CN113633734B - 一种治疗慢性心力衰竭的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及中药技术领域，尤其涉及一种治疗慢性心力衰竭的中药组合物及其制备方法和应用。该组合物由诃子、黑种草子、秦艽、附子、益母草、木通、木芙蓉叶、人参、柏子仁、天冬、冬虫夏草、珠子参、草豆蔻、肉苁蓉、锁阳、葛根和甘草组成。本发明依照中药配伍理论，将上述17味药材进行合理配伍，能够作用于20条与心力衰竭相关的信号通路，各组分缺一不可，相互配合产生了增效协同作用，从而发挥治疗慢性心力衰竭的作用，达到了心肾同治的目的，可用于心力衰竭、心肾纤维化、心肾综合征的治疗或辅助治疗。

Description

一种治疗慢性心力衰竭的中药组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及中药技术领域，尤其涉及一种治疗慢性心力衰竭的中药组合物及其制备方法和应用。

背景技术

慢性心力衰竭是由于任何心脏结构或功能异常导致心室充盈或射血能力受损的一组复杂临床综合征，其主要临床表现为乏力伴随呼吸困难，心悸以及水肿。心肾功能受损是心力衰竭的主要病理因素。心肌细胞受到损伤后，会导致心肌肥大与心肌纤维化，从而激活交感神经系统和肾素-血管紧张素-醛固酮系统，导致肾脏功能和水盐平衡失调，从而导致肾纤维化和水钠潴留。因此，协同调节心肾功能是治疗心衰的重要手段。慢性心力衰竭的中医病机为本虚标实，气虚血瘀，长期的气虚血瘀会导致心肾沟通受阻，心阳不能温煦肾水，肾阴不能滋养心火，久之便会导致或气阴两虚，或心阳亏虚，从而引起阳虚水泛。因此，从中医理论的角度，协同调控心肾功能，交泰心阳肾阴是慢性心力衰竭的核心治法。中药治疗慢性心力衰竭具有独特的临床优势，但目前仍未有特效的中药组合物能够有效的治疗慢性心力衰竭。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种治疗慢性心力衰竭的中药组合物及其制备方法和应用。本发明组合物中各组分配伍合理，协同调控心肾纤维化，抑制心肌成纤维细胞迁移，肾小管细胞上皮-间质转化，在心肌细胞和肾小管上皮细胞中调控心力衰竭相关信号通路，达到心肾同治的目的，可用于心力衰竭、心肾纤维化、心肾综合征的治疗或辅助治疗。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供一种治疗慢性心力衰竭的中药组合物，由以下原料组成：

诃子、黑种草子、秦艽、盐附子、益母草、木通、木芙蓉叶、人参、柏子仁、天冬、冬虫夏草、珠子参、草豆蔻、肉苁蓉、锁阳、葛根和炙甘草。

诃子为使君子可植物诃子Terminalia chebula Retz或绒毛诃子Terminaliachebula Retz.var.tomentella Kurt.的干燥成熟果实。能收敛元气，与附子配伍可减毒增效。

黑种草子为毛茛科植物腺毛黑种草Nigella glandulifera Freyn et Sint.的干燥成熟种子。系维吾尔族民族药，能补肾，利尿。

秦艽为龙胆科植物秦艽Gentiana macrophylla Pall.、麻花秦艽Gentianastraminea Maxim.、粗茎秦艽Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.或小秦艽Gentiana dahurica Fisch.的干燥根，能祛风湿，清湿热。

盐附子为毛茛科植物乌头Aconitum carmichaelii Debx.的子根的加工品。能回阳救逆，补火助阳，为治疗心阳不足、肾阳虚衰的重要药物，常用于心力衰竭的治疗。

益母草为唇形科植物益母草Leonurusjaponicus Houtt.的新鲜或干燥地上部分。能活血化瘀，利尿消肿。

木通为木通科植物木通Akebia quinata(Thunb.)Decne.三叶木通Akebiatrifoliata(Thunb.)Koidz.或白木通Akebia trifoliata(Thunb.)Koidz.var.australis(Diels)Rehd.的干燥藤茎，能利尿通，淋清心除烦。

木芙蓉叶为锦葵科植物木芙蓉Hibiscus mutabilis L.的干燥叶。能清热凉血。

人参为五加科植物人参Panaxginseng C.A.Mey.的干燥根和根茎。能大补元气、复脉固脱，为治疗心气虚衰的重要药物，常用于心力衰竭的治疗。

柏子仁为柏科植物侧柏Platycladus orientalis(L.)Franco的干燥成熟种仁。能养心安神，治疗心悸怔忡。

天冬为百合科植物天冬Asparagus cochinchinensis(Lour.)Merr.的干燥块根。能养阴润燥，清肺生津，可针对心衰的气阴两虚证发挥重要作用。

冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌Cordycepssinensis(BerK.)Sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座和幼虫尸体的干燥复合体。能补肾益肺，可用于心衰中阳虚水泛证之治疗。

珠子参为五加科植物珠子参Panaxjaponicus C.A.Mey.var.major(Burk.)C.Y.Wuet K.M.Feng或羽叶三七Panaxjaponicus C.A.Mey.var.bipinnatifidus(Seem.)C.Y.Wuet K.M.Feng的干燥根茎。能补肺，养阴，祛瘀，可用于气阴两虚心衰的治疗。

草豆蔻为姜科植物草豆蔻Alpinia katsumadai Hayata的干燥近成熟种子，能燥湿行气。

肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma或管花肉苁蓉Cistanche tubulosa(Schenk)Wight的干燥带鳞叶的肉质茎。能补肾阳，益精血，用于心衰之肾阳不足，精血亏虚。

锁阳为锁阳科植物锁阳Cynomorium songaricum Rupr.的干燥肉质茎。能补肾阳，益精血，用于心衰之肾阳不足，精血亏虚。

葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi或甘葛藤PuerariathomsoniiBenth.的干燥根。能升阳止泻，通经活络。

炙甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草Glycyrrhizainflata Bat.或光果甘草Glycyrrhizaglabra L.的干燥根和根茎。能补脾和胃，益气复脉，调和诸药。

本发明依照中药配伍理论，将上述17味药材进行合理配伍，使得各组分起到协同调控心肾纤维化，抑制心肌成纤维细胞迁移和肾小管细胞上皮-间质转化，在心肌细胞和肾小管上皮细胞中调控心力衰竭相关信号通路的功效，达到了心肾同治的目的，因此，本发明组合物可用于心力衰竭、心肾纤维化、心肾综合征的治疗或辅助治疗。

本发明提供的中药组合物中，各药味可替换为相同或相似品类的炮制品。其中，所述附子、人参、甘草和葛根为其生药或炮制品。如附子具体可为生附子、盐附子、黑顺片、白附片，人参可以是人参原药也可为红参，葛根可为葛根原药也可为粉葛，甘草为生甘草或炙甘草替换。本发明对炮制方法没有具体限定，本领域常用的方法即可。

本发明提供的中药组合物，以重量份计，由如下原料制成：

诃子3-10份、黑种草子2-6份、秦艽3-10份、附子3-15份、益母草3-30份、木通3-6份、木芙蓉叶3-30份、人参3-9份、柏子仁3-20份、天冬3-30份、冬虫夏草3-9份、珠子参3-9份、草豆蔻3-6份、肉苁蓉5-12份、锁阳5-12份、葛根5-15份和炙甘草2-10份。

一些具体实施例中，该中药组合物由如下重量份的组分组成：

诃子5份、黑种草子5份、秦艽5份、盐附子5份、益母草5份、木通5份、木芙蓉叶5份、人参5份、柏子仁5份、天冬5份、冬虫夏草5份、珠子参5份、草豆蔻5份、肉苁蓉5份、锁阳5份、粉葛5份和炙甘草5份。

一些具体实施例中，该中药组合物由如下重量份的组分组成：

诃子3份、黑种草子6份、秦艽3份、盐附子15份、益母草3份、木通6份、木芙蓉叶3份、人参9份、柏子仁3份、天冬30份、冬虫夏草3份、珠子参9份、草豆蔻3份、肉苁蓉12份、锁阳5份、粉葛15份和炙甘草2份。

一些具体实施例中，该中药组合物由如下重量份的组分组成：

诃子10份、黑种草子2份、秦艽10份、盐附子3份、益母草30份、木通3份、木芙蓉叶30份、人参3份、柏子仁20份、天冬3份、冬虫夏草9份、珠子参3份、草豆蔻6份、肉苁蓉5份、锁阳12份、粉葛5份和炙甘草10份。

本发明还提供了所述的中药组合物的制备方法，包括：取诃子、黑种草子、秦艽、盐附子、益母草、木通、木芙蓉叶、人参、柏子仁、天冬、冬虫夏草、珠子参、草豆蔻、肉苁蓉、锁阳、粉葛和炙甘草以乙醇水溶液进行回流提取，提取液浓缩、干燥，得到所述中药组合物。

一些实施方案中，回流提取为索氏回流提取，所述乙醇水溶液的体积分数为90％。

本发明还提供了所述中药组合物在制备预防和/或治疗慢性心力衰竭相关疾病的药物中的应用。

所述心力衰竭相关疾病包括心肌纤维化、肾纤维化和/或心肾综合征。

所述治疗包括调控心肾纤维化、抑制心肌成纤维细胞迁移、抑制肾小管细胞上皮-间质转化、抑制细胞纤维化特征基因的表达和/或调控心肌细胞和肾小管上皮细胞中心力衰竭相关信号通路。

所述细胞包括人心肌成纤维细胞和人肾小管上皮细胞。

所述细胞纤维化特征基因为纤维化基因Ⅰ型胶原α1(COL1A1)。

所述心力衰竭相关信号通路为醛固酮合成与分泌、醛固酮调节钠重吸收、集合管酸分泌、缝隙连接、糖酵解与糖异生、HIF-1信号通路、胰岛素抵抗、Nod样受体信号通路、病毒性心肌炎、心肌收缩、脂肪细胞因子信号通路、ECM受体相互作用、流体剪应力与动脉粥样硬化、细胞坏死、PI3K-Akt信号通路、Ras信号通路、肾素血管紧张素系统、转化生长因子β信号通路、造血细胞谱系、钙信号通路中的至少一种。

本发明中药组合物由诃子、黑种草子、秦艽、盐附子、益母草、木通、木芙蓉叶、人参、柏子仁、天冬、冬虫夏草、珠子参、草豆蔻、肉苁蓉、锁阳、粉葛和炙甘草组成，本发明将上述17味药材按照特定比例进行合理配伍，使得各组分之间起到协同调控心肾纤维化，抑制心肌成纤维细胞迁移，肾小管细胞上皮-间质转化，调控心肌细胞和肾小管上皮细胞心力衰竭相关信号通路的作用，达到了心肾同治的目的。试验表明，本发明中药组合物能够显著抑制TGFβ诱导的人心肌成纤维细胞HCF的迁移和纤维化基因COL1A1的表达；同时能显著抑制TGFβ诱导的人肾小管上皮细胞HK2的上皮-间质转化和纤维化基因COL1A1的表达。组合物中任意一种单一中药都能够在心肌细胞和肾小管上皮细胞中作用于调节心力衰竭相关信号通路中的至少一条。以上述17种药材组成的组合物，能够作用于20条与心力衰竭相关的信号通路，各组分缺一不可，相互配合产生了增效协同作用。可用于心力衰竭、心肾纤维化、心肾综合征的治疗或辅助治疗。

附图说明

图1示中药组合物抑制TGFβ诱导的心成纤维细胞迁移；

图2示实施例1-3对TGFβ诱导的人心肌成纤维细胞HCF纤维化基因Ⅰ型胶原α1(COL1A1)表达的调控；

图3示中药组合物对TGFβ诱导的HK2的上皮-间质转化的影响；

图4示中药组合物对TGFβ诱导的人肾小管上皮细胞HK2的纤维化基因Ⅰ型胶原α1(COL1A1)表达的调控；

图5示中药组合物中17味中药在心肌细胞和肾小管上皮细胞中对心力衰竭相关的信号通路的调控。

具体实施方式

本发明提供了一种治疗慢性心力衰竭的中药组合物及其制备方法和应用。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1

组成：诃子5g、黑种草子5g、秦艽5g、盐附子5g、益母草5g、木通5g、木芙蓉叶5g、人参5g、柏子仁5g、天冬5g、冬虫夏草5g、珠子参5g、草豆蔻5g、肉苁蓉5g、锁阳5g、粉葛5g、炙甘草5g。

制备方法：将配方粉碎称80-100目粉末，按配比称量后混合，加15倍体积的90％乙醇，标准索氏回流提取3h，提取液浓缩20min至体积为2mL，利用冻干机减压冻干24h制成提取物冻干粉，称取一定质量冻干粉，溶于DMSO中制成提取物母液，-20℃保存。

实施例2

组成：诃子3g、黑种草子6g、秦艽3g、盐附子15g、益母草3g、木通6g、木芙蓉叶3g、人参9g、柏子仁3g、天冬30g、冬虫夏草3g、珠子参9g、草豆蔻3g、肉苁蓉12g、锁阳5g、粉葛15g和炙甘草2g。

制备方法同实施例1。

实施例3

组成：诃子10g、黑种草子2g、秦艽10g、盐附子3g、益母草30g、木通3g、木芙蓉叶30g、人参3g、柏子仁20g、天冬3g、冬虫夏草9g、珠子参3g、草豆蔻6g、肉苁蓉5g、锁阳12g、粉葛5g和炙甘草10g。

制备方法同实施例1。

实施例4 Transwell实验分析组合物对TGFβ诱导的人心肌成纤维细胞迁移的调控。

具体实验过程为：

1、将实施例1制备的提取物母液稀释为终浓度为100μg/mL的提取物；

2、HCF细胞以10万/孔铺于12孔板中，过夜后，加入终浓度为100μg/mL的提取物，同时设置溶剂对照组，共处理细胞24h。

3、将细胞以3万/孔转移至Transwell小室中，下室加入10ng/mLTGFβ诱导细胞迁移。

3、24h后，PBS清洗细胞，多聚甲醛固定细胞，用结晶紫染色，在光学显微镜下，拍摄细胞迁移情况，结果见图1。

结果显示，中药组合物具有抑制TGFβ诱导的人心肌成纤维细胞迁移的表型，从而起到抗心肌纤维化的作用。

实施例5 qPCR检测对TGFβ诱导的人心肌成纤维细胞的COL1A1基因的表达影响

具体实验过程为：

1、将实施例1、实施例2、实施例3制备的提取物母液稀释为终浓度为200μg/mL的提取物；

2、HCF细胞以10万/孔铺于12孔板中，过夜后加入10ng/mLTGFβ处理细胞48h。

3、加入终浓度为50μg/mL的提取物，同时设置溶剂对照组，共处理细胞48h；

4、PBS清洗细胞两次，利用试剂盒提取RNA并反转为cDNA。

5、qPCR反应，程序：95℃，3min；(95℃，3s；60℃，30s)40个循环。

其中，引物序列为：

表1

6、数据处理：以空白对照组的基因表达量为1，药物处理组基因表达量大于1为基因表达上调，小于1为下调，结果见图2。

结果显示，实施例1、实施例2、实施例3制备的提取物能够抑制TGFβ诱导的人心肌成纤维细胞HCF的纤维化基因Ⅰ型胶原α1(COL1A1)表达，从而发挥抗心肌纤维的作用。

实施例6利用显微镜明场成像与细胞形态学分析

具体实验过程为：

1、将实施例1制备的提取物母液稀释为终浓度为100μg/mL的提取物；

2.加入终浓度为100μg/mL的中药组合物提取物，同时设置溶剂对照组，共处理细胞48h；

3.PBS清洗细胞两次，在倒置荧光显微镜下，白光明场拍摄细胞形态。结果见图3。

结果显示，中药组合物具有抑制TGFβ诱导的人肾小管上皮细胞HK2的上皮-间质转化的表型，从而起到抗肾纤维化的作用。

实施例7利用qPCR检测中药组合物对COL1A1基因的表达影响

具体实验过程为：

1、将实施例1制备的提取物母液稀释为终浓度为100μg/mL的提取物；

2、HK2细胞以8万/孔铺于12孔板中，过夜后，血清饥饿24h，随后加入10ng/mLTGFβ处理细胞48h。

3、加入终浓度为100μg/mL的中药组合物提取物，同时设置溶剂对照组，共处理细胞48h；

4、PBS清洗细胞两次，利用试剂盒提取RNA并反转为cDNA。

5、qPCR反应，程序：95℃，3min；(95℃，3s；60℃，30s)40个循环。其中，引物序列为：

表2

6、数据处理：以空白对照组的基因表达量为1，药物处理组基因表达量大于1为基因表达上调，小于1为下调。结果见图4。

由图4结果可知，中药组合物能够抑制TGFβ诱导的人肾小管上皮细胞HK2的纤维化基因Ⅰ型胶原α1(COL1A1)表达，从而发挥抗肾纤维的作用。

实施例8利用高通量靶向转录组筛选技术检测中药组合物在心肌细胞和肾小管上皮细胞中对心力衰竭相关信号通路的影响

具体实验过程为：

1、分别称取中药诃子、黑种草子、秦艽、盐附子、益母草、木通、木芙蓉叶、人参、柏子仁、天冬、冬虫夏草、珠子参、草豆蔻、肉苁蓉、锁阳、葛根和炙甘草。

2、制备方法：上述药物粉碎后，分别称取10g，各药物分别用150mL的90％乙醇，标准索氏回流提取3h，提取液浓缩20min至体积为2mL，利用冻干机减压冻干24h，分别制成上述17种各种中药提取物的冻干粉。

3、称取一定质量冻干粉，溶于DMSO中制成提取物母液，母液浓度是50mg/mL，-20℃保存。

4、利用上述17种提取物以100μg/mL浓度处理在心肌细胞iPS-CM和肾小管上皮细胞HK2中24小时。

5、两种细胞裂解，加入特异性探针结合mRNA，并利用DNA连接酶将结合成功的一对探针连接。

6、将连接成功的探针洗脱，利用PCR技术进行扩增和建库测序。

7、数据处理：以溶剂对照DMSO处理组为对照组，药物处理组与对照组比较，计算相关通路基因及背景基因的变化倍数。

8、利用基因集富集分析技术，进行心力衰竭相关信号通路富集分析，FDR<0.25，认为通路被显著调控。

由图5结果可知，其展示了17种中药在在心肌细胞和肾小管上皮细胞中对20条心力衰竭相关通路的调控情况：包括通路醛固酮合成与分泌、醛固酮调节钠重吸收、集合管酸分泌、缝隙连接、糖酵解与糖异生、HIF-1信号通路、胰岛素抵抗、Nod样受体信号通路、病毒性心肌炎、心肌收缩、脂肪细胞因子信号通路、ECM受体相互作用、流体剪应力与动脉粥样硬化、细胞坏死、PI3K-Akt信号通路、Ras信号通路、肾素血管紧张素系统、转化生长因子β信号通路、造血细胞谱系、钙信号通路。红色表示该通路显著上调，蓝色表示该通路显著下调，白色表示无影响。

结果显示，中药组合物中，诃子、黑种草子、秦艽、盐附子、益母草、木通、木芙蓉叶、人参、柏子仁、天冬、冬虫夏草、珠子参、草豆蔻、肉苁蓉、锁阳、葛根和炙甘草均可调控心力衰竭相关信号通路。其中，在心肌细胞中，盐附子能显著调控醛固酮合成与分泌，炙甘草能显著调控醛固酮调节钠重吸收，柏子仁能显著调控集合管酸分泌，肉苁蓉能显著调控缝隙连接，黑种草子能显著调控糖酵解与糖异生，诃子能显著调控HIF-1信号通路，益母草能显著调控胰岛素抵抗，人参能显著调控Nod样受体信号通路，秦艽能显著调控病毒性心肌炎，诃子、黑种草子、秦艽、盐附子、益母草、木通、木芙蓉叶、人参、冬虫夏草、草豆蔻、肉苁蓉和锁阳能显著调控心肌收缩。在肾小管上皮细胞中，草豆蔻能显著调控脂肪细胞因子信号通路，葛根能显著调控ECM受体相互作用，珠子参能显著调控流体剪应力与动脉粥样硬化，锁阳能显著调控细胞坏死，木芙蓉叶能显著调控PI3K-Akt信号通路，冬虫夏草能显著调控Ras信号通路，天冬能显著调控肾素血管紧张素系统、木通能显著调控转化生长因子β信号通路，诃子、盐附子、益母草、木通、木芙蓉叶、天冬、冬虫夏草、珠子参、草豆蔻、锁阳、葛根和炙甘草能显著调控造血细胞谱系，盐附子、益母草、木通、木芙蓉叶、人参、冬虫夏草、珠子参、草豆蔻、葛根能显著调控钙信号通路。组合物中任意一种单一中药都能够作用于调节心力衰竭相关信号通路中的至少一条。以上述17种药材组成的组合物，能够作用于20条与心力衰竭相关的信号通路，各组分缺一不可，相互配合产生了增效协同作用。结果表明此中药组合物可显著调节20条心力衰竭相关的通路，从而发挥治疗慢性心力衰竭的作用。

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种治疗慢性心力衰竭的中药组合物，其特征在于，由以下原料组成：

诃子、黑种草子、秦艽、附子、益母草、木通、木芙蓉叶、人参、柏子仁、天冬、冬虫夏草、珠子参、草豆蔻、肉苁蓉、锁阳、葛根和甘草；

各原料的重量份数为：

诃子3-10份、黑种草子2-6份、秦艽3-10份、盐附子3-15份、益母草3-30份、木通3-6份、木芙蓉叶3-30份、人参3-9份、柏子仁3-20份、天冬3-30份、冬虫夏草3-9份、珠子参3-9份、草豆蔻3-6份、肉苁蓉5-12份、锁阳5-12份、粉葛5-15份和炙甘草2-10份。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，各原料的重量份数为：

诃子5份、黑种草子5份、秦艽5份、盐附子5份、益母草5份、木通5份、木芙蓉叶5份、人参5份、柏子仁5份、天冬5份、冬虫夏草5份、珠子参5份、草豆蔻5份、肉苁蓉5份、锁阳5份、粉葛5份和甘草5份。

3.权利要求1～2任一项所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，包括：取诃子、黑种草子、秦艽、盐附子、益母草、木通、木芙蓉叶、人参、柏子仁、天冬、冬虫夏草、珠子参、草豆蔻、肉苁蓉、锁阳、粉葛和炙甘草以90vol％乙醇水溶液进行索氏回流提取，提取液浓缩、干燥，得到所述中药组合物。

4.权利要求1～2任一项所述的中药组合物或权利要求3所述的制备方法制得的中药组合物在制备预防和/或治疗慢性心力衰竭相关疾病的药物中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述心力衰竭相关疾病包括心肌纤维化、肾纤维化和/或心肾综合征。

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