CN113712938B - 一种用于银屑病治疗的v-9302纳米颗粒及其制备方法 - Google Patents
一种用于银屑病治疗的v-9302纳米颗粒及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种用于银屑病治疗的V‑9302纳米颗粒及其制备方法。所述V‑9302纳米颗粒包括HaCAT细胞来源的生物颗粒和V‑9302;本发明还公开了V‑9302纳米颗粒的制备方法,首先将HaCAT细胞在紫外线条件下处理,随后将HaCAT细胞与V‑9302共混条件下进行挤出,收集挤出液后,10,000g离心弃沉淀,上清液于150,000g离心120分钟,收集沉淀重悬后即得V‑9302纳米颗粒。本发明所制备的V‑9302纳米颗粒可用于银屑病治疗,V‑9302纳米颗粒具有较窄的粒径分布,较好的药物包封率,良好的生物相容性。
Description
技术领域
本发明属于纳米药物载体技术领域,具体涉及一种用于银屑病治疗的V-9302纳米颗粒及其制备方法。
背景技术
银屑病俗称牛皮癣,是一种慢性炎症性皮肤病,病程较长,有易复发倾向,有的病例几乎终生不愈。该病发病以青壮年为主,对患者的身体健康和精神状况影响较大。临床表现以红斑,鳞屑为主,全身均可发病,以头皮,四肢伸侧较为常见,全球2-3%的人口深受这种疾病的折磨。仅仅我国就有将近800万的银屑病患者。银屑病外用治疗主要包括糖皮质激素和维生素D3衍生物。其中,糖皮质激素见效快、疗效好,但存在易反复的缺点,而且患者常常因为担心副作用而从心理上不太接受激素治疗;而卡泊三醇为代表的维生素D3药物目前是治疗银屑病的一线用药,是非激素外用药物的"金标准",但一些患者有局部刺激,还存在影响钙磷代谢的问题。因此,提出针对银屑病发展机制的治疗策略,开发新的治疗药物以改善对该疾病的治疗迫在眉睫。
V-9302是跨膜谷氨酰胺转运体的竞争性拮抗剂,可以调控细胞谷氨酰胺摄取。据报道,V-9302可以通过转运体抑制作用调控干扰肿瘤细胞的谷氨酰胺代谢。许多肿瘤细胞表现出强烈的谷氨酰胺代谢依赖性,使其表现出对大量的谷氨酰胺的摄取。V-9302可以通过干扰谷氨酰胺的供应从而实现一定程度上的抗肿瘤作用。但是,目前没有直接将V-9302应用于银屑病治疗的相关报道。
在银屑病治疗中,如何递送药物也是一个难点。传统的银屑病治疗主要是软膏剂、凝胶剂等。相比较于传统的药物制剂,纳米药物载体在递送药物至表皮、真皮提高治疗部位药物浓度、减小全身毒副作用方面,具有明显优势。纳米颗粒因具有较小的粒径和功能多样性等优势,具有提高难溶性药物溶解度、增加药物穿透致密皮肤的能力。目前尚无利用纳米颗粒包载V-9302的相关报导。本发明的V-9302纳米颗粒有望利用V-9302的药理活性及纳米药物的递送特点,提高药物递送效率并协同发挥抗银屑病作用,有望为银屑病药物开发奠定坚实的基础。
发明内容
为了解决背景技术中的问题,本发明提供了一种用于银屑病治疗的V-9302纳米颗粒及其制备方法,且提供了一种V-9302的新应用。本发明所制备V-9302纳米颗粒具有较窄的粒径分布,较好的药物包封率,良好的生物相容性。本发明所制备的V-9302纳米颗粒可用于银屑病治疗,具体表现在银屑病样皮肤情况好转、银屑病样皮肤表皮层增厚被抑制、病变耳朵增厚被抑制,并使银屑病样皮肤中IL-23、IL-17水平降低。
本发明采用的技术方案如下:
一、一种V-9302纳米颗粒
所述V-9302纳米颗粒主要由HaCAT细胞来源的生物颗粒和V-9302制备得到。
所述V-9302是一种跨膜谷氨酰胺通量的竞争性拮抗剂,其化学结构式为:
所述V-9302纳米颗粒的粒径在120-250nm之间。
二、一种V-9302纳米颗粒的制备方法
包括以下步骤:
1)将HaCAT细胞在紫外光条件下照射处理;
2)用细胞铲刮下HaCAT细胞,加入V-9302的溶液重悬得到5×106~8×106cells/mL的细胞混悬液;
3)细胞混悬液依次通过装有10μm、2μm、1μm、0.45μm滤膜的挤出机;
4)收集步骤3挤出机过滤后的细胞过滤液,离心弃沉淀取上清液;
5)上清液继续离心,收集沉淀干燥后即得V-9302纳米颗粒,或者收集沉淀采用pbs缓冲液重悬后即得在液体中分散的V-9302纳米颗粒。
所述步骤1)中的紫外光条件为紫外光强度为140~200μW/cm2,照射时间为45~120min。
所述步骤2)中加入的V-9302溶液含有质量占比为10~30%的溶剂乙醇。
所述步骤4)中,离心时的相对离心力为10,000g,离心时间为10分钟;所述步骤5)中,离心时的相对离心力为150,000g,离心时间为120分钟。
二、一种V-9302纳米颗粒在制备用于治疗银屑病的药物中的应用
所述药物的剂型包括粉剂、注射液、胶囊、片剂、口服液。
本发明的有益效果:
本发明通过挤出法制备了V-9302纳米颗粒,对药物起到了增溶、稳定作用,并利用其纳米效应和类“醇质体”作用,提高了皮肤渗透性和滞留性,从而提高有效治疗物质在病变位置的摄取量,有利于提高药物利用度和有效率。
本发明整个制备过程操作简单,条件稳定,重现性良好。本发明通过大量试验发现V-9302纳米颗粒对治疗银屑病效果好,无毒副作用,成本低廉。将有助于延缓病情进展恶化,还具有可操作性强,能显著降低患者及医疗机构的诊疗费用等优点。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述。
实施例1V-9302纳米颗粒的制备及表征
按照表1中各组V-9302纳米颗粒的处方及制备要点,通过下述方法进行制备:
将细胞接种于10cm的培养皿中,待细胞覆盖率达到80%~90%时,进行紫外条件处理。在继续培养2h后,用细胞铲刮下后收集细胞,加入400μg/mL的药物溶液重悬,得到5×106~8×106cells/mL的细胞混悬液。利用微型挤出机分别让细胞混悬液依次通过10μM,2μM,1μM,0.45μM滤膜,每个尺寸滤膜重复2次。收集细胞过滤液,离心(10,000g,10分钟)弃沉淀取上清液。将上清液继续离心(150,000g,120分钟),并收集沉淀即得V-9302纳米颗粒
将得到的V-9302纳米颗粒,用PBS重悬后,观察在液体中分散的V-9302纳米颗粒是否有丁达尔效应及通过动态光散射检测纳米粒子的平均尺寸。
表1V-9302纳米颗粒的处方及制备要点
实施例2V-9302纳米颗粒的表征
取实施例1中制备得到的各组V-9302纳米颗粒,高相液相法测定纳米颗粒中的V-9302含量,并根据以下公式计算包封率:包封率(%)=纳米颗粒中的V-9302质量(mg)/投药量(mg)。药物包载是纳米药物制剂制备中的关键因素之一。各个纳米颗粒中的药物包封率见表2。该结果表明在处方范围及工艺参数变化内,药物包封率保持在24~36%左右,表明制备工艺合理。
表2V-9302纳米颗粒的包封率
组别 | 包封率(%) |
1 | 29.8 |
2 | 24.2 |
3 | 32.4 |
4 | 35.7 |
5 | 27.6 |
6 | 26.8 |
7 | 27.1 |
8 | 28.9 |
9 | 28.3 |
10 | 30.4 |
11 | - |
12 | 18.7 |
13 | - |
14 | 15.7 |
实施例3V-9302纳米颗粒对银屑病的治疗作用
3.1)银屑病小鼠模型的建立
取BALB/c小鼠作为动物模型,实验前适应性饲养1周,造模前12h禁食,不禁水。将实验组小鼠背部剃毛后固定选取皮肤面积2cm×3cm,每天在背部脱毛区涂抹5%咪喹莫特乳膏(60.5mg/只/天)、耳部脱毛区涂抹5%咪喹莫特乳膏(1mg/只/天),连续用药10天,以小鼠后背部皮肤出现鳞屑及红斑为造模成功,正常对照组小鼠每天给予同等剂量凡士林,用法同造模组。
造模成功后的小鼠随机分组,将实施例1制备得到的各样品组涂抹于银屑病皮肤处,每天给药,连续给药10天。正常对照组小鼠给予同等剂量PBS。
实验中,借鉴临床PASI评分标准,采用盲法对各族小鼠进行银屑病皮肤严重程度评估。评分内容包括红斑、鳞屑及增厚。评分标准如下:0:无现象;1:轻微;2:中度;3:显著;4:十分显著。并用电子游标卡尺测量小鼠耳朵厚度。
给药10天后,处死小鼠,取部分背部皮肤用于酶联免疫法(ELISA)检测。取适量皮肤组织,加入PBS充分混匀,制备成组织匀浆液后离心(1000g,10min),取上清液,按照试剂盒操作检测各组皮肤中IL-23和IL-17含量。
3.2)实验分组
正常对照组:凡士林造模,与纳米颗粒同等剂量的PBS
模型组:造模成功后,与纳米颗粒同等剂量的PBS
给药干预组1:造模成功后,实施例1组纳米颗粒皮肤表面连续给药10天;
给药干预组2:造模成功后,实施例2组纳米颗粒皮肤表面连续给药10天;
给药干预组3:造模成功后,实施例3组纳米颗粒皮肤表面连续给药10天;
给药干预组4:造模成功后,实施例4组纳米颗粒皮肤表面连续给药10天;
给药干预组5:造模成功后,实施例5组纳米颗粒皮肤表面连续给药10天;
给药干预组6:造模成功后,实施例6组纳米颗粒皮肤表面连续给药10天;
给药干预组7:造模成功后,实施例7组纳米颗粒皮肤表面连续给药10天;
给药干预组8:造模成功后,实施例8组纳米颗粒皮肤表面连续给药10天;
给药干预组9:造模成功后,实施例9组纳米颗粒皮肤表面连续给药10天;
给药干预组10:造模成功后,实施例10组纳米颗粒皮肤表面连续给药10天;
给药干预组11:造模成功后,实施例11组纳米颗粒皮肤表面连续给药10天;
给药干预组12:造模成功后,实施例12组纳米颗粒皮肤表面连续给药10天;
给药干预组14:造模成功后,实施例14组纳米颗粒皮肤表面连续给药10天;
给药干预组15:造模成功后,V-9302溶液皮肤表面连续给药10天;
给药干预组16:造模成功后,V-9302溶液+实施例11组纳米颗粒(间隔1小时,分别给药)皮肤表面连续给药10天
3.3)实验结果和结论
表3V-9302纳米颗粒治疗银屑病大鼠的结果
实验结果如表3所示。V-9302纳米颗粒在合理的处方及制备工艺条件下,其临床PASI评分标准在红斑、厚度和鳞屑三个方面都明显好于其他给药干预组。此外,其IL-23和IL-17两种症因子的水平也得到了显著性抑制。
结果表明本发明的V-9302纳米颗粒可以显著抑制银屑病变部位的红斑、皮肤增厚及鳞屑问题,且降低关键性因子IL-23和IL-17的水平。选择合适的细胞、适当的紫外条件处理,V-9302纳米颗粒制备的药物及制备工艺参数都对抗银屑病效果具有关键性作用。
该结果表明,V-9302纳米颗粒可以有效促进银屑病样皮肤情况好转、抑制银屑病样皮肤表皮层增厚和病变耳朵增厚情况,并使银屑病样皮肤中IL-23、IL-17水平降低,从而提示银屑病的发生和发展得以改善。因此,V-9302纳米颗粒有望应用于银屑病药物的制备。
以上所揭露的仅为本发明较佳实施例而已,当然不能以此来限定本发明之权利范围,因此依本发明权利要求所作的等同变化,仍属本发明所涵盖的。
Claims (4)
1.一种用于银屑病治疗的V-9302纳米颗粒,其特征在于,所述V-9302纳米颗粒主要由HaCAT细胞来源的生物颗粒和V-9302制备得到;
所述V-9302是一种跨膜谷氨酰胺通量的竞争性拮抗剂,其化学结构式为:
所述V-9302纳米颗粒的制备方法包括以下步骤:
1)将HaCAT细胞在紫外光条件下照射处理;
2)用细胞铲刮下HaCAT细胞,加入V-9302的溶液重悬得到5×106~8×106 cells/mL的细胞混悬液;
3)细胞混悬液依次通过装有10μm、2μm、1μm、0.45μm滤膜的挤出机;
4)收集步骤3)挤出机过滤后的细胞过滤液,离心弃沉淀取上清液;
5)上清液继续离心,收集沉淀干燥后即得V-9302纳米颗粒,或者收集沉淀重悬后即得在液体中分散的V-9302纳米颗粒;
所述步骤1)中的紫外光条件为紫外光强度为140~200 μW/cm2,照射时间为45~120 min;
所述步骤2)中V-9302溶液的溶剂为质量占比为10~30%的乙醇;
所述步骤4)中,离心时的相对离心力为10,000g,离心时间为10分钟;所述步骤5)中,离心时的相对离心力为150,000g,离心时间为120分钟。
2.根据权利要求1所述的一种用于银屑病治疗的V-9302纳米颗粒,其特征在于,所述V-9302纳米颗粒的粒径在120-250 nm之间。
3.根据权利要求1~2任一所述的用于银屑病治疗的V-9302纳米颗粒的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)将HaCAT细胞在紫外光条件下照射处理;
2)用细胞铲刮下HaCAT细胞,加入V-9302的溶液重悬得到5×106~8×106 cells/mL的细胞混悬液;
3)细胞混悬液依次通过装有10μm、2μm、1μm、0.45μm滤膜的挤出机;
4)收集步骤3)挤出机过滤后的细胞过滤液,离心弃沉淀取上清液;
5)上清液继续离心,收集沉淀干燥后即得V-9302纳米颗粒,或者收集沉淀重悬后即得在液体中分散的V-9302纳米颗粒;
所述步骤1)中的紫外光条件为紫外光强度为140~200 μW/cm2,照射时间为45~120 min;
所述步骤2)中V-9302溶液的溶剂为质量占比为10~30%的乙醇;
所述步骤4)中,离心时的相对离心力为10,000g,离心时间为10分钟;所述步骤5)中,离心时的相对离心力为150,000g,离心时间为120分钟。
4.根据权利要求1~2任一所述的用于银屑病治疗的V-9302纳米颗粒在制备用于治疗银屑病的药物中的应用,其特征在于,所述药物的剂型包括粉剂、注射液、胶囊、片剂、口服液。
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