CN202854153U

CN202854153U - 一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白尿液检测卡

Info

Publication number: CN202854153U
Application number: CN 201220594928
Authority: CN
Inventors: 何仕钊
Original assignee: NANJING NORMAN BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: NANJING NORMAN BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2012-11-12
Filing date: 2012-11-12
Publication date: 2013-04-03
Anticipated expiration: 2022-11-12

Abstract

本实用新型涉及一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）尿液检测卡，由上卡壳、试纸条和下卡壳组成。所述上卡壳上设置有加样孔和检测窗，所述下卡壳中间为放置试纸条的卡槽。所述加样孔底部固定有尿液过滤装置，所述尿液过滤装置与样品区不接触，由孔径从上到下逐渐减小的不对称多孔材料制成。所述试纸条由在支撑物上依次相互搭接的样品区、结合区、检测区、吸水区组成，所述结合区涂覆有标记物标记的NGAL单抗，所述检测区上设有检测线和质控线，所述检测线包被有NGAL抗体，所述质控线包被有羊抗鼠IgG。本实用新型NGAL尿液检测卡尿液分离效果稳定，减少了尿液中大分子物质对检测的干扰，可实现对NGAL快速检测。

Description

一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白尿液检测卡

技术领域

本实用新型涉及免疫层析检测技术领域，具体涉及一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白尿液检测卡。

背景技术

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase associated lipocalin，NGAL），又称人脂质运载蛋白2（lipocalin 2，LCN2）或噬铁蛋白（siderocalin），是人脂质运载蛋白家族中的一个新成员。NGAL是Kjeldsen等在1993年研究中性粒细胞时发现的一种特殊颗粒组份，与明胶酶B即基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）密切相关。NGAL是一种小分子蛋白，其可表达于中性粒细胞和某些上皮细胞，如肾小管上皮细胞中。在多种原因引起的肾损伤中，NGAL可显著升高，释放于尿液和血液中。NGAL在损伤2小时内即可迅速升高，因而，NGAL可作为一种高灵敏度的急性肾损伤早期诊断标志物。

在正常生理情况下，NGAL含量较低，能刺激肾祖细胞向肾小管上皮细胞分化，以保障肾脏正常的生长发育。当肾缺血或毒素急性肾小管损伤时，在开始的两个小时内，受损的肾小管上皮细胞能高表达NGAL，从而诱导肾小管间质中浸润的中性粒细胞发生凋亡，以保护肾组织免受攻击；另一方面高水平的NGAL能促进肾小管上皮细胞再生修复，使肾脏功能得以恢复。

据丹麦Bioporto公司研究，健康志愿者EDTA血浆中NGAL浓度分布在37–106ng/mL，平均值为63ng/mL，尿液中浓度分布在0.7-9.8ng/mL，平均值为5.3ng/mL。而ICU病房中急性肾损伤（acute kidney injury，AKI）患者NGAL浓度在血清中为66-922ng/mL，尿液中为110-40,000ng/mL。

2005年，丹麦BioPorto公司首先推出ELISA商品检测试剂盒，可用于血清（浆）、尿液中NGAL检测。此外，美国R＆D Systems公司也研发出ELSIA检测试剂盒，美国博适公司Triage分析仪也可对EDTA抗凝血浆或全血（双抗体夹心免疫荧光层析法）中的NGAL进行检测。目前已有适用于全自动免疫分析仪的分析系统面世，如美国雅培公司的Architecti2000SR/i1000SR全自动免疫分析仪可测定尿液NGAL（化学发光免疫法）。但其中的ELISA存在着操作繁琐，检测耗时长等缺点；全自动分析仪价格昂贵，不适合检测少量标本使用。相比之下，床旁检测（point care of testing，POCT）可方便快速地提供可靠检验结果，有助于临床医师更早制订治疗策略，并节省治疗费用。

POCT中的侧向流免疫层析检测法具有检测迅速、操作简便、准确和成本低等特点，适合用于检测NGAL。临床上，急性肾损伤患者在尿常规检查中，尿液外观多呈浑浊，尿色深，根据病情不同，尿蛋白定性可为阴性～++++；在尿沉渣检查中，可发现肾小管上皮细胞、上皮细胞管型、颗粒管型、红细胞、白细胞和晶体存在。因此，在对急性肾损伤疑似患者进行尿液检测时，往往需要将尿液离心后再进行分析物检测。如不对尿液处理直接进行检测，则尿液中的大分子物质一方面可能会造成检测卡上膜或垫的堵塞，另一方面可能部分会连同NGAL一起展层至检测区，使得检测区背景颜色较深而干扰结果判断。尿液离心这一步骤视情况不同常需要3-5分钟或更长时间，且较繁琐，不利于实现NGAL尿液检测卡对NGAL的快速检测。

发明内容

本实用新型针对现有技术的不足，提供一种基于侧向流免疫层析法，操作简单，尿液无需离心即可直接检测的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白尿液检测卡，其具有快速、抗干扰能力强、准确等特点。

本实用新型通过以下技术方案实现：一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白尿液检测卡，由上卡壳、试纸条和下卡壳组成，所述上卡壳上设置有加样孔和检测窗，所述试纸条由在支撑物上依次相互搭接的样品区、结合区、检测区、吸水区组成，所述下卡壳中间为放置试纸条的卡槽，其特征在于：所述加样孔底部固定有尿液过滤装置。

所述尿液过滤装置与样品区不接触，由孔径从上到下逐渐减小的不对称多孔材料制成。一种优选的技术方案，其特征在于所述尿液过滤装置由聚酯膜或聚砜膜构成，优选聚砜膜。

所述上下卡壳材料可由不吸水的塑料制成，包括人工合成或自然界有机材料，如聚苯乙烯、聚乙烯、聚氯乙烯、聚酯或纤维素及其衍生物等。

所述支撑物可由PVC板或PS板构成。

所述样品区可由选自纤维素膜、玻璃纤维膜或无纺布中的一种或多种材料构成。

所述结合区可由聚酯纤维或玻璃纤维膜构成，其上涂覆有标记物标记的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体，所述标记物为金属胶体颗粒、荧光颗粒、磁性颗粒或有色乳胶颗粒。

所述检测区可由硝酸纤维膜、PVDF膜或硝化纤维膜构成，在所述检测区上设有检测线（T线）和质控线（C线），所述检测线包被有中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体或多克隆抗体，所述质控线包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体。

所述吸水区可由吸水滤纸或纤维素膜构成。

根据上述方案实现的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白尿液检测卡有益效果主要体现在：本实用新型可在不处理尿液的情况下，直接对尿液NGAL进行检测而不受干扰。尿液过滤装置由孔径从上到下逐渐减小的不对称多孔材料制成，这种结构可使样本在尿液过滤装置的垂直方向上易于扩散，起到快速初过滤作用，使尿液中的待检分子先于大分子物质通过过滤装置，在充分扩散的情况下，达到截留大分子物质，分离样本的目的。因此，在尿液样本到达检测试纸条前，就可将NGAL等小分子尿液成份与其他大分子干扰物相分离，从而可快速、准确检测尿液中NGAL的浓度。

附图说明

图1为本实用新型实施例的侧面剖视图；

图2为本实用新型实施例的正面示意图；

图3为本实用新型实施例的显色结果示意图；

图中1：上卡壳；2：下卡壳；3：卡槽；4：加样孔；5：检测窗；6：尿液过滤装置；7：样品区；8：检测区；9：支撑物；10：结合区；11：吸水区。

具体实施方式

下面将结合本实用新型实施例的附图，对本实用新型进行进一步描述。

实施例1一种胶体金免疫层析NGAL尿液检测卡

胶体金免疫层析NGAL尿液检测卡由上下扣合的上卡壳（1）与下卡壳（2）以及置于下卡壳（2）中间卡槽（3）处的试纸条组成。

上卡壳（1）上设置有加样孔（4）和检测窗（5），加样孔（4）呈立体漏斗状，孔径从上至下逐渐减小，在加样孔漏斗底部固定有尿液过滤装置（6），尿液过滤装置（6）与样品区（7）不接触，由孔径从上到下逐渐减小的不对称聚砜膜组成。加样孔（4）对应试纸条上的样品区（7），试纸条上的检测区（8）正对应上卡壳的检测窗（5），使检测区上的检测线（T线）和质控线（C线）显露。

试纸条置于下卡壳（2）的卡槽（3）中，卡槽（3）的尺寸与试纸条大小相契合，试纸条可置于卡槽（3）中并固定。试纸条由在支撑物（9）上依次相互搭接约1.5mm的样品区（7）、结合区（10）、检测区（8）、吸水区（11）组成。样品区（7）的一端压接在结合区（10）的一端上，结合区（10）的另一端压接在检测区（8）的一端上，吸水区（11）的一端压接在检测区（8）的另一端上。

其中，支撑物（9）由PVC板构成，样品区（7）由玻璃纤维膜构成，结合区（10）由聚酯纤维构成，检测区（8）由硝酸纤维膜构成，吸水区（11）由吸水滤纸构成。所述的结合区（10）涂覆有胶体金标记的NGAL单克隆抗体，检测区（8）上设有彼此分离的T线和C线，其中T线靠近结合区，C线靠近吸水区，所述T线由NGAL多克隆抗体包被，C线由羊抗鼠IgG多克隆抗体包被。

将待检尿液120μl直接加入检测卡加样孔处，尿液通过加样孔处的尿液过滤装置时，大分子物质被截留，小分子成份通过过滤装置至样品区，并经虹吸作用沿样品区、结合区、检测区向吸水区方向移动，15分钟内读取检测结果。

定性检测：

阳性：T线和C线处各出现一条紫红色条带；

阴性：仅在C线处出现一条紫红色条带；

无效：无论样本中含或不含NGAL，胶体金垫处的胶体金标记的NGAL单克隆抗体都会上行至检测区与C线处的羊抗鼠IgG多克隆抗体结合，在C线处出现一条紫红色条带，如不出现，则结果无效，需重新检测。

定量检测：

将检测卡置于胶体金定量检测仪中，仪器通过对检测区进行扫描，收集T线、C线信号强度，最终转换、计算出样本中NGAL的浓度，实现定量检测。

实施例2一种荧光免疫层析NGAL尿液检测卡

荧光免疫层析NGAL尿液检测卡的结构可参考实施例1中的胶体金免疫层析NGAL尿液检测卡，两种尿液检测卡的主要不同之处在于胶体金检测卡的结合区（10）涂覆有胶体金标记的NGAL单克隆抗体，而荧光检测卡的结合区（10）所采用的标记物为荧光颗粒。

将待检尿液120μl直接加入检测卡加样孔处，尿液通过加样孔处的尿液过滤装置时，大分子物质被截留，小分子成份通过过滤装置至样品区，并经虹吸作用沿样品区、结合区、检测区向吸水区方向移动，将检测卡置于荧光分析仪中，仪器通过对检测区进行扫描，收集T线、C线荧光信号强度，最终转换、计算出样本中NGAL的浓度，实现定量检测。

实施例3一种磁珠免疫层析NGAL尿液检测卡

磁珠免疫层析NGAL尿液检测卡的结构可参考实施例1中的胶体金免疫层析NGAL尿液检测卡，两种尿液检测卡的主要不同之处在于胶体金检测卡的结合区（10）涂覆有胶体金标记的NGAL单克隆抗体，而磁珠免疫层析检测卡的结合区（10）所采用的标记物为磁性纳米颗粒。

定性检测：

阳性：T线和C线处各出现一条显色条带；

阴性：仅在C线处出现一条显色条带；

无效：无论样本中含或不含NGAL，结合区处的磁珠标记的NGAL单克隆抗体都会上行至检测区与C线处的羊抗鼠IgG多克隆抗体结合，在C线处出现一条显色条带，如不出现，则结果无效，需重新检测。

定量检测：

将检测卡置于磁性分析仪中，仪器通过对检测区进行扫描，收集T线、C线磁信号强度，最终转换、计算出样本中NGAL的浓度，实现定量检测。

实施例4一种乳胶免疫层析NGAL尿液检测卡

乳胶免疫层析NGAL尿液检测卡的结构可参考实施例1中的胶体金免疫层析NGAL尿液检测卡，两种尿液检测卡的主要不同之处在于胶体金检测卡的结合区（10）涂覆有胶体金标记的NGAL单克隆抗体，而乳胶免疫层析检测卡的结合区（10）所采用的标记物为有色乳胶颗粒。

定性检测：

阳性：T线和C线处各出现一条显色条带；

阴性：仅在C线处出现一条显色条带；

无效：无论样本中含或不含NGAL，结合区处的乳胶标记的NGAL单克隆抗体都会上行至检测区与C线处的羊抗鼠IgG多克隆抗体结合，在C线处出现一条显色条带，如不出现，则结果无效，需重新检测。

定量检测：

将检测卡置于定量检测仪中，仪器通过对检测区进行扫描，收集T线、C线信号强度，最终转换、计算出样本中NGAL的浓度，实现定量检测。

最后应说明的是：以上所述仅为本实用新型的优选实施例而已，并不用于限制本实用新型，尽管参照前述实施例对本实用新型进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本实用新型的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。

Claims

1.一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白尿液检测卡，由上卡壳、试纸条和下卡壳组成，所述上卡壳上设置有加样孔和检测窗，所述试纸条由在支撑物上依次相互搭接的样品区、结合区、检测区、吸水区组成，所述下卡壳中间为放置试纸条的卡槽，其特征在于：所述加样孔底部固定有尿液过滤装置。

2.根据权利要求1所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白尿液检测卡，其特征在于，所述尿液过滤装置与样品区不接触。

3.根据权利要求1或2所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白尿液检测卡，其特征在于，所述尿液过滤装置由孔径从上到下逐渐减小的不对称多孔材料制成。

4.根据权利要求1所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白尿液检测卡，其特征在于，所述结合区涂覆有标记物标记的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体。

5.根据权利要求4所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白尿液检测卡，其特征在于，所述标记物为金属胶体颗粒、荧光颗粒、磁性颗粒或有色乳胶颗粒。

6.根据权利要求1所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白尿液检测卡，其特征在于，所述检测区上设置有检测线和质控线，所述检测线包被有中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白抗体，所述质控线包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体。