CN113624819A - 一种基于核酸外切酶辅助放大光电化学适配体传感器 - Google Patents

一种基于核酸外切酶辅助放大光电化学适配体传感器 Download PDF

Info

Publication number
CN113624819A
CN113624819A CN202110911160.1A CN202110911160A CN113624819A CN 113624819 A CN113624819 A CN 113624819A CN 202110911160 A CN202110911160 A CN 202110911160A CN 113624819 A CN113624819 A CN 113624819A
Authority
CN
China
Prior art keywords
electrode
fto
solution
photoelectrochemical
aptamer sensor
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202110911160.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113624819B (zh
Inventor
郝洪顺
朱良良
赵一睿
李畅
丁超
甘寒薇
侯红漫
张公亮
毕景然
闫爽
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dalian Polytechnic University
Original Assignee
Dalian Polytechnic University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dalian Polytechnic University filed Critical Dalian Polytechnic University
Priority to CN202110911160.1A priority Critical patent/CN113624819B/zh
Publication of CN113624819A publication Critical patent/CN113624819A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113624819B publication Critical patent/CN113624819B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/28—Electrolytic cell components
    • G01N27/30—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells
    • G01N27/305—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells optically transparent or photoresponsive electrodes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/28—Electrolytic cell components
    • G01N27/30—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells
    • G01N27/327—Biochemical electrodes, e.g. electrical or mechanical details for in vitro measurements
    • G01N27/3275—Sensing specific biomolecules, e.g. nucleic acid strands, based on an electrode surface reaction
    • G01N27/3278—Sensing specific biomolecules, e.g. nucleic acid strands, based on an electrode surface reaction involving nanosized elements, e.g. nanogaps or nanoparticles

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Electrochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开的一种基于核酸外切酶辅助放大光电化学适配体传感器的制备方法及应用，水浴沉积的方法在与预处理过的FTO上沉积WO3，煅烧后冷却，将WO3/FTO电极浸入HAuCl4溶液，煅烧后得Au/WO3/FTO电极。将活化的互补cDNA滴在Au/WO3/FTO电极上，孵化过夜。用Tris‑HCl缓冲液冲洗除去未连接的cDNA，然后用MCH封闭。Tris‑HCl冲洗后将CdTe QDs‑Ap偶联物滴在电极上孵育。用Tris‑HCl溶液冲洗后得工作电极。将工作电极插入光电化学池中，再将饱和甘汞电极和铂对电极插入，组成三电极体系，外接电化学工作站，辅以模拟日光氙灯光源系统，组装成光电化学适配体传感器。滴加含Exo‑I的LM溶液，孵育后用Tris‑HCl溶液冲洗后即可进行检测。该传感器具有光电流响应能力强，检测灵敏度高，检测时间短，成本低廉，便携性的优势。

Description

一种基于核酸外切酶辅助放大光电化学适配体传感器
技术领域
本发明属于电化学检测领域，指一种光电化学适配体传感器及其制备方法，并用于食源性致病菌的快速检测。
背景技术
单增李斯特菌(Listeria monocytogenes，LM)是李斯特菌属的8个菌种中对人类致病能力最强的菌种。LM是一种革兰氏阳性小杆菌，其引起的食源性李斯特菌病相对少见但十分严重，是致死率非常高的食源性致病菌。
LM在0～45℃都能生存，生命力非常顽强，存在于牛奶、奶制品、鸡蛋、家禽和肉类中。在冰箱的冷藏温度4～6℃下仍可以大量生长繁殖，这意味着食物在冰箱内冷藏也无法将LM置于死地，也是该菌不同于其它食源性致病菌的重要特征。
目前研究最多的LM快速检测技术主要是PCR技术、实时荧光定量PCR技术、环介导等温扩增技术、酶联免疫吸附技术和免疫层析试纸条。PCR技术和实时荧光定量PCR技术操作过程较为繁琐，需要具有专业技术的操作人员，所需设备和试剂价格昂贵。LAMP法灵敏度高、特异性强、快速高效，但检测过程很容易被污染，造成假阳性。酶联免疫吸附技术在检测效率、特异性上同样具有优势，但由于LM的抗体制备时间较长，成本也比较高，具有一定的局限性。前由于检测环境的多样性和检测标准的不一致性，导致各类传感器的检测灵敏度和特异性产生了较大波动，并且没有合适的检测值确定方法和标准。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种快速简便、灵敏度较高的光电化学适配体传感器，用于LM的检测。本发明整合了纳米材料制备、量子点敏化、适配体分子识别、核酸外切酶I辅助循环等技术，构建光电化学适配体传感器，建立了一种快速简便、准确灵敏的LM检测方法。
本发明完整的技术方案包括：
一种基于核酸外切酶辅助放大光电化学适配体传感器及其检测单增李斯特菌的方法，其步骤如下：
步骤1、制备WO3/FTO电极
将FTO电极先后用丙酮、氢氧化钠、去离子水清洗，烘干备用。将0.4g Na2WO4·2H2O和0.17g(NH4)2C2O4·H2O溶解于33mL去离子水中，搅拌10min后，加入9mL HCl溶液(37％)。再搅拌10min加入8mL H2O2(30％)，继续搅拌20min，加入30mL无水乙醇并搅拌30min。将预处理的FTO导电玻璃导电面朝下，倾斜45°靠近烧杯杯壁，置于上述溶液中，放入水浴锅中一定温度下保持200min。降至室温后，用去离子水冲洗干净，然后置于60℃干燥箱中干燥6h。最后用马弗炉一定温度下煅烧2h，冷却至室温后用去离子水冲洗并干燥，得到WO3/FTO电极。
步骤2、CdTe QDs的制备
0.2mmol的CdCl2·2.5H2O溶解于50mL去离子水中，然后加入18μL巯基乙酸并搅拌10min，然后用2M NaOH调节pH。将0.04mmol的K2TeO3溶解于50mL去离子水中，充分搅拌后加入上述溶液中，并搅拌20min。然后加入80mg NaBH4充分反应5min。然后将烧瓶连接冷凝器在100℃条件下冷凝一定时间。冷却至室温后离心洗涤，最后加入等量去离子水置于4℃冰箱中保存。
步骤3、CdTe QDs-Ap偶联物的制备
400μL CdTe QDs用40μL含有40mM EDC和10mM NHS的溶液在室温下活化1h，然后加入300μL一定浓度的LM适配体(Ap)溶液中，持续搅拌过夜。所得溶液在4℃离心除去过量Ap，即得到CdTe QDs-Ap偶联物。
步骤4、构建光电化学适配体传感器工作电极
首先将WO3/FTO电极浸入0.01M HAuCl4(pH＝4.5)溶液中50min，于300℃下煅烧2h形成金纳米颗粒，得Au/WO3/FTO电极。
将2μM LM适配体的互补DNA(cDNA)用三(2-羧乙基)膦(TCEP)(0.6μL，10mM)活化1h，滴在Au/WO3/FTO电极上。在4℃下孵化过夜，并用Tris-HCl(pH＝7.4，10mM)缓冲液冲洗，然后用30μL 6-羟基-1-己硫醇(MCH)封闭1h。Tris-HCl冲洗后，将30μL CdTe QDs-Ap偶联物滴在电极上，并在37℃下孵育1h使Ap与cDNA杂交。用Tris-HCl溶液冲洗后即得工作电极。
步骤5、构建检测单核增生李斯特菌的光电化学适配体传感器
将步骤4制备的工作电极插入电解槽中，再将饱和甘汞电极和铂对电极插入，组成三电极体系，外接电化学工作站，辅以氙灯光源系统模拟太阳光，即组装成了光电化学适配体传感器，用于单核增生李斯特菌的光电化学检测。
步骤1中，水浴锅温度为70-90℃，马弗炉煅烧温度为300-800℃。
步骤2中，溶液pH值为10-11.5，冷凝时间为1-10h。
步骤3中，LM适配体浓度为1-5μM。
本发明所构建的检测LM的光电化学适配体传感器是基于CdTe量子点敏化与Exo-I的辅助循环作用来放大信号，其优点以及特色如下：
(1)Au/WO3复合结构为工作电极的基底材料，能吸收模拟太阳光产生光电流，Au纳米粒子可以靠Au-S键，将适配体互补链修饰在电极上，还可以增大光电流强度。
(2)利用CdTe QDs作为敏化剂敏化Au/WO3，实现信号放大，再利用Exo-I辅助循环作用实现进一步的信号放大。未孵化时，量子点产生敏化作用，光电流强度响应增强。而当适配体传感器在LM和Exo-I中孵化后，量子点远离电极表面，敏化作用大大减弱，光电流强度也显著降低。
(3)通过LM菌体和其适配体的特异性结合，大大提高了实验的准确性以及特异性。提出的检测标准方法能够迅速灵敏且低成本确定LM菌体的浓度含量，相对现有技术检测快、具有良好的线性响应特征以及良好的特异性。
(4)LM检测时间短，成本低廉，潜在的便携性。
(5)生物传感器作为新型的检测手段，与传统的检测手段相比，其背景信号与检测信号分离，具有良好的灵敏度、简便性和快速性，可实现现场快速检测。光电活性材料和生物识别探针是构建光电化学传感器的基本要素。与抗体等检测元件相比，适配体具有亲和性好、成本低、特异性强等特点。
附图说明
图1为本发明光电化学适配体传感器工作电极的构建过程。
图2为样品WO3/FTO的XRD图。
图3为样品CdTe QDs的XRD图。
图4为不同修饰电极的光电流图。(a:WO3/FTO,b:Au/WO3/FTO,c:MCH/cDNA/Au/WO3/FTO,d:QDS-Ap/MCH/cDNA/Au/WO3/FTO,e:LM-ExoⅠ/QDS-Ap/MCH/cDNA/Au/WO3/FTO)
图5为光电化学适配体传感器的检测响应曲线。
图6为光电化学适配体传感器的特异性实验结果。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明做进一步说明。如图1所示，本发明光电化学适配体传感器工作电极的构建过程如下：
步骤(1)制备WO3/FTO电极
将FTO电极先后用丙酮、氢氧化钠、去离子水清洗，烘干备用。将0.4g Na2WO4·2H2O和0.17g(NH4)2C2O4·H2O溶解于33mL去离子水中，搅拌10min后，加入9mL HCl溶液(37％)。再搅拌10min加入8mL H2O2(30％)，继续搅拌20min，加入30mL无水乙醇并搅拌30min。将预处理的FTO导电玻璃导电面朝下，倾斜45°靠近烧杯杯壁，置于上述溶液中，放入水浴锅中85℃保持200min。降至室温后，用去离子水冲洗干净，然后置于60℃干燥箱中干燥6h。最后用马弗炉500℃煅烧2h，冷却至室温后用去离子水冲洗并干燥，得到WO3/FTO电极。
步骤(2)CdTe QDs的制备
0.2mmol的CdCl2·2.5H2O溶解于50mL去离子水中，然后加入18μL巯基乙酸并搅拌10min，然后用2M NaOH调节pH至10.5。将0.04mmol的K2TeO3溶解于50mL去离子水中，充分搅拌后加入上述溶液中，并搅拌20min。然后加入80mg NaBH4充分反应5min。然后将烧瓶连接冷凝器在100℃条件下冷凝5h。冷却至室温后离心洗涤，最后加入等量去离子水置于4℃冰箱中保存。
步骤(3)CdTe QDs-Ap偶联物的制备
400μL CdTe QDs用40μL含有40mM EDC和10mM NHS的溶液在室温下活化1h，然后加入300μL 2μM的LM适配体(Ap)溶液中，持续搅拌过夜。所得溶液在4℃离心除去过量Ap，即得到CdTe QDs-Ap偶联物。
步骤(4)构建光电化学适配体传感器工作电极
首先将WO3/FTO电极浸入0.01M HAuCl4(pH＝4.5)溶液中50min，于300℃下煅烧2h形成金纳米颗粒，得Au/WO3/FTO电极。
将2μM LM适配体的互补DNA(cDNA)用三(2-羧乙基)膦(TCEP)(0.6μL，10mM)活化1h，滴在Au/WO3/FTO电极上。在4℃下孵化过夜，并用Tris-HCl(pH＝7.4，10mM)缓冲液冲洗，然后用30μL 6-羟基-1-己硫醇(MCH)封闭1h。Tris-HCl冲洗后，将30μL CdTe QDs-Ap偶联物滴在电极上，并在37℃下孵育1h使Ap与cDNA杂交。用Tris-HCl溶液冲洗后即得工作电极。
步骤(5)构建检测单核增生李斯特菌的光电化学生物传感器
将步骤4制备的工作电极插入电解槽中，再将饱和甘汞电极和铂对电极插入，组成三电极体系，外接电化学工作站，辅以氙灯光源系统模拟太阳光，即组装成了光电化学适配体传感器，用于单核增生李斯特菌的光电化学检测。
本发明同时公开了一种利用所制备的光电化学生物传感器进行单核增生李斯特菌浓度含量检测的方法，在检测过程中，通过对于各种不同检测条件下的检测灵敏度和特异性结果进行大数据采集和分析，本发明人发现，检测时的菌液浓度、检测液pH值以及当时的光照条件均对检测灵敏度有不同程度的影响，通过对各个因素进行分析计算后，为了保证检测灵敏性特异性和检测成本的平衡，本发明提出如下的单核增生李斯特菌含量确定方法：
△I＝9.76logC-4.44
式中，△I为检测时修饰致病菌前后的电流变化量，单位为毫安，C为沙门氏菌浓度，单位为CFU/mL。
此外，为了得到更好的检测结果，本发明还限定检测是在室温下用含有0.1M抗坏血酸(AA)的PBS缓冲溶液(pH＝7.4，0.1M)进行。测试过程中由模拟日光氙灯系统提供光源，光源每20s开关一次。外加电压为0.0V。
光电化学灵敏性检测结果验证：
基于以上检测单增李斯特菌的光电化学适配体传感器进行光电化学灵敏性检测
将上述构建的光电化学适配体传感器用于单增李斯特菌的灵敏性检测，步骤如下：
(1)配制不同浓度梯度的单增李斯特菌菌液；浓度分别为10CFU/mL、100CFU/mL、103CFU/mL、104CFU/mL、105CFU/mL、106CFU/mL、107CFU/mL。
(2)取步骤(1)所配制的单增李斯特菌菌液滴加至工作电极表面；
(3)光电化学检测是在室温下用含有0.1M抗坏血酸(AA)的PBS缓冲溶液(pH＝7.4，0.1M)进行。测试过程中由模拟日光氙灯系统提供光源，光源每20s开关一次。外加电压为0.0V。
根究I-t图像，修饰致病菌前后的电流变化量ΔI为纵坐标，以致病菌浓度的对数为横坐标绘制电流-浓度标准曲线。如图5所示，当采用△I＝9.76logC-4.44的方法对单增李斯特菌含量浓度进行确定时，光电流的变化响应与沙门氏菌浓度的对数存在良好的线性依赖关系，尤其是当沙门氏菌浓度为10-107CFU/mL范围之间时，检测限(LOD，检测最小灵敏度)为45CFU/mL，检测的准确度和灵敏度都显著高于现有技术。
特异性实验验证：
将上述所制备的单增李斯特菌适配体传感器用于特异性实验：将(2)滴加的单增李斯特菌，改为滴加无菌水、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌菌液，如图6所示，图中图例自左向右分别为：a单增李斯特菌，b为空白，c为大肠杆菌，d金黄色葡萄球菌，e为沙门氏菌。实验结果表明，除了单增李斯特菌以外，其它菌液不会对光电流产生明显变化。检测的特异性显著高于现有技术。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效结构变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。

Claims (7)

1.一种基于核酸外切酶辅助放大光电化学适配体传感器检测单增李斯特菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1、制备WO3/FTO电极
将掺杂氟的SnO2导电玻璃(FTO)先后用丙酮、氢氧化钠、去离子水清洗，烘干备用。将0.4g Na2WO4·2H2O和0.17g(NH4)2C2O4·H2O溶解于33mL去离子水中，搅拌10min后，加入9mLHCl溶液(37％)。再搅拌10min加入8mLH2O2(30％)，继续搅拌20min，加入30mL无水乙醇并搅拌30min。将预处理的FTO导电面朝下，倾斜45°靠近烧杯杯壁，置于上述溶液中，放入水浴锅中一定温度下保持200min。降至室温后，用去离子水冲洗干净，然后置于60℃干燥箱中干燥6h。最后用马弗炉一定温度下煅烧2h，冷却至室温后用去离子水冲洗并干燥，得到WO3/FTO电极；
步骤2、CdTe量子点(CdTe QDs)的制备
0.2mmol的CdCl2·2.5H2O溶解于50mL去离子水中，然后加入18μL巯基乙酸并搅拌10min，然后用2M NaOH调节pH。将0.04mmol的K2TeO3溶解于50mL去离子水中，充分搅拌后加入上述溶液中，并搅拌20min。然后加入80mg NaBH4充分反应5min。然后将烧瓶连接冷凝器在100℃条件下冷凝一定时间。冷却至室温后离心洗涤，最后加入等量去离子水置于4℃冰箱中保存；
步骤3、CdTe QDs-适配体(CdTe QDs-Ap)偶联物的制备
400μL CdTe QDs用40μL含有40mM 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和10mM N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)的溶液在室温下活化1h，然后加入300μL一定浓度的单核增生李斯特菌(LM)适配体(Ap)溶液中，持续搅拌过夜。所得溶液在4℃离心除去过量Ap，即得到CdTe QDs-Ap偶联物；
步骤4、构建光电化学适配体传感器工作电极
首先将WO3/FTO电极浸入0.01M HAuCl4(pH＝4.5)溶液中50min，于300℃下煅烧2h形成金纳米颗粒，得Au/WO3/FTO电极。
将2μM LM适配体的互补DNA(cDNA)用三(2-羧乙基)膦(TCEP)(0.6μL，10mM)活化1h，滴在Au/WO3/FTO电极上。在4℃下孵化过夜，并用Tris-HCl(pH＝7.4，10mM)缓冲液冲洗，然后用30μL 6-羟基-1-己硫醇(MCH)封闭1h。Tris-HCl冲洗后，将30μL CdTe QDs-Ap偶联物滴在电极上，并在37℃下孵育1h使Ap与cDNA杂交。用Tris-HCl溶液冲洗后即得工作电极；
步骤5、构建检测LM的光电化学适配体传感器
将步骤4制备的工作电极插入电解槽中，再将饱和甘汞电极和铂对电极插入，组成三电极体系，外接电化学工作站，辅以氙灯光源系统模拟太阳光，即组装成了光电化学适配体传感器，用于LM的光电化学检测。
2.根据权利要求1所述的一种基于核酸外切酶辅助放大光电化学适配体传感器检测单增李斯特菌的方法，其特征在于，步骤1中，水浴锅温度为70-90℃，马弗炉煅烧温度为300-800℃。
3.根据权利要求1所述的一种光电化学适配体传感器的制备方法及应用，其特征在于，步骤2中，溶液pH值为10-11.5，冷凝时间为1-10h。
4.根据权利要求1所述的一种光电化学适配体传感器检测单增李斯特菌的方法，其特征在于，步骤3中，LM适配体浓度为1-5μM。
5.根据权利要求1所述的一种光电化学适配体传感器检测单增李斯特菌的方法，其特征在于，单核增生李斯特菌含量确定方法：
△I＝9.76logC-4.44
式中，△I为检测时修饰致病菌前后的电流变化量，单位为毫安，C为沙门氏菌浓度，单位为CFU/mL。
6.根据权利要求5所述的一种基于核酸外切酶辅助放大光电化学适配体传感器检测单增李斯特菌的方法，其特征在于，光电化学检测是在室温下用含有0.1M抗坏血酸(AA)的磷酸盐缓冲溶液(PBS，pH＝7.4，0.1M)进行。测试过程中由模拟日光氙灯系统提供光源，光源每20s开关一次。外加电压为0.0V。
7.根据权利要求1-6任一项所述的方法所制备的光电化学适配体传感器，用于单核增生李斯特菌的快速检测，也适用于其它食源性致病菌的快速检测。
CN202110911160.1A 2021-08-09 2021-08-09 一种基于核酸外切酶辅助放大光电化学适配体传感器 Active CN113624819B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110911160.1A CN113624819B (zh) 2021-08-09 2021-08-09 一种基于核酸外切酶辅助放大光电化学适配体传感器

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110911160.1A CN113624819B (zh) 2021-08-09 2021-08-09 一种基于核酸外切酶辅助放大光电化学适配体传感器

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113624819A true CN113624819A (zh) 2021-11-09
CN113624819B CN113624819B (zh) 2023-09-19

Family

ID=78383804

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110911160.1A Active CN113624819B (zh) 2021-08-09 2021-08-09 一种基于核酸外切酶辅助放大光电化学适配体传感器

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113624819B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114920298A (zh) * 2022-05-20 2022-08-19 郑州轻工业大学 晶态二维多孔CuO/WO3纳米片及其制备方法和作为乙偶姻传感器的应用
CN115201301A (zh) * 2022-06-10 2022-10-18 广州大学 一种光电化学适配体传感器及其制备方法和应用
CN118127133A (zh) * 2024-05-08 2024-06-04 常州先趋医疗科技有限公司 基于电化学dna传感器的lamp检测方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090203028A1 (en) * 2006-07-21 2009-08-13 Hitachi Chemical Research Center, Inc. Novel aptamers that bind to listeria surface proteins
US20140349873A1 (en) * 2006-05-12 2014-11-27 John Bruno Methods of Producing Competitive Aptamer FRET Reagents and Assays
CN104634847A (zh) * 2013-11-14 2015-05-20 中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所 一种用于检测单增李斯特菌的电化学免疫传感方法
CN104818277A (zh) * 2015-03-06 2015-08-05 江南大学 一组特异识别金黄色葡萄球菌黄金亚种的寡核苷酸适配子
CN109781818A (zh) * 2019-02-19 2019-05-21 大连工业大学 一种光电化学生物传感器及其制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140349873A1 (en) * 2006-05-12 2014-11-27 John Bruno Methods of Producing Competitive Aptamer FRET Reagents and Assays
US20090203028A1 (en) * 2006-07-21 2009-08-13 Hitachi Chemical Research Center, Inc. Novel aptamers that bind to listeria surface proteins
CN104634847A (zh) * 2013-11-14 2015-05-20 中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所 一种用于检测单增李斯特菌的电化学免疫传感方法
CN104818277A (zh) * 2015-03-06 2015-08-05 江南大学 一组特异识别金黄色葡萄球菌黄金亚种的寡核苷酸适配子
CN109781818A (zh) * 2019-02-19 2019-05-21 大连工业大学 一种光电化学生物传感器及其制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DONG LIU 等: "construction of the direct Z-scheme CdTe/APTES-WO3 heterostructure by interface engineering for cathodic "signal-off " photoelectrochemical aptasensing of streptomycin at sub-nanomole level", SENSORS AND ACTUATORS B: CHEMICAL *
MOHAMMAD RAMEZANI 等: "A selective and sensitive fluorescent aptasensor for detection of kanamycin based on catalytic recycling activity of exonuclease III and gold nanoparticles", SENSORS AND ACTUATORS B: CHEMICAL *
党蓝图;宋梦梦;胡成国;: "光电化学传感材料的制备及应用进展", 分析科学学报 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114920298A (zh) * 2022-05-20 2022-08-19 郑州轻工业大学 晶态二维多孔CuO/WO3纳米片及其制备方法和作为乙偶姻传感器的应用
CN115201301A (zh) * 2022-06-10 2022-10-18 广州大学 一种光电化学适配体传感器及其制备方法和应用
CN115201301B (zh) * 2022-06-10 2023-10-03 广州大学 一种光电化学适配体传感器及其制备方法和应用
CN118127133A (zh) * 2024-05-08 2024-06-04 常州先趋医疗科技有限公司 基于电化学dna传感器的lamp检测方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN113624819B (zh) 2023-09-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113624819B (zh) 一种基于核酸外切酶辅助放大光电化学适配体传感器
CN110308187B (zh) 一种基于锌和钴掺杂的多孔纳米钒酸铋/硫化铋的光电化学适配体传感器的制备方法及应用
JP5902159B2 (ja) 集積ブロスに希釈された生物学的サンプル中における微生物を直接的に検出し同定する方法
CN105385753B (zh) 基于核酸适配体检测水胺硫磷的电化学传感器及其制备方法
CN103048369A (zh) 一种基于还原氧化石墨烯-纳米金复合材料的金黄色葡萄球菌无标记电化学适配体传感器
Xiong et al. An aptamer-based electrochemical biosensor for simple and sensitive detection of staphylococcal enterotoxin B in milk
Syam et al. Biosensors: a novel approach for pathogen detection
CN110760566B (zh) 一种基于钨酸铋的均相阳极光电化学检测黄曲霉毒素的方法
Li et al. Electrogenerated chemiluminescence biosensors for the detection of pathogenic bacteria using antimicrobial peptides as capture/signal probes
CN110297023B (zh) 一种检测降钙素原电化学催化协助的自增强光电化学免疫传感器的制备方法及应用
JP6005053B2 (ja) 微生物の検出および定量方法
CN104655617A (zh) 用于检测海洋致病菌的电化学发光免疫传感器的制备方法及其应用
CN110554027A (zh) 一种基于氧化铁阵列共反应促进金纳米簇电致发光响应的免疫传感器的制备方法及应用
CN111139288B (zh) 基于适配体识别-杂交链式反应同时检测金黄色葡萄球菌肠毒素a、b的荧光传感器
CN103558389A (zh) 基于微间距阵列电极的免疫定量传感器、制作方法及检测食品中大肠杆菌o157：h7的方法
CN113155917A (zh) 一种用于检测赭曲霉毒素a或黄曲霉毒素b1的光助双极自供能传感器的构建方法
EP1131462B1 (en) Analytical system based upon spore germination
CN112526135A (zh) 一种检测前列腺特异性抗原的光电化学生物传感器的制备方法及应用
CN113702461B (zh) 一种光电化学自供能传感器的制备方法及在检测林可霉素中的应用
CN112748164B (zh) 一种用于磺胺地索辛灵敏检测的光电化学适配体传感器构建的方法
CN113237940B (zh) 一种快速检测黄曲霉毒素的方法
CN112649607B (zh) 一种夹心免疫试剂盒及其应用
CN111830101B (zh) 一种掺杂二茂铁甲酸的ZIF-8猝灭RuSi纳米微粒检测降钙素原的电化学发光传感器
CN113670911A (zh) 一种基于wst-8显色反应测定活菌总数的方法
Xu et al. Simultaneous detection of Staphylococcus aureus and E. coli O157: H7 using a self-calibrated potentiometric sensors array based on peptide recognition

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant