CN113584090A - 趋化因子ccr 5拮抗剂ad101手性中间体的生物制备方法 - Google Patents

趋化因子ccr 5拮抗剂ad101手性中间体的生物制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明利用林生地霉(Geotrichum silvicola)ZJPH1811静息细胞为催化剂，通过催化1‑(4‑三氟甲基苯基)乙酮生物还原制备(R)‑1‑(4‑三氟甲基苯基)乙醇，为不同种类微生物催化制备趋化因子CCR 5拮抗剂AD101关键手性中间体(R)‑1‑(4‑三氟甲基苯基)乙醇方面提供了有益的参考；本发明利用生物催化方法得到产物(R)‑1‑(4‑三氟甲基苯基)乙醇，与已报道的化学合成路线相比，该工艺的过程简单，环境友好，生物催化剂为微生物菌体，成本低廉。

Description

趋化因子CCR 5拮抗剂AD101手性中间体的生物制备方法
(一)技术领域
本发明涉及一种趋化因子CCR 5拮抗剂AD101关键手性中间体(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的生物制备方法。
(二)背景技术
(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的化学结构式为：
Figure BDA0003156039330000011
(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇是合成药物CCR5拮抗剂AD101的关键手性中间体。AD101(SCH-350581)是一种趋化因子CCR5拮抗剂，其分子式为：C28H37F3N4O。CCR5是一种细胞膜蛋白，为趋化因子受体的一种亚型，其属G蛋白偶联受体家族，它是HIV侵染靶细胞过程中主要辅助受体之一，主要通过阻断HIV-1病毒与细胞膜蛋白结合，达到抑制HIV-1病毒的侵入感染免疫细胞，是一种抗艾滋病新药。此外，(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇还可用于合成DP1受体拮抗剂。近年来，DP1拮抗剂已被应用于治疗烟酸所致的冲洗不良反应。
目前催化1-(4-三氟甲基苯基)乙酮还原制备光学纯(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的方法主要有化学法和生物法。Tagat等采用手性催化剂恶唑硼烷，通过BH3Me2S不对称还原合成(R)-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙醇，该化学制备方法需使用昂贵的手性试剂，并且存在环境问题。利用游离酶或微生物全细胞通过生物催化法也可制备得到(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇。吴中柳等通过PCR技术从金黄杆菌CA49(Chryseobacterium sp.CA49)基因组中克隆获得羰基还原酶ChKRED20，利用其催化还原10mM的1-(4-三氟甲基苯基)乙酮制备(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇，尽管该法的产物选择性较高，但酶分离纯化过程复杂，且催化过程中需要外加辅酶。利用微生物全细胞催化法制备不仅反应条件温和、环境友好，而且操作简单，成本低廉。
(三)发明内容
为了解决现有技术产物选择性低、酶的分离纯化过程复杂等问题，本发明提供一种趋化因子CCR 5拮抗剂AD101关键手性中间体(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的生物制备方法，特别是利用林生地霉(Geotrichum silvicola)ZJPH1811全细胞生物催化制备(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的方法。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
本发明提供一种趋化因子CCR 5拮抗剂AD101手性中间体的生物制备方法，所述的方法为：以林生地霉(Geotrichum silvicola)ZJPH1811菌株发酵培养获得的湿菌体为催化剂，以1-(4-三氟甲基苯基)乙酮为底物，以pH值6.0-8.0的磷酸盐缓冲液为反应介质构成转化体系，在25-50℃，150-250rpm条件下进行转化反应4-48h(优选30-40℃、200rpm条件下转化24h)，反应结束后，向转化液中加入与转化液等体积的乙酸乙酯终止反应并萃取，离心后取上清液，即可获得含所述趋化因子CCR 5拮抗剂AD101手性中间体的乙酸乙酯萃取液，所述趋化因子CCR 5拮抗剂AD101手性中间体即(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇产物；其中，所述湿菌体的用量以所述的磷酸盐缓冲液的体积计为50～500g/L(优选200g/L)，所述1-(4-三氟甲基苯基)乙酮的质量以所述的磷酸盐缓冲液的体积计为0.5～6g/L(优选1.88g/L)；
所述林生地霉(Geotrichum silvicola)ZJPH1811菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2020年7月6日，保藏编号：CCTCC NO：M 2020281，保藏地址：中国，武汉，武汉大学，邮编430072。该菌株已在先前的专利申请(申请号为CN202010801547.7，申请日期为2020年8月11日)中公开。
进一步，含所述趋化因子CCR 5拮抗剂AD101手性中间体的乙酸乙酯萃取液按如下方法进一步纯化得到目标产物：将所述含所述趋化因子CCR 5拮抗剂AD101手性中间体的乙酸乙酯萃取液经旋转蒸发仪浓缩去除溶剂乙酸乙酯，即得到产物粗提液；将经石油醚浸泡过的硅胶装于层析柱中制备得到硅胶层析柱，再以1:1～10:1(v/v)的石油醚:乙酸乙酯(优选4:1(v/v))洗脱剂平衡硅胶柱，将所述产物粗提液上样于硅胶柱，再在层析柱顶部覆盖一层硅胶，然后以石油醚:乙酸乙酯＝4:1(v/v)为洗脱剂进行洗脱，收集合并含有目标产物的洗脱液，经旋转蒸发浓缩后，即得(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇产物。
进一步，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01M-0.2M，优选0.1M。
进一步，为促进生物还原过程中的辅酶再生，提高反应产率，所述转化体系中还添加有辅助底物，所述辅助底物为下列之一：葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、甲醇、异丙醇、甘油、L-丙氨酸、L-谷氨酸或L-赖氨酸(优选为葡萄糖、甘油或L-赖氨酸，最优选L-赖氨酸)；所述辅助底物添加量以所述的磷酸盐缓冲液的体积计为4～200g/L，优选60～100g/L，最优选40g/L。相同条件下反应24h，不添加辅助底物的生物催化还原产物对映体过量值(e.e.值)为74.6％(水相转化，具体参见实施例9)，添加40g/L的L-赖氨酸作辅助底物的生物催化还原产物对映体过量值(e.e.值)可提高至98.0％(水相转化，具体参见实施例14)。
具体地，本发明所述湿菌体按如下方法制备：
(1)平板培养：挑取林生地霉ZJPH1811单菌落接种至平板培养基中，30℃培养2d进行第一次活化，从第一次活化的平板上再次挑取单菌落30℃活化培养2d进行第二次活化(所得平板置4℃冰箱保存)；所述平板培养基中各成分的终浓度组成为：葡萄糖15g/L，蛋白胨20g/L，酵母膏10g/L，(NH4)2SO4 2g/L，KH2PO4 2g/L，NaCl 1g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，pH 6.5；
(2)种子培养：从步骤(1)中第二次活化的平板中挑取一环菌体接入种子培养基中，30℃，200rpm培养12h，获得种子液；所述种子培养基中各成分的终浓度组成为：麦芽糖15～50g/L，牛肉浸膏5～15g/L，酵母膏5～15g/L，葡萄糖1～5g/L，KH2PO4 0.2～1.2g/L，CaCl2 0.02～0.12g/L，溶剂为水，pH 5～8；优选所述种子培养基中各成分的终浓度组成为：麦芽糖20g/L，牛肉浸膏11.91g/L，酵母膏8g/L，葡萄糖2g/L，KH2PO4 0.98g/L，CaCl20.095g/L，溶剂为水，pH 7.5；
(3)发酵培养：以体积浓度10％的接种量将种子液接种至发酵培养基中，30℃，200rpm培养24h，获得发酵液，将发酵液离心，所得沉淀用0.1M，pH 7.0的K2HPO4-KH2PO4缓冲液洗涤，离心后获得湿菌体，即为用于生物转化的含酶源细胞；所述发酵培养基中各成分的终浓度组成：碳源15～25g/L，氮源5～15g/L，KH2PO40.2～1.2g/L，CaCl2 0.02～0.12g/L，溶剂为水，pH 6～9；所述碳源为下列之一：葡萄糖、麦芽糖、甘油、乳糖、蔗糖或糊精，优选乳糖；所述氮源为下列之一：酵母膏、蛋白胨、牛肉浸膏、氯化铵或硫酸铵，优选酵母膏和硫酸铵。
进一步，所述发酵培养基中各成分的终浓度组成为：乳糖20g/L，硫酸铵12g/L，酵母膏8g/L，KH2PO4 0.98g/L，CaCl2 0.095g/L，溶剂为水，pH 8.5。
与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在：本发明利用林生地霉(Geotrichum silvicola)ZJPH1811静息细胞为催化剂，通过生物催化1-(4-三氟甲基苯基)乙酮还原制备(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇，为利用不同种类微生物制备趋化因子CCR 5拮抗剂AD101关键手性中间体(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇方面提供了有益的参考；本发明利用生物催化方法制得产物(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇，与已报道的化学合成路线相比，该工艺的过程简单，环境友好，生物催化剂为微生物菌体，成本低廉。
(四)附图说明
图1为底物1-(4-三氟甲基苯基)乙酮、产物(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇和产物(S)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇标准品的气相检测色谱图(含内标十二烷)。
图2为林生地霉ZJPH1811菌株生物还原反应萃取液的气相检测色谱图(含内标十二烷)。
(五)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1、(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的制备及检测
(1)平板培养：挑取林生地霉ZJPH1811单菌落接种至平板培养基中，30℃培养2d进行第一次活化，从第一次活化的平板上再次挑取单菌落30℃活化培养2d进行第二次活化(所得平板置4℃冰箱保存)，即得到平板菌种；所述平板培养基中各成分的终浓度组成为：葡萄糖15g/L，蛋白胨20g/L，酵母膏10g/L，(NH4)2SO4 2g/L，KH2PO4 2g/L，NaCl 1g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，pH 6.5，121℃灭菌20min，灭菌待冷却后、制成平板；
(2)种子培养：从步骤(1)培养成熟的平板中挑取一环菌体接入100mL种子培养基中，30℃，200rpm培养12h，获得种子液；所述种子培养基中各成分的终浓度组成为：麦芽糖20g/L，牛肉浸膏11.91g/L，酵母膏8g/L，葡萄糖2g/L，KH2PO4 0.98g/L，CaCl2 0.095g/L，溶剂为水，pH 7.5，121℃灭菌20min；
(3)发酵培养：以体积浓度10％的接种量将种子液转接到100mL发酵培养基中，30℃，200rpm培养24h，获得发酵液，将发酵液离心，所得沉淀用pH 7.0的K2HPO4-KH2PO4缓冲液洗涤，离心后获得湿菌体，即为含酶源细胞；所述发酵培养基中各成分的终浓度组成同种子培养基组成，121℃灭菌20min。
(4)在0.1M，pH 7.0的10mL磷酸盐缓冲液中，以9.4mg的1-(4-三氟甲基苯基)乙酮为底物，1.0g葡萄糖为辅助底物，1.0g微生物细胞(即发酵培养后的湿菌体)为催化剂，30℃生物转化24h。反应结束后，向转化液中加入10mL乙酸乙酯终止反应并萃取30min，离心后取上清液，采用手性气相色谱法测定转化液中目标产物(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的产率为88.6％，对映体过量值(e.e.值)为77.2％。
气相色谱(GC)检测条件：安捷伦7820A气相色谱仪，Varian CP-Chirasil-Dex CB毛细管气相色谱柱(25m×0.25mm×0.25μm)。载气为N2，压力为0.7MPa；燃烧气体为H2，压力为0.2MPa；助燃气为空气，压力为0.4MPa。流速为2mL/min；分流比为15：1，进样量为1μL。FID检测器，进样器温度为250℃，检测器温度为250℃，采用程序升温：初始柱温为100℃维持3min，然后以10℃/min的速率升温到160℃并维持1min；采取内标法定量，内标物为十二烷。
根据气相色谱检测谱图，计算得出转化液中产物的产率和e.e.值。
产率计算方法为：
标准曲线制作方法：用乙酸乙酯(含内标物十二烷)配制浓度分别为1、5、10、20、30、40、50mmol/L的底物溶液及产物标准品溶液，分别用气相色谱检测。将所得色谱图积分得到峰面积，以底物或产物峰面积与十二烷的峰面积之比为横坐标，以底物或产物的浓度与十二烷的浓度之比为纵坐标绘图并线性回归拟合，绘制标准曲线。得到底物标准曲线方程：y＝1.4158x-0.071，R2＝0.9999；R型产物标准曲线方程：y＝1.4566x+0.0156，R2＝0.9998；S型产物标准曲线方程：y＝1.4002x-00586，R2＝0.9988。
产物产率计算公式如下：
产率＝Cp/C0
式中Cp为(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇浓度，C0为1-(4-三氟甲基苯基)乙酮初始浓度。
产物的光学纯度由对映体过量值(enantiomeric excess,e.e.)来表征。计算公式为：
e.e.＝(CR-CS)/(Cs+CR)×100％
式中CS和CR分别为S型和R型1-(4-三氟甲基苯基)乙醇摩尔浓度。
实施例2、正交实验设计优化发酵培养基组成
在进行单因素实验考察后，选择乳糖、(NH4)2SO4和培养基初始pH值作为三因素，使用SPSS软件设计正交实验(三因素三水平实验)，得到最优培养基中各成分的终浓度组成为：乳糖20g/L，(NH4)2SO4 12g/L，酵母膏8g/L，KH2PO4 0.98g/L，CaCl2 0.095g/L，溶剂为水，培养基初始pH值为8.5。再对该优化结果进行验证，所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为1.0g；加入9.4mg 1-(4-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入1.0g葡萄糖作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应24h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，生物转化所得产物的e.e.值提高到86.5％，产率为93.4％。
实施例3、湿菌体的制备
(1)平板培养：挑取林生地霉ZJPH1811单菌落接种至平板培养基中，30℃培养2d进行第一次活化，从第一次活化的平板上再次挑取单菌落30℃活化培养2d进行第二次活化(所得平板置4℃冰箱保存)，即得到平板菌种；所述平板培养基中各成分的终浓度组成为：葡萄糖15g/L，蛋白胨20g/L，酵母膏10g/L，(NH4)2SO4 2g/L，KH2PO4 2g/L，NaCl 1g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，pH 6.5，121℃灭菌20min，灭菌待冷却后，制成平板；
(2)种子培养：从步骤(1)培养成熟的平板中挑取一环菌体接入100mL种子培养基中，30℃，200rpm培养12h，获得种子液；所述种子培养基中各成分的终浓度组成为：麦芽糖20g/L，牛肉浸膏11.91g/L，酵母膏8g/L，葡萄糖2g/L，KH2PO4 0.98g/L，CaCl2 0.095g/L，溶剂为水，pH 7.5，121℃灭菌20min；
(3)发酵培养：以体积浓度10％的接种量将种子液转接到100mL发酵培养基中，30℃，200rpm培养24h，获得发酵液，将发酵液离心，所得沉淀用pH 7.0的K2HPO4-KH2PO4缓冲液洗涤，离心后获得湿菌体，即为含酶源细胞；所述发酵培养基中各成分的终浓度组成为：乳糖20g/L，(NH4)2SO4 12g/L，酵母膏8g/L，KH2PO40.98g/L，CaCl2 0.095g/L，溶剂为水，pH8.5，121℃灭菌20min。
实施例4
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为1.0g；加入18.8mg 1-(4-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入1.0g葡萄糖作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应24h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，产物(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为76.7％，产率为83.1％。
实施例5
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为1.0g；加入28.2mg 1-(4-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入1.0g葡萄糖作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应24h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，产物(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为64.0％，产率为68.2％。
实施例6
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为1.0g；加入37.6mg 1-(4-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入1.0g葡萄糖作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应24h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，产物(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为60.2％，产率为59.0％。
实施例7
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为1.0g；加入47.0mg 1-(4-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入1.0g葡萄糖作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应24h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，产物(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为58.9％，产率为54.2％。
实施例8
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为1.0g；加入56.4mg 1-(4-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入1.0g葡萄糖作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应24h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，产物(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为55.4％，产率为54.9％。
实施例9
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为1.0g；加入18.8mg 1-(4-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，不添加任何辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应24h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，产物(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为74.6％，产率为72.8％。
实施例10
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为1.0g；加入18.8mg 1-(4-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入1.0g麦芽糖作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应24h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，产物(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为78.2％，产率为80.5％。
实施例11
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为1.0g；加入18.8mg 1-(4-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入1.0g异丙醇作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应24h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，产物(S)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为87.5％，产率为88.2％。
实施例12
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为1.0g；加入18.8mg 1-(4-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入1.0g L-丙氨酸作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应24h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，产物(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为81.7％，产率为72.3％。
实施例13
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为1.0g；加入18.8mg 1-(4-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入1.0g L-赖氨酸作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应24h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，产物(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为97.6％，产率为37.5％。
实施例14
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为1.0g；加入18.8mg 1-(4-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入0.4g L-赖氨酸作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应24h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，产物(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为98.0％，产率为42.8％。
实施例15
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为1.0g；加入18.8mg 1-(4-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入0.6g L-赖氨酸作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应24h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，产物(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为97.8％，产率为39.5％。
实施例16
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为1.0g；加入18.8mg 1-(4-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入0.4g L-赖氨酸作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应4h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，产物(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为98.1％，产率为50.4％。
实施例17
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为1.0g；加入18.8mg 1-(4-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入0.4g L-赖氨酸作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应8h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，产物(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为97.2％，产率为45.1％。
实施例18
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为1.0g；加入18.8mg 1-(4-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入0.4g L-赖氨酸作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应12h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，产物(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为96.6％，产率为43.3％。
实施例19
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为1.0g；加入18.8mg 1-(4-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入0.4g L-赖氨酸作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应16h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，产物(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为96.4％，产率为41.8％。
实施例20
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为0.5g；加入18.8mg 1-(4-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入0.4g L-赖氨酸作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应4h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，产物(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为97.1％，产率为53.8％。
实施例21
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为2.0g；加入18.8mg 1-(4-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入0.4g L-赖氨酸作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应4h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，产物(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为97.0％，产率为79.9％。
实施例22
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为4.0g；加入18.8mg 1-(4-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入0.4g L-赖氨酸作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应4h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，产物(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为96.5％，产率为69.7％。
实施例23
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为5.0g；加入18.8mg 1-(4-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入0.4g L-赖氨酸作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应4h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，产物(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为91.6％，产率为59.9％。
实施例24
小孢根霉须状变种(Rhizopus micrnsporus var.rhizopodiformis)ZJPH1308生物催化制备趋化因子CCR5拮抗剂AD101中间体的转化能力考察
(1)小孢根霉须状变种(Rhizopus micrnsporus var.rhizopodiformis)ZJPH1308，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，保藏日期为2014年12月14日，保藏编号：CCTCC NO:M 2014645。该菌种已在先前的专利申请(公开号：CN104893989A公开日：2015年9月9日)中公开。
(2)平板培养：挑取小孢根霉须状变种ZJPH1308单菌落接种至平板培养基中，30℃培养2d进行第一次活化，从第一次活化的平板上再次挑取单菌落30℃活化培养2d进行第二次活化(所得平板置4℃冰箱保存)，即得到平板菌种；所述平板培养基中各成分的终浓度组成为：葡萄糖15g/L，蛋白胨20g/L，酵母膏10g/L，(NH4)2SO42g/L，KH2PO4 2g/L，NaCl 1g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，pH 6.5，121℃灭菌20min，灭菌待冷却制成平板；
(3)种子培养：从步骤(2)培养成熟的平板中挑取一环菌体接入100mL种子培养基中，30℃，200rpm培养12h，获得种子液；所述种子培养基中各成分的终浓度组成为：葡萄糖15g/L，蛋白胨20g/L，酵母膏10g/L，(NH4)2SO4 2g/L，KH2PO4 2g/L，NaCl 1g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，pH 6.5，121℃灭菌20min；
(4)发酵培养：以体积浓度10％的接种量将种子液转接到100mL发酵培养基中，30℃，200rpm培养24h，获得发酵液，将发酵液离心，所得沉淀用pH 7.0的K2HPO4-KH2PO4缓冲液洗涤，离心后获得湿菌体，即为用于生物转化的含酶细胞；所述发酵培养基中各成分的终浓度组成为：葡萄糖15g/L，蛋白胨20g/L，酵母膏10g/L，(NH4)2SO4 2g/L，KH2PO4 2g/L，NaCl1g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，pH 6.5，121℃灭菌20min。
(5)生物催化制备趋化因子CCR5拮抗剂AD101中间体
将经发酵制备得到的小孢根霉须状变种湿菌体重悬于10mL磷酸钾缓冲液(pH7.0，0.1M)中，1.0g葡萄糖作为辅助底物，9.4mg底物1-(4-三氟甲基苯基)乙酮构成转化体系，其中湿菌体加量以湿重计为1.0g，置于30℃，200rpm的摇床中转化24h。采用实施例1中的气相色谱检测方法检测，所得产物的构型为(S)-构型，(S)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为90.1％，产率为91.62％。
结论：小孢根霉须状变种(Rhizopus micrnsporus var.rhizopodiformis)ZJPH1308不能转化1-(4-三氟甲基苯基)乙酮制备趋化因子CCR5拮抗剂AD101中间体(R)-1-(4-三氟甲基苯基)乙醇。
实施例25
(S)-1-(3-三氟甲基苯基)乙醇的化学结构式为：
Figure BDA0003156039330000111
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为1.0g；加入18.8mg 1-(3-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入1.0g葡萄糖作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应24h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，所得产物的构型为(S)-构型，(S)-1-(3-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为96.5％，产率为78.2％。
实施例26
(S)-1-(3-三氟甲基苯基)乙醇的化学结构式为：
Figure BDA0003156039330000121
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为1.0g；加入18.8mg 1-(3-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入0.4g L-赖氨酸作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应4h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，所得产物的构型为(S)-构型，(S)-1-(3-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为100％，产率为1.29％。
实施例27
(S)-1-(3-三氟甲基苯基)乙醇的化学结构式为：
Figure BDA0003156039330000122
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为1.0g；加入18.8mg 1-(3-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入0.4g L-赖氨酸作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应24h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，所得产物的构型为(S)-构型，(S)-1-(3-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为85.34％，产率为17.83％。
结论：林生地霉(Geotrichum silvicola)ZJPH1811催化1-(3-三氟甲基苯基)乙酮反应4h几乎不转化，催化反应24h后的产物构型以(S)-构型为主，对应(S)-构型醇的产物ee值为85.34％，产率为17.83％。
实施例28
(S)-1-(3-三氟甲基苯基)乙醇的化学结构式为：
Figure BDA0003156039330000123
将按照实施例24方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于5mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为1.0g；加入47mg 1-(3-三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入1.0g葡萄糖作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应24h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，所得产物的构型为(S)-构型，(S)-1-(3-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为100％，产率为47.4％。
结论：林生地霉(Geotrichum silvicola)ZJPH1811催化1-(3-三氟甲基苯基)乙酮反应24h后，所得产物的构型为(S)-构型，产物(S)-1-(3-三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为100％，产率为47.4％。
实施例29
(S)-1-(3,5-双三氟甲基苯基)乙醇的化学结构式为：
Figure BDA0003156039330000131
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为1.0g；加入25.6mg 1-(3,5-双三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入0.4g L-赖氨酸作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应4h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，所得产物的构型为(S)-构型，(S)-1-(3,5-双三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为100％，产率为1.34％。
实施例30
(S)-1-(3,5-双三氟甲基苯基)乙醇的化学结构式为：
Figure BDA0003156039330000132
将按照实施例3方法所得的湿菌体用蒸馏水洗涤后，重悬于10mL磷酸盐缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，湿菌体加量以湿重计为1.0g；加入25.6mg 1-(3,5-双三氟甲基苯基)乙酮作为底物，再加入0.4g L-赖氨酸作为辅助底物，置于30℃，200rpm的摇床中反应24h。采用实施例1的检测方法进行分析检测，所得产物的构型为(S)-构型，(S)-1-(3,5-双三氟甲基苯基)乙醇的e.e.值为87.93％，产率为11.96％。
结论：林生地霉(Geotrichum silvicola)ZJPH1811催化1-(3,5-双三氟甲基苯基)乙酮反应4h后几乎不转化，催化反应24h后的产物主要为(S)-1-(3,5-双三氟甲基苯基)乙醇，ee值为87.93％，产率为11.96％。

Claims (10)

1.一种趋化因子CCR 5拮抗剂AD101手性中间体的生物制备方法，其特征在于所述的方法为：以林生地霉ZJPH1811菌株发酵培养获得的湿菌体为催化剂，以1-(4-三氟甲基苯基)乙酮为底物，以pH值6.0-8.0的磷酸盐缓冲液为反应介质构成转化体系，在25-50℃，150-250rpm条件下进行转化反应4-48h，反应结束后，向转化液中加入与转化液等体积的乙酸乙酯终止反应并萃取，离心后取上清液，即可获得含所述趋化因子CCR 5拮抗剂AD101手性中间体的乙酸乙酯萃取液；其中，所述湿菌体的用量以菌体湿重计为50～500g/L所述的磷酸盐缓冲液，所述1-(4-三氟甲基苯基)乙酮的质量以所述的磷酸盐缓冲液的体积计为0.5～6g/L；
所述林生地霉ZJPH1811菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2020年7月6日，保藏编号：CCTCC NO：M 2020281，保藏地址：中国，武汉，武汉大学，邮编430072。
2.如权利要求1所述的趋化因子CCR 5拮抗剂AD101手性中间体的生物制备方法，其特征在于：所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01M-0.2M。
3.如权利要求1所述的趋化因子CCR 5拮抗剂AD101手性中间体的生物制备方法，其特征在于：所述转化反应为30-40℃、200rpm条件下转化24h。
4.如权利要求1所述的趋化因子CCR 5拮抗剂AD101手性中间体的生物制备方法，其特征在于：所述转化体系中还添加有辅助底物，所述辅助底物为下列之一：葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、甲醇、异丙醇、甘油、L-丙氨酸、L-谷氨酸或L-赖氨酸；所述辅助底物添加量以所述的磷酸盐缓冲液的体积计为4～200g/L。
5.如权利要求4所述的趋化因子CCR 5拮抗剂AD101手性中间体的生物制备方法，其特征在于：所述辅助底物为葡萄糖、甘油或L-赖氨酸。
6.如权利要求4所述的趋化因子CCR 5拮抗剂AD101手性中间体的生物制备方法，其特征在于：所述辅助底物添加量以所述的磷酸盐缓冲液的体积计为60～100g/L。
7.如权利要求4所述的趋化因子CCR 5拮抗剂AD101手性中间体的生物制备方法，其特征在于：所述湿菌体的用量以所述的磷酸盐缓冲液计为200g/L。
8.如权利要求4所述的趋化因子CCR 5拮抗剂AD101手性中间体的生物制备方法，其特征在于：所述1-(4-三氟甲基苯基)乙酮的质量以所述的磷酸盐缓冲液的体积计为1.88g/L。
9.如权利要求1所述的趋化因子CCR 5拮抗剂AD101手性中间体的生物制备方法，其特征在于所述湿菌体按如下方法制备：
(1)平板培养：挑取林生地霉ZJPH1811单菌落接种至平板培养基中，30℃培养2d进行第一次活化，从第一次活化的平板上再次挑取单菌落30℃活化培养2d进行第二次活化；所述平板培养基中各成分的终浓度组成为：葡萄糖15g/L，蛋白胨20g/L，酵母膏10g/L，(NH4)2SO42g/L，KH2PO4 2g/L，NaCl 1g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，pH 6.5；
(2)种子培养：从步骤(1)中第二次活化的平板中挑取一环菌体接入种子培养基中，30℃，200rpm培养12h，获得种子液；所述种子培养基各成分的终浓度组成为：麦芽糖15～50g/L，牛肉浸膏5～15g/L，酵母膏5～15g/L，葡萄糖1～5g/L，KH2PO4 0.2～1.2g/L，CaCl2 0.02～0.12g/L，溶剂为水，pH 5～8；优选所述种子培养基各成分的终浓度组成为：麦芽糖20g/L，牛肉浸膏11.91g/L，酵母膏8g/L，葡萄糖2g/L，KH2PO4 0.98g/L，CaCl2 0.095g/L，溶剂为水，pH 7.5；
(3)发酵培养：以体积浓度10％的接种量将种子液接种至发酵培养基中，30℃，200rpm培养24h，获得发酵液，将发酵液离心，所得沉淀用0.1M，pH7.0的K2HPO4-KH2PO4缓冲液洗涤，离心后获得湿菌体；所述发酵培养基各成分的终浓度组成：碳源15～25g/L，氮源5～15g/L，KH2PO4 0.2～1.2g/L，CaCl20.02～0.12g/L，溶剂为水，pH 6～9；所述碳源为下列之一：葡萄糖、麦芽糖、甘油、乳糖、蔗糖或糊精；所述氮源为下列之一：酵母膏、蛋白胨、牛肉浸膏、氯化铵或硫酸铵。
10.如权利要求9所述的趋化因子CCR 5拮抗剂AD101手性中间体的生物制备方法，其特征在于：步骤(3)中所述发酵培养基各成分的终浓度组成为：乳糖20g/L，硫酸铵12g/L，酵母膏8g/L，KH2PO4 0.98g/L，CaCl2 0.095g/L，溶剂为水，pH 8.5。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112063532A (zh) * 2020-08-11 2020-12-11 浙江工业大学 林生地霉及其制备(s)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇的应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103834694A (zh) * 2014-03-20 2014-06-04 中国科学院成都生物研究所 羰基还原酶ChKRED20在催化羰基底物中的用途
CN112063532A (zh) * 2020-08-11 2020-12-11 浙江工业大学 林生地霉及其制备(s)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇的应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103834694A (zh) * 2014-03-20 2014-06-04 中国科学院成都生物研究所 羰基还原酶ChKRED20在催化羰基底物中的用途
CN112063532A (zh) * 2020-08-11 2020-12-11 浙江工业大学 林生地霉及其制备(s)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇的应用

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112063532A (zh) * 2020-08-11 2020-12-11 浙江工业大学 林生地霉及其制备(s)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇的应用
CN112063532B (zh) * 2020-08-11 2022-05-24 浙江工业大学 林生地霉及其制备(s)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇的应用

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