纤维间接或者直接地在细胞增殖和自我复制中作用(非专利文献11)。另一方面，明确了定位于核外或者细胞质的YAP、在细胞质中分解的YAP或者肌动蛋白应力纤维的不形成参与因细胞死亡、分化而被从细胞集团排除掉的机构(非专利文献12)。根据对皮肤的角化细胞和各种各样的细胞种类的研究的见解，启示了具有YAP不定位于核、未形成肌动蛋白应力纤维这样的现象的角化细胞是自身的增殖维持、自我复制能力低的、老化或者分化那样的细胞(非专利文献13)。另外，在本申请实施例中，通过本发明的方法/装置，核定位YAP保持能力弱或者肌动蛋白应力纤维形成能力弱的老化角化细胞的数量显著地减少了。因此，不受理论的约束，本发明的方法/装置启示了选择性地排除如上述那样的老化角化细胞，促进选择核定位YAP保持能力或者肌动蛋白应力纤维形成能力被保持了的“年轻”角化细胞以及它们之后的再活性化、细胞增殖。也就是说，考虑在通过对皮肤给与本发明中特定的物理刺激而伸展了的角化细胞中，选择性地排除YAP未定位于核或者未形成肌动蛋白应力纤维的角化细胞，并选择性地留下YAP定位于核的角化细胞、具有肌动蛋白应力纤维的角化细胞，结果，有可能使角化细胞增殖或者自我复制。也就是说，考虑本发明的方法/装置通过给与物理刺激，而选择性排除老化角化细胞，并且，选择增殖、自我复制的角化细胞，其结果，有可能促进角化细胞的增殖、恢复。
在此，在对具有核定位YAP或者肌动蛋白应力纤维的细胞数进行测定时，优选对皮肤试料给与伸展刺激等物理刺激。测定皮肤老化度、皮肤抗老化作用时的物理刺激既可以与在本发明的抗老化方法/装置中使用的物理刺激相同，也可以不同，不被限定，只要实现足以测定皮肤老化度的刺激即可。例如，也可以通过对生物体的皮肤、采集后的皮肤或者培养角化细胞这样的皮肤试料给与基于拉伸、按压、拍打、揉搓、吸引这样的接触以及/或者例如通过如超声波、空气压力那样的方式对皮肤给与冲击波来使之位移这样的非接触的物理性的刺激，从而实现皮肤试料的伸展，给与物理刺激的方向也不被限定。
代替性以及/或者追加性地，皮肤抗老化作用有时也意味着通过本发明的方法/装置实现的真皮中的透明质酸量的增加。增加例如也可以是将显著水平设为了5％的具有统计学的显著差异(例如学生t检验(Student's t test))的透明质酸的增加以及/或者例如10％以上、20％以上、30％以上、40％以上、50％以上、60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、100％以上的增加。
代替性以及/或者追加性地，皮肤抗老化作用有时也意味着通过本发明的方法/装置实现的、皮肤粘弹性、紧绷、弹力感、光泽、光滑度、毛孔不明显度、无暗淡度这样的指标的增加。皮肤粘弹性、紧绷、弹力感、光泽、光滑度等能够通过皮肤弹性测试仪、主观性的或者客观性的指标来进行测定。增加例如也可以是将显著水平设为了5％的具有统计学的显著差异(例如dunnett’s test、wilcoxon的带符号顺位检验)的增加以及/或者例如10％以上、20％以上、30％以上、40％以上、50％以上、60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、100％以上的增加。
本发明的方法以及装置能够在实现对表皮这样的浅层好的作用的同时，预防、改善皮肤老化。例如，能够改善角化细胞中的YAP的行为、肌动蛋白纤维的构造，特别是能够抑制对皮肤给与了物理刺激时的具有核定位YAP、肌动蛋白应力纤维的细胞数相对于全部角化细胞的比例的减少或者恢复之后的增加。进一步，也能够带来真皮中的透明质酸的增加、皮肤粘弹性、如上述那样的主观性的或者客观性的指标的增加。
另外，本发明的用于皮肤抗老化的方法/装置也可以与其他处置并用。作为其他处置，例如可举出光刺激、电刺激、机械刺激、人手的刺激这样的刺激的应用、抗老化剂的投与、化妆材料的涂敷等，但不限定于那些。抗老化剂既可以是天然或者化学性地合成的化合物，也可以是动植物的提取物，还可以是单体或混合物、或者含有在水溶液等溶剂中的状态、化妆材料等的形态。另外，抗老化剂的投与路径能够任意地进行选择，例如可举出经口投与、经皮投与、皮下投与、经粘膜投与、肌肉内投与等。
本发明的用于皮肤抗老化的方法/装置也可以是以美容、医疗、压力缓解、放松等为目的的方法/装置。在某实施方式中，本发明的用于皮肤抗老化的方法/装置以美容为目的，有时不是医生、医疗从业者使用的治疗方法/装置。另外，本发明也提供包括向对象提示本发明的美容方法/装置的、进行对象的美容行为的辅助的美容咨询方法。
在本说明书中引用的全部文献的整体通过引用而被援用于本说明书。
实施例
接着，通过实施例对本发明进一步进行详细的说明。本发明的实施例仅以例示为目的，并不限定本发明的技术范围。本发明的技术范围仅由权利要求书的记载来限定。以不脱离本发明的宗旨为条件，能够进行本发明的变更、例如本发明的构成要件的追加、删除以及置换。
实验1：由老化引起的角化细胞的体外(in vitro)的变化
试料：使用了从KAC公司购入的来自年龄不同的供体(0岁、18岁、44岁、64岁)的单层培养角化细胞和成纤维细胞培养物。
伸展条件：使用Menicon Life Science公司制的ShellPa，对上述的角化细胞和成纤维细胞给与了伸展刺激。以如图1的下图中央所记载那样的10％的伸展率进行了伸展刺激。周期如图1的上图左方所记载的那样，以0.33％/s的伸展速度向一个方向拉伸培养腔室，使细胞伸展到了10％的伸展率。然后，维持5分钟期间的伸展状态，以0.33％/s的恢复速度使细胞回到了原来的非伸展状态。将此作为1个周期，进行了3小时的合计27个周期。周期间的停止时间设为了0～10秒。
观察方法：如以下那样通过荧光抗体染色法观察了非伸展刺激以及伸展刺激后的细胞内YAP。细胞中的YAP使用抗YAP抗体(Santa Cruz Biotechnology，YAP抗体(63.7)：sc-101199)，肌动蛋白纤维使用交联了荧光化合物的鬼笔环肽(Thermo Fisher Scientific，Alexa Fluor TM 488Phalloidin：A12379)来进行检测，通过共焦激光显微镜(ZEISS，LSM700)进行了观察以及图像取得。另外，使用图像处理解析软件ImageJ，用荧光强度的程度对YAP的核与细胞质比进行了数值化。算出核与细胞质的荧光强度比(核内YAP的荧光强度/细胞质内YAP的荧光强度)，将该值≥1的细胞作为具有核内YAP的细胞来对其细胞数进行了计数。对于全部细胞数，使用DAPI(Vector Laboratories，VECTASHIELD MountingMedium with DAPI：H-1200)进行染色，对染上了核的细胞的数量进行计数，按照式2算出了具有核定位YAP的细胞数的比例。另外，将即使只包括一个位于细胞质中、核周边的肌动蛋白应力纤维的细胞作为具有肌动蛋白应力纤维的细胞进行计数，同样地对全部细胞数进行计数，按照式3算出了具有肌动蛋白应力纤维的细胞数的比例。
结果：
将角化细胞的显微镜照片表示于图2a、图2b。如根据这些图可知那样，在从低年龄层的供体(0岁、18岁)得到的角化细胞中，在有无伸展刺激的任何条件下，都几乎在全部细胞中，YAP定位于核，但在从中高年龄层的供体(44岁、64岁)得到的角化细胞中，当给与伸展刺激时，具有核定位YAP的细胞数急激地减少了。图3表示角化细胞中的具有核定位YAP的细胞数的比例。在低年龄层中，具有核定位YAP的细胞的数量未发现变化，但在高龄者的角化细胞中显著性地减少了。然而，虽然锐减了，但具有核定位YAP的细胞数不成为零而是以一定比例存在。在表示角化细胞中的具有肌动蛋白应力纤维的细胞数的比例的图4中，在低年龄层中，具有肌动蛋白应力纤维的细胞的数量未发现变化，在高龄者的角化细胞中，显著性地减少而几乎未发现该细胞。另一方面，在成纤维细胞中，如图5所示，在有无伸展刺激的条件下，YAP、肌动蛋白应力纤维未发现变化，也几乎未看出年龄差。
实验2：由老化引起的角化细胞的离体的变化
试料：使用了从Genoskin公司得到的离体人腹部皮肤组织片(Native Skin、12well size、直径约1cm)。组织片为38岁的人的组织片。
伸展条件：制作了如图6所示那样的塑料制的按压部。调整为了：按压部的底面从试料的上部垂直地按下以使得按压于试料的上表面，皮肤被以0.1％以下的伸展率进行伸展。如图7所示，以10％/s的速度进行这样的按下运动，然后，保持按压部而维持10秒期间的伸展状态，以10％/s的速度抬起，恢复为原来的非伸展状态，在下一按下运动之前停止了10秒期间。将此作为1个周期，在30分钟期间进行了90个周期。将该90周期作为1组，在组间设置30分钟～1小时的停止时间来进行了合计3组的按下运动(合计270个周期)。
观察方法：在有无伸展刺激的条件下，通过与实验1同样的方法对YAP以及DAPI进行了染色、观察以及图像取得。
结果：
在实验1中观察到的由老化引起的YAP的行为的变化在离体的试料中也同样地被观察到。如图8中可看到的那样，在从中高年龄层的供体(38岁)得到的离体皮肤模型中，当给与伸展刺激时，在表皮内的角化细胞中观察到了许多核定位YAP减少、未被染色的部分。特别是在基底层附近，这样的变化显著。
实验3：通过伸展刺激实现的角化细胞中的体外(in vitro)的效果
试料：与实验1相同地使用了中高年龄层的供体(44岁)的角化细胞的单层培养物。
伸展条件：与实验1相同地给与了伸展刺激。也就是说，给与了在实验1中所进行的27个周期的伸展刺激的组。但是，在从给与3小时的由27个周期构成的1组伸展刺激后起经过了12～24小时之后，对试料进一步给与相同的伸展刺激而进行了合计2组。
观察方法：与实验1同样地对非伸展刺激以及伸展刺激后的YAP进行了染色。另外，使用BrdU作为增殖标记，使用抗BrdU抗体(Abcam，Anti-BrdU抗体[BU1/75(ICR1)]：ab6326)，通过荧光抗体法进行了染色。进行6小时的BrdU的处理，在7天后使用4％多聚甲醛来以4℃固定了24小时。使用共焦激光显微镜(ZEISS，LSM700)对进行了固定的试料进行了观察以及图像取得。
将结果表示于图9。在第1次的伸展刺激中，与实验1同样地，在伸展刺激前后，具有核定位YAP的细胞数存在了较大的变化。BrdU也与核定位YAP同样地通过伸展刺激而发生了锐减。另一方面，在从第1次的伸展刺激起24小时后给与了第2次的伸展刺激的情况下，核定位YAP和BrdU在非伸展刺激条件和二次伸展刺激条件之间未被观察到较大的变化，或者稍稍增加。启示了核定位YAP与增殖细胞具有某种关联性，并且，启示了与一次伸展刺激相比，给与两次伸展刺激之后的细胞的具有自我复制能力的细胞增加，恢复或者维持了与非伸展或者低年龄的角化细胞同样的细胞增殖能力。虽不受理论约束，但认为有可能通过第1次的伸展刺激，利用促进增殖维持、自我复制能力低的老化角化细胞的细胞死亡、使其剥落这样的某种机构，选择性地排除老化角化细胞，选择性地留下增殖维持、自我复制能力高的呈现核定位YAP的细胞，由此，促进了角化细胞的增殖、恢复。
实验4：通过伸展刺激实现的表皮中的离体(ex vivo)的效果
试料：使用了从Genoskin公司购入的中高年龄层的供体(42岁)的离体人腹部皮肤组织片(NativeSkin、6well size、直径约2～2.5cm)。
伸展条件：制作了一种伸展器具，其具有如图10所示那样的把持井(well)内的皮肤的两端的把持部，通过拉拽把持部，使皮肤伸展。将放入了上述组织片的井设置为水平，对把持部进行操作来从两端使皮肤伸展，如图7所示，以10％/s的速度进行成为10％的伸展率的伸展，以10％/s的恢复速度使试料恢复为了原来的非伸展状态。将此作为1个周期，用30分钟进行了合计90个周期。将该90周期作为1组，在组间设置30分钟～1小时的停止时间来进行了合计3组(合计270个周期)。在从给与3小时的该3组的伸展刺激后起经过了12～24小时之后，对试料进一步连续2天进行了两次相同的3组伸展刺激。
观察方法：对非伸展刺激第0天、刚伸展刺激后(同为第0天)，在培养了1周的非伸展刺激、进行了伸展刺激处理的皮肤组织之后，进行与实验1同样的YAP和DAPI处理，进一步使用Ki67作为增殖标记，使用抗Ki67抗体(Abcam，Anti-Ki67抗体[SP6]：ab16667)进行染色，通过与实验1同样的步骤进行了观察以及图像取得。
在图11示出非伸展刺激第0天和刚伸展刺激后(同为第0天)的状况。具有YAP的基底层的表皮细胞减少，增殖标记Ki67在刚拉伸后增加。虽不受理论约束，但也认为有可能通过伸展刺激促进了细胞增殖和之后的细胞分化的过程。在图12中示出在连续2天给与了两次的伸展刺激之后进行了1周的培养之后的状况。在伸展前，不仅基底层，在表皮细胞整体也发现了YAP。YAP通常多被发现在基底层，但在进行了1周的培养的皮肤中，在所有层观察到YAP。虽不受理论约束，但也认为有可能在非伸展的皮肤组织中，由于细胞老化，例如在表皮内的各层中的细胞增殖、细胞分化发生某些异常，YAP的分布发生了变化。然而，在两次的伸展刺激后，YAP的发现分布被维持为在基底层。虽不受理论约束，但也认为有可能通过物理刺激，表皮中的细胞增殖、细胞分化的稳态(homeostasis)被活化、维持，结果，YAP的分布即使1周的培养后也维持了初始的新鲜皮肤组织的通常状态。
实验5：通过伸展刺激实现的真皮中的离体(ex vivo)的效果
试料以及伸展条件：使用了与实验4相同的从Genoskin公司购入的中高年龄层的供体(44岁)的离体人腹部皮肤组织片(NativeSkin、6well size、直径约2～2.5cm)。连续2天进行了两次作为与实验4相同的伸展的3组伸展刺激。
观察方法：观察了伸展刺激前、伸展刺激后培养1周之后的DAPI、透明质酸(HOKUDO，Biotin-HABP：BC41)、胶原蛋白(Merck Millipore，Anti-human COL1N-terminalantibody：MAB1912)。DAPI与实验1同样地，透明质酸、胶原蛋白通过荧光抗体法进行染色，通过共焦激光显微镜(ZEISS，LSM700)进行了观察以及图像取得。
将结果表示于图13。在给与了伸展刺激的情况下，真皮中的透明质酸增加了。示出了：通过伸展刺激不仅促进表皮细胞的增殖，对真皮也给与了好的影响。
实验6：通过伸展刺激实现的体内(in vivo)的效果
被实验者：选定了健康的30～50多岁的17名女性。
伸展条件：使用了图14左方所记载的伸展装置。该装置被设计为：由图14左方的箭头所示的皮肤接触部与皮肤接触，通过在皮肤固定部将皮肤固定的同时，在最大约5mm的范围中适当地设定皮肤伸展部对于皮肤的垂直方向压入量，使得水平方向的伸展率成为0.1～20％，使皮肤以1.2Hz的振动频率进行伸展。被实验者通过对半个面部应用该装置，在10天期间进行了每天给与30分钟的伸展刺激的操作。
测定方法：对在实验开始后第3天和第10天给与了伸展刺激(treated)以及未给与伸展刺激(control)的各半个面部的皮肤状态进行了测定。对于皮肤状态的计测，通过Delfin Technologies公司的经皮水分流失测量仪测定经皮水分蒸腾量(TEWL)，通过Courage+Khazaka公司的皮肤水份测试仪(CM825)测定皮肤水分量，通过Courage+Khazaka公司的皮肤弹性测试仪(SEM575)测定皮肤粘弹性，从而进行了计测。对于所得到的数据，通过在dunnett’s test中分别与第0天的值进行比较，进行了统计处理(***：p<0.005，**：p<0.01，*：p<0.05)。
进一步，被实验者通过用5级评价按如下所示的各评价项目记入给与伸展刺激前和10天后的脸颊的印象，进行了主观性的评价。
[表1]
Figure BDA0003308228800000231
Figure BDA0003308228800000232
主观性的评价的结果，通过wilcoxon的带符号顺位检验进行了统计处理(***：p<0.005，**：p<0.01，*：p<0.05)。
结果：将结果表示于图15a～图15c。如图15a所示，TEWL和皮肤水分量均没有通过伸展刺激实现的变化，但如图15b所示，在皮肤弹性测试仪的测定中可知R0值显著性地增加，皮肤粘弹性改善了。在R2值和R7值中也观察到该倾向。另外，如图15c所示可知：外观和触感中，被实验者均实际感受到皮肤状态得到了改善。
实验7：通过按压刺激实现的离体的效果
试料：使用了与实验4相同的从Genoskin公司购入的中高年龄层的供体(44岁)的离体人腹部皮肤组织片(NativeSkin、6well size、直径约2～2.5cm)。
按压条件：使用了介电弹性体致动器(住友理工株式会社制：SRHP074-001)。如图16的左上方所记载那样，通过将该介电弹性体致动器施加至上述皮肤组织片，反复进行收缩和扩张，在图16的下部所记载的条件下以0.5Hz、5Hz、或者50Hz的振动频率在1天或者5天期间给与了各种波形的0～100μm的按压刺激。
观察方法：通过与实验4同样的方法观察了按压刺激前、按压刺激后的DAPI、Ki67。
结果：
将结果表示于图17、18。示出了：在未给与按压刺激的情况下(Cont：无声(silent))，第5天的Ki67的数量比第1天的该数量减少，但在给与了按压刺激的情况下(0.5Hz/100μm：矩形波(square))，第5天的表皮细胞的Ki67的减少得到抑制，通过按压刺激抑制了表皮细胞的增殖抑制。另外，按压刺激为0.5Hz左右的低振动频率呈现了比5Hz、50Hz的情况高的效果。此外，图17、18的结果表示了矩形波的情况(square)，但即使是在正弦波(sin)的情况下，也得到了同样的结果。
实验8：通过按压刺激实现的体内(in vivo)的效果
被实验者：选定了健康的30～50多岁的17名女性。
伸展条件：使用了图19所记载的按压装置、介电弹性体致动器(住友理工株式会社制：SRHP074-001)。该装置被设计为：通过图19的上方所示的装置的皮肤接触部以10gf的力压下皮肤，以5Hz的振动频率、100μm的深度对皮肤给与图19的下方所示的矩形波的按压刺激。如图19所示，对被实验者的前臂内侧部应用了该装置，在5天期间进行了每天给与30分钟的按压刺激的操作。
测定方法：进行了实验开始前、在第7天给与了按压刺激以及未给与按压刺激的前臂内侧部的皮肤状态的测定。对于皮肤状态的计测，通过Delfin Technologies公司的经皮水分流失测量仪测定经皮水分蒸腾量(TEWL)，通过Courage+Khazaka公司的皮肤水份测试仪(CM825)测定皮肤水分量，通过Courage+Khazaka公司的皮肤弹性测试仪(SEM575)测定皮肤粘弹性，从而进行了该计测。
结果：将结果表示于图20a～图20c。TEWL和皮肤水分量均没有由按压刺激引起的变化，但皮肤弹性测试仪的结果，当未给与按压刺激，R0值在第7天显著性地减少了，但通过给与按压刺激，该减少得到抑制，看到了粘弹性的改善。
实施了本申请发明的物理刺激的皮肤，启示了通过伸展刺激实现的老化细胞的选择性的排除、且具有核定位YAP、肌动蛋白应力纤维的角化细胞的选择性的保持。另外，也得到了启示那些所选择的具有核定位YAP、肌动蛋白应力纤维的角化细胞的细胞增殖的结果。进一步，不仅是角化细胞所存在的表皮，真皮中的透明质酸的量也增加了。也就是说，启示了：当使用本发明的美容方法/装置时，不仅是表皮，对于包括真皮这样的部分的皮肤也能实现抗老化作用。实际上，当以体内(in vivo)的方式对人应用本发明的美容方法/装置时，改善了皮肤的粘弹性、紧绷、光泽、暗淡、光滑度这样的外观和触感。

Claims (8)

1.一种美容方法，是用于对象的皮肤抗老化的美容方法，包括对皮肤应用微弱的物理刺激的步骤，
在此，该步骤例如包括给与对象的皮肤物理刺激，所述物理刺激是以60Hz以下的振动频率进行包括(a)和(b)以及/或者(a－1)和(b－1)的周期，
所述(a)为：使所述对象的皮肤伸展到0.1％以上且50.0％以下的伸展率，
所述(b)为：使所述对象的皮肤从伸展状态恢复，
所述(a－1)为：将所述对象的皮肤按压1μm～1000μm，
所述(b－1)为：使所述对象的皮肤从按压状态恢复，
在此，伸展率通过如下式1来算出，
Figure FDA0003308228790000011
式中，定点A和定点B是表皮或者表皮附着的基质上的任意位置，在此，通过定点A和定点B的直线与伸展方向平行。
2.根据权利要求1所述的美容方法，
进行1组或者多组的进行2～500个周期的所述周期的组。
3.根据权利要求1或者2所述的美容方法，
所述皮肤抗老化是指：在测定了具有核定位YAP的细胞数相对于全部角化细胞数的比例来作为指标的情况下，在对皮肤应用了所述美容方法之后，在伸展角化细胞中测定的具有核定位YAP的细胞数的比例比应用所述美容方法之前的该比例增加，在此，具有核定位YAP的细胞数的比例通过如下式2来算出，
Figure FDA0003308228790000012
4.根据权利要求1或者2所述的美容方法，
所述皮肤抗老化是指：在测定了具有肌动蛋白应力纤维的细胞数相对于全部角化细胞数的比例来作为指标的情况下，在对皮肤应用了所述美容方法之后，在伸展角化细胞中测定的具有肌动蛋白应力纤维的细胞数的比例增加，在此，具有肌动蛋白应力纤维的细胞数的比例通过如下式3来算出，
Figure FDA0003308228790000021
5.一种美容装置，是用于皮肤抗老化的美容装置，
所述装置具备：
刺激产生部，其产生物理刺激；和
刺激给与部，其给与皮肤由刺激产生部产生的物理刺激，
在此，该装置是用于进行对皮肤应用微弱的物理刺激的步骤的装置，在此，该步骤例如是以60Hz以下的振动频率进行包括(a)和(b)以及/或者(a－1)和(b－1)的周期，
所述(a)为：使皮肤伸展到0.1％以上且50.0％以下的伸展率，
所述(b)为：使所述对象的皮肤从伸展状态恢复，
所述(a－1)为：将所述对象的皮肤按压1μm～1000μm，
所述(b－1)为：使所述对象的皮肤从按压状态恢复，
在此，伸展率通过上述式1来算出。
6.一种美容方法，用于皮肤抗老化，包括：
将权利要求5所述的美容装置应用于对象的皮肤。
7.根据权利要求1～4和6中任一项所述的美容方法，用于增加皮肤中的透明质酸。
8.一种美容咨询方法，进行对象的美容行为的辅助，包括：
向对象提示权利要求1～4、6以及7中任一项所述的美容方法或者权利要求5所述的美容装置。
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