CN113730592A - 一种鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂及制备方法和应用 - Google Patents
一种鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂及制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113730592A CN113730592A CN202111033109.1A CN202111033109A CN113730592A CN 113730592 A CN113730592 A CN 113730592A CN 202111033109 A CN202111033109 A CN 202111033109A CN 113730592 A CN113730592 A CN 113730592A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- duck tembusu
- tembusu virus
- protective agent
- freeze
- live vaccine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 83
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 title claims abstract description 58
- 241000686770 Duck Tembusu virus Species 0.000 title claims abstract description 50
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 title claims abstract description 37
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 41
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 41
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 24
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical compound NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims abstract description 14
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims abstract description 14
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims abstract description 13
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims abstract description 13
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims abstract description 13
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims abstract description 13
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims abstract description 13
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims abstract description 13
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 claims abstract description 11
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims abstract description 10
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims abstract description 10
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Natural products NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims abstract description 8
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 claims abstract description 7
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000009777 vacuum freeze-drying Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims abstract description 3
- -1 polypeptone Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 10
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 10
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 8
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 claims description 7
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 7
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 5
- 239000008236 heating water Substances 0.000 claims description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 5
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 3
- 108010079058 casein hydrolysate Proteins 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 claims 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 4
- 230000032683 aging Effects 0.000 abstract description 3
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 abstract description 3
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 abstract 1
- 210000003746 feather Anatomy 0.000 description 12
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 8
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 6
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 description 5
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 5
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 5
- 241000907504 Tembusu virus Species 0.000 description 4
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 3
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 231100000645 Reed–Muench method Toxicity 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 206010003591 Ataxia Diseases 0.000 description 1
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000013095 identification testing Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 208000005963 oophoritis Diseases 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000009993 protective function Effects 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000011076 safety test Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
- C12N2770/24134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Mycology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本发明公开了一种鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂，由明胶、多聚蛋白胨、胰蛋白胨、酶解酪蛋白、乳糖、蔗糖、硫脲、聚乙烯吡咯烷酮、葡聚糖、山梨醇和注射用水组成；将鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂与鸭坦布苏病毒原液按体积比1:1.5混合分装，经真空冷冻干燥处理得鸭坦布苏病毒病活疫苗。本发明耐热保护剂，各组分相互作用，提高疫苗冻干过程中对温度的耐受性，减少效力损失，冻干前后病毒损失率不超过0.3个滴度，本发明鸭坦布苏病毒病冻干耐热保护剂用于鸭坦布苏病毒病活疫苗，其特点为耐老化程度高，37℃放置15天，物理性状良好，每瓶疫苗的病毒滴度仅下降0.2～0.3个，2～8℃条件下可存放36个月，滴度无明显下降。
Description
技术领域
本发明涉及疫苗耐热保护剂领域，特别是一种鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂及制备方法和应用。
背景技术
坦布苏病毒病俗称“黄病毒病”、“出血性卵巢炎”，最早于2010年在浙江某鸭群被发现，随后证明它是由坦布苏病毒感染引起的。该病可造成产蛋鸭、鹅群产蛋率骤然下降至绝产，亦可引起雏鸭、鹅出现共济失调、瘫痪和死亡。给我国水禽养殖业造成了严重的经济损失。随着鸭群在产前多使用免疫效果更确实的活疫苗进行免疫预防，当前临床上已鲜有该病引起降蛋的案例发生。坦布苏病毒病活疫苗以及大多数兽用活疫苗产品使用常规冻干保护剂。常规保护剂主要成分为脱脂牛奶、蔗糖、明胶等，组方简单、配制简便、易溶性良好，但热稳定性和保护功能差，产品的保存条件较为苛刻，大多需要在-15℃以下保存。在疫苗生产、运输以及使用过程中，如果冷链系统控制不当，疫苗保存环境温度升高，常常导致疫苗效力下降或失效，造成免疫失败。发达国家早在20世纪80年代就开始进行耐热保护剂的研究，目前已经基本采用耐热保护剂生产活疫苗，但由于保护剂的研究和应用均属于专利资料，各国都处于保密状态，耐热冻干保护剂比常规的冻干保护剂更周到地考虑了具有生物活性的制品在较高温度和较长保存时间的情况下，冻干过程可能产生的物理和化学变化对活疫苗存活的影响，通过添加填充剂、防冻剂、抗氧化剂、酸碱调整剂、缓冲剂、羟基中和剂、低分子化合物、高分子化合物等，确保病毒在2～8℃条件下，保存期可达24个月，效价无明显下降，因而其保护性能要比传统保护剂更为优良，从而使活疫苗的储存、运输和使用更方便、经济。随着我国规模化养殖的飞速发展，养殖密度加大，防疫模式也要相应的变化，防疫质量是其中的关键问题，活疫苗的冷链运输及储存温度要求非常高，控制不好直接影响疫苗质量，耐热保护剂的研制开发显得尤为重要。
发明内容
本发明的目的是要解决鸭坦布苏病毒病疫苗因冷链运输控制不好影响疫苗质量的问题，提供一种鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂及制备方法和应用。
为达到上述目的，本发明是按照以下技术方案实施的：
本发明的第一个目的是要提供一种鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂，由以重量百分比计的组份组成：明胶0.8～1.2％、多聚蛋白胨3～6％、胰蛋白胨2～5％、酶解酪蛋白3～6％、乳糖5～10％、蔗糖1～3％、硫脲1～5％、聚乙烯吡咯烷酮0.5～3％、葡聚糖0.1～1％、山梨醇0.1～2％，余量为注射用水。
作为本发明的优选方案，所述鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂，由以重量百分比计的组份组成：明胶1％、多聚蛋白胨4.5％、胰蛋白胨3％、酶解酪蛋白3.5％、乳糖10％、蔗糖3％、硫脲2.5％、聚乙烯吡咯烷酮1.2％、葡聚糖0.6％、山梨醇0.6％，余量为注射用水。
作为本发明的优选方案，所述聚乙烯吡咯烷酮为聚乙烯吡咯烷酮PVPK30。
本发明的第二个目的是要提供一种如权利要求1所述的鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
用玻璃容器称取配制总体积的3/5蒸馏水，按顺序依次将明胶、多聚蛋白胨、胰蛋白胨、酶解酪蛋白、乳糖、蔗糖、硫脲、聚乙烯吡咯烷酮、葡聚糖、山梨醇加入蒸馏水中，将玻璃容器置于超声波加热水浴中，搅拌加热及超声波高频振动使各组分完全溶解后加入余量注射用水，再进行灭菌处理。
作为本发明的优选方案，所述灭菌处理为：于116℃下灭菌处理20分钟。
本发明的第三个目的是要提供一种如权利要求1或2所述的鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂的应用，其特征在于：所述鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂用于制备鸭坦布苏病毒病活疫苗。
进一步地，制备鸭坦布苏病毒病活疫苗的具体步骤为：将鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂与鸭坦布苏病毒原液按体积比1:1.5混合分装，经真空冷冻干燥处理得鸭坦布苏病毒病活疫苗。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明耐热保护剂，各组分相互作用，提高疫苗冻干过程中对温度的耐受性，减少效力损失，冻干前后病毒损失率不超过0.3个滴度。
本发明鸭坦布苏病毒病冻干耐热保护剂用于鸭坦布苏病毒病活疫苗，活疫苗耐老化程度高，37℃放置15天，物理性状良好，每瓶疫苗的病毒滴度仅下降0.2～0.3个，2～8℃条件下可存放36个月，滴度无明显下降，说明本发明解决了常规保护剂活疫苗因冷链运输控制不好影响疫苗质量的问题。
本发明耐热保护剂的原料成本低、配制方法简单、可实现工业大规模生产。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步的详细说明。此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明，并不用于限定发明。
实施例1
用玻璃容器称取配制总体积的3/5蒸馏水，按顺序依次将重量百分比为：明胶0.8％、多聚蛋白胨3％、胰蛋白胨2％、酶解酪蛋白3％、乳糖5％、蔗糖1％、硫脲1％、聚乙烯吡咯烷酮PVPK30 0.5％、葡聚糖0.1％、山梨醇0.1％加入蒸馏水中，将玻璃容器置于超声波加热水浴中，搅拌加热及超声波高频振动使各组分完全溶解后加入余量注射用水，于116℃下灭菌处理20分钟，即制得鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂。
实施例2
用玻璃容器称取配制总体积的3/5蒸馏水，按顺序依次将重量百分比为：明胶1.2％、多聚蛋白胨6％、胰蛋白胨5％、酶解酪蛋白6％、乳糖10％、蔗糖3％、硫脲5％、聚乙烯吡咯烷酮PVPK30 3％、葡聚糖1％、山梨醇2％加入蒸馏水中，将玻璃容器置于超声波加热水浴中，搅拌加热及超声波高频振动使各组分完全溶解后加入余量注射用水，于116℃下灭菌处理20分钟，即制得鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂。
实施例3
用玻璃容器称取配制总体积的3/5蒸馏水，按顺序依次将重量百分比为：明胶1％、多聚蛋白胨4.5％、胰蛋白胨3％、酶解酪蛋白3.5％、乳糖10％、蔗糖3％、硫脲2.5％、聚乙烯吡咯烷酮PVPK30 1.2％、葡聚糖0.6％、山梨醇0.6％加入蒸馏水中，将玻璃容器置于超声波加热水浴中，搅拌加热及超声波高频振动使各组分完全溶解后加入余量注射用水，于116℃下灭菌处理20分钟，即制得鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂。
对比实施例1
选用鸭坦布苏病毒病常规保护剂，包括以下重量组分：明胶10％、蔗糖40％，余量补注射用水。配制方法：称取配制总体积的3/5注射用水，将明胶、蔗糖依次溶解，待上种试剂完全溶解后再进行下个试剂的溶解，待全部溶解后余量补注射用水，116℃高压灭菌20分钟，即得对比例保护剂。
实施例4
本实施例记载了所述鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂可以用于制备鸭坦布苏病毒病活疫苗，其具体步骤为：将实施例3制得的鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂与鸭坦布苏病毒原液按体积比1:1.5混合分装，经真空冷冻干燥处理得鸭坦布苏病毒病活疫苗，记为耐热保护剂疫苗。另外，取对比例保护剂与鸭坦布苏病毒原液按1：7混合配苗分装，1.7ml/瓶，然后立即进行真空冷冻干燥，记为常规保护剂疫苗。
对实施例冻干疫苗的检测
1、产品的物理性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验、鉴别检验、安全性检验、剩余水分测定和真空度测定按《中国兽药典》进行检验。
2、冻干周期不超过48小时。
3、保护剂毒性试验
按产品当中含保护剂量的10倍量，肌肉接种21～35日龄易感鸭10只，每只0.2ml，接种后连续观察14日，应不出现任何不良反应。
4、病毒含量测定及标准
(1)测定方法
按瓶签注明羽份，用维持液稀释成每0.1ml含1羽份，再用维持液作10倍系列稀释，取1取10-3、10-4、10-5、10-64个稀释度分别接种在生长良好的DF-1细胞的96孔板上，每个稀释度接种6孔，每孔0.1ml，置37℃、含5％CO2的细胞培养箱中继续培养6日，观察并记录细胞病变，根据Reed-Muench法计算TCID50。
(2)达到标准
①冻干病毒损失率为0.4个滴度以内。
②冻干后每羽份病毒含量应≥104.0TCID50。
③产品37℃条件下保存15天，病毒损失率为0.3个滴度以内，每羽份病毒含量应≥103.5TCID50。
④产品在2～8℃条件下保存36个月，病毒损失率为0.3个滴度以内，每羽份病毒含量应≥103.5TCID50。
通过上述方法对耐热保护剂疫苗和常规保护剂疫苗进行检测，检测结果如下：
(1)性状：淡黄色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解；
(2)无菌检验：按现行《中国兽药典》附录进行检验，各样品均无菌生长；
(3)支原体检验：按现行《中国兽药典》附录进行检验，各样品均无支原体生长；
(4)外源病毒检验：按现行《中国兽药典》附录进行检验，各样品均无外源病毒污染；
(5)鉴别检验：将疫苗用维持液稀释至102.0TCID50/0.1ml，与等体积抗鸭坦布苏病毒特异性单克隆抗体(中和抗体效价不低于10)混合，37℃中和1小时，接种生长良好的DF-1细胞的96孔细胞培养板10孔，每孔0.2ml；同时设病毒对照和维持液对照，各接种10孔。置37℃、含5％CO2的细胞培养箱中培养6日，观察并记录细胞病变(CPE)。各样品病毒对照孔均产生CPE，而中和孔与维持液对照孔应无CPE出现；
(6)安全检验：每批样品任抽3瓶，按瓶签注明羽份，用灭菌生理盐水稀释为每0.2ml含10羽份，等量混合后，肌肉接种21～35日龄健康易感鸭10只，每只0.2ml，接种后连续观察14日。所有样品均未出现由疫苗引起的任何症状
(7)效力检验
病毒含量测定
每批样品任抽1瓶，按瓶签注明羽份，用维持液稀释成每0.1ml含1羽份，再用维持液作10倍系列稀释，取10-3、10-4、10-5、10-64个稀释度，分别接种在生长良好的DF-1细胞的96孔板上，每个稀释度接种6孔，每孔0.1ml，置37℃、含5％CO2的细胞培养箱中继续培养6日，观察并记录细胞病变，根据Reed-Muench法计算TCID50。所有样品每羽份病毒含量均≥103.5TCID50。
血清法
每批次任抽1瓶，按瓶签注明羽份，用灭菌生理盐水稀释为每0.2ml含1羽份，肌肉接种21～35日龄健康易感鸭10只，每只0.2ml。另10只不接种，作为对照。接种后14日，所有鸭采血，分离血清，用鸭坦布苏病毒ELISA抗体检测方法测定抗体效价。所有样品接种鸭应10只的ELISA抗体效价均≥20，对照鸭的ELISA抗体效价应均＜5。
(8)剩余水份测定按现行《中国兽药典》附录进行测定，各样品剩余水份均≤3.5％；
(9)真空度测定按现行《中国兽药典》附录进行测定，各样品真空度均合格。
耐热保护剂疫苗和常规保护剂疫苗在不同条件和放置不同时间病毒含量情况，单位是lgTCID50/羽份，具体检测结果如下：
(1)鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干前后毒价变化如表1所示：
表1
从表1结果可以看出，通过3次重复试验可以看出采用本发明的耐热保护剂疫苗在冻干过程的保护性能略优于常规保护剂疫苗，冻干损失0.2滴度以内。
(2)鸭坦布苏病毒病活疫苗耐老化实验和保存期实验
将耐热保护剂疫苗和常规保护剂疫苗，分别置37℃和2～8℃保存，定期取出若干瓶，检测病毒含量变化情况，其结果见表2表3。
表2
表3
由表2可知，常规保护剂疫苗通过3次重复实验数据可以看出在37℃耐热15天，病毒含量降低2.6～2.8个滴度，耐热保护剂疫苗损失在0.3个滴度以内。
由表3可知，常规保护剂疫苗通过3次重复实验数据可以看出在2～8℃保存36个月，病毒含量降低2～2.16个滴度，耐热保护剂疫苗损失在0.3个滴度以内。
上述实验结果可见，本发明的耐热保护剂能有效提高鸭坦布苏病毒病活疫苗的保存期。
本发明的技术方案不限于上述具体实施例的限制，凡是根据本发明的技术方案做出的技术变形，均落入本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂，其特征在于，由以重量百分比计的组份组成：明胶0.8～1.2％、多聚蛋白胨3～6％、胰蛋白胨2～5％、酶解酪蛋白3～6％、乳糖5～10％、蔗糖1～3％、硫脲1～5％、聚乙烯吡咯烷酮0.5～3％、葡聚糖0.1～1％、山梨醇0.1～2％，余量为注射用水。
2.根据权利要求1所述的鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂，其特征在于，由以重量百分比计的组份组成：明胶1％、多聚蛋白胨4.5％、胰蛋白胨3％、酶解酪蛋白3.5％、乳糖10％、蔗糖3％、硫脲2.5％、聚乙烯吡咯烷酮1.2％、葡聚糖0.6％、山梨醇0.6％，余量为注射用水。
3.根据权利要求1或2所述的鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂，其特征在于：所述聚乙烯吡咯烷酮为聚乙烯吡咯烷酮PVPK30。
4.一种如权利要求1所述的鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
用玻璃容器称取配制总体积的3/5蒸馏水，按顺序依次将明胶、多聚蛋白胨、胰蛋白胨、酶解酪蛋白、乳糖、蔗糖、硫脲、聚乙烯吡咯烷酮、葡聚糖、山梨醇加入蒸馏水中，将玻璃容器置于超声波加热水浴中，搅拌加热及超声波高频振动使各组分完全溶解后加入余量注射用水，再进行灭菌处理。
5.根据权利要求4所述的鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂的制备方法，其特征在于：所述灭菌处理为：于116℃下灭菌处理20分钟。
6.一种如权利要求1或2所述的鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂的应用，其特征在于：所述鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂用于制备鸭坦布苏病毒病活疫苗。
7.根据权利要求6所述的鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂的应用，其特征在于，制备鸭坦布苏病毒病活疫苗的具体步骤为：将鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂与鸭坦布苏病毒原液按体积比1:1.5混合分装，经真空冷冻干燥处理得鸭坦布苏病毒病活疫苗。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111033109.1A CN113730592B (zh) | 2021-09-03 | 2021-09-03 | 一种鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂及制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111033109.1A CN113730592B (zh) | 2021-09-03 | 2021-09-03 | 一种鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂及制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113730592A true CN113730592A (zh) | 2021-12-03 |
| CN113730592B CN113730592B (zh) | 2023-12-19 |
Family
ID=78735487
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111033109.1A Active CN113730592B (zh) | 2021-09-03 | 2021-09-03 | 一种鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂及制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113730592B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116440282A (zh) * | 2023-05-09 | 2023-07-18 | 中海生物制药(泰州)有限公司 | 一种鸡传染性支气管炎活疫苗冻干保护剂及其制备方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105274064A (zh) * | 2015-11-30 | 2016-01-27 | 齐鲁动物保健品有限公司 | 一种鸭坦布苏病毒弱毒疫苗株及其应用 |
| CN107281481A (zh) * | 2017-08-02 | 2017-10-24 | 华派生物工程集团有限公司 | 一种伪狂犬活疫苗耐热冻干保护剂、制备方法和冻干疫苗及制备方法 |
| CN108815517A (zh) * | 2018-07-13 | 2018-11-16 | 广东永顺生物制药股份有限公司 | 一种鸭瘟活疫苗及其制备方法 |
| CN108992674A (zh) * | 2018-07-13 | 2018-12-14 | 广东永顺生物制药股份有限公司 | 一种耐热保护剂及其应用 |
| EP3493839A1 (en) * | 2016-08-03 | 2019-06-12 | Takeda Vaccines, Inc. | Compositions and methods for stabilizing flaviviruses with improved formulations |
-
2021
- 2021-09-03 CN CN202111033109.1A patent/CN113730592B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105274064A (zh) * | 2015-11-30 | 2016-01-27 | 齐鲁动物保健品有限公司 | 一种鸭坦布苏病毒弱毒疫苗株及其应用 |
| EP3493839A1 (en) * | 2016-08-03 | 2019-06-12 | Takeda Vaccines, Inc. | Compositions and methods for stabilizing flaviviruses with improved formulations |
| CN107281481A (zh) * | 2017-08-02 | 2017-10-24 | 华派生物工程集团有限公司 | 一种伪狂犬活疫苗耐热冻干保护剂、制备方法和冻干疫苗及制备方法 |
| CN108815517A (zh) * | 2018-07-13 | 2018-11-16 | 广东永顺生物制药股份有限公司 | 一种鸭瘟活疫苗及其制备方法 |
| CN108992674A (zh) * | 2018-07-13 | 2018-12-14 | 广东永顺生物制药股份有限公司 | 一种耐热保护剂及其应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 李永洲;戴波涛;赵刚;: "兽用疫苗耐热保护剂的种类及作用机理", 现代畜牧兽医, no. 04 * |
| 杨泽林, 吴宣, 饶德安, 齐雪峰: "耐热冻干保护剂及其在兽用冻干活疫苗中的应用", 四川畜牧兽医, no. 12 * |
| 陈果亮: "新城疫（ND-C30）活疫苗耐热保护剂的筛选", 《扬州大学硕士学位论文》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116440282A (zh) * | 2023-05-09 | 2023-07-18 | 中海生物制药(泰州)有限公司 | 一种鸡传染性支气管炎活疫苗冻干保护剂及其制备方法 |
| CN116440282B (zh) * | 2023-05-09 | 2023-10-20 | 中海生物制药(泰州)有限公司 | 一种鸡传染性支气管炎活疫苗冻干保护剂及其制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113730592B (zh) | 2023-12-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102166362B (zh) | 猪繁殖与呼吸综合征活疫苗耐热冻干保护剂及制备方法 | |
| CN110354259B (zh) | 一种鸭呼肠孤病毒灭活疫苗的制备方法 | |
| CN104946600B (zh) | 一种h9亚型禽流感病毒株 | |
| CN111000993B (zh) | 一种鸭病毒性肝炎、鸭呼肠孤病毒病二联灭活疫苗及其制备方法 | |
| CN113491767A (zh) | 鸭圆环病毒病、新型鸭呼肠弧病毒病、鸭病毒性肝炎三联灭活疫苗及其制备方法 | |
| CN101690808A (zh) | 猪瘟、伪狂犬病二联活疫苗的制备方法及其制品 | |
| CN104258386B (zh) | 一种水貂病毒性肠炎灭活疫苗-犬瘟热活疫苗组合 | |
| CN103861098B (zh) | 一种猪流行性腹泻和大肠埃希氏菌二联疫苗 | |
| CN113730592A (zh) | 一种鸭坦布苏病毒病活疫苗冻干保护剂及制备方法和应用 | |
| CN102727883B (zh) | 猪繁殖与呼吸综合征与猪瘟二联疫苗及其用途 | |
| CN108465107B (zh) | 一种鸭2型腺病毒和番鸭细小病毒病二联灭活疫苗 | |
| CN108452298A (zh) | 一种用spf鸡胚细胞生产黄热病减毒活疫苗的工艺 | |
| CN115581772A (zh) | 一种疫苗冻干耐热保护剂及其制备方法和应用 | |
| CN105920596B (zh) | 一种番鸭细小病毒病、小鹅瘟二联疫苗 | |
| CN110404063B (zh) | 采用非免鸡蛋制备鸡传染性支气管炎病毒抗原的方法 | |
| CN109055320B (zh) | 一株传染性支气管炎病毒分离株及在疫苗制备中的应用 | |
| CN112094339A (zh) | 一种猪圆环病毒2型阳性血清及其制备方法 | |
| CN103933561B (zh) | 一种猪流行性腹泻活疫苗 | |
| CN108300703B (zh) | 鹿源牛病毒性腹泻灭活疫苗及其制备方法 | |
| CN105582535A (zh) | 猪瘟、伪狂犬病二联活疫苗的制备方法及其制品 | |
| CN112618706B (zh) | 沙门氏菌、鸭疫里默氏杆菌、大肠埃希氏杆菌病三联疫苗 | |
| CN106512017A (zh) | 用于猪支原体肺炎活疫苗耐热保护剂及其制备方法和应用 | |
| CN109280648B (zh) | 一种制备水貂细小病毒性肠炎抗原蛋白复合物的方法、抗原蛋白复合物及其应用 | |
| CN106511990A (zh) | 一种兽用冻干布氏菌病活疫苗的浓缩工艺及制备工艺 | |
| CN107982532B (zh) | 一种鸭甲肝病毒抗原抗体复合物疫苗及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Liu Bin Inventor after: Lian Wei Inventor after: Wang Shi Inventor after: Song Songlin Inventor after: Yang Zhongru Inventor after: Yu Zhigang Inventor after: Zhang Zeyue Inventor after: Jing Likun Inventor before: Liu Bin Inventor before: Yang Zhongru Inventor before: Yu Zhigang Inventor before: Zhang Zeyue Inventor before: Jing Likun |
|
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |