CN113613669A - 用于治疗哮喘的脂质运载蛋白突变蛋白 - Google Patents
用于治疗哮喘的脂质运载蛋白突变蛋白 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及通过吸入向人受试者施用治疗有效量的抗IL‑4受体α(IL‑4Rα)脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段来治疗所述受试者的哮喘，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为约0.1mg至约160mg。所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段可以例如每天至少一次、每天一次或每天两次施用。
Description
技术领域
本发明涉及通过吸入向人受试者施用治疗有效量的抗IL-4受体α(IL-4Rα)脂质运载蛋白(lipocalin)突变蛋白或其变体或片段来治疗所述受试者的哮喘，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为约0.1mg至约160mg。脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段可以例如每天至少一次、每天一次或每天两次施用。
背景技术
脂质运载蛋白是具有抗体样功能的蛋白质结合分子，其自然进化为结合配体。脂质运载蛋白存在于许多生物体中，包括脊椎动物、昆虫、植物和细菌。脂质运载蛋白家族的成员(Pervaiz,S.,和Brew,K.(1987)FASEB J.1,209-214)通常是小的分泌蛋白并且具有单个多肽链。它们的特征在于一系列不同的分子识别特性：它们结合各种大多疏水性的分子(诸如类视黄醇、脂肪酸、胆固醇、前列腺素、胆绿素、信息素、促味剂和气味剂)的能力，它们与特定细胞表面受体的结合以及它们大分子复合物的形成。尽管过去它们主要被归类为转运蛋白，但现在很清楚，脂质运载蛋白具有多种生理功能。这些包括在视黄醇转运、嗅觉、信息素信号传导和前列腺素合成中的作用。脂质运载蛋白还参与了免疫反应的调节和细胞稳态的介导(例如综述于Flower,D.R.(1996)Biochem.J.318,1-14和Flower,D.R.等人(2000)Biochim.Biophys.Acta 1482,9-24中)。
脂质运载蛋白共享异常低水平的整体序列保守性，其中序列同一性通常小于20％。强烈对比之下，它们的整体折叠模式高度保守。脂质运载蛋白结构的中心部分由单个八链反平行β-折叠组成，所述β-折叠自身闭合以形成连续的氢键β-桶。此β-桶形成中心空腔。桶的一端被穿过其底部的N端肽段以及连接β-链的三个肽环在空间上阻断。β-桶的另一端对溶剂开放，并包含由四个柔性肽环形成的靶结合位点。正是在其他方面刚性的脂质运载蛋白支架中环的这种多样性产生了各种不同的结合模式，每种模式都能够适应不同大小、形状和化学特征的靶标(综述于例如Flower,D.R.(1996),同上；Flower,D.R.等人(2000),同上，或Skerra,A.(2000)Biochim.Biophys.Acta 1482,337-350中)。
人泪脂质运载蛋白(TLPC或Tlc)(也称为脂质运载蛋白-1、泪前白蛋白或冯·埃布纳腺蛋白(von Ebner gland protein))最初被描述为人泪液的主要蛋白质(大约占总蛋白质含量的三分之一)，但也已在包括前列腺、肾上腺、胸腺、乳腺、睾丸、鼻粘膜和气管粘膜的几种其他分泌组织以及垂体的促肾上腺皮质激素细胞中鉴定出。已经在恒河猴、黑猩猩、大鼠、小鼠、猪、仓鼠、牛、狗和马中发现了同源蛋白质。泪脂质运载蛋白是不寻常的脂质运载蛋白成员，因为与其他脂质运载蛋白相比时，它表现出异常广泛的配体特异性，并且它具有对相对不溶性脂质的高度混杂性(参见Redl,B.(2000)Biochim.Biophys.Acta1482；241-248)。泪脂质运载蛋白的这种特征归因于蛋白质在抑制角膜处细菌和真菌生长方面的功能。大量不同化学类别的亲脂性化合物(诸如脂肪酸、脂肪醇、磷脂、糖脂和胆固醇)是这种蛋白质的内源性配体。有趣的是，与其他脂质运载蛋白相比，配体(靶标)与泪脂质运载蛋白结合的强度与烷基酰胺和脂肪酸二者的烃尾长度相关。因此，泪脂质运载蛋白与可溶性最低的脂质结合最强烈(Glasgow,B.J.等人(1995)Curr.Eye Res.14,363-372；Gasymov,O.K.等人(1999)Biochim.Biophys.Acta 1433,307-320)。泪脂质运载蛋白的1.8-A晶体结构展示了其β-桶内部异常大的空腔(Breustedt,D.A.等人(2005)J.Biol.Chem.280,1,484-493)。
国际专利申请WO 99/16873公开了在四个肽环的区域中具有突变的氨基酸位置的脂质运载蛋白家族的多肽，所述肽环布置在包围结合口袋的圆柱形β-桶结构的末端，并且对应于线性多肽序列中包括欧洲粉蝶(Pieris brassicae)的胆汁三烯结合蛋白的氨基酸位置28至45、58至69、86至99和114至129的那些片段。据报道，脂质运载蛋白家族的成员被翻译后修饰，例如泪脂质运载蛋白的磷酸化和糖基化(例如You,J.等人(2010)Electrophoresis 31,1853-1861)。然而，它们的分子识别特性不需要翻译后修饰。
国际专利申请WO 00/75308公开了胆汁三烯结合蛋白的突变蛋白，其特异性结合地高辛，而国际专利申请WO 03/029463和WO 03/029471分别涉及人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(hNGAL)和载脂蛋白D的突变蛋白。为了进一步提高和微调脂质运载蛋白变体的配体亲和力、特异性以及折叠稳定性，已经提出了使用运载蛋白家族不同成员的各种方法(Skerra,A.(2001)Rev.Mol.Biotechnol.74,257-275；Schlehuber,S.和Skerra,A.(2002)Biophys.Chem.96,213-228)，诸如替换另外的氨基酸残基。PCT公布WO 2006/56464公开了人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的突变蛋白，其对CTLA-4的结合亲和力在低纳摩尔范围内。
国际专利申请WO 2005/19256公开了具有针对不同或相同靶配体的至少一个结合位点的泪脂质运载蛋白的突变蛋白，并提供了一种用于产生此类人泪脂质运载蛋白的突变蛋白的方法。根据此PCT申请，对泪脂质运载蛋白一级序列内的某些氨基酸段(特别是包括成熟人泪脂质运载蛋白的氨基酸7-14、24-36、41-49、53-66、69-77、79-84、87-98和103-110的环区)进行诱变以便产生具有结合亲和力的突变蛋白。所得突变蛋白对所选配体的结合亲和力(KD)在纳摩尔范围内，在大多数情况下>100nM。国际专利申请WO 2008/015239公开了结合给定非天然配体(包括IL-4受体α)的泪脂质运载蛋白的突变蛋白。结合亲和力在纳摩尔范围内。国际专利申请WO 2011/154420描述了在纳摩尔范围内与人IL-4受体α结合的人泪脂质运载蛋白的高亲和力突变蛋白以及用于产生此类高亲和力突变蛋白的方法。国际专利申请WO 2013/087660描述了使用人泪脂质运载蛋白的突变蛋白来治疗其中IL-4/IL-13通路导致疾病发病机制的病症，包括哮喘。
发明内容
本发明基于抗IL-4受体α(IL-4Rα)人泪脂质运载蛋白PRS-060/AZD1402的人体研究，这是第一种基于脂质运载蛋白的哮喘治疗方法。PRS-060/AZD1402的氨基酸序列在表20中示出为SEQ ID NO:1。PRS-060/AZD1402拮抗IL-4受体α(IL-4Rα)且被设计用于吸入。在健康受试者中进行首次人体研究，以评估吸入的单次递增剂量和静脉输注(IV)剂量的安全性、耐受性和药代动力学(PK)。在患有轻度哮喘的受试者中进行第二次人体研究，以评估吸入的多次递增剂量的安全性、耐受性和药代动力学(PK)。吸入AZD1402/PRS-060后，通过抑制IL-4刺激的STAT6磷酸化(pSTAT6)来确定全身性靶标参与，并且将肺部炎症的生物标志物呼出气一氧化氮(FeNO)是作为局部肺部靶标参与的指标进行测量。
基于本文提供的这些研究的结果，本发明提供了一种用于治疗人受试者的哮喘的方法，其中所述方法包括通过吸入向所述受试者施用治疗有效量的包含SEQ ID NO:1中列出的氨基酸序列的抗IL-4受体α(IL-4Rα)脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为约0.1mg至约160mg。脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段可以每天至少一次、每天一次或每天两次施用。
本发明还提供了一种包含SEQ ID NO:1中列出的氨基酸序列的抗IL-4受体α(IL-4Rα)脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，以用于治疗人受试者的哮喘的方法中，其中所述方法包括通过吸入向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的步骤，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为约0.1mg至约160mg。脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段可以每天至少一次、每天一次或每天两次施用。
另外，本发明提供了包含SEQ ID NO:1中列出的氨基酸序列的抗IL-4受体α(IL-4Rα)脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段用于制造用于治疗人受试者的哮喘的药物的用途，其中治疗包括通过吸入向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白或其片段或变体的递送剂量为约0.1mg至约160mg。脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段可以每天至少一次、每天一次或每天两次施用。
基于本文提供的这些研究的结果，本发明提供了一种用于治疗人受试者的哮喘的方法，其中所述方法包括每天至少一次通过吸入向所述受试者施用治疗有效量的包含SEQID NO:1中列出的氨基酸序列的抗IL-4受体α(IL-4Rα)脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白的递送剂量为约0.1mg至约160mg。
本发明还提供了一种包含SEQ ID NO:1中列出的氨基酸序列的抗IL-4受体α(IL-4Rα)脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，以用于治疗人受试者的哮喘的方法中，其中所述方法包括每天至少一次通过吸入向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的步骤，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白的递送剂量为约0.1mg至约160mg。
另外，本发明提供了包含SEQ ID NO:1中列出的氨基酸序列的抗IL-4受体α(IL-4Rα)脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段用于制造用于治疗人受试者的哮喘的药物的用途，其中所述治疗包括每天至少一次通过吸入向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白的递送剂量为约0.1mg至约160mg。
在一些实施方案中，所述脂质运载蛋白突变蛋白或其片段或变体的递送剂量为约0.2mg至约60mg。在一些实施方案中，所述脂质运载蛋白突变蛋白或其片段或变体的递送剂量为约0.6mg至约60mg。
在一些实施方案中，每天至少一次向所述受试者施用包含SEQ ID NO:1中列出的氨基酸序列的脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，可以每天一次向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，可以每天两次向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。
在一些实施方案中，可以持续至少一天、至少两天、至少三天、至少四天、至少五天、至少六天、至少七天、至少八天、至少九天或至少十天向所述受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。
在一些实施方案中，可以每天两次，持续9天，并在第十天每天一次向所述受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。
在一些实施方案中，基于实施例，脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为约0.1mg、约0.5mg、约2mg、约8mg、约24mg、约72mg或约160mg。
在一些实施方案中，基于实施例，脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为约0.2mg、约2mg、约6mg、约20mg或约60mg。在一些实施方案中，每天至少一次施用递送剂量。在一些实施方案中，每天一次施用递送剂量。在一些实施方案中，每天两次施用递送剂量。
在一些实施方案中，基于实施例，脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为约0.2mg、约0.6mg、约2mg、约6mg、约20mg或约60mg。在一些实施方案中，每天至少一次施用递送剂量。在一些实施方案中，每天一次施用递送剂量。在一些实施方案中，每天两次施用递送剂量。
在一些实施方案中，脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量足以实现全身暴露，如实施例中所示。在一些实施方案中，如实施例中所示，脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量不会导致吸入的脂质运载蛋白突变蛋白的实质部分进入循环系统或可检测的全身暴露。
在一些实施方案中，脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为至少约8mg。如本文所报道的，在至少约8mg的递送剂量下观察到脂质运载蛋白突变蛋白的全身暴露。
在一些实施方案中，脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为至少约6mg。在一些实施方案中，每天至少一次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，每天一次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，每天两次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。如本文所报道的，在至少约6mg的递送剂量下观察到脂质运载蛋白突变蛋白的全身暴露。
在其他实施方案中，脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为约2mg或小于约2mg。在一些实施方案中，每天至少一次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，每天一次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，每天两次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，在约2mg或小于约2mg的递送剂量下，不存在脂质运载蛋白突变蛋白的实质性全身暴露。在一些实施方案中，在约2mg或小于约2mg的递送剂量下，未检测到脂质运载蛋白突变蛋白的全身暴露。如本文所报道，当递送剂量小于约2mg时，直到给药后30天，受试者的血清中才可检测到脂质运载蛋白突变蛋白，并因此在此期间无法检测到全身暴露。
在一些实施方案中，脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为约0.6mg或小于约0.6mg。在一些实施方案中，每天至少一次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，每天一次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，每天两次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，在约0.6mg或小于约0.6mg的递送剂量下，不存在脂质运载蛋白突变蛋白的实质性全身暴露。在一些实施方案中，在约0.6mg或小于约0.6mg的递送剂量下，未检测到脂质运载蛋白突变蛋白的全身暴露。
在一些实施方案中，脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为大于约0.6mg且小于约2mg。在一些实施方案中，每天至少一次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，每天一次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，每天两次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。
在一些实施方案中，例如，当脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为至少约8mg时，向所述受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段导致抑制所述受试者的CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。
在一些实施方案中，例如，当脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为至少约6mg时，向所述受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段导致抑制所述受试者的CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。在其他实施方案中，例如，当脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为约2mg或小于约2mg时，向所述受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段不会导致显著抑制所述受试者的CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。在一些实施方案中，每天至少一次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，每天一次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，每天两次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。
在特定的实施方案中，施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段可导致至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％抑制受试者的CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。在一个实施方案中，施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段可导致至少约20％抑制受试者的CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。在其他实施方案中，例如，当脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为约2mg或小于约2mg时，施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段不会导致显著抑制所述受试者的CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。
在特定的实施方案中，施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段可导致至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％抑制受试者的CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。在一个实施方案中，施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段可导致至少约20％抑制受试者的CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。在其他实施方案中，例如，当脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为约0.6mg或小于约0.6mg时，施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段不会导致显著抑制所述受试者的CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。
在施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段不会导致显著抑制所述受试者的CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化的任何实施方案中，施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段可导致小于10％、小于5％、小于4％、小于3％、小于2％或小于1％抑制受试者的CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。
本文公开了一种用于治疗人受试者的哮喘的方法，其中所述方法包括通过吸入向所述受试者施用治疗有效量的包含SEQ ID NO:1中列出的氨基酸序列的抗IL-4受体α(IL-4Rα)脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白的递送剂量导致抑制所述受试者的CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。在一些实施方案中，每天至少一次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，每天一次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，每天两次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在特定的实施方案中，施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段可导致至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％抑制受试者的CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。在一个实施方案中，施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段可导致至少约20％抑制受试者的CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。
本文还公开了一种用于治疗人受试者的哮喘的方法，其中所述方法包括通过吸入向所述受试者施用治疗有效量的包含SEQ ID NO:1中列出的氨基酸序列的抗IL-4受体α(IL-4Rα)脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白的递送剂量不会导致显著抑制所述受试者的CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。在一些实施方案中，每天至少一次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，每天一次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，每天两次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。
在施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段不会导致显著抑制所述受试者的CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化的任何实施方案中，施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段可导致小于10％、小于5％、小于4％、小于3％、小于2％或小于1％抑制受试者的CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。
在一些实施方案中，施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段可导致抑制CD3+T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化，其中IC50为约10nM或更低、约5nM或更低、约4nM或更低、约3nM或更低、约2nM或更低、约1nM或更低、或约0.5nM或更低。在特定的实施方案中，施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段抑制CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化，其中IC50为约0.35nM，如图3所示。在特定的实施方案中，施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段抑制CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化，其中IC50为约0.306nM，如图11所示。在特定的实施方案中，施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段抑制CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化，其中IC50为约0.30nM，如图15所示。
如表1所示，具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的脂质运载蛋白突变蛋白在体外抑制CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化，其中IC50为约1.3nM。
本文公开了一种用于治疗人受试者的哮喘的方法，其中所述方法包括通过吸入向所述受试者施用治疗有效量的包含SEQ ID NO:1中列出的氨基酸序列的抗IL-4受体α(IL-4Rα)脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白的递送剂量导致抑制CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化，其中IC50为约10nM或更低、约5nM或更低、约4nM或更低、约3nM或更低、约2nM或更低、约1nM或更低、或约0.5nM或更低。在一些实施方案中，每天至少一次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，每天一次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，每天两次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在特定的实施方案中，施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段抑制CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化，其中IC50为约0.35nM。在特定的实施方案中，施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段抑制CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化，其中IC50为约0.306nM。在特定的实施方案中，施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段抑制CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化，其中IC50为约0.30nM。
在本文所述的本发明的实施方案中的任一个中，吸入后受试者中脂质运载蛋白突变蛋白或其片段或变体的半衰期(t1/2)可为约3小时至约7小时。这些值基于表7中提供的数据，考虑标准偏差。
通过比较，基于表8中所示的数据，静脉施用后，脂质运载蛋白突变蛋白的半衰期(t1/2)为约1.5小时至2.5小时。
在本文所述的本发明的实施方案中的任一个中，向受试者施用后，脂质运载蛋白突变蛋白的峰值血清浓度(Cmax)可为约6ng/ml至约400ng/ml。这些值基于表7中提供的群组4-7的数据，考虑标准偏差。
在本文所述的本发明的实施方案中的任一个中，向受试者施用后，所述脂质运载蛋白突变蛋白随时间推移的血清浓度(AUCinf)为约60h*ng/ml至约5000h*ng/ml。这些值基于表7中提供的群组4-7的数据，考虑标准偏差。
药代动力学相关缩写(例如Cmax和AUCinf)及其含义的解释在下表19中提供。
在本文所述的本发明的实施方案中的任一个中，在向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段后，受试者呼出气中一氧化氮浓度(FeNO)可降低。在特定的实施方案中，与对照受试者相比，在向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段后，FeNO可降低至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％或至少50％，其中对照受试者是尚未施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的人患者。对照受试者可以是同一受试者(其中FeNO在施用脂质运载蛋白突变蛋白之前评估)或尚未施用任何脂质运载蛋白突变蛋白的不同受试者。在一个实施方案中，对照受试者可能已接受安慰剂。合适的安慰剂可包括生理缓冲盐溶液，诸如用于配制脂质运载蛋白突变蛋白的溶液，例如磷酸盐缓冲盐水溶液。
本文提供的数据表明，即使在(治疗的)受试者的血清中没有可检测到的所述脂质运载蛋白突变蛋白的全身暴露时，FeNO也可降低。这可表明，可实现局部炎症的减轻，如使用FeNO作为生物标志物所评估的，没有可检测的脂质运载蛋白突变蛋白的全身暴露。因此，约2mg或小于约2mg的脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量可导致FeNO因局部肺暴露而降低，而吸入的脂质运载蛋白突变蛋白的实质部分不进入循环系统或没有可检测的全身暴露。因此，约2mg或小于约2mg的脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量可为人哮喘患者提供临床益处。因此，约0.6mg或小于约0.6mg的脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量可导致FeNO因局部肺暴露而降低，而吸入的脂质运载蛋白突变蛋白的实质部分不进入循环系统或没有可检测的全身暴露。因此，约0.6mg或小于约0.6mg的脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量可为人哮喘患者提供临床益处。
在本文所述的本发明的实施方案中的任一个中，可通过雾化向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。
当通过雾化施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段时，标称或计量剂量(即雾化器中脂质运载蛋白突变蛋白的剂量)为约0.25mg至约400mg。这是本文所述的实施例中使用的InnoSpire Go雾化器(Philips)中存在的标称或计量剂量。本领域技术人员将知道，如本文所述，不同的装置可用于通过吸入施用，并且将容易地能够根据本发明基于用于施用脂质运载蛋白突变蛋白的特定装置中的标称或计量剂量来确定递送剂量。
在一些实施方案中，脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的标称剂量为至少约20mg。如本文所报道，在至少约20mg的标称剂量下观察到脂质运载蛋白突变蛋白的全身暴露，并且向所述受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段导致抑制所述受试者的CD3+T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。
在一些实施方案中，脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的标称剂量为至少约15mg。在一些实施方案中，每天至少一次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，每天一次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，每天两次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。如本文所报道，在至少约15mg的标称剂量下观察到脂质运载蛋白突变蛋白的全身暴露，并且向所述受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段导致抑制所述受试者的CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。
在其他实施方案中，脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的标称剂量为约5mg或小于约5mg。在一些实施方案中，每天至少一次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，每天一次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，每天两次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，在约5mg或小于约5mg的标称剂量下，不存在脂质运载蛋白突变蛋白的实质性全身暴露。在一些实施方案中，在约5mg或小于约5mg的标称剂量下，未检测到脂质运载蛋白突变蛋白的全身暴露。如本文所报道，当标称剂量小于约5mg时，对于给药后30天测量的(治疗的)受试者的血清中不存在可检测的脂质运载蛋白突变蛋白，并因此在此期间无法检测到全身暴露。
在一些实施方案中，脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的标称剂量为约1.5mg或小于约1.5mg。在一些实施方案中，每天至少一次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，每天一次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，每天两次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，在约1.5mg或小于约1.5mg的标称剂量下，不存在脂质运载蛋白突变蛋白的实质性全身暴露。在一些实施方案中，在约1.5mg或小于约1.5mg的标称剂量下，未检测到脂质运载蛋白突变蛋白的全身暴露。如本文所报道，当标称剂量小于约1.5mg时，对于给药后30天测量的(治疗的)受试者的血清中不存在可检测的脂质运载蛋白突变蛋白，并因此在此期间无法检测到全身暴露。
在一些实施方案中，脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的标称剂量大于约1.5mg且小于约5mg。在一些实施方案中，每天至少一次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，每天一次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。在一些实施方案中，每天两次向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。
附图说明
现在将参照附图论述举例说明本发明原理的实施方案和实验，其中：
图1示出了体外添加对IL-4Rα具有特异性的脂质运载蛋白突变蛋白(具有SEQ IDNO:1的PRS-060/AZD1402)抑制全血中的IL-4信号传导，从而降低IL-4刺激诱导的STAT6磷酸化(pSTAT6)(图1A)和嗜酸性粒细胞趋化因子-3(eotaxin-3)(图1B)、TARC(图1C)和MDC(图1D)产生的水平。在这些功能性体外测定中，脂质运载蛋白突变蛋白与参考IL-4Rα抗体(度匹鲁单抗(Dupilumab))具有相似的效力。度匹鲁单抗是针对IL-4和IL-13受体的白细胞介素-4受体亚基α(IL-4Rα)的全人Ig4单克隆抗体。它通常通过皮下注射给药，并且在美国被批准用于治疗特应性皮炎和中度至重度嗜酸性粒细胞哮喘。
图2示出了接受不同递送剂量的吸入的PRS-060/AZD1402(具有SEQ ID NO:1)的受试者的IL-4刺激的全血中STAT6磷酸化(pSTAT6)的体外抑制。
图3示出了接受吸入的PRS-060/AZD1402(具有SEQ ID NO:1)的受试者的IL-4刺激的全血中STAT6磷酸化(pSTAT6)的体外抑制。观察到STAT6磷酸化的剂量依赖性抑制，其中IC50值为0.35nM。
图4提供了健康受试者通过口服吸入施用单剂量PRS-060/AZD1402(如SEQ ID NO:1所示)的药代动力学分析结果。在8.00mg或更高的递送剂量下观察到吸入的PRS-060/AZD1402的全身暴露。平均血清PRS-060/AZD1402浓度随着剂量的增加而增加。观察到吸入后血清PK缓慢下降，这表明了吸收驱动的消除。此图示出了在仅使用线性标度的情况下，群组4至7中吸入的PRS-060/AZD1402的平均(SD)血清浓度相对于时间的曲线(PK群体)。SD＝标准偏差；PK＝药代动力学。
图5提供了健康受试者通过口服吸入施用单剂量PRS-060/AZD1402(如SEQ ID NO:1所示)的药代动力学分析结果。在8.00mg或更高的递送剂量下观察到吸入的PRS-060/AZD1402的全身暴露。平均血清PRS-060/AZD1402浓度随着剂量的增加而增加。观察到吸入后血清PK缓慢下降，这表明了吸收驱动的消除。此图示出了在仅使用对数线性标度的情况下，群组4至7中吸入的PRS-060/AZD1402的平均(SD)血清浓度相对于时间的曲线(PK群体)。SD＝标准偏差；PK＝药代动力学。
图6提供了健康受试者通过静脉施用来施用单剂量PRS-060/AZD1402(如SEQ IDNO:1所示)的药代动力学分析结果。PRS-060/AZD1402的平均血清水平指示快速消除阶段，其中t1/2为接受吸入剂量的受试者中观察到的大约一半。此图示出了在使用线性标度的情况下，群组8(1mg)和群组9(2mg)中静脉内施用后PRS-060/AZD1402的平均(SD)血清浓度相对于时间的曲线(PK群体)。SD＝标准偏差；PK＝药代动力学。
图7提供了健康受试者通过静脉施用来施用单剂量PRS-060/AZD1402(如SEQ IDNO:1所示)的药代动力学分析结果。PRS-060/AZD1402的平均血清水平指示快速消除阶段，其中t1/2为接受吸入剂量的受试者中观察到的大约一半。此图示出了在使用对数线性标度的情况下，群组8(1mg)和群组9(2mg)中静脉内施用后PRS-060/AZD1402的平均(SD)血清浓度相对于时间的曲线(PK群体)。SD＝标准偏差；PK＝药代动力学。
图8示出了安慰剂组以及递送剂量2mg、6mg和20mg的呼出气中一氧化氮浓度(FeNO)相对于基线的平均百分比变化。组平均值基于基线的log(FeNO)变化来计算，逆转换为线性标度并表示为百分比。
图9示出了每天两次2mg、6mg和20mg PRS-060/AZD1402递送剂量后的血清平均暴露曲线。
图10示出了接受不同递送剂量(2.0mg、6.0mg和20mg)的吸入的PRS-060/AZD1402(具有SEQ ID NO:1)的受试者的IL-4刺激的全血中STAT6磷酸化(pSTAT6)的体外抑制。
图11示出了接受吸入的PRS-060/AZD1402(具有SEQ ID NO:1)的受试者的IL-4刺激的全血中STAT6磷酸化(pSTAT6)的体外抑制。观察到STAT6磷酸化的剂量依赖性抑制，其中IC50值为0.306nM。
图12示出了群组1-4的安慰剂组(n＝12)和剂量组的FeNO相对于基线的平均百分比变化。组平均值基于基线的log(FeNO)变化来计算，逆转换为线性标度并表示为百分比。
图13示出了每天两次2mg、6mg、20mg和60mg PRS-060/AZD1402递送剂量后的血清中值暴露曲线。
图14示出了接受不同递送剂量(2.0mg、6.0mg、20mg和60mg)的吸入的PRS-060/AZD1402(具有SEQ ID NO:1)的受试者的IL-4刺激的全血中STAT6磷酸化(pSTAT6)的体外抑制。
图15示出了接受吸入的PRS-060/AZD1402(具有SEQ ID NO:1)的受试者的IL-4刺激的全血中STAT6磷酸化(pSTAT6)的体外抑制。观察到STAT6磷酸化的剂量依赖性抑制，其中IC50值为0.30nM。
图16示出了仅对应于实施例4的群组1-4的MAD研究设计。所示剂量是PRS-060/AZD1402的多个装置剂量(b.i.d.(每天两次)递送剂量)。间隔12小时施用b.i.d.剂量。在第-1天，即接受第一剂量的AZD1402/PRS-060或匹配安慰剂的前1天，对参与者进行评价以确认资格。参与者入住医院/研究现场，并留在医院/研究现场直到最后剂量的研究药物(第10天)后48小时(第12天)离开。使用InnoSpire Go雾化器施用研究药物，递送剂量在2mg与60mg之间，b.i.d.持续9天，并且第10天一个剂量。每个参与者从筛选到研究后随访的研究持续时间为大约9周。
图17示出了实施例2的SAD研究设计。
具体实施方式
现在将参照附图论述本发明的方面和实施方案。其他方面和实施方案对于本领域技术人员来说将是显而易见的。此文本中提及的所有文件均以引用的方式并入本文。
本发明涉及一种治疗人受试者的哮喘的方法。哮喘是慢性、复杂且异质性的呼吸道疾病，其特征在于一系列致病特征，包括肺部炎症、粘液高分泌、可变气道阻塞和气道重塑。它是由包括随时间和严重程度而变化的喘息、呼吸短促和咳嗽的呼吸道症状史定义的。症状和气道阻塞都可由一系列因素引发，包括运动、暴露于吸入的刺激物或过敏原或呼吸道感染。患者有哮喘恶化(加剧)的风险。这些哮喘的加剧可危及生命，并且可显著影响患者的生活质量。大多数哮喘患者的治疗由控制疗法和支气管扩张疗法的治疗方案组成。吸入皮质类固醇(ICS)被认为是控制哮喘症状的“黄金标准”，并且长效β-激动剂(LABA)是目前可用的最有效的支气管扩张剂。口服皮质类固醇仍然是严重哮喘的护理标准，但与显著的副作用相关联，而奥马佐单抗(omalizumab)(抗IgE单克隆抗体)；贝那利珠单抗(benralizumab)、美泊利单抗(mepolizumab)和瑞利珠单抗(reslizumab)(抗IL-5抗体)以及度匹鲁单抗(美国)(IL-4Rα和IL-13的单克隆抗体阻断剂)为重症患者提供了有限的选择。另外，患者经常无法控制ICS/LABA并且甚至替代疗法的数量有限，从而突出了重要的未满足需求。
白细胞介素-4、白细胞介素-13、白细胞介素-4-受体α和转录因子-6的信号转导因子和激活因子是哮喘中气道炎症、粘液产生和气道高反应性发展的关键组分。
治疗哮喘的方法包括施用治疗有效量的抗IL-4受体α(IL-4Rα)脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其包含SEQ ID NO:1中列出的氨基酸序列。
“治疗有效量”意指产生所施用效果的剂量。如本文所述，脂质运载蛋白突变蛋白的“治疗有效量”可根据诸如年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用时间、药物相互作用和病状严重程度的因素而变化，这可能是必要的，并且将通过本领域技术人员的常规实验可确定。当在本申请中使用时，治疗有效量也是其中脂质运载蛋白突变蛋白的任何毒性或有害作用被治疗有益作用所超过的量。
白细胞介素-4受体α链(IL-4Rα)是可结合白细胞介素4和白细胞介素13以调节B细胞中IgE抗体的产生的I型跨膜蛋白。在T细胞中，编码的蛋白质还可结合白细胞介素4以促进Th2细胞的分化。
对IL-4受体α(IL-4Rα)(特别是人IL-4Rα)具有特异性的脂质运载蛋白突变蛋白公开于国际专利公布WO 2008/015239、WO 2011/154420和WO 2013/087660中。人白细胞介素-4受体α链可具有SWISS PROT数据库登录号P24394的氨基酸序列(如SEQ ID NO:4所示)或其片段。人白细胞介素-4受体α链的片段的说明性实例包括IL-4受体α的氨基酸26至232。
具有如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的IL-4Rα特异性脂质运载蛋白突变蛋白是人泪脂质运载蛋白的突变蛋白。
如本文所用，“突变蛋白”是指与天然存在的(野生型)核酸或蛋白质“参考”支架相比，一个或多个核苷酸或氨基酸的交换、缺失或插入，所述“参考”支架优选为如SEQ ID NO:3所示的成熟人泪脂质运载蛋白。如本文所述，所述“参考支架”还包括突变蛋白或其片段或变体。
人泪脂质运载蛋白的氨基酸序列由SWISS-PROT数据库登录号P31025提供，如SEQID NO:2所示。成熟人泪脂质运载蛋白不包括SWISS-PROT登录号P31025的序列中包括的N端信号肽，即它缺少包括在SWISS-PROT登录号P31025的序列中的N端信号肽(氨基酸1-18)。成熟人泪脂质运载蛋白的氨基酸序列在SEQ ID NO:3中示出。
本发明中使用的脂质运载蛋白突变蛋白包含SEQ ID NO:1或为其变体或片段。如SEQ ID NO:1所示的脂质运载蛋白突变蛋白是如SEQ ID NO:3所示的成熟人泪脂质运载蛋白的变体，其缺少前四个氨基酸，并且特别包括在与如SEQ ID NO:3所示的成熟人泪脂质运载蛋白的氨基酸序列的序列位置相对应的位置处的以下氨基酸取代：Arg 26→Ser、Glu 27→Arg、Phe 28→Cys、Glu 30→Arg、Met 31→Ala、Asn 32→Val、Leu 33→Tyr、Glu 34→Asn、Met 55→Ala、Leu 56→Gln、Ile 57→Arg、Ser 58→Lys、Cys 61→Trp、Glu 63→Lys、Asp 80→Ser、Lys 83→Arg、Glu 104→Leu、Leu 105→Cys、His 106→Pro和Lys 108→Gln。
本发明中使用的脂质运载蛋白突变蛋白包含SEQ ID NO:1或为其变体或片段。如SEQ ID NO:1所示的脂质运载蛋白突变蛋白是如SEQ ID NO:3所示的成熟人泪脂质运载蛋白的变体，其缺少前四个氨基酸，并且特别包括在与如SEQ ID NO:3所示的成熟人泪脂质运载蛋白的氨基酸序列的序列位置相对应的位置处的以下氨基酸取代：Arg 26→Ser、Glu 27→Arg、Phe 28→Cys、Glu 30→Arg、Met 31→Ala、Asn 32→Val、Leu 33→Tyr、Glu 34→Asn、Val 53→Phe、Met 55→Ala、Leu 56→Gln、Ile 57→Arg、Ser 58→Lys、Cys 61→Trp、Glu 63→Lys、Val 64→Tyr、Ala 66→Leu、Asp 80→Ser、Lys83→Arg、Tyr 100→His、Cys101→Ser、Glu 104→Leu、Leu 105→Cys、His 106→Pro、Lys 108→Gln、Arg 111→Pro、Lys114→Trp和Cys 153→Ser。
如本文所用，术语“变体”涉及包含例如通过氨基酸序列或核苷酸序列的取代、缺失、插入和/或化学修饰的突变的蛋白质或多肽的衍生物。在一些实施方案中，此类突变和/或化学修饰不降低蛋白质或肽的功能。此类取代可以是保守的，即氨基酸残基被化学上相似的氨基酸残基替代。保守取代的实例是以下组成员之间的替代：1)丙氨酸、丝氨酸和苏氨酸；2)天冬氨酸和谷氨酸；3)天冬酰胺和谷氨酰胺；4)精氨酸和赖氨酸；5)异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸和缬氨酸；6)苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。此类变体包括蛋白质或多肽，其中一个或多个氨基酸已被其各自的D-立体异构体或除天然存在的20个氨基酸以外的氨基酸(例如像鸟氨酸、羟脯氨酸、瓜氨酸、高丝氨酸、羟赖氨酸、正缬氨酸取代)。此类变体还包括例如其中在N端和/或C端添加或缺失一个或多个氨基酸残基(诸如从N端缺失四个氨基酸和/或从C端缺失两个氨基酸)的蛋白质或多肽。一般来说，变体具有与天然序列蛋白质或多肽至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约92％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性。变体优选保留衍生其的蛋白质或多肽的生物学活性，例如结合相同的靶标。
因此，包含根据本发明的SEQ ID NO:1中列出的氨基酸的脂质运载蛋白突变蛋白的变体与如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约92％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性，并且保留与IL-4受体α(特别是人IL-4Rα)或其片段结合的能力。优选地，脂质运载蛋白突变蛋白的变体能够抑制IL-4与IL-4Rα的结合。
在一些实施方案中，包含根据本发明的SEQ ID NO:1中列出的氨基酸的脂质运载蛋白突变蛋白的变体与如SEQ ID NO:3所示的成熟人泪脂质运载蛋白的氨基酸序列具有至少约50％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约72％、至少约74％、至少约75％、至少约76％、至少约77％、至少约79％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约92％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性，并且保留与IL-4受体α(特别是人IL-4Rα)或其片段的能力。优选地，脂质运载蛋白突变蛋白的变体能够抑制IL-4与IL-4Rα的结合。
如本文所用，术语“序列同一性”或“同一性”表示测量其相似性或关系的序列的特性。如本公开所用，术语“序列同一性”或“同一性”意指成对相同残基(在本公开的蛋白质或多肽的序列与所讨论的序列的(同源)比对之后)相对于这两个序列中较长的序列的残基数的百分比。通过将相同氨基酸残基数除以残基总数并将结果乘以100来测量序列同一性。
技术人员将识别可用的计算机程序，例如BLAST(Altschul等人,Nucleic AcidsRes,1997)、BLAST2(Altschul等人,J Mol Biol,1990)、FASTA(其使用Pearson和Lipman(1988)的方法)、Altschul等人(1990)同上的TBLASTN程序、GAP(Wisconsin GCG package,Accelerys Inc,San Diego USA)和Smith-Waterman(Smith和Waterman,J Mol Biol,1981)，以用于使用标准参数确定序列同一性。例如，可使用程序BLASTP，版本2.2.5，2002年11月16日(Altschul等人,Nucleic Acids Res,1997)在本文中确定序列同一性的百分比。在本实施方案中，同源性百分比基于包括多肽序列的整个蛋白质或多肽序列的比对(矩阵：BLOSUM62；空位罚分：11.1；截断值设置为10-3)，优选地在成对比较中使用野生型蛋白质支架作为参考。所述同源性百分比被计算为BLASTP程序输出结果中指示的“阳性”(同源氨基酸)数除以所述程序出于比对选择的氨基酸总数的百分比。序列同一性通常参考算法GAP(Wisconsin GCG数据包,Accelerys Inc,San Diego USA)来定义。GAP使用Needleman和Wunsch算法来比对最大化匹配数并最小化空位数的两个完整序列，所述空位是比对中由于氨基酸的添加或缺失而产生的空间。通常使用默认参数，其中空位创造罚分等于12，并且空位扩展罚分等于4。
具体地，为了确定脂质运载蛋白(突变蛋白)的氨基酸序列的氨基酸残基是否不同于具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的脂质运载蛋白突变蛋白，技术人员可使用本领域众所周知的手段和方法，例如手动比对或通过使用计算机程序诸如BLAST2.0(其代表Basic Local Alignment Search Tool)或ClustalW或适合生成序列比对的任何其他合适的程序的比对。因此，SEQ ID NO:1可用作“参考序列”，而与具有如本文所述的SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的脂质运载蛋白突变蛋白不同的脂质运载蛋白的氨基酸序列用作“查询序列”。
如本文中结合本公开的脂质运载蛋白突变蛋白使用的术语“片段”涉及衍生自脂质运载蛋白突变蛋白的蛋白质或肽，其包含SEQ ID NO:1中列出的N端和/或C端截短(即缺少N端和/或C端氨基酸中的至少一个)的氨基酸序列。此种片段可缺少至多1个、至多2个、至多3个、至多4个、至多5个、至多10个、至多15个、至多20个、至多25个或至多30个(包括之间的所有数值)N端和/或C端氨基酸。作为说明性实例，此种片段可缺少一个、两个、三个或四个N端氨基酸和/或一个或两个C端氨基酸。应当理解，片段优选为全长脂质运载蛋白(突变蛋白)的功能片段，这意味着它优选包含衍生其的全长脂质运载蛋白(突变蛋白)的结合口袋。作为说明性实例，此种功能片段可至少包含与成熟人泪脂质运载蛋白的线性多肽序列相对应的位置5-158、1-156、5-156、5-153、26-153、5-150、9-148、12-140、20-135或26-133处的氨基酸。此类片段可包括如SEQ ID NO:1所示的序列的至少10个、至少20个、至少30个、至少40个、至少50个、至少60个、至少70个、至少80个、至少90个或至少100个连续氨基酸，并且通常在具有氨基酸序列SEQ ID NO:1的脂质运载蛋白突变蛋白的免疫测定中可检测到。片段可与如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约92％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性。优选地，片段保留与IL-4受体α(特别是人IL-4Rα或其片段)结合的能力。优选地，脂质运载蛋白突变蛋白的片段能够抑制IL-4与IL-4Rα的结合。
关于本公开的对应靶标IL-4Rα(其描述于UniProt P24394中且示出为SEQ ID NO:4，其不包括25个残基的信号肽)的“片段”是指N端和/或C端截短的IL-4Rα或IL-4Rα的蛋白质结构域。如本文所述的IL-4Rα的片段保留全长IL-4Rα被本公开的脂质运载蛋白突变蛋白识别和/或结合的能力。作为说明性实例，片段可以是IL-4Rα的细胞外结构域，诸如包含如SEQ ID NO:5所示的UniProt P24394的氨基酸残基26-232的细胞外结构域。
通过吸入向人受试者施用根据本发明的脂质运载蛋白突变蛋白。如本文所用，通过吸入施用是指通常通过口服吸入施用脂质运载蛋白突变蛋白。脂质运载蛋白突变蛋白可为雾化液体气雾剂或液体喷雾剂的形式。脂质运载蛋白突变蛋白可通过雾化施用。
用于吸入施用脂质运载蛋白突变蛋白的手段和装置是技术人员已知的。此类手段和装置包括雾化器和非加压计量剂量吸入器。适用于指导吸入施用脂质运载蛋白突变蛋白的其他手段和装置也是本领域已知的。
雾化器是用于以吸入肺部的雾状形式施用药物的药物递送装置。不同类型的雾化器是技术人员已知的，并且包括喷射雾化器、超声波雾化器和振动网技术。一些雾化器提供连续的雾化溶液流，即无论受试者是否从其中吸入，它们都将在很长一段时间内提供连续雾化，而其他雾化器是呼吸驱动的，即受试者仅在从其中吸入时才获得一些剂量。
非加压计量剂量吸入器(MDI)(也称为软雾吸入器)是以短时间喷射液体雾化药物的形式将特定量药物递送到肺部的装置。此种计量剂量吸入器通常由三个主要部件组成；罐，其包含待施用的制剂，计量阀，其允许在每次致动时分配计量量的制剂，以及致动器(或吹口)，其允许患者操作装置并将液体气雾剂导入患者肺部。
用于本发明的脂质运载蛋白突变蛋白将通常以药物组合物的形式施用，除特异性结合成员之外，所述组合物还可包含至少一种组分。因此，除活性成分之外，根据本发明使用的药物组合物还可包含药学上可接受的赋形剂、载剂、缓冲剂、稳定剂或本领域技术人员众所周知的其他材料。此类材料应是无毒性的，并且不应干扰活性成分的功效。例如，可将根据本发明使用的脂质运载蛋白突变蛋白配制在磷酸盐缓冲盐水(PBS)的水性溶液中。
包含脂质运载蛋白突变蛋白的药物组合物可单独施用或与其他治疗同时或顺序地组合施用。
在本文公开的用于治疗哮喘的方法中，所述脂质运载蛋白突变蛋白的递送剂量为约0.1mg至约160mg。“递送剂量”是指递送至受试者的脂质运载蛋白突变蛋白的剂量，即当应用装置时从吸入装置中出来的剂量。例如，雾化器有时会故意过量填充，因为最终总体积不会被雾化。对于雾化器，递送剂量通常小于标称剂量的50％，所述标称剂量是加载到装置中的脂质运载蛋白突变蛋白的剂量。标称剂量也称为计量剂量。技术人员可通过确定从吸入装置中出来的脂质运载蛋白突变蛋白的量来容易地确定递送剂量。例如，欧洲药典9.0的第2.9.44节提供了用于通过实验测量“递送剂量”的方法。
本文所述的SAD研究(实施例2)中加载到雾化器中的0.25mg、1.25mg、5mg、20mg、60mg、180mg和400mg的标称(或计量)剂量分别与0.1mg、0.5mg、2.0mg、8.0mg、24mg、72mg和160mg的递送剂量相关。
本文所述的MAD研究(实施例3和实施例4)中加载到雾化器中且每天两次施用的0.5mg、5mg、15mg、50mg和150mg的标称(或计量)剂量分别与每天两次施用的0.2mg、2.0mg、6.0mg、20mg和60mg的递送剂量相关。1.5mg的标称或计量剂量与0.6mg的递送剂量相关。
来自本文提供的SAD研究(实施例2)的结果表明，全身暴露发生在至少约8mg脂质运载蛋白突变蛋白的递送剂量下，而在低于约2mg的递送剂量下，未观察到可检测的全身暴露。
来自本文提供的MAD研究(实施例3)的群组1-3的结果表明，全身暴露发生在至少约6mg脂质运载蛋白突变蛋白的递送剂量下，而在约2mg或低于约2mg的递送剂量下，未观察到可检测的全身暴露。
来自本文提供的MAD研究(实施例4)的群组1-5的结果表明，全身暴露发生在至少约6mg脂质运载蛋白突变蛋白的递送剂量下，而在约2mg或低于约2mg的递送剂量下，未观察到可检测的全身暴露。
如本文所用，“全身暴露”意指吸入的脂质运载蛋白突变蛋白的实质部分进入循环系统，并且任选地，全身可受到脂质运载蛋白突变蛋白的影响。全身暴露可意味着进入循环系统的脂质运载蛋白突变蛋白的量是可量化的。全身暴露可相当于可量化的进入血流的脂质运载蛋白突变蛋白的浓度。此种暴露可由脂质运载蛋白突变蛋白的血液(血清、血浆或全血)浓度表示，所述浓度可随时间测量并通过一系列参数记录，包括曲线下面积(AUC)。全身暴露于脂质运载蛋白突变蛋白也可影响生物标志物，所述生物标志物的水平可与脂质运载蛋白突变蛋白的浓度直接相关，并因此与全身暴露相关。当与全身暴露结合使用时，术语“可量化的”或“可检测的”是指由脂质运载蛋白突变蛋白的血液(血清、血浆或全血)浓度或由通过本领域已知的一种或多种分析方法可测量的生物标志物的水平表示的暴露。此类分析方法包括但不限于ELISA、竞争性ELISA、荧光滴定、量热法、质谱(MS)和色谱法，诸如高效液相色谱法(HPLC)。还应理解，使用此类分析方法进行的测量与检测限(诸如仪器检测限、方法检测限和量化限)相关联。
来自本文提供的MAD研究(实施例3)的群组1-3的结果表明，约2mg或小于约2mg的脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量可导致FeNO因局部肺暴露而降低，而吸入的脂质运载蛋白突变蛋白的实质部分不进入循环系统或没有可检测的全身暴露。
来自本文提供的MAD研究(实施例4)的群组1-4的结果表明，约2mg或小于约2mg的脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量可导致FeNO因局部肺暴露而降低，而吸入的脂质运载蛋白突变蛋白的实质部分不进入循环系统或没有可检测的全身暴露。
来自本文提供的MAD研究(实施例4)的群组1-5的结果表明，约2mg或小于约2mg但大于0.2mg的脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量可导致FeNO因局部肺暴露而降低，而吸入的脂质运载蛋白突变蛋白的实质部分不进入循环系统或没有可检测的全身暴露。约2mg或小于约2mg但约0.6mg或大于约0.6mg的脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量可导致FeNO因局部肺暴露而降低，而吸入的脂质运载蛋白突变蛋白的实质部分不进入循环系统或没有可检测的全身暴露。
如本文所用，“局部暴露”意指肺中存在足够水平的吸入的脂质运载蛋白突变蛋白以与肺中的靶标相互作用。这可在血液中没有可检测到的靶标参与或血液或血清中没有可测量浓度的脂质运载蛋白突变蛋白的情况下发生。随着吸入剂量水平的增加，肺靶标参与的水平可增加，并且这也可与血液中靶标参与以及血液或血清中可测量浓度的脂质运载蛋白突变蛋白的实质性抑制相关联。术语“局部肺暴露”是指负责其肺靶标参与的吸入的脂质运载蛋白突变蛋白的肺浓度。呼出气中一氧化氮浓度(FeNO)的降低可用于确定是否实现了足够的“局部暴露”。在一些其他情况下，特别是如果受试者为人，由于直接测量留在肺中的脂质运载蛋白突变蛋白的量是困难的，可通过确定进入循环系统的脂质运载蛋白突变蛋白的量来间接进行“局部暴露”或“局部肺暴露”的确定。
CD3+ T细胞群中STAT6的磷酸化可用作脂质运载蛋白突变蛋白的全身暴露的标志物。STAT6磷酸化(pSTAT6)的确定可通过本领域技术人员已知的任何合适的方法进行。例如，在向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白后，可从受试者收集全血，用IL-4刺激，并且使用荧光激活细胞分选(FACS)评估CD3+ T细胞亚群中的pSTAT6，如实施例部分中所述。在向受试者施用脂质运载蛋白突变蛋白后，CD3+T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化的抑制表明脂质运载蛋白突变蛋白的全身暴露。例如，可相对于未施用任何脂质运载蛋白突变蛋白的对照受试者来确定脂质运载蛋白突变蛋白对CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化的抑制百分比。这可以是同一受试者(其中在施用脂质运载蛋白突变蛋白之前评估CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化)或未施用任何脂质运载蛋白突变蛋白的不同受试者。
CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化的抑制可通过确定IC50值来评估，所述值是脂质运载蛋白突变蛋白的半最大抑制浓度；即抑制50％的CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化所需的血浆中测量的脂质运载蛋白突变蛋白的浓度。脂质运载蛋白突变蛋白的IC50可通过构建剂量-反应曲线并检查不同浓度的脂质运载蛋白突变蛋白对逆转CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化的作用来确定。IC50值可通过确定在用IL-4刺激后抑制半数CD3+ T细胞中STAT6磷酸化所需的脂质运载蛋白突变蛋白的浓度来计算。CD3+ T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化的不可检测的或不显著的抑制可能意味着吸入的脂质运载蛋白突变蛋白的实质部分未进入循环系统或没有可检测的全身暴露。
呼出气中一氧化氮浓度(FeNO)可用作确定脂质运载蛋白突变蛋白在治疗哮喘方面的有效性的标志物。本领域技术人员将能够容易地使用已知技术测量FeNO，例如通过患者缓慢而稳定地往连接到手持式监测器的吹口中呼气来进行FeNO测试。读数在监测器上示出，其中FeNO测试的结果示出气道发炎的程度。常用的FeNO测试是美国胸科学会(ATS)2005测试。
例如，可相对于未施用任何脂质运载蛋白突变蛋白的对照受试者来确定脂质运载蛋白突变蛋白降低FeNO的百分比。这可以是同一受试者(其中FeNO在施用脂质运载蛋白突变蛋白之前评估)或尚未施用任何脂质运载蛋白突变蛋白的不同受试者。可能已向这个不同受试者施用了安慰剂。
在包括下面权利要求的整个说明书中，除非上下文另外要求，否则词语“包含(comprise)”和“包括(include)”及变型(诸如“包含(comprises/comprising)”和“包括(including)”)将理解为隐含包括规定的整数或步骤或整数或步骤的组但不排除任何其他整数或步骤或整数或步骤的组。
必须注意，除非上下文另有明确规定，如说明书和所附权利要求中所使用，单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数指示物。因此，例如，对“脂质运载蛋白突变蛋白”的提及包括一种或多种脂质运载蛋白突变蛋白。
本文任何地方使用的术语“和/或”都包括“和”、“或”和“由所述术语连接的要素的所有或任何其他组合”的含义。
如本文所用，术语“约”或“大约”意指在给定值或范围的20％内，优选在10％内，并且更优选在5％内。然而，所述术语也包括具体数字，例如，“约20”包括20。
如本文所用，术语‘至少约’包括具体数字，例如，‘至少约6’包括6。
在前述描述中、或在以下权利要求中、或在附图中所公开的以其具体形式或根据用于执行所公开功能的手段，或用于获得所公开结果的方法或过程来表达的特征可单独地或以此类特征的任何组合用于以其多样化的形式实现本发明。
虽然已经结合上面描述的示例性实施方案描述了本发明，但是当给出本公开内容时，许多等效修改和变型对于本领域技术人员将是显而易见的。因此，上面阐述的本发明的示例性实施方案被认为是说明性而非限制性的。在不脱离本发明的精神和范围的情况下可对所描述的实施方案作出各种改变。
为避免任何疑问，本文提供的任何理论解释都是为了提高读者的理解。发明人不希望受任何这些理论解释的束缚。
本文所使用的任何小节标题仅出于组织性目的且不诠释为限制所描述的主题。
实施例
实施例1.作为对PRS-060/AZD1402的人免疫反应的评价的人体外全血测定
为了表征PRS-060/AZD1402对IL-4Rα信号传导的作用，在存在或不存在PRS-060/AZD1402的情况下，用IL-4刺激来自健康受试者的人全血，并量化其信号传导组分的磷酸化和释放的可溶性生物标志物。
从健康志愿者抽取人全血，并将其收集在含有肝素的无菌管中。在递增浓度的PRS-060/AZD1402或参考IL4-Rα抗体的情况下，用8ng/mL IL-4刺激经肝素处理的全血15分钟，然后使用荧光激活细胞分选(FACS)评估CD3+ T细胞亚群中的磷酸化STAT6(pSTAT6)。
另外，在递增浓度的PRS-060/AZD1402或参考IL4-Rα抗体的情况下，用8ng/mL IL-4刺激经肝素处理的全血24小时，之后使用酶联免疫吸附测定(ELISA)测量嗜酸性粒细胞趋化因子-3、胸腺和活化调节趋化因子(TARC)和巨噬细胞衍生趋化因子(MDC)。
代表性实验的结果描绘于图1中，并且PRS-060/AZD1402和参考IL4-Rα抗体对pSTAT6和可溶性细胞因子的释放的抑制的拟合IC50值总结于表1中。用IL-4刺激人全血导致pSTAT6水平增加，并导致嗜酸性粒细胞趋化因子-3、TARC和MDC的释放。PRS-060/AZD1402以浓度依赖性方式抑制pSTAT6，并且其效力与参考IL-4Rα抗体相似。还观察到PRS-060/AZD1402以与参考IL-4Rα抗体等同的效力抑制可溶性细胞因子嗜酸性粒细胞趋化因子-3、TARC和MDC的释放。
数据表明PRS-060/AZD1402能够抑制人全血中的IL-4Rα信号传导，并且其中IC50值与参考IL4Rα抗体相当。此外，观察到的低水平变化使此方法适用于检测吸入给药后PRS-060/AZD1402全身水平的存在。例如，pSTAT6反应以及全血中下游细胞因子释放可用于临床试验以评估全身暴露。
表1对pSTAT6和可溶性细胞因子的释放的抑制
IL-4与其受体(IL-4R)的结合导致Janus激酶(Jak)3-1和Jak-3的酪氨酸磷酸化，这进一步导致IL-4Rα链的酪氨酸磷酸化。在通过Src同源2结构域与IL-4R上的磷酸酪氨酸停泊位点(docking site)结合后，Stat6被Jak激酶磷酸化。从IL-4R释放的磷酸化STAT6(pSTAT6)形成同源二聚体并易位到细胞核，在那里它与特定的DNA序列结合并触发其靶基因的转录(Nelms等人,Annu Rev Immunol,1999,17:701-738)。pSTAT6的抑制百分比可用作反映PRS-060/AZD1402添加/施用后IL-4Rα的抑制的直接量度。
pSTAT6向细胞核的易位在转录水平上调节与2型免疫相关联的许多基因(Chen等人,2003.J Immunol,171:3627-3635)。在IL-4刺激后，已经证明了在转录水平上诱导TARC/CCL17、MCD/CCL22和嗜酸性粒细胞趋化因子-3/CCL26(参见例如，Wirnsberger等人,EurJImmunol.,2006,36(7):1882-1891,Rahal等人,Int J Radiat Oncol Biol Phys,2018,100(4):1034-1043以及Hoeck和
J Immunol,2001,167(6):3216-3222)。此外，用IL-4刺激健康供体的人全血24小时导致可被IL-4Rα抑制的TARC/CCL17、MCD/CCL22和嗜酸性粒细胞趋化因子-3/CCL26的有效诱导和细胞因子释放。此后，可容易地在血液的无细胞部分中检测到这些细胞因子。
实施例2.评估健康受试者通过口服吸入或静脉输注施用单剂量PRS-060/AZD1402的安全性、耐受性和药代动力学的剂量递增单盲研究
A.研究目标和概述
本实施例描述了一项随机、安慰剂对照、单盲、单剂量递增研究，所述研究通过向招募的受试者口服吸入或静脉内(IV)施用单剂量PRS-060/AZD1402或安慰剂来进行。研究的主要目标是评价健康男性和女性受试者单次吸入和单次IV剂量PRS-060/AZD1402的安全性和耐受性。研究的次要目标是评价健康男性和女性受试者单次吸入和单次IV剂量PRS-060/AZD1402后PRS-060/AZD1402的药代动力学。研究的探索性目标包括PRS-060/AZD1402对药效动力学生物标志物的作用，诸如对IL-4/IL-13途径的离体全血活化的抑制。
将招募的受试者随机分配到剂量群组。每个群组共包括8名受试者，由6名PRS-060/AZD1402受试者和2名安慰剂受试者组成。将每个群组的2名前哨受试者以1:1随机分组至PRS-060/AZD1402和安慰剂，并且在群组中剩余受试者之前至少24小时给药。每个群组的剩余受试者(以5:1随机分组至PRS-060/AZD1402或安慰剂)以不超过40分钟的间隔接受研究药物。
第一群组中招募的受试者接受最低剂量的PRS-060/AZD1402(0.25mg标称或计量剂量；相当于0.1mg递送剂量)。在审查临床前毒理学研究设定的预定义暴露限后，决定每个群组的实际剂量。口服吸入群组的实际剂量总结于表2中。对于施用，使用InnoSpire Go雾化器(Philips)。PRS-060/AZD1402在磷酸盐缓冲盐水(PBS)(1.06mM KH2PO4，2.96mMNa2HPO4，154mM NaCl，pH 7.4)的水性溶液中以10mg/mL或50mg/mL的靶蛋白浓度配制，并提供有5.2mL的最小可提取体积。
表2 PRS-060/AZD1402和匹配安慰剂的口服吸入剂量
在对接受口服吸入剂量的所有受试者群组(群组1至7)进行安全性评价后，另外2个受试者群组(未参与吸入剂量群组)接受IV给药。将10mg/mL PRS-060/AZD1402在PBS中稀释，以用于使用注射泵通过输注施用。另外2个群组总结于表3中。
表3 PRS-060/AZD1402和匹配安慰剂的静脉内剂量
基于以下标准将受试者招募到研究中：(1)18岁至55岁的非生育潜力的(绝经后或手术绝育的)健康男性和女性受试者；(2)体重指数(BMI)为18-35kg/m2；以及(3)是不吸烟者或过去6个月内未吸烟的戒烟者的受试者(通过筛选访视时尿可替宁<500ng/mL来确定)。讲符合所有纳入标准的受试者进一步筛选以下排除标准：(1)在研究者看来，可能因参与研究而使受试者处于风险中、影响研究结果或影响受试者参与研究的能力的任何临床上显著的医学病症的病史或临床表现；(2)吸毒或酗酒史；(3)可能使受试者在参与研究期间处于风险中的感染史或已知重大感染，包括甲型、乙型或丙型肝炎、人免疫缺陷病毒、结核病(即干扰素-γ释放测定QuantiFERON TB-Gold的阳性结果)；(4)在研究期间第1天或计划住院手术或住院治疗后4周内出现的任何临床上显著的疾病、感染、医疗/手术规程或创伤；(5)如由主要研究者判断的临床化学、血液学或尿液分析结果的任何临床上显著的异常；(6)有任何恶性肿瘤或赘生性疾病病史的受试者；(7)可能是慢性或急性的任何原因的复发性或持续性“干眼综合征”的重大病史，这可能影响与靶向PRS-060/AZD1402的抗药物抗体(ADA)(结构上与泪脂质运载蛋白相关)的潜在性相关联的安全性数据的解释；(8)在第1天之前4周内接受过活疫苗或减毒疫苗的受试者；(9)有提示异常免疫功能的病史的受试者；(10)任何生物疗法后的过敏反应史和对研究产品配方的任何组分的已知过敏或反应史；(11)无法与研究者进行良好沟通(即语言问题、智力发育不良或脑功能受损)；(12)在前16周内参加新化学实体的任何临床研究或在研究药物的第一剂量之前的前12周内或5个半衰期内(以较长者为准)的上市药物临床研究；(13)在前12周内献血450mL或更多；(14)怀孕的妇女；以及(15)与有生育潜力的女性伴侣性活跃且未做过输精管切除术并且从第1天起90天内不同意双重避孕方法的男性。
B.研究程序
受试者在第1天的前一天下午进入研究现场，并在第3天的48小时测量完成之前留在研究现场。在第1天的早晨，受试者接受治疗剂量：单次吸入剂量或IV输注积极治疗(PRS-060/AZD1402)或安慰剂治疗。对于接受口服吸入剂量的受试者，研究药物以PBS中10mg/mL或50mg/mL提供，并使用InnoSpire Go雾化器(Philips)施用。对于接受IV输注的受试者，在60分钟内输注10mL体积的PBS中的PRS-060/AZD1402。在研究期间的预定时间点进行安全性和PK评估。在所有研究评估完成后，受试者在第3天离开研究现场，并计划在第7天(±1天)和第30天(±3天)返回进行安全性随访、PK和药效动力学评估。
C.终点和评估
研究的主要终点是安全性/耐受性，通过在研究期间持续进行基础上的不良事件(AE)、生命体征、1秒用力呼气量(FEV1)、心电图(ECG)和实验室安全性测试进行评估。AE被定义为在暴露于药物产品之后或期间，不期望的医学病状的发展或原有医学病状的恶化，无论是否认为与产品有因果关系。生命体征的评估包括体温、收缩压和舒张压读数(mmHg)、脉搏(每分钟心跳次数(BPM))和呼吸频率(每分钟呼吸频率(BRPM))。收集血液和尿液样品用于实验室评估，包括血液学、血清化学和尿液分析。如果同时收集，则在血液收集之前的预定时间点进行三次12导联ECG。
研究的次要终点是PK参数，包括：(1)血清(口服吸入和IV施用两者)最大浓度(Cmax)、达到最大浓度的时间(Tmax)、终末半衰期(t1/2)、从时间零到给药后24小时的曲线下面积(AUC0-24)、从时间零到最后可测量浓度采样时间(Tlast)的曲线下面积(质量×时间×体积-1)(AUClast)、从时间零到无穷的曲线下面积(质量×时间×体积-1)(AUCinf)、从时间零到最后可测量浓度的曲线下面积(AUClast)、Cmax/剂量、AUC0-24h/剂量、AUC0-last/剂量、AUCinf/剂量和(平均停留时间)MRT；(2)血清(仅IV施用)终末期分布容积(Vz)、稳态表观分布容积(Vss)和全身清除率(CL)；(3)血清(仅口服吸入)表观分布容积(Vz/F)和CL/F、以及F吸入、总体和平均吸收时间(MAT)(均来源于IV PK数据)；以及(4)尿液(口服吸入和IV施用两者)：尿液中排泄的药物总量(Ae)、Ae(tx-tx+1)、Ae(0-tx)、尿液中排泄的剂量分数(fe)、fe(tx-tx+1)、fe(0-tx)和肾清除率(CLr)。
研究的探索性终点包括评价味觉特征和PRS-060/AZD1402对药效动力学生物标志物的作用，诸如抑制与IL-4/IL-13途径相关的离体全血活化和探索性全身生物标志物。使用问卷评价味觉特征。收集血浆和血清，并将其用于评估与IL-4Rα途径相关联的潜在生物标志物。通过用IL-4(10ng/ml人IL-4，持续15分钟)刺激从受试者收集的全血，并且随后测量CD3+ T细胞亚群中的磷酸化STAT6(pSTAT6)来评价对离体全血活化的抑制。
D.统计方法
对于主要终点，所有提供知情同意书并接受1个剂量研究药物的受试者都用于所有分析。根据接受的治疗对受试者进行分析。根据AE报告、临床实验室数据、生命体征、呼吸量评估和12导联ECG参数评估安全性。
所有AE总结仅限于治疗紧急AE(TEAE)，但所有AE都包括在数据列表中。TEAE被定义为次第一次给药时或之后开始的AE。药物相关TEAE被定义为与研究药物有可能、很可能或明确关系的TEAE。TEAE总结提供了受试者的数量和百分比以及事件的数量。对于MedDRA系统器官分类(SOC)和首选术语(PT)的总结，受试者在SOC水平上计数一次，并且在SOC水平内的每个PT上计数一次。对于SOC、PT和严重程度的总结，受试者在SOC水平上发生事件的每个严重程度水平以及对于所述SOC水平内每个独特PT发生事件的每个严重程度水平计数一次。对与研究药物的关系的总结的处理与严重程度的总结相似。
按群组和治疗在每次方案计划访视(筛选、第-1天、第1天、第2天、第3天、安全性随访(第7±1天)和30天随访)时获得包括血液学、血清化学和尿液分析的实验室数据，并进行描述性总结，作为绝对值和相对于基线的变化。
按群组和治疗在每个方案计划时间点(筛选；给药前；给药后5分钟、40分钟、1小时、4小时)获得呼吸量测定评估，包括FEV1(mL)、6秒用力呼气容积(FEV6)(mL)、用力肺活量(FVC)(mL)、呼气流速峰值(PEFR)(L/分钟)和FEV1/FVC比率，并进行描述性总结，作为绝对值和相对于基线的变化。
按群组和治疗在每个方案计划时间点(筛选；给药前；给药后20分钟、30分钟、1小时、1.5小时、2小时、3小时、4小时、5小时、8小时、12小时、24小时；第3天；安全性随访；30天随访)获得12导联ECG，包括RR间隔(msec)、PR间隔(msec)、QT间隔(msec)、QTcF间隔(msec)和QTcB间隔(msec)，并进行描述性总结，作为绝对值和相对于基线的变化。计划在第1天给药后20分钟、30分钟和1小时进行单次12导联ECG，并在其他时间点进行三次评估。在第1天给药前进行的三次ECG测量的平均值用作所有给药后比较的受试者的基线校正QT(QTc)值。
对于次要终点，所有提供知情同意书并接受1个剂量PRS-060/AZD1402并且收集了用于PK分析的至少1份可评估血液样品的受试者用于PK参数计算分析、个体数据的图形显示、PK浓度数据和PK参数的PK参数数据总和列表以及所有其他PK列表。
E.结果
对所有72名招募的受试者观察到的结果总结如下。在72名受试者中，54名受试者随机接受PRS-060/AZD1402，并且18名受试者随机接受安慰剂。参与者的平均年龄为26.4岁，并且平均BMI为24.5kg/m2。每个群组分配八名受试者。在每个群组(群组1至9)中，6名受试者接受PRS-060/AZD1402，并且2名受试者接受安慰剂。所有72名招募的受试者均接受1个剂量研究药物并完成此研究。没有受试者过早地中止研究。人口统计学和基线特征在各组和群组中相似。
接受1个剂量研究药物的所有72名招募的受试者都被包括在安全性群体中。共37名受试者(51.4％)被包括在PK群体中。在37名受试者中，1名受试者在群组3中，并且36名受试者在群组4至9中(每个群组6名受试者)。PK群体中不包括群组1和群组2中的受试者，并且也不包括安慰剂受试者。
(i)主要终点
施用于健康男性受试者的单次吸入剂量和单次IV剂量的PRS-060/AZD1402是良好耐受且安全的。
所有受试者的TEAE总结提供于表4和表5中，并且按群组的TEAE总结提供于表6中。在72名受试者中，任何TEAE的发生率为34.7％(25名受试者)：安慰剂为33.3％(6名受试者)，并且PRS-060/AZD1402为35.2％(19名受试者)。所有PRS-060/AZD1402群组中的受试者经历了至少1次TEAE。安慰剂群组1、3、4和8中的受试者经历了至少1次TEAE。在经历过任何TEAE的25名受试者中，10名受试者(40.0％)报告了被判断为可能与研究药物相关的11个事件，并且15名受试者(60.0％)报告了被判断为与研究药物无关的17个事件。群组8中的一名安慰剂受试者经历了被判断为可能与研究药物相关的头痛(定义为药物相关TEAE)，但所述事件的强度较轻，并且在事件发生后1小时内消退，没有后遗症。没有TEAE是严重的或导致中止。此研究中未发生死亡。安慰剂受试者和PRS-060/AZD1402受试者都经历了以下TEAE：头痛、上呼吸道感染和肌肉骨骼胸痛。最常报告的TEAE是6名受试者(8％)经历的头痛和5名受试者(7％)经历的上呼吸道感染。除了头痛和上呼吸道感染外，受试者没有经历过接受AZD1402/PRS-060和安慰剂的受试者所常见的其他事件。在经历过任何TEAE的25名受试者中，20名受试者(80.0％)报告轻度TEAE，并且5名受试者(20.0％)报告中度TEAE。没有受试者报告重度TEAE。
表4所有受试者(安全性群体)的治疗紧急不良事件的总发生率
表5.所有受试者(安全性群体)的TEAE发生率。
表6按群组(安全性群体)的治疗紧急不良事件的发生率
缩写：AE＝不良事件，m＝事件数，N＝组中受试者数，n＝指定类别的受试者数，TEAE＝治疗紧急不良事件。
注意：TEAE被定义为在第一次给药时或之后开始的AE。
注意：百分比基于每个治疗组的安全性群体中的受试者数。
临床实验室评价未展示临床上显著的异常或相对于基线的变化。在此研究中没有注意到个体临床上显著的异常。同样，在生命体征、任何肺力学测量或ECG评价中未观察到明显变化。个体受试者对味觉特征评估的反应是积极的，因为没有与研究药物或安慰剂相关联的显著味道或气味。
(ii)次要终点
群组1至7口服吸入后，群组1(递送剂量0.10mg)和群组2(递送剂量0.50mg)中所有受试者的血清PRS-060/AZD1402 PK曲线都低于量化限(BLOQ)，直到给药后30天为止。对于群组3(递送剂量2.00mg)，1名受试者仅在给药后4小时(1.58ng/ml)和给药后5小时(1.67ng/mL)具有可检测到的PRS-060/AZD1402浓度，但对于所有其他浓度都是BLOQ。因此，无法确定此研究前3个群组的PK参数。从群组4(递送剂量8.00mg)开始评估PRS-060/AZD1402相对于时间的PK曲线。在平均PRS-060/AZD1402浓度曲线中，观察到血清PRS-060/AZD1402浓度随群组4>群组5>群组6>群组7的增加剂量而排序增加(图4和5)。对应的血清PK参数总结于表7中。从数据中，观察到PK参数Cmax和AUC随剂量大于比例的增加。例如，从群组6(72mg递送剂量)到群组7(160mg递送剂量)的剂量增加2.2倍导致Cmax和AUC大约增加2.8倍。未观察到剂量-比例关系，这可能是由于在群组7的最高吸入递送剂量(AUCinf/剂量和Cmax/剂量分别为67.2％和87.1％)下的受试者间高度可变性。所有群组的Tmax发生在2小时与8小时之间。在群组4和5中，PRS-060/AZD1402对于给药后约18小时是可检测到的，而Tlast在群组6和群组7中较晚。终末期支持平均(SD)t1/2为4.163(1.7032)小时(群组4)、4.100(0.8974)小时(群组5)、6.156(0.7305)小时(群组6)和5.998(0.6803)小时(群组7)。
表7在以群组4至7(PK群体)的递送剂量口服吸入PRS-060/AZD1402后的血清PK参数
缩写：D＝剂量，h＝小时，min＝最小值，max＝最大值，MRT＝平均停留时间，PK＝药代动力学。
an＝2
bn＝5
注意：Tmax所示的值为中值(最小值，最大值)
在IV施用于群组8和9后，平均(SD)血清PRS-060/AZD1402指示快速消除阶段，其中t1/2为在群组4至7中观察到的吸入剂量的大约一半(图6和7以及表8)。对于群组8与9之间IV剂量增加2倍(从1mg增加到2mg)，平均t1/2、MRTinf、Vz、Vss和CL相似，而平均Cmax、AUClast和AUC0-24增加大约2倍(表8)。在给药的受试者中，虽然群组8中在给药后7天和30天，PRS-060/AZD1402水平为BLOQ，但是对于群组9，1名受试者直到给药后30天都具有PRS-060/AZD1402水平。此受试者包括在图6和7中，但被认为是确定终末期PK参数(t1/2、AUCinf、CL/F和Vz/F)的异常值并且不包括在表8中。另外，在同一群组9受试者中观察到给药前第1天的水平为2.23ng/mL，这可能反映了血清中存在的人泪脂质运载蛋白对测定的干扰。然而，预计不会影响PK，因为这占Cmax的1.2％。
表8群组8和9(PK群体)的静脉内施用后的血清PK参数
缩写：D＝剂量，h＝小时，min＝最小值，max＝最大值，PK＝药代动力学。
注意：Tmax所示的值为中值(最小值，最大值)。
单剂量口服吸入后的吸收时间由与IV输注后相比较长的t1/2表示，因此基于来自以1mg输注的群组8(6名受试者)和以2mg输注的群组9(5名受试者)的11名受试者的平均混合MRTinf来确定平均吸收时间(MAT)(表9)。两个IV群组的平均(SD)MRTinf为1.45(0.202)小时，并且在吸入PRS-060/AZD1402剂量后的7.76与11.49小时之间。因此，当考虑具有最完整数据的较高剂量群组(其中n＝5或6)时，MAT在7.45至10.04小时范围内。
此外，通过将群组4至7的吸入后平均AUCinf与IV群组9(2mg)的平均AUCinf进行比较确定吸入剂量的绝对生物利用度在大约6.99％至13.8％范围内(表10)。
表9平均吸收时间确定
缩写：h＝小时，IV＝静脉内，MAT＝平均吸收时间，MRT＝平均停留时间。
注意：**MAT＝MRTinf INH-MRTinfIV
表10生物利用度确定群组9
缩写：AUCinf＝从时间零到无穷的曲线下面积，h＝小时，IV＝静脉内。
还评价了PRS-060/AZD1402的尿液PK曲线。收集尿液样品以用于给药后48小时的吸入剂量。在此研究中，在3名受试者中检测到PRS-060/AZD1402浓度。在IV群组(群组8和9)中未观察到尿PRS-060/AZD1402水平。尿PK参数的总结在表11中示出，这表明尿液中作为未改变的PRS-060/AZD1402排出的剂量分数非常低。因此，未改变的PRS-060/AZD1402的尿排泄可能被认为是次要的消除途径。
所有群组在给药后30天的ADA结果被确认为阴性。
表11 PRS-060/AZD1402的尿液浓度
缩写：Ae＝尿液中排出的药物总量。
(iii)探索性终点(pSTAT6抑制)：
对群组2至7中的受试者进行IL-4离体全血刺激，并确定对应的pSTAT6水平。采样时程期间受试者中％pSTAT6+CD3细胞的平均值和标准偏差在图2中提供。从群组4(递送剂量8.00mg)开始观察到pSTAT6的抑制。来自群组4和5(递送剂量分别为8.00mg和24.0mg)中受试者的结果表明，在吸入后4至8小时之间，对pSTAT6+CD3细胞的％的抑制最高。来自群组6和7(递送剂量分别为72.0mg和160mg)中受试者的结果表明，在给药后1小时直到24小时，对pSTAT6+CD3细胞的％的抑制有效且持久。
对离体全血活化的抑制的PK/PD分析(图3)表明，在吸入PRS-060/AZD1402后，下游STAT6磷酸化呈剂量依赖性抑制，其中受试者之间的变化较小。在0.35nM下计算IC50值。
F.讨论和结论
在8.00mg或更高的递送剂量下观察到吸入的PRS-060/AZD1402的全身暴露。吸入后血清PK缓慢下降表明吸收驱动的消除。在最高吸入递送剂量(160mg)下，血清PRS-060/AZD1402水平的高度可变性阻止了剂量-比例关系被限定。对于IV剂量增加2倍(1mg增加到2mg)，平均t1/2、MRTinf、Vz、Vss和CL相似，而平均Cmax、AUClast和AUC0-24增加大约2倍。
具有PRS-060/AZD1402分子量(17kDa)的蛋白质可经肾脏清除，并且组织分布较低。在IV PK群组中确定的大约10L的Vss值证实了低组织分布。因为在大多数受试者的尿液中未检测到并以其他方式以非常低的水平检测到的未改变的PRS-060/AZD1402的尿排泄，因此未确认尿PK参数。这表明至少对于未改变的PRS-060/AZD1402，尿排泄是次要的消除途径。
存在于血液中的CD3+细胞中pSTAT6的抑制与全身暴露相关，并且从8.00mg递送剂量开始观察到。每个群组的受试者中pSTAT6+CD3细胞的％的可变性是由于PRS-060/AZD1402全身暴露的变化。这些结果表明PRS-060/AZD1402吸入不影响到达全身循环并且可有效抑制IL-4Rα下游的信号传导的分子的稳定性和活性。
来自口服吸入和IV施用的所有群组的任何受试者均未记录到表明使用PRS-060/AZD1402的潜在风险的阳性ADA结果。此外，在任何受试者中均未检测到ADA。
总的来说，在此研究中未观察到安全性问题。任何TEAE的发生率为34.7％(25名受试者)：安慰剂为33.3％(6名受试者)，并且PRS-060/AZD1402为35.2％(19名受试者)。在PRS-060/AZD1402受试者中看到的发生率与在安慰剂受试者中看到的发生率相似。任何TEAE的发生率与施用的剂量无关。最常报告的TEAE是6名受试者(8.3％)的头痛(7个事件)，其次是5名受试者(6.9％)的上呼吸道感染(5个事件)。
没有TEAE被报告为绝对相关、很可能相关或绝对无关。报告为可能相关的药物相关TEAE的发生率为13.9％(10名受试者[PRS-060/AZD1402中9名受试者和安慰剂中1名受试者])。药物相关TEAE包括头痛、嗜睡、咽干、胸膜痛、恶心、呼吸道感染和肌肉骨骼胸痛。
大多数TEAE是轻度的，并且所有事件都是可逆的。未报告重度TEAE。没有TEAE是严重的或导致中止。此研究中未发生死亡。
没有临床实验室评价导致任何临床上显著的异常或相对于基线的变化。在此研究中没有注意到个体临床上显著的异常。
在生命体征、任何肺力学测量(包括FEV1/FVC比率)或ECG评价中均未观察到明显变化。
个体受试者对味道特征评估的反应表明，没有与PRS-060/AZD1402或安慰剂相关联的不愉快的味道或气味。基于此，研究药物(雾化药物产品)的重复使用被认为是可能的。
总之，健康男性成年受试者的单次吸入剂量和单次IV剂量的PRS-060/AZD1402是安全且良好耐受的。吸入后，观察到PRS-060/AZD1402的剂量相关全身暴露，其中曲线表明吸收驱动的消除，并与分子的PD效应密切相关。也可选择未观察到吸入PRS-060/AZD1402的全身暴露的剂量。
实施例3.评估患有轻度哮喘的受试者通过口服吸入施用的多剂量PRS-060/AZD1402的安全性、耐受性和药代动力学的剂量递增单盲研究
实施例3提供了此研究中群组1-3的数据，其中群组1-5的数据提供于实施例4中。由于临床试验尚未完成，整个临床研究的数据锁定并且研究报告的最终数据输出尚未产生。
A.研究目标和概述
本实施例描述了一项安慰剂对照、单盲、随机、剂量递增研究，所述研究通过向招募的患有轻度哮喘的受试者口服吸入多个剂量PRS-060/AZD1402来进行。研究的主要目标是评价患有轻度哮喘的男性和非怀孕、非母乳喂养的女性受试者的多个吸入剂量PRS-060/AZD1402的安全性和耐受性。研究的次要目的是评价轻度哮喘男性受试者和轻度哮喘非怀孕、非母乳喂养女性受试者在多个吸入剂量PRS-060/AZD1402之后的血清和尿液药代动力学(PK)，评价针对PRS-060/AZD1402的抗药物抗体(ADA)的潜在开发，以及评价接受多个吸入剂量PRS-060/AZD1402或安慰剂的轻度哮喘患者的呼出气中一氧化氮浓度(FeNO)分数相对于基线的变化。研究的探索性目标包括PRS-060/AZD1402对药效动力学生物标志物的作用，诸如对IL-4/IL-13途径的离体全血活化的抑制。
符合纳入和排除标准(参见下文)的53名受试者被招募并分配到5个群组：群组1和群组2，8名受试者(各自包括6名积极受试者，2名安慰剂受试者)；群组3，18名受试者(12名积极，6名安慰剂)；群组4，8名受试者(6名积极受试者和2名安慰剂受试者)；以及群组5，11名受试者(9名积极，2名安慰剂)。除群组5外，每个群组有2名前哨受试者以1:1随机分组至积极PRS-060/AZD1402和安慰剂给药。对每个群组的剩余受试者以对于群组1和群组2的5:1、对于群组3的11:5、以及对于群组4的5:1随机分组至PRS-060/AZD1402或安慰剂。
对于群组1至5，招募的受试者通过口服吸入接受多剂量的作为雾化溶液的PRS-060/AZD1402或匹配安慰剂，从第1天至第9天每天两次(BID)(每12小时一次，持续9天)，并且在第10天早晨一次。群组1中招募的受试者以5.0mg标称剂量接受PRS-060/AZD1402；相当于每天两次给与的2.0mg递送剂量，不同之处在于在第10天仅施用第一早晨剂量。群组2、3、4和5中招募的受试者按照表12接受剂量。在审查如实施例2所述的第1阶段单次递增剂量研究中获得的数据和由临床前毒理学研究设定的预定暴露限之后决定剂量。前一个群组给药完成与下一个群组给药开始之间有至少7天，群组5除外。对于每个群组，前哨受试者在群组中的剩余受试者之前至少48小时给药，群组5除外。在审查前哨受试者的数据以确认结果有利之后，向群组的剩余合格受试者施用相同的剂量水平。剩余受试者在开始吸入后间隔至少30分钟给药。审查所有安全性数据和PK数据，以确定是继续下一个群组还是延迟、停止或修改向下的剂量递增。
表12 PRS-060/AZD1402和匹配安慰剂的剂量
基于以下标准将受试者招募到研究中：(1)体重指数(BMI)为18-35；(2)是不吸烟者或筛选前3个月内吸烟不超过两次的戒烟者的受试者(通过筛选访视时尿可替宁<500ng/mL确定)；(3)男性和非怀孕、非母乳喂养的女性；(4)与有生育潜力的妇女性活跃的男性同意在用研究药物治疗期间以及最后剂量的研究药物后另外的90天内遵循高效避孕方法。与可育男性性活跃的有生育潜力的妇女同意在参与试验期间和最后剂量的研究药物后90天内遵循双重避孕方法的说明；(5)有记录的轻度哮喘诊断；(6)18至55岁；(7)FEV1和FEV1/用力肺活量(FVC)比率≥0.7预测的肺功能≥70％；(8)在筛选时和研究资格预审期间，FeNO≥35ppb。
另外，符合以下标准中任一项的受试者未被招募：(1)在研究者看来，可能因参与研究而使受试者处于风险中、影响研究结果或影响受试者参与研究的能力的任何临床上显著的医学病症的病史或临床表现。吸毒或酗酒史；(2)可能使受试者在参与研究期间处于危险中的感染史或已知重大感染，包括甲型、乙型或丙型肝炎、人免疫缺陷病毒(HIV)、结核病(即干扰素[IFN]-γ释放测定[IGRA]，
TB-Gold的阳性结果)；(3)过去10年内的癌症病史(对于乳腺癌为20年)，但已经治疗并认为治愈的皮肤的基底细胞癌和鳞状细胞癌或宫颈原位癌除外。任何淋巴瘤病史都不被允许；(4)在研究期间第1天或计划住院手术或住院治疗后4周内出现的任何临床上显著的疾病、感染、医疗/手术规程或创伤；(5)如由主要研究者判断的临床化学、血液学或尿液分析结果的任何临床上显著的异常；(6)可能是慢性或急性的任何原因的复发性持续性“干眼综合征”的重大病史，这可能影响与靶向PRS-060/AZD1402的ADA(结构上与泪脂质运载蛋白相关)的潜在性相关联的安全性数据的解释；(7)在第1天之前4周内接受过活疫苗或减毒疫苗的受试者；(8)有提示异常免疫功能的病史的受试者；(9)任何生物疗法后的过敏反应史和对研究产品配方的任何组分的已知过敏或反应史；(10)无法与研究者进行良好沟通(即语言问题、智力发育不良或脑功能受损)；(11)在前16周内参加新化学实体的任何临床研究或在研究药物的第一剂量之前的前12周内或5个半衰期内(以较长者为准)的上市药物临床研究；(12)在前12周内献血450mL或更多；(13)在研究期间或最后剂量的研究药物后90天内怀孕或母乳喂养或计划怀孕的妇女；(14)与有生育潜力的女性伴侣性活跃且未做过输精管切除术并且第1天至最后剂量的研究药物后90天不同意高效避孕方法的男性。与可育男性伴侣性活跃并且不同意在第1天至最后剂量的研究药物后90天内使用至少一种屏障的双重避孕方法的有生育潜力的妇女；(15)过去有危及生命的哮喘发作；(16)筛选前规定时间内使用过以下药物中的任一种：长效β2激动剂(筛选前4周内未使用)、抗IgE或抗-IL-5疗法(筛选前6个月)、筛选前16周内吸入的皮质类固醇(每天>500μg二丙酸倍氯米松(BDP)或等效物)、筛选时或筛选前4周内或随机分组时的任何吸入的皮质类固醇、筛选前5年内用于治疗哮喘或呼吸道感染的口服或可注射类固醇、筛选前4周内鼻内类固醇、筛选前4周内局部类固醇、筛选前2周内白三烯拮抗剂、或筛选前1周内黄嘌呤(不包括咖啡因)、抗胆碱能药或色甘酸盐。
B.研究程序
研究包括筛选期间的研究前评估(第-21天(施用研究药物前21天)至第-2天)。在筛选资格时和在第-1天(导入)评估FeNO以确认资格。将在两种情况下FeNO≥35的受试者随机分组到研究中以接受PRS-060/AZD1402或安慰剂。在第-1天(导入)，即他们接受第一剂量PRS-060/AZD1402或匹配安慰剂的前一天，受试者入住医院/研究现场；受试者在施用最后剂量(第10天)后48小时(第12天)离开。在第1天早晨，使用InnoSpire Go雾化器(Philips)施用研究药物PRS-060/AZD1402或安慰剂。在研究期间的预定时间点进行安全性和PK评估。在第1天和第10天施用早晨剂量后进行完整的PK曲线。然后受试者在第12天早晨从诊所出院，并在他们在第10天接受最后剂量的研究药物后第17天(±1天)和第40天(±3天)返回进行安全性随访、PK和PD评估。
C.终点和评估
研究的主要终点是安全性/耐受性，通过在研究期间持续进行基础上的不良事件(AE)、生命体征、1秒用力呼气量(FEV1)、心电图(ECG)和实验室安全性测试进行评估。在研究参与(从第一次施用研究药物时开始)以及直到最后剂量的研究药物后30天期间监测受试者的AE。对任何正在进行的重度AE(SAE)进行随访，直到消退或稳定。生命体征的评估包括体温、收缩压和舒张压读数(mm Hg)、脉搏(每分钟心跳次数[BPM])和呼吸频率(每分钟呼吸频率[BRPM])。收集血液和尿液样品用于实验室评估，包括血液学、血清化学、尿液分析和妊娠筛选。如果同时收集，则在血液收集之前的预定时间点进行三次12导联ECG。
对于主要终点，接受1个剂量PRS-060/AZD1402的所有受试者被纳入安全性分析。根据AE、生命体征、肺功能测试(PFT)、ECG和实验室数据评估安全性。描述了所有AE、体检、生命体征、PFT和ECG评估加上潜在临床问题的安全性实验室异常。安全性数据以表格和/或图形形式提供，并视情况根据剂量群组和时间进行描述性总结。视情况对绝对值数据和相对于基线数据的变化进行总结。
使用监管活动医学词典(MedDRA)系统器官分类和首选术语对AE进行编码。根据第一次给药之前或之后的发作日期，所有AE都被表征为治疗前和治疗紧急AE(TEAE)。按最大严重程度、SAE、评估为与研究药物相关的AE和导致研究药物中止的AE提供具有AE的受试者的所有AE的发生率表。
对于ECG分析，在给药前进行三次ECG测量，并在给药后20分钟、30分钟和60分钟进行单次测量，并对之后的每次测量进行三次重复。在第1天给药前进行的三次ECG测量的平均值用作所有给药后比较的患者的基线校正QT间隔(QTc)值。总结了ECG和实验室测量的变化。
研究的次要终点是PK参数、血清中针对PRS-060/AZD1402的抗药物抗体(ADA)的出现以及FeNO水平相对于基线的变化。在预定时间点收集用于PK分析和ADA评估的静脉血液样品和尿液样品。确定了以下PK参数：Cmax、Cave、Tmax、从时间零到给药后12小时的曲线下面积(AUC0-12)、AUC0-24、AUC0-last、AUCinf、从时间零到给药期结束的AUC累积率(Rac AUC0-τ)、RacCmax、时间变化参数(TCP)、剂量归一化暴露参数(AUC0-24/剂量、AUC0-last/剂量、AUCinf/剂量)、t1/2、吸入施用的表观清除率(CL/F)和基于终末期的分布容积(Vz/F)、PRS-060/AZD1402的Ae、fe以及CLr。每个尿液收集间隔累积确定Ae和fe(Ae[tx-tx+1]、Ae[0-tx]、fe[tx-tx+1]和fe[0-tx])。与安慰剂相比，FeNO水平相对于基线的变化被评估为药理活性的指标。使用标准化单次呼吸FeNO测试评价气道炎症，所述测试在筛选和任何随访访视期间进行，并且在给药期间每天进行5次(给药前一次，以及每个BID[每天2次]给药后两次)。在每次研究访视时都以相同的方式完成FeNO测试。受试者通过NIOX
气道炎症监测器吸入总肺容量，然后以50mL/秒(辅以视觉和听觉提示)呼气10秒。记录获得的值，并重复过程进行总共2次测量(至多重复2次)。
研究的探索性终点包括PRS-060/AZD1402对PD生物标志物的作用，诸如抑制与IL-4/IL-13途径相关的离体全血活化和探索性全身生物标志物，以及在给药之前、期间和之后对血浆和血清样品进行可溶性生物标志物分析。为了进行探索性分析，收集血浆、血清、外周血单核细胞(PBMC)和全血。血浆和血清用于评估与IL-4Rα途径相关联的潜在可溶性生物标志物。全血的离体刺激用于评估全身靶标参与。通过用IL-4离体刺激从受试者收集的全血，并且随后在预定时间点吸入后测量CD3+ T细胞亚群中的磷酸化STAT6(pSTAT6)来评价全血活化的抑制。使用DNA是为了鉴定与疾病相关的基因型。进行mRNA分析是为了鉴定具有与IL-4Rα途径相关且最有可能通过干预受益的基因特征的患者。
D.数据分析
(i)PK
对于次要终点，在研究过程中调查了前3个群组第1天和第10天的PRS-060/AZD1402的PK曲线，并在数据分析中使用了PK群体。暴露PK参数是根据标准非房室分析程序得出的。使用的软件是PhoenixTM 
v 8.0(Pharsight Corporation,USA)。根据表19，PK暴露参数的描述性统计包括算术平均值和标准偏差(SD)，并且生成描述性平均血清浓度相对于时间的曲线。
(ii)抗药物抗体形成
在研究过程中调查了PRS-060/AZD1402的免疫原性(抗-PRS-060/AZD1402抗体形成)。
(iii)PD-FeNO
FeNO被定义为PRS-060/AZD1402的PD标志物。列出了从PD分析中排除的任何受试者的可用PD数据，并且仅将PD分析集中的受试者包括在描述性总结表和总结/平均值图中。对PD分析集进行推断统计，以评估与安慰剂相比单独的所有剂量组和PRS-060/AZD1402剂量组的FeNO相对于基线的变化。FeNO是对数正态分布端点，这意味着分析是在对数标度上进行的。在提供结果时，积极与安慰剂之间的估计平均差异被转化为线性标度，并表示为相对于安慰剂组而言积极组相对于基线的降低百分比。在群组3完成时，进行了出于期中分析目的的数据快照(参见下文第(v)节)，以评估FeNO测量值的可变性，以便确保群组的适当效力，并且评估相对于安慰剂而言前三个剂量中的每一个相对于基线的变化的初步估计值。
(iv)FeNO的分析
将安慰剂受试者从所有三个群组合并到包含10名患者的一个组中。群组1和2各包括积极治疗的6名患者，并且群组3有12名患者。每位患者提供20次FeNO测量值：基线值，第1天至第9天早晨剂量后2h和晚上剂量后2h，以及第10天早晨剂量后2h进行记录。
每个积极组与安慰剂之间的对数FeNO平均差异的估计值来源于非线性混合效应模型，其中非线性部分是以下形式的sigmoidal emacs模型：
渐近线参数A由固定治疗组效应和受试者特定随机效应建模：
Aik＝βk+bi
对于治疗组k(k＝安慰剂，5mg、15mg和50mg标称剂量)和受试者i(i＝1至34)。随机效应解释了患者内部的相关性，并将受试者特定的渐近线考虑在内。为了将安慰剂组中不同的时程效应考虑在内，tmid参数包括两个固定效应水平：
tmid＝β积极+β安慰剂
为了数据的图形可视化，对在治疗期间(第1天至第10天)以及第11天和第12天观察到的FeNO降低进行绘制。图中包括第11天和第12天的FeNO测量值，以说明FeNO恢复到其基线水平。
E.结果
(1)FeNO结果
所有群组(n＝34)中的FeNO基线平均值(SD)为75.9(41.0)ppb，中值为62ppb。治疗10天后，安慰剂组的估计降低百分比为25.2％。表13示出了剂量组中的每个相对于安慰剂组的境地百分比。
表13FeNO结果：相对于安慰剂，相对于基线的平均降低百分比。估计的治疗效果代表治疗结束时(第10天)的降低。
*无效假设“积极与安慰剂之间没有差异”的双侧检验
(2)PK结果
在群组1中，受试者接受2mg的递送剂量后观察到有限的血清暴露，这不足以计算PK参数。在群组2中，受试者接受6mg的递送剂量后以及在群组3中，受试者接受20mg的递送剂量后观察到更完整的暴露数据，从而允许得出PK参数(图9)。群组1-3的主要结果如下：
·AUC和Cmax暴露量随剂量增加而增加(表14)。
·在整个10天给药期间采集给药前样品，并且观察到的血清水平表明在给药的第2天结束时已达到稳态(图9)。
·每天两次施用9天后第10天给药后的暴露量高于第1天第1剂量后的暴露量。观察到的增加与12h的给药间隔和单次递增剂量研究(实施例2)得出的PK特性合理一致。
尿PK分析尚未完成。
在群组1中，2名受试者在第17天返回低阳性ADA结果，随后在第40天的反应为阴性。在群组2中，没有ADA发现。
表14给药第10天的分析暴露数据
*由于缺乏具有可测量暴露量的受试者而未确定
(3)探索性终点-通过监测CD3+细胞中pSTAT6抑制的靶标参与结果：
对STAT6磷酸化的抑制进行评价，以评估PRS-060/AZD1402靶标参与。
在对来自群组1至3的现场中的任一个中招募的受试者的血液进行用IL-4的离体全血刺激，并确定对应的pSTAT6水平。在指定的时间点从在Nucleus Network临床现场招募的患者收集全血。用10ng/mL人IL-4刺激血液15分钟，然后，在红细胞裂解和白细胞固定后，对pSTAT6和CD3标志物进行染色，且随后进行FACS分析。采样时程期间受试者中％pSTAT6+CD3细胞的平均值和标准偏差在图10中提供。从群组2(递送剂量6.00mg)开始观察到pSTAT6的抑制。来自群组2和3(递送剂量为6.00mg和20.0mg)中受试者的结果表明，在第10天吸入后1至8小时之间，对pSTAT6+CD3细胞的％的抑制最高。
对离体全血活化的抑制的PK/PD分析(图11)表明，在吸入PRS-060/AZD1402后，下游STAT6磷酸化呈剂量依赖性抑制，其中受试者之间的变化较小。在0.306nM下计算IC50值。
(4)安全性结果
对于群组1(2.0mg递送剂量)，在生命体征、心电图、病理学(生物化学、血液学、尿液分析)方面未观察到临床相关的变化。在群组2(6.0mg递送剂量)中，从基线到第10天，有1名受试者的中性粒细胞和白细胞计数增加，此群组中的生命体征或心电图没有变化。在群组3中，1名受试者的白细胞计数升高被认为没有临床意义，在重复测试后恢复正常，另一名受试者的血红蛋白下降可能与重复抽血相关，此群组中的生命体征或心电图没有变化。
在3个群组中观察到轻度至中度不良事件。在群组1(递送剂量2.0mg)中，这些包括2名受试者的轻度皮疹、1名受试者给药后口干的体征。一名受试者在给药后出现咳嗽，但这在下一次给药前消退。在群组2(递送剂量6.0mg)中，1名受试者出现味觉障碍，1名受试者出现轻度关节疼痛，以及1名受试者出现轻度咳嗽。在群组3(递送剂量20.0mg)中，注意到头痛和口干可能与研究产品相关，观察到两次支气管痉挛发作但与给药无关，另外2名受试者出现短期喘息，并且指出这可能且很可能与给药相关。
总的来说，研究产品是良好耐受的，并且安全性审查没有影响所有3个群组剂量递增的决定。
G.讨论和结论
在患有轻度哮喘的患者中的PRS-060/AZD1402的这项多剂量递增研究中，相对于安慰剂，在群组1、2和3中观察到剂量相关的全身靶标参与，如由STAT6磷酸化的抑制所表示的。
总的来说，FeNO的降低表明吸入后肺中PRS-060/AZD1402的局部靶标参与。然而，关键的观察结果是，接受2mg递送剂量的受试者(群组1)中FeNO显著降低，这并未反映在全身pSTAT6靶标参与中，并且在这种每天两次递送剂量下，有限的血清暴露量不足以计算PK参数。这表明由FeNO降低所确定的PRS-060/AZD1402影响局部肺部炎症的能力之间存在脱节，而没有显著全身暴露和靶标参与。这为肺递送的靶向IL-4Rα的脂质运载蛋白突变蛋白可在没有全身暴露的情况下介导抗炎作用的概念提供支持。
实施例4.评估患有轻度哮喘的受试者通过口服吸入施用的多剂量PRS-060/AZD1402的安全性、耐受性和药代动力学的剂量递增单盲研究
实施例4提供了群组1-5的数据。群组1-3的数据提供于实施例3中。由于临床试验尚未完成，整个临床研究的数据锁定并且研究报告的最终数据输出尚未产生。
A.研究目标和概述
研究目标如以上实施例3中所述。
来自群组1-4的患者的基线特征在下表15中示出。
表15–基线特征
来自群组1-4的患者。
BMI，体重指数；FeNO，呼出气中一氧化氮浓度；FEV1，第一秒用力呼气量；FVC，用力肺活量；ppb，十亿分之一。
图16中示出了仅群组1至4的研究设计的示意图。
B.研究程序
研究程序如以上实施例3中所述。
C.终点和评估
终点和评估如以上实施例3中所述。
D.数据分析
(i)PK
对于次要终点，在研究过程中调查了前5个群组第1天和第10天的PRS-060/AZD1402的PK曲线，并在数据分析中使用了PK群体。暴露PK参数是根据标准非房室分析程序得出的。使用的软件是PhoenixTM 
v 8.0(Pharsight Corporation,USA)。根据表19，PK暴露参数的描述性统计包括算术平均值和标准偏差(SD)，并且生成描述性平均血清浓度相对于时间的曲线。
(ii)抗药物抗体形成
在研究过程中调查了PRS-060/AZD1402的免疫原性(如通过抗-PRS-060/AZD1402抗体形成所评估的)。
(iii)PD-FeNO
PD标志物FeNO的评估如实施例3第(iii)部分中所述。
(iv)FeNO的分析
通过在渐近线参数A的模型中添加基线FeNO作为协变量来更新实施例3(iv)中所述的非线性混合效应模型。
E.结果
(1)PK结果
在群组1中，受试者接受2mg的递送剂量后观察到有限的血清暴露，并且这不足以计算PK参数。在群组2中，受试者接受6mg的递送剂量后，在群组3中，受试者接受20mg的递送剂量后以及在群组4中，受试者接受60mg的递送剂量后观察到更完整的暴露数据，从而允许得出PK参数(图13)。群组1-5的主要结果如下：
·AUC和Cmax暴露量随剂量增加而增加(表16)。
·在整个10天给药期间采集给药前样品，并且观察到的血清水平表明在给药的第2天结束时已达到稳态(图13)。
·每天两次施用9天后第10天给药后的暴露量高于第1天第1剂量后的暴露量。观察到的增加与12h的给药间隔和单次递增剂量研究(实施例2)得出的PK特性合理一致。
·尿PK分析尚未完成。
表16给药第1天和第10天的分析暴露数据
*由于缺乏具有可测量暴露量的受试者而未确定
(3)抗药物抗体
在群组1中，在6名受试者中，2名在第17天返回低阳性ADA值；随后在第40天的反应为阴性。
在群组2中，没有ADA发现。
在群组3中，在12名受试者中，4名在第40天返回低阳性ADA值，并且1名受试者在第17天返回低阳性ADA值，其随后在第40天为阴性反应。
在群组4中，在6名受试者中，3名返回阳性ADA值。在这2名受试者中，仅在第40天具有低阳性ADA值。1名受试者在第17天和第40天都产生较高阳性ADA反应。
在群组5中，有一名受试者在第12天、第17天和第40天具有证实的阳性ADA结果，并且1名受试者在第40天具有证实的阳性ADA。
在任何预处理样品中或在同时接受PRS-060/AZD1402的样品中均未观察到ADA。
(4)探索性终点-通过监测CD3+细胞中pSTAT6抑制的靶标参与：
对STAT6磷酸化的抑制进行评价，以评估PRS-060/AZD1402靶标参与。
在对来自群组1至4而不是群组5的现场中的任一个中招募的受试者的血液中进行用IL-4的离体全血刺激，并确定对应的pSTAT6水平。在指定的时间点从在Nucleus Network临床现场招募的患者收集全血。用10ng/mL人IL-4刺激血液15分钟，然后，在红细胞裂解和白细胞固定后，对pSTAT6和CD3标志物进行染色，且随后进行FACS分析。采样时程期间受试者中％pSTAT6+CD3细胞的平均值和标准偏差在图14中提供。从群组2(递送剂量6.00mg)开始观察到pSTAT6的抑制。来自群组3和4(递送剂量为20.00mg和60.0mg)中受试者的结果表明，在第10天吸入后1至8小时之间，对pSTAT6+CD3细胞的％的抑制最高。
对离体全血活化的抑制的PK/PD分析(图15)表明，在吸入PRS-060/AZD1402后，下游STAT6磷酸化呈剂量依赖性抑制，其中受试者之间的变化较小。在0.30nM下计算IC50值。
(5)安全性结果：群组1-5
不良事件：在5个群组中观察到归因于药物的轻度至中度不良事件，总结如下：
在群组1(每天两次递送剂量2.0mg)中，不良事件包括2名受试者的轻度皮疹、1名受试者给药后口干的体征。一名受试者在给药后出现咳嗽，但这在下一次给药前消退。
在群组2(每天两次递送剂量6.0mg)中，不良事件包括1名受试者出现味觉障碍，1名受试者出现轻度关节疼痛，以及1名受试者出现轻度咳嗽，并且随后在给药结束后2天出现短暂且轻度的哮喘加剧。
在群组3(每天两次递送剂量20.0mg)中，不良事件包括指出可能与研究产品相关的头痛和口干。在单个受试者中观察到两次支气管痉挛事件，但与给药无关。在另外2名受试者中出现短期喘息，并分别指出可能和很可能与给药相关。
在群组4(每天两次递送剂量60.0mg)中，不良事件包括可能与研究产品相关的头痛。两次咳嗽发作和相关症状也被指出可能与研究产品绝对相关。在第9天，被诊断为患有上呼吸道感染的一名受试者经历短暂的支气管痉挛。一名受试者在第9天因咳嗽和高烧退出研究，被认为是很可能与药物相关的上呼吸道感染。此参与者还多次出现明显的晕厥发作，这可能与病毒性疾病相关。同一名参与者在给药期后还出现了唇疱疹(持续)和胸闷的一个不良事件，这可能与病毒性疾病相关。另外，此受试者在返回给药后随访时被证实具有无关妊娠。妊娠的后续结果是流产，这与研究产品无关，并且可能是由于参与者的年龄(47岁)。
另外的安全性总结如下：
对于群组1(2.0mg每天两次递送剂量)，在生命体征、心电图、病理学(生物化学、血液学、尿液分析)方面未观察到临床相关的变化。
在群组2(6.0mg每天两次递送剂量)中，从基线至第10天，有1名受试者的中性粒细胞和白细胞计数增加。此群组中的生命体征或心电图没有变化
在群组3(20.0mg每天两次递送剂量)中，1名受试者的白细胞计数升高被认为没有临床意义，在重复测试后恢复正常，另一名受试者的血红蛋白下降可能与重复抽血相关。此群组中的生命体征或心电图没有变化
在群组4(60.0mg每天两次递送剂量)中，一名参与者在给药前中性粒细胞计数较低，并且与研究产品无关。还有一例轻度暂时性淋巴细胞减少症和中性粒细胞减少症被认为不是显著的。一名受试者表现出血液学波动，并且血红蛋白下降，并且治疗后的随访结果与其第1天的结果一致。观察到一名受试者的给药前胆红素升高(在筛选时正常)，所述胆红素在研究期间继续增加，但在计划外访视时降低。然而，它仍然很高，并且不良事件仍在持续。
在群组5(0.2mg每天两次递送剂量)中，在招募的11名受试者中的9名中观察到26个轻度至中度不良事件。没有不良事件被认为是严重的或重度的。26个AE中有20个被认为是“轻度”，其中5个被认为“可能相关”。6个不良事件被认为是中度性质的，其中3个被认为“可能相关”，这是在接受安慰剂的一名受试者中观察到的。剩余3个中度AE被认为“无关”。群组5中观察到的所有AE都消退了。临床研究者认为所有呼吸量测定、实验室、ECG和生命体征均无临床意义。安全性审查委员会一致决定所述剂量水平是良好耐受的。
总的来说，此研究中研究产品是良好耐受的，并且安全性审查没有影响所有5个群组剂量递增和/或继续下一个群组的决定。
表17提供了群组1-4的不良事件的总结，所述不良事件发生在≥5％的总体患者中a
a百分比基于首选术语，即按首选术语发生在≥5％的总体患者中的AE发生率
bAE来自群组1-4，其发生在≥5％的总体患者中
cAZD1402/PRS-060的递送剂量为2mg、6mg、20mg和60mg
观察到一次导致流产的严重AE的妊娠。研究者认为这是由于患者的年龄，并且与研究药物无关
AE，不良事件；m，事件数；n，报告有特定AE的患者数；N，每个治疗组的患者总数
(6)群组1-5：FeNO结果
群组1-4(n＝42)的FeNO基线平均值(SD)为75.8(41.2)ppb，中值为62ppb，并且范围为28-178ppb。更新的非线性混合效应模型(包括基线FeNO作为协变量)用于估计平均降低百分比。治疗10天后，安慰剂组(n＝12)的估计降低百分比为26.2％。
表18相对于安慰剂，FeNO相对于基线的平均降低百分比。估计的治疗效果代表治疗结束时(第10天)的降低。
*无效假设“积极与安慰剂之间没有差异”的双侧检验
对群组5的FeNO数据进行分析，递送剂量为0.2mg，表明相对于安慰剂，FeNO相对于基线没有降低。
G.讨论和结论
在患有轻度哮喘的患者中的PRS-060/AZD1402的这项多剂量递增研究中，相对于安慰剂，在群组1-5中观察到剂量相关的全身靶标参与(即递送剂量为2mg、6mg、20mg、60mg和0.2mg)，如由STAT6磷酸化的抑制所表示的。
总的来说，FeNO的降低表明吸入后肺中PRS-060/AZD1402的局部靶标参与。然而，关键的观察结果是，接受2mg递送剂量的受试者(群组1)中FeNO显著降低，这并未通过显著抑制作用反映在全身pSTAT6靶标参与测定中，因为在这种每天两次递送剂量下，观察到的有限的全身暴露不足以抑制此IL-4诱导的反应。这表明PRS-060/AZD1402影响由FeNO降低所确定的局部肺部炎症的所示能力之间存在脱节，但没有可检测的全身暴露和相关的全身靶标参与。这为肺递送的靶向IL-4Rα的脂质运载蛋白突变蛋白可在没有可检测的全身暴露的情况下介导抗炎作用的概念提供支持。
表19药代动力学参数
参考文献
上面引用了许多出版物，以便更全面地描述和公开本发明以及本发明所属的现有技术水平。下面提供这些参考文献的完整引用。这些参考文献中的每个的全部内容并入本文。
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序列
表20
Claims (69)
1.一种用于治疗人受试者的哮喘的方法，其中所述方法包括每天至少一次通过吸入向所述受试者施用治疗有效量的包含SEQ ID NO:1中列出的氨基酸序列的抗IL-4受体α(IL-4Rα)脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为约0.1mg至约160mg。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为至少约8mg。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述递送剂量导致所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的全身暴露。
4.如权利要求2或3中任一项所述的方法，其中向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段导致抑制所述受试者的CD3+T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。
5.如权利要求4所述的方法，其中施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段导致至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％或至少约99％抑制所述受试者的CD3+T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。
6.如权利要求2或3所述的方法，其中施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段导致抑制CD3+T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化，其中IC50为约10nM或更低。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量小于约2mg。
8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段后，呼出气中一氧化氮浓度(FeNO)降低。
9.如权利要求8所述的方法，其中在向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段后，FeNO降低至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％或至少50％。
10.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中通过雾化向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。
11.如权利要求1所述的方法，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为约0.2mg至约60mg。
12.如权利要求1或11所述的方法，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为至少约6mg。
13.如权利要求12所述的方法，其中至少约6mg的所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量每天两次施用。
14.如权利要求12或13所述的方法，其中所述递送剂量导致所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的全身暴露。
15.如权利要求12-14中任一项所述的方法，其中向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段导致抑制所述受试者的CD3+T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。
16.如权利要求15所述的方法，其中施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段导致至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％或至少约99％抑制所述受试者的CD3+T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。
17.如权利要求12-14所述的方法，其中施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段导致抑制CD3+T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化，其中IC50为约10nM或更低。
18.如权利要求1或11所述的方法，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为约2mg或更低。
19.如权利要求18所述的方法，其中约2mg或更低的所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量每天两次施用。
20.如权利要求11或18或19所述的方法，其中所述递送剂量导致所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的局部肺暴露。
21.如权利要求11-20中任一项所述的方法，其中在向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段后，呼出气中一氧化氮浓度(FeNO)降低。
22.如权利要求21所述的方法，其中在向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段后，FeNO降低至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％或至少50％。
23.如权利要求11-22中任一项所述的方法，其中通过雾化向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。
24.一种包含SEQ ID NO:1中列出的氨基酸序列的抗IL-4受体α(IL-4Rα)脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其用于治疗人受试者的哮喘的方法中，其中所述方法包括每天至少一次通过吸入向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的步骤，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为约0.1mg至约160mg。
25.根据权利要求24所述使用的IL-4Rα脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为至少约8mg。
26.根据权利要求25所述使用的IL-4Rα脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中所述递送剂量导致所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的全身暴露。
27.根据权利要求25或26中任一项所述使用的IL-4Rα脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段导致抑制所述受试者的CD3+T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。
28.根据权利要求27所述使用的IL-4Rα脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段导致至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％或至少约99％抑制所述受试者的CD3+T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。
29.根据权利要求25或26所述使用的IL-4Rα脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段导致抑制CD3+T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化，其中IC50为约10nM或更低。
30.根据权利要求24所述使用的IL-4Rα脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量低于约2mg。
31.根据权利要求24至30所述使用的IL-4Rα脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中在向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段后，呼出气中一氧化氮浓度(FeNO)降低。
32.根据权利要求31所述使用的IL-4Rα脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中在向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段后，FeNO降低至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％或至少50％。
33.根据权利要求24-32中任一项所述使用的IL-4Rα脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中通过雾化向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。
34.根据权利要求24所述使用的IL-4Rα脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为约0.2mg至约60mg。
35.根据权利要求24或34所述使用的IL-4Rα脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为至少约6mg。
36.根据权利要求35所述使用的IL-4Rα脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中至少约6mg的所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量每天两次施用。
37.根据权利要求35或36所述使用的IL-4Rα脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中所述递送剂量导致所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的全身暴露。
38.根据权利要求35-37中任一项所述使用的IL-4Rα脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段导致抑制所述受试者的CD3+T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。
39.根据权利要求38所述使用的IL-4Rα脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段导致至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％或至少约99％抑制所述受试者的CD3+T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。
40.根据权利要求35-37中任一项所述使用的IL-4Rα脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段导致抑制CD3+T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化，其中IC50为约10nM或更低。
41.根据权利要求24或34所述使用的IL-4Rα脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为约2mg或更低。
42.根据权利要求41所述使用的IL-4Rα脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中约2mg或更低的所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量每天两次施用。
43.根据权利要求34或41或42所述使用的IL-4Rα脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中所述递送剂量导致所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的局部肺暴露。
44.根据权利要求34-43中任一项所述使用的IL-4Rα脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中在向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段后，呼出气中一氧化氮浓度(FeNO)降低。
45.根据权利要求44所述使用的IL-4Rα脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中在向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段后，FeNO降低至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％或至少50％。
46.根据权利要求34-45中任一项所述使用的IL-4Rα脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中通过雾化向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。
47.包含SEQ ID NO:1中列出的氨基酸序列的抗IL-4受体α(IL-4Rα)脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段用于制造用于治疗人受试者的哮喘的药物的用途，其中所述治疗包括每天至少一次通过吸入向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为约0.1mg至约160mg。
48.如权利要求47所述的用途，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为至少约8mg。
49.如权利要求48所述的用途，其中所述递送剂量导致所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的全身暴露。
50.如权利要求48或49所述的用途，其中向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段导致抑制所述受试者的CD3+T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。
51.如权利要求50所述的用途，其中施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段导致至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％或至少约99％抑制所述受试者的CD3+T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。
52.如权利要求48或49所述的用途，其中施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段导致抑制CD3+T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化，其中IC50为约10nM或更低。
53.如权利要求47所述的用途，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量小于约2mg。
54.如权利要求47-53中任一项所述的用途，其中在向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段后，呼出气中一氧化氮浓度(FeNO)降低。
55.如权利要求54所述的用途，其中在向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段后，FeNO降低至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％或至少50％。
56.如权利要求47-55中任一项所述的用途，其中通过雾化向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。
57.如权利要求47所述的用途，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为约0.2mg至约60mg。
58.如权利要求47或57所述的用途，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为至少约6mg。
59.如权利要求58所述的用途，其中至少约6mg的所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量每天两次施用。
60.如权利要求58或59所述的用途，其中所述递送剂量导致所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的全身暴露。
61.如权利要求58-60中任一项所述的用途，其中向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段导致抑制所述受试者的CD3+T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。
62.如权利要求61所述的用途，其中施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段导致至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％或至少约99％抑制所述受试者的CD3+T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化。
63.如权利要求58-60中任一项所述的用途，其中施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段导致抑制CD3+T细胞中IL-4刺激的STAT6磷酸化，其中IC50为约10nM或更低。
64.如权利要求47或57所述的用途，其中所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量为约2mg或更低。
65.如权利要求64所述的用途，其中约2mg或更低的所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的递送剂量每天两次施用。
66.如权利要求57或64或65所述的用途，其中所述递送剂量导致所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段的局部肺暴露。
67.如权利要求57-66中任一项所述的用途，其中在向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段后，呼出气中一氧化氮浓度(FeNO)降低。
68.如权利要求67所述的用途，其中在向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段后，FeNO降低至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％或至少50％。
69.如权利要求57-68中任一项所述的用途，其中通过雾化向所述受试者施用所述脂质运载蛋白突变蛋白或其变体或片段。
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