CN113588958A - 具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条及其应用。所述试纸条包括沿设定方向依次连接的样品垫、金标垫、层析垫和吸水垫，所述层析垫上沿所述设定方向依次间隔分布有低浓度检测线、高浓度检测线和质控线。利用本发明的试纸条可以进行血液等样品中拉莫三嗪浓度的快速判断，整个检测过程仅需10分钟左右，进而可以快速、准确地为患者调整拉莫三嗪的服药剂量提供直接判断依据，对于临床拉莫三嗪服药剂量的控制具有重要的指导和参考价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种试纸条，特别涉及一种具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条及其应用，属于药物检测技术领域。
背景技术
治疗药物监测(therapeutic drug monitoring，TDM)是一门新兴临床药学分支学科，在临床治疗中TDM通过高灵敏性的现代分析技术对生物样本中药物及相关活性代谢物的浓度进行定量分析，结合临床指标确定使用药物有效治疗浓度范围，以确保药物剂量适当，避免药物毒副反应，提高药物疗效。
目前在临床治疗中需要进行药物监测的主要是对治疗指数低、安全浓度范围窄、不良反应强的药物。根据所监测的血药浓度对用药剂量进行及时调整，实现以较理想的血药浓度达到最佳的治疗效果的目的。
拉莫三嗪(Lamotrigine)是一种新型苯三嗪类广谱抗癫痫药物，临床上主要用于部分性和全身性癫痫发作的单药治疗或辅助治疗。其他已知的抗癫痫药相比，拉莫三嗪具有良好的耐受性、受代谢酶的影响小和妊娠期毒性小等优点。但是值得注意的是低龄、妊娠期、合并使用丙戊酸钠或奥卡西平、初始剂量过高或者剂量递增过快的患者容易发生皮肤不良反应。并且因不同患者的个体差异，生理病理状态及存在基因多态性，即使严格按照推荐的给药方案给予拉莫三嗪治疗，其药动学行为和最佳治疗浓度依然可能存在明显的个体差异，对于不同的患者服用相同的剂量血药浓度差异性可能会较大，且可能表现出不同的治疗效果或不良反应。
所以，对于特殊生理、病理状态以及更改合并用药情况的患者应尤其注意检测拉莫三嗪的血药浓度水平。目前临床上拉莫三嗪血药浓度的检测方法主要有HPLC法、HPLC-MS/MS法等，这些方法的特点是所需血液样本量较大、样品预处理复杂，并且需要配备昂贵的设备，无法在所有的医疗机构实现。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条及其应用，以克服现有技术中的不足。
为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：
本发明的一个方面提供了一种具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条，包括沿设定方向依次连接的样品垫、金标垫、层析垫和吸水垫，所述层析垫上沿所述设定方向依次间隔分布有低浓度检测线、高浓度检测线和质控线。
进一步的，所述低浓度检测线所对应的检测阈值为拉莫三嗪浓度在2.5μg/mL以下，而所述高浓度检测线所对应的检测阈值为拉莫三嗪浓度在15μg/mL以上。
进一步的，所述金标垫上分布有由拉莫三嗪单克隆抗体、兔抗牛血清白蛋白抗体(BSA)与纳米金颗粒复合形成的胶体金标记物，其中纳米金颗粒的粒径为1-50nm。
本发明的另一个方面提供了一种用于检测血液中拉莫三嗪浓度的试剂盒，其包括所述的具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条。
本发明的再一个方面提供了一种制备所述的具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条的方法，其包括：
将胶体金标记物分散液均匀施加到金标垫上并进行干燥处理，所述胶体金标记物分散液包含由拉莫三嗪单克隆抗体、兔抗牛血清白蛋白抗体与纳米金颗粒复合形成的胶体金标记物；
分别将拉莫三嗪-牛血清白蛋白偶联物溶液、兔抗牛血清白蛋白抗体溶液施加在层析垫上形成低浓度检测线、高浓度检测线和质控线；
将样品垫、金标垫、层析垫和吸水垫依次连接，制得所述拉莫三嗪侧向层析试纸条。
本发明的又一个方面提供了一种产品，应用于液体样品中拉莫三嗪浓度的检测方法，所述产品包括所述的具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条；并且，所述的检测方法包括：
将待检测的液体样品直接滴加在样品垫上，等待足够时间后，观察层析垫上低浓度检测线、高浓度检测线和质控线的显色情况，从而判断所述液体样品中拉莫三嗪的浓度；
其中，当所述液体样品中拉莫三嗪的浓度小于所述低浓度检测线的检测阈值时，所述低浓度检测线、高浓度检测线和质控线均显现；
当所述液体样品中拉莫三嗪的浓度大于或等于所述低浓度检测线的检测阈值，但小于所述高浓度检测线的检测阈值时，所述低浓度检测线未显现，所述高浓度检测线和质控线均显现；
当所述液体样品中拉莫三嗪的浓度大于或等于所述高浓度检测线的检测阈值时，所述低浓度检测线和高浓度检测线均未显现，所述质控线显现。
较之现有技术，本发明提供的拉莫三嗪侧向层析试纸条具有多条指示不同拉莫三嗪浓度的检测线，可以用于对血液等样品中拉莫三嗪的浓度进行快速、直观的判断，且无需对样品进行复杂的前处理，具有非常高的临床应用价值和市场价值。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明一实施例中一种具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条结构示意图；
图2为本发明一典型实施方案不同浓度检测线显现结果与浓度范围判断的关系；
图3为本发明一实施例中利用具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条检测血液中拉莫三嗪结果图。
具体实施方式
如前所述，鉴于现有技术的不足，本案发明人经长期研究和大量实践，得以提出本发明的技术方案，如下将将对该技术方案、其实施过程及原理等做进一步的解释说明。
本发明实施例提供了一种具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条，包括沿设定方向依次连接的样品垫、金标垫、层析垫和吸水垫，所述层析垫上沿所述设定方向依次间隔分布有低浓度检测线、高浓度检测线和质控线。
进一步的，所述层析垫两端分别与金标垫、吸水垫搭接。
进一步的，所述样品垫、金标垫、层析垫和吸水垫均设置在底板上。
其中，所述样品垫的一端可以搭接在金标垫上，而金标垫的一端可以搭接在层析垫的一端上，吸水垫一端搭接在层析垫的另一端上。如本领域人员所熟知的，当液态样品被施加到样品垫上时，吸水垫可以通过毛细作用使液态样品中的水、化合物、蛋白等向层析垫上迁移。
进一步的，所述层析垫采用硝酸纤维膜。
进一步的，所述金标垫也可以采用硝酸纤维膜等制成，而样品垫、吸水垫、底板可以采用本领域常用的材质，此处不再赘述。
进一步的，所述低浓度检测线所对应的检测阈值为拉莫三嗪浓度优选在2.5μg/mL以下，而所述高浓度检测线所对应的检测阈值为拉莫三嗪浓度优选在15μg/mL以上。
进一步的，所述低浓度检测线上拉莫三嗪-牛血清白蛋白偶联物的固定浓度优选为0.1-0.5mg/mL，所述高浓度检测线上拉莫三嗪-牛血清白蛋白偶联物的固定浓度优选为0.8-1.2mg/mL。
进一步的，所述质控线上兔抗牛血清白蛋白抗体的固定浓度优选为0.5-1.2mg/mL。
进一步的，所述金标垫上分布有由拉莫三嗪单克隆抗体、兔抗牛血清白蛋白抗体与纳米金颗粒复合形成的胶体金标记物。
较为优选的，所述低浓度检测线、高浓度检测线、质控线与金标垫的距离分别为0.8-1.3mm、5.2-6.2mm、16.5-17.5mm，其可同时提高检测结果的输出速度及准确性。
较为优选的，所述胶体金标记物包含60-70v/v％第一胶体金标记物和30-40v/v％第二胶体金标记物，所述第一胶体金标记物所含纳米金颗粒的粒径为1-10nm，所述第二胶体金标记物所含纳米金颗粒的粒径为20-50nm。通过采用这样的方案，可以有效减少甚至消除试纸条在检测时出现的假阴性、假阳性等问题。
本发明实施例还提供了一种用于检测血液中拉莫三嗪浓度的试剂盒，其包括所述的具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条。
此外，所述试剂盒中还可以包含其它的组件，例如指尖取血器、注射器、滴管、棉签等，或者用于稀释或溶解某些膏状、浆状或固相物质的水、缓冲液等。
本发明实施例还提供了一种制备所述具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条的方法，其包括：
将胶体金标记物分散液均匀施加到金标垫上并进行干燥处理，所述胶体金标记物分散液包含由拉莫三嗪单克隆抗体、兔抗牛血清白蛋白抗体与纳米金颗粒复合形成的胶体金标记物；
分别将拉莫三嗪-牛血清白蛋白偶联物溶液、兔抗牛血清白蛋白抗体溶液施加在层析垫上形成低浓度检测线、高浓度检测线和质控线；
将样品垫、金标垫、层析垫和吸水垫依次连接，制得所述拉莫三嗪侧向层析试纸条。
进一步的，所述胶体金标记物分散液可以通过如下方法制备，包括：
按照本领域熟知的方式制取胶体金溶液，其中包含本发明所需粒径的纳米金颗粒；
将所述胶体金溶液与拉莫三嗪单克隆抗体、兔抗牛血清白蛋白抗体混合反应，至产生红色沉淀，之后将所述红色沉淀分散于BSA溶液，获得胶体金标记物分散液。
更为具体的，可以在制得所述胶体金溶液之后，向所述胶体金溶液内加入碱性溶液(例如碳酸钾溶液)，之后加入拉莫三嗪单克隆抗体溶液混合反应，其后加入BSA溶液继续进行反应，然后高速离心分离出其中的红色沉淀，再分散于BSA溶液中，得到胶体金标记物分散液。
进一步的，所述高浓度检测线、低浓度检测线、质控线可以通过如下方式制备，包括：取拉莫三嗪-牛血清白蛋白偶联物溶液分别稀释到0.8-1.2mg/mL、0.1-0.5mg/mL,另取抗BSA抗体稀释到浓度0.8-1.6mg/mL，再分别利用胶体金喷膜仪喷至硝酸纤维膜上，分别作为高浓度检测线、低浓度检测线、质控线，之后可以在合适温度下烘干，例如在27℃烘2h后备用。
本发明实施例还提供了一种产品，应用于液体样品中拉莫三嗪浓度的检测方法，所述产品包括所述具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条；并且，所述的检测方法包括：
将待检测的液体样品直接滴加在样品垫上，等待足够时间后，观察层析垫上低浓度检测线、高浓度检测线和质控线的显色情况，从而判断所述液体样品中拉莫三嗪的浓度；
其中，当所述液体样品中拉莫三嗪的浓度小于所述低浓度检测线的检测阈值时，所述低浓度检测线、高浓度检测线和质控线均显现；
当所述液体样品中拉莫三嗪的浓度大于或等于所述低浓度检测线的检测阈值，但小于或等于所述高浓度检测线的检测阈值时，所述低浓度检测线未显现，所述高浓度检测线和质控线均显现；
当所述液体样品中拉莫三嗪的浓度大于所述高浓度检测线的检测阈值时，所述低浓度检测线和高浓度检测线均未显现，所述质控线显现。
进一步的，所述液体样品包括血液或血清，但不限于此。
进一步的，所述足够的时间优选为5-15min，当然视液态样品的具体情况也可以为更长或更短时间。
进一步的，所述检测方法可以用于对从动物体内采集的血液样品，例如患者指尖血进行直接检测，而无需复杂的前处理。
本发明提供了一种拥有多条代表不同浓度检测线的胶体金侧向层析试纸条，利用该试纸条可以进行血液等样品中拉莫三嗪浓度的快速判断。具体的，该试纸条的层析垫(亦称检测垫)上具有多条检测线，且不同检测线代表的检测浓度不同，根据代表不同浓度检测线的显现结果，就可以对血液中的拉莫三嗪浓度进行快速判断，整个检测过程仅需10分钟左右，进而可以快速、准确的为患者调整拉莫三嗪的服药剂量提供直接判断依据，对于临床拉莫三嗪服药剂量的控制具有重要的指导和参考价值。
下面结合若干优选实施例及附图对本发明的技术方案做进一步详细说明，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。需要指出的是，以下所述实施例旨在便于对本发明的理解，而对其不起任何限定作用。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件，其中的实验条件和设定参数不应视为对本发明基本技术方案的局限。
实施例1请参阅图1所示，本实施例提供的一种具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条包括PVC底板、样品垫、金标垫、层析垫和吸水垫。其中，样品垫、金标垫、层析垫和吸水垫依次连接，且金标垫的两端分别与样品垫、层析垫搭接，层析垫与吸水垫搭接。该层析垫上依次间隔分布有低浓度检测线、高浓度检测线和质控线。
所述试纸条可以通过如下方法制备，包括如下步骤：
(1)用于标记的金纳米粒子的制备：将70mL双蒸水倒入250mL锥形瓶中，再滴加1200μL浓度为10mg/mL的氯金酸于双蒸水中，置于磁力加热搅拌器上加热到微沸。当锥形瓶中液体微沸后，保持1500r/min的搅拌转速不变，再迅速加入1000μL质量浓度为20g/L的柠檬酸三钠溶液。溶液颜色在2min内发生明显变化，由透明-黑-紫-酒红，至颜色不变后，关闭热源，继续搅拌15min即可，冷却，获得胶体金溶液，其中所含纳米金颗粒的粒径分布为18-40nm，于4℃保存待用。
(2)胶体金标记物的制备：取1000μL步骤(1)制备好的胶体金溶液置于洁净干燥的1.5mL离心管中，加入3μL浓度为0.1M的碳酸钾溶液，振荡混匀，再加入1.5-5μL浓度约1mg/mL的拉莫三嗪单克隆抗体溶液振荡反应2h后，再加入100μL浓度为10wt％的BSA溶液，继续振荡反应1h，以10100r/min离心10min，分离出其中的红色沉淀，并以100μL浓度为10wt％BSA溶液复溶，即可得到胶体金标记物分散液；
(3)金标垫的制备：将胶体金标记物分散液按照8μL/pad的用量滴加到用于制备金标垫的硝酸纤维膜上，置于27℃烘箱内烘干，获得金标垫，备用。
(4)层析垫的制备：取拉莫三嗪-牛血清白蛋白偶联物溶液分别稀释到1.2mg/mL、0.5mg/mL,利用胶体金喷膜仪分别以2μL/cm、3μL/cm的速度喷至硝酸纤维膜上，分别作为高浓度检测线、低浓度检测线，其与金标垫的距离分别为0.8mm、5.2mm，另取抗BSA抗体溶液稀释到浓度1.6mg/mL，用胶体金喷膜仪以3μL/cm的速度喷至硝酸纤维膜作为质控线，其与金标垫的距离为16.5mm，之后置于27℃烘箱内烘2h后取出，获得层析垫，备用。
(5)将样品垫、金标垫、层析垫和吸水垫依次粘贴在塑料(PVC)底板上，每个组件与相邻组件的交叠部分的长度为2mm，用切条机切割成3mm宽的试纸条，常温保存备用。
实施例2本实施例提供的一种具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条的结构与实施例1基本相同，区别在于，所述试纸条的制备方法包括如下步骤：
(1)用于标记的金纳米粒子的制备：将50mL双蒸水倒入250mL锥形瓶中，再滴加850μL浓度为5mg/mL的氯金酸于双蒸水中，置于磁力加热搅拌器上加热到微沸。当锥形瓶中液体微沸后，保持1500r/min的搅拌转速不变，再迅速加入750μL质量浓度为10g/L的柠檬酸三钠溶液。溶液颜色在2min内发生明显变化，由透明-黑-紫-酒红，至颜色不变后，关闭热源，继续搅拌5min即可，冷却，获得胶体金溶液，其中所含纳米金颗粒的粒径分布为18-40nm，于4℃保存待用。
(2)胶体金标记物的制备：取500μL步骤(1)制备好的胶体金溶液置于洁净干燥的1.5mL离心管中，加入1.5μL浓度为0.3M的碳酸钾溶液，振荡混匀，再加入1.5-5μL浓度约1mg/mL的拉莫三嗪单克隆抗体溶液振荡反应1h后，再加入50μL浓度为10wt％的BSA溶液，继续振荡反应0.5h，以10100r/min离心10min，分离出其中的红色沉淀，并以50μL浓度为20wt％BSA溶液复溶，即可得到胶体金标记物分散液；
(3)金标垫的制备：将胶体金标记物分散液按照4μL/pad的用量滴加到用于制备金标垫的硝酸纤维膜上，置于27℃烘箱内烘干，获得金标垫，备用。
(4)层析垫的制备：取拉莫三嗪-牛血清白蛋白偶联物溶液分别稀释到0.8mg/mL、0.1mg/mL,利用胶体金喷膜仪分别以1μL/cm、1μL/cm的速度喷至硝酸纤维膜上，分别作为高浓度检测线、低浓度检测线，其与金标垫的距离分别为1mm、5.4mm，另取抗BSA抗体溶液稀释到浓度0.8mg/mL，用胶体金喷膜仪以2μL/cm的速度喷至硝酸纤维膜作为质控线，其与金标垫的距离为16.7mm，之后置于27℃烘箱内烘2h后取出，获得层析垫，备用。
(5)将样品垫、金标垫、层析垫和吸水垫依次粘贴在塑料(PVC)底板上，每个组件与相邻组件的交叠部分的长度为4mm，用切条机切割成5mm宽的试纸条，常温保存备用。
实施例3本实施例提供的一种具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条的结构与实施例1基本相同，区别在于，所述试纸条的制备方法包括如下步骤：
(1)用于标记的金纳米粒子的制备：将60mL双蒸水倒入250mL锥形瓶中，再滴加1000μL浓度为8mg/mL的氯金酸于双蒸水中，置于磁力加热搅拌器上加热到微沸。当锥形瓶中液体微沸后，保持1500r/min的搅拌转速不变，再迅速加入900μL质量浓度为15g/L的柠檬酸三钠溶液。溶液颜色在2min内发生明显变化，由透明-黑-紫-酒红，至颜色不变后，关闭热源，继续搅拌10min即可，冷却，获得胶体金溶液，其中所含纳米金颗粒的粒径分布为18-40nm，于4℃保存待用。
(2)胶体金标记物的制备：取800μL步骤(1)制备好的胶体金溶液置于洁净干燥的1.5mL离心管中，加入2μL浓度为0.5M的碳酸钾溶液，振荡混匀，再加入3μL浓度约为1mg/mL的拉莫三嗪单克隆抗体溶液振荡反应2h后，再加入80μL浓度为10wt％的BSA溶液，继续振荡反应1h，以10100r/min离心20min，分离出其中的红色沉淀，并以50μL浓度为10wt％BSA溶液复溶，即可得到胶体金标记物分散液；
(3)金标垫的制备：将胶体金标记物分散液按照6μL/pad的用量滴加到用于制备金标垫的硝酸纤维膜上，置于27℃烘箱内烘干，获得金标垫，备用。
(4)层析垫的制备：取拉莫三嗪-牛血清白蛋白偶联物溶液分别稀释到1.0mg/mL、0.2mg/mL,利用胶体金喷膜仪分别以4μL/cm、4μL/cm的速度喷至硝酸纤维膜上，分别作为高浓度检测线、低浓度检测线，其与金标垫的距离分别为1.3mm、5.7mm，另取抗BSA抗体溶液稀释到浓度1.0mg/mL，用胶体金喷膜仪以5μL/cm的速度喷至硝酸纤维膜作为质控线，其与金标垫的距离为17mm，之后置于27℃烘箱内烘2h后取出，获得层析垫，备用。
(5)与实施例1相同。
实施例4本实施例提供的一种具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条的结构与实施例1基本相同，区别在于，所述试纸条的制备方法包括如下步骤：
(1)用于标记的金纳米粒子的制备：按照文献(如“金纳米粒子的合成、性质及其应用新进展”，翟宏菊等，《吉林师范大学学报(自然科学版)》，2017年)报道的方式，分别制取第一胶体金溶液、第二胶体金溶液，该第一胶体金溶液中纳米金颗粒的粒径分布为1-5nm，第二胶体金溶液中纳米金颗粒的粒径分布为20-30nm，之后将该第一胶体金溶液、第二胶体金溶液稀释到相同浓度后，按照3：2的体积比混合备用。
(2)～(5)：与实施例1相同。
实施例5本实施例提供的一种具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条的结构与实施例1基本相同，区别在于，所述试纸条的制备方法包括如下步骤：
(1)用于标记的金纳米粒子的制备：按照文献(如“金纳米粒子的合成、性质及其应用新进展”，翟宏菊等，《吉林师范大学学报(自然科学版)》，2017年)报道的方式，分别制取第一胶体金溶液、第二胶体金溶液，该第一胶体金溶液中纳米金颗粒的粒径分布为5-10nm，第二胶体金溶液中纳米金颗粒的粒径分布为30-50nm，之后将该第一胶体金溶液、第二胶体金溶液稀释到相同浓度后，按照7：3的体积比混合备用。
(2)～(5)：与实施例1相同。
实施例6本实施例提供的一种具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条的结构与实施例4基本相同，区别在于，所述试纸条的制备方法包括如下步骤：
(1)用于标记的金纳米粒子的制备：按照文献(如“金纳米粒子的合成、性质及其应用新进展”，翟宏菊等，《吉林师范大学学报(自然科学版)》，2017年)报道的方式，制取胶体金溶液，该胶体金溶液中纳米金颗粒的粒径分布为5-10nm。
(2)～(5)：与实施例1相同。
实施例7本实施例提供的一种具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条的结构与实施例4基本相同，区别在于，所述试纸条的制备方法包括如下步骤：
(1)用于标记的金纳米粒子的制备：按照文献(如“金纳米粒子的合成、性质及其应用新进展”，翟宏菊等，《吉林师范大学学报(自然科学版)》，2017年)报道的方式，制取胶体金溶液，该胶体金溶液中纳米金颗粒的粒径分布为30-50nm。
(2)～(5)：与实施例1相同。
取服用不同药量拉莫三嗪的多个病人的指尖血样，并分别将各血样直接滴加在实施例1-实施例7制备的所述试纸条的样品垫上，每张试纸条上的血样滴加量为60-100μL，之后等待10-15min，观察各试纸条上高浓度检测线、低浓度检测线、质控线的显色情况，并根据显色结果对各血样中拉莫三嗪的浓度范围进行直接判断，参阅图2，相关判断依据主要为：
当血样中拉莫三嗪的浓度高于或等于15μg/mL时，较高浓度的拉莫三嗪将高浓度检测线和低浓度检测线均有效抑制，各纸条上只显示质控线，由此可以快速判断血样中拉莫三嗪的浓度高于15μg/mL。
当血样中拉莫三嗪的浓度高于或等于2.5μg/mL但小于15μg/mL时，样品中拉莫三嗪的浓度能够将各试纸条上低浓度检测线完全抑制，高浓度检测线部分抑制但仍然能够显现，质控线完全显现，即只有质控线和高浓度检测线显现，可以快速判断血样中拉莫三嗪的浓度在2.5-15μg/mL之间。
当血样中拉莫三嗪的浓度小于2.5μg/mL时，样品中拉莫三嗪的浓度不能够引起低浓度检测线和高浓度检测线的抑制现象，低浓度检测线和高浓度检测线均能够显现，质控线完全显现，可以快速判断血样中拉莫三嗪的浓度小于2.5μg/mL。
图3示出了实施例1的试纸条对含有不同浓度拉莫三嗪的血样进行检测后的各检测线和质控线的显色情况。实施例2-7的试纸条也有相似表现。
另外，采用HPLC法对各血样中的拉莫三嗪浓度进行测试，以验证各试纸条检测结果的准确性。
尽管已参考说明性实施例描述了本发明，但所属领域的技术人员将理解，在不背离本发明的精神及范围的情况下可做出各种其它改变、省略及/或添加且可用实质等效物替代所述实施例的元件。另外，可在不背离本发明的范围的情况下做出许多修改以使特定情形或材料适应本发明的教示。例如，本领域技术人员亦可参考本发明的技术构思，构建用于检测其它药物的胶体金侧向层析试纸条及相应的检测方法。因此，本文并不打算将本发明限制于用于执行本发明的所揭示特定实施例，而是打算使本发明将包含归属于所附权利要求书的范围内的所有实施例。
Claims (10)
1.一种具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条，包括沿设定方向依次连接的样品垫、金标垫、层析垫和吸水垫，其特征在于：所述层析垫上沿所述设定方向依次间隔分布有低浓度检测线、高浓度检测线和质控线。
2.根据权利要求1所述的具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条，其特征在于：
所述低浓度检测线所对应的检测阈值为拉莫三嗪浓度在2.5μg/mL以下，而所述高浓度检测线所对应的检测阈值为拉莫三嗪浓度在15μg/mL以上；
和/或，所述低浓度检测线上拉莫三嗪-牛血清白蛋白偶联物的固定浓度为0.1-0.5mg/mL，所述高浓度检测线上拉莫三嗪-牛血清白蛋白偶联物的固定浓度为0.8-1.2mg/mL。
3.根据权利要求1所述的具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条，其特征在于：所述质控线上兔抗牛血清白蛋白抗体的固定浓度为0.5-1.2mg/mL。
4.根据权利要求1所述的具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条，其特征在于：所述金标垫上分布有由拉莫三嗪单克隆抗体、兔抗牛血清白蛋白抗体与纳米金颗粒复合形成的胶体金标记物，所述胶体金标记物包含60-70v/v％第一胶体金标记物和30-40v/v％第二胶体金标记物，所述第一胶体金标记物所含纳米金颗粒的粒径为1-10nm，所述第二胶体金标记物所含纳米金颗粒的粒径为20-50nm。
5.根据权利要求1所述的具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条，其特征在于：所述层析垫两端分别与金标垫、吸水垫搭接；和/或，所述层析垫采用硝酸纤维膜；和/或，所述样品垫、金标垫、层析垫和吸水垫均设置在底板上。
6.根据权利要求1所述的具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条，其特征在于：所述低浓度检测线、高浓度检测线、质控线与金标垫的距离分别为0.8-1.3mm、5.2-6.2mm、16.5-17.5mm。
7.一种用于检测血液中拉莫三嗪浓度的试剂盒，其特征在于包括权利要求1-6中任一项所述的具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条。
8.权利要求1-6中任一项所述的具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条的制备方法，其特征在于包括：
将胶体金标记物分散液均匀施加到金标垫上并进行干燥处理，所述胶体金标记物分散液包含由拉莫三嗪单克隆抗体、兔抗牛血清白蛋白抗体与纳米金颗粒复合形成的胶体金标记物；
分别将拉莫三嗪-牛血清白蛋白偶联物溶液、兔抗牛血清白蛋白抗体溶液施加在层析垫上形成低浓度检测线、高浓度检测线和质控线；
将样品垫、金标垫、层析垫和吸水垫依次连接，制得所述拉莫三嗪侧向层析试纸条。
9.一种产品，应用于液体样品中拉莫三嗪浓度的检测方法，其特征在于：所述产品包括权利要求1-6中任一项所述的具有多浓度检测线的拉莫三嗪侧向层析试纸条；并且，所述的检测方法包括：
将待检测的液体样品直接滴加在样品垫上，等待足够时间后，观察层析垫上低浓度检测线、高浓度检测线和质控线的显色情况，从而判断所述液体样品中拉莫三嗪的浓度；
其中，当所述液体样品中拉莫三嗪的浓度小于所述低浓度检测线的检测阈值时，所述低浓度检测线、高浓度检测线和质控线均显现；
当所述液体样品中拉莫三嗪的浓度大于或等于所述低浓度检测线的检测阈值，但小于所述高浓度检测线的检测阈值时，所述低浓度检测线未显现，所述高浓度检测线和质控线均显现；
当所述液体样品中拉莫三嗪的浓度大于或等于所述高浓度检测线的检测阈值时，所述低浓度检测线和高浓度检测线均未显现，所述质控线显现。
10.根据权利要求9所述的产品，其特征在于：所述液体样品包括血液或血清；和/或，所述足够的时间为5-15min。
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113588958B (zh) | 2023-11-10 |
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