CN113637638A - 一种用于陡脉冲消融电击3d细胞聚集体模型的构建方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供的一种3D细胞聚集体模型的构建方法，包括：取3D微载片放入孔板的孔中，向所述3D微载片中滴入细胞液，在孔板的孔与孔的间隙中加入液体，加入的液体不超过所述间隙的边沿，然后将孔板放在温度为35‑37℃，含有5％CO2的条件下在培养6‑20h；在这过程中3D微载片会固化，避免后续加入液体时3D微载片分散成小颗粒，接种时，直接向微载片里面滴入细胞液，静置2h,等待细胞浸润微载片，微载片不会分散，细胞进入到微载片的孔里，当向孔板加培养基培养细胞时，微载片遇大体积的水分没有分散成颗粒，细胞在微载片的孔隙呈3维立体生长，3D聚集体模型细胞培养的目的达成。

Description

一种用于陡脉冲消融电击3D细胞聚集体模型的构建方法
技术领域
本发明涉及医药领域，具体涉及一种用于陡脉冲消融电击3D细胞聚集体模型的构建方法。
背景技术
微秒脉冲不可逆电穿孔(IRE)消融肿瘤技术是我国科研人员在2004年率先提出，IRE以其非热效应的优点，能够消融热敏组织器官附近的肿瘤组织，打破了热疗法(射频消融、微波消融、冷冻消融等)治疗肿瘤的局限性，在临床实体瘤治疗领域中迅速发展并取得了显著的治疗效果。目前，已经开发设计出了多种多样的不可逆电穿孔装置，比如高频不可逆电穿仪。这些开发的不可逆电穿孔装置进入临床使用前需要进行有效性实验。有效性实验基础研究包括体外细胞实验，现阶段研究者主要用细胞悬液作为研究模型，然而使用细胞悬液作为研究模型得出的实验结果缺乏准确性和可靠性。目前还未有人提出一种可用于研究这些装置有效性的3D细胞聚集体模型，为此，本发明提供了一种3D细胞聚集体模型的构建方法。
发明内容
因此，本发明要解决的技术问题在于提供了用于陡脉冲消融电击3D细胞聚集体模型的构建方法。
为此，本发明提供了如下的技术方案：
一种3D细胞聚集体模型的构建方法，包括：取3D微载片放入干燥的孔板的孔中，向所述3D微载片中滴入细胞液，在孔板的孔与孔的间隙中加入液体，加入的液体不超过所述间隙的边沿，然后将孔板放在温度为35-37℃，含有5％CO2的条件下在培养6-20h。
可选的，所述3D微载片为3D Flo Trix微载片。
可选的，所述培养温度为37℃。
可选的，培养时间为16小时。
可选的，所述孔板为12孔板时，加入的缓冲液、无菌水或培养基的体积为1ml。
所述缓冲液为PBS缓冲液，pH为中性。
还包括向3D微载片接种细胞的步骤，将细胞液滴入3D微载片中，渗透0.5-3小时，然后加入培养基，培养45-52h。
可选的，所述细胞液的体积为20-100微升，细胞密度是(0.5-1.5)*106个/mL。
本发明提供了一种所述的3D细胞聚集体模型的构建方法得到的3D细胞聚集体模型用于陡脉冲消融电击。
本发明技术方案，具有如下优点：
1.本发明提供的一种3D细胞聚集体模型的构建方法，包括：取3D微载片放入孔板的孔中，向所述3D微载片中滴入细胞液，在孔板的孔与孔的间隙中加入液体，加入的液体不超过所述间隙的边沿，然后将孔板放在温度为35-37℃，含有5％CO2的条件下在培养6-20h；由于细胞培养一般是直接将细胞接种到培养皿，细胞贴壁生长在培养皿里面，相当于是2维生长，然而很多研究需要细胞呈3维聚集生长以满足实验需求如不可逆电穿孔装置的有效性实验，因此，本发明提供上述的构建方法，先将3D微载片放在干燥的孔板中，在孔与孔的间隙中加入液体，加入的液体不超过所述间隙的边沿，然后置于培养箱中放置，在这过程中3D微载片会固化，避免后续加入液体时3D微载片分散成小颗粒，接种时，直接向微载片里面滴入细胞液，静置2h,等待细胞浸润微载片，微载片不会分散，细胞进入到微载片的孔里，当向孔板加培养基培养细胞时，微载片遇大体积的水分没有分散成颗粒，细胞在微载片的孔隙呈3维立体生长，3D聚集体模型细胞培养的目的达成。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实施例1中固化和未固化处理的3D Flo Trix微载片遇水情况；
图2是本发明实施例1中(A)RBE胆管癌细胞3D聚集体模型大体观,RBE细胞生长在3D微载片中；(B)RBE胆管癌细胞3D聚集体模型培养48h后孔板中培养基大体观，黑色的是部分3D微载片显微镜图。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
实施例1
本实施例提供了一种用于消融电击3D细胞聚集体模型的构建方法，包括如下步骤：
取3D Flo Trix微载片置于干燥的12孔板中，在12孔板孔间隙中加入PBS缓冲液(pH为中性)，加入的PBS缓冲液不超过所述间隙的边沿，避免PBS缓冲液进入孔中，然后在温度为37℃，含有5％CO2的培养箱中培养16h。
然后将RBE胆管癌细胞(100微升，细胞总数为1×107个)接种在培养后的3D FloTrix微载片上，接种量为50微升，静置2小时，待细胞渗入微载片的孔中，然后向孔中加入常规培养基，培养时间为48h,然后可将细胞聚集体用于陡脉冲消融电击。
结果如图1-2，图1固化和未固化处理的3D Flo Trix微载片遇水情况，未经固化处理的3D Flo Trix微载片遇水分散，经固化处理的3D Flo Trix微载片遇水未分散，从图2中可以看到，(A)RBE胆管癌细胞3D模型大体观,RBE细胞生长在3D微载片中；(B)RBE胆管癌细胞3D聚集体模型培养48h后孔板中培养基大体观，黑色的是部分3D微载片显微镜图，显微镜下观察孔板底部没有发现RBE细胞，表面RBE细胞很好的被包裹在微载片里没有逃逸出来。
以上，本发明的能很好的模拟细胞3D生长条件，细胞接种在3D微载片后，在显微镜下观察12孔板底部没有游离的细胞(如图2)，说明细胞很好的被包裹在3D微载片中而没有逃离出来，用于消融电击3D细胞聚集体模型建立成功。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (9)

1.一种3D细胞聚集体模型的构建方法，其特征在于，在接种细胞前，包括：取3D微载片放入干燥的孔板的孔中，在孔板的孔与孔的间隙中加入液体，加入的液体不超过所述间隙的边沿，然后将孔板放在温度为35-37℃，含有5％CO2的条件下在放置6-20h。
2.根据权利要求1所述的3D细胞聚集体模型的构建方法，其特征在于，所述3D微载片为3D Flo Trix微载片。
3.根据权利要求1所述的3D细胞聚集体模型的构建方法，其特征在于，所述培养温度为37℃。
4.根据权利要求1或2或3所述的3D细胞聚集体模型的构建方法，其特征在于，培养时间为16小时。
5.根据权利要求1或2或3所述的3D细胞聚集体模型的构建方法，其特征在于，所述孔板为12孔板时，加入的缓冲液、无菌水或培养基的体积为1ml。
6.根据权利要求1或2或3所述的3D细胞聚集体模型的构建方法，其特征在于，加入的液体为缓冲液、无菌水或培养基；可选的，所述缓冲液为PBS缓冲液，pH为中性。
7.根据权利要求1或2或3所述的3D细胞聚集体模型的构建方法，其特征在于，还包括向3D微载片接种细胞的步骤，将细胞液滴入3D微载片中，渗透0.5-3小时，然后加入培养基，培养45-52h。
8.根据权利要求7所述的3D细胞聚集体模型的构建方法，其特征在于，所述细胞液的体积为20-100微升，细胞密度是(0.5-1.5)*106个/mL。
9.一种如权利要求1-8所述的3D细胞聚集体模型的构建方法得到的3D细胞聚集体模型用于陡脉冲消融电击。
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