CN113637684A - 一种水稻类病斑突变体基因scyl2及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种水稻类病斑突变体基因SCYL2，所述水稻类病斑突变体基因SCYL2的核苷酸序列是SEQ ID No.1所示的核苷酸序列中通过添加、替换或缺失一个或几个碱基生成的核苷酸序列，其编码的蛋白能够调控水稻类病斑形成。SCYL2基因的突变激活水稻中抗病相关基因的表达，对稻瘟病和白叶枯病的抗性显著增强。该基因的发现和克隆为水稻抗稻瘟病和白叶枯病抗性育种提供了新的基因资源。

Description

一种水稻类病斑突变体基因SCYL2及其应用

技术领域

本发明涉及水稻育种技术领域，尤其涉及一种水稻类病斑突变体基因及其在 水稻抗稻瘟病和白叶枯病抗性育种上的应用。

背景技术

植物类病斑突变体(Lesion mimic mutant，LMM)是指在没有遭受病原物侵 染条件下在植物的叶片或叶鞘上自发形成坏死病斑的一类突变体。

研究发现，类病斑突变体上形成病斑的生理生化过程与植物在收到病原物侵 染时发生超敏反应(hypersensitive response，HR)时非常相似。超敏反应发 生时，受病原物侵染的部位以及周围的寄主细胞会发生细胞程序性死亡 (Programmed cell death，PCD)，形成坏死斑，以限制病原物的进一步蔓延。 绝大多数类病斑突变体除了形成类病斑之外，还会激活植物抗病相关基因的组成 型表达，并且伴随着植物抗病能力的增强。因此，对类病斑突变体形成机制、相 关调控因子的研究，具有重要的意义。

近年来，随着分子生物学的发展，已经发现了数十个水稻类病斑突变体基因， 这些基因为今后应用基因工程手段培育抗病性更好的水稻品种积累了丰富的基 因资源。然而，目前已知这些基因相较于整个水稻抗病反应调控网络来说还只是 冰山一角，还有许多未知的部分需要进一步研究。

发明内容

本发明提供了一个新的控制水稻类病斑形成的基因SCYL2。这个基因的突变 使水稻产生类病斑的表型，激活水稻抗病相关基因的表达，并使水稻对稻瘟病和 白叶枯病的抗性显著增强。

本发明第一个目的是提供一种水稻类病斑突变体基因SCYL2，其特征在 于，所述水稻类病斑突变体基因SCYL2的核苷酸序列是SEQ ID No.1所示的核 苷酸序列中通过添加、替换或缺失一个或几个碱基生成的核苷酸序列，其编码的 蛋白能够调控水稻类病斑形成。

进一步地，所述水稻类病斑突变体基因SCYL2的编码序列(CDS)是SEQ ID No.2所示的核苷酸序列中通过添加、替换或缺失一个或几个碱基生成的核苷 酸序列。

进一步地，所述水稻类病斑突变体基因SCYL2的核苷酸序列是在SEQ ID No.1所示的核苷酸序列中缺失TTATCACCTGGT生成的核苷酸序列。

进一步地，所述水稻类病斑突变体基因SCYL2的编码序列(CDS)是SEQ ID No.2所示的核苷酸序列中缺失TTATCACCTGGT生成的核苷酸序列。

本发明的第二个目的是提供一种水稻类病斑突变体基因SCYL2在培育抗病 植物品种中的应用，其特征在于：所述水稻类病斑突变体基因SCYL2为上述任 一所述突变体基因，所述植物为水稻，所述抗病是抗稻瘟病菌和白叶枯病菌。

本申请发明人从粳稻品种秀水134为遗传背景的辐照诱变的突变体库中筛选 到了一个类病斑突变体，该突变体类病斑的形成依赖光照，在病斑形成过程中发 生类似过敏反应的细胞坏死。通过图为克隆的方法，发现这个突变体中的位于1 号染色体上的基因LOC_Os01g42950的第4个外显子发生了12个碱基 (TTATCACCTGGT)的缺失。LOC_Os01g42950基因编码一个与动物中 SCY1-LIK2(SCYL2)基因同源，因此将这个突变体命名为是scyl2。在scyl2突变 体中，与抗病相关的基因OsPR1a、OsPR1b、OsPR4、OsPAL3、OsAOS2、OsWRKY45和OsJAmyb的表达量相对于野生型秀水134显著增加，并且scyl2突变体对稻瘟病 和白叶枯病的抗性比野生型秀水134显著增强。

水稻中SCYL2的基因组核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，包含14个外显子和13 个内含子。该基因CDS序列如SEQ ID No.2所示，包括起始密码子和终止密码子 总长度为2835bp，编码一个944个氨基酸的蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No.3 所示。

用RT-PCR技术扩增野生型水稻中SCYL2基因的CDS序列，构建超表达载 体，用农杆菌介导的方法转入scyl2类病斑突变体中，可以使突变体的类病斑恢 复。另一方面用CRISPR-Cas9基因编辑技术将野生型水稻中的SCYL2基因敲除， 可以使水稻产生类病斑的表型。验证了scyl2类病斑突变体的表型是由于SCYL2 基因的突变产生的。

本发明提供了一个新的控制水稻类病斑形成的基因SCYL2，并发现这个基 因的突变使水稻产生类病斑的表型，激活水稻抗病相关基因的表达，并使水稻对 稻瘟病和白叶枯病的抗性显著增强。该基因的发现和克隆，为通过基因工程手段 进行水稻抗稻瘟病和白叶枯病的抗性育种提供了新的靶点。

附图说明

图1为scyl2突变体的表型图。

其中，A：分蘖期野生型(左侧)和突变体(右侧)植株的比较；B：分蘖 期野生型(左侧)和突变体(右侧)叶片的比较；C：成熟期野生型(左侧)和 突变体(右侧)植株的比较；D：成熟期野生型(左侧)和突变体(右侧)叶片 的比较；E：野生型(左侧)和突变体(右侧)叶片遮光处理的表型。

图2为scyl2突变体稻瘟病和白叶枯病接种实验。

其中，A：野生型(左侧)和突变体(右侧)接种稻瘟病菌后的表型；B： 野生型(左侧)和突变体(右侧)接种白叶枯病菌P6生理小种后的表型；C：野 生型(左侧)和突变体(右侧)接种白叶枯病菌P7生理小种后的表型；D：野生 型(左侧)和突变体(右侧)接种白叶枯病菌XOO4生理小种后的表型。

图3为野生型和scyl2突变体中抗病相关基因的表达。

图4为SCYL2基因的定位和克隆。

其中，A：SCYL2基因的初步定位；B：SCYL2基因的精细定位；C：SCYL2 基因的结构；D：野生型和突变体SCYL2基因序列的比较。

图5为SCYL2基因的CRISPR/Cas9基因编辑。

其中，A：SCYL2基因结构及CRISPR/Cas9基因编辑靶位点序列；B：3个独 立CRISPR/Cas9株系的基因型；C：3个独立CRISPR/Cas9株系的表型；

图6为scyl2突变体基因功能互补验证。

其中，A：野生型(左侧)、突变体(中间)和转基因互补(右侧)的植株表 型；B：野生型(左侧)、突变体(中间)和转基因互补(右侧)的叶片表型

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步说明。本实施例在以本发明技术方案前 提下进行实施，给出了详细的实施方式和过程，但本发明的保护范围包括但不限 于下述的实施例。

实施例1类病斑突变体scyl2的表型鉴定

本发明人以秀水134为背景，通过电子束辐照诱变获得的一个类病斑突变体， 命名为scyl2。与野生型秀水134进行比较发现，在苗期突变体和野生型差异不明 显。到分蘖期开始，突变体比野生型稍矮(图1A)，在从上往下数第3片叶子开 始，可以观察到类似超敏反应的坏死斑，且随着生长类病斑扩散分布到整个叶片 (图1B)。到了成熟期类病斑扩散分布到所有叶片(图1C)，包括叶鞘上也出现 同样的类病斑(图1D)。用锡箔纸遮光处理发现scyl2突变体类病斑的形成受光照 的诱导。

与野生型秀水134相比，scyl2突变体对稻瘟病和白叶枯病的抗性显著增强(如 图2所示)。

实施例2类病斑突变体scyl2中抗病相关基因表达量的检测

采用qRT-PCR方法比较了秀水134和scyl2突变体在分蘖期叶片中15个与抗病 相关基因的表达量。其中8个基因与水杨酸信号途径相关，7个基因与茉莉酸信号 途径相关。结果显示，水杨酸信号途径相关途径的基因中，有OsPR1a，OsPR1b， OsPR4和OsPAL3等4个基因的表达量在突变体中显著上升；茉莉酸信号途径相关 途径的基因中，有OsAOS2，OsWRKY45和OsJAmyb等3个基因的表达量在突变体 中显著上升(图3)。说明SCYL2基因的突变激活了体内抗病相关基因的表达。

实施例3SCYL2基因的定位与克隆

利用图位克隆的方法将SCYL2基因精细定位于1号染色体大约18kb的范围内 (图4A、B)，在这个范围内，只有SCYL2一个基因，SCYL2基因包含14个外显子 和13个内含子(图4C).通过测序发现scyl2突变体中在SCYL2基因的第4个外显子 中发生了12个碱基(TTATCACCTGGT)的缺失(图4D)。

实施例4CRISPR/Cas9技术靶向敲除SCYL2基因

本实施例CRISPR/Cas9编辑靶序列长度为20bp，位于SCYL2编码区的第 442至461碱基位(图5A)，编辑的靶序列为：CTCGGCTGCCTCGACAACGT。

根据靶序列合成两条单核苷酸引物：

SCYL2-F1：TGTGTGCTCGGCTGCCTCGACAACGT

SCYL2-R1：AAACACGTTGTCGAGGCAGCCGAGCA；

通过退火反应使得引物SCYL2-F1和SCYL2-R1形成二聚体结构，然后与 BGK03载体片段进行连接，构建成含有水稻SCYL2基因靶序列的质粒 BGK03-SCYL2。

用电激法将BGK03-SCYL2质粒转化如农杆菌EHA105，将含有 BGK03-SCYL2质粒的农杆菌EHA105在含有Kan(50μg/μl)的LB平板上划线， 获得单菌落。挑单菌落接种到3ml含利福平(25mg/L)和Kan(50mg/L)的 LB液体培养基中28℃摇菌培养过夜；第二天将菌液按1:20的比例接种于含利 福平(25mg/L)、Kan(50mg/L)和乙酰丁香酮(20mg/L)的AB液体培养基中，28℃，200rpm摇菌培养大约4h。离心收集农杆菌，加等体积含乙酰丁香酮 (20mg/L)的AAM液体培养基重悬，即可用于转化水稻的受体材料。

本实施例以粳稻秀水134为受体材料进行农杆菌转化。成熟的种子1000粒 左右，去壳后用75％的乙醇浸泡1分钟，倒掉75％乙醇后用30％安替福民溶液 消毒30分钟，用无菌水洗6次，用灭菌纱布吸干水分后将种子种到含2,4D (2mg/L)的NB培养基上26℃避光培养2周。将诱导出的愈伤组织切下，放入 新的含2,4D(2mg/L)的NB培养基上，26℃培养7天。挑取状态较好的愈伤组 织，于备好的农杆菌菌液中浸泡8min，期间不时摇晃。吸出或倒掉菌液，将愈 伤组织用无菌滤纸吸干，接种于共培养中(含100μM乙酰丁香酮)28℃暗培养72h。取出愈伤组织，转入含有25mg/L潮霉素的筛选培养基上培养，2周后转 入含有50mg/L潮霉素的筛选培养基上继续筛选。2周后将愈伤转入预分化培养 基上培养1周后，再转入分化培养基光照培养，分化成苗后将小苗用1/2MS培 养基生根壮苗获得T0代植株，移入田间种植。

取T0代植株叶片提取DNA，根据SCYL2基因的序列设计引物扩增，对PCR 产物进行测序，确定靶序列发生突变的植株，所用引物序列为：

SCYL2-F2：GAGGACGCCTTCCTCGACCT

SCYL2-R2：AGATCTTGTGGACTCTAGAGCGGCT。

测序结果共获得了3个独立的SCYL2基因编辑的株系,这3个基因编辑株系 的基因型见图5B。这3个SCYL2基因编辑株系的表型与scyl2突变体的表型完 全一致(图5C)。

实施例5突变体基因功能互补试验

用KOD高保真聚合酶扩增玉米泛素基因启动子，所用引物序列如下：

UBI-PRO-F:

TGACCATGATTACGAATTCGAGCTCCGGTCGTGCCCCTCTCTAG

UBI-PRO-R:TCAGCGCCATCTGCAGAAGTAACACCAAACAACAG

用KOD高保真聚合酶扩增野生型水稻秀水134中SCYL2基因CDS序列，所用 引物序列如下：

SCYL2-F3：ACTTCTGCAGATGGCGCTGAACATGAAGAC

SCYL2-R3：

GGGAAATTCGAGCTGGTCACCCTACAGTAAATCTAGAATAGG

将玉米泛素基因启动子和SCYL2基因CDS的PCR扩增产物用1％琼脂糖电泳 回收。

将PCAMBIA1301载体用SacI和BstEII双酶切，酶切产物用1％琼脂糖电泳回收 线性化的载体。

将上述PCR产物和线性化的载体用擎科Trelief^TM SoSoo克隆试剂盒连接后转 化大肠杆菌Top10，挑取阳性克隆后测序鉴定。

载体测序正确后，转化农杆菌EHA105，然后转化用scyl2突变体种子诱导而 来的愈伤组织。转化方法如实施例4中所述。

结果发现，阳性转化株系的类病斑表型被恢复，说明scyl2突变体类病斑的 表型是由于SCYL2的基因突变引起的。

序列表

<110> 上海市农业科学院

<120> 一种水稻类病斑突变体基因SCYL2及其应用

<160> 11

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 7338

<212> DNA

<213> 水稻SCYL2基因组(Rice scyl2 genome)

<400> 1

atggcgctga acatgaagac gctgacgcag gcgctggcga aggcgtcggc ggtgatcgag 60

aagacggtga cgacgacggt gcaggaggtg acggggccgc ggccgctgca ggacttcgag 120

ctgctcgagc aggccgggtc ggggggcccc ggcctcgcat ggcggatcta cacggcgcgg 180

ccgcgggagg gggcgccgtc cgcgccctac ccggtggtct ccgtctgggt gctcgacaag 240

cgggcgctcg ccgaggcgcg ggcgcgggcg gggctcacca aggccgccga ggacgccttc 300

ctcgacctcg cccgcgccga cgccgcgcgg ctcgtgcgcc tccggcaccc cggggtgctc 360

cacgtcgtcc aggcgctgga cgagaccaag gccgccatgg ccatggccac cgagccggtg 420

ttcgcgtccg tcgccaacgc gctcggctgc ctcgacaacg tcggcaaggt gcccaaggag 480

ctcaagggca tggtacggag cgatgctgcc tcgcttattt tttgttaggt ttccgtgtgc 540

ctagatgtcc actttggcga ttgctagtaa ttagccgctc tagagtccac aagatctgtg 600

atttggttta ttttgggcat gggatgtttg ctagctcaaa agttccttct aattaacatg 660

ttgaagtgat tagtgttact gacagtggta aactggcaac tgtaccattt gtgagttggg 720

atatatttag taacattatc tagatttgtg cgttagaaca taatttgagc tgaaaattga 780

cataaggctt tgtcttttgt atgcaacact ttgcagtgcc atatccagaa aattcattaa 840

atgggatcat tggtacttat aaacatttgc agcgagcttt ctttgcagtt aactttctaa 900

tgcaatcaat ctgtctgaaa tctgccaagt ttcctgggaa ggcatataaa ttgttacgtg 960

gtacttagaa tacattcatt tacaaaaagt gccgtgggtt ctataaagca tgacgatgtg 1020

tttcagctgt actgagattt gcttgtttat tgttatgttt caggaaatgg ggctactgga 1080

ggttaaacac gggttgctac aagtctcaga gacactagac tttcttcata acaatgccca 1140

tcttgcccat cgagctatat cacccgaggt tgaatgcagc acattcttca actcatagtt 1200

tctgcacgaa tgtttcatgt tatggatgtg ctttgtcata aatctgttag aatccttttt 1260

cattttacct gttttattta ctttagttag tttctcaagt tttctagtac aacaatataa 1320

tgttctttgc cttggagttg tctctgatga atgcttagcc aagtccattc atatcatgct 1380

gtgatctagg ctagccgctc aattttatca tgctgttttt tgcgcactta actatgcatg 1440

aaatgagttc aaaagaatct gctgcacgaa ctggtgttgc gggaacacat aatctaacac 1500

tgcctgccaa tgatcatgca tatactagtt aatttttgaa tctgtgattt cccctgctct 1560

tgcataatgc atttagccta tttggtcttc atctgcaagt cttatgttct gtcgttgtaa 1620

taatttgatt tcttttgcag acggtcttta taactttgaa tggatcttgg aaacttggtg 1680

ggtttggttt tgctctttct gttgaccaag ccacaggcag tttgacatca acacagcaat 1740

tccactattc ggttagtaag taatttatgc ttagttgtgc attatgtgat agcttttaag 1800

ctgtgtattt gttttaccat tttggataca ctaactaatt ggagcaatag cataaatatt 1860

tctactataa ttgataaaga ttctcttagc tgacctgatt gcactccatg ataaagcaca 1920

taattcttct tgctcttttt tgtttaactc atcaagcatg tacagctact gttatctgag 1980

ttatttccac attcaatgga agtgcttttc tttataatgg cacaaatcat ttcctactta 2040

agtacttagc agtgaacaag taaacattat ttacaacttg gcttcccctg taattatttt 2100

tgctaacact gtttgtcaat gtaattagct gtttgtggaa cctgctttct aatacccatc 2160

attgtgtcat tttcacaatt tgaatcataa tctatttgtc tgtttggtcc ctctaaagga 2220

ctatgatgtt gaggatacag ctttacctct tcaaccatct ctgaattata ctgcaccaga 2280

attggtccga agtggagatt ctaaagttgg ctcggcttgt gacatattta gttttggatg 2340

tctagcttat cacctggttg ctcgtagacc acttctggat tgccataaca atgtgaaaat 2400

ggtatgtctt gaatctggat tttgacattt tacctattct taatgctttt ttttttgaat 2460

tttaattacc tgatctctga actgctgttg gtacatgtat gtagtttccc tttggtatgc 2520

aaacaaacca tctgttaagg aattaaggtt gcatctgctg caatgttagc atttttaaag 2580

atgtgttgat gtttcatttt gttttgcagt atatgaattc cttgacgtat ttaacaagtg 2640

aagccttttc taatattcct gctgatttag tggtggattt gcaaaggatg ctatcagttg 2700

atgtagcatc acgccctagt gctatggcgt tcacaggtaa attatcactt atcatttctt 2760

tatcttgggc ataagatctt ccagaatgga gtttttggat gttctatttg attggagatc 2820

accaggttac ctatacttac atgaaattct tttgaaatgt tgcaccttct gtctgatagg 2880

ctcttccttc ttccggaatg atacgcggtt gcgtgctctt cgtttccttg accatttgct 2940

tgtatgtgtc tattactcca gtttcttttc acagataagt tagttgcttg tttcatatat 3000

atgcatatca tagcttgctt attttctatc tgagaatctc gtttgcctgg cttaagtttc 3060

aattgtacgt gggaagacag aactaggagc tttatctgct tgactgttgt ttgtctaaac 3120

agacaacata ctaatttgtt acctagaaat ggttataatc ttgatccaat atcgtcttca 3180

ggagagagac aatatgcaga agacggagtt tctgaaggca ttatcggata tgtggaagga 3240

cttcgattcc cgagttcttc ggtataaagt atgagcaatc cattatctcc acttttcata 3300

tcaagtgtgg tcttatgaaa ttatggccac attttcttgg tttgtgtgct gcttcataga 3360

agatgttaga acctgctaat tatctaatta ttccatgtta cttattccca gttgtctgat 3420

aagtattttt gcatcgacag ctatactata ctcataaaat taacaggaag tccatcttaa 3480

attttcaatt caatatcatt gcccaattct ttgtgctatt gagcttatca agatcacata 3540

gcaaaatttc agtgtgttct agttattttg ccaaaaaaaa aaatgttgag acactgagaa 3600

ctattggttg taatattgaa aataaaaaga taacatatac acacctcaat gttctaactt 3660

ccattccttt attacatagg tgaatcacgc ctcctgtttg cttttagaga ggaatcactt 3720

ttgttgatcc ttctattagc attatcactt tccttttttg tccttatcta cagttttgat 3780

tcaatgaatc aatgagaaaa atccaagaaa tgccattgac aaacacccaa atccaagaaa 3840

ttccatcaat gagtgcgagt tccataaaat gccatcgtac aaacgatttt atctcagaaa 3900

taccatcgct gttagggttc ccccaatccc gcgccgttaa gtgcactgtt catccttagc 3960

acttaacgga gggctgctaa tggaacccta acggcaatgg catttttggg acaaagttgc 4020

ttgtatgatg gcatttcatg gaacttgtac ttgatgacat ttcttgaaat tgagtgcttg 4080

tcaatggcat ttcttggatt ttctattaat gtattgaatt tgcgcaactt acttatgttt 4140

gcatatgtgt gcatgcgaat tctttctatc ggaaggaaaa aaaatgctga ttcacaatgt 4200

tacttaatat attgactatc tgtaagctga ctctgtttgc aaccaggttc ttccacctct 4260

ctgtgctgag ttacgcaaca tggtcatgca gccaatgatt ttgcccatgg ttctaacaat 4320

agcggaatct caggtcatgt tccttgtgtt ttacgaatac ctttttctta aatattttat 4380

gaattatatt ctttgttcaa tgatagtaag aacttatctc actgattgtt aactaatggg 4440

atgataccat ggttctgtaa taccactttg cataatgtga agtatcatat tttatttgac 4500

tgtttttcat ctgaacttgc ttttgactgg agtaagtcca atttaatgtg gttgtatcat 4560

tcttgctgca acacagagtc atccacagta ctaacactcg aacattgtta tttgtttgtt 4620

atgcttcaat ttcgtgagtt catagagttt gtaaagtgaa atacatttaa agctatgtta 4680

tatggtaatg tttctttatg atgcaaatgc tataattttt ttttctgaaa atttgttctc 4740

tgctctctgg caggacaaag gtgattttga gctttcaaca ctgccggccc ttgttccggt 4800

atttacttca gcgtcaggtg aaacacttct tttgctcgtg aagcatgcgg atcttattat 4860

tcacaaggta actaagttac ttttataaat actgcactga ttcattgttt ttgtttttgc 4920

tctttttatc tctatagtaa atgcaattat aatctaaatt cacaatggta ccaacacaat 4980

agttgtaatt actggaattt tccatggcca gatgacctaa tcaatttctt taccatgctt 5040

ctcttttcag gccacacaag agcatttgat atcacatgtc cttcctatgc tggtacgggc 5100

ttatgatgac actgatcccc gactacagga agaagtactg cgacggacag tgccattgtc 5160

tcgtcagctt gacgtgaagg ttagcattga aatatattct taaaatgagg ataaactata 5220

tactgtagct tcattttctc catcacaatt gagaaagcca ctatctttgc ctctcgttga 5280

gtaagggctc acttgacaaa ttaacttcac aatgacaaaa gaatcaacaa ttccacatga 5340

accatttttg tactcactca gtgatttctt cttgcagcta ctgaaacagt ctgttctgcc 5400

acgcgtacat ggattagcct taaagactac agttgctgcg gtatgcataa tacatgtttt 5460

agttttataa tttgggtact ttatgtgtca gattgtacca tattaataca cattaaaaca 5520

cacaaatagc atgtatgatg aaacaacttt ttttttaaaa aagaataatt aaaagggaaa 5580

actcctgtct cgtttgcaca taaaataaat aaacagaaat ataagagcca tgagatgttg 5640

agtgtatggt ttttctatgt agctactcca tcctatagct tgttattgat caagagtgtt 5700

aagatcttag atgttagtgt cactatagtg ctattatata attcttctgt attttatcac 5760

cccctattat aatcccgcct aattaccagg aaggcagcct tctgtacctt atattatttt 5820

gtgttttatg tttctttgtt ctgatcttga ttttgaattg tgacttgaaa atataggtgc 5880

gtgtaaatgc cttgcgctgt ttaggggatc ttgttccatc tttggataaa gaaggcatac 5940

tggagatctt gcaaactctt cggcgttgta cagctgttga ccacaccgca ccaacactta 6000

tgtgcaccct tggagtggct aatgcaattt ttaaacaggt ttgttcttga tatagtttgt 6060

ttcagtattg ctaaatcatg aacaattatt ttttatgcca attgattttt ccttgtaaaa 6120

gatatcttat tttactcatt tgccaatgat ccagtgtggt gttgagtttg ctgcggagta 6180

cgtgattcct ctcgtcttcc cactgctcac agcacatcaa ctgaatgtac agcaatttgc 6240

taagtacata ctatttgtca aggatatcac aaggtacctt ttgtcccacc acacttgcga 6300

tgcgttaatc aatatgccaa ctaaattagt gcctacttct acagcaagat tgaggagaag 6360

cgtggtgtga ctgttacaga taatgggaat acagaggtaa aagtatcacc ctcattggct 6420

aatgggattc attctgagcc attgtcacga ggtgtgggac aaactgaaca gatacaaact 6480

gcaaagggtg ctgcatggga tgaggactgg ggccctacta agaaagcaag cactccatca 6540

cagtcatctg attccaatgc acggatgaag caaccatcag acccttttga tttcagcact 6600

caaacaaagc aaccctcggc acttcctttt gatttcagta ctcaacaacc taagccatca 6660

tctgcaatcc cgcaagtgac accagctaca atttcgcctg caccatcact tccatcactg 6720

caatctcttg caccaagctc tggaccccaa acttctggtt catgtgttcc tgttgacatt 6780

gagtggcctc ctagaaaaaa cacatcgtct gactttaatg caccattatc tgttagtgag 6840

caaagtaaat ctggagggct atctagtgat ggtcttgctg atattgatcc ttttgccgac 6900

tggcccccaa aagcaagcag tggtgccagc attttagctg ttggacacct gtcaagcaca 6960

agccaaagta tttctggact aagtacagga aatattgggt tcagtggcaa cagtggttct 7020

ctgggacaaa tgaaaaccaa ccaaatgagc tggtcagcga aaccgaacac tactaattta 7080

atggccgtga actcaacagg caattacttg aatcagggca actcagctct tggatttgga 7140

aatccaattg gaggacggag tacagggtca ttgtcaagca gcacaacaca gggtccaccc 7200

aggcttgctc ctcctccatc tgcttctgtt ggaagagggc gtggtagaaa tcaagggcaa 7260

tcggcacttt cacgagcatc acgtactcct cattccaatg tttcatcaga gcagccacct 7320

attctagatt tactgtag 7338

<210> 2

<211> 2835

<212> DNA

<213> 水稻中SCYL2的基因组CDS序列(Genomic cds sequence of scyl2 in rice)

<400> 2

atggcgctga acatgaagac gctgacgcag gcgctggcga aggcgtcggc ggtgatcgag 60

aagacggtga cgacgacggt gcaggaggtg acggggccgc ggccgctgca ggacttcgag 120

ctgctcgagc aggccgggtc ggggggcccc ggcctcgcat ggcggatcta cacggcgcgg 180

ccgcgggagg gggcgccgtc cgcgccctac ccggtggtct ccgtctgggt gctcgacaag 240

cgggcgctcg ccgaggcgcg ggcgcgggcg gggctcacca aggccgccga ggacgccttc 300

ctcgacctcg cccgcgccga cgccgcgcgg ctcgtgcgcc tccggcaccc cggggtgctc 360

cacgtcgtcc aggcgctgga cgagaccaag gccgccatgg ccatggccac cgagccggtg 420

ttcgcgtccg tcgccaacgc gctcggctgc ctcgacaacg tcggcaaggt gcccaaggag 480

ctcaagggca tggaaatggg gctactggag gttaaacacg ggttgctaca agtctcagag 540

acactagact ttcttcataa caatgcccat cttgcccatc gagctatatc acccgagacg 600

gtctttataa ctttgaatgg atcttggaaa cttggtgggt ttggttttgc tctttctgtt 660

gaccaagcca caggcagttt gacatcaaca cagcaattcc actattcgga ctatgatgtt 720

gaggatacag ctttacctct tcaaccatct ctgaattata ctgcaccaga attggtccga 780

agtggagatt ctaaagttgg ctcggcttgt gacatattta gttttggatg tctagcttat 840

cacctggttg ctcgtagacc acttctggat tgccataaca atgtgaaaat gtatatgaat 900

tccttgacgt atttaacaag tgaagccttt tctaatattc ctgctgattt agtggtggat 960

ttgcaaagga tgctatcagt tgatgtagca tcacgcccta gtgctatggc gttcacaggc 1020

tcttccttct tccggaatga tacgcggttg cgtgctcttc gtttccttga ccatttgctt 1080

gagagagaca atatgcagaa gacggagttt ctgaaggcat tatcggatat gtggaaggac 1140

ttcgattccc gagttcttcg gtataaagtt cttccacctc tctgtgctga gttacgcaac 1200

atggtcatgc agccaatgat tttgcccatg gttctaacaa tagcggaatc tcaggacaaa 1260

ggtgattttg agctttcaac actgccggcc cttgttccgg tatttacttc agcgtcaggt 1320

gaaacacttc ttttgctcgt gaagcatgcg gatcttatta ttcacaaggc cacacaagag 1380

catttgatat cacatgtcct tcctatgctg gtacgggctt atgatgacac tgatccccga 1440

ctacaggaag aagtactgcg acggacagtg ccattgtctc gtcagcttga cgtgaagcta 1500

ctgaaacagt ctgttctgcc acgcgtacat ggattagcct taaagactac agttgctgcg 1560

gtgcgtgtaa atgccttgcg ctgtttaggg gatcttgttc catctttgga taaagaaggc 1620

atactggaga tcttgcaaac tcttcggcgt tgtacagctg ttgaccacac cgcaccaaca 1680

cttatgtgca cccttggagt ggctaatgca atttttaaac agtgtggtgt tgagtttgct 1740

gcggagtacg tgattcctct cgtcttccca ctgctcacag cacatcaact gaatgtacag 1800

caatttgcta agtacatact atttgtcaag gatatcacaa gcaagattga ggagaagcgt 1860

ggtgtgactg ttacagataa tgggaataca gaggtaaaag tatcaccctc attggctaat 1920

gggattcatt ctgagccatt gtcacgaggt gtgggacaaa ctgaacagat acaaactgca 1980

aagggtgctg catgggatga ggactggggc cctactaaga aagcaagcac tccatcacag 2040

tcatctgatt ccaatgcacg gatgaagcaa ccatcagacc cttttgattt cagcactcaa 2100

acaaagcaac cctcggcact tccttttgat ttcagtactc aacaacctaa gccatcatct 2160

gcaatcccgc aagtgacacc agctacaatt tcgcctgcac catcacttcc atcactgcaa 2220

tctcttgcac caagctctgg accccaaact tctggttcat gtgttcctgt tgacattgag 2280

tggcctccta gaaaaaacac atcgtctgac tttaatgcac cattatctgt tagtgagcaa 2340

agtaaatctg gagggctatc tagtgatggt cttgctgata ttgatccttt tgccgactgg 2400

cccccaaaag caagcagtgg tgccagcatt ttagctgttg gacacctgtc aagcacaagc 2460

caaagtattt ctggactaag tacaggaaat attgggttca gtggcaacag tggttctctg 2520

ggacaaatga aaaccaacca aatgagctgg tcagcgaaac cgaacactac taatttaatg 2580

gccgtgaact caacaggcaa ttacttgaat cagggcaact cagctcttgg atttggaaat 2640

ccaattggag gacggagtac agggtcattg tcaagcagca caacacaggg tccacccagg 2700

cttgctcctc ctccatctgc ttctgttgga agagggcgtg gtagaaatca agggcaatcg 2760

gcactttcac gagcatcacg tactcctcat tccaatgttt catcagagca gccacctatt 2820

ctagatttac tgtag 2835

<210> 3

<211> 944

<212> PRT

<213> 水稻SCYL2基因组氨基酸序列(Amino acid sequence of rice scyl2 genome)

<400> 3

Met Ala Leu Asn Met Lys Thr Leu Thr Gln Ala Leu Ala Lys Ala Ser

1 5 10 15

Ala Val Ile Glu Lys Thr Val Thr Thr Thr Val Gln Glu Val Thr Gly

20 25 30

Pro Arg Pro Leu Gln Asp Phe Glu Leu Leu Glu Gln Ala Gly Ser Gly

35 40 45

Gly Pro Gly Leu Ala Trp Arg Ile Tyr Thr Ala Arg Pro Arg Glu Gly

50 55 60

Ala Pro Ser Ala Pro Tyr Pro Val Val Ser Val Trp Val Leu Asp Lys

65 70 75 80

Arg Ala Leu Ala Glu Ala Arg Ala Arg Ala Gly Leu Thr Lys Ala Ala

85 90 95

Glu Asp Ala Phe Leu Asp Leu Ala Arg Ala Asp Ala Ala Arg Leu Val

100 105 110

Arg Leu Arg His Pro Gly Val Leu His Val Val Gln Ala Leu Asp Glu

115 120 125

Thr Lys Ala Ala Met Ala Met Ala Thr Glu Pro Val Phe Ala Ser Val

130 135 140

Ala Asn Ala Leu Gly Cys Leu Asp Asn Val Gly Lys Val Pro Lys Glu

145 150 155 160

Leu Lys Gly Met Glu Met Gly Leu Leu Glu Val Lys His Gly Leu Leu

165 170 175

Gln Val Ser Glu Thr Leu Asp Phe Leu His Asn Asn Ala His Leu Ala

180 185 190

His Arg Ala Ile Ser Pro Glu Thr Val Phe Ile Thr Leu Asn Gly Ser

195 200 205

Trp Lys Leu Gly Gly Phe Gly Phe Ala Leu Ser Val Asp Gln Ala Thr

210 215 220

Gly Ser Leu Thr Ser Thr Gln Gln Phe His Tyr Ser Asp Tyr Asp Val

225 230 235 240

Glu Asp Thr Ala Leu Pro Leu Gln Pro Ser Leu Asn Tyr Thr Ala Pro

245 250 255

Glu Leu Val Arg Ser Gly Asp Ser Lys Val Gly Ser Ala Cys Asp Ile

260 265 270

Phe Ser Phe Gly Cys Leu Ala Tyr His Leu Val Ala Arg Arg Pro Leu

275 280 285

Leu Asp Cys His Asn Asn Val Lys Met Tyr Met Asn Ser Leu Thr Tyr

290 295 300

Leu Thr Ser Glu Ala Phe Ser Asn Ile Pro Ala Asp Leu Val Val Asp

305 310 315 320

Leu Gln Arg Met Leu Ser Val Asp Val Ala Ser Arg Pro Ser Ala Met

325 330 335

Ala Phe Thr Gly Ser Ser Phe Phe Arg Asn Asp Thr Arg Leu Arg Ala

340 345 350

Leu Arg Phe Leu Asp His Leu Leu Glu Arg Asp Asn Met Gln Lys Thr

355 360 365

Glu Phe Leu Lys Ala Leu Ser Asp Met Trp Lys Asp Phe Asp Ser Arg

370 375 380

Val Leu Arg Tyr Lys Val Leu Pro Pro Leu Cys Ala Glu Leu Arg Asn

385 390 395 400

Met Val Met Gln Pro Met Ile Leu Pro Met Val Leu Thr Ile Ala Glu

405 410 415

Ser Gln Asp Lys Gly Asp Phe Glu Leu Ser Thr Leu Pro Ala Leu Val

420 425 430

Pro Val Phe Thr Ser Ala Ser Gly Glu Thr Leu Leu Leu Leu Val Lys

435 440 445

His Ala Asp Leu Ile Ile His Lys Ala Thr Gln Glu His Leu Ile Ser

450 455 460

His Val Leu Pro Met Leu Val Arg Ala Tyr Asp Asp Thr Asp Pro Arg

465 470 475 480

Leu Gln Glu Glu Val Leu Arg Arg Thr Val Pro Leu Ser Arg Gln Leu

485 490 495

Asp Val Lys Leu Leu Lys Gln Ser Val Leu Pro Arg Val His Gly Leu

500 505 510

Ala Leu Lys Thr Thr Val Ala Ala Val Arg Val Asn Ala Leu Arg Cys

515 520 525

Leu Gly Asp Leu Val Pro Ser Leu Asp Lys Glu Gly Ile Leu Glu Ile

530 535 540

Leu Gln Thr Leu Arg Arg Cys Thr Ala Val Asp His Thr Ala Pro Thr

545 550 555 560

Leu Met Cys Thr Leu Gly Val Ala Asn Ala Ile Phe Lys Gln Cys Gly

565 570 575

Val Glu Phe Ala Ala Glu Tyr Val Ile Pro Leu Val Phe Pro Leu Leu

580 585 590

Thr Ala His Gln Leu Asn Val Gln Gln Phe Ala Lys Tyr Ile Leu Phe

595 600 605

Val Lys Asp Ile Thr Ser Lys Ile Glu Glu Lys Arg Gly Val Thr Val

610 615 620

Thr Asp Asn Gly Asn Thr Glu Val Lys Val Ser Pro Ser Leu Ala Asn

625 630 635 640

Gly Ile His Ser Glu Pro Leu Ser Arg Gly Val Gly Gln Thr Glu Gln

645 650 655

Ile Gln Thr Ala Lys Gly Ala Ala Trp Asp Glu Asp Trp Gly Pro Thr

660 665 670

Lys Lys Ala Ser Thr Pro Ser Gln Ser Ser Asp Ser Asn Ala Arg Met

675 680 685

Lys Gln Pro Ser Asp Pro Phe Asp Phe Ser Thr Gln Thr Lys Gln Pro

690 695 700

Ser Ala Leu Pro Phe Asp Phe Ser Thr Gln Gln Pro Lys Pro Ser Ser

705 710 715 720

Ala Ile Pro Gln Val Thr Pro Ala Thr Ile Ser Pro Ala Pro Ser Leu

725 730 735

Pro Ser Leu Gln Ser Leu Ala Pro Ser Ser Gly Pro Gln Thr Ser Gly

740 745 750

Ser Cys Val Pro Val Asp Ile Glu Trp Pro Pro Arg Lys Asn Thr Ser

755 760 765

Ser Asp Phe Asn Ala Pro Leu Ser Val Ser Glu Gln Ser Lys Ser Gly

770 775 780

Gly Leu Ser Ser Asp Gly Leu Ala Asp Ile Asp Pro Phe Ala Asp Trp

785 790 795 800

Pro Pro Lys Ala Ser Ser Gly Ala Ser Ile Leu Ala Val Gly His Leu

805 810 815

Ser Ser Thr Ser Gln Ser Ile Ser Gly Leu Ser Thr Gly Asn Ile Gly

820 825 830

Phe Ser Gly Asn Ser Gly Ser Leu Gly Gln Met Lys Thr Asn Gln Met

835 840 845

Ser Trp Ser Ala Lys Pro Asn Thr Thr Asn Leu Met Ala Val Asn Ser

850 855 860

Thr Gly Asn Tyr Leu Asn Gln Gly Asn Ser Ala Leu Gly Phe Gly Asn

865 870 875 880

Pro Ile Gly Gly Arg Ser Thr Gly Ser Leu Ser Ser Ser Thr Thr Gln

885 890 895

Gly Pro Pro Arg Leu Ala Pro Pro Pro Ser Ala Ser Val Gly Arg Gly

900 905 910

Arg Gly Arg Asn Gln Gly Gln Ser Ala Leu Ser Arg Ala Ser Arg Thr

915 920 925

Pro His Ser Asn Val Ser Ser Glu Gln Pro Pro Ile Leu Asp Leu Leu

930 935 940

<210> 4

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

tgtgtgctcg gctgcctcga caacgt 26

<210> 5

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

aaacacgttg tcgaggcagc cgagca 26

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

gaggacgcct tcctcgacct 20

<210> 7

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

agatcttgtg gactctagag cggc 24

<210> 8

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

tgaccatgat tacgaattcg agctccggtc gtgcccctct ctag 44

<210> 9

<211> 35

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

tcagcgccat ctgcagaagt aacaccaaac aacag 35

<210> 10

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

acttctgcag atggcgctga acatgaagac 30

<210> 11

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

gggaaattcg agctggtcac cctacagtaa atctagaata gg 42

Claims (5)

1.一种水稻类病斑突变体基因SCYL2，其特征在于，所述水稻类病斑突变体基因SCYL2的核苷酸序列是SEQ ID No.1所示的核苷酸序列中通过添加、替换或缺失一个或几个碱基生成的核苷酸序列，其编码的蛋白能够调控水稻类病斑形成。

2.如权利要求1所述的水稻类病斑突变体基因SCYL2，其特征在于，所述水稻类病斑突变体基因SCYL2的编码序列(CDS)是SEQ ID No.2所示的核苷酸序列中通过添加、替换或缺失一个或几个碱基生成的核苷酸序列。

3.如权利要求1所述的水稻类病斑突变体基因SCYL2，其特征在于，所述水稻类病斑突变体基因SCYL2的核苷酸序列是在SEQ ID No.1所示的核苷酸序列中缺失TTATCACCTGGT生成的核苷酸序列。

4.如权利要求2所述的水稻类病斑突变体基因SCYL2，其特征在于，所述水稻类病斑突变体基因SCYL2的编码序列(CDS)是SEQ ID No.2所示的核苷酸序列中缺失TTATCACCTGGT生成的核苷酸序列。

5.一种水稻类病斑突变体基因SCYL2在培育抗病植物品种中的应用，其特征在于：所述水稻类病斑突变体基因SCYL2为权利要求1～4任一所述突变体基因，所述植物为水稻，所述抗病是抗稻瘟病菌和白叶枯病菌。

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