CN113717297A - 一种玫瑰多糖及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种玫瑰多糖及其制备方法和应用，属于天然产物提取制备技术领域。本发明以玫瑰蒸煮渣为原料，通过优化提取工艺条件，最终获得玫瑰多糖，多糖提取率较高，同时与从玫瑰干花中提取的玫瑰多糖进行试验验证，研究发现无论是从玫瑰蒸煮渣中获得的玫瑰多糖还是直接从玫瑰干花中获得的玫瑰多糖，均具有良好的抗炎症、抗氧化效果，可广泛应用于食品、药品、日化用品和饲料等领域，有效提高了玫瑰花的综合利用价值。

Description

一种玫瑰多糖及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于天然产物提取制备技术领域，具体涉及一种玫瑰多糖及其制备方法和应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
玫瑰(Rosa rugosa Thunb.)为蔷薇科(Rosaceae)蔷薇属(Rosa)的多年生灌木，原产于亚洲东部地区，在我国具有两千余年的栽培历史，是我国的传统名花。由于其耐旱、耐寒适应性强，对土壤、温度等生长条件要求不高，因此玫瑰在我国广泛种植，山东、甘肃、云南、新疆是我国的玫瑰主产区，玫瑰的种植面积逐年升高。玫瑰不仅是具有观赏价值的园林植物，更是药食两用的传统经济作物，具有理气、活血、美容养颜、行气解郁等作用，主治月经不调、肝气胃痛、乳臃肿痛等症。玫瑰花是深受消费者青睐的食药两用珍惜资源，如何进一步深入开发玫瑰资源，提升玫瑰的附加值，延长玫瑰产业链是玫瑰产业急需解决的问题。
目前，玫瑰产业正在蓬勃发展，玫瑰花产品包括玫瑰干花蕾、玫瑰花酱、玫瑰花糖、玫瑰花饼等玫瑰花初加工食品，以及玫瑰精油、玫瑰细胞液、玫瑰水以及以此为原料进一步深加工而成的玫瑰面膜、玫瑰精华液等玫瑰系列化妆品。分析可以发现，玫瑰花相关产品虽然种类较丰富，但是同时存在较多问题。玫瑰花初加工食品虽然得益于玫瑰的口味和香气而受到了消费者的普遍喜爱，但是玫瑰初加工食品的科技含量、技术含量和附加值较低。玫瑰多糖等功效成分没有进行生物学功效评价并研发为玫瑰保健产品，玫瑰的药用价值没有充分利用。玫瑰精油、玫瑰水以及以瑰精油、玫瑰水为功效成分的玫瑰化妆品是最主要的玫瑰深加工产品，但是玫瑰精油及玫瑰水的得率很低，其余玫瑰精油、玫瑰水加工副产物玫瑰蒸煮渣均被丢弃或者制作为肥料。玫瑰花作为一种珍惜资源，每年仅仅4-5月份开花，玫瑰精油、玫瑰水提取工艺副产物——玫瑰蒸煮渣含有玫瑰多糖等玫瑰水溶性功效成分，其被丢弃或作为肥料无疑是玫瑰资源的极大浪费。
多糖是10个以上单糖分子通过醛糖或(和)酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子糖类化合物，广泛存在于植物、动物、微生物的细胞壁中。植物多糖是从植物组织中提取的多糖，据报道，植物多糖不仅仅具有营养生理功能，更具有特殊的生物学活性。玫瑰多糖是玫瑰花的主要活性成分，将玫瑰多糖从玫瑰花中提取出来，明确玫瑰多糖的功效，研发以玫瑰多糖为主要功效成分的玫瑰功能性食品、玫瑰保健食品及玫瑰化妆品是提高玫瑰花利用率，提升玫瑰附加值，延长玫瑰产业链的有效途径。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供一种玫瑰多糖及其制备方法和应用。本发明通过试验研究发现，不论是直接从玫瑰干花中提取的玫瑰多糖还是从玫瑰蒸煮渣中获得的玫瑰多糖，均具有良好的抗炎症、抗氧化效果，因此具有良好的实际应用之价值。
为实现上述技术目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明的第一个方面，提供玫瑰多糖在抗炎症和/或抗氧化性产品中的应用。
所述产品包括但不限于食品、药品、日化用品和饲料。
本发明中的玫瑰多糖是从玫瑰花中提取获得的多糖成分，即实际为一种玫瑰花多糖，对其提取制备工艺不做具体限定。同时，需要说明的是，此处的玫瑰花应做广义理解，即任何可能含有玫瑰花多糖的玫瑰花及其制品均属于本申请中玫瑰花的范畴，因此，此处的玫瑰花可以是玫瑰花鲜花或者玫瑰花干花，也可以是玫瑰花工业生产中产生的伴生物、废弃物等，如玫瑰蒸煮渣。其中，所述玫瑰蒸煮渣具体是在瑰精油/玫瑰水制备工艺中产生的玫瑰蒸煮水和玫瑰花渣的混合物。
本发明的第二个方面，提供一种玫瑰多糖的制备方法，所述制备方法包括从玫瑰蒸煮渣中提取获得。
具体的，所述制备方法包括：
S1、将玫瑰蒸煮渣进行过滤分离获取玫瑰花渣和玫瑰蒸煮水；
S2、将步骤S1制得的玫瑰花渣进行提取处理获得玫瑰花渣提取液；
S3、将步骤S1制得的玫瑰蒸煮水浓缩得浓缩液；或，
将步骤S2制得的玫瑰花渣提取液浓缩得浓缩液；或，
将步骤S1所述的玫瑰蒸煮水与步骤S2制得的玫瑰花渣提取液混合浓缩得浓缩液；
S4、将步骤S3制得的浓缩液与乙醇混合静置后，收集固形物。
或，所述玫瑰多糖的制备方法，包括从玫瑰花中直接提取处理获得。
具体的，所述提取制备方法包括：
S1、将玫瑰花干燥破碎后加水进行提取处理得提取液；
S2、将提取液进行浓缩得浓缩液并加入乙醇，混合静置后，收集固形物。
发明人经试验证明，采用上述方法制得的玫瑰多糖成分具有较佳的抗炎症和抗氧化作用，因此具有良好的实际应用之价值。
本发明的第三个方面，提供一种具有抗炎症和/或抗氧化的产品，所述产品包含上述玫瑰多糖。
所述产品包括但不限于食品、药品、日化用品和饲料。
上述一个或多个技术方案的有益技术效果：
上述技术方案中以玫瑰蒸煮渣为原料，通过优化提取工艺条件，最终获得玫瑰多糖，多糖提取率较高，同时从玫瑰干花中提取的玫瑰多糖进行试验验证，研究发现无论是从玫瑰蒸煮渣中获得的玫瑰多糖还是直接从玫瑰干花中获得的玫瑰多糖，均具有良好的抗炎症、抗氧化效果，可广泛应用于食品、药品、日化用品和饲料等领域，有效提高了玫瑰花的综合利用价值。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为本发明实施例1中苯酚-硫酸法标准曲线。
图2为本发明实施例2中不同提取方法对玫瑰多糖提取率的影响。
图3为本发明实施例3中玫瑰多糖的单糖组成分析，其中，A为标准品的离子色谱图，B为玫瑰多糖的离子色谱图。
图4为本发明实施例4中玫瑰多糖的还原力。
图5为本发明实施例4中玫瑰多糖的ABTS自由基清除能力。
图6为本发明实施例4中玫瑰多糖的DPPH自由基清除能力。
图7为本发明实施例4中玫瑰多糖的总抗氧化能力。
图8为本发明实施例4中玫瑰多糖的超氧阴离子自由基清除能力。
图9为本发明实施例4中玫瑰多糖的羟基自由基清除能力。
图10为本发明实施例5中玫瑰多糖对斑马鱼的抗炎效果图。
图11为本发明实施例6中玫瑰多糖对斑马鱼的抗炎效果图。
图12为本发明实施例8中玫瑰多糖的DPPH自由基清除能力。
图13为本发明实施例8中玫瑰多糖的还原力。
图14为本发明实施例8中玫瑰多糖的总抗氧化能力。
图15为本发明实施例10中玫瑰多糖的DPPH自由基清除能力。
图16为本发明实施例10中玫瑰多糖的还原力。
图17为本发明实施例10中玫瑰多糖的总抗氧化能力。
图18为本发明实施例11中玫瑰多糖对斑马鱼的抗炎效果图。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。
本发明的一个典型具体实施方式中，提供玫瑰多糖在抗炎症和/或抗氧化性产品中的应用。
炎症是具有血管系统的活体组织对损伤因子所发生的防御性反应，中性粒细胞在炎症反应中具有重要作用。炎症反应通常被认为是宿主和免疫细胞之间稳态的失衡，这种失衡将导致疾病的产生。炎症反应涉及到多种疾病的发生和发展过程，如感染、自身免疫性疾病、动脉粥样硬化、神经退行性疾病、癌症等。因此有效控制炎症的发生与发展引起众多学者的关注。
炎症与氧化应激存在密切关系，氧化应激是炎症反应的一个组成部分，是指在机体收到刺激时，体内高活性分子(如活性氧自由基、活性氮自由基)过量产生，超出机体的清除能力，使得机体内氧化与抗氧化状态失衡，从而引起机体的氧化损伤。
炎症与氧化应激存在着相互作用。在机体受到刺激时，造成氧化应激，从而激活NF-Kβ，上调TNF-α等多种炎性因子的表达，诱导产生大量的促炎因子，释放一系列的炎症介质。炎症介质激活中性粒细胞等炎症细胞，使其处于激活状态，使得炎症发生。另一方面，SOD是体内催化超氧阴离子为过氧化氢的限速酶，具有较强的清除氧自由基、过氧化氢的能力。SOD活性下降与机体氧化应激时产生大量氧自由基，使得SOD短时清除氧自由基的效率下降，大量活性自由基堆积，炎症加剧。
本发明通过试验研究发现，玫瑰多糖对炎症具有改善作用，具体通过抑制中性粒细胞的迁移、聚集达到改善炎症实现抗炎的效果。同时，本申请的玫瑰多糖还具有良好的还原力、总抗氧化能力以及ABTS自由基、DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟基自由基清除能力，从而具有显著的抗氧化作用。证明本发明的玫瑰多糖在抗炎和/或抗氧化产品的开发方面具有广阔的市场价值。
所述产品包括但不限于食品、药品、日化用品和饲料。
本发明中的玫瑰多糖是从玫瑰花中提取获得的多糖成分，即实际为一种玫瑰花多糖，对其提取制备工艺不做具体限定。同时，需要说明的是，此处的玫瑰花应做广义理解，即任何可能含有玫瑰花多糖的玫瑰花及其制品均属于本申请中玫瑰花的范畴，因此，此处的玫瑰花可以是玫瑰花鲜花或者玫瑰花干花，也可以是玫瑰花工业生产中产生的伴生物、废弃物等，如玫瑰蒸煮渣。
其中，所述玫瑰蒸煮渣具体是在瑰精油/玫瑰水制备工艺中产生的玫瑰蒸煮水和玫瑰花渣的混合物；通过利用玫瑰蒸煮渣中提取获得玫瑰多糖，从而有效提高资源可利用率。
此外，需要说明的是，本发明中对玫瑰品种不做具体限定，包括但不限于平阴玫瑰、格拉斯玫瑰、大马士革玫瑰和苦水玫瑰等。
本发明的又一具体实施方式中，所述玫瑰多糖的组成包括岩藻糖、阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、甘露糖和果糖。
其中，所述岩藻糖、阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、甘露糖和果糖的质量比为0.1-0.5:5-10：40-45:0.3-0.8:0.8-1.5:45-55。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种玫瑰多糖的制备方法，所述制备方法包括从玫瑰蒸煮渣中提取获得。
具体的，所述提取方法包括：
S1、将玫瑰蒸煮渣进行过滤分离获取玫瑰花渣和玫瑰蒸煮水；
S2、将步骤S1制得的玫瑰花渣进行提取处理获得玫瑰花渣提取液；
S3、将步骤S1制得的玫瑰蒸煮水浓缩得浓缩液；或，
将步骤S2制得的玫瑰花渣提取液浓缩得浓缩液；或，
将步骤S1所述的玫瑰蒸煮水与步骤S2制得的玫瑰花渣提取液混合浓缩得浓缩液；
S4、将步骤S3制得的浓缩液与乙醇混合静置后，收集固形物。
所述步骤S2中，所述提取处理为热水提取工艺处理、超声提取工艺处理或酶法提取工艺处理中的任意一种或多种；
所述热水提取工艺处理具体包括：将玫瑰花渣与热水按照质量比为1：10-50(优选为1：15-25，进一步优选为1：20)比例混匀，提取时间控制为1-3h(优选为2h)；其中，可采用水浴加热方式维持热水水温恒定，水浴温度控制为60-95℃(优选为85-95℃，如95℃)。
所述超声提取工艺处理具体包括：超声破碎条件具体为：超声频率为100-500W(如300W)，超声时间为1-30min(如10min)；更具体的，所述超声提取工艺包括：将玫瑰花渣与水按照质量比1：10-50(优选为1：15-25，进一步优选为1：20)比例混匀，进行超声破碎提取，然后进行水浴加热，控制水浴加热温度为60-95℃(优选为85-95℃，如95℃)，时间为1-3h(优选为2h)。
所述酶法提取工艺处理具体包括：将玫瑰花渣破碎后，按照质量比为1：10-50(优选为1：15-25，进一步优选为1：20)比例加水混匀，然后加入纤维素酶进行水浴加热处理。纤维素酶添加量控制为玫瑰花渣质量的1-10％(如4％)。
本发明的又一具体实施方式中，所述水浴加热采用两段式方法进行，第一阶段控制水浴加热温度为40-60℃(优选为45-55℃，如50℃)加热处理1-3h(优选为2h)，第二阶段控制水浴加热温度为60-95℃(优选为85-95℃，如90℃)加热处理1-3h(优选为2h)。通过采用两段式加热处理，能够有效提高玫瑰多糖提取率。
本发明的又一具体实施方式中，上述提取处理方式再重复进行0-3次，将每次获得的提取液合并得玫瑰花渣提取液进入下一步序。
本发明的又一具体实施方式中，所述步骤S3中，所述浓缩液具体为浓缩至原体积的2/3-1/4。
本发明的又一具体实施方式中，所述步骤S4中，所述乙醇浓度为50％-100％；
本发明的又一具体实施方式中，所述浓缩液与乙醇的体积比为1：1-7。
静置时间控制为0.5-24h(如12h)，从而使得多糖成分尽可能析出沉淀。
收集固形物具体可采用离心或过滤方式进一步收集固形物。
本发明的又一具体实施方式中，所述步骤还包括将收集到的固形物进行干燥后得玫瑰多糖。
所述干燥可采用加热干燥(如在50-60℃环境下烘干)或冷冻干燥的方式进行。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种玫瑰多糖的制备方法，所述制备方法包括从玫瑰花中直接提取处理获得。
具体的，所述提取方法包括：
S1、将玫瑰花干燥破碎后加水进行提取处理得提取液；
S2、将提取液进行浓缩得浓缩液并加入乙醇，混合静置后，收集固形物。
所述步骤S1中，所述提取处理为热水提取、酶法提取和超声提取中的任意一种或多种；
其中，所述酶法提取具体方法包括：将玫瑰花干燥破碎后，按照质量比为1：10-50(优选为1：15-25，进一步优选为1：20)比例加水混匀，然后加入纤维素酶进行水浴加热处理。纤维素酶添加量控制为玫瑰花质量的1-10％(如4％)。
本发明的又一具体实施方式中，所述水浴加热采用两段式方法进行，第一阶段控制水浴加热温度为40-60℃(优选为45-55℃，如50℃)加热处理1-3h(优选为1.5h)，第二阶段控制水浴加热温度为60-95℃(优选为85-95℃，如90℃)加热处理1-3h(优选为2h)。通过采用两段式加热处理，能够有效提高玫瑰多糖提取率。
所述超声提取具体方法包括：将玫瑰花干燥破碎后，按照质量比为1：10-50(优选为1：15-25，进一步优选为1：20)比例加水混匀，超声破碎条件具体为：超声频率为100-500W(如300W)，超声时间为1-30min(如10min)；然后进行水浴加热，控制水浴加热温度为60-95℃(优选为85-95℃，如95℃)，时间为1-3h(优选为2h)。
所述步骤S2中，所述浓缩液具体为浓缩至原体积的2/3-1/4(如1/2)；
所述浓缩液与乙醇的体积比为1：1-7(如1：3)。
静置时间控制为0.5-24h(如12h)，从而使得多糖成分尽可能析出沉淀。
所述提取方法还包括将步骤S2获得的固形物进行纯化得玫瑰多糖，具体的，加水溶解去蛋白，冻干后即得玫瑰多糖。其中，去蛋白方法包括Sevag法。
发明人经试验证明，采用上述方法制得的玫瑰多糖对炎症(如神经性炎症)具有改善作用，具体通过抑制中性粒细胞的迁移、聚集达到改善神经性炎症实现抗炎的效果。同时，本申请的玫瑰多糖还具有良好的还原力、总抗氧化能力以及ABTS、DPPH、超氧阴离子自由基、羟基自由基清除能力，从而具有显著的抗氧化作用。证明本发明的玫瑰多糖在抗炎和/或抗氧化产品的开发方面具有广阔的市场价值，因此具有良好的实际应用之价值。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种具有抗炎症和/或抗氧化的产品，所述产品包含上述玫瑰多糖。
所述产品包括但不限于食品、药品、日化用品和饲料。
需要说明的是，在本发明中，所使用的术语“食品”应做广义的理解，其可以理解为可以使任何可以被食用的形式，例如，本发明中的食品包括普通食品和特殊食品，本发明所述特殊食品包括保健食品和特殊医学用途配方食品；而普通食品时相对于特殊食品而言的，是适合所有人的食品。
所述食品包含但不限于固体食品、液体食品；所述固体食品包括但不限于烘焙食品(如饼干、面包、蛋糕)、糖果、固体饮料等；所述液体食品包括但不限于液体饮料(如碳酸饮料、果汁饮料、乳饮料)等。
所述药品可以单位剂量形式给药，给药剂型可以是液体剂型、固体剂型。液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。其他剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂、包合物、填埋剂、贴剂和擦剂等。
所述日化用品可为衣物洗涤剂、个人卫生清洁剂和化妆品等，具体如牙膏、漱口水、衣物消毒剂、洗发水、发乳、发胶、沐浴露、肥皂、面膜、面霜、洗面奶等。
所述饲料即为农业或牧业饲养的动物的食物。本发明的玫瑰多糖可作为饲料添加剂添加至任意品种饲料中，所述饲料包括但不限于全价配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料。
以下通过实施例对本发明做进一步解释说明，但不构成对本发明的限制。应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。各实施例中蒸煮水和玫瑰花渣通过以下方式获得：将玫瑰花置于玫瑰精油/玫瑰水蒸馏装置中，加入2.5倍去离子水，100℃加热3h即获得玫瑰蒸煮渣，将玫瑰蒸煮渣过滤，滤液即为玫瑰蒸煮水，滤渣即为玫瑰花渣。
实施例1
量取50mL玫瑰蒸煮水，加入50、100、150、200、250mL乙醇(95％浓度)，即玫瑰蒸煮水与乙醇的比例为1:1、1:2、1:3、1:4、1:5，混匀，静置12h，离心(5000r/min，10min)，收集沉淀于55℃烘干，加入去离子水充分溶解，利用苯酚-硫酸法测定多糖含量，计算玫瑰多糖提取率。
表1乙醇添加量对玫瑰蒸煮水多糖提取率的影响
Figure BDA0003291152250000091
由表1可知，玫瑰蒸煮水含有较高含量的玫瑰多糖。乙醇添加量对玫瑰蒸煮水多糖的影响较大。在较高的乙醇添加量下，玫瑰蒸煮水的玫瑰多糖提取率可达3.75g/L。
实施例2
分别采用不同方法提取玫瑰花渣中的玫瑰多糖，如下所示：
方法一：将玫瑰花渣用破碎机打碎，按1:20比例加入去离子水，加入4％纤维素酶(w/w，纤维素酶的添加量为玫瑰花渣质量的4％)于50℃水浴锅中2h，再置于90℃水浴锅中2h。
方法二：称取玫瑰花渣，按1:20比例加入去离子水，超声破碎(300W，10min)，置于90℃水浴锅中2h。
方法三：称取玫瑰花渣，按1:20比例加入去离子水，加入4％纤维素酶于50℃水浴锅中2h，再置于90℃水浴锅中2h。
方法四：称取玫瑰花渣，按1:20比例加入去离子水，置于90℃水浴锅中2h。提取液离心(10000r/min，10min)，取上清液，用旋转蒸发仪浓缩至原体积的1/2，加入3倍体积的乙醇(95％浓度)，静置过夜，离心(10000r/min，10min)，取沉淀，加入去离子水充分溶解，定容，利用苯酚-硫酸法测定多糖含量，计算玫瑰多糖提取率。
如图2所示，将玫瑰花渣超声破碎或将玫瑰花渣粉碎后加入纤维素酶可以显著提高玫瑰花渣中的玫瑰多糖的提取率。在破碎加酶提取工艺(方法一)下，玫瑰花渣多糖的提取率可以达到4.5g/kg。在超声提取工艺下(方法二)，玫瑰花渣多糖的提取率可以达到4.52g/kg。
实施例3
将玫瑰花置于玫瑰精油/玫瑰水蒸馏装置中，加入2.5倍去离子水，100℃加热3h即获得玫瑰蒸煮渣，将玫瑰蒸煮渣过滤，滤液即为玫瑰蒸煮水。将玫瑰蒸煮水与3倍体积乙醇混合，静置12h，过滤收集沉淀，沉淀于55℃烘干获得玫瑰多糖。
称取玫瑰多糖5mg，加入1mL三氟乙酸(2.5M)，60℃加热60min。通氮气，吹干。加入甲醇清洗，再吹干，重复甲醇清洗2-3次。加入无菌水溶解，转入色谱瓶中。采用离子色谱系统(ICS5000，Thermo Fisher Scientific，USA)测定玫瑰多糖的单糖组成。测定条件：进样量5μL；流动相A(0.1M NaOH)，流动相B(0.1M NaOH，0.2M NaAc)；流速0.5mL/min；柱温为30℃；洗脱梯度：0min A相/B相(95：5，V/V)，30min A相/B相(80：20，V/V)，30.1min A相/B相(60：40，V/V)，45min A相/B相(60：40，V/V)。
多糖，又称为多聚糖，是一类10个以上单糖分子缩合而成的天然大分子物质。由图3可知，玫瑰多糖的单糖组成为岩藻糖0.36％，阿拉伯糖7.86％，葡萄糖41.2％，木糖0.52％，甘露糖0.95％，果糖49.1％。
实施例4
将玫瑰花置于玫瑰精油/玫瑰水蒸馏装置中，加入2.5倍去离子水，100℃加热3h即获得玫瑰蒸煮渣，将玫瑰蒸煮渣过滤，滤液即为玫瑰蒸煮水。将玫瑰蒸煮水与3倍体积乙醇混合，静置12h，过滤收集沉淀，沉淀于55℃烘干获得玫瑰多糖。
玫瑰多糖的抗氧化能力测定
(1)还原力
取1mL样品于试管中，加入2.5mL磷酸钠盐缓冲液(pH6.6，0.2mol/L)和1mL铁氰化钾溶液(10g/L)，混匀，50℃水浴20min，然后加入2mL三氯乙酸(100g/L)和1.2mL三氯化铁溶液(1g/L)，混匀后于700nm处测定吸光度。用2,6-二叔丁-4-甲基苯酚(BHT)作为阳性对照。
(2)ABTS自由基清除能力的测定
实验组：将ABTS溶液(7mmol/L)和过硫酸钾溶液(4.9mmol/L)等体积混合，避光静置20h，用磷酸盐缓冲液(0.1mol/L，pH＝7.4)稀释，使其在734nm处吸光度为0.7±0.02，即为ABTS工作液。取ABTS工作液3mL，样品1mL于试管中，室温避光反应6min，于734nm处测定吸光度A。实验对照组：将ABTS工作液换为磷酸钠盐缓冲液，测得吸光度为AC。空白对照组：将样品换为水，测得吸光度为AB。ABTS自由基清除率(％)＝[1-(A-AC)]/AB×100。
(3)DPPH自由基清除能力的测定
实验组：取2mL样品和2mL DPPH乙醇溶液(0.2mmol/L)于试管中，混合均匀后避光反应30min，于517nm处测定吸光度A。实验对照组：将DPPH乙醇溶液换为乙醇溶液，测得吸光度为AC。空白对照组：将样品换为去离子水，测得吸光度为AB。DPPH自由基清除率(％)＝[1-(A-AC)]/AB×100。
(4)总抗氧化能力的测定
向试管中加入0.2mL样品和2mL的P溶液(含0.6mol/L硫酸、28mmol/L磷酸钠、4mmol/L钼酸铵)，95℃水浴90min，于695nm测吸光度。
(5)超氧阴离子自由基清除能力的测定
向试管中加入1mL样品溶液及2mL Tris-HCl缓冲液(pH8.2，50mmol/L)混合均匀，25℃水浴20min，结束后加入25℃水浴预热过的邻苯三酚溶液0.4mL(5mmol/L)，迅速混均并于325nm处每隔20s测定一次吸光度，持续3min。以去离子水替代样品作为空白对照。超氧阴离子自由基清除率(％)＝(S0-S)/S0×100％，S0为空白对照吸光度的斜率，S为样品吸光度的斜率。
(6)羟基自由基清除能力的测定
向试管中依次加入1mL硫酸亚铁溶液(9mmol/L)，1mL水杨酸乙醇溶液(9mmol/L)，1mL多糖样品，1mL过氧化氢溶液(8.8mmol/L)混合均匀，37℃水浴30min，离心(5000r/min，10min)，取上清液于510nm处测定吸光度A。维生素C作为阳性对照。羟基自由基清除率(％)＝(A0-A)/A0×100，A0为去离子水替代样品的吸光度。
由图4-图9可知，当玫瑰多糖的浓度为5000mg/L时，玫瑰多糖的还原力可达维生素C的91.37％，ABTS自由基的清除能力可达维生素C的90.55％，DPPH自由基的清除能力可达维生素C的85.71％，总抗氧化能力可达维生素C的82.35％，超氧阴离子自由基的清除能力可达维生素C的51.83％，羟基自由基的清除能力可达维生素C的64.66％。因此，玫瑰多糖具有良好的还原力、总抗氧化能力以及ABTS自由基、DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟基自由基清除能力。
实施例5
将玫瑰花置于玫瑰精油/玫瑰水蒸馏装置中，加入2.5倍去离子水，100℃加热3h即获得玫瑰蒸煮渣，将玫瑰蒸煮渣过滤，滤液即为玫瑰蒸煮水。将玫瑰蒸煮水与3倍体积乙醇混合，静置12h，过滤收集沉淀，沉淀于55℃烘干获得玫瑰多糖。
挑选72hpf健康并带有荧光的Tg(Lyz:GFP)系斑马鱼，随机移入24孔板中，分为6组，每孔10条。将玫瑰多糖样品与斑马鱼共孵育2h，然后用硫酸铜(20μmol/L)处理2h。用4％PFA处理斑马鱼1h，清除PFA并使用PBST清洗斑马鱼。(NC)正常对照组：养殖水。(MC)炎症模型组：硫酸铜处理2h。(I，II，III)高、中、低剂量玫瑰多糖干预组：玫瑰多糖(浓度分别为10、50、100μg/mL)处理2h，然后硫酸铜处理2h。在荧光显微镜下拍照。用Image pro-plus软件计算中性粒细胞迁移个数。
中性粒细胞的激活、迁移及聚集是炎症反应的重要特征，可以直接反应机体的炎症水平。(Tg(Lyz:GFP)斑马鱼品系为中性粒细胞被标记为绿色荧光的转基因斑马鱼品系。当斑马鱼幼鱼接触到硫酸铜时，硫酸铜选择性的破坏斑马鱼侧线的神经丘导致中性粒细胞向受损侧线迁移。在抗炎物质的作用下，中性粒细胞迁移到侧线的数量减少。由图10可见，炎症模型组(MC)斑马鱼的中性粒细胞迁移数显著高于空白对照组(NC)(P<0.01)，硫酸铜诱导的斑马鱼神经性炎症模型构建成功。与斑马鱼神经性炎症模型组相比，玫瑰多糖干预组的中性粒细胞迁移数显著减少，并呈现出明显的量效关系。玫瑰多糖低、中、高剂量干预组(I，II，III)的细胞迁移数分别降低了24.03％(P<0.01)、43.04％(P<0.01)和57.87％(P<0.01)。因此，玫瑰多糖具有显著的抗炎作用。
实施例6
将玫瑰花置于玫瑰精油/玫瑰水蒸馏装置中，加入2.5倍去离子水，100℃加热3h即获得玫瑰蒸煮渣，将玫瑰蒸煮渣过滤，滤渣为玫瑰花渣。称取玫瑰花渣，按1∶20比例加入去离子水，加入4％纤维素酶(w/w，纤维素酶添加量为玫瑰花渣质量的4％)，置于45℃水浴中1.5h，然后置于90℃水浴中2h，离心取上清液。重复提取2次，合并上清液，浓缩为原体积的1/2，加入3倍体积乙醇，静置12h，离心，收集沉淀于55℃烘干，获得玫瑰多糖。
挑选72hpf健康并带有荧光的Tg(Lyz:GFP)系斑马鱼，随机移入24孔板中，分为6组，每孔10条。将玫瑰多糖样品与斑马鱼共孵育2h，然后用硫酸铜(20μmol/L)处理2h。用4％PFA处理斑马鱼1h，清除PFA并使用PBST清洗斑马鱼。(NC)正常对照组：养殖水。(MC)炎症模型组：硫酸铜处理2h。(I，II，III)高、中、低剂量玫瑰多糖干预组：玫瑰多糖(浓度分别为10、50、100μg/mL)处理2h，然后硫酸铜处理2h。在荧光显微镜下拍照。用Image pro-plus软件计算中性粒细胞迁移个数。
由图11可见，炎症模型组(MC)斑马鱼的中性粒细胞迁移数显著高于空白对照组(NC)(P<0.01)，硫酸铜诱导的斑马鱼神经炎症模型构建成功。与斑马鱼神经炎症模型组相比，玫瑰多糖干预组的中性粒细胞迁移数显著减少，并呈现出明显的量效关系。玫瑰多糖低、中、高剂量干预组(I，II，III)的细胞迁移数分别降低了17.63％(P<0.01)、38.05％(P<0.01)和49.28％(P<0.01)。因此，玫瑰多糖具有显著的抗炎作用。
实施例7
将玫瑰花烘干、粉碎，称取玫瑰花粉，按1∶20比例加入去离子水，加入4％纤维素酶(w/w，纤维素酶添加量为玫瑰花粉质量的4％)，置于45℃水浴中1.5h，然后置于90℃水浴中2h，离心取上清液。重复提取3次，合并上清液，浓缩为原体积的1/2，加入3倍体积乙醇，静置12h，离心，收集沉淀于55℃烘干，加入去离子水充分溶解，利用苯酚-硫酸法测定多糖含量，计算玫瑰多糖提取率。
在该提取条件下，玫瑰多糖的提取率可以达到40.9g/kg。
实施例8
将玫瑰花烘干、粉碎，称取玫瑰花粉，按1∶20比例加入去离子水，加入4％纤维素酶(纤维素酶添加量为玫瑰花粉质量的4％)，置于45℃水浴中1.5h，然后置于90℃水浴中2h，离心取上清液。重复提取3次，合并上清液，浓缩为原体积的1/2，加入3倍体积乙醇，静置12h，离心，收集沉淀于55℃烘干，加入去离子水充分溶解，Sevag法去蛋白，冻干后即为酶法提取的玫瑰多糖。
分别测定酶法提取的玫瑰多糖的体外抗氧化能力，体外抗氧化实验方法同实施例4。
如图12-14所示，当玫瑰多糖的浓度为5000mg/L时，玫瑰多糖的DPPH自由基的清除能力可达维生素C的82.60％，玫瑰多糖的还原力可达维生素C的70.20％，总抗氧化能力可达维生素C的47.58％。因此，酶法提取的玫瑰多糖具有良好的还原力、总抗氧化能力以及DPPH自由基清除能力。
实施例9
将玫瑰花烘干、粉碎，称取玫瑰花粉，按1∶20比例加入去离子水，超声破碎(300W，10min)，然后置于90℃水浴中2h，离心取上清液。重复提取3次，合并上清液，悬蒸浓缩为原体积的1/2，加入3倍体积乙醇，静置12h，离心，收集沉淀于55℃烘干，加入去离子水充分溶解，利用苯酚-硫酸法测定多糖含量，计算玫瑰多糖提取率。
在该提取条件下，玫瑰多糖的提取率可以达到49.5g/kg。
实施例10
将玫瑰花烘干、粉碎，称取玫瑰花粉，按1∶20比例加入去离子水，超声破碎(300W，10min)，然后置于90℃水浴中2h，离心取上清液。重复提取3次，合并上清液，悬蒸浓缩为原体积的1/2，加入3倍体积乙醇，静置12h，离心，收集沉淀于55℃烘干，加入去离子水充分溶解，除去蛋白，冻干后即为超声法提取的玫瑰多糖。
分别测定超声法提取的玫瑰多糖的体外抗氧化能力。体外抗氧化实验方法同实施例4。
如图15-17所示，当玫瑰多糖的浓度为5000mg/L时，玫瑰多糖的DPPH自由基的清除能力可达维生素C的94.11％，玫瑰多糖的还原力可达维生素C的88.47％，总抗氧化能力可达维生素C的93.04％。因此，超声法的玫瑰多糖具有良好的还原力、总抗氧化能力以及DPPH自由基清除能力。
实施例11
将玫瑰花烘干、粉碎，称取玫瑰花粉，按1∶20比例加入去离子水，超声破碎(300W，10min)，然后置于90℃水浴中2h，离心取上清液。重复提取3次，合并上清液，悬蒸浓缩为原体积的1/2，加入3倍体积乙醇，静置12h，离心，收集沉淀于55℃烘干，加入去离子水充分溶解，Sevag法去蛋白，冻干后即为超声法提取的玫瑰多糖。
挑选72hpf健康并带有荧光的Tg(Lyz:GFP)系斑马鱼，随机移入24孔板中，分为6组，每孔10条。将玫瑰多糖样品与斑马鱼共孵育2h，然后用硫酸铜(20μmol/L)处理2h。用4％PFA处理斑马鱼1h，清除PFA并使用PBST清洗斑马鱼。(NC)正常对照组：养殖水。(MC)炎症模型组：硫酸铜处理2h。(I，II，III)高、中、低剂量玫瑰多糖干预组：玫瑰多糖(浓度分别为10、50、100μg/mL)处理2h，然后硫酸铜处理2h。在荧光显微镜下拍照。用Image pro-plus软件计算中性粒细胞迁移个数。
中性粒细胞的激活、迁移及聚集是炎症反应的重要特征，可以直接反应机体的炎症水平。(Tg(Lyz:GFP)斑马鱼品系为中性粒细胞被标记为绿色荧光的转基因斑马鱼品系。当斑马鱼幼鱼接触到硫酸铜时，硫酸铜选择性的破坏斑马鱼侧线的神经丘导致中性粒细胞向受损侧线迁移。在抗炎物质的作用下，中性粒细胞迁移到侧线的数量减少。由图18可见，炎症模型组(MC)斑马鱼的中性粒细胞迁移数显著高于空白对照组(NC)(P<0.01)，硫酸铜诱导的斑马鱼神经炎症模型构建成功。玫瑰多糖中的总糖含量为902.63±4.16g/kg。与斑马鱼神经炎症模型组相比，玫瑰多糖干预组的中性粒细胞迁移数显著减少，并呈现出明显的量效关系。玫瑰多糖低、中、高剂量干预组(I，II，III)的细胞迁移数分别降低了18.28％(P<0.01)、36.03％(P<0.01)和51.67％(P<0.01)。因此，玫瑰多糖具有显著的抗炎作用。
应注意的是，以上实例仅用于说明本发明的技术方案而非对其进行限制。尽管参照所给出的实例对本发明进行了详细说明，但是本领域的普通技术人员可根据需要对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围。

Claims (10)

1.玫瑰多糖在抗炎症和/或抗氧化性产品中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括食品、药品、日化用品和饲料；
所述玫瑰多糖的组成包括岩藻糖、阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、甘露糖和果糖；
优选的，所述玫瑰多糖从玫瑰花中提取获得；
所述玫瑰花为任何含有玫瑰多糖的玫瑰花及其制品。
3.一种玫瑰多糖的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
S1、将玫瑰蒸煮渣进行过滤分离获取玫瑰花渣和玫瑰蒸煮水；
S2、将步骤S1制得的玫瑰花渣进行提取处理获得玫瑰花渣提取液；
S3、将步骤S1制得的玫瑰蒸煮水浓缩得浓缩液；或，
将步骤S2制得的玫瑰花渣提取液浓缩得浓缩液；或，
将步骤S1所述的玫瑰蒸煮水与步骤S2制得的玫瑰花渣提取液混合浓缩得浓缩液；
S4、将步骤S3制得的浓缩液与乙醇混合静置后，收集固形物。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，
所述步骤S2中，所述提取处理为热水提取工艺处理、超声提取工艺处理或酶法提取工艺处理中的任意一种或多种；
所述热水提取工艺处理具体包括：将玫瑰花渣与热水按照质量比为1：10-50比例混匀，提取时间控制为1-3h；其中，采用水浴加热方式维持热水水温恒定，水浴温度控制为60-95℃；
所述超声提取工艺处理具体包括：超声破碎条件具体为：超声频率为100-500W，超声时间为1-30min；
优选的，所述超声提取工艺包括：将玫瑰花渣与水按照质量比1：10-50比例混匀，进行超声破碎提取，然后进行水浴加热，控制水浴加热温度为60-95℃，时间为1-3h；
所述酶法提取工艺处理具体包括：将玫瑰花渣破碎后，按照质量比为1：10-50比例加水混匀，然后加入纤维素酶进行水浴加热处理；
优选的，所述水浴加热采用两段式方法进行，第一阶段控制水浴加热温度为40-60℃加热处理1-3h，第二阶段控制水浴加热温度为60-95℃加热处理1-3h；
优选的，上述提取处理方式再重复进行0-3次，将每次获得的提取液合并得玫瑰花渣提取液进入下一步序。
5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，
所述步骤S3中，所述浓缩液具体为浓缩至原体积的2/3-1/4；
所述步骤S4中，所述乙醇浓度为50％-100％；
优选的，所述浓缩液与乙醇的体积比为1：1-7；
静置时间控制为0.5-24h；
收集固形物具体采用离心或过滤方式进一步收集固形物；
进一步优选的，所述步骤还包括将收集到的固形物进行干燥后得玫瑰蒸煮渣多糖；
所述干燥可采用加热干燥或冷冻干燥的方式进行。
6.一种玫瑰多糖的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
S1、将玫瑰花干燥破碎后加水进行提取处理得提取液；
S2、将提取液进行浓缩得浓缩液并加入乙醇，混合静置后，收集固形物。
7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，
所述步骤S1中，所述提取处理为热水提取、酶法提取和超声提取中的任意一种或多种；
其中，所述酶法提取具体方法包括：将玫瑰花干燥破碎后，按照质量比为1：10-50比例加水混匀，然后加入纤维素酶进行水浴加热处理；
所述水浴加热采用两段式方法进行，第一阶段控制水浴加热温度为40-60℃加热处理1-3h，第二阶段控制水浴加热温度为60-95℃加热处理1-3h；
所述超声提取具体方法包括：将玫瑰花干燥破碎后，按照质量比为1：10-50比例加水混匀，超声破碎条件具体为：超声频率为100-500W，超声时间为1-30min；然后进行水浴加热，控制水浴加热温度为60-95℃，时间为1-3h。
8.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，
所述步骤S2中，所述浓缩液具体为浓缩至原体积的2/3-1/4；
所述浓缩液与乙醇的体积比为1：1-7；
静置时间控制为0.5-24h；
所述提取方法还包括将步骤S2获得的固形物进行纯化得玫瑰多糖，优选的，加水溶解去蛋白，冻干后即得玫瑰多糖；其中，去蛋白方法包括Sevag法。
9.一种具有抗炎症和/或抗氧化的产品，其特征在于，所述产品包含权利要求3-8任一项所述制备方法得到的玫瑰多糖。
10.如权利要求9所述产品，其特征在于，所述产品包括食品、药品、日化用品和饲料。
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