CN113730398A - 青蒿琥酯及包含其的组合物的新应用 - Google Patents

青蒿琥酯及包含其的组合物的新应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种青蒿琥酯在制备防治耐受BRAF(V600E)抑制剂的肿瘤的效果的药物中的应用，以及人参皂苷Rg3和青蒿琥酯组合物在制备防治耐受BRAF(V600E)抑制剂的肿瘤的药物中的应用，如此能够增强对耐受BRAF(V600E)抑制剂的肿瘤的治疗效果。

Description

青蒿琥酯及包含其的组合物的新应用
技术领域
本发明涉及药物的新应用，特别是涉及一种青蒿琥酯及包含其的组合物的新应用。
背景技术
BRAF属于丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶，是生长信号转导蛋白激酶家族中的一员。BRAF基因的T1799A点突变(即V600E突变)会导致BRAF蛋白持续活化，从而激活下游的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外调节蛋白激酶(ERKs)信号级联通路，刺激细胞增殖和分化，抑制细胞凋亡，最终促进癌症进展。该突变发生在多种癌症中，如毛细胞白血病(约100％)、Erdheim-Chester血癌(约54％)、甲状腺乳头状癌(约50％)、黑色素瘤(40％-60％)、结直肠癌(约12％)和非小细胞肺癌(约7％)等。维罗非尼(Vemurafenib)是美国食品药品监督管理局(FDA)批准的第一个BRAF(V600E)抑制剂，被用于治疗不可切除或转移性的BRAF(V600E)突变阳性黑色素瘤和Erdheim-Chester血癌，但患者往往在接受治疗5-8月后出现耐药。另一个BRAF(V600E)抑制剂达拉非尼(Dabrafenib)以及BRAF下游MEK的抑制剂曲美替尼(Trametinib)和考比替尼(Cobimetinib)也被FDA批准用于BRAF(V600E)突变型黑色素瘤，但患者同样会对它们产生耐药。后来FDA批准联合使用BRAF(V600E)抑制剂及MEK抑制剂，包括曲美替尼/达拉非尼组合和考比替尼/维罗非尼组合，治疗黑色素瘤。其疗效显著，患者中位生存期达22.3月。但联合用药只是延迟了耐药发生，患者在接受治疗数月后也对药物组合产生耐药。此外，BRAF(V600E)突变阳性的结直肠癌患者以及部分BRAF(V600E)突变阳性的黑色素瘤和甲状腺癌患者对BRAF(V600E)抑制剂固有耐药。耐药性是BRAF(V600E)突变阳性肿瘤治疗的一大难题，迫切需要安全有效的药物治疗对BRAF(V600E)抑制剂耐药的肿瘤病人。
人参皂苷Rg3(Ginsenoside Rg3)是国家I类抗肿瘤中药“参一胶囊”的组成成分，分子式是C42H72O13，分子量为784.30。人参皂苷Rg3有20-R-Rg3【结构式如式(I)】和20-S-Rg3【结构式如式(II)】两种旋光异构体。参一胶囊主要成分为20-R-Rg3，临床上主要与化疗药合用，提高化疗药对原发性肺癌、肝癌的疗效，改善肿瘤患者的气虚症状，提高机体免疫功能，并抑制肿瘤血管内皮细胞的增殖和新生血管的形成。研究发现人参皂苷Rg3对结肠癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、乳腺癌、黑色素瘤、鼻咽癌、前列腺癌、白血病等有较好的抗癌效果。此外，人参皂苷Rg3能增强人非小细胞肺癌对伊考替尼(Icotinib)的敏感性，减少肺癌细胞对顺铂的耐药性，还能逆转胶质母细胞瘤对替莫唑胺耐药。这提示人参皂苷Rg3有克服肿瘤耐药的潜能。我们前期研究发现，人参皂苷Rg3确实能抑制BRAF(V600E)抑制剂耐药肿瘤细胞的增殖。
Figure BDA0003291273570000021
青蒿琥酯(Artesunate)是青蒿素的半合成衍生物，其分子式是C19H28O8，分子量是384.42，结构式如式(III)。青蒿琥酯主要作用于疟原虫红内期无性体，杀灭红细胞内期的疟原虫，有抗疟疾作用。临床上青蒿琥酯适用于脑型疟及各种危重疟疾的抢救，毒副作用小。研究发现青蒿琥酯对B细胞淋巴瘤、卵巢癌、乳腺癌、大肠癌、黑色素瘤、鼻咽癌等多种肿瘤细胞有细胞毒性作用，而对正常细胞毒性较低。目前，关于青蒿琥酯对BRAF(V600E)抑制剂耐药肿瘤的作用，或人参皂苷Rg3和青蒿琥酯组合物对BRAF(V600E)抑制剂耐药肿瘤作用还未见报道。
Figure BDA0003291273570000031
发明内容
基于此，本发明青蒿琥酯在制备防治耐受BRAF(V600E)抑制剂的肿瘤的效果的药物中的应用，以及人参皂苷Rg3和青蒿琥酯组合物在制备防治耐受BRAF(V600E)抑制剂的肿瘤的药物中的应用，如此能够增强对耐受BRAF(V600E)抑制剂的肿瘤的治疗效果。
本发明的第一方面，提供青蒿琥酯或其衍生物在制备防治耐受BRAF(V600E)抑制剂的肿瘤的药物中的应用。
在其中一个实施例中，所述青蒿琥酯的衍生物为TF27(青蒿琥酯的三聚衍生物)。
本发明的第二方面，提供人参皂苷Rg3或其衍生物，与青蒿琥酯或其衍生物组成的组合物在制备治疗耐受BRAF(V600E)抑制剂的肿瘤的效果的药物中的应用。
在其中一个实施例中，所述青蒿琥酯的衍生物为TF27(青蒿琥酯的三聚衍生物)。
在其中一个实施例中，所述人参皂苷Rg3为20-S-Rg3和/或20-R-Rg3。
在其中一个实施例中，所述人参皂苷Rg3的衍生物为20(R)-25-OH-人参皂苷Rg3或dihydroginsenoside Rg3。
在其中一个实施例中，以质量百分比计，所述组合物包括：0.1％～99.9％的人参皂苷Rg3和/或其衍生物，以及99.9％～0.1％的青蒿琥酯和/或其衍生物。
在其中一个实施例中，所述药物还包括药学上可接受的辅料。
在其中一个实施例中，所述药物的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、口服液、注射剂或膏剂。
在其中一个实施例中，所述药物还包括抗癌药。
在其中一个实施例中，所述耐受BRAF(V600E)抑制剂的肿瘤为对靶向BRAF(V600E)的抑制剂或对靶向BRAF下游MEK的抑制剂固有耐药或获得性耐药的BRAF(V600E)突变阳性的黑色素瘤、大肠癌、前列腺癌、甲状腺癌、非小细胞肺癌、浆液性卵巢癌或多毛细胞白血病。
本发明提供两种用于制备防治耐受BRAF(V600E)抑制剂的肿瘤的药物，包括青蒿琥酯及人参皂苷Rg3与青蒿琥酯的组合物。实验证明，在细胞模型上，青蒿琥酯单用及与人参皂苷Rg3联用都能抑制BRAF(V600E)抑制剂耐药的黑色素瘤细胞增殖，并且人参皂苷Rg3和青蒿琥酯有协同作用，且药物处理对正常细胞均无明显毒性；在小鼠模型上，人参皂苷Rg3和青蒿琥酯的组合物能显著抑制耐受BRAF(V600E)抑制剂的黑色素瘤生长，并且不影响小鼠的体重。青蒿琥酯及其与人参皂苷Rg3的组合物均可用于制备防治耐受BRAF(V600E)抑制剂的肿瘤的药物。
附图说明
图1为人参皂苷Rg3与青蒿琥酯单用及联用对耐受BRAF(V600E)抑制剂的黑色素瘤细胞增殖的影响；与溶剂对照组比，*P<0.05，**P<0.01；δ表示药物联用有协同作用，CDI<1；δδ表示药物联用有显著协同作用，CDI<0.7；
图2为人参皂苷Rg3与青蒿琥酯单用及联用对正常细胞存活率的影响；
图3为人参皂苷Rg3与青蒿琥酯单用及联用在小鼠模型上对荷耐受BRAF(V600E)抑制剂的黑色素瘤生长的影响：(A)小鼠肿瘤图片；(B)小鼠肿瘤重量；(B)小鼠肿瘤体积生长曲线；与对照组比，*P<0.05。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的青蒿琥酯及包含其的组合物的新应用作进一步详细的说明。本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本发明公开内容理解更加透彻全面。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。
本文所使用的术语“和/或”、“或/和”、“及/或”的可选范围包括两个或两个以上相关所列项目中任一个项目，也包括相关所列项目的任意的和所有的组合，所述任意的和所有的组合包括任意的两个相关所列项目、任意的更多个相关所列项目、或者全部相关所列项目的组合。
本发明中，“第一方面”、“第二方面”等仅用于描述目的，不能理解为指示或暗示相对重要性或数量，也不能理解为隐含指明所指示的技术特征的重要性或数量。而且“第一”、“第二”、等仅起到非穷举式的列举描述目的，应当理解并不构成对数量的封闭式限定。
本发明中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。
本发明中，涉及到数值区间，如无特别说明，上述数值区间内视为连续，且包括该范围的最小值及最大值，以及这种最小值与最大值之间的每一个值。进一步地，当范围是指整数时，包括该范围的最小值与最大值之间的每一个整数。此外，当提供多个范围描述特征或特性时，可以合并该范围。换言之，除非另有指明，否则本文中所公开之所有范围应理解为包括其中所归入的任何及所有的子范围。
本发明中涉及的百分比含量，如无特别说明，对于固液混合和固相-固相混合均指质量百分比，对于液相-液相混合指体积百分比。
本发明中涉及的百分比浓度，如无特别说明，均指终浓度。所述终浓度，指添加成分在添加该成分后的体系中的占比。
本发明中“药学上可接受的”指在合理医学判断范围内适于施用患者且与合理益处/风险比相称的那些配体、材料、组合物和/或剂型。
本发明提供青蒿琥酯或其衍生物在制备治疗耐受BRAF(V600E)抑制剂的肿瘤的药物中的应用。
在其中一些具体的示例中，青蒿琥酯的衍生物为TF27(青蒿琥酯的三聚衍生物)或其他衍生物。
本发明还提供人参皂苷Rg3或其衍生物，与青蒿琥酯或其衍生物组成的组合物在制备治疗耐受BRAF(V600E)抑制剂的肿瘤的效果的药物中的应用。
在其中一些具体的示例中，青蒿琥酯的衍生物为TF27(青蒿琥酯的三聚衍生物)或其他衍生物。
在其中一些具体的示例中，人参皂苷Rg3为20-S-Rg3和/或20-R-Rg3。
在其中一些具体的示例中，人参皂苷Rg3的衍生物为20(R)-25-OH-人参皂苷Rg3、dihydroginsenoside Rg3或其他衍生物。
在其中一些具体的示例中，以质量百分比计，组合物包括：0.1％～99.9％的人参皂苷Rg3和/或其衍生物，以及99.9％～0.1％的青蒿琥酯和/或其衍生物。进一步地，以质量百分比计，所述组合物包括：55％～65％的人参皂苷Rg3和/或其衍生物，以及45％～35％的青蒿琥酯和/或其衍生物。更进一步地，以质量百分比计，所述组合物包括：60％～65％的人参皂苷Rg3和/或其衍生物，以及40％～35％的青蒿琥酯和/或其衍生物。在其中另外一些具体的示例中，以质量百分比计，组合物包括：25％～30％的人参皂苷Rg3和/或其衍生物，以及75％～70％的青蒿琥酯和/或其衍生物。
在其中一些具体的示例中，药物还包括药学上可接受的辅料。药学上可接受的辅料包括但不限于载体、助剂等。其中，“药学上可接受的载体”指药学上可接受的材料、组合物或媒剂，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或囊封材料。如本文所用，语言“药学上可接受的载体”包括与药物施用相容的缓冲剂、注射用无菌水、溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂及抗真菌剂、等渗剂及吸收延迟剂及诸如此类。在与配制物中其他成分兼容且对患者无害的意义上，每种载体必须为“药学上可接受的”。合适的实例包括但不限于：(1)糖，例如乳糖、葡萄糖及蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉及经取代或未经取代的β-环糊精；(3)纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素及乙酸纤维素；(4)粉状黄蓍胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，例如可可脂及栓剂蜡；(9)油类，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油及大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇及聚乙二醇；(12)酯类，例如油酸乙酯及月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁及氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲液；及(21)药物配制物中所采用的其他无毒兼容物质。
在其中一些具体的示例中，药物可被制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、口服液、注射剂、膏剂等任何一种剂型。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备，本发明不受上述所列剂型所限制。
在其中一些具体的示例中，药物可经口服、注射或外用形式给药，给药途径不受上述例子所限制。
在其中一些具体的示例中，药物还包括抗癌药。该抗癌药选自维罗非尼(Vemurafenib)、达拉非尼(Dabrafenib)、曲美替尼(Trametinib)、考比替尼(Cobimetinib)和其他BRAF(V600E)的抑制剂及靶向BRAF下游MEK的抑制剂中的一种或多种的组合。
在其中一些具体的示例中，耐受BRAF(V600E)抑制剂的肿瘤为对靶向BRAF(V600E)的抑制剂或对靶向BRAF下游MEK的抑制剂固有耐药或获得性耐药的BRAF(V600E)突变阳性的黑色素瘤、大肠癌、前列腺癌、甲状腺癌、非小细胞肺癌、浆液性卵巢癌或多毛细胞白血病。
以下为具体的实施例。
实施例中所用人参皂苷20-R-Rg3购于南京源植生物科技有限公司(中国)；
青蒿琥酯购于成都曼思特生物科技有限公司(中国)，经HPLC检测纯度都大于98％。
实施例1、人参皂苷Rg3与青蒿琥酯单用及联用对BRAF(V600E)靶向药物耐受的黑色素瘤细胞增殖的影响
1.1、实验材料
(1)人参皂苷20-R-Rg3：购于南京源植生物科技有限公司；称取一定量人参皂苷20-R-Rg3，用二甲基亚砜(DMSO)溶解为20mM的Rg3溶液(母液)，分装，放-20℃冰箱备用。
(2)青蒿琥酯：购于成都曼思特生物科技有限公司；称取一定量青蒿琥酯，用DMSO溶解为50mM的青蒿琥酯溶液(母液)，分装，放-20℃冰箱备用。
(3)维罗非尼：由LC Laboratories公司生产；称取一定量维罗非尼，用DMSO溶解为10mM的维罗非尼溶液(母液)，分装，放-20℃冰箱备用。
(4)A375细胞株【携带BRAF(V600E)突变的人黑色素瘤细胞】：购于美国ATCC细胞库，液氮保存。
(5)对维罗非尼获得性耐药的细胞A375R：在含有10％FBS和逐渐增加浓度(0.1-2μM)的维罗非尼的DMEM中培养A375细胞3个月，得到对维罗非尼耐药的黑素瘤细胞A375R，后续用含有2μM维罗非尼和10％FBS的DMEM培养细胞，维持其耐药性。
(6)DMEM培养基粉末：美国Gibco公司生产。
(7)0.5％胰蛋白酶-EDTA(10X)(Trypsin):100mL/瓶，美国Gibco公司生产。
(8)胎牛血清：500mL/瓶，美国Gibco公司生产。
(9)96孔平底培养板：韩国SPL公司生产。
(10)CCK8试剂盒：日本东仁(Dojindo)公司生产。
1.2、实验仪器
(1)二氧化碳培养箱：nu-4750e型，Nuaire公司生产。
(2)离心机：centrifuge 5702型，Eppendorf公司生产。
(3)生物安全柜：nu-425-400e型，Nuaire公司生产。
(4)电子天平：Mettler Toledo公司生产。
(5)倒置显微镜：Leica公司生产。
(6)水浴器：WNB 14，Memmert GmbH+Co公司生产。
(7)微孔板阅读仪：BIO-RAD公司生产。
1.3、实验方法及结果
收集培养的对维罗非尼获得性耐药的细胞A375R，调整细胞悬液浓度为3×103个/孔，加入96孔培养板内，每孔100μL，置37℃、5％的CO2细胞培养箱培养24小时。吸除旧培养基，加入20、25μM的人参皂苷Rg3，25、30μM的青蒿琥酯或人参皂苷Rg3与青蒿琥酯(ART)的组合物(Rg3/ART：20/25、20/30、25/30μM)，并设对照组(0.1％DMSO)和空白组(无细胞)，每组均设4个复孔，继续培养24小时。给药结束后按10μL每孔加入CCK8试剂，在4h内每间隔1h在450nm处检测各孔的OD值。所述OD值为被检测物吸收掉的光密度，为仪器上直接读取数据。用以下公式计算细胞存活率和药物联用效果。
细胞存活率＝(药物处理组OD值-空白孔OD值)/(对照组OD值-空白孔OD值)×100％。
两药相互作用系数(coefficient of drug interaction，CDI)＝人参皂苷Rg3与青蒿琥酯组合物组的细胞存活率与对照组细胞存活率之比/(人参皂苷Rg3组的细胞存活率与对照组细胞存活率之比)×(青蒿琥酯组的细胞存活率与对照组细胞存活率之比)。
CDI＞1，表示两药有拮抗作用；
CDI＝1，表示两药有相加作用；
CDI＜1，表示两药有协同作用，其中CDI＜0.7，表示两药有显著协同作用。
实验结果见表1和图1。
表1人参皂苷Rg3与青蒿琥酯单用及联用对BRAF(V600E)抑制剂耐药的黑色素瘤细胞增殖的影响
Figure BDA0003291273570000111
注：*表示与相对应的对照组比较p<0.05，**表示与相对应的对照组比较p<0.01。
δ表示药物联用有协同作用，CDI<1。
δδ表示药物联用有显著协同作用，CDI<0.7。
由表1及图1可见，人参皂苷Rg3、青蒿琥酯能抑制对维罗非尼获得性耐药A375R黑色素瘤细胞的增殖；人参皂苷Rg3与青蒿琥酯联用有协同作用。
实施例2、人参皂苷Rg3与青蒿琥酯单用及联用对正常细胞存活的影响
2.1、实验材料
(1)人参皂苷20-R-Rg3：购于南京源植生物科技有限公司；称取一定量人参皂苷Rg3，用DMSO溶解为20mM的Rg3溶液(母液)，分装，放-20℃冰箱备用。
(2)青蒿琥酯：购于成都曼思特生物科技有限公司；称取一定量青蒿琥酯，用DMSO溶解为50mM的青蒿琥酯溶液(母液)，分装，放-20℃冰箱备用。
(3)正常细胞细胞株：人永生化角质形成细胞HaCaT；购于美国ATCC细胞库，液氮保存。
(4)DMEM培养基粉末：美国Gibco公司生产。
(5)0.5％胰蛋白酶-EDTA(10X)(Trypsin):100mL/瓶，美国Gibco公司生产。
(6)胎牛血清：500mL/瓶，美国Gibco公司生产。
(7)96孔平底培养板：韩国SPL公司生产。
(8)CCK8试剂盒：日本东仁(Dojindo)公司生产。
2.2、实验仪器
(1)二氧化碳培养箱：nu-4750e型，Nuaire公司生产。
(2)离心机：centrifuge 5702型，Eppendorf公司生产。
(3)生物安全柜：nu-425-400e型，Nuaire公司生产。
(4)电子天平：Mettler Toledo公司生产。
(5)倒置显微镜：Leica公司生产。
(6)水浴器：WNB 14，Memmert GmbH+Co公司生产。
(7)微孔板阅读仪：BIO-RAD公司生产。
2.3、实验方法及结果
收集用含10％FBS的DMEM培养的HaCaT细胞，调整细胞悬液浓度为4×103个/孔，加入96孔培养板内，每孔100μL，置37℃、5％的CO2细胞培养箱培养24小时。吸除旧培养基，15μM的人参皂苷Rg3，10、15、20、50μM的青蒿琥酯或人参皂苷Rg3和青蒿琥酯不同配比的组合物，并设对照组(0.1％DMSO)和空白组(无细胞)，每组均设4个复孔，继续培养48小时。给药结束后按10μL每孔加入CCK8试剂，在4h内每间隔1h在450nm处检测各孔的OD值。所述OD值为被检测物吸收掉的光密度，为仪器上直接读取数据。细胞存活率及药物联用效果的计算如实施例1。
实验结果见表2和图2。
表2人参皂苷Rg3与青蒿琥酯单用及联用对正常细胞存活的影响
Figure BDA0003291273570000131
注：ns表示与对照组比较没有显著性差异。
由表2及图2可见，人参皂苷Rg3和青蒿琥酯单独及联用对人永生化角质形成细胞HaCaT无明显细胞毒作用。
实施例3、人参皂苷Rg3与青蒿琥酯联用对荷耐受BRAF(V600E)抑制剂的黑色素瘤小鼠的影响
3.1、实验材料
实验动物：雄性BALB/c-nu/nu裸鼠(约8周大小)，由香港中文大学动物实验中心提供。在香港浸会大学实验动物中心恒温恒压无菌环境中饲养。
对维罗非尼获得性耐药的细胞A375R：A375细胞购于美国ATCC细胞库，对维罗非尼耐药的黑素瘤细胞A375R在实施例1建立，后续用含有2μM维罗非尼和10％FBS的DMEM培养细胞，维持其耐药性。
人参皂苷Rg3灌胃液：称取7.2mg人参皂苷Rg3溶解于0.3mL的DMSO中，再用羧甲基纤维素钠(CMC-Na)稀释至6mL，得到1.2mg/mL人参皂苷Rg3溶液，过滤后分装保存。
青蒿琥酯灌胃液：称取18mg青蒿琥酯溶解于0.3mL的DMSO中，再用5％CMC-Na溶液稀释至6mL，得到3mg/mL青蒿琥酯溶液，过滤后分装保存。
曲美替尼灌胃液：称取10mg曲美替尼溶解于0.3mL的DMSO中，再用5％CMC-Na溶液稀释至30mL，得到0.33mg/mL曲美替尼溶液，过滤后分装保存。
3.2、实验方法与结果：
收集培养的对维罗非尼获得性耐药的细胞A375R，将细胞用磷酸盐缓冲盐水(PBS)重悬后，接种到BALB/c-nu/nu裸鼠的背部皮下，每只小鼠注射3×106个细胞，记为第0天。在第1天将小鼠按体重随机分成2组，对照组4只，阳性对照组4只，药物联用组3只，禁食8h后给药。阳性对照组每日给予小鼠灌胃0.33mg/kg/天的曲美替尼，药物联用组每日给予小鼠灌胃6mg/kg/天的人参皂苷Rg3和15mg/kg/天的青蒿琥酯，对照组给与等体积的溶剂(含5％DMSO的5％的CMC-Na溶液)，持续给药13天。间隔时间测量小鼠体重和肿瘤体积，绘制小鼠体重变化曲线和肿瘤体积变化曲线。在第14天实验结束时处死小鼠，剥离实体瘤、称瘤重，计算抑瘤率(％)。实验结果见表3和图3。
表3人参皂苷Rg3与青蒿琥酯联用对荷BRAF(V600E)靶向药物耐受的黑色素瘤小鼠的影响
Figure BDA0003291273570000141
注：*表示与对照组比较p<0.05。
实验结果表明，随着给药时间增加，阳性对照组和药物联用组中肿瘤体积增长速度低于对照组(图3A)。人参皂苷Rg3和青蒿琥酯联用组处理后荷瘤裸鼠的瘤重明显低于对照组(p<0.05)，对A375R肿瘤生长的抑制率为62.24％(表3，图3B)，并且对小鼠体重无明显影响。说明人参皂苷Rg3和青蒿琥酯联用可安全有效地抑制耐受BRAF(V600E)抑制剂的黑色素瘤在小鼠体内的生长。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，便于具体和详细地理解本发明的技术方案，但并不能因此而理解为对发明专利保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。应当理解，本领域技术人员在本发明提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或者有限的试验得到的技术方案，均在本发明所附权利要求的保护范围内。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求的内容为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。

Claims (10)

1.青蒿琥酯或其衍生物在制备防治耐受BRAF(V600E)抑制剂的肿瘤的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述青蒿琥酯的衍生物为青蒿琥酯的三聚衍生物。
3.人参皂苷Rg3或其衍生物，与青蒿琥酯或其衍生物组成的组合物在制备治疗耐受BRAF(V600E)抑制剂的肿瘤的效果的药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述青蒿琥酯的衍生物为青蒿琥酯的三聚衍生物。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述人参皂苷Rg3为20-S-Rg3和/或20-R-Rg3。
6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述人参皂苷Rg3的衍生物为20(R)-25-OH-人参皂苷Rg3或dihydroginsenoside Rg3。
7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，以质量百分比计，所述组合物包括：0.1％～99.9％的人参皂苷Rg3和/或其衍生物，以及99.9％～0.1％的青蒿琥酯和/或其衍生物。
8.根据权利要求1～7任一项所述的应用，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的辅料；及/或
所述药物的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、口服液、注射剂或膏剂。
9.根据权利要求1～7任一项所述的应用，其特征在于，所述药物还包括抗癌药。
10.根据权利要求1～7任一项所述的应用，其特征在于，所述耐受BRAF(V600E)抑制剂的肿瘤为对靶向BRAF(V600E)的抑制剂或对靶向BRAF下游MEK的抑制剂固有耐药或获得性耐药的BRAF(V600E)突变阳性的黑色素瘤、大肠癌、前列腺癌、甲状腺癌、非小细胞肺癌、浆液性卵巢癌或多毛细胞白血病。
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