JP2022526524A - 喘息の処置のためのリポカリンムテイン - Google Patents

Abstract

本発明は、ヒト対象の喘息の処置に関し、処置は、治療的有効量の抗ＩＬ－４受容体アルファ（ＩＬ－４Ｒα）リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを該対象に吸入で投与することによるものであり、該リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量は、約０．１ｍｇ～約１６０ｍｇである。リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、例えば、少なくとも１日１回、１日１回、または１日２回投与されてもよい。

Description

本発明は、ヒト対象の喘息の処置に関し、処置は、治療的有効量の抗ＩＬ－４受容体アルファ（ＩＬ－４Ｒα）リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを該対象に吸入で投与することによるものであり、該リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量は、約０．１ｍｇ～約１６０ｍｇである。リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、例えば、少なくとも１日１回、１日１回、または１日２回投与されてもよい。

リポカリンは、抗体様機能を有するタンパク質性結合分子であり、これは、リガンドに結合するように自然に進化している。リポカリンは、脊椎動物、昆虫、植物、及び細菌を含む多くの生物に存在する。リポカリンタンパク質ファミリーのメンバー（Ｐｅｒｖａｉｚ，Ｓ．，＆ Ｂｒｅｗ，Ｋ．（１９８７）ＦＡＳＥＢ Ｊ．１，２０９－２１４）は、通常、少なく分泌されたタンパク質であり、単一のポリペプチド鎖を有する。それらは、種々の分子認識特性の範囲を特徴とする：様々な、主に疎水性分子（例えば、レチノイド、脂肪酸、コレステロール、プロスタグランジン、ビリベルジン、フェロモン、味覚物質、及び着臭剤）に結合する能力、特定の細胞－表面受容体への結合ならびにポリマー複合体のそれらの形成。過去に、主に輸送タンパク質として分類されていたが、目下、リポカリンが幅広い生理学的機能を果たすことが明らかである。これらは、レチノール輸送、嗅覚作用、フェロモンシグナル伝達、及びプロスタグランジンの合成における役割を含む。リポカリンは、また、例えば、免疫応答の調節及び細胞恒常性の媒介に関与している（例えば、Ｆｌｏｗｅｒ，Ｄ．Ｒ．（１９９６）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３１８，１－１４ ａｎｄ Ｆｌｏｗｅｒ，Ｄ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １４８２，９－２４に概説）。

リポカリンは、異常に低いレベルの全体的な配列保存を共有し、多くの場合、配列同一性は、２０％未満である。対照的に、全体的な折り畳みパターンは、高度に保存される。リポカリン構造の中央部分は、連続的に水素結合したβバレルを形成するように、それ自体が閉じられて単一の８本鎖逆平行βシートから構成される。このβバレルは、中央の空洞を形成する。バレルの一端は、その底を横切るＮ末端ペプチドセグメント及びβストランドを接続する３つのペプチドループにより立体的にブロックされる。βバレルのもう一端は、溶媒に対して開放されており、４つの柔軟なペプチドループにより形成される標的結合部位を包含する。それは、それぞれが異なるサイズ、形状、及び化学的特性の標的に適合することが可能である様々な異なる結合モードを生じさせる別途剛直なリポカリン足場におけるループのこの多様性である（ｒｅｖｉｅｗｅｄ，例えば、上掲のＦｌｏｗｅｒ，Ｄ．Ｒ．（１９９６）；上掲のＦｌｏｗｅｒ，Ｄ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．（２０００）、またはＳｋｅｒｒａ，Ａ．（２０００）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １４８２，３３７－３５０に概説）。

リポカリン－１、涙プレアルブミン、またはフォンエブナー腺タンパク質とも称されるヒト涙リポカリン（ＴＬＰＣまたはＴｌｃ）は、元々、ヒト涙液の主要タンパク質（総タンパク質含有量の約３分の１）と記載されるが、また、前立腺、副腎、胸腺、乳腺、精巣、鼻粘膜、及び気管粘膜を含むいくつかの他の分泌組織、ならびに下垂体の副腎皮質刺激ホルモンにおいて同定されている。相同タンパク質は、アカゲザル、チンパンジー、ラット、マウス、ブタ、ハムスター、ウシ、イヌ、及びウマで発見されている。涙リポカリンは、他のリポカリンと比較した場合、非常に広範なリガンド特異性を示すという点で、及び比較的不溶性の脂質に対して高度に入り乱れた状態という点で、珍しいリポカリンメンバーである（Ｒｅｄｌ，Ｂ．（２０００）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １４８２；２４１－２４８を参照）。涙リポカリンのこの特徴は、角膜での細菌及び真菌の成長を阻害するタンパク質の機能に起因している。様々な化学物質の部類の驚くべき数の親油性化合物、例えば、脂肪酸、脂肪アルコール、リン脂質、糖脂質、及びコレステロールは、このタンパク質の内因性リガンドである。興味深いことに、他のリポカリンとは対照的に、涙リポカリンに結合するリガンド（標的）の強度は、アルキルアミド及び脂肪酸の両方に対し炭化水素尾部の長さと相関する。従って、涙リポカリンは、可溶性が最小の脂質に最も強く結合する（Ｇｌａｓｇｏｗ，Ｂ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｃｕｒｒ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．１４，３６３－３７２；Ｇａｓｙｍｏｖ，Ｏ．Ｋ．ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ１４３３，３０７－３２０）。涙リポカリンの１．８－Ａ結晶構造は、βバレルの内部に異常に大きな空洞を明らかにした（Ｂｒｅｕｓｔｅｄｔ，Ｄ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０，１，４８４－４９３）。

国際特許出願ＷＯ９９／１６８７３は、４つのペプチドループの領域に変異アミノ酸位置を有するリポカリンファミリーのポリペプチドについて開示し、これは、結合ポケットを含む円筒状βバレル構造の端部に配置され、これは、Ｐｉｅｒｉｓ ｂｒａｓｓｉｃａｅのビリン結合タンパク質のアミノ酸位置２８～４５、５８～６９、８６～９９、及び１１４～１２９を含む線状ポリペプチド配列のセグメントに対応する。リポカリンファミリーのメンバーは、翻訳後修飾、例えば、涙リポカリンのリン酸化及びグリコシル化されることが報告されている（例えば、Ｙｏｕ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ３１，１８５３－１８６１）。それにもかかわらず、それらの分子認識特性のための翻訳後修飾は必要とされない。

国際特許出願ＷＯ００／７５３０８は、ジゴキシゲニンに特異的に結合するビリン結合タンパク質のムテインについて開示するが、国際特許出願ＷＯ０３／０２９４６３及びＷＯ０３／０２９４７１は、それぞれ、ヒト好中球ゼラチナーゼ結合性リポカリン（ｈＮＧＡＬ）及びアポリポタンパク質Ｄのムテインに関する。リポカリン多様体のリガンド親和性、特異性、及びフォールディング安定性を改善及び微調整するために、リポカリンファミリーの種々のメンバーを使用するさらなる様々なアプローチ（Ｓｋｅｒｒａ，Ａ．（２００１）Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７４，２５７－２７５；Ｓｃｈｌｅｈｕｂｅｒ，Ｓ．，ａｎｄ Ｓｋｅｒｒａ，Ａ．（２００２）Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．９６，２１３－２２８）例えば、さらなるアミノ酸残基の置換が提示されている。ＰＣＴ公開ＷＯ２００６／５６４６４は、低ナノモル範囲のＣＴＬＡ－４に対する結合親和性を有するヒト好中球ゼラチナーゼ関連リポカリンのムテインについて開示する。

国際特許出願ＷＯ２００５／１９２５６は、異なるまたは同じ標的リガンドに対する少なくとも１つの結合部位を有する涙リポカリンのムテインについて開示し、ヒト涙リポカリンのそのようなムテインの生成のための方法を提供する。このＰＣＴ出願によると、特定のアミノ酸は、涙リポカリンの１次配列、特に、成熟ヒト涙リポカリンのアミノ酸７～１４、２４～３６、４１～４９、５３～６６、６９～７７、７９～８４、８７～９８、及び１０３～１１０を含むループ領域内に伸び、結合親和性を有するムテインを生成するために変異導入を受ける。得られるムテインは、ナノモル範囲、ほとんどの場合、１００ｎＭ超の選択されたリガンド（Ｋ_Ｄ）に対する結合親和性を有する。国際特許出願ＷＯ２００８／０１５２３９は、ＩＬ－４受容体アルファを含む所与の非天然リガンドに結合する涙リポカリンのムテインについて開示する。結合親和性は、ナノモル範囲である。国際特許出願ＷＯ２０１１／１５４４２０は、ナノモル範囲でヒトＩＬ－４受容体アルファに結合するヒト涙リポカリンの高親和性ムテイン及びそのような高親和性ムテインを生成するための方法について記載する。国際特許出願ＷＯ２０１３／０８７６６０は、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路が喘息を含む疾患の病因に関与する障害を処置するためのヒト涙リポカリンのムテインの使用について記載する。

本発明は、喘息の最初のリポカリンベースの処置である抗ＩＬ－４受容体アルファ（ＩＬ－４Ｒα）ヒト涙リポカリン、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２のヒト内研究に基づいている。ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２のアミノ酸配列は、配列番号１として表２０に示される。ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２は、ＩＬ－４受容体アルファ（ＩＬ－４Ｒα）を拮抗し、吸入のために設計される。健常な対象において最初のヒト内研究を行って、吸入された単回漸増用量及び静脈内注入（ＩＶ）用量の安全性、忍容性、及び薬物動態（ＰＫ）を評価した。軽度の喘息を有する対象における２回目のヒト内研究を行って、吸入された複数回漸増用量の安全性、忍容性、及び薬物動態（ＰＫ）を評価した。ＡＺＤ１４０２／ＰＲＳ－０６０の吸入後、ＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化（ｐＳＴＡＴ６）の阻害により、全身ターゲットエンゲージメントを決定し、肺炎症のバイオマーカーである呼気中一酸化窒素濃度（ＦｅＮＯ）を、局所の経肺ターゲットエンゲージメントの指標として測定した。

本明細書で提示される、これらの研究の結果に基づいて、本発明は、ヒト対象の喘息を処置するための方法を提供し、方法は、治療有効量の配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む抗ＩＬ－４受容体アルファ（ＩＬ－４Ｒα）リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを該対象に吸入で投与することを含み、該リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量は、約０．１ｍｇ～約１６０ｍｇである。リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、少なくとも１日１回、１日１回、または１日２回投与されてもよい。

本発明は、さらに、ヒト対象の喘息を処置する方法に使用される、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む抗ＩＬ－４受容体アルファ（ＩＬ－４Ｒα）リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを提供し、方法は、該対象に、該リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを吸引により投与するステップを含み、該リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量は、約０．１ｍｇ～約１６０ｍｇである。リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、少なくとも１日１回、１日１回、または１日２回投与されてもよい。

加えて、本発明は、ヒト対象の喘息の処置に使用される薬品の製造のための配列番号１に記載のアミノ酸配列またはその多様体もしくはフラグメントを含む抗ＩＬ－４受容体アルファ（ＩＬ－４Ｒα）リポカリンムテインの使用を提供し、処置は、該リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを該対象に吸入で投与することを含み、該リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量は、約０．１ｍｇ～約１６０ｍｇである。リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、少なくとも１日１回、１日１回、または１日２回投与されてもよい。

本明細書に提示される、これらの研究の結果に基づいて、本発明は、ヒト対象の喘息を処置するための方法を提供し、方法は、少なくとも１日１回、配列番号１に記載のアミノ酸配列またはその多様体もしくはフラグメントを含む治療有効量の抗ＩＬ－４受容体アルファ（ＩＬ－４Ｒα）リポカリンムテインを該対象に吸入で投与することを含み、該リポカリンムテインの送達用量は、約０．１ｍｇ～約１６０ｍｇである。

本発明は、さらに、ヒト対象の喘息を処置する方法で使用される、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む抗ＩＬ－４受容体アルファ（ＩＬ－４Ｒα）リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを提供し、方法は、少なくとも１日１回、該リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを該対象に吸入で投与するステップを含み、送達用量の該リポカリンムテインは、約０．１ｍｇ～約１６０ｍｇである。

加えて、本発明は、ヒト対象の喘息の処置に使用される薬品を製造するための、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む抗ＩＬ－４受容体アルファ（ＩＬ－４Ｒα）リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの使用を提供し、処置は、少なくとも１日１回、該リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを該対象に吸入で投与することを含み、該リポカリンムテインの送達用量は、０．１ｍｇ～約１６０ｍｇである。

いくつかの実施形態では、該リポカリンムテインまたはそのフラグメントもしくは多様体の送達用量は、約０．２ｍｇ～約６０ｍｇである。いくつかの実施形態では、該リポカリンムテインまたはそのフラグメントもしくは多様体の送達用量は、約０．６ｍｇ～約６０ｍｇである。

いくつかの実施形態では、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含むリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、少なくとも１日１回、該対象に投与される。いくつかの実施形態では、該リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日１回、対象に投与されてもよい。いくつかの実施形態では、該リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日２回、対象に投与されてもよい。

いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、少なくとも１日、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、または少なくとも１０日間該対象に投与されてもよい。

いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、９日間で１日２回及び１０日目で１日１回、対象に投与されてもよい。

いくつかの実施形態では、実施例に基づいて、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量は、約０．１ｍｇ、約０．５ｍｇ、約２ｍｇ、約８ｍｇ、約２４ｍｇ、約７２ｍｇ、または約１６０ｍｇである。

いくつかの実施形態では、実施例に基づいて、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量は、約０．２ｍｇ、約２ｍｇ、約６ｍｇ、約２０ｍｇ、または約６０ｍｇである。いくつかの実施形態では、送達用量は、少なくとも１日１回投与される。いくつかの実施形態では、送達用量は、１日１回投与される。いくつかの実施形態では、送達用量は、１日２回投与される。

いくつかの実施形態では、実施例に基づいて、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量は、約０．２ｍｇ、約０．６ｍｇ、約２ｍｇ、約６ｍｇ、約２０ｍｇ、または約６０ｍｇである。いくつかの実施形態では、送達用量は、少なくとも１日１回投与される。いくつかの実施形態では、送達用量は、１日１回投与される。いくつかの実施形態では、送達用量は、１日２回投与される。

いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量は、実施例に示されるように、全身曝露を達成するのに十分である。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量により、実施例に示されるように、循環系に入る吸入リポカリンムテインの実質的な部分または検出可能な全身曝露がもたらされない。

いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量は、少なくとも約８ｍｇである。リポカリンムテインの全身曝露は、本明細書に報告されるように、少なくとも約８ｍｇの送達用量で観察された。

いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量は、少なくとも約６ｍｇである。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、少なくとも１日１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日２回、対象に投与される。リポカリンムテインの全身曝露は、本明細書に報告されるように、少なくとも約６ｍｇの送達用量で観察された。

他の実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量は、約２ｍｇまたは約２ｍｇ未満である。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、少なくとも１日１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日２回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、約２ｍｇまたは約２ｍｇ未満の送達用量でのリポカリンムテインの実質的な全身曝露はない。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインの全身曝露は、約２ｍｇまたは約２ｍｇ未満の送達用量では検出できない。本明細書で報告されるように、送達用量が約２ｍｇ未満であった場合、投与後３０日までに対象の血清中に検出可能なリポカリンムテインはない。それ故、この時間中には、検出不可能な全身曝露である。

いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量は、約０．６ｍｇまたは約０．６ｍｇ未満である。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、少なくとも１日１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日２回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、約０．６ｍｇまたは約０．６ｍｇ未満の送達用量でのリポカリンムテインの実質的な全身曝露はない。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインの全身曝露は、約０．６ｍｇまたは約０．６ｍｇ未満の送達用量では検出できない。

いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量は、約０．６ｍｇ超且つ約２ｍｇ未満である。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、少なくとも１日１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日２回、対象に投与される。

いくつかの実施形態では、例えば、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量が、少なくとも８ｍｇである場合、該対象にリポカリンムテインタンパク質またはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、該対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害がもたらされた。

いくつかの実施形態では、例えば、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量が、少なくとも約６ｍｇである場合、該対象にリポカリンムテインタンパク質またはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、該対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害がもたらされた。他の実施形態では、例えば、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量は、約２ｍｇまたは約２ｍｇ未満である場合、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、該対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の有意の阻害がもたらされない。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、少なくとも１日１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日２回、対象に投与される。

特定の実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の阻害がもたらされ得る。一実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の少なくとも約２０％の阻害がもたらされ得る。他の実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、例えば、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量が約２ｍｇまたは約２ｍｇ未満である場合、該対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の有意の阻害がもたらされない。

特定の実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の阻害がもたらされ得る。一実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の少なくとも約２０％の阻害がもたらされ得る。他の実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、例えば、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量が約０．６ｍｇまたは約０．６ｍｇ未満である場合、該対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の有意の阻害がもたらされない。

リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの投与により、該対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の有意の阻害がもたらされない任意の実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の１０％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満の阻害がもたらされ得る。

ヒト対象の喘息を処置する方法が本明細書で開示され、方法は、治療有効量の配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む抗ＩＬ－４受容体アルファ（ＩＬ－４Ｒα）リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを該対象に吸入で投与することを含み、送達用量の該リポカリンムテインにより、該対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害がもたらされる。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、少なくとも１日１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日２回、対象に投与される。特定の実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の阻害がもたらされ得る。一実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の少なくとも約２０％の阻害がもたらされ得る。

ヒト対象の喘息を処置する方法も本明細書で開示され、方法は、治療有効量の配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む抗ＩＬ－４受容体アルファ（ＩＬ－４Ｒα）リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを該対象に吸入で投与することを含み、送達用量の該リポカリンムテインにより、該対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の有意の阻害がもたらされない。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、少なくとも１日１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日２回、対象に投与される。

リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの投与により、該対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の有意の阻害がもたらされない任意の実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の１０％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満の阻害がもたらされ得る。

いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、約１０ｎＭ以下、約５ｎＭ以下、約４ｎＭ以下、約３ｎＭ以下、約２ｎＭ以下、約１ｎＭ以下、または約０．５ｎＭ以下のＩＣ_５０のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害がもたらされ得る。特定の実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、図３に示されるように、約０．３５ｎＭのＩＣ_５０で、ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化が阻害される。特定の実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、図１１に示されるように、約０．３０６ｎＭのＩＣ_５０で、ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化が阻害される。特定の実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、図１５に示されるように、約０．３０ｎＭのＩＣ_５０で、ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化が阻害される。

表１に示されるように、配列番号１として示されるアミノ酸配列を有するリポカリンムテインにより、約１．３ｎＭのＩＣ_５０で、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化が阻害される。

ヒト対象の喘息を処置するための方法が、本明細書で開示され、方法は、治療有効量の配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む抗ＩＬ－４受容体アルファ（ＩＬ－４Ｒα）リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを該対象に吸入で投与することを含み、送達用量の該リポカリンムテインにより、約１０ｎＭ以下、約５ｎＭ以下、約４ｎＭ以下、約３ｎＭ以下、約２ｎＭ以下、約１ｎＭ以下、または約０．５ｎＭ以下のＩＣ_５０の、ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害がもたらされる。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、少なくとも１日１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日２回、対象に投与される。特定の実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、約０．３５ｎＭのＩＣ_５０で、ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化が阻害される。特定の実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、約０．３０６ｎＭのＩＣ_５０で、ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化が阻害される。特定の実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、約０．３０ｎＭのＩＣ_５０で、ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化が阻害される。

本明細書に記載の本発明の実施形態のいずれにおいても、リポカリンムテインまたはそのフラグメントもしくは多様体は、吸入後の対象において約３時間～約７時間の半減期（ｔ_１／２）を有し得る。これらの値は、標準偏差を考慮して、表７で提供されるデータに基づく。

比較として、静脈内投与後、表８に示されるデータに基づいて、リポカリンムテインは、約１．５～２．５時間の半減期（ｔ_１／２）を有し得る。

本明細書に記載の本発明の実施形態のいずれにおいても、対象への投与後のリポカリンムテインのピーク血清濃度（Ｃ_ｍａｘ）は、約６ｎｇ／ｍｌ～約４００ｎｇ／ｍｌであってよい。これらの値は、標準偏差を考慮して、コホート４～７について表７に示されるデータに基づく。

本明細書に記載の本発明の実施形態のいずれにおいても、対象への投与後の該リポカリンムテインの経時的な血清濃度（ＡＵＣ_ｉｎｆ）は、約６０ｈ＊ｎｇ／ｍｌ～約５０００ｈ＊ｎｇ／ｍｌである。これらの値は、標準偏差を考慮して、コホート４～７について表７に示されるデータに基づく。
薬物動態学関連の略語（例えば、Ｃ_ｍａｘ及びＡＵＣ_ｉｎｆ）、ならびに、その意味の説明が以下の表１９で提供される。

本明細書に記載の本発明の実施形態のいずれにおいても、該リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを対象に投与した後、該対象の呼気中一酸化窒素濃度（ＦｅＮＯ）が低減し得る。特定の実施形態では、該リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを対象に投与した後、ＦｅＮＯは、対照対象と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、または少なくとも５０％低減し得、該対照対象は、該リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与されていないヒト対象である。対照対象は、同じ対象（リポカリンムテインの投与前にＦｅＮＯが評価される）または任意のリポカリンムテインを投与されていない異なる対象であってよい。一実施形態では、対照対象は、プラセボを投与されていてもよい。好適なプラセボは、生理学的に緩衝された食塩水、例えば、リポカリンムテインを製剤化するために使用される溶液、例えば、リン酸緩衝生理食塩水、を含んでもよい。

本明細書に提示されたデータは、（処置）対象の血清中に該リポカリンムテインの検出可能な全身曝露がない場合でさえ、ＦｅＮＯが減少し得ることを実証する。これは、リポカリンムテインの検出可能な全身曝露することなく、バイオマーカーとしてＦｅＮＯを使用して評価されるように、局所的な炎症の低減が達成され得ることを示し得る。それ故、約２ｍｇまたは約２ｍｇ未満のリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量により、吸入リポカリンの実質的な部分が循環器系に入らない局所肺曝露または検出可能な全身曝露の結果として、ＦｅＮＯの低減がもたらされ得る。従って、約２ｍｇまたは約２ｍｇ未満のリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量は、ヒト喘息患者に臨床的利点を提供し得る。それ故、約０．６ｍｇまたは約０．６ｍｇ未満のリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量により、吸入リポカリンの実質的な部分が循環器系に入らない局所肺曝露または検出可能な全身曝露の結果として、ＦｅＮＯの低減がもたらされ得る。従って、約０．６ｍｇまたは約０．６ｍｇ未満のリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量は、ヒト喘息患者に臨床的利点を提供し得る。

本明細書に記載の本発明の実施形態のいずれにおいても、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、対象に噴霧で投与されてもよい。

リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントが噴霧で投与される場合、公称用量または定量用量（ネブライザー中のリポカリンムテインの用量である）は、約０．２５ｍｇ～約４００ｍｇである。これは、本明細書に記載の実施例で使用されるＩｎｎｏＳｐｉｒｅ Ｇｏネブライザー（Ｐｈｉｌｉｐｓ）に存在する公称用量または定量用量である。本明細書に記載のように、異なるデバイスが吸入による投与のために利用可能であり、リポカリンムテインを投与するために使用される特定のデバイス中の公称用量または定量用量に基づく本発明による送達用量を容易に決定可能であることを、当業者は理解するであろう。

いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの公称用量は、少なくとも約２０ｍｇである。リポカリンムテインの全身曝露が、本明細書で報告されるように、少なくとも約２０ｍｇの公称用量で観察され、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを該対象に投与すると、該対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害がもたらされる。

いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの公称用量は、少なくとも約１５ｍｇである。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、少なくとも１日１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日２回対象に投与される。リポカリンムテインの全身曝露が、本明細書で報告されるように、少なくとも約１５ｍｇの公称用量で観察され、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを該対象に投与すると、該対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害がもたらされる。

他の実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの公称用量は、約５ｍｇまたは約５ｍｇ未満である。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、少なくとも１日１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日２回対象に投与される。いくつかの実施形態では、約５ｍｇまたは約５ｍｇ未満の公称用量でのリポカリンムテインの実質的な全身曝露はない。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインの全身曝露は、約５ｍｇまたは約５ｍｇ未満の公称用量では検出可能でない。本明細書で報告されるように、公称用量が約５ｍｇ未満である場合、投与後３０日間測定された（処置）対象の血清中に検出可能なリポカリンムテインはなく、それ故、この期間中の全身曝露は検出不可能であった。

いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの公称用量は、約１．５ｍｇまたは約１．５ｍｇ未満である。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、少なくとも１日１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日２回対象に投与される。いくつかの実施形態では、約１．５ｍｇまたは約１．５ｍｇ未満の公称用量でのリポカリンムテインの実質的な全身曝露はない。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインの全身曝露は、約１．５ｍｇまたは約１．５ｍｇ未満の公称用量では検出可能でない。本明細書で報告されるように、公称用量が約１．５ｍｇ未満である場合、投与後３０日間測定された（処置）対象の血清中に検出可能なリポカリンムテインはなく、それ故、この期間中の全身曝露は検出不可能であった。

いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの公称用量は、約１．５ｍｇ超且つ約５ｍｇ未満である。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、少なくとも１日１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日１回、対象に投与される。いくつかの実施形態では、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントは、１日２回対象に投与される。

ここで、本発明の原理を説明する実施形態及び実験は、以下の添付の図を参照して検討されることになる。

ＩＬ－４Ｒαに特異的なリポカリンムテイン（配列番号１を有するＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２）をｉｎ ｖｉｔｒｏで添加すると、全血中のＩＬ－４シグナル伝達が阻害され、ＩＬ－４刺激により誘導されるＳＴＡＴ６リン酸化（ｐＳＴＡＴ６）（図１Ａ）及びエオタキシン－３（図１Ｂ）、ＴＡＲＣ（図１Ｃ）、ならびにＭＤＣ（図１Ｄ）産生のレベルを低減させる。リポカリンムテインは、これらの機能的なｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおいて、参照ＩＬ－４Ｒα抗体（デュピルマブ）と同様の効力を有する。デュピルマブは、ＩＬ－４及びＩＬ－１３受容体のインターロイキン－４受容体サブユニットα（ＩＬ－４Ｒα）に対する完全ヒトＩｇ４モノクローナル抗体である。それは、通常、皮下注射で投与され、米国で、アトピー性皮膚炎及び中等度から重度の好酸球性喘息の処置用に承認される。 異なる送達用量で吸入ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２（配列番号１を有する）を投与された対象のＩＬ－４で刺激された全血におけるＳＴＡＴ６リン酸化（ｐＳＴＡＴ６）のｅｘ ｖｉｖｏ阻害を示す。 吸入ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２（配列番号１を有する）を投与された対象のＩＬ－４で刺激された全血におけるＳＴＡＴ６リン酸化（ｐＳＴＡＴ６）のｅｘ ｖｉｖｏ阻害を示す。ＳＴＡＴ６リン酸化の用量依存的阻害が観察され、ＩＣ_５０値は、０．３５ｎＭであった。 健常な対象において経口吸入により投与されたＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２（配列番号１として示される）の単回投与の薬物動態分析の結果を提供する。吸入ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の全身曝露は、８．００ｍｇ以上の送達用量で観察された。平均血清ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２濃度は、用量の漸増とともに増加した。吸入後の血清ＰＫのゆっくりとした低下が観察され、これは、吸収による排泄を示す。この図は、線形スケール（ＰＫ集団）のコホート４～７のみにおける、吸入ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の平均（ＳＤ）血清濃度、対、時間プロファイルを示す。ＳＤ＝標準偏差、ＰＫ＝薬物動態。 健常な対象において経口吸入により投与されたＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２（配列番号１として示される）の単回投与の薬物動態分析の結果を提供する。吸入ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の全身曝露は、８．００ｍｇ以上の送達用量で観察された。平均血清ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２濃度は、用量の漸増とともに増加した。吸入後の血清ＰＫのゆっくりとした低下が観察され、これは、吸収による排泄を示す。この図は、対数－線形スケール（ＰＫ集団）のコホート４～７のみにおける、吸入ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の平均（ＳＤ）血清濃度、対、時間プロファイルを示す。ＳＤ＝標準偏差、ＰＫ＝薬物動態。 健常な対象に静脈内投与により投与されたＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２（配列番号１として示される）の単回投与の薬物動態分析の結果を提供する。ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の平均血清レベルは、吸入用量を投与された対象で観察されたものの約半分のｔ_１／２の急激な排泄相を示した。この図は、線形スケール（ＰＫ集団）のコホート８（１ｍｇ）及びコホート９（２ｍｇ）における静脈内投与後のＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の平均（ＳＤ）血清濃度、対、時間プロファイル度を示す。ＳＤ＝標準偏差、ＰＫ＝薬物動態。 健常な対象に静脈内投与により投与されたＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２（配列番号１として示される）の単回投与の薬物動態分析の結果を提供する。ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の平均血清レベルは、吸入用量を投与された対象で観察されたものの約半分のｔ_１／２の急激な排泄相を示した。この図は、対数－線形スケール（ＰＫ集団）のコホート８（１ｍｇ）及びコホート９（２ｍｇ）における静脈内投与後のＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の平均（ＳＤ）血清濃度、対、時間プロファイルを示す。ＳＤ＝標準偏差、ＰＫ＝薬物動態。 プラセボ群ならびに２ｍｇ、６ｍｇ、及び２０ｍｇの送達用量に対するベースラインからの呼気中一酸化窒素濃度（ＦｅＮＯ）の平均変化率を示す。群平均は、ベースラインからのｌｏｇ（ＦｅＮＯ）の変化に基づいて計算され、線形スケールに逆変換され、パーセンテージとして表される。 １日２回の２、６、及び２０ｍｇのＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の送達用量の後の血清平均曝露プロファイルを示す。 異なる送達用量（２．０ｍｇ、６．０ｍｇ、及び２０ｍｇ）で吸入ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２（配列番号１を有する）を投与された対象のＩＬ－４で刺激された全血におけるＳＴＡＴ６リン酸化（ｐＳＴＡＴ６）のｅｘ ｖｉｖｏ阻害を示す。 吸入ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２（配列番号１を有する）を投与された対象のＩＬ－４で刺激された全血におけるＳＴＡＴ６リン酸化（ｐＳＴＡＴ６）のｅｘ ｖｉｖｏ阻害を示す。ＳＴＡＴ６リン酸化の用量依存的阻害が観察され、ＩＣ５０値は、０．３０６ｎＭであった。 プラセボ群（ｎ＝１２）及びコホート１～４の投与群のベースラインに対するＦｅＮＯの平均変化率を示す。群平均は、ベースラインからのｌｏｇ（ＦｅＮＯ）の変化に基づいて計算され、線形スケールに逆変換され、パーセンテージとして表される。 １日２回の２、６、２０、及び６０ｍｇのＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２を送達用量の後の血清中央値曝露プロファイルを示す。 異なる送達用量（２．０ｍｇ、６．０ｍｇ、２０ｍｇ、及び６０ｍｇ）で吸入ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２（配列番号１を有する）を投与された対象のＩＬ－４で刺激された全血におけるＳＴＡＴ６リン酸化（ｐＳＴＡＴ６）のｅｘ ｖｉｖｏ阻害を示す。 吸入ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２（配列番号１を有する）を投与された対象のＩＬ－４で刺激された全血におけるＳＴＡＴ６リン酸化（ｐＳＴＡＴ６）のｅｘ ｖｉｖｏ阻害を示す。ＳＴＡＴ６リン酸化の用量依存的阻害が観察され、ＩＣ５０値は、０．３０ｎＭであった。 実施例４のコホート１～４にのみ対応するＭＡＤ研究計画を示す。示される用量は、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の複数デバイス用量（ｂ．ｉ．ｄ．（１日２回）の送達用量）である。ｂ．ｉ．ｄ．用量は、１２時間間隔で投与される。ＡＺＤ１４０２／ＰＲＳ－０６０の初回投与またはマッチングプラセボを投与される１日前である、－１日目に、参加者を評価して適格性を確認した。参加者は、病院／研究サイトにチェックインし、治験薬の最後の投与（１０日目）の４８時間後（１２日目）にチェックアウトするまで病院／研究サイトに留まった。９日間１日２回、１０日目に１回投与の２ｍｇ～６０ｍｇの送達用量で、ＩｎｎｏＳｐｉｒｅ Ｇｏネブライザーを使用して、治験薬を投与した。スクリーニングから研究後のフォローアップ訪問までの研究期間は、各参加者について約９週間であった。 実施例２のＳＡＤ研究計画を示す。

本発明の態様及び実施形態は、ここで添付の図を参照して検討されるだろう。さらなる態様及び実施形態は、当業者らには明らかであろう。このテキストで言及される全ての文書は、参照により本明細書に組み込まれる。

本発明は、ヒト対象の喘息を処置する方法に関する。喘息は、肺の炎症、粘液分泌過多、可変気道閉塞、及び気道リモデリングを含む、様々な病原性特徴を特徴とする慢性の複雑で不均一な呼吸器疾患である。それは、経時的に及び重症度が変化する喘鳴、息切れ、及び咳を含む呼吸器症状の病歴により定義される。症状及び気道閉塞の両方は、運動、吸入された刺激物もしくはアレルゲンへの曝露、または呼吸器感染症を含む様々な要因により引き起こされ得る。患者は、喘息の悪化（憎悪）のリスクがある。喘息のこれらの増悪は、生命に危険を及ぼす可能性があり、患者の生活の質に著しく影響を及ぼし得る。ほとんどの喘息患者の処置は、管理者の処置計画及び気管支拡張薬療法で構成される。吸入コルチコステロイド（ＩＣＳ）は、喘息の症状を制御する上での「ゴールドスタンダード」とみなされており、長時間作用型ベータ作動薬（ＬＡＢＡ）は、現在利用可能な最も効果的な気管支拡張薬である。経口コルチコステロイドは、依然として、重度の喘息の標準治療であるが、重大な副作用と関連するが、抗ＩｇＥモノクローナル抗体であるオマリズマブ；抗ＩＬ－５抗体であるベンラリズマブ、メポリズマブ及びレスリズマブ、ならびにＩＬ－４Ｒα及びＩＬ－１３のモノクローナル抗体ブロッカーであるデュピルマブ（ＵＳ）は、重症患者にわずかな数の選択肢を提供する。さらに、患者は、多くの場合、依然として、ＩＣＳ／ＬＡＢＡ及びわずかな数の代替療法でさえも制御されず、満たされていない重要なニーズが強調される。

インターロイキン－４、インターロイキン－１３、インターロイキン－４－受容体アルファ、及びシグナル伝達兼転写活性化因子－６は、喘息における気道炎症、粘液産生、及び気道過敏性の発症における重要な構成要素である。

喘息を処置する方法は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む治療有効量の抗ＩＬ－４受容体アルファ（ＩＬ－４Ｒα）リポカリンムテインまたはその多様体またはフラグメントを投与することを含む。

「治療有効量」は、それが投与される効果を生じる用量を意味する。本明細書に記載されるリポカリンムテインの「治療有効量」は、年齢、体重、全体的な健康状態、性別、食事、投与時間、薬物相互作用、及び必要となり得且つ当業者らによる所定の実験で確認可能となる状態の重症度などの因子に応じて変動し得る。治療的に有効な量は、また、本出願で使用される場合、任意のリポカリンムテインの毒性または有害な影響を治療的に有益な効果が上回るものである。

インターロイキン－４受容体アルファ鎖（ＩＬ－４Ｒα）は、Ｂ細胞におけるＩｇＥ抗体産生を調節するためにインターロイキン４及びインターロイキン１３に結合し得るＩ型膜貫通タンパク質である。Ｔ細胞の中で、コードされたタンパク質は、また、Ｔｈ２細胞の分化を促進するためにインターロイキン４に結合し得る。

ＩＬ－４受容体アルファ（ＩＬ－４Ｒα）、特に、ヒトＩＬ－４Ｒαに特異的なリポカリンムテインは、国際特許公開ＷＯ２００８／０１５２３９、ＷＯ２０１１／１５４４２０、及びＷＯ２０１３／０８７６６０で開示される。ヒトインターロイキン－４受容体アルファ鎖は、配列番号４として示されるＳＷＩＳＳ ＰＲＯＴデータバンクアクセッション番号Ｐ２４３９４またはそのフラグメントのアミノ酸配列を有してもよい。ヒトインターロイキン－４受容体アルファ鎖のフラグメントの実例は、ＩＬ－４受容体アルファのアミノ酸２６～２３２を含む。

配列番号１として示されるアミノ酸配列を有するＩＬ－４Ｒα特異的リポカリンムテインは、ヒト涙リポカリンのムテインである。

本明細書で使用される場合、「ムテイン」は、天然に存在する（野生型）核酸またはタンパク質の「参照」足場（好ましくは、配列番号３として示される成熟ヒト涙リポカリン）と比較して、１つ以上のヌクレオチドまたはアミノ酸の置換、欠失、または挿入を指す。該「参照足場」は、また、本明細書に記載されるムテインまたはそのフラグメントもしくは多様体を含む。

ヒト涙リポカリンのアミノ酸配列は、配列番号２に示されるＳＷＩＳＳ－ＰＲＯＴデータバンクアクセッション番号Ｐ３１０２５で提供される。成熟ヒト涙リポカリンは、ＳＷＩＳＳ－ＰＲＯＴアクセッション番号Ｐ３１０２５の配列に含まれるＮ末端シグナルペプチドを含まず、すなわち、それは、ＳＷＩＳＳ－ＰＲＯＴアクセッション番号Ｐ３１０２５の配列に含まれるＮ末端シグナルペプチド（アミノ酸１～１８）を欠く。成熟ヒト涙液リポカリンのアミノ酸配列は、配列番号３に示される。

本発明で使用されるリポカリンムテインは、配列番号１を含むか、またはその多様体もしくはフラグメントである。配列番号１として示されるリポカリンムテインは、配列番号３として示される成熟ヒト涙リポカリンの多様体であり、これは、最初の４つのアミノ酸を欠き、とりわけ、配列番号３として示される成熟ヒト涙リポカリンのアミノ酸配列の配列位置に対応する位置に以下のアミノ酸置換を含む：Ａｒｇ２６→Ｓｅｒ、Ｇｌｕ２７→Ａｒｇ、Ｐｈｅ２８→Ｃｙｓ、Ｇｌｕ３０→Ａｒｇ、Ｍｅｔ３１→Ａｌａ、Ａｓｎ３２→Ｖａｌ、Ｌｅｕ３３→Ｔｙｒ、Ｇｌｕ３４→Ａｓｎ、Ｍｅｔ５５→Ａｌａ、Ｌｅｕ５６→Ｇｌｎ、Ｉｌｅ５７→Ａｒｇ、Ｓｅｒ５８→Ｌｙｓ、Ｃｙｓ６１→Ｔｒｐ、Ｇｌｕ６３→Ｌｙｓ、Ａｓｐ８０→Ｓｅｒ、Ｌｙｓ８３→Ａｒｇ、Ｇｌｕ１０４→Ｌｅｕ、Ｌｅｕ１０５→Ｃｙｓ、Ｈｉｓ１０６→Ｐｒｏ、及びＬｙｓ１０８→Ｇｌｎ。

本発明で使用されるリポカリンムテインは、配列番号１を含むか、またはその多様体もしくはフラグメントである。配列番号１として示されるリポカリンムテインは、配列番号３として示される成熟ヒト涙リポカリンの多様体であり、これは、最初の４つのアミノ酸を欠き、とりわけ、配列番号３として示される成熟ヒト涙リポカリンのアミノ酸配列の配列位置に対応する位置に以下のアミノ酸置換を含む：Ａｒｇ２６→Ｓｅｒ、Ｇｌｕ２７→Ａｒｇ、Ｐｈｅ２８→Ｃｙｓ、Ｇｌｕ３０→Ａｒｇ、Ｍｅｔ３１→Ａｌａ、Ａｓｎ３２→Ｖａｌ、Ｌｅｕ３３→Ｔｙｒ、Ｇｌｕ３４→Ａｓｎ、Ｖａｌ５３→Ｐｈｅ、Ｍｅｔ５５→Ａｌａ、Ｌｅｕ５６→Ｇｌｎ、Ｉｌｅ５７→Ａｒｇ、Ｓｅｒ５８→Ｌｙｓ、Ｃｙｓ６１→Ｔｒｐ、Ｇｌｕ６３→Ｌｙｓ、Ｖａｌ６４→Ｔｙｒ、Ａｌａ６６→Ｌｅｕ、Ａｓｐ８０→Ｓｅｒ、Ｌｙｓ８３→Ａｒｇ、Ｔｙｒ１００→Ｈｉｓ、Ｃｙｓ１０１→Ｓｅｒ、Ｇｌｕ１０４→Ｌｅｕ、Ｌｅｕ１０５→Ｃｙｓ、Ｈｉｓ１０６→Ｐｒｏ、Ｌｙｓ１０８→Ｇｌｎ、Ａｒｇ１１１→Ｐｒｏ、Ｌｙｓ１１４→Ｔｒｐ、及びＣｙｓ１５３→Ｓｅｒ。

本明細書で使用される場合、「多様体」という用語は、例えば、アミノ酸配列またはヌクレオチド配列の置換、欠失、挿入、及び／または化学修飾による変異を含むタンパク質またはポリペプチドの誘導体に関する。いくつかの実施形態では、そのような変異及び／または化学修飾は、タンパク質またはペプチドの機能性を低減させない。そのような置換は、保存的であり得、すなわち、アミノ酸残基は、化学的に類似したアミノ酸残基で置換される。保存的置換の例は、以下の群のメンバー間の置換である：１）アラニン、セリン、及びスレオニン；２）アスパラギン酸及びグルタミン酸；３）アスパラギン及びグルタミン；４）アルギニン及びリジン；５）イソロイシン、ロイシン、メチオニン、及びバリン；ならびに、６）フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファン。そのような多様体は、タンパク質またはポリペプチドを含み、１つ以上のアミノ酸は、それぞれのＤ－立体異性体で、または天然に存在する２０のアミノ酸以外のアミノ酸、例えば、オルニチン、ヒドロキシプロリン、シトルリン、ホモセリン、ヒドロキシリジン、ノルバリンなど、で置換されている。そのような多様体は、また、例えば、１つ以上のアミノ酸残基がＮ末端及び／またはＣ末端に付加または欠失する、例えば、Ｎ末端から４つのアミノ酸及び／またはＣ末端から２つのアミノ酸を欠失する、タンパク質またはポリペプチドを含む。一般に、多様体は、天然配列タンパク質またはポリペプチドと、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９２％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有する。多様体は、好ましくは、それが由来するタンパク質またはポリペプチドの生物学的活性、例えば、同じ標的への結合、を保持する。

従って、本発明による配列番号１に記載のアミノ酸を含むリポカリンムテインの多様体は、配列番号１として示されるアミノ酸配列と、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９２％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有し、ＩＬ－４受容体アルファ、特に、ヒトＩＬ－４Ｒα、またはそのフラグメントに結合する能力を保持する。好ましくは、リポカリンムテインの多様体は、ＩＬ－４がＩＬ－４Ｒαに結合するのを阻害することが可能である。

いくつかの実施形態では、本発明による配列番号１に示されるアミノ酸を含むリポカリンムテインの多様体は、配列番号３として示される成熟ヒト涙リポカリンのアミノ酸配列と、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７２％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９２％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有し、ＩＬ－４受容体アルファ、特に、ヒトＩＬ－４Ｒα、またはそのフラグメントに結合する能力を保持する。好ましくは、リポカリンムテインの多様体は、ＩＬ－４がＩＬ－４Ｒαに結合するのを阻害することが可能である。

本明細書で使用される場合、「配列同一性」または「同一性」という用語は、類似性または関係を測定する配列の特性を表す。本開示で使用される「配列同一性」または「同一性」という用語は、本開示のタンパク質またはポリペプチドの配列の（これらの２つの配列の長い方の残基数に対して）問題の配列との（相同な）アラインメント後の、ペアワイズ同一残基のアラインメントのパーセンテージを意味する。配列同一性は、同一のアミノ酸残基の数を残基の総数で除し、結果に１００を乗ずることにより測定される。

当業者は、標準パラメーターを使用して配列同一性を決定するための利用可能なコンピュータープログラム、例えば、ＢＬＡＳＴ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ，１９９７）、ＢＬＡＳＴ２（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，１９９０）、ＦＡＳＴＡ（Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ（１９８８）の方法を使用）、上掲のＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）のＴＢＬＡＳＴＮプログラム、ＧＡＰ（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ ＧＣＧ ｐａｃｋａｇｅ、Ａｃｃｅｌｅｒｙｓ Ｉｎｃ、米国サンディエゴ）、及びＳｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎ（Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，１９８１）を認識するであろう。配列同一性のパーセンテージは、例えば、プログラムＢＬＡＳＴＰ、バージョン２．２．５、２００２年１１月１６日（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ，１９９７）を使用して本明細書で決定することができる。この実施形態では、相同性のパーセンテージは、好ましくは、ペアワイズ比較の参照として野生型タンパク質足場を使用して、ポリペプチド配列を含む、全タンパク質またはポリペプチド配列（マトリックス：ＢＬＯＳＵＭ ６２；ギャップコスト：１１．１；１０^－３に設定されたカットオフ値）のアラインメントに基づく。それは、アラインメント用プログラムで選択されたアミノ酸の総数で除した、ＢＬＡＳＴＰプログラムアウトプットの結果として示された「陽性」（相同アミノ酸）の数のパーセンテージとして計算された。配列の同一性は、一般に、アルゴリズムＧＡＰ（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ ＧＣＧパッケージ、Ａｃｃｅｌｅｒｙｓ Ｉｎｃ、米国サンディエゴ）を参照して定義される。ＧＡＰは、２つの完全配列をアラインして、マッチの数を最大化し、ギャップ数を最小化するＮｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズムを使用する。これは、アミノ酸の付加または欠失の結果であるアラインメントのスペースである。一般に、ギャップ生成ペナルティが１２に等しく、ギャップ伸長ペナルティが４に等しいデフォルトパラメーターが使用される。

具体的には、リポカリン（ムテイン）のアミノ酸配列のアミノ酸残基が、配列番号１として示されるアミノ酸配列を有するリポカリンムテインと異なるかどうかを決定するために、当業者は、当該技術分野で周知の手段及び方法、例えば、手動でのアラインメント、あるいはＢａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌを代表するＢＬＡＳＴ２．０もしくはＣｌｕｓｔａｌＷなどのコンピュータープログラム、または配列アラインメントを生成するのに適する任意の他の好適なプログラムの使用によるアラインメントを使用し得る。従って、配列番号１は、「参照配列」として機能するが、本明細書に記載の配列番号１として示されるアミノ酸配列を有するリポカリンムテインとは異なるリポカリンのアミノ酸配列は、「クエリ配列」として機能する。

本開示のリポカリンムテインと関連して本明細書で使用される「フラグメント」という用語は、Ｎ末端及び／またはＣ末端が切断されている、すなわち、Ｎ末端及び／またはＣ末端アミノ酸の少なくとも１つを欠いている、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含むリポカリンムテインに由来するタンパク質またはペプチドに関する。そのようなフラグメントは、最大１、最大２、最大３、最大４、最大５、最大１０、最大１５、最大２０、最大２５、または最大３０（間の全ての数を含む）のＮ末端及び／またはＣ末端アミノ酸を欠いていてもよい。実例として、そのようなフラグメントは、１つ、２つ、３つ、もしくは４つのＮ末端及び／または１つもしくは２つのＣ末端アミノ酸を欠いていてもよい。フラグメントは、好ましくは、全長リポカリン（ムテイン）の機能的フラグメントであることが理解され、このことは、それが、由来する全長リポカリン（ムテイン）の結合ポケットを含むことが好ましいことを意味する。実例として、そのような機能的フラグメントは、成熟ヒト涙リポカリンの線形ポリペプチド配列に対応する５～１５８、１～１５６、５～１５６、５～１５３、２６～１５３、５～１５０、９～１４８、１２～１４０、２０～１３５、または２６～１３３位に少なくともアミノ酸を含んでもよい。そのようなフラグメントは、配列番号１として示される配列の少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、または少なくとも１００の連続アミノ酸を含んでもよく、通常、配列番号１のアミノ酸配列を有するリポカリンムテインのイムノアッセイにおいて検出可能である。フラグメントは、配列番号１として示されるアミノ酸配列と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有してもよい。好ましくは、フラグメントは、ＩＬ－４受容体アルファ、特に、ヒトＩＬ－４Ｒα、またはそのフラグメントに結合する能力を保持する。好ましくは、リポカリンムテインのフラグメントは、ＩＬ－４がＩＬ－４Ｒαに結合するのを阻害することが可能である。

本開示の対応する標的ＩＬ－４Ｒαに対するフラグメント（２５残基のシグナルペプチドを含まないＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ２４３９４に記載され且つ配列番号４として示される）は、Ｎ末端及び／またはＣ末端が切断されたＩＬ－４ＲαまたはＩＬ－４Ｒαのタンパク質ドメインを指す。本明細書に記載のＩＬ－４Ｒαのフラグメントは、本開示のリポカリンムテインにより認識及び／または結合されるべき全長ＩＬ－４Ｒαの能力を保持する。実例として、フラグメントは、配列番号５として示されるＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ２４３９４のアミノ酸残基２６～２３２を含む細胞外ドメインなどのＩＬ－４Ｒαの細胞外ドメインであってよい。

本発明によるリポカリンムテインは、ヒト対象に吸入で投与される。本明細書で使用される場合、吸入による投与は、通常、経口吸入による、リポカリンムテインの投与を指す。リポカリンムテインは、噴霧された液体エアロゾルまたは液体スプレーの形態であってよい。リポカリンムテインは、噴霧で投与されてもよい。

リポカリンムテインの吸入投与のための手段及びデバイスは、当業者に既知である。そのような手段及びデバイスは、ネブライザー及び非加圧定量吸入器を含む。リポカリンムテインの吸入投与の送達に適する他の手段及びデバイスも当該技術分野で既知である。

ネブライザーは、肺に吸入されるミストの形態の治療薬を投与するために使用される薬物送達デバイスである。様々なタイプのネブライザーは、当業者に既知であり、ジェットネブライザー、超音波ネブライザー、及び振動メッシュ技術を含む。噴霧溶液の連続フローを提供するネブライザーもあれば（すなわち、ネブライザーは、対象がそれから吸入するのかどうかに関わらず、長期間にわたって連続噴霧を提供することになる）、呼吸作動されるネブライザーもある（すなわち、対象が、それから吸入する場合にのみ、一部の用量を得る）。

ソフトミスト吸入器としても既知の非加圧定量吸入器（ＭＤＩ）は、液体エアロゾル化された治療薬の短いバーストの形態で、特定量の治療薬を肺に送達するデバイスである。そのような定量吸入器は、通常、３つの主要な構成要素で構成される：投与されるべき製剤を含む容器、計量された量の製剤を各動作で出すことを可能にする絞り弁、及び患者がデバイスを操作して、患者の肺に液体エアロゾルを導くことを可能にする作動装置（またはマウスピース）。

本発明で使用されるリポカリンムテインは、通常、特定の結合メンバーに加えて少なくとも１つの構成成分を含み得る医薬組成物の形態で投与されるであろう。従って、本発明に従って使用するための医薬組成物は、有効成分に加えて、薬学的に許容される賦形剤、担体、緩衝液、安定剤、または当業者らに周知の他の材料を含んでもよい。そのような材料は、無毒でなければならず、活性成分の有効性を妨げてはならない。例えば、本発明に従って使用されるリポカリンムテインは、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）の水溶液の形態で製剤化されてもよい。

リポカリンムテインを含む医薬組成物は、単独でまたは他の治療薬と組み合わせて、同時にまたは連続して投与されてもよい。

本明細書に開示の喘息を処置するための方法では、該リポカリンムテインの送達用量は、約０．１ｍｇ～約１６０ｍｇである。「送達用量」は、対象に送達されるリポカリンムテインの用量、すなわち、デバイスを適用する時に吸入デバイスから出てくる用量、を指す。例えば、最終的な総量が噴霧されないため、ネブライザーは、意図的に過剰に充填されるであろう。ネブライザーの場合、送達用量は、通常、公称用量の５０％未満であり、公称用量は、デバイスに充填されるリポカリンムテインの用量である。公称用量は、定量用量としても既知である。当業者は、吸入デバイスから出てくるリポカリンムテインの量を決定することにより、送達用量を容易に決定し得る。例えば、「送達用量」を実験的に測定するために使用される方法は、欧州薬局方９．０のセクション２．９．４４で提供される。

本明細書に記載のＳＡＤ研究（実施例２）において、ネブライザーに充填された０．２５ｍｇ、１．２５ｍｇ、５ｍｇ、２０ｍｇ、６０ｍｇ、１８０ｍｇ、及び４００ｍｇの公称（または定量）用量は、それぞれ、０．１ｍｇ、０．５ｍｇ、２．０ｍｇ、８．０ｍｇ、２４ｍｇ、７２ｍｇ、及び１６０ｍｇの送達用量と相関する。

噴霧器に充填され、本明細書に記載のＭＡＤ研究（実施例３及び実施例４）で１日２回投与される０．５ｍｇ、５ｍｇ、１５ｍｇ、５０ｍｇ、及び１５０ｍｇの公称（または定量）用量は、それぞれ、１日２回の０．２ｍｇ、２．０ｍｇ、６．０ｍｇ、２０ｍｇ、及び６０ｍｇの送達用量と相関する。１．５ｍｇの公称用量または定量用量は、０．６ｍｇの送達用量と相関する。

本明細書に提示されるＳＡＤ研究（実施例２）の結果は、全身曝露がリポカリンムテインの少なくとも約８ｍｇの送達用量で生じるが、約２ｍｇ以下の送達用量では、検出可能な全身曝露が観察されないことを示す。

本明細書に提示されるＭＡＤ研究（実施例３）のコホート１～３の結果は、全身曝露がリポカリンムテインの少なくとも約６ｍｇの送達用量で生じるが、約２ｍｇまたは約２ｍｇ以下の送達用量では、検出可能な全身曝露が観察されないことを示す。

本明細書に提示されるＭＡＤ研究（実施例４）のコホート１～５の結果は、全身曝露がリポカリンムテインの少なくとも約６ｍｇの送達用量で生じるが、約２ｍｇまたは約２ｍｇ以下の送達用量では、検出可能な全身曝露が観察されないことを示す。

本明細書で使用される場合、「全身曝露」手段は、吸入リポカリンムテインの実質的な部分が、循環系に入ること、任意に、体全体がリポカリンムテインにより影響され得ることを意味する。全身曝露は、循環器系に入るリポカリンムテインの量が定量化可能であることを意味し得る。全身曝露は、定量化可能な血流に入るリポカリンムテインの濃度と同等であり得る。この曝露は、リポカリンムテインの血液（血清、血漿、または全血）中濃度で表すことができ、これは、経時的に測定し、曲線下面積（ＡＵＣ）を含む一連のパラメーターで記録することができる。リポカリンムテインへの全身曝露は、また、バイオマーカーに影響を及ぼし得、このレベルは、リポカリンムテインの濃度に、それ故、全身曝露、に直接相関し得る。「定量化可能」または「検出可能」という用語は、全身曝露と関連して使用される場合、リポカリンムテインの血液（血清、血漿、または全血）中濃度により、または当該技術分野で既知の１つ以上の分析方法で測定可能なバイオマーカーのレベルにより表される曝露を指す。そのような分析方法は、ＥＬＩＳＡ、競合ＥＬＩＳＡ、蛍光滴定、熱量測定法、質量分析（ＭＳ）、及び高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）などのクロマトグラフィー法を含むが、これらに限定されない。また、測定は、そのような分析方法を使用して実施される測定値は、検出限界、例えば、機器の検出限界、方法の検出限界、及び定量の限界、と関連することが理解される。

本明細書で提示されるＭＡＤ研究（実施例３）のコホート１～３の結果は、約２ｍｇまたは約２ｍｇ未満のリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量により、吸入リポカリンの実質的な部分が循環器系に入らないまたは検出可能な全身曝露を伴わない局所肺曝露の結果として、ＦｅＮＯの低減がもたらされ得ることを示す。

本明細書で提示されるＭＡＤ研究（実施例４）のコホート１～４の結果は、約２ｍｇまたは約２ｍｇ未満のリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量により、吸入リポカリンの実質的な部分が循環器系に入らないまたは検出可能な全身曝露を伴わない局所肺曝露の結果として、ＦｅＮＯの低減がもたらされ得ることを示す。

本明細書で提示されるＭＡＤ研究（実施例４）のコホート１～５の結果は、約２ｍｇまたは約２ｍｇ未満であるが０．２ｍｇ超のリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量により、吸入リポカリンの実質的な部分が循環器系に入らないまたは検出可能な全身曝露を伴わない局所肺曝露の結果として、ＦｅＮＯの低減がもたらされ得ることを示す。約２ｍｇまたは約２ｍｇ未満であるが約０．６ｍｇまたは約０．６ｍｇ超であるリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量により、吸入リポカリンの実質的な部分が循環器系に入らないまたは検出可能な全身曝露を伴わない局所肺曝露の結果として、ＦｅＮＯの低減がもたらされ得る。

本明細書で使用される場合、「局所曝露」は、肺中の標的と相互作用するのに十分なレベルの吸入リポカリンムテインが肺中に存在することを意味する。これは、血中の検出可能なターゲットエンゲージメント、または血中もしくは血清中の測定可能な濃度のリポカリンムテインなしで生じ得る。吸入用量レベルが増加するにつれて、肺ターゲットエンゲージメントのレベルが、増加し得、これは、血中ターゲットエンゲージメントの実質的な阻害及び血中または血清中のリポカリンムテインの測定可能な濃度とも関連し得る。「局所肺曝露」という用語は、肺ターゲットエンゲージメントの関与する吸入リポカリンムテインの肺濃度を指す。呼気中一酸化窒素濃度（ＦｅＮＯ）の低減は、十分な「局所曝露」が達成されているかどうかを判断するために使用されてもよい。他のいくつかの場合、特に、対象がヒトである場合、肺中に残っているリポカリンムテインの量を直接測定することが困難であるので、「局所曝露」または「局所肺曝露」の決定は、循環器系に入るリポカリンムテインの量を決定することにより間接的に実施されてもよい。

ＣＤ３＋Ｔ細胞集団におけるＳＴＡＴ６のリン酸化は、リポカリンムテインの全身曝露のマーカーとして使用されてもよい。ＳＴＡＴ６リン酸化（ｐＳＴＡＴ６）の決定は、当業者に既知の任意の好適な方法により実施されてもよい。例えば、対象へのリポカリンムテインの投与後、全血を対象から採取し、実施例セクションに記載されるように、ＣＤ３＋Ｔ細胞亜集団においてＩＬ－４で刺激し、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を使用してｐＳＴＡＴ６を評価してもよい。対象へのリポカリンムテインの投与後のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害は、リポカリンムテインの全身曝露を示す。リポカリンムテインによるＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害率は、例えば、いかなるリポカリンムテインも投与されていない対照対象と比較して決定されてもよい。これは、同じ対象（ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化がリポカリンムテインの投与前に評価されている）またはいかなるリポカリンムテインも投与されていない別の対象であってよい。

ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害は、リポカリンムテインの半数最大阻害濃度であるＩＣ_５０値、すなわち、ＣＤ３＋Ｔ細胞の５０％でＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化を阻害するために必要な、血漿中で測定されるリポカリンムテインの濃度、を決定することにより評価されてもよい。リポカリンムテインのＩＣ_５０は、用量反応曲線を作成し、ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の逆転に対する様々な濃度のリポカリンムテインの効果を試験することにより決定することができる。ＩＣ_５０値は、ＩＬ－４を用いる刺激後のＣＤ３＋Ｔ細胞の半分でＳＴＡＴ６リン酸化を阻害するために必要なリポカリンムテインの濃度を決定することにより計算することができる。ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の検出不可能であるか、または有意な阻害がないということは、循環系に入る吸入リポカリンムテインまたは検出可能な全身曝露の実質的な部分がないことを意味し得る。

呼気中一酸化窒素濃度（ＦｅＮＯ）は、喘息の処置におけるリポカリンムテインの効果を判定するマーカーとして使用されてもよい。当業者は、既知の技術を使用してＦｅＮＯを容易に測定することが可能になり、例えば、ＦｅＮＯ試験は、手持ち式の監視装置に取り付けられたマウスピースにゆっくりと着実に息を吐き出す患者により行われる。読み値は、監視装置に表示され、ＦｅＮＯ試験の結果は、気道の炎症の程度を示す。一般に使用されるＦｅＮＯ試験は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｈｏｒａｃｉｃ Ｓｏｃｉｅｔｙ（ＡＴＳ）２００５試験である。

リポカリンムテインによるＦｅＮＯの低減率は、例えば、いかなるリポカリンムテインを投与されていない対照対象と比較して決定されてもよい。これは、同じ対象（リポカリンムテインの投与前にＦｅＮＯが評価される）またはいかなるリポカリンムテインも投与されていない異なる対象であってよい。プラセボは、この異なる対象に投与されていることがある。

以下の特許請求の範囲を含む本明細書全体を通して、文脈に別途要求のない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」及び「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」という単語、ならびに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、及び「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などの変形形態は、所定の完全体もしくはステップまたは完全体もしくはステップの群を含むが、任意の他の完全体もしくはステップまたは完全体もしくはステップの群を除外しないことを意味することが理解されるであろう。

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈に別途明示のない限り、複数の指示対象を含むことに留意しなければならない。従って、例えば、「リポカリンムテイン」への言及は、１つ以上のリポカリンムテインを含む。

「及び／または」という用語は、本明細書で使用される場合は常に、「及び」、「または」及び「該用語により結合された要素の全てまたは任意の他の組み合わせ」の意味を含む。

本明細書で使用される「約」または「ほぼ」という用語は、所与の値または範囲の２０％以内、好ましくは、１０％以内、より好ましくは、５％以内を意味する。しかし、用語は、具体的な数を含み、例えば、「約２０」は２０を含む。

本明細書で使用される「少なくとも約」という用語は、具体的な数を含み、例えば、「少なくとも約６」は６を含む。

必要に応じて、上述の説明で、または以下の特許請求の範囲に、または添付の図面に開示され、特定の形態で、または開示された機能、または開示された結果を得るための方法もしくはプロセスを実施するための手段に関して表現される特徴は、別々に、またはそのような特徴の任意の組み合わせで、その多様な形態で本発明を実現するために利用されてもよい。

本発明は上述の例示的な実施形態とともに記載されているが、本開示が与えられた場合、多くの等価な修正及び変更は当業者らには明らかであろう。従って、上記の本発明の例示的な実施形態は、限定的ではなく例示的なものとみなされる。記載される実施形態への様々な変更は、本発明の趣旨及び範囲から逸脱せずに行われてよい。

あらゆる疑義を回避するために、本明細書で提供される任意の理論的説明は、読者の理解を進める目的のために提供される。本発明者は、これらの理論的説明のいずれによりも束縛されることを望まない。

本明細書で使用される任意のセクションの見出しは、組織的な目的のみであり、記載の主題を制限するものとして解釈されるべきではない。

実施例１．ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２へのヒト免疫応答の評価としてのヒトｉｎ ｖｉｔｒｏ全血アッセイ
ＩＬ－４Ｒαシグナル伝達に対するＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の影響を特徴づけるために、健常な対象由来のヒト全血を、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の存在下または非存在下、ＩＬ－４で刺激し、シグナル伝達構成成分のリン酸化及び可溶性バイオマーカーの放出を定量した。

ヒト全血が、健常なボランティアから採決され、ヘパリンを含有する滅菌チューブに収集した。ヘパリン処理された全血を、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２または参照ＩＬ４－Ｒα抗体の濃度を上昇させながら、８ｎｇ／ｍＬのＩＬ－４で１５分間刺激し、次に、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を使用して、ＣＤ３＋Ｔ細胞亜集団におけるリン酸化ＳＴＡＴ６（ｐＳＴＡＴ６）を評価した。

さらに、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２または参照ＩＬ４－Ｒα抗体の濃度を上昇させながら、ヘパリン処理された全血を８ｎｇ／ｍＬのＩＬ－４で２４時間刺激し、続いて、酵素結合免疫アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して、エオタキシン－３、胸腺、及び活性化調節ケモカイン（ＴＡＲＣ）、ならびにマクロファージ由来ケモカイン（ＭＤＣ）を測定した。

代表的な実験の結果が図１に示され、ｐＳＴＡＴ６及び可溶性サイトカインの放出のＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２及び参照ＩＬ４－Ｒα抗体阻害に適合したＩＣ_５０値が表１にまとめられる。ＩＬ－４を用いるヒト全血の刺激により、ｐＳＴＡＴ６のレベルの増加、ならびにエオタキシン－３、ＴＡＲＣ、及びＭＤＣの放出がもたらされた。ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２は、濃度依存的にｐＳＴＡＴ６を阻害し、参照ＩＬ－４Ｒα抗体と同様の効力を有する。参照ＩＬ－４Ｒα抗体と同等の効力の、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２による可溶性サイトカインエオタキシン－３、ＴＡＲＣ、及びＭＤＣの放出の阻害も観察された。

データは、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２が、ヒト全血において、参照ＩＬ－４Ｒα抗体のものに匹敵するＩＣ_５０値で、ＩＬ－４Ｒαシグナル伝達を阻害することが可能であることを示唆する。さらに、観察された低レベルの変動により、この方法を、吸入投与後の全身レベルのＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の存在を検出するのに適するものにする。例えば、全血中のｐＳＴＡＴ６応答及び下流のサイトカイン放出は、全身曝露を評価するための臨床試験で使用されてもよい。

ＩＬ－４のその受容体（ＩＬ－４Ｒ）への結合により、ヤヌスキナーゼ（Ｊａｋ）３－１及びＪＡＫ－３のチロシンリン酸化がもたらされ、これは、さらに、ＩＬ－４Ｒα鎖のチロシンリン酸化がもたらされる。Ｓｒｃホモロジー２ドメインを介してＩＬ－４Ｒのリン酸化チロシンドッキング部位に結合した後、Ｓｔａｔ６は、Ｊａｋキナーゼによりリン酸化される。ＩＬ－４Ｒから放出されたリン酸化ＳＴＡＴ６（ｐＳＴＡＴ６を）は、ホモ二量体を形成し、核に移行し、そこで、それが特定のＤＮＡ配列に結合し、標的遺伝子の転写を引き起こす（Ｎｅｌｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９９９，１７：７０１－７３８）。ｐＳＴＡＴ６の阻害率は、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の添加／投与後のＩＬ－４Ｒαの阻害を反映する直接的な尺度として使用することができる。

ｐＳＴＡＴ６の核への移行は、２型免疫と関連する転写レベルで多くの遺伝子を調節する（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００３．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１７１：３６２７－３６３５）。転写レベルでのＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７、ＭＣＤ／ＣＣＬ２２、及びＥｏｔａｘｉｎ－３／ＣＣＬ２６の誘導は、ＩＬ－４刺激後に実証されている（例えば、Ｗｉｒｎｓｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００６，３６（７）：１８８２－１８９１、Ｒａｈａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｒａｄｉａｔ Ｏｎｃｏｌ Ｂｉｏｌ Ｐｈｙｓ，２０１８，１００（４）：１０３４－１０４３、及びＨｏｅｃｋ ａｎｄ Ｗｏｉｓｅｔｓｓｃｈｌａｇｅｒ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００１，１６７（６）：３２１６－３２２２）。さらに、健常なドナーのヒト全血をＩＬ－４で２４時間刺激すると、ＩＬ－４Ｒαにより阻害することができるＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７、ＭＣＤ／ＣＣＬ２２、及びエオタキシン－３／ＣＣＬ２６の強力な誘導及びサイトカイン放出がもたらされる。その後、これらのサイトカインは、血液の無細胞部分で容易に検出することができる。

実施例２．健常な対象に経口吸入または静脈内注入により投与されたＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の単回投与の安全性、忍容性、及び薬物動態を評価する用量漸増の単盲検研究
Ａ．研究の目的及び概要
この実施例では、登録された対象へのＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２またはプラセボのいずれかの単回用量の経口吸入または静脈内（ＩＶ）投与で実施された無作為プラセボ対照の単盲検単回投与漸増研究について記載する。この研究の主な目的は、健常な男性及び女性対象におけるＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の単回吸入及び単回ＩＶ投与の安全性及び忍容性を評価することであった。研究の副次目的は、健康な男性及び女性対象においてＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の単回吸入及び単回ＩＶ投与後に、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の薬物動態を評価することであった。研究の探索的目的は、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路のｅｘ－ｖｉｖｏでの全血活性化の阻害などの薬力学的バイオマーカーへのＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２効果を含む。

登録された対象は、用量コホートに無作為に割り当てられた。各コホートは、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２用の６人の対象及びプラセボ用に２人の対象からなる合計８人の対象を含む。コホート毎の２人の指標対象を、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２及びプラセボに１：１で無作為化し、コホート中の残りの対象の少なくとも２４時間前に投与した。１コホート毎の残りの対象（ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２またはプラセボに５：１で無作為化）は、多くとも４０分の間隔で治験薬を投与された。

第１のコホートに登録された対象は、最低用量のＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２（０．２５ｍｇの公称用量または定量用量；０．１ｍｇの送達用量に相当）を投与された。各コホートの実際の用量は、前臨床毒物学研究により設定された事前に定義された曝露限界の評価後に決定された。経口吸入コホートの実際の用量は、表２にまとめられる。投与では、ＩｎｎｏＳｐｉｒｅ Ｇｏネブライザー（Ｐｈｉｌｉｐｓ）を使用した。ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（１．０６ｍＭのＫＨ_２ＰＯ_４、２．９６ｍＭのＮａ_２ＨＰＯ_４、１５４ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．４）の水溶液の形態で１０ｍｇ／ｍｌまたは５０ｍｇ／ｍｌの標的タンパク質濃度で、製剤化され、５．２ｍＬの抽出可能な最小容量で提供された。

経口吸入用量を投与された対象の全てのコホート（コホート１～７）の安全性評価の後、（吸入投与コホートに参加しなかった）対象の追加の２つのコホートは、ＩＶ投与のために入院した。シリンジポンプを使用した注入による投与のために、１０ｍｇ／ｍＬのＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２をＰＢＳで希釈した。追加の２つのコホートが表３にまとめられる。

対象を、以下の基準に基づいて研究に登録した：（１）１８～５５歳の出産の可能性のない（閉経後または不妊手術された）対象の健常な男性及び女性；（２）１８～３５ｋｇ／ｍ^２の肥満度指数（ＢＭＩ）；及び、（３）非喫煙者または直近の６ヶ月に喫煙していない元喫煙者であった対象（尿中コチニン＜５００ｎｇ／ｍＬにより決定、スクリーニング受診時）。全ての選択基準を満たした対象は、以下の除外基準についてさらにスクリーニングされた：（１）研究者の意見では、研究への参加のために対象を危険にさらし得る任意の臨床的に重大な医学的障害の病歴または臨床症状は、研究の結果に影響を与えるか、または研究に参加する対象の能力に影響を与える；（２）薬物またはアルコール乱用の病歴；（３）研究への参加中に対象を危険にさらし得るＡ型肝炎、Ｂ型肝炎、またはＣ型肝炎、ヒト免疫不全ウイルス、結核を含む既知の有意な感染症（すなわち、インターフェロン－γ放出アッセイ、ＱｕａｎｔｉＦＥＲＯＮ ＴＢ－Ｇｏｌｄの陽性結果）の病歴、またはこれが知られている；（４）１日目から４週間以内の任意の臨床的に重大な疾病、感染、医学的／外科的手順、もしくは外傷、または研究期間中に計画された入院患者の手術もしくは入院；（５）研究責任者が判断した、臨床化学、血液学、または尿検査の結果における任意の臨床的に重大な異常；（６）悪性腫瘍または腫瘍性疾患の任意の病歴を有する対象；（７）ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２（構造的に関連する涙リポカリン）に標的化される抗薬剤抗体（ＡＤＡ）に対する可能性と関連する安全性データの解釈に影響を与え得る、慢性または急性であった可能性がある任意の原因の進行中または再発性『ドライアイ症候群』の重大な病歴；（８）１日目の４週間前に生ワクチンまたは弱毒化ワクチンを投与されている対象；（９）免疫機能の異常を示唆する病歴を有する対象；（１０）生物学的療法後のアナフィラキシーの病歴、及び治験薬製剤の任意の構成成分に対するアレルギーまたは応答の既知の病歴；（１１）研究者とうまくコミュニケーションができない（すなわち、言語の問題、精神発達の低下、または脳機能の障害）；（１２）治験薬の初期投与前に、直前の１６週間以内の新規化学物質の任意の臨床研究または直前の１２週間以内もしくは５半減期内（どちらか長い方）の市販薬物の臨床研究への参加；（１３）直前の１２週間以内の４５０ｍＬ以上の血液の提供；（１４）妊娠中であった女性；及び、（１５）出産可能な女性パートナーとの性的に活発であり且つ精管切除をしておらず且つ１日目から９０日間２重の避妊法に同意していない男性。

Ｂ．研究手順
対象は、１日目前日の午後に研究施設に入院し、３日目の４８時間の測定が完了するまでの研究現場に留まった。１日目の朝、対象は、処置用量を投与された：能動的処置（ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２）またはプラセボ処置のいずれかの単回吸入用量またはＩＶ注入。経口吸入投与を投与された対象では、治験薬を、ＰＢＳ中１０ｍｇ／ｍｌまたは５０ｍｇ／ｍＬで提供し、ＩｎｎｏＳｐｉｒｅ Ｇｏネブライザー（Ｐｈｉｌｉｐｓ）を使用して投与した。ＩＶ注入を受けた対象では、ＰＢＳ中の１０ｍＬの容積のＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２を６０分間かけて注入した。安全性及びＰＫの評価を研究期間中の所定の時点で実施した。対象は、全ての研究評価が完了し、７日目（±１日）及び３０日目（±３日）の安全フォローアップ、ＰＫ、及び薬力学的評価のために再来するようにスケジュールされた後３日目に研究施設から退院した。

Ｃ．エンドポイント及び評価
研究の１次エンドポイントは、研究中継続的に、有害事象（ＡＥ）、バイタルサイン、１秒強制呼気量（ＦＥＶ_１）、心電図（ＥＣＧ）、及び研究室安全性試験で評価される安全性／忍容性である。ＡＥは、製品と因果関係があるとみなされてもみなされなくても、医薬品への曝露後または曝露中の、望ましくない病状の発症または既存の病状の悪化として定義される。バイタルサインの評価は、体温、収縮期及び拡張期の血圧測定値（ｍｍＨｇ）、脈拍（１分当たりの心拍数（ＢＰＭ））、及び呼吸数（１分当たりの呼吸数（ＢＲＰＭ））を含む。血液学、血清化学、及び尿検査を含む臨床検査評価のために、血液及び尿試料を収集した。所定の時点で、３回１２誘導ＥＣＧを実施し、同時に採取した場合は採血前に実施した。

研究の２次エンドポイントは、以下を含むＰＫパラメーターである：（１）血清中（経口吸入及びＩＶ投与の両方）最大濃度（Ｃ_ｍａｘ）、最大濃度までの時間（Ｔ_ｍａｘ）、終末半減期（ｔ_１／２）、ゼロ時から投与の２４時間後までの曲線下面積（ＡＵＣ_０－２４）、ゼロ時から最終測定可能濃度サンプリング時間（Ｔ_ｌａｓｔ）までの曲線下面積（質量×時間×容積－１）（ＡＵＣ_ｌａｓｔ）、ゼロ時から無限大までの曲線下面積（質量×時間×容積－１）（ＡＵＣ_ｉｎｆ）、ゼロ時から最終測定可能濃度までの曲線下面積（ＡＵＣ_ｌａｓｔ）、Ｃ_ｍａｘ／用量、ＡＵＣ_{０－２４ｈ}／用量、ＡＵＣ_{０－ｌａｓｔ}／用量、ＡＵＣ_ｉｎｆ／用量、及び（平均滞留時間）ＭＲＴ；（２）終末相での血清中（ＩＶ投与のみ）分布容積（Ｖ_ｚ）、定常状態での見かけの分布容積（Ｖ_ｓｓ）、及び全身クリアランス（ＣＬ）；（３）血清中（経口吸入のみ）の見かけの分布容積（Ｖ_ｚ／Ｆ）及びＣＬ／Ｆ、ならびに、Ｆ_{ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ、ｔｏｔａｌ}及び平均吸収時間（ＭＡＴ）（両方ともＩＶ ＰＫデータから導出）、ならびに、（４）尿中（経口吸入及びＩＶ投与の両方）：尿中に排泄された薬物の合計量（Ａｅ）、Ａｅ（ｔ_ｘ－ｔ_ｘ＋１）、Ａｅ（０－ｔ_ｘ）、尿中に排泄された用量の画分（ｆｅ）、ｆｅ（ｔ_ｘ－ｔ_ｘ＋１）、ｆｅ（０－ｔ_ｘ）、及び腎臓クリアランス（ＣＬ_ｒ）。

本研究の探索的エンドポイントは、味覚特性の評価及び薬力学的バイオマーカー、例えば、ｅｘ－ｖｉｖｏ全血活性化の阻害及びＩＬ－４／ＩＬ－１３経路と関連する探索的全身バイオマーカー、に対するＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の影響を含む。質問票を使用して、味覚特性を評価した。血漿及び血清を採取し、ＩＬ－４Ｒα経路と関連する潜在的なバイオマーカーを評価するために使用した。対象から収集された全血をＩＬ－４で（１０ｎｇ／ｍｌのヒトＩＬ－４で１５分間）刺激し、続いて、ＣＤ３＋Ｔ細胞亜集団のリン酸化ＳＴＡＴ６（ｐＳＴＡＴ６）を測定することにより、ｅｘ－ｖｉｖｏ全血活性化の阻害を評価した。

Ｄ．統計的方法
プライマリーエンドポイントでは、インフォームドコンセントを提供し且つ治験薬の１用量を投与された全ての対象は、全ての分析のために使用された。投与された処置に従って、対象を分析した。ＡＥレポート、臨床検査データ、バイタルサイン、肺活量測定評価、及び１２誘導ＥＣＧパラメーターに基づいて、安全性を評価した。

全てのＡＥの概要は、処置下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ）のみに制限されたが、全てのＡＥは、データリストに含まれていた。ＴＥＡＥは、初回投与時または投与後に開始されたＡＥとして定義された。薬物関連ＴＥＡＥは、治験薬と可能な、起こりうる、または明確な関係を有するＴＥＡＥとして定義された。対象の数及び割合ならびにイベント数は、ＴＥＡＥの概要のために提示された。ＭｅｄＤＲＡ器官別大分類（ＳＯＣ）及び基本語（ＰＴ）による概要では、対象は、ＳＯＣレベルで１回、ＳＯＣレベル内の各ＰＴで１回カウントされた。ＳＯＣ、ＰＴ、及び重症度による概要では、対象は、ＳＯＣレベルでイベントが発生している各重症度レベル、及びそのＳＯＣレベル内のユニークなＰＴ毎にイベントが発生している各重症度レベルで１回カウントした。治験薬との関係による概要は、重症度による概要と同様に取り扱われた。

血液学、血清化学、及び尿検査を含む臨床検査値は、各プロトコールが予定された訪問（絶対値及びベースラインからの変化として、コホート及び処置毎に、スクリーニング、－１日目、１日目、２日目、３日目、安全フォローアップ（７日目±１）、及び３０日フォローアップ）時に取得され、記述的にまとめられた。

ＦＥＶ_１（ｍＬ）、６秒強制呼気量（ＦＥＶ_６）（ｍＬ）、強制肺活量（ＦＶＣ）（ｍＬ）、最大呼気流量（ＰＥＦＲ）（Ｌ／分）、及びＦＥＶ_１／ＦＶＣ比を含む肺活量測定評価を取得し、コホート及び処置による、各プロトコールがスケジュールされた時点（スクリーニング；投与前、投与の５分後、４０分後、１時間後、４時間後）で、絶対値及びベースラインからの変化として記述的にまとめた。

ＲＲ間隔（ミリ秒）、ＰＲ間隔（ミリ秒）、ＱＴ間隔（ミリ秒）、ＱＴｃＦ間隔（ミリ秒）、及びＱＴｃＢ間隔（ミリ秒）を含む１２誘導ＥＣＧを取得し、コホート及び処置毎に、各プロトコールがスケジュールされた時点（スクリーニング；投与前、投与の２０分後、３０分後、１時間後、１．５時間後、２時間後、３時間後、４時間後、５時間後、８時間後、１２時間後、２４時間後；３日目；安全フォローアップ；３０日フォローアップ）で、絶対値及びベースラインからの変化として記述的にまとめた。１日目の投与の２０分後、３０分後、及び１時間に１回の１２誘導ＥＣＧが、他の時点で３回の評価が実施されるようにスケジュールされた。１日目に投与前に実施された３回のＥＣＧ測定の平均は、全ての投与後の比較で対象のベースライン補正ＱＴ（ＱＴｃ）値として機能した。

２次エンドポイントでは、インフォームドコンセントを提供し、１用量のＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２が投与され、収集されたＰＫ分析用の少なくとも１つの評価可能な血液試料を有した全ての対象を、ＰＫパラメーター計算の分析、個々のデータのグラフ表示、ＰＫ濃度データ及びＰＫパラメーターのＰＫパラメーターデータ要約の一覧表作成、及び他全てのＰＫ一覧表作成のために使用した。

Ｅ．結果
登録された７２人の対象全てで観察された結果を以下にまとめる。７２人の対象のうち、５４人の対象を無作為化して、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２を投与し、１８人の対象を無作為化して、プラセボを投与した。参加者の平均年齢は、２６．４歳であり、平均ＢＭＩは、２４．５ｋｇ／ｍ^２であった。８人の対象を各コホートに割り当てた。各コホート（コホート１～９）内で、６人の対象が、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２を投与され、２人の対象がプラセボを投与された。登録された７２人の対象全てが、１用量の治験薬を投与され、この研究を完了した。研究を早期に中止した対象はいなかった。人口統計及びベースライン特性は、群及びコホート間で類似している。

１用量の治験薬を投与された７２人の登録された対象全てが安全集団に含まれていた。合計３７人の対象（５１．４％）が、ＰＫ集団に含まれていた。３７人の対象のうち、１人の対象は、コホート３に存在し、３６人の対象は、コホート４～９に存在した（各コホートに６人の対象）。コホート１及びコホート２の対象も、プラセボ対象もＰＫ集団に含まれていなかった。

（ｉ）１次エンドポイント
健常な男性対象に投与されたＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の単回吸入用量及び単回ＩＶ用量は十分に忍容性であり安全であった。

ＴＥＡＥの概要は、全ての対象の場合表４及び表５に、コホート毎に表６に提供される。７２人の対象のうち、すべてのＴＥＡＥの発生率は、３４．７％（２５人の対象）であり、プラセボで３３．３％（６人の対象）、及びＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２で３５．２％（１９人の対象）であった。全てのＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２コホートの対象は、少なくとも１つのＴＥＡＥを経験した。プラセボコホート１、３、４、及び８の対象は、少なくとも１つのＴＥＡＥを経験した。任意のＴＥＡＥを経験した２５人の対象のうち、１０人の対象（４０．０％）が治験薬と関連する可能性があると判断された１１のイベントを報告し、１５人の対象（６０．０％）が治験薬と関連しないと判断された１７のイベントを報告した。コホート８の１人のプラセボ対象は、薬物関連ＴＥＡＥとして定義された治験薬と関連する可能性があると判断された頭痛を経験したが、イベントは、強度が軽度であり、イベント開始の１時間後には後遺症がなく回復した。ＴＥＡＥのいずれも、重篤なものでも、中止に至ったものでなかった。この研究では、死亡は発生しなかった。プラセボ対象及びＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２対象は、両方とも、次のＴＥＡＥを経験した：頭痛、上気道感染症、及び筋骨格系の胸痛。最も頻繁に報告されたＴＥＡＥは、６人の対象（８％）が経験した頭痛及び５人の対象（７％）が経験した上気道感染症であった。頭痛及び上気道感染症を除いて、対象が経験した他のイベントは、ＡＺＤ１４０２／ＰＲＳ－０６０及びプラセボを投与された者に共通のものではなかった。任意のＴＥＡＥを経験した２５名の対象のうち、２０人の対象（８０．０％）が軽度のＴＥＡＥを報告し、５人の対象（２０．０％）が中等度のＴＥＡＥを報告した。重度のＴＥＡＥを報告した対象はいなかった。

略語：ＡＥ＝有害事象、ｍ＝事象の数、Ｎ＝群内の対象数、ｎ＝指定されたカテゴリーの対象数、ＴＥＡＥ＝治験薬投与後に発現した有害事象。
注記：ＴＥＡＥは、初回の投与時または投与後に開始されたＡＥとして定義された。
注記：パーセンテージは、各処置群の安全集団の対象数に基づいていた。

臨床検査評価は、臨床的に重大な異常またはベースラインからの変化を明らかにしなかった。この研究では、個々の臨床的に重大な異常は、認められなかった。同様に、バイタルサインには、すなわち、肺の機械的測定またはＥＣＧ評価のうちのいずれにも、顕著な変化は全く観察されなかった。味覚特性評価に対する個々の対象の応答は、治験薬またはプラセボと関連する有意な味覚または嗅覚がなかったという点で陽性であった。

（ｉｉ）２次エンドポイント
コホート１～７の経口吸入後、コホート１（送達用量０．１０ｍｇ）及びコホート２（送達用量０．５０ｍｇ）の全ての対象の血清ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２ ＰＫプロファイルは、投与後３０日までの定量限界（ＢＬＯＱ）であった。コホート３（送達用量２．００ｍｇ）では、１人の対象は、投与の４時間後（１．５８ｎｇ／ｍｌ）及び投与の５時間後（１．６７ｎｇ／ｍＬ）でのみ、検出可能なＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２濃度を有したが、他の全ての濃度の場合、ＢＬＯＱであった。従って、その結果、ＰＫパラメーターは、この研究の最初の３つのコホートに対して決定することが不可能であった。ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２のＰＫプロファイル、対、時間を、コホート４（送達用量８．００ｍｇ）以降で評価した。コホート４＞コホート５＞コホート６＞コホート７からの用量の増加に伴う血清中ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２濃度の順位の増加が、平均ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２濃度プロファイルで観察された（図４及び５）。対応する血清ＰＫパラメーターを表７にまとめる。データから、用量に伴うＰＫパラメーターＣ_ｍａｘ及びＡＵＣの比例以上の増加が観察された。例えば、コホート６（７２ｍｇの送達用量）からコホート７（１６０ｍｇの送達用量）への用量の２．２倍の増加は、Ｃ_ｍａｘ及びＡＵＣに約２．８倍の増加をもたらした。用量比例関係は、観察されず、コホート７の最高吸入送達用量（ＡＵＣ_ｉｎｆ／用量及びＣ_ｍａｘ／用量の場合、それぞれ６７．２％及び８７．１％）での高度な対象間変動に起因する可能性がある。Ｔ_ｍａｘは、全てのコホートで２時間～８時間に生じた。コホート４及び５では、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２は、投与の約１８時間後まで検出可能であったが、Ｔ_ｌａｓｔは、コホート６及び７では、より後ろになった。終末相は、平均（ＳＤ）ｔ_１／２の４．１６３（１．７０３２）時間（コホート４）、４．１００（０．８９７４）時間（コホート５）、６．１５６（０．７３０５）時間（コホート６）、及び５．９９８（０．６８０３）時間（コホート７）をサポートした。

略語：Ｄ＝用量、ｈ＝時間、ｍｉｎ＝最小、ｍａｘ＝最大、ＭＲＴ＝平均滞留時間、ＰＫ＝薬物動態。
^ａｎ＝２
^ｂｎ＝５
注記：Ｔ_ｍａｘに示される値は、中央値（最小、最大）である。

コホート８及び９へのＩＶ投与後、平均（ＳＤ）血清中ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２は、コホート４～７の吸入用量で観察されたｔ_１／２の約半分の急激な排泄相を示した（図６及び７ならびに表８）。コホート８～９のＩＶ用量の２倍の増加（１ｍｇ～２ｍｇ）では、平均ｔ_１／２、ＭＲＴ_ｉｎｆ、Ｖ_ｚ、Ｖ_ｓｓ、及びＣＬが、類似していたが、平均Ｃ_ｍａｘ、ＡＵＣ_ｌａｓｔ、及びＡＵＣ_０～２４は、約２倍に増加した（表８）。投与された対象のうち、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２レベルが、コホート８の投与後７日目及び３０日目のＢＬＯＱであったが、コホート９の場合、１人の対象は、投与の３０日後までＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２レベルを有していた。この対象は、図６及び７に含まれていたが、終末相ＰＫパラメーター（ｔ_１／２、ＡＵＣ_ｉｎｆ、ＣＬ／Ｆ、及びＶ_Ｚ／Ｆ）を決定するための外れ値と考えられ、表８に含まれていなかった。さらに、同じコホート９の対象で、１日目の投与前レベル２．２３ｎｇ／ｍＬが観察され、これは、血清中に提示されたヒト涙リポカリンによるアッセイ干渉を反映し得る。しかし、これがＣ_ｍａｘの１．２％を構成するので、ＰＫに影響を及ぼすとは予想されていなかった。

略語：Ｄ＝用量、ｈ＝時間、ｍｉｎ＝最小、ｍａｘ＝最大、ＰＫ＝薬物動態。
注記：Ｔ_ｍａｘに示された値は、中央値（ｍｉｎ、ｍａｘ）である。

吸収時間が、ＩＶ注入後よりも、単回用量経口吸入後に、より長いｔ_１／２で示されたように、１ｍｇの注入のコホート８（６人の対象）及び２ｍｇの注入のコホート９（５人の対象）の両方の１１人の対象における平均プールＭＲＴ_ｉｎｆに基づいて、平均吸収時間（ＭＡＴ）を決定した（表９）。両方のＩＶコホートにわたる平均（ＳＤ）ＭＲＴ_ｉｎｆは、１．４５（０．２０２）時間であり、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２用量の吸入後の７．７６～１１．４９時間であった。従って、ＭＡＴは、最も完全なデータ（ｎ＝５または６）を備えた高用量コホートを考慮した場合、７．４５～１０．０４時間の範囲であった。

さらに、コホート４～７の吸入後の平均ＡＵＣ_ｉｎｆを、ＩＶコホート９（２ｍｇ）の平均ＡＵＣ_ｉｎｆと比較することにより、吸入用量の絶対的な生物学的利用能が約６．９９％～１３．８％の範囲に及ぶことを決定した（表１０）。

略語：ｈ＝時間、ＩＶ＝静脈内、ＭＡＴ＝平均吸収時間、ＭＲＴ＝平均滞留時間。
注記：＊＊ＭＡＴ＝ＭＲＴ_ｉｎｆ ＩＮＨ－ＭＲＴ_ｉｎｆ ＩＶ

略語：ＡＵＣ_ｉｎｆ＝時間ゼロから無限大までの曲線下面積、ｈ＝時間、ＩＶ＝静脈内。

ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の尿ＰＫプロファイルも評価した。吸入投与の４８時間後まで、尿試料を収集した。この研究の３人の対象で、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２濃度を検出した。ＩＶコホート（コホート８及び９）では、尿中ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２レベルは、観察されなかった。尿中ＰＫパラメーターの要約が表１１に示され、これは、尿中に不変ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２として排泄される用量の割合が非常に低いことを示す。従って、不変ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の尿中排泄は、マイナーな排泄経路とみなされ得る。

全てのコホートの投与の３０日後までのＡＤＡの結果は、陰性であることが確認された。

略語：Ａｅ＝尿中に排泄される薬物の総量。

（ｉｉｉ）探索的エンドポイント（ｐＳＴＡＴ６阻害）：
コホート２～７の対象では、ＩＬ－４を用いるｅｘ－ｖｉｖｏでの全血の刺激を実施し、対応するｐＳＴＡＴ６レベルを決定した。サンプリングの時間経過中の対象の％ｐＳＴＡＴ６＋ＣＤ３細胞の平均及び標準偏差が図２に提示される。ｐＳＴＡＴ６の阻害は、コホート４（送達用量８．００ｍｇ）以降で観察された。コホート４及び５の対象の結果（送達用量は、それぞれ、８．００ｍｇ及び２４．０ｍｇ）は、吸入の４～８時間後のｐＳＴＡＴ６＋ＣＤ３細胞の％の最も高い阻害を示した。コホート６及び７の対象からの結果（送達用量は、それぞれ、７２．０ｍｇ及び１６０ｍｇである）は、投与の１時間後～２４時間後のｐＳＴＡＴ６＋ＣＤ３細胞の％の強力且つ長期の阻害を示した。

ｅｘ ｖｉｖｏ全血活性化の阻害のＰＫ／ＰＤ分析（図３）は、下流のＳＴＡＴ６リン酸化の用量依存的阻害を示し、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の吸入後の対象間の変動は少ない。ＩＣ_５０値を、０．３５ｎＭで計算した。

Ｆ．検討及び結論
吸入ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の全身曝露は、８．００ｍｇ以上の送達用量で観察された。吸入後の血清中ＰＫのゆっくりとした低下は、吸収による排泄を示す。最高吸入投与量（１６０ｍｇ）での血清中ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２レベルの高度な変動により、用量と比例の関係を定義することができなかった。ＩＶ用量の２倍の増加（１ｍｇ～２ｍｇ）では、平均ｔ_１／２、ＭＲＴ_ｉｎｆ、Ｖ_ｚ、Ｖ_ｓｓ、及びＣＬが類似していたが、平均Ｃ_ｍａｘ、ＡＵＣ_ｌａｓｔ、及びＡＵＣ_０～２４は、約２倍増加した。

ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の分子量（１７ｋＤａ）を有するタンパク質は、腎臓からクリアランスされ、組織分布が低くなる可能性がある。ＩＶ ＰＫコホートで決定された約１０ＬのＶ_ｓｓ値は、低い組織分布を確認した。不変ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の尿中排泄がほとんどの対象の尿で検出できず、そうでなければ、非常に低レベルであったため、尿中ＰＫパラメーターは、確認されなかった。これは、少なくとも不変ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２については、尿中排泄がマイナーな排泄経路であったことを示した。

血中に存在するＣＤ３＋細胞におけるｐＳＴＡＴ６の阻害は、全身曝露と相関し、８．００ｍｇの送達用量以降で観察された。各コホートの対象におけるｐＳＴＡＴ６＋ＣＤ３細胞の％の変動性は、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の全身曝露の変動によるものであった。これらの結果は、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２吸入が、全身循環に到達してＩＬ－４Ｒαの下流のシグナル伝達を強力に阻害し得る分子の安定性及び活性に影響を与えないことを示す。

ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の使用による潜在的なリスクを示す陽性のＡＤＡ結果は、経口吸入及びＩＶ投与の全てのコホートのいかなる対象に対しても記録されなかった。さらに、ＡＤＡは、いかなる対象においても検出されなかった。

全体として、安全性の懸念は、本研究では観察されなかった。すべてのＴＥＡＥの発生率は、３４．７％（２５人の対象）：プラセボ（６人の対象）で３３．３％、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２（１９人の対象）で３５．２％であった。ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２対象にみられた発生率は、プラセボ対象にみられたものと同様であった。任意のＴＥＡＥの発生率は、投与された投薬量には依存しなかった。最も頻繁に報告されたＴＥＡＥは、７つのイベントを有する６人の対象（８．３％）の頭痛、続いて、５つのイベントを有する５人の対象（６．９％）で上気道感染症であった。

明確に関連している、おそらく関連している、または完全に関連していないＴＥＡＥは、報告されていない。関連する可能性があると報告された薬物関連ＴＥＡＥの発生率は、１３．９％（１０人の対象［ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の９人の対象及びプラセボで１人の対象］）であった。薬物関連ＴＥＡＥは、頭痛、傾眠、喉の乾燥、胸膜性の痛み、悪心、気道感染症、及び筋骨格系の胸痛を含んでいた。

ＴＥＡＥの大部分は、軽度であり、全てのイベントは、治療可能であった。重度のＴＥＡＥは、報告されていない。ＴＥＡＥのいずれも、重篤なものでも、中止に至ったものでなかった。この研究では、死亡は発生しなかった。

臨床的に重大な異常またはベースラインからの変化をもたらす臨床検査評価はなかった。この研究では、個々の臨床的に重大な異常は、認められなかった。

バイタルサインであるＦＥＶ_１／ＦＶＣ比、またはＥＣＧ評価を含む呼吸機能測定のうちのいずれか、顕著な変化は観察されなかった。

味覚特性評価に対する個々の対象の応答は、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２またはプラセボと関連する不快な味または匂いがないことを示した。これに基づき、治験薬（噴霧製剤）の反復使用が可能と考えられた。

結論として、健常な成人男性対象におけるＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の単回吸入用量及び単回ＩＶ用量は、安全であり、十分に忍容性であった。吸入後のＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の用量関連の全身曝露は、吸収による排泄を示すプロファイルで観察され、分子のＰＤ効果と密接に相関していた。吸入ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の全身曝露が観察されない用量が、また、選択されてもよい。

実施例３．軽度の喘息の対象に経口吸入により投与されたＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の複数回投与の安全性、忍容性、及び薬物動態を評価する用量漸増の単盲検研究
実施例３は、コホート１～３のこの研究のデータを提供し、コホート１～５のデータは、実施例４で提供される。臨床試験がまだ完了していないので、臨床研究全体のデータロック、及び研究レポートの最終データアウトプットは、まだ作成されていない。

Ａ．研究の目的及び概要
本実施例では、軽度の喘息の登録対象にＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の複数回用量の経口吸入で実施されたプラセボ対照単盲検無作為化用量漸増研究について記載する。本研究の主な目的は、軽度の喘息を有する男性及び非妊娠非授乳女性対象において、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の複数回吸入投与の安全性及び忍容性を評価することであった。本研究の副次目的は、軽度の喘息の男性対象及び軽度の喘息の非妊娠非授乳女性対象に、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２を複数回吸入投与した後のＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の血清中及び尿中薬物動態（ＰＫ）を評価すること、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２に対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）の潜在的な出現を評価すること、及びＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２またはプラセボの複数吸入用量を投与された軽度喘息患者における呼気中一酸化窒素濃度（ＦｅＮＯ）のベースラインからの変化を評価すること、であった。研究の探索的目的は、ＩＬ－４／ＩＬ－１３経路のｅｘ－ｖｉｖｏでの全血活性化の阻害などの薬力学的バイオマーカーへのＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２効果を含む。

適合基準及び除外基準（以下参照）を満たした５３人の対象を登録し、５つのコホートに割り当てた：８人の対象（両方とも、それぞれ、６人の実薬対象、２人のプラセボ対象を含む）を有するコホート１及び２、１８人の対象（１２人の実薬、６人のプラセボ）を有するコホート３、８人の対象（６人の実薬対象及び２人のプラセボ対象）を有するコホート４、ならびに、１１人の対象（９人の実薬、２人のプラセボ）を有するコホート５。コホート５を除いて、実薬ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２及びプラセボに１：１で無作為化されて投与される２人の指標対象が、各コホート毎に存在する。コホート毎の残りの対象を、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２またはプラセボに、コホート１及び２の場合５：１で、コホート３の場合１１：５で、及びコホート４の場合５：１で無作為化した。

登録対象は、コホート１～５の場合、１日目～９日目に１日２回（ＢＩＤ）（１２時間毎、９日間）、１０日目の朝に１回、経口吸入を介した霧状液として、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２またはマッチングプラセボの複数回用量を投与された。コホート１に登録された対象は、５．０ｍｇの公称用量でＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２を投与され；最初の朝の用量のみが投与された１０日目を除いて、１日２回与えられた２．０ｍｇの送達用量に相当する。コホート２、３、４、及び５に登録された対象は、表１２に従う用量を投与された。実施例２に記載されるように、第１相単回漸増用量研究で得られたデータ、及び前臨床毒性研究により設定された事前に定義された曝露限界を検討した後に、用量を決定した。コホート５を除いて、先行するコホートの投与の完了及び次のコホートの投与の開始の間に最低７日間あった。各コホートでは、コホート５を除いて、指標対象へ、コホートの残りの対象の少なくとも４８時間前に投与した。結果が好ましいことを確認する指標対象のデータを検討した後、同じ用量レベルをコホートの残りの適格対象に投与した。残りの対象は、吸入開始から少なくとも３０分間隔で投与された。全ての安全性データ及びＰＫデータを検討して、次のコホートまで続けるか、または遅延させるか、停止するか、もしくは用量漸増を下向きに変更するかを判断した。

対象を、以下の基準に基づいて研究に登録した：（１）１８～３５の肥満度指数（ＢＭＩ）；（２）非喫煙者または元喫煙者であり、スクリーニング前の３ヶ月間に２回以下喫煙した対象（スクリーニング訪問時に尿中コチニン＜５００ｎｇ／ｍＬで判定）；（３）男性及び非妊娠非授乳女性；（４）出産可能な女性と性的に活発であった男性は治験薬を用いる処置期間及び治験薬の最終投与後さらに９０日間、避妊の効果の高い方法に従うことを同意する。妊孕性のある男性と性的に活発であった出産可能な女性は、治験の参加期間及び治験薬の最終投与後さらに９０日間に２重の避妊法に対する指示に従うことを同意する：（５）軽度の喘息の診断の文書化；（６）１８～５５歳；（７）ＦＥＶ_１に対して予測される肺機能≧７０％及びＦＥＶ_１／強制肺活量（ＦＶＣ）比≧０．７；（８）スクリーニング時及び研究の事前資格審査中にＦｅＮＯ≧３５ｐｐｂ。

さらに、以下の基準のうちのいずれかを満たした対象は、登録されなかった：（１）研究者の意見では、研究への参加のために対象を危険にさらし得る任意の臨床的に重大な医学的障害の病歴または臨床症状は、研究の結果に影響を与えるか、または研究に参加する対象の能力に影響を与え得た。薬物またはアルコール乱用の病歴；（２）研究への参加中に対象を危険にさらし得るＡ型肝炎、Ｂ型肝炎、またはＣ型肝炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、結核を含む既知の有意な感染症（すなわち、インターフェロン［ＩＦＮ］－γ放出アッセイ［ＩＧＲＡ］の陽性結果、ＱｕａｎｔｉＦＥＲＯＮ（登録商標）ＴＢ－Ｇｏｌｄ）の病歴、またはこれが知られている；（３）処置されて治癒したとみられる皮膚の基底細胞癌及び扁平上皮癌、または子宮頸部上皮内癌を除く過去１０年以内（乳癌の場合、２０年）の癌の病歴。リンパ腫の病歴は認められなかった；（４）１日目から４週間以内の任意の臨床的に重大な疾病、感染、医学的／外科的手順、もしくは外傷、または研究期間中に計画された入院患者の手術もしくは入院；（５）研究責任者が判断した、臨床化学、血液学、または尿検査の結果における任意の臨床的に重大な異常；（６）ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２（構造的に関連する涙リポカリン）に標的化されるＡＤＡに対する可能性と関連する安全性データの解釈に影響を与え得る、慢性または急性であった可能性がある任意の原因の進行中の再発性『ドライアイ症候群』の重大な病歴；（７）１日目の４週間以内に生ワクチンまたは弱毒化ワクチンを投与されている対象；（８）免疫機能の異常を示唆する病歴を有する対象；（９）生物学的療法後のアナフィラキシーの病歴、及び治験薬製剤の任意の構成成分に対するアレルギーまたは応答の既知の病歴；（１０）研究者とうまくコミュニケーションができない（すなわち、言語の問題、精神発達の低下、または脳機能の障害）；（１１）治験薬の初期投与前に、直前の１６週間以内の新規化学物質の任意の臨床研究または直前の１２週間以内もしくは５半減期内（どちらか長い方）の市販薬物の臨床研究への参加；（１２）直前の１２週間以内の４５０ｍＬ以上の血液の提供；（１３）妊娠中もしくは授乳中または研究期間内もしくは治験薬の最終投与後９０日以内の妊娠を計画していた女性；（１４）出産可能な女性パートナーとの性的に活発であり且つ精管切除をしておらず且つ１日目から治験薬の最終投与の９０日後まで避妊の効果の高い方法に同意していない男性。妊孕性のある男性パートナーと性的に活発であり、１日目から治験薬の最終投与の９０日後まで少なくとも１つのバリアを用いて２重の避妊法に同意していなかった出産可能な女性；（１５）生命を脅かす喘息のエピソード；（１６）スクリーニング前の特定の時間内に次の薬剤のうちのいずれかを使用：長時間作用型β２アゴニスト（スクリーニング前４週間はなし）、抗ＩｇＥもしくは抗ＩＬ－５療法（スクリーニング前６ヶ月間）、スクリーニング前１６週間以内の吸入コルチコステロイド（１日当たり５００μｇ超のベクロメタゾンジプロピオン酸（ＢＤＰ）もしくは同等物）、スクリーニング時もしくはスクリーニング前４週間以内もしくは無作為化時の任意の吸入コルチコステロイド、スクリーニング前５年以内の喘息もしくは呼吸器感染症の処置のための経口もしくは注射可能なステロイド、スクリーニング前４週間以内の鼻腔内ステロイド、スクリーニング前４週間以内の局所ステロイド、スクリーニング前２週間以内のロイコトリエン拮抗薬、またはスクリーニング前の１週間以内のキサンチン（カフェインを除く）、抗コリン作動薬、もしくはクロモグリケート。

Ｂ．研究手順
研究は、スクリーニング中（治験薬の投与の２１日前である－２１日目から－２日目まで）の研究前評価を含んでいた。適格性のためのスクリーニング時及び－１日目（慣らし）にＦｅＮＯを評価し、適格性を確認した。両方の場合にＦｅＮＯが３５ｐｐｂ以上の対象は、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２またはプラセボを投与するために無作為化されて研究に参加した。－１日目（慣らし）、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２またはマッチングプラセボの初回投与を投与される１日前に、対象は、病院／研究サイトにチェックインし；対象は、最終用量の投与（１０日目）の４８時間後（１２日目）にチェックアウトした。１日目の朝、ＩｎｎｏＳｐｉｒｅ Ｇｏネブライザー（Ｐｈｉｌｉｐｓ）を使用して、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２またはプラセボのいずれかの治験薬を投与した。安全性及びＰＫの評価を研究期間中の所定の時点で行った。朝の用量の投与後１日目及び１０日目に、完全なＰＫプロファイルを実施した。次に、対象は、１２日目の朝にクリニックを退院し、１０日目の治験薬の最終用量を投与された後の１７日目（±１日）及び４０日目（±３日）に、安全フォローアップ、ＰＫ、及びＰＤ評価のために再来した。

Ｃ．エンドポイント及び評価
研究の１次エンドポイントは、研究中継続的に、有害事象（ＡＥ）、バイタルサイン、１秒強制呼気量（ＦＥＶ_１）、心電図（ＥＣＧ）、及び研究室安全性試験で評価される安全性／忍容性である。対象は、研究参加中（治験薬が最初に投与された時点から開始）及び治験薬の最終投与の３０日後まで、ＡＥについて監視された。進行中の重篤なＡＥ（ＳＡＥ）は、治癒または安定するまで追跡された。バイタルサインの評価は、体温、収縮期及び拡張期の血圧測定値（ｍｍＨｇ）、脈拍（１分当たりの心拍数［ＢＰＭ］）、及び呼吸数（１分当たりの呼吸数［ＢＲＰＭ］）を含む。血液学、血清化学、尿検査、及び妊娠スクリーニングを含む臨床検査評価のために、血液及び尿試料を収集した。所定の時点で３回１２誘導ＥＣＧを実施し、同時に採血した場合、採血前に実施した。

主要エンドポイントでは、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２を１回用量を投与された全ての対象は、安全性分析に含まれていた。ＡＥ、バイタルサイン、呼吸機能検査（ＰＦＴ）、ＥＣＧ、及び臨床検査データに基づいて、安全性を評価した。全てのＡＥ、身体検査、バイタルサイン、ＰＦＴ、及びＥＣＧ評価、ならびに、潜在的な臨床的懸念のある安全臨床検査の異常について記載した。安全性データは、必要に応じて、表及び／またはグラフ形式で提示され、用量コホート及び時間により記述的にまとめられる。絶対値データ及びベースラインデータからの変更は、必要に応じて、まとめられる。

Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｆｏｒ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ（ＭｅｄＤＲＡ）器官別大分類及び基本語を使用して、ＡＥをコード化した。第１投与前または後に開始日付に従って、前処置及び処置下発生ＡＥ（ＴＥＡＥ）として、全てのＡＥを特性決定した。ＡＥを有する対象の発生率表は、最大重症度であるＳＡＥ、治験薬と関連すると評価されたＡＥ、及び治験薬の中止をもたらしたＡＥで、全てのＡＥに対して提示された。

ＥＣＧ分析では、投与前に３回のＥＣＧ測定を行い、投与の２０、３０、及び６０分後に単回測定を行い、ならびに後で、全ての測定に対し３回行った。１日目に投与前に実施された３回のＥＣＧ測定の平均は、全ての投与後の比較で患者のベースライン補正ＱＴ間隔（ＱＴｃ）値として機能した。ＥＣＧ及び臨床検査測定の変化がまとめられる。

研究の副次エンドポイントは、ＰＫパラメーター、血清中のＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２に対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）の出現、及びＦｅＮＯレベルのベースラインからの変化である。ＰＫ分析及びＡＤＡ評価のための静脈血試料及び尿試料を、事前に決定された時点で収集した。以下のＰＫパラメーターを決定した：Ｃ_ｍａｘ、Ｃ_ａｖｅ、Ｔ_ｍａｘ、ゼロ時から投与の１２時間後の曲線下面積（ＡＵＣ_０－１２）、ＡＵＣ_０－２４、ＡＵＣ_{０－ｌａｓｔ}、ＡＵＣ_ｉｎｆ、ゼロ時から投与期間の最後までのＡＵＣに対する累積比（Ｒａｃ ＡＵＣ_０－τ）、Ｒａｃ Ｃ_ｍａｘ、時間変化パラメーター（ＴＣＰ）、用量正規化された曝露パラメーター（ＡＵＣ_０－２４／用量、ＡＵＣ_{０－ｌａｓｔ}／用量、ＡＵＣ_ｉｎｆ／用量）、ｔ_１／２、吸入投与の見かけのクリアランス（ＣＬ／Ｆ）、及び終末相に基づく分布容積（Ｖ_ｚ／Ｆ）、Ａｅ、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２のｆｅ、ならびにＣＬ_ｒ。各尿の収集の間隔で、Ａｅ及びｆｅを累積的に決定した（Ａｅ［ｔ_ｘ－ｔ_ｘ＋１］、Ａｅ［０－ｔ_ｘ］、ｆｅ［ｔ_ｘ－ｔ_ｘ＋１］、及びｆｅ［０－ｔ_ｘ］）。プラセボと比較したベースラインからのＦｅＮＯレベルの変化を、薬理活性の指標として評価した。スクリーニング及び任意のフォローアップ訪問中は１回及び投与期間中は１日５回（投与前１回、及び各ＢＩＤ［１日２回］投与後は２回）、標準ブレスＦｅＮＯ試験を使用して気道炎症を評価した。ＦｅＮＯ試験を全ての研究訪問で同じ方法で完了した。対象は、ＮＩＯＸ ＶＥＲＯ（登録商標）気道炎症モニターを介して総肺容量まで吸入し、次に、５０ｍＬ／秒で１０秒間息を吐き出した（視覚的及び聴覚的合図で支援）。得られた値を記録し、合計２回測定のプロセスを繰り返した（最大２回の繰り返し）。

研究の探索的エンドポイントは、投与前、投与中、及び投与後の、ＰＤバイオマーカーに対するＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の影響、例えば、ｅｘ－ｖｉｖｏ全血活性化の阻害及びＩＬ－４／ＩＬ－１３経路と関連する探索的全身バイオマーカー、ならびに血漿及び血清試料の可溶性バイオマーカー分析を含んでいた。探索的分析では、血漿、血清、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、及び全血を収集した。血漿及び血清を使用して、ＩＬ－４Ｒα経路と関連する潜在的な可溶性バイオマーカーを評価した。全血のｅｘ－ｖｉｖｏ刺激を使用して、全身ターゲットエンゲージメントを評価した。ＩＬ－４で対象から収集した全血をｅｘ ｖｉｖｏで刺激し、その後、事前定義された時点での吸入後のＣＤ３＋Ｔ細胞亜集団におけるリン酸化ＳＴＡＴ６（ｐＳＴＡＴ６）を測定することにより、全血活性化の阻害を評価した。疾患と関連する遺伝子型を同定するために、ＤＮＡを使用した。ＩＬ－４Ｒα経路と関連し且つ介入により恩恵を受ける可能性が最も高かった遺伝子シグネチャーを有する患者を同定しようとして、ｍＲＮＡ分析を実施した。

Ｄ．データ分析
（ｉ）ＰＫ
副次エンドポイントでは、研究の過程で、最初の３つのコホートのために、１日目及び１０日目にＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２のＰＫプロファイルを調査し、ＰＫ集団をデータ分析に使用した。標準非コンパートメント分析手順に従って、曝露ＰＫパラメーターを誘導した。使用されたソフトウェアは、Ｐｈｏｅｎｉｘ（商標）ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（登録商標）ｖ８．０（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、米国）であった。表１９に従って、ＰＫ曝露パラメーターの記述統計は、算術平均及び標準偏差（ＳＤ）を含み、記述平均血清中濃度、対、時間プロファイルを生成した。

（ｉｉ）抗薬物抗体形成
研究の過程で、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の免疫原性（抗ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２抗体形成）を調査した。

（ｉｉｉ）ＰＤ－ＦｅＮＯ
ＦｅＮＯは、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２のＰＤマーカーとして定義された。ＰＤ解析から除外された任意の対象のための利用可能なＰＤデータが列挙され、ＰＤ解析セットの対象のみが、記述的要約表及び要約／平均図面に含まれる。全ての投与群について個別に及びプラセボと比較したＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２投与群について、ＦｅＮＯのベースラインからの変化を評価するために、推論統計をＰＤ解析セットで実施した。ＦｅＮＯは、対数正規分布のエンドポイントであり、これは、分析が対数スケールで実施されたことを意味する。結果の提示では、実薬及びプラセボ間の推定平均差を、線形スケールに変換し、プラセボ群に比較して、実薬群のベースラインからの低減割合として表した。コホート３の完了時に、中間分析を目的としたデータスナップショットを実施し（以下のセクション（ｖ）を参照）、コホートの適切な検出力を保証するためにＦｅＮＯ測定の変動性を評価し、プラセボと比較した最初の３回の投与のそれぞれのベースラインからの変化の予備的な推定を評価した。

（ｉｖ）ＦｅＮＯの分析
プラセボ対象は、３つのコホート全てから、１０人の患者を含有する一群にプールされた。コホート１及び２は、それぞれ、実薬処置を受けている６人の患者を含み、コホート３は、１２人の患者を有していた。各患者は、２０回のＦｅＮＯ測定値に貢献した：ベースライン値、１日目～９日目の朝の投与の２時間後及び晩の投与の２時間後、ならびに１０日目の朝の投与の２時間後の記録。

各実薬群及びプラセボ間のｌｏｇ ＦｅＮＯの平均差の推定値は、非線形混合効果モデルから導出し、非線形部分は、以下の式のｓｉｇｍｏｉｄａｌ ｅｍａｃｓモデルであった。

固定された処置群効果及び対象固有の変量効果により、漸近線パラメーターＡをモデル化した。

処置群ｋ（ｋ＝プラセボ、５ｍｇ、１５ｍｇ、及び５０ｍｇの公称用量）ならびに対象ｉ（ｉ＝１～３４）の場合。変量効果は、患者内の相関関係を説明し、対象固有の漸近線を可能にした。プラセボ群で異なる時間経過効果を可能にするために、ｔ_ｍｉｄパラメーターは、２つの固定効果のレベルを含んでいた。

データの図で視覚化するために、観察されたＦｅＮＯの低減を、処置期間（１日目～１０日目）、ならびに１１日目及び１２日目にわたってプロットした。１１日目及び１２日目のＦｅＮＯ測定値は、ベースラインレベルへのＦｅＮＯの戻りを示すためにグラフに含まれていた。

Ｅ．結果
（１）ＦｅＮＯの結果
全てのコホート（ｎ＝３４）にわたるＦｅＮＯベースライン平均（ＳＤ）は、７５．９（４１．０）ｐｐｂであり、中央値は、６２ｐｐｂであった。１０日間の治療後のプラセボ群の推定減少率は、２５．２％であった。表１３は、プラセボ群と比較した用量群のそれぞれの減少率を示す。

^＊帰無仮説の両側検定「実薬及びプラセボ間の差異はない」

（２）ＰＫの結果
コホート１において、対象が２ｍｇの送達用量を投与された後、わずかな血清曝露が観察されたが、これは、ＰＫパラメーターの計算には不十分であった。コホート２において、対象が６ｍｇの送達用量を投与された後、より完全な曝露データが観察され、コホート３において２０ｍｇを投与された後、ＰＫパラメーターが導出されることが可能になる（図９）。コホート１～３の主な研究結果は、以下の通りであった：
●ＡＵＣ及びＣｍａｘの曝露は、線量とともに増加した（表１４）。
●投与前試料を、１０日間の投与期間を通じて採取し、観察された血清レベルは、定常状態が投与の２日目の終わりまでに達成されている（図９）ことを示した。
●１日２回９日間投与後の１０日目の投与後の曝露は、１日目の１回目の投与後よりも高かった。観察された増加は、１２時間の投与間隔及び単回漸増用量研究で得られたＰＫ特性と合理的に一致していた（実施例２）。
完了している尿中ＰＫ分析はない。

コホート１では、２人の対象が、１７日目に低い陽性のＡＤＡ結果を返し、４０日目のその後の反応は、陰性であった。コホート２では、ＡＤＡの研究結果はなかった。

^＊測定可能な曝露を伴う対象が不足しているので、決定されていない

（３）探索的エンドポイント－ＣＤ３＋細胞におけるｐＳＴＡＴ６阻害を監視することによるターゲットエンゲージメントの結果：
ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害を評価して、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２のターゲットエンゲージメントを評価した。

コホート１～３のサイトのうちの１つに登録する対象の血液中で、ＩＬ－４を用いるｅｘ－ｖｉｖｏでの全血の刺激を実施し、対応するｐＳＴＡＴ６のレベルを決定した。指定された時点で、Ｎｕｃｌｅｕｓ Ｎｅｔｗｏｒｋ臨床サイトに登録された患者から、全血を収集した。血液を１０ｎｇ／ｍＬのヒトＩＬ－４で１５分間刺激し、次に、赤血球を溶解して白血球を固定した後、ｐＳＴＡＴ６及びＣＤ３マーカーの染色を実施し、続いて、ＦＡＣＳ分析にかけた。サンプリングの時間経過中の対象の％ｐＳＴＡＴ６＋ＣＤ３細胞の平均及び標準偏差が図１０に提示される。ｐＳＴＡＴ６の阻害は、コホート２（送達用量６．００ｍｇ）以降で観察された。コホート２及び３の対象の結果（送達用量６．００ｍｇ及び２０．０ｍｇ）は、１０日目の吸入の１～８時間後にｐＳＴＡＴ６＋ＣＤ３細胞の％の最も高い阻害を示した。

ｅｘ ｖｉｖｏ全血活性化の阻害のＰＫ／ＰＤ解析（図１１）は、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の吸入後、対象間の変動が少なく、下流のＳＴＡＴ６リン酸化の用量依存的阻害を示した。ＩＣ_５０値を、０．３０６ｎＭで計算した。

（４）安全性の結果
コホート１（２．０ｍｇの送達用量）では、バイタルサイン、心電図、病理学（生化学、血液学、尿検査）で臨床的に関連する変化は観察されなかった。コホート２（６．０ｍｇの送達用量）では、好中球及び白血球数が、１０日目までにベースラインを離れて増加した１人の対象がおり、このコホートではバイタルサインまたは心電図に変化はなかった。コホート３では、１人の対象は、臨床的に重要でないとみられる白血球数の増加を有し、これは、反復試験で正常化され、別の対象は、繰り返される採血と関連している可能性があるヘマグロビンの低下を有し、このコホートにおいてバイタルサインまたは心電図の変化はない。

軽度から中等度の有害事象が３つのコホートにわたって観察された。コホート１（送達用量２．０ｍｇ）では、これらは、２人の対象において軽度の発疹の徴候、１人の対象において投与後の口渇を含む。１人の対象は、投与後に咳を経験したが、これは、次の投与前に治癒した。コホート２（送達用量６．０ｍｇ）では、１人の対象は、味覚障害を経験し、１人の対象は、軽度の関節痛を経験し、１人は、事実上、軽度である咳を経験した。コホート３（用量送達２０．０ｍｇ）では、頭痛及び口渇は、治験薬と関連する可能性があると示され、気管支痙攣の２つのエピソードが観察されたが、投与とは関連がなく、短期的な喘鳴が別の２人の対象でみられ、これは、投与と関連している可能性があり及びおそらく関連していると示された。

全体として、治験薬は、十分に忍容性であり、３つのコホート全てに対し用量を漸増する決定に影響を及ぼす安全審査に関する懸念はなかった。

Ｇ．考察及び結論
軽度の喘息患者におけるＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２のこの複数回漸増用量研究では、ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害により表されるように、コホート１、２、及び３対プラセボにおいて、用量関連全身ターゲットエンゲージメントが観察された。

全体として、ＦｅＮＯの低減は、吸入後の肺におけるＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の局所ターゲットエンゲージメントを示した。しかし、重要な観察結果は、ｐＳＴＡＴ６の全身ターゲットエンゲージメントに反映されなかった２ｍｇの送達用量（コホート１）を投与された対象におけるＦｅＮＯの有意な低減であり、この１日２回の送達用量では、ＰＫパラメーター計算に不十分な、わずかな血清曝露があった。これにより、有意な全身曝露及びターゲットエンゲージメントのないＦｅＮＯの低減で決定される、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２が局所肺炎症に影響を及ぼす能力の間のずれが示された。これは、ＩＬ－４Ｒαを標的とする肺送達リポカリンムテインが全身曝露なしに抗炎症効果を媒介し得るという概念を支持する。

実施例４．軽度の喘息の対象に経口吸入により投与されたＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の複数回投与の安全性、忍容性、及び薬物動態を評価する用量漸増の単盲検研究
実施例４は、コホート１～５のデータを提供する。コホート１～３のデータは、実施例３で提供された。臨床試験がまだ完了していないので、臨床研究全体のデータロック、及び研究レポートの最終データアウトプットは、まだ作成されていない。

Ａ．研究の目的及び概要
研究の目的は、上記の実施例３に記載された通りであった。

コホート１～４の患者のベースライン特性は、以下の表１５に示される。

コホート１～４の患者。
ＢＭＩ、肥満度指数；ＦｅＮＯ、呼気中の一酸化窒素濃度；ＦＥＶ１、１秒強制呼気量；ＦＶＣ、強制肺活量；ｐｐｂ、１０億分の１。

コホート１～４のみの研究計画の概略図が図１６に示される。

Ｂ．研究手順
研究手順は、上記の実施例３に記載された通りであった。

Ｃ．エンドポイント及び評価
エンドポイント及び評価は、上記の実施例３に記載の通りであった。

Ｄ．データ分析
（ｉ）ＰＫ
副次エンドポイントでは、研究の過程で、最初の５つのコホートのために、１日目及び１０日目にＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２のＰＫプロファイルを調査し、ＰＫ集団をデータ分析に使用した。標準非コンパートメント分析手順に従って、曝露ＰＫパラメーターを誘導した。使用されたソフトウェアは、Ｐｈｏｅｎｉｘ（商標）ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（登録商標）ｖ８．０（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、米国）であった。表１９に従って、ＰＫ曝露パラメーターの記述統計は、算術平均及び標準偏差（ＳＤ）を含み、記述平均血清中濃度、対、時間プロファイルを生成した。

（ｉｉ）抗薬物抗体形成
研究の過程で、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の免疫原性（抗ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２抗体形成により評価）を調査した。

（ｉｉｉ）ＰＤ－ＦｅＮＯ
ＰＤマーカーＦｅＮＯの評価は、実施例３のパート（ｉｉｉ）に記載の通りであった。

（ｉｖ）ＦｅＮＯの分析
実施例３（ｉｖ）に記載の非線形混合効果モデルは、漸近線パラメーターＡのモデルに共変量としてベースラインＦｅＮＯを追加することにより更新された。

Ｅ．結果
（１）ＰＫの結果
コホート１では、対象が２ｍｇの送達用量を投与された後、わずかな血清曝露が観察され、これは、ＰＫパラメーターの計算には不十分であった。コホート２において、対象が６ｍｇの送達用量を投与された後に、より完全な曝露データが観察され、コホート３において２０ｍｇ及びコホート４において６０ｍｇを投与された後、ＰＫパラメーターが導出されることが可能になる（図１３）。コホート１～５の主な研究結果は、以下の通りであった：
●ＡＵＣ及びＣｍａｘの曝露は、線量とともに増加した（表１６）。
●投与前試料を、１０日間の投与期間を通じて採取し、観察された血清レベルは、定常状態が投与の２日目の終わりまでに達成されている（図１３）ことを示した。
●１日２回９日間投与後の１０日目の投与後の曝露は、１日目の１回目の投与後よりも高かった。観察された増加は、１２時間の投与間隔及び単回漸増用量研究で得られたＰＫ特性と合理的に一致していた（実施例２）。
●完了している尿中ＰＫ分析はない。

^＊測定可能な曝露を伴う対象が不足しているので、決定されていない

（３）抗薬物抗体
コホート１では、６人の対象のうち、２人が１７日目に低い陽性ＡＤＡ値を返し；４０日目のその後の応答は陰性であった。

コホート２では、ＡＤＡの研究結果はなかった。

コホート３では、１２人の対象のうち４人は、４０日目に低い陽性ＡＤＡ値を返し、１人の対象は、１７日目に低い陽性ＡＤＡ値を返し、その後、４０日目に陰性応答を返した。

コホート４では、６人の対象のうち３人が、陽性ＡＤＡ値を返した。これらのうち、２人の対象は、４０日目のみで低い陽性ＡＤＡ値を有していた。１人の対象は、１７日目及び４０日目の両方で、より高い陽性ＡＤＡ応答を生じた。

コホート５では、１２日目、１７日目、及び４０日目に陽性ＡＤＡ結果が確認された１人の対象、ならびに、４０日目に陽性ＡＤＡが確認された１人の対象が存在した。

任意の前処理試料またはＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２を投与される場合の試料では、ＡＤＡは、観察されなかった。

（４）探索的エンドポイント－ＣＤ３＋細胞におけるｐＳＴＡＴ６阻害を監視することによるターゲットエンゲージメント：
ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害を評価して、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２のターゲットエンゲージメントを評価した。

コホート５ではなくコホート１～４のサイトのうちの１つに登録する対象の血液中で、ＩＬ－４を用いるｅｘ－ｖｉｖｏでの全血の刺激を実施し、対応するｐＳＴＡＴ６のレベルを決定した。指定された時点で、Ｎｕｃｌｅｕｓ Ｎｅｔｗｏｒｋ臨床サイトに登録された患者から、全血を収集した。血液を１０ｎｇ／ｍＬのヒトＩＬ－４で１５分間刺激し、次に、赤血球を溶解して白血球を固定した後、ｐＳＴＡＴ６及びＣＤ３マーカーの染色を実施し、続いて、ＦＡＣＳ分析にかけた。サンプリングの時間経過中の対象の％ｐＳＴＡＴ６＋ＣＤ３細胞の平均及び標準偏差が図１４に提示される。ｐＳＴＡＴ６の阻害は、コホート２（送達用量６．００ｍｇ）以降で観察された。コホート３及び４の対象の結果（送達用量２０．００ｍｇ及び６０．０ｍｇ）は、１０日目の吸入の１～８時間後にｐＳＴＡＴ６＋ＣＤ３細胞の％の最も高い阻害を示した。

ｅｘ ｖｉｖｏ全血活性化の阻害のＰＫ／ＰＤ解析（図１５）は、ＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の吸入後、対象間の変動が少なく、下流のＳＴＡＴ６リン酸化の用量依存的阻害を示した。ＩＣ_５０値を、０．３０ｎＭで計算した。

（５）安全性の結果：コホート１～５
有害事象：薬物に起因する軽度～中等度の有害事象が５つのコホートにわたって観察され、以下のようにまとめられる。

コホート１（１日２回の送達用量２．０ｍｇ）では、有害事象は、投与後に２人の対象に軽度の発疹、１人の対象に口渇の徴候を含んでいた。１人の対象は、投与後に咳を経験したが、これは、次の投与前に治癒した。

コホート２（１日２回の送達用量６．０ｍｇ）では、有害事象は、味覚障害を経験した１人の対象、軽度の関節痛を経験した１人の対象、及び軽度の咳を経験した１人、ならびに投与の終了の２日後に、その後に短く軽度の喘息の悪化を含んでいた。

コホート３（１日２回の送達用量２０．０ｍｇ）では、有害事象は、治験薬と関連する可能性があるものとして示される頭痛及び口渇を含んでいた。気管支痙攣の２つのイベントが１人の対象で観察されたが、投薬とは関係なかった。短期間の喘鳴が別の２人の対象にみられ、それぞれ、投与と関連する可能性があり及びおそらく関連すると示される。

コホート４（１日２回の送達用量６０．０ｍｇ）では、有害事象は、治験薬と関連する可能性があるものとして示される頭痛を含んでいた。咳及びそれと関連する症状の２つのエピソードも、明らかに治験薬と関連している可能性として示された。９日目に、上気道感染症と診断された１人の対象は、短時間の気管支痙攣を経験した。１人の対象は、９日目に咳及び高熱で研究から離脱し、おそらく薬物と関連しているとみられる上気道感染症と考えられた。この参加者は、また、ウイルス性疾患と関連している可能性が高い、複数回の失神の重大なエピソードを有した。同じ参加者は、また、おそらくウイルス性疾患と関連して、投与期間後に口唇ヘルペス（進行中）及び胸部圧迫感のうちの１つの有害事象を有していた。さらに、この対象は、投薬後のフォローアップ訪問のために再来した時に、無関係の妊娠を確認された。その後の妊娠の結果は、流産であり、治験薬とは関係がなく、おそらく参加者の年齢（４７歳）が原因であった。

追加の安全性は、以下の通りまとめられる。

コホート１（１日２回の２．０ｍｇの送達用量）では、バイタルサイン、心電図、病理学（生化学、血液学、尿検査）で臨床的に関連する変化は観察されなかった。

コホート２（１日２回の６．０ｍｇを送達用量）では、好中球及び白血球数がベースラインから１０日目まで増加した対象が１人いた。このコホートでは、バイタルサインまたは心電図に変化はなかった。

コホート３（１日２回の２０．０ｍｇの送達用量）では、１人の対象は、白血球数が増加し（臨床的に有意ではないとみなされた）、これは、反復試験で正常化され、別の対象は、繰り返しの採血と関連している可能性のあるヘモグロビンの低下を有していた。このコホートでは、バイタルサインまたは心電図に変化はなかった。

コホート４（１日２回の６０．０ｍｇの送達用量）では、１人の参加者は、投与前の好中球数が少なく、治験薬とは関連がなかった。軽度の一過性リンパ球減少症及び好中球減少症の症例もあったが、これは、有意とはみなされなかった。１人の対象は、ヘモグロビンが低下した血液学的変動を示し、処置後フォロー結果は、それらの１日目の結果と一致した。１人の対象は、投与前に上昇したビリルビン（スクリーニングでは正常）を有することが観察され、これは、研究中は増加し続けたが、予定外の訪問時には減少していた。しかし、それは、依然として高く、有害事象は、進行中である。

コホート５（１日２回の０．２ｍｇの送達用量）では、登録された１１人の対象のうち９人において、２６の軽度～中等度の有害事象が観察された。有害事象はいずれも深刻または重度とはみなされなかった。２６のＡＥのうち２０は、「軽度」とみなされ、そのうち５つは、「関連している可能性がある」とみなされた。６つの有害事象は、事実上中等度とみなされ、そのうち３つは、「関連している可能性がある」とみなされ、プラセボを投与された１人の対象で観察された。残りの３つの中程度のＡＥは、「関連性がない」とみなされた。コホート５で観察された全てのＡＥが治癒した。全ての肺活量測定、臨床検査、ＥＣＧ、及びバイタルサインは、臨床研究者により臨床的に重要ではないとみなされた。安全審査委員会は、用量レベルが十分に忍容性であることを全員一致で決定した。

全体的に、治験薬は、本研究で十分に忍容性であり、全ての５つのコホートに対し、次のコホートまで用量漸増及び／または継続する意思決定に影響を及ぼした安全審査時に懸念は全くなかった。

^ａパーセンテージは、優先語に基づく、すなわち、優先語毎に患者全体の５％以上で生じたＡＥの発生率
^ｂＡＥは、コホート１～４のものであり、これは、患者全体の５％以上で生じた
^ｃＡＺＤ１４０２／ＰＲＳ－０６０の送達用量は、２ｍｇ、６ｍｇ、２０ｍｇ、及び６０ｍｇであった。
流産の重篤な有害事象につながる１回の妊娠が観察された。これは、患者の年齢によるものと考えられ、研究者による治験薬とは関連しなかった。
ＡＥ、有害事象；ｍ、イベント数；ｎ、特定のＡＥで報告された患者数；Ｎ、各処置群の患者の総数

（６）コホート１～５：ＦｅＮＯの結果
コホート１～４全体のＦｅＮＯベースライン平均（ＳＤ）（ｎ＝４２）は、７５．８（４１．２）ｐｐｂであり、中央値は、６２ｐｐｂであり、範囲は、２８～１７８ｐｐｂであった。共変量としてベースラインＦｅＮＯを含む、更新された非線形混合効果モデルを使用して、平均低減率を推定した。１０日間の処置後のプラセボ群（ｎ＝１２）の推定低減率は、２６．２％であった。

^＊帰無仮説の両側検定「実薬及びプラセボ間の差異はない」

送達用量０．２ｍｇのコホート５のＦｅＮＯデータの分析により、プラセボと比較してベースラインからのＦｅＮＯの低減が全く示されなかった。

Ｇ．考察及び結論
軽度の喘息患者においてＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２のこの複数回漸増用量研究では、ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害により表されるように、コホート１～５（すなわち、２ｍｇ、６ｍｇ、２０ｍｇ、６０ｍｇ、及び０．２ｍｇの送達用量）対プラセボにおいて、用量と関連する全身ターゲットエンゲージメントが観察された。

全体として、ＦｅＮＯの低減は、吸入後の肺におけるＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の局所ターゲットエンゲージメントを示した。しかし、重要な観察結果は、２ｍｇの送達用量を投与された対象（コホート１）におけるＦｅＮＯの有意な減少であり、これは、この１日２回の送達用量ではｐＳＴＡＴ６の全身ターゲットエンゲージメントアッセイにおいて有意な阻害効果により反映されず、みられたわずかな全身曝露は、このＩＬ－４誘発応答を阻害するには不十分であった。これにより、検出可能な全身曝露及び関連する全身ターゲットエンゲージメントのないＦｅＮＯの低減で決定される局所肺炎症に影響を及ぼすＰＲＳ－０６０／ＡＺＤ１４０２の実証された能力の間のずれが示された。これは、ＩＬ－４Ｒαを標的とする肺送達リポカリンムテインが検出可能な全身曝露なしに抗炎症効果を媒介し得るという概念を支持する。

参考文献
本発明及び本発明が属する最新技術をより完全に記載及び開示するために、多くの刊行物が上で引用される。これらの参考文献の完全な引用が以下に提供される。これらの参考文献のそれぞれの全体が本明細書に組み込まれる。
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配列

Claims (69)

1. ヒト対象の喘息を処置するための方法であって、少なくとも１日１回、治療有効量の配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む抗ＩＬ－４受容体アルファ（ＩＬ－４Ｒα）リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを前記対象に吸入で投与することを含み、リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量が、約０．１ｍｇ～約１６０ｍｇである、前記方法。
2. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの前記送達用量が、少なくとも約８ｍｇである、請求項１に記載の方法。
3. 前記送達用量により、前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの全身曝露がもたらされる、請求項２に記載の方法。
4. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを前記対象に投与すると、前記対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害がもたらされる、請求項２または３のいずれか１項に記載の方法。
5. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、前記対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％の阻害がもたらされる、請求項４に記載の方法。
6. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、約１０ｎＭ以下のＩＣ_５０で、ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害がもたらされる、請求項２または３に記載の方法。
7. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの前記送達用量が、約２ｍｇ未満である、請求項１に記載の方法。
8. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを前記対象に投与した後、呼気中一酸化窒素濃度（ＦｅＮＯ）が低減する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
9. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを前記対象に投与した後、ＦｅＮＯが、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、または少なくとも５０％低減する、請求項８に記載の方法。
10. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントが、前記対象に噴霧で投与される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
11. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの前記送達用量が、約０．２ｍｇ～約６０ｍｇである、請求項１に記載の方法。
12. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの前記送達用量が、少なくとも約６ｍｇである、請求項１または１１に記載の方法。
13. 少なくとも約６ｍｇの、前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの前記送達用量が、１日２回投与される、請求項１２に記載の方法。
14. 前記送達用量により、前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの全身曝露がもたらされる、請求項１２または１３に記載の方法。
15. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを前記対象に投与すると、前記対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害がもたらされる、請求項１２～１４のいずれか１項に記載の方法。
16. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、前記対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％の阻害がもたらされる、請求項１５に記載の方法。
17. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、約１０ｎＭ以下のＩＣ_５０で、ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害がもたらされる、請求項１２～１４に記載の方法。
18. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの前記送達用量が、約２ｍｇ以下である、請求項１または１１に記載の方法。
19. 約２ｍｇ以下の、前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの前記送達用量が、１日２回投与される、請求項１８に記載の方法。
20. 前記送達用量により、前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの局所肺曝露がもたらされる、請求項１１または１８または１９に記載の方法。
21. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを前記対象に投与した後、呼気中一酸化窒素濃度（ＦｅＮＯ）が低減する、請求項１１～２０のいずれか１項に記載の方法。
22. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを前記対象に投与した後、ＦｅＮＯが、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、または少なくとも５０％低減する、請求項２１に記載の方法。
23. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントが、前記対象に噴霧で投与される、請求項１１～２２のいずれか１項に記載の方法。
24. ヒト対象の喘息を処置する方法に使用される、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む抗ＩＬ－４受容体アルファ（ＩＬ－４Ｒα）リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントであって、前記方法が、少なくとも１日１回、前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを前記対象に吸入で投与するステップを含み、前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量が、約０．１ｍｇ～約１６０ｍｇである、前記ＩＬ－４Ｒαリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメント。
25. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの前記送達用量が、少なくとも約８ｍｇである、請求項２４に記載の使用のための、ＩＬ－４Ｒαリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメント。
26. 前記送達用量が、前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの全身曝露をもたらす、請求項２５に記載の使用のための、ＩＬ－４Ｒαリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメント。
27. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを前記対象に投与すると、前記対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害がもたらされる、請求項２５または２６のいずれか１項に記載の使用のための、ＩＬ－４Ｒαリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメント。
28. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、前記対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％の阻害がもたらされる、請求項２７に記載の使用のための、ＩＬ－４Ｒαリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメント。
29. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、約１０ｎＭ以下のＩＣ_５０で、ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害がもたらされる、請求項２５または２６に記載の使用のための、ＩＬ－４Ｒαリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメント。
30. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの前記送達用量が、約２ｍｇ未満である、請求項２４に記載の使用のための、ＩＬ－４Ｒαリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメント。
31. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを前記対象に投与した後、呼気中一酸化窒素濃度（ＦｅＮＯ）が低減する、請求項２４～３０に記載の使用のための、ＩＬ－４Ｒαリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメント。
32. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを前記対象に投与した後、ＦｅＮＯが、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、または少なくとも５０％低減する、請求項３１に記載の使用のための、ＩＬ－４Ｒαリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメント。
33. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントが、前記対象に噴霧で投与される、請求項２４～３２のいずれか１項に記載の使用のための、ＩＬ－４Ｒαリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメント。
34. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの前記送達用量が、約０．２ｍｇ～約６０ｍｇである、請求項２４に記載の使用のための、ＩＬ－４Ｒαリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメント。
35. リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの前記送達用量が、少なくとも約６ｍｇである、請求項２４または３４に記載の使用のための、ＩＬ－４Ｒαリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメント。
36. 少なくとも６ｍｇの前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメント前記送達用量が、１日２回投与される、請求項３５に記載の使用のための、ＩＬ－４Ｒαリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメント。
37. 前記送達用量により、前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの全身曝露がもたらされる、請求項３５または３６に記載の使用のための、ＩＬ－４Ｒαリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメント。
38. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを前記対象に投与すると、前記対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害がもたらされる、請求項３５～３７のいずれか１項に記載の使用のための、ＩＬ－４Ｒαリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメント。
39. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、前記対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％の阻害がもたらされる、請求項３８に記載の使用のための、ＩＬ－４Ｒαリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメント。
40. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、約１０ｎＭ以下のＩＣ_５０で、ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害がもたらされる、請求項３５～３７に記載の使用のための、ＩＬ－４Ｒαリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメント。
41. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの前記送達用量が、約２ｍｇ以下である、請求項２４または３４に記載の使用のための、ＩＬ－４Ｒαリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメント。
42. 約２ｍｇ以下の前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの前記送達用量が、１日２回投与される、請求項４１に記載の使用のための、ＩＬ－４Ｒαリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメント。
43. 前記送達用量により、前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの局所肺曝露がもたらされる、請求項３４または４１または４２に記載の使用のための、ＩＬ－４Ｒαリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメント。
44. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを前記対象に投与した後、呼気中一酸化窒素濃度（ＦｅＮＯ）が低減する、請求項３４～４３のいずれか１項に記載の使用のための、ＩＬ－４Ｒαリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメント。
45. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを前記対象に投与した後、ＦｅＮＯが、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、または少なくとも５０％低減する、請求項４４に記載の使用のための、ＩＬ－４Ｒαリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメント。
46. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントが、前記対象に噴霧で投与される、請求項３４～４５の１項に記載の使用のための、ＩＬ－４Ｒαリポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメント。
47. ヒト対象の喘息の処置に使用される薬品の製造のための配列番号１に記載のアミノ酸配列またはその多様体もしくはフラグメントを含む抗ＩＬ－４受容体アルファ（ＩＬ－４Ｒα）リポカリンムテインの使用であって、前記処置が、少なくとも１日１回、前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを前記対象に吸入で投与することを含み、前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの送達用量が、約０．１ｍｇ～約１６０ｍｇである、前記使用。
48. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの前記送達用量が、少なくとも約８ｍｇである、請求項４７に記載の使用。
49. 前記送達用量により、前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの全身曝露がもたらされる、請求項４８に記載の使用。
50. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを前記対象に投与すると、前記対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害がもたらされる、請求項４８または４９のいずれか１項に記載の使用。
51. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、前記対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％の阻害がもたらされる、請求項５０に記載の使用。
52. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、約１０ｎＭ以下のＩＣ_５０で、ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害がもたらされる、請求項４８または４９に記載の使用。
53. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの前記送達用量が、約２ｍｇ未満である、請求項４７に記載の使用。
54. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを前記対象に投与した後、呼気中一酸化窒素濃度（ＦｅＮＯ）が低減する、請求項４７～５３のいずれか１項に記載の使用。
55. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを前記対象に投与した後、ＦｅＮＯが、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、または少なくとも５０％低減する、請求項５４に記載の使用。
56. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントが、前記対象に噴霧で投与される、請求項４７～５５のいずれか１項に記載の使用。
57. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの前記送達用量が、約０．２ｍｇ～約６０ｍｇである、請求項４７に記載の使用。
58. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの前記送達用量が、少なくとも約６ｍｇである、請求項４７または５７に記載の使用。
59. 少なくとも約６ｍｇの、前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの前記送達用量が、１日２回投与される、請求項５８に記載の使用。
60. 前記送達用量により、前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの全身曝露がもたらされる、請求項５８または５９に記載の使用。
61. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを前記対象に投与すると、前記対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害がもたらされる、請求項５８～６０のいずれか１項に記載の使用。
62. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、前記対象のＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％の阻害がもたらされる、請求項６１に記載の使用。
63. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを投与すると、約１０ｎＭ以下のＩＣ_５０の、ＣＤ３＋Ｔ細胞におけるＩＬ－４刺激性ＳＴＡＴ６リン酸化の阻害がもたらされる、請求項５８～６０に記載の使用。
64. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの前記送達用量が、約２ｍｇ以下である、請求項４７または５７に記載の使用。
65. 約２ｍｇ以下の、前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの前記送達用量が、１日２回投与される、請求項６４に記載の使用。
66. 前記送達用量により、前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントの局所肺曝露がもたらされる、請求項５７または６４または６５に記載の使用。
67. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを前記対象に投与した後、呼気中一酸化窒素濃度（ＦｅＮＯ）が低減する、請求項５７～６６のいずれか１項に記載の使用。
68. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントを前記対象に投与した後、ＦｅＮＯが、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、または少なくとも５０％低減する、請求項６７に記載の使用。
69. 前記リポカリンムテインまたはその多様体もしくはフラグメントが、前記対象に噴霧で投与される、請求項５７～６８のいずれか１項に記載の使用。

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