CN113633818A - 一种多肽抗生素抗菌人工敷料的研制 - Google Patents

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胡云睿
肖秋群
周曼珍
张信果
张巧玲
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Abstract

本发明涉及一种多肽抗生素抗菌人工敷料的研制，该敷料由抗菌肽、混合溶液、基质组成，其中，所述的基质由以下重量百分量组成：壳聚糖3‑6％，胶原0.3‑0.9％，透明质酸0.1‑0.3％，甘油3‑6％；组成所述的基质由以下方法制得：将3‑6％壳聚糖加入80‑100mL 2％的醋酸溶液中，使用搅拌器以500r/min的转速下溶胀均匀，测试pH值，使用1mol/L的NaOH调节溶液的pH为4.5‑5。在室温下将0.3‑0.9％胶原蛋白肽溶解于混合溶液中，再将透明质酸0.1‑0.3％添加进入混合溶液，在500r/min的转速下均匀溶胀。其中混合溶液为3‑6％甘油,1‑3％多肽溶液，1％维生素C溶液，11‑13％去离子水。最后制备而成的新型多肽抗生素基抗菌人工敷料为微黄色不透明的凝胶。该凝胶具有较好的涂抹性能，并且直接应用于伤口以达到抗菌促愈合的效果。

Description

一种多肽抗生素抗菌人工敷料的研制
技术领域
本发明涉及一种凝胶敷料的制备方法，尤其涉及一种多肽抗生素抗菌的敷料的制备方法。
背景技术
皮肤是人体与外界环境的天然屏障，可以保护人体内部各组织和器官免受各种物理、化学和生物性的侵袭。一般情况下，皮肤具有很强的再生能力，在受损时可以自愈合。但是，因战争中皮肤创伤，以及日常生活中烧伤、大面积皮肤损伤等情况发生后，皮肤的真皮层受损，愈合速度缓慢，需要人工敷料进行治疗过程中的暂时性创面保护。
壳聚糖是一种天然高分子材料，其具有良好的生物相容性。此外，作为人工敷料，壳聚糖还具有柔软、舒适，与创面的贴合性好的性能；并且壳聚糖基人工敷料透气、吸水，具有抑制疼痛和止血的功能；随着创伤愈合，自身皮肤生长，壳聚糖能够被降解，免除了揭除时病人的痛苦。研究者们还在壳聚糖中添加了胶原、糖胺聚糖等活性成分，增加了材料促表皮- 真皮愈合的效果。但是，在大面积皮肤受损愈合过程中，因为失去了皮肤的保护作用，人体极易被细菌感染，严重的会导致脓毒血症，甚至病人的死亡。因此，研发可以促进受损皮肤愈合并预防细菌感染的人工敷料，成为近年来医疗器械和生物材料领域所关注的热点。
壳聚糖基人工敷料的抗菌性能匮乏，难以达到抑制细菌感染的目的。添加抗生素的抗菌人工敷料可以在一定程度上抑制感染，但是细菌易对抗生素产生耐药性，使抗菌人工敷料失效；类似银等重金属具有优异抗菌性和低致耐药性，但是其具有显著的生物毒性，无法满足临床需求。相比于抗生素和银，多肽抗生素在表现优异抗菌性的同时，还具有低致耐药性和生物毒性，更加适用于受损组织部位。本项目拟结合多肽抗生素，制备具有抗菌和促进皮肤表皮-真皮层修复功能的人工敷料，为解决皮肤受损病人的细菌感染临床难题提供方案。
多肽抗生素是生物体内经诱导产生的一种具有生物活性的小分子多肽，分子量在2000-7000左右，由20-60个氨基酸残基组成。此类抗生素与传统抗生素相比，具有不同的作用靶位点及作用时间，故不会使病原菌产生抗药性，故可作为消灭"超级病菌"的药物。
发明内容
本发明要解决的技术问题是传统敷料下的粘合剂层会对皮肤脆弱的患者造成进一步的表皮伤、局限性包括接触性皮炎的发生和敷料下表面产生恶臭的黄色凝胶，这可能与感染相混淆、在更换敷料期间使患者不适等缺点。所以本发明提供一种多肽抗生素抗菌人工敷料的研制，该敷料结合多肽抗生素，构建可以促进表皮-真皮组织快速愈合并可以抑制细菌感染发生的人工敷料。
本发明解决上述技术问题的方案如下：
一种多肽抗生素抗菌人工敷料的研制，该辅料由混合溶液、基质组成，其中，
1)所述的基质由以下重量百分量的壳聚糖组成：壳聚糖3-6％，将3-6g壳聚糖加入80-100mL 2％的醋酸溶液中，使用搅拌器中以500r/min的转速下溶胀均匀，完全溶解后，测试pH值，使用1mol/L的NaOH调节溶液的pH为4.5-5。
2)所述的混合溶液由甘油、多肽溶液、维生素C溶液、去离子水等组成：在室温下将0.3-0.9％胶原蛋白肽溶解于由3-6％甘油,1-3％多肽溶液，1％维生素C溶液，11-13％去离子水溶液中，再将透明质酸0.1-0.3％添加进入混合溶液，在500r/min的转速下均匀溶胀，得混合溶液。
3)取所述的混合溶液，将制备好的基质在500r/min的条件下，将混合溶液在搅拌的条件下缓慢加入溶液中，搅拌10-20min均匀后，置于超声仪器中除气泡20-40S,即制成新型抗菌促愈合凝胶。
上述敷料中，所述的基质以及混合溶液的最佳配比为壳聚糖5％、胶原蛋白肽0.9％、透明质酸0.2％、甘油5％、抗菌肽溶液3％、醋酸80mL组成.所述敷料中的有效成分以重量百分量记。所述的混合溶液搅拌时间为15min.超声仪器除气泡为30s。
本发明所述的敷料可采用常规的方法制得，本发明人推荐的方法如下：
1)制备所述的基质：将5g壳聚糖加入80mL 2％的醋酸溶液中，使用搅拌器中以500r/min 的转速下溶胀均匀，完全溶解后，测试pH值，使用1mol/L的NaOH调节溶液的pH 为4.5-5。
2)制备所述的混合溶液：在室温下将0.9％胶原蛋白肽溶解于由5％甘油,3％多肽溶液， 1％维生素C溶液，12％去离子水溶液中，再将透明质酸0.2％添加进入混合溶液，在500r/min的转速下均匀溶胀，得混合溶液。
3)制备人工辅料：取所述的混合溶液，将制备好的基质在500r/min的条件下，将混合溶液在搅拌的条件下缓慢加入溶液中，搅拌15min均匀后，置于超声仪器中除气泡 30S,即制成新型抗菌促愈合凝胶。
具体实施方式
实施例1
1.壳聚糖基质的制备：将5g壳聚糖加入80mL 2％的醋酸溶液中，使用搅拌器中以500r/min的转速下溶胀均匀，完全溶解后，测试pH值，使用1mol/L的NaOH调节溶液的pH为4.5-5，记录添加NaOH溶液中的用量，置于暗中保存。记做A溶液。
2.抗菌肽溶液制备：将5mg的抗菌肽溶解于18mL水溶液中，配置成5mg/18mL的水溶液中，在之后的正交实验中，1％的多肽就相应的添加1mL。标记为溶液B。
3.维生素C溶液制备：将去离子水煮沸除气泡，覆盖上保鲜膜，待冷却后用于配置溶液。取维生素C1g，加入煮沸冷却的去离子水，配置成0.1g/mL的维生素C溶液。记做溶液C。
4.混合溶液制备：在室温下将0.3g胶原蛋白肽溶解于5mL甘油,1mLB溶液，1mLC溶液 13mL去离子水中，再将透明质酸0.1g添加进入溶液中，在500r/min的转速下均匀溶胀。标记为溶液D。
5.将制备好的溶液A在500r/min的条件下，将溶液D在搅拌的条件下缓慢加入溶中，搅拌15min均匀后，置于超声仪器中除气泡30,即制成新型抗菌促愈合凝胶。
实施例2
1.壳聚糖基质的制备：将5g壳聚糖加入80mL 2％的醋酸溶液中，使用搅拌器中以500r/min的转速下溶胀均匀，完全溶解后，测试pH值，使用1mol/L的NaOH调节溶液的pH为4.5-5，记录添加NaOH溶液中的用量，置于暗中保存。记做A溶液。
2.抗菌肽溶液制备：将5mg的抗菌肽溶解于18mL水溶液中，配置成5mg/18mL的水溶液中，在之后的正交实验中，1％的多肽就相应的添加1mL。标记为溶液B。
3.维生素C溶液制备：将去离子水煮沸除气泡，覆盖上保鲜膜，待冷却后用于配置溶液。取维生素C1g，加入煮沸冷却的去离子水，配置成0.1g/mL的维生素C溶液。记做溶液C。
4.混合溶液制备：在室温下将0.3g胶原蛋白肽溶解于5mL甘油,2mLB溶液，1mLC溶液 12mL去离子水中，再将透明质酸0.2g添加进入溶液中，在500r/min的转速下均匀溶胀。标记为溶液D。
5.将制备好的溶液A在500r/min的条件下，将溶液D在搅拌的条件下缓慢加入溶液中，搅拌15min均匀后，置于超声仪器中除气泡30,即制成新型抗菌促愈合凝胶。
实施例3
1.壳聚糖基质的制备：将5g壳聚糖加入80mL 2％的醋酸溶液中，使用搅拌器中以500r/min的转速下溶胀均匀，完全溶解后，测试pH值，使用1mol/L的NaOH调节溶液的pH为4.5-5，记录添加NaOH溶液中的用量，置于暗中保存。记做A溶液。
2.抗菌肽溶液制备：将5mg的抗菌肽溶解于18mL水溶液中，配置成5mg/18mL的水溶液中，在之后的正交实验中，1％的多肽就相应的添加1mL。标记为溶液B。
3.维生素C溶液制备：将去离子水煮沸除气泡，覆盖上保鲜膜，待冷却后用于配置溶液。取维生素C1g，加入煮沸冷却的去离子水，配置成0.1g/mL的维生素C溶液。记做溶液C。
4.混合溶液制备：在室温下将0.3g胶原蛋白肽溶解于5mL甘油,3mLB溶液，1mLC溶液 11mL去离子水中，再将透明质酸0.3g添加进入溶液中，在500r/min的转速下均匀溶胀。标记为溶液D。
5.将制备好的溶液A在500r/min的条件下，将溶液D在搅拌的条件下缓慢加入溶液中，搅拌15min均匀后，置于超声仪器中除气泡30,即制成新型抗菌促愈合凝胶。
实施例4
1.壳聚糖基质的制备：将5g壳聚糖加入80mL 2％的醋酸溶液中，使用搅拌器中以500r/min的转速下溶胀均匀，完全溶解后，测试pH值，使用1mol/L的NaOH调节溶液的pH为4.5-5，记录添加NaOH溶液中的用量，置于暗中保存。记做A溶液。
2.抗菌肽溶液制备：将5mg的抗菌肽溶解于18mL水溶液中，配置成5mg/18mL的水溶液中，在之后的正交实验中，1％的多肽就相应的添加1mL。标记为溶液B。
3.维生素C溶液制备：将去离子水煮沸除气泡，覆盖上保鲜膜，待冷却后用于配置溶液。取维生素C1g，加入煮沸冷却的去离子水，配置成0.1g/mL的维生素C溶液。记做溶液C。
4.混合溶液制备：在室温下将0.6g胶原蛋白肽溶解于5mL甘油,1mLB溶液，1mLC溶液 13mL去离子水中，再将透明质酸0.2g添加进入溶液中，在500r/min的转速下均匀溶胀。标记为溶液D。
5.将制备好的溶液A在500r/min的条件下，将溶液D在搅拌的条件下缓慢加入溶液中，搅拌15min均匀后，置于超声仪器中除气泡30,即制成新型抗菌促愈合凝胶。
实施例5
1.壳聚糖基质的制备：将5g壳聚糖加入80mL 2％的醋酸溶液中，使用搅拌器中以500r/min的转速下溶胀均匀，完全溶解后，测试pH值，使用1mol/L的NaOH调节溶液的pH为4.5-5，记录添加NaOH溶液中的用量，置于暗中保存。记做A溶液。
2.抗菌肽溶液制备：将5mg的抗菌肽溶解于18mL水溶液中，配置成5mg/18mL的水溶液中，在之后的正交实验中，1％的多肽就相应的添加1mL。标记为溶液B。
3.维生素C溶液制备：将去离子水煮沸除气泡，覆盖上保鲜膜，待冷却后用于配置溶液。取维生素C1g，加入煮沸冷却的去离子水，配置成0.1g/mL的维生素C溶液。记做溶液C。
4.混合溶液制备：在室温下将0.6g胶原蛋白肽溶解于5mL甘油,2mLB溶液，1mLC溶液 12mL去离子水中，再将透明质酸0.3g添加进入溶液中，在500r/min的转速下均匀溶胀。标记为溶液D。
5.将制备好的溶液A在500r/min的条件下，将溶液D在搅拌的条件下缓慢加入溶液中，搅拌15min均匀后，置于超声仪器中除气泡30,即制成新型抗菌促愈合凝胶。
实施例6
1.壳聚糖基质的制备：将5g壳聚糖加入80mL 2％的醋酸溶液中，使用搅拌器中以500r/min的转速下溶胀均匀，完全溶解后，测试pH值，使用1mol/L的NaOH调节溶液的pH为4.5-5，记录添加NaOH溶液中的用量，置于暗中保存。记做A溶液。
2.抗菌肽溶液制备：将5mg的抗菌肽溶解于18mL水溶液中，配置成5mg/18mL的水溶液中，在之后的正交实验中，1％的多肽就相应的添加1mL。标记为溶液B。
3.维生素C溶液制备：将去离子水煮沸除气泡，覆盖上保鲜膜，待冷却后用于配置溶液。取维生素C1g，加入煮沸冷却的去离子水，配置成0.1g/mL的维生素C溶液。记做溶液C。
4.混合溶液制备：在室温下将0.3g胶原蛋白肽溶解于5mL甘油,3mLB溶液，1mLC溶液 11mL去离子水中，再将透明质酸0.1g添加进入溶液中，在500r/min的转速下均匀溶胀。标记为溶液D。
5.将制备好的溶液A在500r/min的条件下，将溶液D在搅拌的条件下缓慢加入溶液中，搅拌15min均匀后，置于超声仪器中除气泡30,即制成新型抗菌促愈合凝胶。
实施例7
1.壳聚糖基质的制备：将5g壳聚糖加入80mL 2％的醋酸溶液中，使用搅拌器中以500r/min的转速下溶胀均匀，完全溶解后，测试pH值，使用1mol/L的NaOH调节溶液的pH为4.5-5，记录添加NaOH溶液中的用量，置于暗中保存。记做A溶液。
2.抗菌肽溶液制备：将5mg的抗菌肽溶解于18mL水溶液中，配置成5mg/18mL的水溶液中，在之后的正交实验中，1％的多肽就相应的添加1mL。标记为溶液B。
3.维生素C溶液制备：将去离子水煮沸除气泡，覆盖上保鲜膜，待冷却后用于配置溶液。取维生素C1g，加入煮沸冷却的去离子水，配置成0.1g/mL的维生素C溶液。记做溶液C。
4.混合溶液制备：在室温下将0.9g胶原蛋白肽溶解于5mL甘油,1mLB溶液，1mLC溶液 13mL去离子水中，再将透明质酸0.3g添加进入溶液中，在500r/min的转速下均匀溶胀。标记为溶液D。
5.将制备好的溶液A在500r/min的条件下，将溶液D在搅拌的条件下缓慢加入溶液中，搅拌15min均匀后，置于超声仪器中除气泡30,即制成新型抗菌促愈合凝胶。
实施例8
1.壳聚糖基质的制备：将5g壳聚糖加入80mL 2％的醋酸溶液中，使用搅拌器中以500r/min的转速下溶胀均匀，完全溶解后，测试pH值，使用1mol/L的NaOH调节溶液的pH为4.5-5，记录添加NaOH溶液中的用量，置于暗中保存。记做A溶液。
2.抗菌肽溶液制备：将5mg的抗菌肽溶解于18mL水溶液中，配置成5mg/18mL的水溶液中，在之后的正交实验中，1％的多肽就相应的添加1mL。标记为溶液B。
3.维生素C溶液制备：将去离子水煮沸除气泡，覆盖上保鲜膜，待冷却后用于配置溶液。取维生素C1g，加入煮沸冷却的去离子水，配置成0.1g/mL的维生素C溶液。记做溶液C。
4.混合溶液制备：在室温下将0.9g胶原蛋白肽溶解于5mL甘油,2mLB溶液，1mLC溶液 12mL去离子水中，再将透明质酸0.1g添加进入溶液中，在500r/min的转速下均匀溶胀。标记为溶液D。
5.将制备好的溶液A在500r/min的条件下，将溶液D在搅拌的条件下缓慢加入溶液中，搅拌15min均匀后，置于超声仪器中除气泡30,即制成新型抗菌促愈合凝胶。
实施例9
1.壳聚糖基质的制备：将5g壳聚糖加入80mL 2％的醋酸溶液中，使用搅拌器中以500r/min的转速下溶胀均匀，完全溶解后，测试pH值，使用1mol/L的NaOH调节溶液的pH为4.5-5，记录添加NaOH溶液中的用量，置于暗中保存。记做A溶液。
2.抗菌肽溶液制备：将5mg的抗菌肽溶解于18mL水溶液中，配置成5mg/18mL的水溶液中，在之后的正交实验中，1％的多肽就相应的添加1mL。标记为溶液B。
3.维生素C溶液制备：将去离子水煮沸除气泡，覆盖上保鲜膜，待冷却后用于配置溶液。取维生素C1g，加入煮沸冷却的去离子水，配置成0.1g/mL的维生素C溶液。记做溶液C。
4.混合溶液制备：在室温下将0.9g胶原蛋白肽溶解于5mL甘油,3mLB溶液，1mLC溶液 11mL去离子水中，再将透明质酸0.2g添加进入溶液中，在500r/min的转速下均匀溶胀。标记为溶液D。
5.将制备好的溶液A在500r/min的条件下，将溶液D在搅拌的条件下缓慢加入溶液中，搅拌15min均匀后，置于超声仪器中除气泡30,即制成新型抗菌促愈合凝胶。
正交实验相关表征：
1.正交实验设计制备的人工敷料粘度表征
表1粘度表征记录表
Figure RE-GDA0003303758990000071
将上表数据制图后，见说明书附图1可以观察到通过正交实验制备产生的正交样品粘度相差较小且均处于较为合适的粘度范围，患者使用涂抹并且该基质容易使药物分布更为均匀。
2.新型多肽抗生素基抗菌人工敷料酸碱度表征
表2.人工敷料酸碱度
Figure RE-GDA0003303758990000072
将上表2数据制成说明书附图2后可以观察到通过正交实验制备产生的正交样品酸碱度较为稳定，但是其pH值均小于7，在药典中规定经皮给药制剂pH要求为7左右，除特别规定外。本实验制备所采用的机制为壳聚糖基质，只溶于酸性溶液中，故酸碱稳定在pH＝6为较好的酸碱范围。这说明本制剂在保证降低刺激性同时也保证了壳聚糖的溶解度及其稳定性。
3.新型多肽抗生素基抗菌人工敷料抗菌能能力表征
3.1实验操作步骤
实验目的：本专利采用一般接种法培养金黄色葡萄球菌和大肠杆菌等临床常见细菌，检测新型多肽抗生素基抗菌人工敷料对细菌粘附、增殖和生物膜形成的抑制作用。
具体操作：采用低温间歇杀菌法对培养基进行消毒—制备琼脂培养基—用手指轻放于培养基上使细菌接种到培养基—采用K-B法进行抑菌圈实验—标记并封闭培养皿—在温暖避光的环境下培养4-6天后抑菌圈测量记录实验数据，实验结果图见说明书附图3。
表3人工敷料抑菌圈实验
Figure RE-GDA0003303758990000081
3.2实验结果及分析
本课题所制备的人工敷料，其中所加入的抗菌肽溶液百分比为1％/2％/3％,抗菌肽的具体浓度为2.78×10-3mg/mL、5.54×10-3mg/mL、8.31×10-3mg/mL。由实验记录数据以及说明书附图4表明抗菌效果最差的为正交实验样品1，其抑菌圈为14.1mm。抗菌效果最好的为正交实验样品9，其抑菌圈为20.9mm。平均抑菌圈直径为17.91mm,相对偏差为2.51，说明不同样品之间具有较大的抑菌能力差异。同时根据抑菌圈实验表明，本课题所制备的样品中，在加入相同水平的抗菌肽样品中同样也表现出抑菌效果的强弱，表明正交因素对所制备的实验样品的抑菌效果同样具有一定的影响.
动物实验相关表征
1.实验小鼠创口模型的建立
33只SPF级雌雄各半昆明小鼠(体重18–22g)，并以自由饮食和饮用水适应性喂养了一周。饲喂环境受到控制(光照/黑暗周期12小时；湿度40-70％；环境温度21-26℃)。所有动物实验均经南方医科大学大学动物中心批准并在动物中心进行，所有动物都具有相应的合格证。
2.相关准备：
配置脱毛剂：取4g硫化钠，溶解于17mL水和8mL无水乙醇中，即配置成脱毛剂。
麻醉剂配置：称取纯度为99％的水合氯醛0.404g配置成4mL的10％的水合氯醛水溶液。实验操作：(1)脱毛：提前准备好温水，棉花，镊子等实验仪器。使用棉签蘸取少量的脱毛液之后在小鼠后背部上进行刷试，来回重复四次即可，等待20-30min后，用脱脂棉沾水把硫化钠脱毛液擦拭干净，以免硫化钠残留于表皮而对实验产生影响，实验结果见说明书附图5。
(2)麻醉并作横线切口模型
麻醉后造小鼠横线切口模型：先将小鼠称取体重，本实验小鼠10％浓度的水合氯醛以每 30克体重腹腔注射0.1毫升的剂量进行麻醉，小鼠麻醉时间普遍在2-3min时达到麻醉效果，可以开展横切切口模型试验。待小鼠达到麻醉效果后，将小鼠放置手术台，先采用记号笔在小鼠背部左右侧上各标记一处1cm长度的线条，后使用手术刀沿着标记线条进行切割皮肤，切至肌肉层为止，效果图见于说明书附图6。
(3)给药：本次试验共将30只大鼠随机分为10组：空白组(1，生理盐水，0.05mL)，实验组(9，不同配比的壳聚糖凝胶，0.05mL)，阳性对照组(1，75％的酒精，0.05mL)。小鼠左边伤口空白组使用生理盐水，实验组使用不同配比的壳聚糖凝胶，右边伤口使用75％的酒精。每天记录小鼠体重，伤口是否发脓，是否结痂，是否已经愈合，最后统计数据得出相关结论。
表5小鼠实验相关数据汇总表
Figure RE-GDA0003303758990000091
Figure RE-GDA0003303758990000101
根据动物实验记录会汇总表进行统计分析，本课题所设计的新型人工敷料敷料实验组及阳性对照组隔日均未出现发脓现象，而空白对照组则出现发脓感染现象，这表明课题所制备的正交样品具有较好的抑菌效果。
3.实验结果及分析
在动物实验中，我们在每只小鼠的背部制造了两个横线伤口模型，在实验过程中未发现小鼠死亡，说明本实验造模较为成功，不会对小鼠造成过度的伤害，保证了动物实验的正常进行。其中小鼠的背部左边伤口编号1-27号小鼠均采用人工敷料进行处理，编号28-30 小鼠不进行处理。小鼠右边伤口均采用75％消毒酒精进行处理，处理图见于说明书附图7。
将上述实验记录汇总表进行提取，分析，本课题动物实验的小鼠愈合平均天数及相对误差情况如下表格。
表6小鼠愈合平均天数统计表
Figure RE-GDA0003303758990000111
将上表数据制图，见于说明书附图8可以观察到相对于阳性对照组和空白对照组，实验组小鼠横线切口模型平均愈合天数较少，且统计学具有意义(P<0.01)，如图所示，小鼠实验组平均愈合天数为5.3±0.72天，阳性对照组6.59±0.75天，空白组为8.67±0.58 天，显著缩短了愈合时间。
4.新型多肽抗生素基抗菌人工敷料的总体分析
本课题为新型多肽抗生素基抗菌人工敷料的制备和表征，表征了粘度，酸碱度，抑菌性能，动物促愈合试验等。在前期筛选凝胶基质时，通过测试粘度和酸碱度确定5％的壳聚糖凝胶基质为最佳配比，在后期制备过程发现制备后排气泡后粘度凝胶粘度下降到较为合适的范围。在抑菌圈实验中，发现不同样品间均具有较好的抑菌能力，其中样品9，抑菌圈直径达到20.9mm,为正交实验所制备样品中抑菌效果最好的。
在动物实验中，总共设置了11个分组，分为实验组，空白组，阳性对照组。实验组与阳性对照组隔日均未出现发脓现象。说明本课题正交设计制备的样品均具有良好的抑菌性能。在促愈合效能上，排除空白对照组的部分，对实验结果进行t检验可以得到，全部实验组小鼠横线切口模型平均愈合天数为5.3±0.72天，阳性对照组6.59±0.75天，两组数据P值为 P为3.4×10-8<0.01,说明实验组和阳性对照组存在极显著性差异，具有统计学意义；值得一提的是，其中实验组7平均愈合天数为小鼠实验组平均愈合天数为4.33±0.58天，相对应的阳性对照组平均愈合天数为7.33±0.58天，两组数据P值为0.003<0.01,说明实验组和阳性对照组存在极显著性差异，具有统计学意义。说明实验组7具有良好的促愈合效果。
正交设计实验所制备的样品7在粘度，酸碱度，抑菌性能方面都表现出相当良好的性能。是本课题探讨出的的最佳配比，即壳聚糖5％，胶原蛋白肽0.9％，抗菌肽溶液1％，透明质酸 0.3％，2％醋酸80mL,甘油5％,维生素溶液C1％,去离子水加至100mL。成品图见于说明书附图 9。
通过正交实验设计制备了系列样品，为后期表征实验提供材料。开展了进一步酸碱度测试，确保人工敷料酸碱度在经皮给药制剂酸碱度范围，以减小对皮肤的刺激性。通过抑菌圈实验确定了该人工敷料具有良好的抗菌性能，为开展动物实验提供基础。开展动物实验，验证了新型多肽抗生素基抗菌人工敷料的抗菌性能以及促愈合性能。
附图说明：
附图1：通过正交实验制备产生的正交样品粘度相差较小且均处于较为合适的粘度范围，患者使用涂抹并且该基质更容易使药物分布更为均匀。
附图2：本制剂在保证降低刺激性同时也保证了壳聚糖的溶解度及其稳定性。
附图3、4：抗菌效果最差的为正交实验样品1，抗菌效果最好的为正交实验样品9，不同样品之间具有较大的抑菌能力差异。
图5：本课题将小鼠进行脱毛效果良好。
图6：本课题将小鼠进行切口整齐，大小相差较小。
图7:本课题将小鼠进行切口处理后上药处理图，药物涂抹均匀。
图8：相对于阳性对照组和空白对照组，实验组小鼠横线切口模型平均愈合天数较少，且统计学具有意义(P<0.01)，小鼠实验组平均愈合天数显著缩短了愈合时间。
图9：本发明所制备的一种多肽抗生素抗菌人工敷料的研制的成品图。

Claims (9)

1.一种多肽抗生素抗菌人工敷料的研制方法，其特征在于基质的制备及混合溶液的配比，包括如下步骤：
1)所述的基质由以下重量百分量的壳聚糖组成：壳聚糖3～6％，将3-6g壳聚糖加入80-100ml 2％的醋酸溶液中，使用搅拌器中以500转/min的转速下溶胀均匀，完全溶解后，测试pH值，使用1mol/L的NaOH调节溶液的pH为4.5～5。
2)所述的混合溶液由胶原蛋白肽、甘油、多肽溶液、维生素C溶液、去离子水等组成：在室温下将0.3～0.9％胶原蛋白肽溶解于由3～6％甘油,1～3％多肽溶液，1％维生素C溶液，11～13％去离子水溶液中，再将透明质酸0.1～0.3％添加进入混合溶液，在500转/秒的转速下均匀溶胀，得混合溶液。
3)取所述的混合溶液，将制备好的基质在500转/min的条件下，将混合溶液在搅拌的条件下缓慢加入溶液中，搅拌10-20min均匀后，置于超声仪器中除气泡20-40S,即制成新型抗菌促愈合凝胶。
2.根据权利要求1所述的新型多肽抗生素基抗菌人工敷料，其特征在于，所述的基质由以下重量百分量的壳聚糖、胶原、透明质酸、甘油组成：壳聚糖5％，胶原0.9％，透明质酸0.2％，甘油5％组成.所述敷料中的有效成分以重量百分量记：抗菌肽溶液3％。
3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所述的壳聚糖最佳用量为5g。
4.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所述的胶原蛋白肽最佳用量为0.9％。
5.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所述的抗菌肽最佳用量为3％。
6.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所述的透明质酸最佳用量为0.2％。
7.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所述的甘油最佳用量为5％。
8.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所述的醋酸最佳用量为80ml。
9.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：混合溶液搅拌时间为15min.超声仪器除气泡为30s。
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