CN113777322A - 一种粪便钙卫蛋白检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种粪便钙卫蛋白检测试剂盒及其制备方法，包括PVC底板，PVC底板上由左到右依次搭接设置有样品垫、胶体金标记垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；硝酸纤维素膜内含有从左到右依次分布设置的检测线T、对照线R和质控线C，对应的检测线T、对照线R和质控线C处分别在硝酸纤维素膜上形成检测区T、对照区T和质控区C；样品垫右侧端部搭接于胶体金标记垫的左侧端部上侧，胶体金标记垫右侧端部搭接于硝酸纤维素膜的左侧端部上侧，吸水纸左侧端部搭接于硝酸纤维素膜的右侧端部上侧；整体操作简单、性能可靠，实现快速准确的半定量检测粪便钙卫蛋白，直观地判断出样品中钙卫蛋白比阈值的高低，成本低廉、适于临床快速检测。

Description

一种粪便钙卫蛋白检测试剂盒及其制备方法

【技术领域】

本发明涉及医疗检测技术，尤其是一种粪便钙卫蛋白检测试剂盒及其制备方法。

【背景技术】

钙卫蛋白(Calprotectin)是一个分子量为36kD的钙、锌结合蛋白，由两条分子量为14kD的重链和一个分子量为8kD的轻链以共价键连接的钙结合蛋白质异三聚体组成，每条链可结合两个Ca2+，从而具有耐热性和增强水解性的特性，其蛋白结构是由2个亚单位S-100A8和S-100A9组成的复合物。它分布于人体的粒细胞、单核细胞、上皮细胞、角化细胞和各种组织及体液中，是保护性蛋白。

目前虽然钙卫蛋白在人类生物体中多处被发现，包括：血清、唾液、脑脊液和尿液。但在粪便中容易测得，且其成分稳定，室温下可在大便中稳定存在7d左右，且不易被细菌和各种酶类破坏，不受饮食的影响。粪便钙卫蛋白(Faecal Calprotectin，FC)测定具有无创伤性、操作简便、痛苦小、价格便宜等优点，临床实用性较强。

国外学者研究炎症性肠病(IBD)与粪便钙卫蛋白(FC)指标相关性中指出，粪便钙卫蛋白(FC)＞120ug/g时，炎症性肠病(IBD)复发风险的灵敏度为80％，特异性为60％。在克罗恩病(Crohn’s Disease，CD)患者中粪便钙卫蛋白(FC)平均水平为175(44～938)ug/g，在溃疡性结肠炎 (Ulcerative Colitis，UC)患者中粪便钙卫蛋白(FC)平均水平为465(61～1128)ug/g，在其他肠病患者中，肠易激综合征(Irritable Bowel Syndrome， IBS)患者中FC平均水平为54(16～1128)ug/g。粪便钙卫蛋白(FC)水平与炎症性肠病(IBD)内镜活动水平显著相关，并且证实在疾病的活动期和缓解期均有意义。目前粪便钙卫蛋白(FC)是反应炎症性肠病(IBD)患者肠道黏膜炎症水平最好的检测指标。如果内镜检查基于粪便钙卫蛋白(FC) 基础上，对疑似炎症性肠病(IBD)患者内镜检查的会下降到32％，减少不必要的肠镜检查。

国内学者也进行大量临床研究，证实溃疡性结肠炎(UC)活动期患者粪便钙卫蛋白(FC)水平比结肠息肉和正常人显著增高。粪便钙卫蛋白(FC) 水平数值的高低可以反映出肠粘膜的病变情况与患者疾病严重程度。李晓光等人的研究表明，当粪便钙卫蛋白大于50ug/g为界定值，大肠癌组的阳性率为85％，慢性炎症组阳性率为91.7％；计春燕等人的研究表明，粪便钙卫蛋白(FC)中位数从高到低依次为感染性腹泻组(中位数515.21ug/g)、大肠癌组(中位数162.47ug/g)、D-IBS组(中位数35.02ug/g)和正常对照组 (中位数25.18ug/g)，得出粪便钙卫蛋白(FC)≥70ug/g时，应高度疑诊断为感染性腹泻或者结肠肿瘤可能，结合患者临床病史，即可作出感染性腹泻或结肠肿瘤初步诊断。

但是，目前市场上主要以ELISA方法检测粪便钙卫蛋白，ELISA方法对仪器及操作的要求制约了推广使用，因此，在结果判断上，如何借助仪器使用ELISA试剂实现一定程度上的定量分析，是目前检测粪便钙卫蛋白(FC) 迫切需要解决的一个技术难题。

【发明内容】

本发明提供一种操作简单、性能可靠，实现快速准确的半定量检测粪便钙卫蛋白，直观地判断出样品中钙卫蛋白比阈值的高低，成本低廉、适于临床快速检测的粪便钙卫蛋白检测试剂盒及其制备方法。

为达到上述发明目的，采用的技术方案如下：

一种粪便钙卫蛋白检测试剂盒，包括PVC底板，所述PVC底板上由左到右依次搭接设置有样品垫、胶体金标记垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；

所述硝酸纤维素膜内含有从左到右依次分布设置的检测线T、对照线R 和质控线C，对应的检测线T、对照线R和质控线C处分别在硝酸纤维素膜上形成检测区T、对照区T和质控区C；

所述样品垫右侧端部搭接于所述胶体金标记垫的左侧端部上侧，所述胶体金标记垫右侧端部搭接于硝酸纤维素膜的左侧端部上侧，所述吸水纸左侧端部搭接于硝酸纤维素膜的右侧端部上侧；

所述胶体金标记垫的左侧端部位于样品垫的内侧，所述硝酸纤维素膜的左侧端部位于胶体金标记垫的内侧，所述硝酸纤维素膜的右侧端部位于吸水纸的内侧。

进一步地，所述胶体金标记垫的材质为玻璃纤维素膜。

进一步地，所述样品垫的材质为聚酯膜或玻璃纤维素膜。

进一步地，所述样品垫、胶体金标记垫、硝酸纤维素膜和吸水纸的条宽均不小于2.5mm。

一种粪便钙卫蛋白检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

A、制备样品垫：

将玻璃纤维平放在玻璃或保鲜膜上，将配好的样本垫处理液适量体积倒在玻璃纤维上，将液体均匀涂布于玻璃纤维上，将涂布好的样本垫放于湿度≤25％环境下，干燥12～24小时，备用；

B、制备胶体金标记垫：

制备胶体金溶液和抗体标记，然后喷涂至玻璃纤维素膜上，干燥，得到胶体金标记垫；

C、制备硝酸纤维素膜：

用包被缓冲液稀释检测线包被抗体、对照线包被物、质控线包被抗体制备成包被工作液，即检测线包被液、对照线包被液和质控线包被液，采用喷膜仪将制备的检测线包被液、对照线包被液和质控线包被液分别包被在硝酸纤维素膜上，形成检测线T、对照线R和质控线C，得到含有检测线T、对照线R和质控线C的硝酸纤维素膜；

D、贴板及切割：

将样品垫、胶体金标记垫、硝酸纤维素膜和吸水纸顺序搭接PVC底板上，并按照规格要求切割成条宽不小于2.5mm。

进一步地，所述步骤A中的样本垫处理液由0.3％-0.7％吐温-20、0.3％- 0.7％曲拉通-100、3.5％-4.5％BSA、0.25％防腐剂的pH为8.0的0.05mol/L Tris-HCl缓冲液组成。

进一步地，所述步骤B中，具体包括以下步骤：

a、制胶体金溶液；

b、制备粪便钙卫蛋白胶体金溶液、标记物胶体金溶液；

c、涂布：取玻璃纤维素膜，将适量液体均匀涂布于玻璃纤维上，将涂布好的玻璃纤维进行干燥；

d、胶体金标记垫干燥后，用铝箔袋封存备用。

进一步地，所述步骤B中，胶体金标记垫制备完成后，在其表面上标记具有粪便钙卫蛋白标记抗体和标记物的垫体。

进一步地，所述步骤C中，具体包括以下步骤：

e、按照配方要求配制FC检测线包被抗体、对照线包被物和质控线包被物的溶液，对应分别形成检测线包被液、对照线包被液、质控线包被液，喷量为0.8～1.2ul/cm，最终检测线包被液、质控线包被液浓度为1.0mg/ml，对照线包被液浓度为0.3mg/ml；

f、取已粘贴硝酸纤维素膜的PVC底板，按照距离间隔一次性划出检测线T、对照线R和质控线C；

g、质控线C至硝酸纤维素膜的底端距离为15mm，误差≤±0.5mm；对照线R至硝酸纤维素膜的底端距离为11mm，误差≤±0.5mm；检测线T至硝酸纤维素膜的底端距离为7mm，误差≤±0.5mm；

h、设定干燥温湿度，湿度≤25％、温度≤30℃的环境下干燥，干燥时间为12-24h；

i、将干燥的硝酸纤维素膜放于自封袋密封，备用。

进一步地，所述步骤D中，具体包括以下步骤：

j、检查生产车间湿度，确保湿度≤25％才能开始工作；

k、撕开PVC底板表面的保护纸，将胶体金标记垫黏贴在PVC底板上，让胶体金标记垫的上边缘与硝酸纤维素膜的下边缘重叠1-2mm，将样品垫粘贴在胶体金标记垫的下方，让样品垫的上边缘与胶体金标记垫的下边缘重叠 1-2mm；

1、撕开PVC底板表面的离层纸，将吸水纸直线黏贴到PVC底板上，让吸水纸与硝酸纤维素膜的上边缘重叠2mm；

m、贴隐形胶带，让隐形胶带与硝酸纤维素膜垫的下边缘重叠 1～1.5mm；

n、操作自动斩切机，按要求的宽度切割。

本发明的优点：

本发明采用双抗体夹心法的原理测定粪便样本中是否含有钙卫蛋白，在 PVC底板的上表面依次设置有经过处理的样品垫、包被有胶体金标记的FC 标记抗体和标记物的胶体金标记垫，以及包被有FC检测线包被抗体、对照线包被物和质控线包被物的硝酸纤维素膜和吸水纸；在钙卫蛋白检测试剂盒的硝酸纤维素膜上引入了对照线R，通过检测线T与对照线R色度对比，可以直观地判断出样品中钙卫蛋白比阈值高还是低，从而实现了较准确的半定量，可以达到区分肠道疾病的效果。即通过临床上确定的有重要意义的<15 μg/g、[15μg/g，60μg/g)、≥60μg/g，这几个人粪便钙卫蛋白临介阈值浓度，作为比色卡设置的四个关键的量值，在无需任何仪器下就可以快速检测人粪便中钙卫蛋白的含量。

该钙卫蛋白检测试剂盒既可以用于手工操作，也可以配套粪便分析仪实现自动化去检测，其中，肠易激综合征(irritable bowel syndrome，IBS)症状与炎症性肠病(IBD)症状相似，可以通过检测粪便钙卫蛋白(FC)含量对其进行区分，以避免不必要的内镜检查，通过粪便钙卫蛋白(FC)数值高低就可以决定患者是否需要做内镜检查。

测试时，样本滴入加样处，如样本中含有钙卫蛋白抗原，则钙卫蛋白可与胶体金标记的FC标记抗体结合形成免疫复合物，在层析作用下复合物及样本由下向上移动。当复合物经过检测区T时被固定在膜上的FC检测线包被抗体捕获，在检测区T位置上会出现一条紫红色条带。而且检测区T的显色强度与样本中的钙卫蛋白的含量正相关。无论样本中是否都含有钙卫蛋白，对照区R和质控区C都会出现一条紫红色条带，对照区R出现的条带是判断是否有足够多的样本，质控区的条带是判定层析过程是否正常；而且，该钙卫蛋白检测试剂盒同时也作为试剂检测的内控标准。

【附图说明】

图1为本发明中试剂盒的剖视结构示意图；

图2为本发明中试剂盒的俯视结构示意图；

图3为本发明中样本垫处理液第一配方的测试结果图；

图4为本发明中样本垫处理液第二配方的测试结果图；

图5为本发明中样本垫处理液第三配方的测试结果图；

图6为本发明中第一对照试剂的性能柱线图；

图7为本发明中粪便钙卫蛋白检测试剂盒的测试结果柱状图；

图8为本发明中粪便钙卫蛋白检测试剂盒测试时钙卫蛋白处于正常水平的测试图；

图9为本发明中粪便钙卫蛋白检测试剂盒测试时钙卫蛋白处于正常水平或者可能存在肠易激综合征风险的测试图；

图10为本发明中粪便钙卫蛋白检测试剂盒测试时钙卫蛋白一种状态下可能存在肠炎疾病风险的测试图；

图11为本发明中粪便钙卫蛋白检测试剂盒测试时钙卫蛋白另一种状态下可能存在肠炎疾病风险的测试图；

图12为本发明中粪便钙卫蛋白检测试剂盒测试时表明钙卫蛋白检测结果无效的测试图。

【具体实施方式】

为了让本领域技术人员更加清楚明白本发明所述技术方案，现列举以下实施例进行说明。需要指出的是，以下实施例对本发明要求的保护范围不构成限制作用。

一种粪便钙卫蛋白检测试剂盒，如图1和图2所示，包括PVC底板1， PVC底板1上由左到右依次搭接设置有样品垫2、胶体金标记垫3、硝酸纤维素膜4和吸水纸6；硝酸纤维素膜4内含有从左到右依次分布设置的检测线T8、对照线R7和质控线C5，对应的检测线T8、对照线R7和质控线C5 处分别在硝酸纤维素膜4上形成检测区T、对照区T和质控区C；样品垫2 右侧端部搭接于胶体金标记垫3的左侧端部上侧，胶体金标记垫3右侧端部搭接于硝酸纤维素膜4的左侧端部上侧，吸水纸6左侧端部搭接于硝酸纤维素膜4的右侧端部上侧；即胶体金标记垫3的左侧端部位于样品垫2的内侧，硝酸纤维素膜4的左侧端部位于胶体金标记垫3的内侧，硝酸纤维素膜 4的右侧端部位于吸水纸6的内侧。

其中，胶体金标记垫3的材质为玻璃纤维素膜，样品垫2的材质为聚酯膜或玻璃纤维素膜，样品垫2、胶体金标记垫3、硝酸纤维素膜4和吸水纸 (6)的条宽均不小于2.5mm。

该粪便钙卫蛋白检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

A、制备样品垫2：

将玻璃纤维平放在玻璃或保鲜膜上，将配好的样本垫处理液适量体积倒在玻璃纤维上，将液体均匀涂布于玻璃纤维上，将涂布好的样本垫放于湿度≤25％环境下，干燥12～24小时，备用；

样本垫处理液配比最优选择：

第一配方由<0.3％吐温-20、<0.3％曲拉通-100、<3.5％BSA、＜0.25％防腐剂的pH为8.0的0.05mol/L Tris-HCl缓冲液组成，如图3所示，测试结果如图中柱线所示。

第二配方由0.3％-0.7％吐温-20、0.3％-0.7％曲拉通-100、3.5％-4.5％ BSA、0.25％防腐剂的pH为8.0的0.05mol/L Tris-HCl缓冲液组成。优选的，样本垫处理液由0.4％吐温-20、0.4％曲拉通-100、4％BSA、0.25％防腐剂的pH为8.0的0.05mol/L Tris-HCl缓冲液组成，如图4所示，测试结果如图中柱线所示。

第三配方由＞0.7％吐温-20、＞0.7％曲拉通-100、＞4.5％BSA、＞0.25％防腐剂的pH为8.0的0.05mol/L Tris-HCl缓冲液组成，如图5所示，测试结果如图中柱线所示。

综上，图4中的样本垫处理液配方比例为最优配比，不会造成阳性漏检和假阳。

B、制备胶体金标记垫3：

制备胶体金溶液和抗体标记，然后喷涂至玻璃纤维素膜上，干燥，得到胶体金标记垫；具体步骤包括：

a、烧制胶体金溶液；

b、制备粪便钙卫蛋白胶体金溶液、标记物胶体金溶液；

c、涂布：取玻璃纤维素膜，将适量液体均匀涂布于玻璃纤维上，将涂布好的玻璃纤维进行干燥；

j、胶体金标记垫干燥后，用铝箔袋封存备用。

其中，胶体金标记垫制备完成后，在其表面上标记具有粪便钙卫蛋白标记抗体和标记物的垫体。

C、制备硝酸纤维素膜4：

用包被缓冲液稀释检测线包被抗体、对照线包被物、质控线包被抗体制备成包被工作液，即检测线包被液(对应检测线T8)、对照线包被液(对应对照线R7)和质控线包被液(对应质控线C5)，采用喷膜仪将制备的检测线包被液、对照线包被液和质控线包被液分别包被在硝酸纤维素膜上，形成检测线T8、对照线R7和质控线C5，得到含有检测线T8、对照线R7和质控线C5的硝酸纤维素膜4；

具体包括以下步骤：

e、按照配方要求配制FC检测线包被抗体、对照线包被物和质控线包被物的溶液，对应分别形成检测线包被液、对照线包被液、质控线包被液，喷量为1ul/cm，最终检测线包被液、质控线包被液浓度为1.0mg/ml，对照线包被液浓度为0.3mg/ml；

f、取已粘贴硝酸纤维素膜(规格宽度为20mm)的PVC底板，按照距离间隔一次性划出检测线T、对照线R和质控线C；

g、质控线C至硝酸纤维素膜的底端距离为15mm，误差≤±0.5mm；对照线R至硝酸纤维素膜的底端距离为11mm，误差≤±0.5mm；检测线T至硝酸纤维素膜的底端距离为7mm，误差≤±0.5mm；

h、设定干燥温湿度，湿度≤25％、温度≤30℃的环境下干燥，干燥时间为12-24h；

i、将干燥的硝酸纤维素膜放于自封袋密封，备用。

D、贴板及切割：

将样品垫2、胶体金标记垫3、硝酸纤维素膜4和吸水纸6顺序搭接 PVC底板1上，并按照规格要求切割成条宽不小于2.5mm。

具体包括以下步骤：

j、检查生产车间湿度，确保湿度≤25％才能开始工作；

k、撕开PVC底板1表面的保护纸，将胶体金标记垫黏贴在PVC底板1 上，让胶体金标记垫3的上边缘与硝酸纤维素膜4的下边缘重叠1-2mm，将样品垫2粘贴在胶体金标记垫3的下方，让样品垫2的上边缘与胶体金标记垫3的下边缘重叠1-2mm；

1、撕开PVC底板1表面的离层纸，将吸水纸6直线黏贴到PVC底板1 上，让吸水纸6与硝酸纤维素膜4的上边缘重叠2mm左右；

m、贴隐形胶带，让隐形胶带与硝酸纤维素膜垫的下边缘重叠1～1.5mm 左右；

n、操作自动斩切机，按要求的宽度切割。

该粪便钙卫蛋白检测试剂盒的使用方法，用含样本稀释液的5ml小滴瓶分别采集200例粪便样本混匀，在实施例一样品垫2中，滴加3滴处理后的样本，15分钟后判读，对上述200例粪便样本同时采用第一对照试剂进行检测，第一对照试剂的性能对比标准如图6所示的柱线，该粪便钙卫蛋白检测试剂盒的测试结果的柱状图如图7所示。第一对照试剂只能判断为阴性或阳性，该粪便钙卫蛋白检测试剂盒，如图7所示，可以在阴性样本中更准确对钙卫蛋白含量其进行区分，可以让患者更加了解自己是处于钙卫蛋白处于正常水平或可能处在正常水平或者可能存在肠易激综合征风险，以避免不必要的内镜检查。

使用时，如图8所示，对照区R和质控区C位置出现两条红色条带，而在检测区T内无红色条带出现，钙卫蛋白浓度<15μg/g，提示样本中的钙卫蛋白处于正常水平；如图9所示，质控区C条带比对照区R条带颜色深，而检测区T比对照区R的显色强度弱，钙卫蛋白浓度[15μg/g，60μg/g)，提示可能处在正常水平或者可能存在肠易激综合征风险；如图10所示、如图11所示，质控区C条带比对照区R条带颜色深，而检测区T与对照区R的显色强度一致，或检测区T比对照区R的显色强度深；钙卫蛋白浓度≥60μg/g，提示可能存在肠炎疾病风险。如图12所示，在对照区R和质控区C 位置无红色条带出现或仅有其中一条带出现，结果表明无效，可能是不正确的操作过程或实际已经变质损坏，对无效结果应重新试验，重新试验时应严格按照说明书操作，如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。

所以，该粪便钙卫蛋白检测试剂盒可根据与T线与R线的深浅进行比较得出具体的数值<15μg/g、[15μg/g，60μg/g)、≥60μg/g，而临床上钙卫蛋白的正常值是0～50μg/g，该粪便钙卫蛋白检测试剂盒可以更准确对钙卫蛋白含量其进行区分，以避免不必要的内镜检查，钙卫蛋白数值高低可以决定患者是否需要做内镜检查。从而实现了较准确的半定量，成本低廉的试剂盒。

以上所述实施例只是为本发明的较佳实施例，并非以此限制本发明的实施范围，除了具体实施例中列举的情况外；凡依本发明之方法及原理所作的等效变化，均应涵盖于本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种粪便钙卫蛋白检测试剂盒，包括PVC底板(1)，其特征在于：

所述PVC底板(1)上由左到右依次搭接设置有样品垫(2)、胶体金标记垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水纸(6)；

所述硝酸纤维素膜(4)内含有从左到右依次分布设置的检测线T(8)、对照线R(7)和质控线C(5)，对应的检测线T(8)、对照线R(7)和质控线C(5)处分别在硝酸纤维素膜(4)上形成检测区T、对照区T和质控区C；

所述样品垫(2)右侧端部搭接于所述胶体金标记垫(3)的左侧端部上侧，所述胶体金标记垫(3)右侧端部搭接于硝酸纤维素膜(4)的左侧端部上侧，所述吸水纸(6)左侧端部搭接于硝酸纤维素膜(4)的右侧端部上侧；

所述胶体金标记垫(3)的左侧端部位于样品垫(2)的内侧，所述硝酸纤维素膜(4)的左侧端部位于胶体金标记垫(3)的内侧，所述硝酸纤维素膜(4)的右侧端部位于吸水纸(6)的内侧。

2.根据权利要求1所述的一种粪便钙卫蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述胶体金标记垫(3)的材质为玻璃纤维素膜。

3.根据权利要求1所述的一种粪便钙卫蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述样品垫(2)的材质为聚酯膜或玻璃纤维素膜。

4.根据权利要求1所述的一种粪便钙卫蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述样品垫(2)、胶体金标记垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水纸(6)的条宽均不小于2.5mm。

5.根据权利要求1～4中任意一项所述的一种粪便钙卫蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、制备样品垫(2)：

将玻璃纤维平放在玻璃或保鲜膜上，将配好的样本垫处理液适量体积倒在玻璃纤维上，将液体均匀涂布于玻璃纤维上，将涂布好的样本垫放于湿度≤25％环境下，干燥12～24小时，备用；

B、制备胶体金标记垫(3)：

制备胶体金溶液和抗体标记，然后喷涂至玻璃纤维素膜上，干燥，得到胶体金标记垫；

C、制备硝酸纤维素膜(4)：

用包被缓冲液稀释检测线包被抗体、对照线包被物、质控线包被抗体制备成包被工作液，即检测线包被液、对照线包被液和质控线包被液，采用喷膜仪将制备的检测线包被液、对照线包被液和质控线包被液分别包被在硝酸纤维素膜上，形成检测线T(8)、对照线R(7)和质控线C(5)，得到含有检测线T(8)、对照线R(7)和质控线C(5)的硝酸纤维素膜(4)；

D、贴板及切割：

将样品垫(2)、胶体金标记垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水纸(6)顺序搭接PVC底板(1)上，并按照规格要求切割成条宽不小于2.5mm。

6.根据权利要求5所述的一种粪便钙卫蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤A中的样本垫处理液由0.3％-0.7％吐温-20、0.3％-0.7％曲拉通-100、3.5％-4.5％BSA、0.25％防腐剂的pH为8.0的0.05mol/LTris-HCl缓冲液组成。

7.根据权利要求5所述的一种粪便钙卫蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤B中，具体包括以下步骤：

a、制胶体金溶液；

b、制备粪便钙卫蛋白胶体金溶液、标记物胶体金溶液；

c、涂布：取玻璃纤维素膜，将适量液体均匀涂布于玻璃纤维上，将涂布好的玻璃纤维进行干燥；

d、胶体金标记垫干燥后，用铝箔袋封存备用。

8.根据权利要求7所述的一种粪便钙卫蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤B中，胶体金标记垫制备完成后，在其表面上标记具有粪便钙卫蛋白标记抗体和标记物的垫体。

9.根据权利要求5所述的一种粪便钙卫蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤C中，具体包括以下步骤：

e、按照配方要求配制FC检测线包被抗体、对照线包被物和质控线包被物的溶液，对应分别形成检测线包被液、对照线包被液、质控线包被液，喷量为0.8～1.2ul/cm，最终检测线包被液、质控线包被液浓度为1.0mg/ml，对照线包被液浓度为0.3mg/ml；

f、取已粘贴硝酸纤维素膜的PVC底板，按照距离间隔一次性划出检测线T、对照线R和质控线C；

g、质控线C至硝酸纤维素膜的底端距离为15mm，误差≤±0.5mm；对照线R至硝酸纤维素膜的底端距离为11mm，误差≤±0.5mm；检测线T至硝酸纤维素膜的底端距离为7mm，误差≤±0.5mm；

h、设定干燥温湿度，湿度≤25％、温度≤30℃的环境下干燥，干燥时间为12-24h；

i、将干燥的硝酸纤维素膜放于自封袋密封，备用。

10.根据权利要求5所述的一种粪便钙卫蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤D中，具体包括以下步骤：

j、检查生产车间湿度，确保湿度≤25％才能开始工作；

k、撕开PVC底板(1)表面的保护纸，将胶体金标记垫黏贴在PVC底板(1)上，让胶体金标记垫(3)的上边缘与硝酸纤维素膜(4)的下边缘重叠1-2mm，将样品垫(2)粘贴在胶体金标记垫(3)的下方，让样品垫(2)的上边缘与胶体金标记垫(3)的下边缘重叠1-2mm；

l、撕开PVC底板(1)表面的离层纸，将吸水纸(6)直线黏贴到PVC底板(1)上，让吸水纸(6)与硝酸纤维素膜(4)的上边缘重叠2mm；

m、贴隐形胶带，让隐形胶带与硝酸纤维素膜垫的下边缘重叠1～1.5mm；

n、操作自动斩切机，按要求的宽度切割。

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