CN113759050A - 一种绵萆薢供试品的制备方法及其薄层鉴别方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种绵萆薢供试品的制备方法及其薄层鉴别方法，其中，一种绵萆薢供试品的制备方法，包括：取绵萆薢供试品，将其与体积浓度为5％‑10％的盐酸溶液混合后进行提取，提取时间为10‑60min，提取后采用萃取溶剂进行萃取获得萃取液，合并萃取液，蒸干，残渣加溶解溶剂进行溶解后即可获得供试品溶液。本发明方法具有操作更加简便，极大地节约制备时长，提高制备效率，且安全无毒，对检测人员及环境十分友好等优点。

Description

一种绵萆薢供试品的制备方法及其薄层鉴别方法

技术领域

本发明涉及薄层鉴别领域，具体涉及一种绵萆薢供试品的制备方法及其薄层鉴别方法。

背景技术

绵萆薢为薯蓣科植物绵萆薢Dioscorea spongiosa J.Q.Xi，M.Mizuno etW.L.Zhao或福州薯蓣Dioscorea futschauensisΜline ex R.Kunth的干燥根茎。本品性平味苦，归肾、胃经。有利湿去浊，祛风除痹之功效。临床常用于治疗膏淋，白浊，白带过多，风湿痹痛，关节不利，腰膝疼痛之病症。

绵萆薢所含的主要成分为为甾体类的皂苷类、木脂素类和二芳基庚烷类等化合物，除此之外还有类固醇糖苷等等。2015、2020版《中华人民共和国药典》(一部)绵萆薢项下，鉴别方法用对照药材鉴别绵萆薢，供试品溶液的制备过程包括：取本品粉末2g，加甲醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml使溶解，用乙醚25ml洗涤，弃去乙醚液，水液加盐酸2ml，加热回流1.5小时，放冷，用乙醚振摇提取2次，每次25ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。

药典中的操作步骤包含回流、洗涤、酸解、萃取、蒸干、三氯甲烷溶解等步骤，操作繁琐，费时近4h，因此效率极低；并且，该方法在过程使用第一类、第二类有机毒性试剂三氯甲烷与乙醚，导致安全系数差；同时，该方法明显不适用于绵萆薢配方颗粒的鉴别。

而目前，对绵萆薢薄层鉴别的相关研究报道较少，现有文献与药典方法差异不大，均是先采用醇提或醇提水沉后，再对提取出的物质进行酸解，酸解时间要求较长，通常需要在1h以上，步骤繁琐，工作效率低，且对检测人员及环境不友好。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中的绵萆薢的供试品溶液制备时间长、操作复杂的问题；从而提供一种制备效率高、操作简单的绵萆薢供试品的制备方法，并公开了采用该方法制备得到的供试品溶液进行薄层鉴别的方法。

一种绵萆薢供试品的制备方法，包括：

取绵萆薢供试品，将其与体积浓度为5％-10％的盐酸溶液混合后进行提取，提取时间为10-60min，提取后采用萃取溶剂进行萃取获得萃取液，蒸干，残渣加溶解溶剂进行溶解后即可获得供试品溶液。

所述萃取溶剂为乙酸乙酯或水饱合的正丁醇；所述溶解溶剂为甲醇。

每0.5-1g绵萆薢供试品采用22-37ml的盐酸溶液进行提取；每0.5-1g绵萆薢供试品采用15-30ml的萃取溶剂进行萃取；每0.5-1g绵萆薢供试品采用2-4ml溶解溶剂进行溶解。

所述提取的方式为加热回流或超声提取；提取时间为10-30min；

所述萃取的次数为2-3次。

所述绵萆薢供试品为绵萆薢药材、绵萆薢饮片、绵萆薢中间产物或绵萆薢配方颗粒；所述绵萆薢中间产物包括但不限于提取液、浓缩液、干燥粉。

一种绵萆薢供试品的薄层鉴别方法，采用上述的一种绵萆薢供试品的制备方法制备得到的供试品溶液进行薄层鉴别。

所述薄层鉴别的过程为：

将供试品溶液点于硅胶G薄层板上，以4:(1-4)的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以显色剂后，加热至斑点显色清晰，紫外灯检视。

进一步，薄层鉴别中还包括对照药材溶液和对照品溶液，点于与供试品溶液相同的硅胶G薄层板上；所述对照药材溶液采用对照药材制备得到，其制备方法与供试品溶液相同；所述对照品溶液采用薯蓣皂苷元加甲醇制成，对照品溶液中薯蓣皂苷元的浓度为0.1-0.2mg/ml。

具体的，所述薄层鉴别的过程为：

采用供试品溶液相同的制备方法采用对照药材制备出对照药材溶液；

采用薯蓣皂苷元对照品，加甲醇制成浓度为0.1mg/ml的对照品溶液；

分别吸取供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4:(1-4)的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以显色剂后，加热至斑点显色清晰，紫外灯检视。

所述显色剂为10％的硫酸乙醇溶液，紫外灯波长为365nm。

所述环己烷-乙酸乙酯的比例为4:(3-4)。

显色时，所述加热温度为105℃。

本发明技术方案，具有如下优点：

1.本发明提供的了一种绵萆薢供试品的制备方法，本方法中采用绵萆薢供试品与水和盐酸混合共同提取的方式，在提取的过程中同时进行酸解，提取液后续只需采用萃取溶剂进行萃取即可，操作更加简便，极大地节约制备的时长，提高制备效率。

2.本发明提供的绵萆薢供试品的制备方法中，优选采用乙酸乙酯或水饱合的正丁醇进行振摇萃取，可获得丰富的斑点信息；由于水饱合的正丁醇相比乙酸乙酯而言，其制备过程中易乳化，因此，该萃取溶剂优选为乙酸乙酯；并且，该乙酸乙酯安全无毒，环保健康，因此，对检测人员及环境十分友好。

3.本发明提供的一种绵萆薢供试品的薄层鉴别方法，其不仅仅能够提高了检测效率、节约成本，减少了环境污染；并且，本发明方法借助各成分特征官能团，利用显色反应，将不同吸收波段特征成分在同一块薄层板上，在相同的检视条件下显色，获得具有专属性、多信息、斑点清晰的薄层色谱图；即，本发明可以采用所述的供试品溶液进行检测获得的信息丰富的薄层色谱图，与现有技术薄层信息相比，能大幅度提高绵萆薢及其绵萆薢配方颗粒的质量可控性，有利于原料到成品生产过程的物质信息质量监督。

4.本发明方法中供试品溶液制备时，加热回流只需15分钟，萃取两次；对照药材同法制备；因此，供试品溶液所花费时间可以缩短至30分钟。而薄层鉴别过程中所采用的展开剂的种类的选择，具有展开速度快、溶剂挥散快的优势，只需约20分钟，即可完成展开。因此，整个鉴别过程可以实现在1小时之内完成，其效率之高、成本之低、易于推广应用的普及性，是目前已报道方法都无法实现的。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明实施例1的薄层鉴别检视结果图；

图2是本发明实施例2中对照药材溶液在不同点样量下的薄层鉴别检视结果图；

图3是本发明实施例2中供试品溶液在不同点样量下的薄层鉴别检视结果图；

图4是本发明实施例3中供试品溶液在常温常湿条件下的薄层鉴别检视结果图；

图5是本发明实施例3中供试品溶液在低温高湿条件下的薄层鉴别检视结果图；

图6是本发明实施例3中供试品溶液在常温低湿条件下的薄层鉴别检视结果图；

图7是本发明实施例3中供试品溶液在常温高湿条件下的薄层鉴别检视结果图；

图8是本发明实施例3中采用烟台市芝罘黄务硅胶开发试验厂的硅胶G板的薄层鉴别检视结果图；

图9是本发明实施例3中采用Merck KGaA的硅胶G板的薄层鉴别检视结果图；

图10是本发明实施例3中采用烟台市化学工业研究所的硅胶G板的薄层鉴别检视结果图；

图11是本发明实施例4中采用的18批供试品溶液的薄层鉴别检视结果图；

图12是本发明实施例5中包括绵萆薢饮片的薄层鉴别检视结果图；

图13是本发明实施例6中展开剂比例为4:1时的薄层鉴别检视结果图；

图14是本发明实施例6中展开剂比例为4:2时的薄层鉴别检视结果图；

图15是本发明实施例6中展开剂比例为4:3时的薄层鉴别检视结果图；

图16是本发明实施例6中展开剂比例为4:4时的薄层鉴别检视结果图；

图17是本发明实施例7中不同回流时间的薄层鉴别检视结果图；

图18是本发明实施例8中不同提取方式的薄层鉴别检视结果图；

图19是本发明对比例1中绵萆薢配方颗粒的薄层鉴别检视结果图；

图20是本发明对比例1的绵萆薢饮片的薄层鉴别检视结果图。

具体实施方式

实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。

仪器：CAMAG薄层成像系统，CAMAG薄层自动点样仪，JY20002电子天平(梅特勒·托利多)，BT25S电子天平(赛多利斯科技仪器(北京)有限公司)，KQ-500DB超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，硅胶G板(Merck KGaA，烟台市化学工业研究所，烟台市芝罘黄务硅胶开发试验厂)。

试药：薯蓣皂苷元对照品(批号：111539-200001，中国食品药品检定研究院)

绵萆薢对照药材(批号：121545-201603，中国食品药品检定研究院)

绵萆薢配方颗粒KL200520-322300-01、KL200520-437300-02、KL200525-438700-03试剂：甲醇、盐酸、乙酸乙酯、环己烷、三氯甲烷、丙酮均为分析纯，水为蒸馏水。

实施例1

一种绵萆薢供试品的薄层鉴别方法，具体过程如下：

1、供试品溶液的制备：

供试品溶液的制备：取绵萆薢配方颗粒0.5g，加水25ml，盐酸2ml，加热回流15分钟，放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

对照药材溶液的制备：取绵萆薢对照药材0.5g，加水25ml，盐酸2ml，加热回流15分钟，放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。

对照品溶液的制备：取薯蓣皂苷元对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液作为对照品溶液。

2、薄层鉴别的过程：

吸取供试品溶液3μl，对照药材溶液5μl，对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4:3.5的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视，检视结果如图1所示。图1中，编号1为薯蓣皂苷元对照品，编号2为绵萆薢对照药材，编号3为绵萆薢配方颗粒。

实施例2

本实施例与实施例1的区别在于，本发明采用的供试品溶液和对照药材溶液的点样量不同，具体设置为：绵萆薢对照药材点样量分别为1μl、3μl、5μl、7μl、10μl、15μl，供试品溶液点样量分别为1μl、2μl、3μl、4μl、5μl，结果见图2-3所示。该图2中，编号1为薯蓣皂苷元对照品，2-7依次对应1μl、3μl、5μl、7μl、10μl、15μl绵萆薢对照药材的点样量。该图3中，编号1为薯蓣皂苷元对照品，编号2为绵萆薢对照药材，编号3-7依次对应1μl、2μl、3μl、4μl、5μl供试品溶液点样量。

通过检测结果可知，本发明方法可以有效实现绵萆薢的准确鉴别，其中，对照药材溶液5μl、供试品溶液3μl时，点样量能够更加清晰、准确的鉴别绵萆薢配方颗粒，故优选对照药材和供试品溶液点样量分别为5μl、3μl。

实施例3

本实施例对实施例1中的薄层鉴别进行耐用性验证，具体包括：

1、不同温湿度的考察

按选定的方法制备对照品溶液、对照药材溶液以及供试品溶液并按其条件，分别在常温常湿(T：24.9℃，RH：52％)、低温高湿(T：8.5℃，RH：84％)、常温低湿(T：24.9℃，RH：14％)、常温高湿(T：25.4℃，RH：71％)条件下展开，取出，晾干，显色，置紫外光灯(365nm)下检视，结果见图4-7。该图4-7中编号1为薯蓣皂苷元对照品，编号2为绵萆薢对照药材，编号3为KL200520-322300-01绵萆薢配方颗粒，编号4为KL200520-437300-02绵萆薢配方颗粒，编号5为KL200525-438700-03绵萆薢配方颗粒。

2、不同薄层板的考察

按选定的方法制备对照品溶液、对照药材溶液以及供试品溶液并按其条件，分别采用烟台市芝罘黄务硅胶开发试验厂、Merck KGaA、烟台市化学工业研究所三种厂家的硅胶G板进行展开，取出，晾干，显色，置紫外光灯(365nm)下检视，结果见图8-10。该图8-10中编号1为薯蓣皂苷元对照品，编号2为绵萆薢对照药材，编号3为KL200520-322300-01绵萆薢配方颗粒，编号4为KL200520-437300-02绵萆薢配方颗粒，编号5为KL200525-438700-03绵萆薢配方颗粒。

实施例4

本实施例与实施例1的区别在于，本发明采用实施例1相同的条件进行18批绵萆薢配方颗粒的检测。检测结果如图11所示。

实施例5

本实施例与实施例1的区别在于，本发明采用实施例1相同的条件进行对照品溶液、对照药材溶液以及绵萆薢饮片与颗粒的供试品溶液的检测，检测结果如图12所示。图12中，编号1为薯蓣皂苷元对照品，编号2为绵萆薢对照药材，编号3为绵萆薢饮片，编号4为绵萆薢配方颗粒。

结果表明，本发明方法下绵萆薢饮片与颗粒所得斑点信息无明显差异，且在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

实施例6

本实施例与实施例1的区别在于，展开剂的比例不同，具体的，采用4:1、4:2、4:3、4:4的环己烷-乙酸乙酯的4种比例，分别进行薯蓣皂苷元对照品、绵萆薢对照药材以及3批绵萆薢的标准汤剂冻干粉的考察，考察结果如图13-16所示。本实施例中该绵萆薢对照药材以及绵萆薢的标准汤剂冻干粉均采用实施例1中供试品溶液相同的制备方法进行处理。该图13-16中，编号1为薯蓣皂苷元对照品，进样量1μl；编号2为绵萆薢对照药材，进样量5μl；编号3为绵萆薢标准汤剂冻干粉，进样量1μl；编号4为绵萆薢标准汤剂冻干粉，进样量2μl；编号5为绵萆薢标准汤剂冻干粉，进样量4μl。

该绵萆薢的标准汤剂冻干粉的具体制备过程为：取绵萆薢饮片，置于砂锅中，浸泡30分钟，一煎加入饮片量15倍水，武火煮沸后，文火煎煮30分钟，趁热过滤，迅速冷却，备用；二煎加饮片量12倍水，武火煮沸后，文火煎煮20分钟，趁热过滤，迅速冷却备用；合并滤液，65℃浓缩，浓缩至料液比约为1：1，此时，相对密度为1.05-1.10(50℃)，冷冻干燥，即得。

实施例7

本实施例与实施例1的区别在于，供试品溶液的制备过程中回流时间不同，具体制备过程如下：

取绵萆薢配方颗粒各1g，加25ml的水与2ml的盐酸，分别加热回流15分钟、30分钟和60分钟，放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解制备得到供试品溶液。

采用上述供试品溶液进行薄层鉴别，薄层鉴别过程与实施例1相同，鉴别结果如图17所示。图17中，编号1为薯蓣皂苷元对照品，进样量1μl；编号2为绵萆薢对照药材，进样量10μl；编号3为供试品溶液，回流时间15分钟；编号4为供试品溶液，回流时间30分钟；编号5为供试品溶液，回流时间60分钟。

通过检测得知，在回流15min-60min之间均可以获得较为丰富的斑点信息，且15min-60min之间的斑点信息无明显差异，因此，优选回流时间为15min-30min，可以有效进一步提高处理效率。

实施例8

本实施例与实施例1的区别在于，供试品溶液的制备过程中提取方式不同，具体过程如下：

分别取绵萆薢配方颗粒各1g，加25ml的水与2ml的盐酸，一组超声处理1小时，另一组回流1小时，放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

采用上述供试品溶液进行薄层鉴别，薄层鉴别过程与实施例1相同，鉴别结果如图18所示。图18中，编号1为薯蓣皂苷元对照品，进样量1μl；编号2为绵萆薢对照药材，进样量10μl；编号3为供试品溶液，超声1h；编号4为供试品溶液，回流1h。

通过对比可知：超声与回流所提取的供试品，斑点信息差异较大，回流的斑点信息更丰富，因此选择回流为最佳方案。

实施例9

本实施例与实施例1的区别在于，供试品溶液的制备过程中萃取溶剂不同，本实施例中的萃取溶剂采用水饱合的正丁醇，其他与实施例1均相同，本实施例中采用水饱合的正丁醇替换乙酸乙酯时获得的斑点信息与乙酸乙酯萃取获得的斑点信息一致，但是，本实施例的供试品溶液在制备过程中易乳化。

实施例10

本实施例中包括：

(1)、与实施例1的区别在于，供试品溶液的制备过程中，取绵萆薢配方颗粒0.5g，加水20ml(最小用水量)、盐酸2ml，加热回流10分钟，其余与实施例1相同。

(2)、与实施例1的区别在于，供试品溶液的制备过程中，取绵萆薢配方颗粒0.5g，加水35ml(最大用水量)、盐酸2ml，加热回流30分钟，其余与实施例1相同。

上述制备方法得到的供试品溶液进行检测时，斑点信息与实施例1完全相同。

对比例1

本实施例采用《中国药典》2015年版一部的方法对绵萆薢饮片以及绵萆薢配方颗粒进行薄层色谱检测，具体过程如下：

供试品溶液的制备：

绵萆薢供试品为绵萆薢配方颗粒时，取绵萆薢配方颗粒2g，加甲醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml使溶解，用乙醚25ml洗涤，弃去乙醚液，水液加盐酸2ml，加热回流1.5小时，放冷，用乙醚振摇提取2次，每次25ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。

绵萆薢供试品为绵萆饮片时，取绵萆薢饮片2g，加甲醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml使溶解，用乙醚25ml洗涤，弃去乙醚液，水液加盐酸2ml，加热回流1.5小时，放冷，用乙醚振摇提取2次，每次25ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。

对照药材溶液的制备：取绵萆薢对照药材2g，加甲醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml使溶解，用乙醚25ml洗涤，弃去乙醚液，水液加盐酸2ml，加热回流1.5小时，放冷，用乙醚振摇提取2次，每次25ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为对照药材溶液。

薄层色谱条件：吸取供试品与对照药材两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮(9：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸试液，在105℃加热至斑点显色清晰，检测结果如图19-20所示。图19-20中，编号1为绵萆薢对照药材；编号2为供试品溶液。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种绵萆薢供试品的制备方法，其特征在于，包括：

取绵萆薢供试品，将其与体积浓度为5％-10％的盐酸溶液混合后进行提取，提取时间为10-60min，提取后采用萃取溶剂进行萃取获得萃取液，蒸干，残渣加溶解溶剂进行溶解后即可获得供试品溶液。

2.根据权利要求1所述的一种绵萆薢供试品的制备方法，其特征在于，所述萃取溶剂为乙酸乙酯或水饱合的正丁醇；所述溶解溶剂为甲醇。

3.根据权利要求1或2所述的一种绵萆薢供试品的制备方法，其特征在于，每0.5-1g绵萆薢供试品采用22-37ml的盐酸溶液进行提取；每0.5-1g绵萆薢供试品采用15-30ml的萃取溶剂进行萃取；每0.5-1g绵萆薢供试品采用2-4ml溶解溶剂进行溶解。

4.根据权利要求1-3任一所述的一种绵萆薢供试品的制备方法，其特征在于，所述提取的方式为加热回流或超声提取；提取时间为10-30min；

所述萃取的次数为2-3次。

5.根据权利要求1-4任一所述的一种绵萆薢供试品的制备方法，其特征在于，所述绵萆薢供试品为绵萆薢药材、绵萆薢饮片、绵萆薢中间产物或绵萆薢配方颗粒；所述绵萆薢中间产物包括但不限于提取液、浓缩液、干燥粉。

6.一种绵萆薢供试品的薄层鉴别方法，其特征在于，采用权利要求1-5任一所述的一种绵萆薢供试品的制备方法制备得到的供试品溶液进行薄层鉴别。

7.根据权利要求6所述的一种绵萆薢供试品的薄层鉴别方法，其特征在于，所述薄层鉴别的过程为：

将供试品溶液点于硅胶G薄层板上，以4:(1-4)的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以显色剂后，加热至斑点显色清晰，紫外灯检视。

8.根据权利要求7所述的一种绵萆薢供试品的薄层鉴别方法，其特征在于，薄层鉴别中还包括对照药材溶液和对照品溶液，点于与供试品溶液相同的硅胶G薄层板上；所述对照药材溶液采用对照药材制备得到，其制备方法与供试品溶液相同；所述对照品溶液采用薯蓣皂苷元加甲醇制成，对照品溶液中薯蓣皂苷元的浓度为0.1-0.2mg/ml。

9.根据权利要求7或8所述的一种绵萆薢供试品的薄层鉴别方法，其特征在于，所述环己烷-乙酸乙酯的比例为4:(3-4)。

10.根据权利要求9所述的一种绵萆薢供试品的薄层鉴别方法，其特征在于，所述显色剂为10％的硫酸乙醇溶液，紫外灯波长为365nm；显色时，所述加热温度为105℃。

Images