CN113640429A - 一种用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法 - Google Patents

一种用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN113640429A
CN113640429A CN202111056746.0A CN202111056746A CN113640429A CN 113640429 A CN113640429 A CN 113640429A CN 202111056746 A CN202111056746 A CN 202111056746A CN 113640429 A CN113640429 A CN 113640429A
Authority
CN
China
Prior art keywords
magnetic
solution
sample
graphene oxide
mixed solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202111056746.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113640429B (zh
Inventor
叶磊海
钟世欢
叶佳明
杨娜
黄南
盛丽娜
顾秀英
王静
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zanyu Technology Group Co ltd
Zhejiang Gongzheng Testing Center Inc
Original Assignee
Zanyu Technology Group Co ltd
Zhejiang Gongzheng Testing Center Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zanyu Technology Group Co ltd, Zhejiang Gongzheng Testing Center Inc filed Critical Zanyu Technology Group Co ltd
Priority to CN202111056746.0A priority Critical patent/CN113640429B/zh
Publication of CN113640429A publication Critical patent/CN113640429A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113640429B publication Critical patent/CN113640429B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/62—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating the ionisation of gases, e.g. aerosols; by investigating electric discharges, e.g. emission of cathode
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/36—Control of physical parameters of the fluid carrier in high pressure liquid systems
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/72—Mass spectrometers
    • G01N30/7233—Mass spectrometers interfaced to liquid or supercritical fluid chromatograph
    • G01N30/724—Nebulising, aerosol formation or ionisation
    • G01N30/7266—Nebulising, aerosol formation or ionisation by electric field, e.g. electrospray

Abstract

本发明属于食品安全检测领域。技术方案是：一种用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法，按如下步骤进行：1)样品预处理：称取1‑2g样品于50mL离心管中，加入10mL乙二胺四乙酸二钠(NA2EDTA)‑磷酸氢二钾缓冲溶液，10‑50μL氯化胆碱对甲苯酚混合溶液、0.05‑0.1g磁性氧化石墨烯分子印迹聚合物，涡旋、超声提取后，用磁力枪将磁性氧化石墨烯分子印迹聚合物吸出；加入1mL0.2％甲酸甲醇洗脱液将样品中的喹诺酮类药物解析出来,混匀后，过0.22μm有机滤膜，获得待测液；2)待测液的检测：运用HPLC‑MS/MS，在质谱ESI源下正离子模式下测定。该方法选择性好、灵敏度高。

Description

一种用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法
技术领域
本发明属于食品安全检测领域，尤其涉及一种动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法。
背景技术
喹诺酮类抗生素广泛用于人和动物疾病的预防和治疗，是一类具有抗菌谱广，抗菌性强，价格低廉等特点的人工合成抗菌药；然而摄入含有喹诺酮类残留的动物源性食品，除造成药物致敏和其它对人体的毒副作用外，还容易产生细菌耐药性。是目前兽药残留的监测重点，我国农业部也对动物源性食品中多种喹诺酮类药物制定了最高残留限量。当前现行检测动物源性食品中喹诺酮类抗生素的国家标准方法为高效液相色谱-串联质谱法，均采用外标法定量，GB/T 20366-2006的前处理方法中需要大量提取液提取，经正己烷除脂后再旋转蒸发浓缩，耗时长；GB/T 21312-2007需用缓冲盐溶液提取，再经传统HLB固相萃取小柱净化，操作繁琐，具有一定的局限性。
磁固相萃取(MSPE)是近年来发展的一种以磁性纳米材料作为吸附剂的固相萃取技术,以碳材料改性的磁性纳米颗粒因其比表面积大和吸附能力优良在兽药残留检测取得了广泛的应用，常用的碳材料有碳纳米管、石墨烯或氧化石墨烯、多孔碳、富勒烯等。其中石墨烯(G)除了本身具有超高的比表面积外，其原子以一种类似六角形蜂窝的形状排列，特殊的结构可以和其他有机化合物形成较强的π-π相互作用，具有较强的疏水性和独特的共轭体系。石墨烯氧化物(GO)除具有大离域π电子共轭系统外，还具有-OH，-COOH等极性官能团，通过π-π堆积、疏水作用、氢键作用、静电作用对多种有机化合物都表现出较强的吸附能力。将G/GO与磁性纳米材料复合制备的磁性石墨烯纳米复合材料兼具二者优势，是极具潜力的磁固相萃取吸附剂。
分子印迹技术(molecularly imprinted technique,MIT)是制备对模板分子具有特异选择性识别能力的聚合物-分子印迹聚合物的技术。该聚合物对模板分子具有较高的选择识别能力,并且在较为恶劣的条件下，也不会丧失对目标分子结合的能力。分子印迹固相萃取技术由于选择性较强、稳定性好、易于制备而受到广泛关注，石墨烯磁性纳米粒子表面合成分子印迹壳层。不仅具有分子印迹的优势，能够特异性识别和吸附目标分子,而且能在磁场的作用下快速分离，同时由于氧化石墨烯粒径较小，具有较大的比表面积，吸附容量较大，是一种更为理想的样品前处理手段。在兽药残留检测中有着广泛的应用前景。
发明内容
本发明的目的是克服动物源性食品中喹诺酮类药物检测复杂的前处理手段，提供一种用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法，该方法应具备选择性好、灵敏度高、检测时间短的特点，以提高检测效率。
为实现上述目的，本方法提供了如下技术方案：
一种用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法，依照如下步骤进行：
1)样品预处理：称取1-2g样品于50mL离心管中，加入10mL乙二胺四乙酸二钠(NA2EDTA)-磷酸氢二钾缓冲溶液，10-50μL氯化胆碱对甲苯酚混合溶液、0.05-0.1g磁性氧化石墨烯分子印迹聚合物，涡旋、超声提取后，用磁力枪将磁性氧化石墨烯分子印迹聚合物吸出；加入1mL0.2％甲酸甲醇洗脱液将样品中的喹诺酮类药物解析出来,混匀后，过0.22μm有机滤膜，获得待测液；
2)待测液的检测：运用HPLC-MS/MS，在质谱ESI源下正离子模式下测定，内标法定量。
所述乙二胺四乙酸(NA2EDTA)-磷酸氢二钾缓冲溶液，按如下方法制备：30.25g乙二胺四乙酸二钠(Na2EDTA·2H2O)、4.56g磷酸氢二钾(K2HPO3)用纯水溶解，用10mol/LNAOH调pH到7.2-7.4，用水定容至1L。
所述氯化胆碱对甲苯酚混合溶液，按如下方法制备：氯化胆碱、对甲苯酚、乙二醇单甲醚按0.1:0.25:1摩尔比例称取适量，在60℃恒定搅拌下加热，直至形成稳定的均匀透明的液体；将制备的混合溶液储存在密封的小瓶中并保存在干燥器中。
所述磁性氧化石墨烯分子印迹聚合物，按如下方法制备：
(1)氧化石墨烯的修饰：将石墨烯粉末置于-18℃冰箱中冷冻1小时，称取3g石墨烯粉末，缓慢加入200mL按3:1:0.1比例混合的浓硫酸H2SO4、浓硝酸HNO3、异丙醇的混合溶液中之后，加入高锰酸钾(KMnO4)5g，搅拌30min后，缓慢升温至55℃，超声反应3h，在80℃下加热搅拌反应2h，抽滤，用蒸馏水涤至中性，于50℃真空干燥至恒重，研磨过筛获得氧化石墨烯，备用；
(2)溶剂热法制备磁性碳纳米管：称取5.410g三氯化铁(FeCl3·6H2O)和3.475g硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)置于250mL平底烧瓶中加入100mL水，60℃下恒温磁力搅拌，全部溶解后，加入25mL氨水、2g步骤(1)制得的氧化石墨烯、5mL按1:1比例组成的乙二醇与聚乙二醇混合溶剂中，60℃下恒温磁力搅拌2h得到黑色的混合溶液，用乙醇和水洗数次，于50℃真空干燥至恒重获得磁性碳纳米管，备用；
(3)将步骤(2)得到的磁性碳纳米管、1mmol恩诺沙星、5mmol甲基丙烯酸、5mmol丙烯酸、1mL二甲基亚砜、50mL按9:1比例组成的乙醇-聚乙二醇混合溶液涡旋混合1min，再加入10mmol乙二醇二甲基丙烯酸酯、0.2g聚乙烯吡咯烷酮、0.010g偶氮二异丁脐(AIBN)引发剂，通氮气密封，80℃水浴超声3h；反应结束后磁场分离除去上清液，其余料用体积比为9∶1混合的甲醇与甲酸混合溶液反复超声洗涤，直至上清液经示差检测器检测不到模板分子为止，于50℃真空干燥至恒重，得到磁性氧化石墨烯分子印迹聚合物。
超高效液相色谱-三重四极杆质谱仪色谱条件为：
色谱柱：安捷伦SB-C18色谱柱(2.1×100mm,1.8μm))；流速：0.30mL/min；进样量：5μL；柱温：35℃。溶液A—0.1％甲酸水溶液，B--乙腈(含0.1％甲酸)，梯度洗脱程序：0min，10％B％，0min-2.00min，10％B％-40％B％，2.00min–4.00min，40％-90％B％，4.00min-5.00min，90％B％，5.00min–5.5min，90％-10％B％，5.50min–10.00min,10％B％。
超高效液相色谱-三重四极杆质谱仪质谱条件为：
离子源：电喷雾离子源(ESI源)。
喷雾压力：40psi。
干燥气流速：11L/min。
干燥气温度：350℃。
毛细管电压：4500V。
监测模式：正离子监测模式。
监测离子对及相关电压参数设定见表1。
表1三重四极杆离子对及相关电压参数设定表
Figure BDA0003254868530000041
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1)将乙二胺四乙酸二钠-磷酸氢二钾缓冲溶液与疏水性低共熔溶剂(氯化胆碱对甲苯酚混合溶液)相结合作为提取溶剂，极大的提高了喹诺酮类物质的提取率；同时对比不同提取液的提取效果进行实验，数据如表2：
表2不同提取液提取效果对比
Figure BDA0003254868530000042
由上可见，利用本发明提供的提取液对动物源性食品中喹诺酮类药物进行提取选择性好，提取率明显高于柠檬酸缓冲溶液、偏磷酸缓冲溶液、乙腈、乙酸乙酯。同时对上述6种药物的提取率均能达到95％以上，提取溶剂用量仅为10mL,减少了有机溶剂的使用，更加环保。
2)将修饰的磁性分子印迹聚合物作为净化手段，减少了对固相萃取柱净化、氮吹浓缩等步骤，操作更加简便，以恩诺沙星为目标模板，兼顾诺氟沙星、洛美沙星、环丙沙星、氧氟沙星、培氟沙星等化学基团，特异性强，能够去除大部分的基质干扰物，结合纳米材料的高通量吸附性能、分子印迹技术优异的净化手段、磁性材料的快速分离能力，简化了前处理步骤，大大缩短了前处理时间，将预处理时间从4小时缩短至5分钟，提高了检测效率。磁性分子印迹聚合物能够循环使用，降低了检测成本，非常适合同时处理多批次样品。
3)通过色谱、质谱条件的优化，采用同位素内标法定量，灵敏度高，6种化合物的定量限均0.5μg/kg，相对标准偏差(RSD)为<5％，回收率在90～110％，结果表明该方法灵敏度、精密度、准确度均优于标准方法，适用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，进一步进行说明。
实施例1
1)样品预处理：称取1g猪肝样品于50mL离心管中，加入10mL乙二胺四乙酸二钠-磷酸氢二钾缓冲溶液，50μL氯化胆碱对甲苯酚混合溶液、0.1g的磁性氧化石墨烯分子印迹聚合物，涡旋、超声提取后，用磁力枪将磁性氧化石墨烯分子印迹聚合物吸出。加入1mL洗脱液(0.2％甲酸甲醇)将样品中的喹诺酮类药物解析出来,混匀后，过0.22μm有机滤膜，获得待测液；
2)待测液的检测：运用HPLC-MS/MS，在质谱ESI源下正离子模式下测定，内标法定量。
超高效液相色谱-三重四极杆质谱仪色谱条件为：
色谱柱：安捷伦SB-C18色谱柱(2.1×100mm,1.8μm))；流速：0.30mL/min；进样量：5μL；柱温：35℃。溶液A—0.1％甲酸水溶液，B--乙腈(含0.1％甲酸)，梯度洗脱程序：0min，10％B％，0min-2.00min，10％B％-40％B％，2.00min–4.00min，40％-90％B％，4.00min-5.00min，90％B％，5.00min–5.5min，90％-10％B％，5.50min–10.00min,10％B％。
超高效液相色谱-三重四极杆质谱仪质谱条件为：
离子源：电喷雾离子源(ESI源)。
喷雾压力：40psi。
干燥气流速：11L/min。
干燥气温度：350℃。
毛细管电压：4500V。
监测模式：正离子监测模式。监测离子对及相关电压参数设定见表3。
表3三重四极杆离子对及相关电压参数设定表
Figure BDA0003254868530000061
3)样品检测结果予以省略。
上述样品的检测数据准确性验证如下：
1)标准储备液的配置：分别称取恩诺沙星、诺氟沙星、洛美沙星、环丙沙星、氧氟沙星、培氟沙星、恩诺沙星-D5、诺氟沙星-D5、洛美沙星-D5、环丙沙星-D8、氧氟沙星-D3、培氟沙星-D5各10mg，分别用乙腈溶解定容100.0mL，获得十二种标准储备液，浓度均为100μg/mL；
2)混合标准储备液的配置：所述的十二种标准储备液中，每一种均吸取1.00mL于同一100mL容量瓶中，混匀后用乙腈定容，得到1.00μg/mL的混合标准溶液；所述的十二种标准储备液中，每一种均分别吸取1.00mL于另一100mL容量瓶中，混匀后用乙腈定容，得到1.00μg/mL的混合内标溶液；
3)基质工作液的配置：按步骤1)的样品预处理方法对空白阴性猪肝样品进行处理后，用获得的空白阴性猪肝样品基质溶液稀释混合标准溶液，制成0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL六种不同浓度的混合标准工作液；用空白阴性猪肝样品基质溶液稀释混合内标溶液，制成浓度为2.0ng/mL的混合内标工作液。
4)上机检测；运用HPLC-MS/MS，在质谱ESI源下正离子模式下测定，内标法定量；质谱仪色谱条件、质谱条件以及监测离子对及相关电压参数，均与前述待测液检测相同。
将混合标准工作液按由低到高浓度进样，在上述仪器条件下测定，以混合标准工作溶液浓度为横坐标，以目标化合物与内标的峰面积比为纵坐标进行线性回归。其回归方程、相关系数、检出限和线性范围见表4。
表4猪肝中喹诺酮类药物回归方程、相关系数、检出限和线性范围
Figure BDA0003254868530000071
由表4的结果可知，在猪肝基质中6种喹诺酮类药物的回归方程相关系数均超过0.999；定量限：0.5μg/kg；线性范围0.25-20ng/mL。
称取三份阴性猪肝样品(每份1g)，按实施例1中步骤1)的样品预处理方法处理后，分别添加0.50ng、1.5ng、5.00ng的混合标准工作液，然后再分别添加2.0ng的混合内标工作液；最后进行加标回收试验考察回收率和精密度，结果见表5：
表5猪肝样品中回收率和精密度试验
Figure BDA0003254868530000081
由表5可知，在猪肝基质中本发明的喹诺酮类药物的回收率为95.2～106％，RSD为1.0～4.8％。由以上结果可知，本实施例的回收率、精密度满足检测要求。
实施例2
1)样品预处理：取适量鸡蛋，去壳后均质，称取2g鸡蛋样品于50mL离心管中，加入10mL乙二胺四乙酸二钠-磷酸氢二钾缓冲溶液，10μL氯化胆碱对甲苯酚混合溶液、0.05g磁性氧化石墨烯分子印迹聚合物，涡旋、超声提取后，用磁力枪将磁性氧化石墨烯分子印迹聚合物吸出。加入1mL洗脱液(0.2％甲酸甲醇)将样品中的喹诺酮类药物解析出来,混匀后，过0.22μm有机滤膜，获得待测液；
2)待测液的检测：运用HPLC-MS/MS，在质谱ESI源下正离子模式下测定，内标法定量。
超高效液相色谱-三重四极杆质谱仪色谱条件为：
色谱柱：安捷伦SB-C18色谱柱(2.1×100mm,1.8μm))；流速：0.30mL/min；进样量：5μL；柱温：35℃。溶液A—0.1％甲酸水溶液，B--乙腈(含0.1％甲酸)，梯度洗脱程序：0min，10％B％，0min-2.00min，10％B％-40％B％，2.00min–4.00min，40％-90％B％，4.00min-5.00min，90％B％，5.00min–5.5min，90％-10％B％，5.50min–10.00min,10％B％。
超高效液相色谱-三重四极杆质谱仪质谱条件为：
离子源：电喷雾离子源(ESI源)。
喷雾压力：40psi。
干燥气流速：11L/min。
干燥气温度：350℃。
毛细管电压：4500V。
监测模式：正离子监测模式。监测离子对及相关电压参数设定见表6。
表6三重四极杆离子对及相关电压参数设定表
Figure BDA0003254868530000091
3)样品检测结果予以省略。
上述样品的检测数据准确性验证如下：
1)标准储备液的配置：分别称取恩诺沙星、诺氟沙星、洛美沙星、环丙沙星、氧氟沙星、培氟沙星、恩诺沙星-D5、诺氟沙星-D5、洛美沙星-D5、环丙沙星-D8、氧氟沙星-D3、培氟沙星-D5各10mg，分别用乙腈溶解定容100.0mL，获得十二种标准储备液，浓度均为100μg/mL；
2混合标准储备液的配置：所述的十二种标准储备液中，每一种均吸取1.00mL于同一100mL容量瓶中，混匀后用乙腈定容，得到1.00μg/mL混合标准溶液；所述的十二种标准储备液中，每一种均吸取1.00mL于同一100mL容量瓶中，混匀后用乙腈定容，得到1.00μg/mL混合内标溶液；
3)基质工作液的配置：按样品预处理方法对空白阴性鸡蛋样品进行处理后，用获得的鸡蛋空白阴性样品基质溶液稀释混合标准储备液，制成0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL六种浓度的混合标准工作液；用获得的鸡蛋空白阴性样品基质溶液稀释混合内标溶液，制成浓度为2.0ng/mL的混合内标工作液。
4)上机检测；运用HPLC-MS/MS，在质谱ESI源下正离子模式下测定，内标法定量；质谱仪色谱条件、质谱条件以及监测离子对及相关电压参数，均与前述待测液检测相同。
将混合标准工作液按由低到高浓度进样，在上述仪器条件下测定，以混合标准工作溶液浓度为横坐标，以目标化合物与内标的峰面积比为纵坐标进行线性回归。其回归方程、相关系数、检出限和线性范围见表7。
表7鸡蛋中喹诺酮类药物类药物回归方程、相关系数、检出限和线性范围
Figure BDA0003254868530000101
由表7的结果可知，在鸡蛋基质中6种喹诺酮类药物的回归方程相关系数均大于0.999；定量限：0.5μg/kg；线性范围0.5-20ng/mL。
称取三份阴性鸡蛋样品，(每份2g)，按实施例2中步骤1)的样品预处理方法处理后，分别添加1.0ng、3.0ng、10ng的混合标准溶液，然后再分别添加2ng的混合内标工作液；最后进行加标回收试验考察回收率和精密度，结果见表8：
表8鸡蛋样品中回收率和精密度试验
Figure BDA0003254868530000102
Figure BDA0003254868530000111
由表8可知，在鸡蛋基质中本发明的喹诺酮类药物的回收率为94.8～105％，RSD为1.0～4.8％。由以上结果可知，本实施例的回收率、精密度满足检测要求。
本文提供的实施例针对猪肝、鸡蛋样品，以乙二胺四乙酸二钠-磷酸二氢钾缓冲溶液与疏水性低共熔溶剂(氯化胆碱对甲苯酚混合溶液)相结合作为提取溶剂，极大的提高了喹诺酮类物质的提取率，以恩诺沙星为目标模板，合成新型的磁性氧化石墨烯分子印迹聚合物作为净化手段，特异性强，能够去除大部分的基质干扰物，减少了对固相萃取柱净化、氮吹浓缩等步骤，操作更加简便，简化了前处理步骤，大大缩短了前处理时间，将预处理时间从4小时缩短至5分钟，提高了检测效率。磁性氧化石墨烯分子印迹聚合物能够循环使用，降低了检测成本。以三重四级杆质谱仪作为检测仪器，采取同位素内标法定量，该方法准确、快速、定量结果可靠，非常适合批量样品的检测。

Claims (5)

1.一种用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法，依照如下步骤进行：
1)样品预处理：称取1-2g样品于50mL离心管中，加入10mL乙二胺四乙酸二钠-磷酸氢二钾缓冲溶液，10-50μL氯化胆碱对甲苯酚混合溶液、0.05-0.1g磁性氧化石墨烯分子印迹聚合物，涡旋、超声提取后，用磁力枪将磁性氧化石墨烯分子印迹聚合物吸出；加入1mL0.2％甲酸甲醇洗脱液将样品中的喹诺酮类药物解析出来,混匀后，过0.22μm有机滤膜，获得待测液；
2)待测液的检测：运用HPLC-MS/MS，在质谱ESI源下正离子模式下测定，内标法定量。
2.根据权利要求1所述的用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法，其特征在于：所述乙二胺四乙酸二钠-磷酸氢二钾缓冲溶液，按如下方法制备：30.25g乙二胺四乙酸二钠、4.56g磷酸氢二钾用纯水溶解，用10mol/LNAOH调pH到7.2-7.4，用水定容至1L。
3.根据权利要求2所述的用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法，其特征在于：所述氯化胆碱对甲苯酚混合溶液，按如下方法制备：氯化胆碱、对甲苯酚、乙二醇单甲醚按0.1:0.25:1摩尔比例称取适量，在60℃恒定搅拌下加热，直至形成稳定的均匀透明的液体；将制备的混合溶液储存在密封的小瓶中并保存在干燥器中。
4.根据权利要求3所述的用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法，其特征在于：所述磁性氧化石墨烯分子印迹聚合物，按如下方法制备：
(1)氧化石墨烯的修饰：将石墨烯粉末置于-18℃冰箱中冷冻1小时，称取3g石墨烯粉末，缓慢加入200mL按3:1:0.1比例混合的浓硫酸-浓硝酸-异丙醇混合溶液中之后，加入KMnO45g，搅拌30min后，缓慢升温至55℃，超声反应3h，在80℃下加热搅拌反应2h，抽滤，用蒸馏水涤至中性，于50℃真空干燥至恒重，研磨过筛获得氧化石墨烯，备用；
(2)溶剂热法制备磁性碳纳米管：称取5.410g三氯化铁和3.475g硫酸亚铁置于250mL平底烧瓶中加入100mL水，60℃下恒温磁力搅拌，全部溶解后，迅速加入25mL氨水、2g步骤(1)制得的氧化石墨烯、5mL按1:1比例组成的乙二醇-聚乙二醇混合溶剂中，60℃下恒温磁力搅拌2h得到黑色的混合溶液，用乙醇和水洗数次，于50℃真空干燥至恒重获得磁性碳纳米管，备用；
(3)将步骤(2)得到的磁性碳纳米管、1mmol恩诺沙星、5mmol甲基丙烯酸、5mmol丙烯酸、1mL二甲基亚砜、50mL按9:1比例组成的乙醇-聚乙二醇混合溶液涡旋混合1min，再加入10mmol乙二醇二甲基丙烯酸酯、0.2g聚乙烯吡咯烷酮、0.010g偶氮二异丁脐引发剂，通氮气密封，80℃水浴超声3h；反应结束后磁场分离除去上清液，其余材料用体积比为9∶1混合的甲醇与甲酸混合溶液反复超声洗涤，直至上清液经示差检测器检测不到模板分子为止，于50℃真空干燥至恒重，得到磁性氧化石墨烯分子印迹聚合物。
5.根据权利要求4所述的用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法，其特征在于：
超高效液相色谱-三重四极杆质谱仪色谱条件为：
色谱柱：安捷伦SB-C18色谱柱(2.1×100mm,1.8μm))；流速：0.30mL/min；进样量：5μL；柱温：35℃；溶液A—0.1％甲酸水溶液，B--乙腈(含0.1％甲酸)，梯度洗脱程序：0min，10％B％，0min-2.00min，10％B％-40％B％，2.00min–4.00min，40％-90％B％，4.00min-5.00min，90％B％，5.00min–5.5min，90％-10％B％，5.50min–10.00min,10％B％；
超高效液相色谱-三重四极杆质谱仪质谱条件为：
Figure FDA0003254868520000021
CN202111056746.0A 2021-09-09 2021-09-09 一种用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法 Active CN113640429B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111056746.0A CN113640429B (zh) 2021-09-09 2021-09-09 一种用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111056746.0A CN113640429B (zh) 2021-09-09 2021-09-09 一种用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113640429A true CN113640429A (zh) 2021-11-12
CN113640429B CN113640429B (zh) 2023-03-24

Family

ID=78425628

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111056746.0A Active CN113640429B (zh) 2021-09-09 2021-09-09 一种用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113640429B (zh)

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101315351A (zh) * 2008-06-26 2008-12-03 江南大学 一种同时检测19种喹诺酮类药物的hplc-esi-ms/ms测定方法
US20090163449A1 (en) * 2007-12-20 2009-06-25 Eastman Chemical Company Sulfo-polymer powder and sulfo-polymer powder blends with carriers and/or additives
CN103910836A (zh) * 2013-01-07 2014-07-09 中国药科大学 一种可应用于生物样品前处理的磁性碳纳米管表面分子印迹聚合物的制备方法
AU2016200673A1 (en) * 2011-06-21 2016-02-18 Dioxide Materials, Inc. Electrochemical carbon dioxide sensor
CN105758957A (zh) * 2016-02-29 2016-07-13 山东省分析测试中心 蔬菜中8种喹诺酮类药物残留的高效液相色谱-串联质谱检测方法及其应用
CN107129562A (zh) * 2017-05-26 2017-09-05 浙江海洋大学 一种磁性纳晶纤维素枝接氧化石墨烯表面分子印迹聚合物
CN111443152A (zh) * 2020-03-26 2020-07-24 中国检验检疫科学研究院 检测喹诺酮类化合物含量的方法和试剂盒
CN112007621A (zh) * 2020-06-23 2020-12-01 广东工业大学 四环素类抗生素多模板分子印迹磁性复合材料的制备及应用方法
CN112362797A (zh) * 2020-10-26 2021-02-12 浙江国正检测技术有限公司 一种饲料中喹诺酮类药物的检测方法
CN112557557A (zh) * 2020-12-04 2021-03-26 秦皇岛市农产品质量安全监督检验中心(秦皇岛市兽药监察所、秦皇岛市饲料监测站) 检测蔬菜中磺胺类、喹诺酮类及四环素类残留量的方法

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090163449A1 (en) * 2007-12-20 2009-06-25 Eastman Chemical Company Sulfo-polymer powder and sulfo-polymer powder blends with carriers and/or additives
CN101315351A (zh) * 2008-06-26 2008-12-03 江南大学 一种同时检测19种喹诺酮类药物的hplc-esi-ms/ms测定方法
AU2016200673A1 (en) * 2011-06-21 2016-02-18 Dioxide Materials, Inc. Electrochemical carbon dioxide sensor
CN103910836A (zh) * 2013-01-07 2014-07-09 中国药科大学 一种可应用于生物样品前处理的磁性碳纳米管表面分子印迹聚合物的制备方法
CN105758957A (zh) * 2016-02-29 2016-07-13 山东省分析测试中心 蔬菜中8种喹诺酮类药物残留的高效液相色谱-串联质谱检测方法及其应用
CN107129562A (zh) * 2017-05-26 2017-09-05 浙江海洋大学 一种磁性纳晶纤维素枝接氧化石墨烯表面分子印迹聚合物
CN111443152A (zh) * 2020-03-26 2020-07-24 中国检验检疫科学研究院 检测喹诺酮类化合物含量的方法和试剂盒
CN112007621A (zh) * 2020-06-23 2020-12-01 广东工业大学 四环素类抗生素多模板分子印迹磁性复合材料的制备及应用方法
CN112362797A (zh) * 2020-10-26 2021-02-12 浙江国正检测技术有限公司 一种饲料中喹诺酮类药物的检测方法
CN112557557A (zh) * 2020-12-04 2021-03-26 秦皇岛市农产品质量安全监督检验中心(秦皇岛市兽药监察所、秦皇岛市饲料监测站) 检测蔬菜中磺胺类、喹诺酮类及四环素类残留量的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
徐潇颖等: "磁性多壁碳纳米管固相萃取/高效液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中多组分兽药残留", 《分析测试学报》 *
梁素丹等: "全自动固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定动物肌肉中喹诺酮类和四环素类兽药残留", 《中国食品卫生杂志》 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN113640429B (zh) 2023-03-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108262019B (zh) 一种磁性磺酸基功能化COFs材料及其制备方法和应用
Liu et al. Solid phase extraction using magnetic core mesoporous shell microspheres with C18-modified interior pore-walls for residue analysis of cephalosporins in milk by LC–MS/MS
CN108276584A (zh) 一种人体尿液中芳香胺化合物的检测方法
CN102645481A (zh) 发光纳米碳点作为maldi基质分析小分子的应用
WO2019196233A1 (zh) 一种测定河口沉积物中多种内分泌干扰物含量的方法
CN110514774B (zh) 一种分析水中酚类化合物的方法
CN111157641B (zh) 一种hplc-ms-ms法测定人血浆中卡马西平成分含量的方法
WO2022017548A2 (zh) 一种用于药物布洛芬分子手性结构分析的试剂和方法
CN113899836A (zh) 土壤样品和沉积物样品中抗生素的快速高通量检测方法
Liu et al. The determination of pesticides in tea samples followed by magnetic multiwalled carbon nanotube-based magnetic solid-phase extraction and ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry
Ma et al. Enhanced cleanup efficiency hydroxy functionalized-magnetic graphene oxide and its comparison with magnetic carboxyl-graphene for PRiME pass-through cleanup of strychnine and brucine in human plasma samples
CN109459506B (zh) 一种用于茶叶中多氯联苯检测的快速样品前处理方法
CN113640429B (zh) 一种用于动物源性食品中喹诺酮类药物残留的检测方法
Wang et al. Green sample clean-up based on magnetic multiwalled carbon nanotubes for the determination of lamivudine by high performance liquid chromatography
CN106645451A (zh) 一种谷物中赭曲霉毒素a的检测方法
CN111175369A (zh) 一种用于小分子检测的maldi-tof ms基质及其应用
WO2022017549A2 (zh) 一种用于药物布洛芬分子手性结构分析的试剂和方法
CN112834599B (zh) 一种用于位置异构氨基联苯分子的位置异构分析试剂和方法
CN113655153B (zh) 一种用于动物源性产品中金刚烷胺类药物残留的检测方法
CN113791150B (zh) 一种用于动物源性食品中头孢类药物残留量的检测方法
CN111307992B (zh) 一种定量检测pm2.5中有机酸的柱前衍生液质联用分析方法
CN114113394A (zh) 用于提取净化百草枯代谢物的磁性微球、制备方法、试剂盒及提取方法
CN111413422B (zh) 胆碱脯氨酸离子液体修饰磁性纳米材料及其结合hplc对爱普列特的检测方法
CN115112786A (zh) 一种检测燃香类产品中多环芳烃类物质含量的方法
CN112834600B (zh) 一种基于伽马环糊精的氨基苯磺酸位置异构体的分析试剂和方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant